PL95733B1 - Sposob otrzymywania preparatu paszowego - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania preparatu paszowego do stosowania jako dodatku do karmy dla zwierzat gospodarskich, w którym czynnym skladnikiem antybiotycznym jest salicylan bacytracyny.Pochodne bacytracyny opisane w patencie polskim nr 72067, wsród których wymieniono salicylan i 5-sulfosalicylan bacytracyny, otrzymano z czystej bacytracyny po wyodrebnieniu jej z brzeczki fermentacyjnej i oczyszczeniu, a nastepnie poddaniu reakcji z kwasem.Otrzymany w ten sposób produkt oczyszczano dla uzyskania substancji (nie zawierajacej skladników dodatkowych) do porównania jej mocy z moca standardu bacytracyny. Substancja taka miala sluzyc w przyszlosci jako wzorzec nowego zwiazku dla porównywania produktów zawierajacych addukt bacytracyny.Dotychczas stosowane preparaty paszowe bacytracyny zawieraly przede wszystkim kompleks tego antybiotyku z cynkiem.Poszukiwania nowych stymulatorów wzrostu zwierzat gospodarskich doprowadzily do stwierdzenia, ze szczególnie korzystne jest stosowanie preparatów paszowych zawierajacych sól addycyjna bacytracyny z kwasem salicylowym. Jako wiadomo kwas salicylów/ moze byc stosowany jako' skladnik pasz stymulujacy wzrost zwierzat gospodarskich. W salicylanie bacytracyny znajduja sie wiec dwa skladniki, o tym dzialaniu w przeciwienstwie do cynk-bacytracyny) gdzie tylko skladnik antybiotyczny odgrywa role stymulatora.Przeprowadzone doswiadczenia na brojlerach otrzymujacych karme z 5 ppm paszowego salicylanu bacytracyny wykazaly przyrost wagi kurczat srednio o 2,3-2,8% w porównaniu z grupami kontrolnymi, wsród których byly równiez kurczeta otrzymujace dodatkowo oksytetracykline w postaci Polfamiksu B. Przy tym równoczesnie zmniejszylo sie zuzycie paszy do 2,04 kg/kg przyrostu wagi. Pod wzgledem zmniejszonego zuzycia karmy preparat paszowy salicylanu bacytracyny przewyzsza równiez preparat paszowy Zn-bacytracyny i inne pochodne.W analogicznym doswiadczeniu z preparatem Zn-bacytracyny zuzycie paszy wynosilo 2,5—2,9 kg/kg przyrostu.Sposobem wedlug wynalar^ku do brzeczki fermentacyjnej otrzymywanej przy uzyciu szczepu z rodzaju Bacillus, zwlaszcza uzyskanej przy uzyciu szczepów niezdolnych do tworzenia endospor lub o wybitnie2 95 733 ograniczonej zdolnosci sporulacji, otrzymanej wedlug patentu polskiego nr 90102, dodaje sie nadmiar kwasu salicylowego w formie substancji stalej, zawiesiny lub roztworu az do doprowadzenia do wartosci pH 5,6—6,4.Calosc miesza sie od 30 minut do godziny, a nastepnie suszy w suszarni rozpylowej. utrzymujac na wlocie temperature 160°C na wylocie 80-100°C.Otrzymany tym sposobem preparat paszowy zawiera przykladowo: okolo 8% salicylanu bacytracyny okolo 4% salicylanów nieorganicznych i wolnego kwasu salicylowego okolo 86,5% biomasy i soli nieorganicznych okolo 1,5% wody W przypadku zuzycia jako producenta drobnoustrojów przetrwalnikujacych, preparat paszowy otrzymuje sie z brzeczki pofermentacyjnej po usunieciu, przez saczenie badz odwirowanie masy komórkowej. Brzeczke zakwasza sie w tym przypadku do wartosci pH okolo 4 rozcienczonym kwasem siarkowym, saczy, nastepnie bulion alkalizuje roztworem wodorotlenku wapniowego lub sodowego do wartosci pH okolo 7 i postepuje jak poprzednio.Uzyskany preparat zawiera przykladowo: okolo 12,5% salicylanu bacytracyny okolo 36% salicylanów nieorganicznych i wolnego kwasu salicylowego okolo 50% soli nieorganicznych i organicznych rozpuszczalnych skladników brzeczki oraz okolo 1,5% wody Preparat paszowy salicylanu bacytracyny otrzymuje sie jako dodatek do karmy dla róznych gatuków zwierzat gospodarskich, stosujac go w róznych ilosciach zaleznie od rodzajów zwierzat, dla których pasza jest przeznaczona.Przyklad I. Brzeczke zawierajaca bacytracyne otrzymywano z fermentacji w kolbach na trzesawce przy uzyciu asporogennego mutanta z rodzaju Bacillus.Stadium posiewowe. Kolby Erlenmayera o pojemnosci 500 ml, zawierajace 50 ml nizej podanej pozywki posiewowej, zaszczepiono komórkami szczepu asporogennego U 3—3/93, zebranymi z dwudniowej hodowli na agarze skosnym.Sklad pozywki posiewowej: maka sojowa odtluszczona 3,0% makaziemniaczana 1,5% CaC03 0,4% (NH4)2S04 0,2% MgS04 • 7H20 0,03% MnS04-5H20 0,01% KH2P04 0,02% kwas mlekowyspozywczy 0,5% woda wodociagowaad 100% * Wartosc pH pozywki ustalano roztworem wodorotlenku sodowego. Proces sterylizacji przebiegal w 117°C wciagu 30 minut. Po sterylizacji wartosci pH wynosila 6,8.Kolby z zaszczepiona pozywka wstawiono na trzesawke obrotowa o 240 obr./min. Inkubowano w temperaturze 33°C wciagu 24 godzin. Otrzymana hodowla sluzyla jako material szczepienny dla stadium produkcyjnego.Stadium produkcyjne. Do kolb Erlenmayera o pojemnosci 500 ml zawierajacych po 30 ml nizej podanej pozywki produkcyjnej dodano hodowle stadium posiewowego w ilosci 1,5% w stosunku do objetosci pozywki.Pozywka produkcyjna: maka sojowa odtluszczona 5,0% maka ziemniaczana spozywcza 2,0% kwas mlekowyspozywczy 1,1% CaC03 0,3% MgS04 • 7H20 0,03% MnS04 • 5H20 0,01% (NH4)2S04 0.2% KH2P04 0,01% woda wodociagowaad 100%95 733 3 - Wartosc pH pozywki ustalono roztworem wodorotlenku potasowego. Pozywke wyjalawiano w 177 C wciagu 30 minut. Po wyjalowieniu wartosc pH wynosila 6,9.Fermentacje prowadzono w temperaturze 33°C na trzesawce obrotowej o 240obr/min., Po zakonczeniu fermentacji, co nastapilo po 38 godzinach fermentacji, plyny fermentacyjne wykazywaly aktywnosc 392 j/ml w przeliczeniu na bacytracyne. Oznaczenie bacytracyny przeprowadzano metoda biologiczna plytkowo-cylinderkowa uzywajac jako szczepu testowego Micrococcus flavus ATCC 10240.Do 7 I brzeczki o pH 8,3 dodano 32 g kwasu salicylowego, po czym mieszano przez 30 minut w temperaturze pokojowej uzyskujac wartosc pH 6,0. Otrzymana zawiesine suszono na suszarni rozpylowej utrzymujac na wlocie temperature 160°C, na wylocie 80—100°C. Otrzymano 520 g produktu zawierajacego ok. 4% kwasu salicylowego i wykazujacego aktywnosc 4,6 j/mg w przeliczeniu na bacytracyne. Z otrzymanego preparatu paszowego salicylanu bacytracyny przygotowano karme dla drobiu stosujac 5—10 ppm w przeliczeniu na bytracyne do mieszanki DK („Bacutil") uzupelnionej sruta z kukurydzy.Przyklad II. Biosynteze bacytracyny prowadzono w fermentorach szklanych.Stadium posiewowe I. Hodowle posiewowa przygotowano w sposób podany w przykladzie I (stadium posiewowe).Stadium posiewowe II. Do kolb Erlenmayera o pojemnosci 500 ml zawierajacych po 30 ml jalowej pozywki posiewowe] dodano po 0,3 ml hodowli stadium posiewowego I. Hodowle inkubowano w temperaturze 33°C na trzesawce obrotowej o 240 obr./min. w ciagu 18 godzin. Hodowla ta sluzyla jako inoculum dla stadium produkcyjnego.Stadium produkcyjne. Do fermentorów szklanych o pojemnosci 14 I wlano 7 I pozywki produkcyjnej (patrz przyklad I) z dodatkiem 0,2% surowego oleju sojowego. Proces wyjalowienia prowadzono w autoklawie w temperaturze 120°C wciagu 60 minut.Po sterylizacji wartosc pH wynosila 6,9. Wyjalowiona pozywke zaszczepiono hodowla stadium II dodajac 1% w stosunku do objetosci pozywki. Biosynteze antybiotyku prowadzono w temperaturze 32°C przy stalym napowietrzaniu wynoszacym 1,5 objetosci powietrza na objetosc pozywki na minute i przy stalym mieszaniu (800 obr./min.). W czasie fermentacji podawano pompa perysta Ityczna olej sojowy jako srodek przeciwpienny. Po zakonczeniu fermentacji, co nastapilo w 30 godzinie, plyny pofermentacyjne wykazywaly aktywnosc 396 j/ml bacytracyny, a wartosc pH wynosila 83.Do 10 I brzeczki dodano 57 g kwasu salicylowego, mieszano w temperaturze pokojowej 1 godzine. Calosc mieszaniny reakcyjnej o wartosci pH 6,3 skierowano do suszenia rozpylowego postepujac jak w przykladzie I.Otrzymano 800 g preparatu paszowego salicylanu bacytracyny o aktywnosci 3,7 j/mg w przeliczeniu na bacytracyne. Karme dla drobiu przygotowano analogicznie jak w przykladzie I stosujac 5—10 ppm.Przyklad III. Biosynteze bacytracyny prowadzono w kolumnie fermentacyjnej przy uzyciu wysokoaktywnego mutanta sporogennego Zp/L—2.Material szczepienny przygotowano w kolbach na trzesawce w sposób podany w przykladzie II (stadium posiewowe I i stadium posiewowe II). Róznica polegala na uzyciu szczepu Zp/L—2.Do kolumny fermentacyjnej o pojemnosci 2,5 I wlano 1,75 I pozywki produkcyjnej o skladzie podanym w przykladzie I, wyjalowionej w autoklawie w temperaturze 120°C wciagu 45 minut. Jalowa pozywke zaszczepiono inoculum (stadium posiewowe II) w ilosci 1% w stosunku do objetosci, pozywki. Hodowle prowadzono w temperaturze 33°C, przy stalym napowietrzaniu 1,2 objetosci powietrza na objetosc pozywki na minute. Jako srodka przeciwpiennego uzyto mieszaniny oleju sojowego i smalcu (1 :1). Proces zakonczono w 29 godzinie fermentacji. Aktywnosc plynów pofermentacyjnych wynosila 342 j/ml, a wartosc pH 7,8.Brzeczke po zakonczeniu procesu fermentacji zakwaszono kwasem siarkowym 5 n do wartosci pH 4.Odsaczono biomase drobnoustroju produkcyjnego i przemyto woda. Otrzymany bulion zadano 20% NaOH doprowadzajac pH do wartosci 6,8—7,0. Nastepnie dodajac wodna zawiesine kwasu salicylowego doprowadzono pH do wartosci 5,7. Uzyskany roztwór skierowano do suszenia rozpylowego, jak w przykladzie I. Uzyskano 24 g preparatu paszowego salicylanu bacytracyny o aktywnosci 7,1 j/mg w przeliczeniu na bacytracyne. Z preparatu przyrzadzono karme dla drobiu stosujac go w ilosci 5—10 ppm analogicznie jak w przykladzie I. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania preparatu paszowego zawierajacego salicylan bacytracyny, znamienny tym, ze bacytracyne zawarta w brzeczce fermentacyjnej lub bulionie poddaje sie reakcji z kwasem salicylowym, w formie substancji stalej, zawiesiny lub roztworu wodnego, w nadmiarze do wartosci pH mieszaniny reakcyjnej 5,6—6,4, korzystnie 5,7—5,9, po czym odparowuje uzyskujac sucha pozostalosc stanowiaca preparat paszowy. PL