PL73538B2 - - Google Patents

Description

Zgodnie z uprzednio wymieniona metoda moze byc otrzymany szczep BIO posiadajacy wysoka od¬ pornosc na SM. Nastepnie, takim samym sposobem po przeprowadzeniu poprzednio wymienionych ko¬ lejnych posiewów hodowli w kolejnosci CM, TC, EM i ABPC metoda plytek gradientowych i kolej¬ nych posiewów na pozywki ze zwiekszajacym sie, lecz mniejszym od hamujacego, stezeniem antybio¬ tyku mozna otrzymac bakterie mlekowe majace od¬ pornosc na wiele leków. Taki szczep bakterii mle¬ kowych oznaczono BIO-4R. Ten szczep zdeponowa¬ no pod nr 184 w Agency of Industrial Science and Technology, Fermentation Research Institute, który jest w Japonii instytutem uprawnionym do deponowania bakterii.Wykonujac wymienione poprzednio kolejne po¬ siewy hodowli posiewa sie w przypadku CM 30 — 40 razy, w przypadku TC 40—50 razy, w przy¬ padku EM 16 — 17 razy, w przypadku ABPC 20 — 30 razy, wówczas otrzymuje sie baikterie majace wysoka odpornosc na kazdy lek.Stopien odpornosci otrzymanych bakterii mle¬ kowych szczep BIO — 4R na wymienione wyzej leki w porównaniu ze szczepem macierzystym (BIO) jest nastepujacy: SM wiecej niz 2000 razy CM 1000 „ TC 100 „ EM 50 „ KM 33 „ F 100 „ ABPC 30 „ Oleandomycyna 15 „ Linkomycyna 10 „ Leukomycyna wiecej niz 60 „ Penicylina GK 20 „ Cefalorydyna 20 „ Gentamycyna 40 „ Spiramycyna 250 „ Bicylina V2 32 „ Syncylina 32 „ Oracylina 160 „ Stafcylina wiecej niz 5 „ Stafcylina V wiecej niz 32 „ Metacylina S wiecej niz 5 „ Stafcylina A wiecej niz 5 „ Natycylina 320 „ 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6073538 AV^ ^ ^ Równiez, w przypadku zastosowania sposobu many sposobem wedlu^r ^y^^^^^^^^^^a\ -fi- wedlug wynalazku ze szczepem Staphylococcus zem lub przed podapeml Sj^^iJ|^:«1^i^eiiQQ 209P stopien odpornosci na sulfonamidy jest wiek- zmniejszala sie do 5i^Mozn^.'^r^yjac'/ze preia4 szy niz 2000razy. ratbakterii mlekow^e^\ot£zymanyeh.¦• s"poyobem Pozywka Ca LA stosowana w metodzie plytek 5 wedlug wynalazku na 'qc^^npsc^ria;SM-'ri EBflfjed- gradientowych w celu wywolania odpornosci bak- noczesnie reguluje nieno^marne^z^i^szjaiiiersj^ ,Hos- terii mlekowych BIO na róznego rodzaju leki przy- ci drozdzy (zjawisko nadkacerilapi clz^laL^muja- gotowywana jest w nastepujacy sposób: co na zakazenia wywolywane ^JraeZrJSateonella en- wyciag miesny 10 g teritidis. pepton 10 g 10 Ponizszy przyklad ilustruje sposób wedlug wyna- NaCl 2 g lazku nie ograniczajac jego zakresu. laktoza 20 g Przyklad. Streptococcus faecalis szczep BIO wyciag drozdzowy 20 ml — 4R posiewano na pozywke Ca LA przygotowana weglan wapniowy stracony 10 g jak opisano powyzej, do której dodawano SM. Wy- agar 14 g 15 mieniony szczep hodowano metoda plytek gradien- Mieszanine powyzszych skladników rozpuszczo- towych w ciagu 72 godzin w temperaturze 37°C, no w 1000 ml wody destylowanej. Po nastawieniu Po okresie hodowli, sposród kolonii które wyrosly pH i wyjalowieniu pozywke nalewano po 10 ml do na plytkach wybierano te, które zawieraly najwiek- plytek Petri'ego. Pozywke zestalano w temperatu- sze stezenie SM i stosowano je do kolejnych po¬ rze okolo 10°C, ustawiano poziomo i dodawano 10 20 siewów na pozywke takiego samego rodzaju. Po ml pozywki o wymaganym stezeniu kazdego leku kolejnych 16 posiewach otrzymywano bakterie mle_ i zestalano w formie warstwy. Przygotowana w ten kowe majace duza odpornosc na SM. Nastepnie, sposób pozywka do metody plytek gradientowych bakterie mlekowe majace odpornosc na SM posie- moze byc stosowana korzystnie jako pozywka hodo- wano kolejno 30 razy sposobem wyzej opisanym na wlana do wywolywania odpornosci na rózne rodza- 25 pozywki z dodatkiem CM w wyniku czego otrzy- je antybiotyków. Bakterie mlekowe szczepu BIO — mywano bakterie mlekowe majace odpornosc na 4R, u których wywolano odpornosc na takiej po- SM i CM. Nastepnie, bakterie mlekowe majace od¬ zywce wymieniona metoda w kolejnosci SM, CM, pornosc na SM i CM posiewano kolejno 40 razy TC, EM i ABPC, posiewano do malej ilosci mleka sposobem wyzej opisanym na pozywke z dodatkiem w 10—15 butlach i hodowano w temperaturze 37°C. * TC w wyniku czego otrzymano bakterie mlekowe Zestalone mleko hodowlane oddzielono z hodowli majace odpornosc na SM, CM i TC. Nastepnie, (bak- i ponownie posiewano nowe mleko. Po kolejnych terie mlekowe majace odpornosc na SM, CM i TC wiecej niz 10 posiewach tej hodowli wybierano posiewano kolejno 16 razy sposobem wyzej opisa- szczep majacy zdolnosc do obfitego wzrostu. Me- nym na pozywki z dodatkiem EM w wyniku czego toda takich kolejnych posiewów hodowli szczep, 35 otrzymano bakterie mlekowe majace odpornosc na który wykazywal w pierwszej hodowli tylko 50 do SM, CM, TC i EM. Ostatecznie bakterie mlekowe 60% zdolnosci wzrostu w koncowej wykazuje 100% majace odpornosc na SM, CM, TC i EP posiewano i okres zestalania mleka jest regularny 2 do 3 dni. kolejno 20 razy sposobem wyzej opisanym na pozyw- Otrzymany tym sposobem szczep bakterii mle- ki z dodatkiem ABPC w wyniku czego otrzymy- kowych BIO — 4R latwo wyrasta w pozywce, któ- 40 wano bakterie mlekowe (BIO — 4R), które mialy rej glównym skladnikiem jest odtluszczone mleko, odpornosc nie tylko na SM, CM, TC, EM i ABPC, przeto moze byc latwo suszony metoda rozpylowa. lecz równiez na wymieniona wyzej szeroka rózno- Sposób suszenia rozpylowego hodowli bakterii mle- rodnosc antybiotyków i sulfonamidów, kowych i przygotowanie stabilnego preparatu w Potwierdzono, ze stopien odpornosci na wymie- postaci proszku przedstawiono w japonskim opi- *$ nione rózne rodzaje leków osiaga granice po za- sie patentowym nr 502315. Istota jego jest metoda stosowaniu kolejnych posiewów hodowli 16 — 17 suszenia rozpylowego hodowli, która przygotowano razy w przypadku SM, 30—40 razy w przypadku z wymienionego wyzej szczepu bakterii mlekowych CM, 40—50 razy w przypadku TC, 16—17 razy w majacych odpornosc na rózne leki w pozywce za- przypadku EM i 20—30 razy w przypadku ABPC. wierajacej wysokie stezenia mleka. Do preparatu 50 Bakterie mlekowe szczep BIO — 4R majace od- bakterii mlekowych dodawany jest zazwyczaj nos- pornosc na rózne leki, otrzymane sposobem wyzej nik. opisanym posiewano na mleko (okolo 15 ml), do Przeprowadzono nastepujace badania sprawdzaja- którego dodano SM 2000 ug/ml, CM 15 jig/ml, TC 10 ce w celu potwierdzenia odpornosci na rózne leki fig/ml, EM 100 fig/ml i ABPC 20 ^g/ml i wybierano i dzialanie preparatu bakterii mlekowych otrzyma- 55 szczep majacy duza zdolnosc zestalania mleka. Ten nych sposobem wedlug wynalazku. wybrany szczep posiewano 10—15 razy w sposób, Gdy wymieniony preparat razem z SM podawa- jak wyzej opisano, az do otrzymania szczepu ma¬ no co dzien doustnie myszom, nie stwierdzono od- jacego zdolnosc stabilnego zestalania mleka, to jest biegajacego od normy zwiekszania sie drozdzopo- zdolnosc do obfitego wzrostu w mleku. Wówczas dobnych bakterii w kale. Gdy podawano tylko SM, 60 szczep otrzymany w ten sposób hodowano w po- ilosc drozdzopodobnych bakterii w kale zwiekszala zywce zawierajacej w przyblizeniu 18% odtlusz- sie znacznie. Ponadto, gdy myszom podawano do- czonego mleka w ciagu 96 godzin i otrzymywano ustnie szczep Salmonella enteritidis nr 11 z SM i obfity wzrost bakterii mlekowych. Hodowle te prze- EM smiertelnosc wynosila 80% do 100%, jednakze, prowadzano w postac proszku metoda szybkiego gdy preparat bakterii mlekowych BIO-4R otrzy- 65 suszenia rozpylowego w temperaturze 70—100°C.7 73 538 8 Do sproszkowanego preparatu ewentualnie doda¬ wano jako nosnik, w zaleznosci od wymagan, en¬ zymy, witaminy i srodki zapachowe. PL PL

Claims (7)

1. Zastrzezenia patentowe 5 1. Sposób wytwarzania aktywnego preparatu bak¬ terii mlekowych odpornego na dzialanie róznych leków, znamienny tym, ze przeprowadza sie ko¬ lejne posiewy odpornego na sulfonamidy szczepu io bakterii Streptococcus faecalis B 10 — 4R metoda plytek gradientowych na pozywki ze zwiekszajacym sie, lecz mniejszym od hamujacego stezeniem anty¬ biotyku, w kolejnosci streptomycyny, chloramfe¬ nikolu, tetracykliny, erytromycyny i penicyliny a- 15 -aminobenzylowej, nastepnie kolejne posiewy na po¬ zywke z mlekiem, zawierajacym wyzej wymienio¬ ne piec rodzajów leków, po czym przeprowadza sie hodowle w postac proszku metoda suszenia rozpy- lowego. 20

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wywolania odpornosci na streptomycyne kolej¬ ne posiewy hodowli przeprowadza sie 16—17 razy.

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wywolania odpornosci na chloramfanikol kolejne posiewy hodowli przeprowadza sie 30—40 razy.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wywolania odpornosci na tetracykline kolejne posiewy hodowli przeprowadza sie 40—50 razy.

5. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wywolania odpornosci na erytromycyne kolej¬ ne posiewy hodowli przeprowadza sie 16—17 razy.

6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze w celu wywolania odpornosci na penicyline a-amino- benzylowa kolejne posiewy przeprowadza sie 20—30 razy.

7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze kolejne posiewy hodowli w pozywke z mlekiem przeprowadza sie okolo 10—15 razy. Bltk 2614/74 r. 95 egz. A4 Cena 10 zl PL PL