PL68275B1 - - Google Patents

Description

Opublikowano: 28.XD.1973 68275 KI. 12o,25/05 MKP C07c 167/10 CZYlELNi Urzedu Patentowego PfllsLiH B2Gu;;G.^|,1tj [j^t\ Wspóltwórcy wynalazku: Jadwiga Golonka, Wieslaw Lewensteinjrena Eysymontt, Wieslawa Kotula, Maria Iwaszkiewicz Wlasciciel patentu: Instytut Przemyslu Farmaceutycznego, Warszawa (Polska) Sposób wytwarzania 1 la -hydroksysterydów 1 Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania Ha-hydroksysterydów serii piegnanu o ukladzie A4-3-keto- nowym zawierajacych w polozeniu 17a atom wodoru lub gnipc hydroksylowa, a w polozeniu 17/5 ugrupowanie -COCH,OH oraz zawierajacych ewentualnie dodatkowe pod- 5 wójne wiazanie w pozycji 1-2, polegajacy na wprowadzeniu metoda mikrobiologiczna*do odpowiednich substratów stery¬ dowych grupy hydroksylowej w pozycji Ha. Zwiazki te sa waznymi produktami posrednimi w syntezie kortyzonu ijego pochodnych. 10 Znany sposób wprowadzania grupy hydroksylowej w po¬ zycje Ha pierscienia sterydowego metoda mikrobiologicznej transformacji polega na zastosowaniu szczepów mikroorgani¬ zmów z rodzaju Rhizopus, Aspergillus i CunninghameUa is (D.fiPeterson iMurray, J.A.Chem.,Soc., 74, 1871, 5933 (1952); Fried iwspóftw., J.Am.€hem.v Soc, 74, 3962 (1952); RShirasaka i N.Tsuruta, Chem.Pharm.BuU. 9, 159 (1961)] oraz szczepów z rodzaju Absidia (L. Sokolowa i wspóltw., Mied.Prom. nr 6, 36, (1966); J. Protfra, Schwarz 20 i Syhora, opis patentowy CSSR nr 110082]. Jako efekt kon¬ cowy biotransformacji za pomoca tych szczepów otrzymywa¬ no niewielkie ilosci produktu, a najczesciej mieszanine kilku produktów, wymagajaca skomplikowanego rozdzielania na drodzechemicznej. 25 Znany jest równiez sposób polegajacy na zastosov iniu szczepu Metarrhizium anisopliae do Ha-hydroksylacji pro¬ gesteronu i 3,5-cyklo-6hydroksyprognan-2(tami (Y. Kuro¬ sawa, J.Agr.Chem.SoaJapan, 31, 478 (1957)| oraz progeste¬ ronu (M. Nishikawa i wspólpr., opis patentowy japonski 30 nr 426 z 1959 r.), które to zwiazki nie mieszcza sie jednak w omawianej grupie zwiazków.Ponadto znany jest równiez sposób wprowadzania grupy hydroksylowej w polozeniu 11 pierscienia sterydowego za pomoca bakterii z rodzaju Pseudomonas lub Serratia, jednak¬ ze jak wynika z przykladów grupa hydroksylowa wchodzi w polozenie 1l/J przy równoczesnej dehydrogenacji w pozy¬ cji 1-2 (opisy patentowe szwajcarskie nr 381226 i 385204).Stosunkowo najlepsze wyniki Ha-hydroksylacji sterydów uzyskano przy zastosowaniu nastepujacych szczepów: Pa- naeolus campanulatus (opis patentowy St. ^jedn. Am. nr 3149050), Fusarium equiseti var. buUarum (opis patento¬ wy brytyjski nr 896913) oraz Glomerella cingulata (opis pa¬ tentowy St Zjeda Am. nr 2985563). Niewielkie stezenie substratu sterydowego wynoszace zaledwie do 0,5 g/l brzecz¬ ki w znacznym stopniu ogranicza zastosowanie przemyslowe dwóch pierwszych szczepów. Równiez metoda mikrobiolo¬ gicznej Ha-hydroksylacji przy zastosowaniu szczepu Glome¬ rella cingulata, choc dopuszcza wieksze stezenie substratu (do 1 g/l brzeczki), wykazuje istotne braki i niedogodnosci, jak dlugi czas przygotowywania hodowli wynoszacy 24-36 godzin oraz czas trwania procesu transformacji wyno¬ szacy 24-30 godzin.Stwierdzono, ze zastosowanie nowego szczepu Metarrhi¬ zium yelutinum M-6 w konwencjonalnej metodzie 1 la-hydroksylacji w odróznieniu od znanych i stosowanych do tego celu szczepów umozliwia selektywne, stereospecy- ficzne otrzymanie produktu oraz zwiekszenie stezenia sub¬ stratu do okolo 1,5 g/l brzeczki, przy znacznym skróceniu czasu przygotowania hodowli i czasu transformacji. 6827568 275 Wedlug wynalazku zwiazek sterydowy serii pregnanu o ukladzie A4-3-ketbnowym zawierajacy w polozeniu 17a atom wodoru lub grupe ^hydroksylowa, a w polozeniu 170 ugrupowanie -COCH,OH lub -COCHaOAc, w którym Ac oznacza acyl o 2-4 atomach wegla, oraz zawierajacy ewentu- s alnie dodatkowe podwójne wiazanie w pozycji 1-2, lecz nie zawierajacy grupy hydroksylowej w polozeniu 1la, poddaje sie dzialaniu szczepu Metarrhizium yelutinu M-6 w warun¬ kach aerobowyeh sposobem konwencjonalnym, po czym su¬ rowy produkt zawierajacy w pozycji 1la grupe wodorotleno- 10 wa wyodrebnia sie w znany sposób, np. przez ekstrakcje i ewentualnie oczyszcza.Nowy szczep Metarrhizium yelutinum oznaczony symbo¬ lem M-6 i nalezacy do klasy Fungi Imperfecti, rzedu Moni- liales, rodziny Moniliaceae, wyizolowano z gleby i opracowa- 15 no na drodze selekcji z dzikiego szczepu macierzystego w Pra¬ cowni Bakteriologicznej Instytutu Farmaceutycznego w War¬ szawie. Opis nowego gatunku podali A. Borowska, J. Golon¬ ka i W. Kotula w Acta Mycologjca, VII, 1(1971).Szczep Metarrhizium Yelutinum M-6 na pozywce Czapek 20 Doxa tworzy koloniepoczatkowo biale, po 12 dniach zielono- szare z jasniejszym zóltawym marginesem, niskie o aksamit¬ nej powierzchni; po 12 dniach kolonie osiagaja srednice 4 cm. Odwrotna strona pozywki poczatkowo bezbarwna wkrótce przybiera jaskrawozólte lub zóltc-oliwkowe zabar- 25 wienie. W starszych kulturach kolonie maja zabarwienie in¬ tensywnie zielonoszare.Grzybnia wegetatywna zlozona z bezbarwnych, falistych strzepek ze zgrubieniami Komórki jej o wymiarach 112,5-20 X 5,5-8/i zawieraja liczne krople tluszczu. 30 Konidiofory wyrastaja pojedynczo lub w skupieniach tworzac pedzlowate pseudosporodochia; konidiofory po¬ jedyncze sa nierozgalezione, wyprostowane, 7,5-12,5 X X 2-2,5 m» czesto pod szczytem lekko rozszerzone, bez przegrody lub z jedna przegroda poprzeczna; czesto spo- 35 tykane, nierozgalezione konidiofory dzwigaja na szczycie 2-6 fialid. Wystepuja równiez konidiofory typu Penicillium z flalidami I i II rzedu, polozonymi okólkowo, badz koni¬ diofory kilkakrotnie rozgalezione do 50 m wysokie. Pseudo¬ sporodochia 150-300 X 30-50 m tworzy sie wskutek wyras- 40 tania scisle obok siebie kilku obficie rozgalezionych konidio- forów. Szczytowe flalidy tych.konidioforów, o wymiarach 9,5-12 X 2,5 m, wyrastaja blisko siebie i skierowane sa pio¬ nowo ku górze. Dlugie lancuchy flalospor tworzace sie na ich szczycie polozone sa równolegle i scisle do-siebie przyle- 45 gaja. Fialidy cylindryczne lekko zwezajace sie ku szczytowi maja wymiary 7,7-14 X 2-3,5 m.Fialospory sa poczatkowo bezbarwne, w starych kultu¬ rach wnusie zielonawe, jednokomórkowe, cienkoscienne, gladkie, 6-7 X 2,5-3 m, podluznoowalne do cylindrycz- so nych, z zaokraglonymi koncami badz o zwezonym i scietym Jednym koncu, niekiedy lekko wygiete. Tworza dlugie, lan¬ cuchy, które nie rozpadaja sie nawet w bardzo starych kultu¬ rach.Metarrhizium yelutinum M-6 mozna inkubowac wtem- ss peraturze 20-32°C, najszybszy wzrost osiaga sie w tempera¬ turze 28-30°C Nie rozklada celulozy.W literaturze mitologicznej znane sa opisy tylko trzech gatunków z rodzaju Metarrhizium: Metarrhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin 1879, Metarrhizium album (Petch) 1931 60 oraz Metarrhizium brunneum (Petch) 1935. Z opisu Metarrhi¬ zium album (Petch) 1931 wynika, ze jest to gatunek wyraz¬ nie rózny od szczepu wedlug wynalazku, dlatego nie brano go pod uwage przy dalszych badaniach porównawczych.Przeprowadzono szczególowe porównanie Metarrhizium 65 anisopliae z CBS Baarn i z WSR w Szczecinie oraz Metharri- zium brunneum z CBS Baarn z nowym wyizolowanym gatun¬ kiem wedlug wynalazku. Grzyby hodowano na trzech podlo¬ zach (Czapek-Doxa, agar owsiany i ziemniaczany) w wielo¬ krotnych powtórzeniach w temp. 28° i pokojowej.Oba -szczepy Metarrhizium anisopliae, poza róznica w wymiarach fialid oraz flalospor nie wykazuja istotniejszych róznic miedzy soba. Metarrhizium anisopliae (o malych wymiarach flalospor) jest gatunkiem najbardziej zblizonym do szczepu obecnie wyizolowanego. Rózni sie od niego za¬ barwieniem i struktura kolonii, wielkoscia i stanem rozpro¬ szenia pseudosporodochiów, wymiarami fialid oraz ksztaltem i wymiarami flalospor. Wyizolowany grzyb wedlug wynalaz¬ ku reprezentuje nowy gatunek z rodzaju Metarrhizium. W ta¬ blicy podano zestawienie cech charakterystycznych bada¬ nych szczepów. Wedlug wynalazku substrat sterydowy miesza sie z hodowla szczepu Metarrhizium yelutinum M-6 albo z jej enzymatycznymi produktami przy stalym dopro¬ wadzaniu tlenu, a po zakonczeniu hydroksylacji wyodrebnia sie produkt przez ekstrakcje brzeczki lub odsaczenie razem z grzybnia, po czym wydzielony produkt ewentualnie oczysz¬ cza sie w znany sposób.Transfromacje wymienionych sterydów do lla -hydrc- ksypochodnych mozna przeprowadzic bezposrednio w hodo¬ wli glebinowej Metarrhizium yelutinum M-6, w zawiesinie tego mikroorganizmu zebranego z hodowli glebinowej badz powierzchniowej, za pomoca oddzielonych zarodników, albo tez wobec preparatów enzymatycznych otrzymanych z mi¬ kroorganizmu, badz jego zarodników zawierajacych lla-hydroksylaze sterydowa.Przy zastosowaniu szczepu wedlug wynalazku przemiana przebiega przy wartosci pH 4-9, najlepiej 5,6-7,0. Hodowle mozna prowadzic systemem periodycznym lub ciaglym. Przy hodowli glebinowej stosuje sie mieszanie, najczesciej miesza¬ nie wirowe.Zwiazek sterydowy mozna wprowadzic do hodowli jako rozdrobniona substancje stala lub w postaci zawiesiny, a naj¬ lepiej roztworu w rozpuszczalnikach organicznych. Jako roz¬ puszczalniki stosuje sie alifatyczne alkohole, ketony, estry i amidy kwasowe, np. metanol, aceton, dwumetyloformamid.Mozna równiez stosowac roztwór lub zawiesine zwiazku ste¬ rydowego uzyskana w trakcie syntezy lub biosyntezy.Hodowle prowadzi sie w warunkach aerobowyeh w kol¬ bach umieszczonych na trzesawce, co zapewnia równomier¬ ne silne mieszanie, a tym samym staly doplyw powietrza, które jest niezbedne zarówno do rozwoju mikroorganizmu, jak i utleniania substratu. Hodowle mozna równiez prowa¬ dzic w róznego typu i wielkosci fermentorach zaopatrzonych w odpowiednie dysze wtryskujace powietrze z dna aparatu oraz mieszadla umozliwiajace dokladne rozprowadzenie pecherzyków powietrza w plynnej hodowli.Ekstrakt zawierajacy produkt transformacji moze byc za¬ geszczony do malej objetosci lub odparowany do sucha a nastepnie oczyszczony przy pomocy róznych metod, z których najbardziej znanymi sa: chromatografia i krystaliza¬ cja.Hodowle szczepu mozna prowadzic w znany sposób me¬ toda powierzchniowa lub glebinowa, przy czym stosuje sie podloza o róznych zródlach wegla i azotu. Zródlem wegla moze byc glukoza, sacharoza lub inne przyswajalne cukry, a takze kwasy organiczne albo ich polaczenia. Azot mozna dostarczac w postaci soli nieorganicznych, biopreparatów ta¬ kich jak pepton, hydrolizat kazeiny, wyciag miesny, wyciag slodowy, namok kukurydziany, maka sojowa i ekstrakt droz¬ dzowy.5 68 TW 6 Tablica Zestawienie cech charakterystycznych M. anisopliae, M. velutinum i M. biunneum Pozyw¬ ka 2 8 i kolonie (14 dni) rewers ko¬ lonii pseudospo- rodochia fialidy M. anisopliae czarno-zielono-oliwkowe, niskie, prawie skorupiaste bezbarwny (WSR) lub zólto- oliwkowy (CBR) wyprostowane zrastajace sie z soba, 100-250 X 50-100 M 15-20 X 3-4 m (WSR), M. velutinum zielono-szare z zóltym marginesem aksamitne jaskrawozólty do zóltooliwko- wego wygiete lub proste, oddzielne, 150-300X30-50*1 7,5-14 X 2-2,5 m M. brunneum i, zóltawókremowe, z przewaga p szystej plonnej grzybni powie¬ trznej bezbarwny lub cytrynowozólty tworza sie sporadycznie, 150-200 X 20-40 m 9-12 X 2-3 m 10-12 X 3-3,5 m (CBR) fialospory dlugoowalne, fasolkowate, eli¬ psoidalne, 10-16 X 3-4 m (WSR), 5-8 X 2-3 M (CBS) kolonie czarno-zielono-oliwkowe, zwarte (14 dni) (WSR) badz z obfita biala plon¬ na grzybnia powietrzna (CBS) rewers ko- bezbarwny (WSR), brazowawy lonii (CBS) pseudospo- 100-200 X 100-150 m (WSR),* rodochia 100-150 X 80-100 m (CBS) fialidy 17,5-20 X 3-4 n (WSR), 10-13 X 2,5-3,5 M (CBS) fialospory 10-12,5 X 2,5-3,5 » (WSR) 5-7,5 X 2'-2,5 ji (CBS) kolonie czarno-zielono-oliwkowe, luzne (14 dni) (WSR), z obfita biala grzybnia powietrzna (CBS) rewers ko- bezbarwny (WSR) lub zóltawy lonii (CBS) pseudospo- 150-250 X 80-100 M (WSR), rodochia 100-150 X 80-100 m (CBS) fialidy 15-20 X 2,5-3,7 m (WSR), 8-15 X 2,5-3,5 m (CBS) fialospory 10-15 X 2,5-3 m (WSR), 4,5-7,5 X 2-2,5 n dlugoowalne, cylindryczne, 6-8 X 2,5-3 M dlugoowalne, cylindryczne, 5-8 X 2-2,5 M zielono-szare z odcieniem oliwko- bialozóltawe, obfita biala wym, jasniejszy margines, lekko plonna grzybnia powietrzna puszyste zóltawy lub z odcieniem oliwko- zóltawobrazowawy wym, ale tylko w centrum 100-150 X 50-70M 70 X 580 M (nieliczne) 10-15 X 2,5-3 m 6-8 X 2,8-3 M 12,5-15 X 2,5-3 M 6-12,5 X 2,5-3 M jasnozielono-szare, z jasniej- bialozóltawe (wzrost bardzo szym marginesem, welwetowate skapy) bezbarwny lub zóltawy 150-200X 50-60m 12,5-16X2,5-3,8/1 6-8(10) X 2,5-3,5 m bezbarwny lub lekko zóltawy nieliczne, 100 X 30 m 12-17 X 2,5-3,5 M 6-10 X 2,5 A* Dla szybkiego wzrostu i hodowli mozna dodawac fosfora¬ ny. Niezbedne sole mineralne i witaminy zawarte sa w wy¬ mienionych biopreparatach w ilosciach wystarczajacych dla optymalnego wzrostu.Mozna stosowac podloza plynne wedlug Sabouraud, np. 1% peptonu i 2% maltozy lub 1% peptonu, 4% glukozy, 0,35% ekstraktu miesnego i 0,75% chlorku sodowego, podlo¬ ze wedlug Raulin-Thoma i wedlug Czapka i Czapek-Doxa, a najkorzystniej podloze IFB, opracowane w Pracowni Bak¬ teriologicznej Instytutu Farmaceutycznego w Warszawie o nastepujacym skladzie ekstraktdrozdzowy 0,25% pepton 0,4 % KHaP04 0,4 % brzeczka slodowa o gestosci 8,7° Big 10% v/V woda do 100% Po sterylizacji wartosc pH wynosila 6 - 6*1. 10 15 Substraty sterydowe, które moga byc poddane procesowi fermentacji przy uzyciu Metarrhizium velutinum M-6, jest pregnen-4-diol-17a, 21-dion-3,20 czyli substancja S Reichstei¬ na, 21-octan substancji S Reichsteina, pregnen-4-ol-21-dion- -3,20 czyli dezoksykortykosteron oraz pregnadien-l,4-diol- -17a,21-on-3,20 czyli A1-substancja S Reichsteina.Szczególnie korzystne wyniki uzyskuje sie poddajac Ha -hydroksylacji pregnen-4-dkl-17a , 21-dion-3,20 czyli sub¬ stancje S Reichsteina oraz jej 21-acetylowa pochcdaa.W wyniku dzialania szczepu Metarrhizium vdutinum M-6 otrzymuje sie odpowiednie Ha -hydroksypochodite przy równoczesnej hydrolizie grup acylowych do hydroktylowych oraz enoleterów i enolestrów do grup ketonowych. Reakcja przebiega jednokierunkowo ipozwalu uzyskac produkt z wydajnoscia wieksza niz 80%. Proces przebiega bardzo •zybko i trwa zaleznie od stezenia substratu 8-14 godzin.Przyklad I. Pieciolitrowy szklany fermentor wypel-68275 niono 2,51 podloza w skladzie: 6,25% f ekstraktu drozdzo¬ wego 10 g hydrolizatu erizyinatycuiego bialka kiwi bydlecej, lOg KH,P04, 250ml brzeczki slodowej ogestosci §7° Big i woda do 2,5 L to czym podlosc wysterylizowano;po stery¬ lizacji pH podloza wynosilo 6,0. Podloze fermentacyjne za¬ szczepiono 150 ml dwudzlestotrzygodziniiej hodowli plynnej Metarrhrzmra vdottfiomM-6. Pd 20 godzinach inkubacji w temperaturze 2JTC (przy napowietrzaniu 1,251/min i mle szanhi 500 obf/mlfl) grzybnie odsaczono i zawieszono w wo¬ dzie. Do mieszaniny reakcyjnej dodano 3,750 mg pregnen-4- •diol-Wa ,21-dtonu-3,20 rozpuszczonego w metanolu, Inku¬ bacje kontynuowano wciagu 12-14godzin. W koncowym okresie tramformacji postepy reakcji byly kontrolowane przy pomocy chromatografii cienkowarstwowej. Transforma¬ cje przerwano po stwierdzeniu calkowitej przemiany preg nen-4-diol-17a ,21-dlonu-3,20. Nastepnie z mieszaniny pofer¬ mentacyjnej odsaczono grzybnie i przemyto woda a produkt wyekstrahowano z przesaczu chloroformem. Polaczone eks¬ trakty wysuszono bezwodnym siarczanem sodowym, przesa¬ czono i odparowano pod zmniejszonym cisnieniem. Po jedno¬ razowej krystalizacji z acetonu otrzymano 3l00g czystego pregneifr-4-trioM Ioil7a21-dionu-3,20 o temperaturze topnic- nia 207 209°C; |«| 1T » ? 120,4° (1% l«tOH 96%); ^VXmav 241 mu (l*-420); IR V}j£* cm ' 3440, 1705, 1640. 1605.P r z y k l a d II. Do dziesieciu póllitrowych kolb dano po 100 ml podloza o skladzie: 0,25 g ekstraktu drozdzowe¬ go, 0,4 g hydrolizatu enzymatycznego bialka krwi bydlecej, 0,4 g KII, P04, 10 ml brzeczki slodowej o gestosci 8,7° Big i wody do 100 ml, po czym podloze wysterylizowano. Po sterylizacji pil podloza wynosilo 6,0. Nastepnie podloze fer¬ mentacyjne zaszczepiono 5 ml dwudziestotrzygodzinnej ho¬ dowli Metarrhiziom vdutiiiuin M 6. Po 23 godzinach inku¬ bacji w leinpcralur/e 2lfi* na trzesa wcc obrotowej t240ohr/min) odsaczono grzybnie i zawieszono w wodzie.IKi mieszaniny fermentacyjnej dodano po 150 mg 21-octanu preiencn-4-oM7a -dionu-3,20 ro/pus/c/onego w metanolu, lukubiicje kontynuowano w ciagu 30 god/in, po czym mie¬ szanine wyekstrahowano chloroformem. Polazone eks¬ trakty chloroformowe wysuszono be/wodnym siarczanem sodowym, przesaczono i odparowano pod zmniejszonym cis¬ nieniem. Po krystalizacji z acetonu otrzymano czysty preg nen-4 tnoHlal7u2l dion *,20 o temperaturze topnienia 208 11 TC; \n\& - ? 12M 11% etanol %%. to IS 20 lS 30 39 Przyklad Ul. W identyczny sposób jak w przykla¬ dzie II przygotowano hodowle Metarrhizium velutmum M 6. Grzybnie odsaczono i zawieszono w wodzie. Do mieszaniny reakcyjnej dodano po 100 mg pregnadien-1,4- -dkri-17a,2t«dionu-3,20 rozpuszczonego w metanolu. Inkuba¬ cje kontynuowano przez 24 godziny, po czym mieszanine wyekstrahowano chlofoformem. Polaczone ekstrakty chloro¬ formowe wysuszono bezwodnym siarczanem sodowym, prze¬ saczono i odparowano pod zmniejszonym cisnieniem. Po krystalizacji z acetonu otrzymano pregnadien-1,4 triol-llu, 17a,21-dkn-3,20. Temperatura topnienia 221 223°C; M*f- +76° (0,5%metanol).P r z y k i a d IV. W identyczny sposób jak w przykla¬ dzie II poddano przemknie pfe$nen-4-ol-21-dion-3,20 do pregnen-4-diol-l1a,2l-dlón-3,20 przy zastosowaniu szczepu Metarrhizium vdutinum M 6. Suche ekstrakty byly iden¬ tyczne z wzorcem pregnen-4-dioH lat2l-dion-3,20 czyli 1 lo-hydroksypochodncj dezoksykortykosteronu (porównaw¬ czo wartosc Rf, reakcje barwne i rodzaj lluorescencji po wywolaniu kwu*ein siarkowym i kwasem Fosforowym). PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania 11«-hydroksysterydów serii pregna- mi o ukladzie A4 3-ketonowyin /uwierajacych w polozeniu Ha atom wodoru lub grupe hydroksylowa, a w polozeniu 170 ugrupowanie -tXH'H)OH oraz zawierajacych ewentual¬ nie dodatkowe podwójne wiazanie w pozycji 12, przez wprowadzenie metoda mikrobiologiczna grupy wodorotleno¬ wej w polozeniu Ha pierscienia sterydowego, znamienny tym, ze zwiazek sterydowy serii pregnanu o ukladzie A4 - Vketonowym zawierajacy w polozeniu I7a atom wodoru lub grupe hydroksylowa, a w polozeniu 170 ugrupowanie -rOCIIadll lub -COCHrOAc, w któiym Ac oznacza reszte acylowa o 2 4 atomach wegla oraz zawierajacy ewentualnie dodatkowe podwójne wiazanie w pozycji I 2, w postaci roz drohnionej, roztworu lub zawiesiny, albo tez jako zawarly w mieszaninie reakcyjnej produkt uprzedniej reakcji syntezy lub biosyntezy, poddaje sie dzialaniu s/czepu Metarrlii ziumm yehitinum M 6 w postaci hodowli. oddzielonej i za wieszonej w wodzie grzybni, przesaczu hodowli lub innych preparatów enzymatycznych uzyskanych z tego szczepu, po czym surowy produkt wyodrebnia sie prze/ ekstrakcje i ewentualnie oczyszcza w znany spoNÓb. Prac. Kepr. UP PRL. aam. 59/73 naklad 120+ IB Cena lOzl 0 a PL PL