PL67956B1 - - Google Patents

Description

13.V.1966 Stany Zjednoczone Ameryki Opublikowano: 5.VII.1973 67956 KI. 12p,4/01 MKP C07d 99/16 UKD Wspóltwórcy wynalazku: Donald Eugene Clark, Norman Howard Grant, Harvey Eugene Album Wlasciciel patentu: American Home Products Corporation, Nowy Jork (Stany Zjednoczone Ameryki) Sposób otrzymywania nowych bezwodnych lub pólwodnych krystalicznych penicylin syntetycznych Wynalazek dotyczy otrzymywania nowych bez¬ wodnych lub pólwodnych krystalicznych penicylin syntetycznych, zwlaszcza niektórych kwasów 6-(a- minocykloalkilokarboksyamido) penicylanowych.Wymienione kwasy 6-(l-aminocykloakilokarbo- ksyamido) penicylanowe, w znanych poprzednio postaciach, maja uznane znaczenie z powodu swej rozleglej aktywnosci przeciwbakteryjnej, i sa uzy¬ teczne jako czynniki terapeutyczne podawane po- zajelitowo lub doustnie u drobiu i u ssakówj a w szczególnosci u czlowieka, w leczeniu chorób infekcyjnych wywolanych przez bakterie Gram- -dodatnie i Gram-ujemne. Zwiazki te maja takze zastosowanie jako dodatki do pokarmu dla zwie¬ rzat.Jak ujawniono w opisie patentowym St. Zjedn.Am. nr 3194 802, znane calkowicie uwodnione zwiazki sa zazwyczaj otrzymywane przez reakcje odpowiedniego 4-podstawionego-2,5-oksazolidinodio- nu (znanego równiez jako bezwodnik N-karboksya- minokwasu) z kwasem 6-aminopenicylanowym.Reakcja powinna przebiegac w zimnym roztworze wodnym, który jest mieszany przez kilka godzin w temperaturze od dokladnie powyzej punktu krzepniecia mieszaniny wodnej do okolo 37°C, a korzystnie w temperaturze o zakresie od 0-10°C.Kwasy 6-(l-airiinocykloalkilokarboksyamido) pe¬ nicylanowe otrzymane powyzszym sposobem i kaz¬ dym innym znanym dotychczas sposobem zawie¬ raly od okolo 3% do kolo 8% wody, jak to zo¬ stalo oznaczone metoda KarPa Fischera. Wskazu¬ je to na to, ze dotychczas otrzymywane zwiazki wystepowaly w postaci pelnych wodzianów, na przyklad, jako monohydraty. 5 Okreslenie „calkowicie uwodnione odmiany" — uzyte w tym opisie oznaczaja w szczególnosci te krystaliczne odmiany, które maja przynajmniej jedna czasteczke wody zwiazana chemicznie na czasteczke penicyliny; na przyklad, przynajmniej 10 jej monohydrat.Niespodziewanie stwierdzono, ze pewne kwasy 6-( 1 -aminocykloalkilokarboksyamido) penicylanowe mozna otrzymac w nieznanej poprzednio czescio¬ wo bezwodnej oraz bezwodnej postaci. Okreslenie „czesciowo odwodnione i bezwodne postaci" uzy¬ te w tym opisie oznacza te postacie krystaliczne wymienionych kwasów penicylanowych, które ma¬ ja nie wiecej niz 1/2 czasteczki wody zwiazanej z nimi chemicznie.Sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie za¬ tem zwiazki o wzorze przedstawionym na rysun¬ ku, iw którym n oznacza liczbe calkowita od 1 óo 5, a m ma wartosc od 1/2 do 0, z zastrzezeniem^ ze gdy n oznacza 1, n jest mniejsze niz 1/2.Te nowe zwiazki mozna scharakteryzowac w ten sposób, ze zawieraja bardzo malo lub wcale nie zawieraja-wody, a maksymalna ilosc wody nie przekracza okolo 3,5%. Ponadto, maja one strukture krystaliczna rózniaca sie w zasadniczy sposób od 30 ich znanych odpowiedników, czego dowodza ich 15 25 67 95667 956 3 rózne spektrogramy w podczerwieni, pokazane na fig. 1-9.Na tych rysunkach fig. 1 przedstawia spektrogram w podczerwieni dla bezwodnego kwasu 6-(l-amino- cyklopentanokarboksyamido) penicylanowego, otrzy¬ manego sposobem wedlug wynalazku; fig. 2 przed¬ stawia spektrogram w podczerwieni dla znanego monohydratu kwasu 6-(l-aminocyklopentanokarbok- syamido)penicylanowego; fig. 3 przedstawia spek¬ trogram w podczerwieni dla bezwodnego kwasu 6-(l-aminocyklobutanokarboksyamido) penicylano¬ wego, otrzymanego sposobem wedlug wynalazku fig. 4 przedstawia spektrogram w podczerwieni dla wodzianu kwasu 6-(l-aminocyklobutanokarbo- ksyamido)penicylanowego; fig. 5 przedstawia spek¬ trogram w podczerwieni dla nowego pólwodzianu kwasu 6-(l-amino-cykloheksanokarboksyamido)pe- nicylanowego, otrzymanego sposobem wedlug wy¬ nalazku; fig. 6 przedstawia spektrogram w pod¬ czerwieni dla znanego monohydratu kwasu 6-(l-a- minocykloheksanokarboksyamido) penicylanowego; fig. 7 przedstawia spektrogram podczerwieni dla nowego pólwodzianu kwasu 6-(l-aminocyklohepta- nokarboksyamido)penicylanowego, otrzymanego spo¬ sobem wedlug wynalazku; fig. 8 przedstawia spek¬ trogram w podczerwieni dla znanego monohydra¬ tu kwasu 6-(l-aminocykloheptanokarboksyamido)pe- nicylanowego; fig. 9 przedstawia spektrogram w podczerwieni dla nowego bezwodnego kwasu 6-(l- aminocykloheksanokarboksyamido) penicylanowego, otrzymanego sposobem wedlug wynalazku.Kwasy 6-(l-aminocykloalkilokarboksyamido)peni- cylanowe otrzymane sposobem wedlug wynalazku, odznaczaja sie dalej tym, ze jak stwierdzono, wy¬ kazuja one wieksza trwalosc przy magazynowaniu niz wczesniej znane wodziany. Z powodu ich trwa¬ losci, w polaczeniu z ich wieksza gestoscia nowe zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku sa bardziej uzyteczne niz odpowiednie hydraty na przyklad stosowane w formie kapsulek.Poprzednie róznice i zalety nowych zwiazków otrzymanych sposobem wedlug wynalazku w sto¬ sunku do tych, które sa juz znane maja donios¬ le znaczenie, poniewaz ich terapeutyczna aktyw¬ nosc nie zmniejsza sie. Przeciwnie, aktywnosc czesciowo odwodnionych lub bezwodnych zwiaz¬ ków otrzymanych sposobem wedlug wynalazku jest faktycznie równa aktywnosci znanych zwiazków o równych ciezarach. Na przyklad, jesli myszy sa sprowokowane sródotrzewnowo wrazliwym na pe¬ nicyline szczepem S. surcus i zjadliwym szczepem S. typhosa, i oba znane typy zwiazków oraz zwia¬ zek otrzymany sposobem wedlug wynalazku sa po¬ dawane doustnie zarazanym myszom, przy obu ty¬ pach zwiazków uzyskuje sie jednakowa ochrone.Zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku mozna otrzymac przez ogrzewanie odpowiedniego znanego calkowicie uwodnionego zwiazku w obec¬ nosci wolnej wody w temperaturze 40°C do 100°C dotad, az utworzy sie zwiazek odwodniony. Ogrze¬ wanie przeprowadzi sie z wsadem, zawierajacym wybrany calkowicie uwodniony zwiazek z dodat¬ kiem wody przy pH 3,0—7,0. Korzystna jest obec¬ nosc wody w ilosci, przynajmniej 50% wagowych calkowicie uwodnionego zwiazku we wsadzie, a ogrzewanie stosuje sie dla calego wsadu w prózni, az do otrzymania suchego czesciowo uwodnionego produktu. Korzystnie, mozna zastosowac organiczny rozpuszczalnik calkowicie mieszalny z woda, na 5 przyklad etanol lub izopropanol, dodajac go do wsadu po dokonaniu ogrzewania, lecz przed su¬ szeniem. W innej odmianie sposobu wedlug wy¬ nalazku potrzebne cieplo i woda moga byc dostar¬ czone w formie pary wodnej. Stwierdzono, ze naj- 10 bardziej korzystne z punktu widzenia mozliwosci wykonania i oplacalnosci procesu jest prowadzenie operacji suszenia przy pH=5,0—5,5 i w tempera¬ turze 60—70°C i w obecnosci przynajmniej 65% objetosciowo rozpuszczalnika organicznego. 15 Obecnosc wolnej wody na wsadzie zawierajacym uwodniony zwiazek majacy podlegac przeksztalce¬ niu w odpowiedni czesciowo odwodniony lub bez¬ wodny zwiazek sposobem wedlug wynalazku, oraz minimalna temperatura ogrzewania 40°C dla osia- 20 gniecia przemiany, zostaly wykazane jako niezbedne w sposobie wedlug wynalazku. W zwiazku z tym dowiedziono przeprowadzajac szereg oddzielnych prób, ze samo suszenie nie powoduje pozadanej przemiany. Tak wiec stwierdzono, ze nadzwyczaj 25 trudno jest obnizyc zawartosc wody w wysuszo¬ nym uprzednio calkowicie uwodnionym zwiazku kwasu 6-( 1 -amino-cykloheksanokarboksyamido)pe - nicylanowego wedlug wczesniejszego sposobu po¬ nizej 2% suszac wedlug Abderhalden'a w tempe- 30 raturze 55°C z P205, destylujac azeotropowo z ben¬ zenu prowadzac reakcje z 2,2-dwumetoksypropa- nem i kwasem, suszenie w piecu prózniowym nad P205 w 55°C i traktowanie roztworem dwumetylo- formamidu, „sitem molekularnym" Iiinde'go z na- 35 stepujaca potem sucha krystalizacja eterowa. We wszystkich przypadkach produktem koncowym byl znany juz calkowicie uwodniony zwiazek. Dowodzi to, ze róznica pomiedzy calkowicie uwodnionymi zwiazkami i zwiazkami czesciowo uwodnionymi 40 albo bezwodnymi polega na tworzeniu krysztalów.Jednakze raz odwodnione sposobem wedlug wy¬ nalazku zwiazki rozpuszczone w wodzie staja sie indentyczne ze znanymi zwiazkami rozpuszczonymi w wodzie i moga zostac wykrystalizowane jako 45 znana uwodniona postac w nizszej temperaturze, znanymi juz sposobami krystalizacji z mniejsza zawartoscia wody. Nie stwierdzono, aby zwiazki odwodnione sposobem wedlug wynalazku zmie¬ nialy sie w odpowiednia uwodniona postac w sta- 50 nie stalym. Nowe zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku ulegaja latwo przemianie w znane zwiazki na drodze rozpuszczania w wodzie przy dowolnym pH i krystalizacje ponizej 40°C, lub liofilizacji. Z drugiej strony, jak wynika z po- 95 przednich rozwazan, przemiana znanych zwiazków w postaci krystalicznej w zwiazki otrzymane spo¬ sobem wedlug wynalazku wymaga dostarczenia ciepla i obecnosci wody. Na reakcje moze miec wplyw czas ogrzewania, zawartosc wody i jej pH, eo oraz dodanie organicznego rozpuszczalnika przed stadium suszenia, jak to zostanie wykazane bar¬ dziej szczególowo ponizej. Nastepujace przyklady objasniaja wynalazek lecz nie ograniczaja go.Przyklad 1. Odwodniony kwas 6-(l-amino- w cyklopentanokarboksyamido)penicylanowy.5 67 956 6 A. Zawiesine zawierajaca 10,8 g kwasu 6-amino- penicylanowego (6-APA), 6,3 g trójetyloaminy i 58 ml dwuchlorku metylenu mieszano w tempera¬ turze pokojowej w ciagu jednej godziny. Nastepnie oziebiono ja do 0°C, i dodawano 4,1 g bezwodnika N-karboksylowego kwasu 1-aminocyklopentanokar- boksylowego. Po uplywie jednej godziny, dodano dalsze 4,1 g NCA, i mieszanine mieszano przez 2 go¬ dziny. Roztwór przesaczono i do przesaczu dodano 150 ml octanu etylu. Ten roztwór zageszczano do 60 ml, po czym dodano 40 ml octanu etylu, zawie¬ rajacego 4 g kwasu octowego lodowatego. Wytra¬ cony osad utworzony ze znanego hydratu i wysu¬ szony w prózni nad zelem krzemionkowym wazyl 13,3 g i zawieral 5,89% wody.B. Produkt odwodnienia zwiazków uwodnionych sporzadzony sposobem opisanym w A uformowano nastepujaco: 2 g wodzianu zmieszano z 2 ml wody i ogrzewano w 70°C przez 2 minuty; nastepnie do¬ dano 2 ml izopropanolu i mieszanine odsaczono.Pozostalosc zawierajaca 900 mg, wykazywala wy¬ raznie zmienione widmo podczerwieni (potwierdza¬ ja to fig. 1 i fig. 2 na zalaczfonych rysunkach) d zawierala 0,1% wody oznaczonej metoda Karl'a Fi¬ schera.C. Próbki wodzianu kwasu 6-(l-aminocyklopenta- nokarboksyamido)penicylanowego (hydrat cyklo- leucylopenicyliny) (3,8% wody) otrzymane metoda A i nowy produkt ich odwodnienia (0,0% wody) otrzy¬ many metoda B, zostaly umieszczone w zamknie¬ tych pojemnikach na 17 godzin w 78°C. Wodzian stracil 35% zawartosci swego betalaktanu, podczas gdy produkt odwodniony stracil tylko 4%.Przyklad II. Odwodniony kwas 6-(l-amino- cyklobutanokarboksyamido)penjicylanowy. 7 g wo¬ dzianu, który zawieral 3% wody oznaczonej metoda Karl'a Fischera, ogrzewano z 5 ml wody w 65°C przez 5 minut. Dodano nastepnie 70 ml izopropa¬ nolu i ten uklad przesaczono.Placek filtracyjny przemyto izopropanolem, i pro¬ dukt wysuszono.Wyliczono dla C18H19N804S; H—6,07; C—49,8; N— 13,5; S—10,2.Analiza elementarna: H—6,14; C—49,6; N—13,6; S—10,2.Produkt mial widmo w podczerwieni (fig. 3 na rysunku) rózniace sie od widma wodzianu (fig. 4) przy obecnosci charakterystycznych pasm absorb- cyjnych, przy nastepujacych czestotliwosciach (cm-1); 3350, 2100, 1690, 1640, 1530, 1220, 1180, 1030, 1000, 950, 875, 848, 805, 775 i 672.Po ogrzewaniu stalych substancji w ciagu 73 go¬ dzin w 100°C uwodniona penicylina stracila 90% pod¬ stawowego betalaktamu, podczas gdy produkt od¬ wodniony nie stracil go wcale.Przyklad III. Pólwodzian kwasu 6-(l-amino- cykloheksanokarboksyamido)penicylanowego. 2 g monohydraty kwasu 6-(l-aminocykloheksanokarbo- ksyamido)penicylanowego otrzymanego sposobem podobnym jak w przykladzie IA, lecz przy podstawieniu odpowiedniego NCA, rozpuszczo¬ ny w 2 ml wody i roztwór ogrzewano w 60°C przez 4 minuty. Nastapilo wytracenie osadu.Dodano wówczas 20 ml izopropanolu i mieszanine przesaczono. Placek filtracyjny przemyto izopropa¬ nolem, a produkt wysuszono.Wyliczono dla C^HaNjOtS 1/2 HtO: C—51,5; H— 6,85; N—12,0; HtO=2,58 Analiza elementarna: C—51,3, H—6,60, N—120,0, O—2,49.Produkt mial widma w podczerwieni (fig. 5) rózniace sie od widma monohydratu (fig. 6) obec¬ noscia charakterystycznych pasm absorpcyjnych przy nastepujacych czestotliwosciach (cm-1): 1670, 1510 i 765.Przyklad IV. Pólwodzian kwasu 6-(l-amino- cykloheksanokarboksyamido)penicylanowego. Por¬ cje monohydratu kwasu 6-(l-aminocykloheksanokar- boksyamido)penicylanowego w ilosci 8,6 g zmie¬ szano z 7 ml wody i ogrzewano w 60—65PC prze* 5 minut.Nastepnie dodano 80 ml izopropanolu i mie¬ szanine odsaczono. Po wysuszeniu nad pieciotlen¬ kiem fosforu w prózna produkt mial wfidmo w pod¬ czerwieni (fig. 5) rózniace sie od widma monohy¬ dratu (fig. 6), jak opisano powyzej. Po ogrzewaaifU w ciagu 73 godzin w 100°C penicylina w stanie stalym zachowala caly swój betalaktan, zgodnie z pró¬ bami z hydroksamianami.Przyklad V. Pólwodzian kwasu 6-(l-amino- cykloheptanokarboksyamido)penicylanowego. 7 g monowodzianu kwasu 6-(l-aminocyklohepta- nokarboksyamido)penicylanowego otrzymanego me¬ toda wedlug przykladu IA, przy zastosowaniu od¬ powiedniego NCA, plus 5 ml wody, ogrzewano w 60°C przez 5 minut. Po dodaniu 70 ml izopropanolu uklad przesaczono, otrzymujac produkt w postaci pólwodzianu o zmienionym widmie podczerwieni (fig. 7 i 8) majacym wyrazne pasma przy 1110, 1070 i 791 cm-1.Przyklad VI. Pólwodzian kwasu 6-(l-amino- cykloheptanokarboksyamido)penicylanowego. 11 g monowodzianu kwasu 6-(l-aminocyklohepta- nokarboksyamido)penicylanowego plus 7 ml wody ogrzewano w 55—58°C przez 4 minuty. Lepkosc ukladu wykazywala nagly wzrost i powstal osad.Wysuszony produkt dal zmienione widmo pólwo¬ dzianu podczerwieni (fig. 7). W badaniu trwalosci obejmujacym ogrzewanie w ciagu 73 godzin w 100°C material wyjsciowy stracil 90% swego beta-lakta- mu, w przeciwienstwie do 29% utraconego przez zmieniony produkt.Przyklad VII. Produkt odwodnienia kwasu 6-(l-aminocykloheksanokarboksyamido) penicylano¬ wego.A. Jeden gram monohydratu zmieszano z 0,5 ml wody i 0,5 ml izopropanolu i nastepnie ogrzewano w kapieli wrzacej wody przez 3 minuty. Dodano dal¬ sze 8 ml izopropanolu, uklad zostal doprowadzony do wrzenia i nastepnie przesaczony. Nierozpuszczal¬ ny skladnik stanowil produkt odwodnienia majacy spektrograficzna róznice w podczerwieni taka, jak róznica miedzy pólwodzianem (fig. 5) i monohy¬ dratem (fig. 6).B. Jeden gram monohydratu zmieszano z 0,2 ml wody i 0,8 ml izopropanolu i nastepnie ogrzewano w kapieli wodnej o temperaturze 100°C przez 4 minuty. Dodano dalsze 8 ml izopropanolu, uklad doprowadzono do wrzenia, a nastepnie przesaczono. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 6067 956 8 Nierozpuszczalny skladnik stanowil pozadany pro¬ dukt odwodnienia penicyliny o widmie w pod¬ czerwieni jak pokazano na fig. 9.C. Dwa gramy monohydratu zmieszano z 0,6 ml H20 i 6 ml nitrometanu. Uklad ogrzewano do wrze¬ nia i saczono. Nierozpuszczalny skladnik wazyl 600 mg i zawieral 1% wody, oznaczony metoda Kar- TaFischer'a.D. Trzydziesci dziewiec gramów monohydratu ogrzewano z dodatkiem 30 ml izopropanolu plus 7,5 ml wody. Przy 40°C calosc przeksztalcila sie w roztwór. Przy 50°C roztwór stal sie bardziej lepki, a substancja stala wytracila sie miedzy 50°C i 60°C. Dodano izopropanolu, aby uzyskac koncowa objetosc 200 ml, temperature doprowadzono do 47°C i mieszanine przesaczono. Nierozpuszczalny skladnik zawieral 1% wody (Karl Fischer), i mial widmo w podczerwieni pokazane na fig. 9. PL PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania nowych bezwodnych lub pólwodnych krystalicznych penicylin syntetycz¬ nych zwlaszcza nowego zwiazku o wzorze przed¬ stawionym na rysunku w którym n jest liczba calkowita od 1 do 5, a m ma wartosc od 1/2 do 0 z tym zastrzezeniem, ze gdy n jest równe 1, wówczas m jest mniejsze od 1/2, znamienny tym, ze mieszanine wody ewentualnie z dodatkiem roz¬ puszczalnika organicznego calkowicie mieszajacego sie z woda i uwodnionego zwiazku o wzorze przed¬ stawionym na rysunku w którym n jest liczba calkowita od 2 do 5 i m jest liczba calkowita wie¬ ksza lub równa 1 albo n jest równe 1, a m jest 5 wieksze lub równe 1/2, wykazujaca wartosc pH 3,0—7,0, ogrzewa sie do temperatury 40—100°C, po czym otrzymany zwiazek suszy sie. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 10 stosuje sie wode stanowiaca przynajmniej 50% wa¬ gowych mieszaniny. 3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tym, ze rozpuszczalnik organiczny mieszajacy sie zasa- 15 dniczo calkowicie z woda dodaje sie do miesza¬ niny po ogrzewaniu 40—100°C, po czym mieszani¬ ne suszy sie. 4. Sposób wedlug zastrz. 3 i 4, znamienny tym, 20 ze jako rozpuszczalnik organiczny stosuje sie eta¬ nol, propanol lub nitrometan. 6. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze ogrzewanie przeprowadza sie w temperaturze 60 — 25 70°C i przy pH=5,0 — 5,5. 7. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze krysztaly uwodnionego zwiazku, w którym m ozna¬ cza wartosc liczbowa 1 lub wieksza od 1, ogrzewa 30 sie z para wodna. FIG.I 4000 3000 9ala laaaflfiaaaaaaaaaaaaaaa' . -imiiMiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiitiiiiiiiiiiiini)< •¦' fiaBi •¦•¦¦¦- .aaa«aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaafjpB •«• tiiaiiaaaaaaaaaaaaaaaa- «a» aaaaaaiaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa< aia i tiaaaa <¦<¦--¦¦ aaaaa.¦¦¦¦¦¦¦¦luiHiiiiiitiiiMini ¦•¦ ifaaaaaaaaaaaaaaaaaaar •¦¦¦ ••«•¦¦•¦•¦•¦¦¦••••¦¦•••¦•¦¦¦«•¦•¦••¦•¦•¦• .. ¦¦• '•••• • <•••¦•¦ l »««¦¦•¦¦¦ aaaaaaaaaaaa*-*- --«¦¦•«¦¦¦• ¦ IfJ •¦Zi af&aaSaaaaaaaaaaaaaa .¦¦¦¦ ¦lit tHatf¦¦¦¦¦ ¦¦¦¦¦nr i ¦•¦• aaaaaaiaaaaaiaaaaaaaaaaaaalifiaaaa* * alai iii.< aZZaawaiaaaaaaaaaaaaaaaa. aaaaaaafa* aaiaaaa. wniiiH aiai aiaaaiaaaaaaaaa' a ¦• iiiii aaaaaaaaaaaaaaaaiiiliaaaaaaifaaaaai a ii ia t.iiiit ¦¦•¦¦*¦¦•••¦¦¦•¦¦•*« liMtafi .«m •»«aaa«^^B HiiiMiMtiittiiitiiM ¦¦¦¦•! aaaaaaaaaaaaaaaaaaiiaaalaaiiiaar a ai ii iaa aiaaaiiaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa «a^a«ii .aiaaiaaaaa •• ^inH «•• • - a*a#saaw aa aiaaaaaaaaaaaa «*•¦¦ ¦•••¦•¦•¦ iMliiitittiajtiii*! iaa. ,¦¦¦•¦¦•{¦{•¦•¦¦¦¦••{•(•¦¦¦•¦¦«•¦«<••••«;•••¦¦¦«••.••¦•«¦ aa. • . •••Ilaaiai .¦¦¦¦¦•¦¦•¦•¦i... «i«i aaaaaaaaaaaa;aaa asal SaSSi .•¦•••¦tan . •** ^ia«a»a« ••••¦•••¦••¦¦••••••ai »«ai«iaai«ajS««ia»«i""ai«»«aiaiai«iai«« taal ¦ii' • a .aaaaaaaa * . «•*¦ ¦¦ aaia aiai •¦ai aa iaj •••*•*«*¦• ¦ aaaaaaaaaiall »»m» ¦ • •¦«• ¦ — .3< .41 .501 .60 7Q 1.0 *Jmm. isi ¦¦¦•iMSiiaiiiisiiiaaa ia llllllllllllllllllllllllllllllllllltf ;:»si:i2 •«••¦•••¦• • •¦,¦••••«*¦¦•••«• ¦«•••< • •• ••••••• taaaa ii •¦ taaaaa. .aaaaaaa aa*aaaaaaa«aaaaaaaaaa aiaiaiaiaia»«iaiaiai"a»aiai»aiw«ai«i•¦••••••¦¦ aaaaaasaaa aaSSaafia. • 23aaSaSaj*33aSES««aai • ¦• r.aaliS ¦¦iii"! Ia laiaaaa t ISaaZaa a«aiaiaiaaialala) «Sa*«SBa»ai aaaaaaaaaaaaaaaaaaaa ••.«..•••• aaaaaa aaaaa •¦¦•« aarSa • aa3aaaa3aaaa»aaaaaa»' • a. . .*a3aa )•*#f • •« •• • • aaa aaaaa aagaa aaaaaaaaaa aSaaaaaaaa aa-^a*a.a.a^ •¦-..«•«•»••«.•.a.aaaaa«a»aaaaa^ •aaa.aaaaaaaaaaaaaalaaSaaaaiaa. . a. • ¦• Saf iUkli • t* i. .aaaaiaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa.a.a»aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa.a. ~Saa3 5ava*a»waf»a»a»ak mmmmmm^m**mm~~ ««• • «»* a h.S iX1SI i. ..M*...«...a.*....*....a. «w«»«aa< »w««a« aa»«aka..aaaa.a««..a. m«i • . a. » a w» • »«»*a-< a« ¦* ••• ••¦aaaaaaaaaaaaaaaa».aaaaaaa».aaa»«aaaaaaaaaaaaaaaaaj»=*««l»»»--«..._». iniiniiiiiililiiiiiiiiiiiiiii iiniiiiiiiiiiifiii H 50 60 1.70 31.0 •t?5t????i;=5f??=="?"??=n????? ~i'Zz~zziZ"~"i'ii~~"""'"u^ 10 11 12 13 14 15KI. 12p,4/01 67 956 MKP C07d 99/16 FIG 2. 4000 3000 2000 1500 CM'1 1000 900 800 700 rtnte 0.0BH •ioB .20jj .30Jj •40B 6011 7om 1.0||fc ooLtUj L»J 1 1 1 . lli li 1 1 . 1 , li 11111 i 11 i 111l 111111111 i 1111111111111 i t li" 11 lllllllllll lllff 111111] 11 li Pf 'lii 1 IImiIIIIIIiIIH 111111 [ 111 1! 11M i J.1l,,,l,.,l,,ll.,,.»,l,,|lin|l,l,»,u|.l| 11111 li 11111111 fi 1 1 MIII 1 i 1111 li 111 Ul Ul nilu II im Ul [I Ul 1111111111111111111111111111 In u 1 i 1II1111IIIIII111II1IIIIIIII1111111 i\\ ti\ li'i 1 i'i 1 i'i M i*i h li li 1.1.1.1. Ir^ 11111TTT7TT111111111FITT11IITI HTm ]0.0 1.10 .20 .30 J.40 .50 1.60 70 J1.0 Joo 10 11 12 13 14 15 FIG3. 4000 3000 2000 1500 CM1 1000 900 800 0.0 .10 700 Vh1i'^fi'i'ili li'i I i'i i*i i'i i'i 11 i1!1! I i*i hV'l i*i iVi'i i 111'| I f 1111 I i I f I1!! 1111 11 I I I 1*11 I I 11 f f f I1!1!1!1! I fi'1'1 i i1'*' ¦*'*'1 i'fl '*' M '* |p.O 10 ¦ ¦¦ •¦¦¦•¦» ¦¦•¦¦¦¦¦¦•¦¦•¦••¦••¦••¦•¦¦¦¦••¦•¦¦¦¦»¦•¦¦¦¦¦¦•¦¦•¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦••¦••¦•¦¦••¦¦¦¦ ••^¦¦••••¦' ¦¦• •¦•¦¦as¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦•¦•¦¦¦¦ ¦ ¦¦i •¦¦¦¦•¦¦¦•¦¦¦¦¦¦•¦¦•¦¦¦¦¦¦¦•¦•¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦•¦¦¦¦¦¦¦¦»¦¦¦¦•¦¦ iti»i*M •¦¦¦«¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦«¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦•¦¦ .20| 1.20 .30 4< 30 3 ¦¦¦¦i (¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦^¦¦¦¦¦¦•Haai ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•» ¦¦¦¦i ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦s•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦ii *¦¦( immmmmmmmummmmmumummmmmmmmmmmmmmmmummmmmmmmmmummmummmm •¦¦¦t/Ta ¦¦¦¦• ¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦ ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦«¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦«¦¦! i ¦¦¦! •¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦a laaPr-ii 501 601 701 1.0 ¦ ¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦l IIIMIIIIII lllll lllllllllll ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦lllllllllllllllllllllllllllllllll ¦ ¦¦¦¦¦-¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦i im i ¦-¦¦¦'(¦¦¦¦i * ¦¦((¦¦¦¦¦i ¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦ »""55555555"!555S5555S2S5£l S 5' M "S"52 S2555! !'5S!T55SSS55SSS5SSSS5SSSSS5SS5555M5SSS5S5 1.50 1.60 1.70 1.0 8 9 10 11 12 13 14 15KI. 12p,4/01 67 956 MKP C07d 99/16 FIG.4, 4000 3000 2000 1500 CM1 . 1000 900 800 0.0 700 .10 8mJi i¦¦¦¦*¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦ . *¦¦¦ •¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦' ~mr*mm- :.*¦«» ¦¦<¦¦•»••»' •»¦¦¦»¦¦¦ *«m¦•»*«««*¦¦¦¦¦»¦¦« SS|'BSSSSSSSSSSSSSSS"a^B^S5SSiSSSSS^ tfi i iiiir iiiiuiiiiiiisisiiiii^ 0.0 .10 20 .30 3 4 5 •• 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 FIG. 5. 4000 3000 2000 1500 CM'1 1000 900 800 700 0.0 10 20 JO 40 50 60 70 1.0 oo' jjfA i+tl} i'l11 i'l 1 l'l 1*11*11'lllfl'lll'lM 1*11 1111II11111111111 Mil li 11111! lll 11111 llllllllllllllllllllllltmllllllllllml li i i i iiii w 1 fiwl I lii 14-11 1tri 111111 14! 1 i 11lllllllIM 11111 1 1 M 1 111111 M 11 111111 1II1 111 1 111 ITTT 1*1*1*1*1^4) 1*1*1 l't*T*ili'i \ i'i 1 /i /i L'i /i /i ' ¦ \ A A11 ¦ fi i 11 ! 1 1 1 1 1 ! | 1111 1 11 111 1111 0.0 .10 .20 .30 .40 .50 .60 .70 1.0 OO 8 9 10 11 12 13 U 15KI. 12p,4/01 67956 MKP C07d 99/16 FIG. 6. 4000 3000 ,l|J,l,UJ,l,l 0.0 2000 1-500 l«l i I i I cmI 1000 900 800 700 ws ztt r.*:^.:.::::::;:::::::.:::::::::^ ^¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦r.lllhlMlMJIMI»MIMI»llll»IHIII»»»Nlllt.v.lllllllkk...k'< ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦'.¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦•¦¦¦¦¦¦¦¦«¦¦¦ 10 FIG. 7. 4000 3000 0.0 .10 2000 1500 CM' 1000 900 800 700 lyiy/jj;,1,',^ | ,*, \ „',,', /, /,, |,',', j fi, M ,'i ^ ¦'¦ ¦. ¦ . ,',, ( ¦ ¦ ¦ l ¦ ¦ Ji i ¦ 1111 h ¦1^ i.i ff[fnYm I* 10.0 .10 30 40 50 70 10 oo' -H-j IMd1111iUWU 111 }/H f -j-h-h liiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦i ¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦¦a iiiii llllllllll ¦¦¦¦¦¦¦ii ¦¦¦ ::::::::::: iiiii*;; IIH iiiiiiiiiri ¦¦¦¦¦tiiiri ¦¦¦¦¦¦< naaua ¦¦¦¦¦¦ \mwmm ISSSSttiSSSi iiiiiijiiii "tlili ifttttt" ¦¦¦¦¦¦¦¦¦ <¦¦¦ ¦ ¦¦¦¦¦¦¦1 !!¦¦¦ ¦¦¦¦¦¦¦¦•.i ¦ ¦¦¦¦¦"¦ ilHI ¦¦¦¦*¦!¦¦¦ «a1 ¦¦¦¦¦¦ « • ¦¦ ¦¦• |pii|ri5s»!! 53==Si3's5r:lsS llllllllllIIII 1IIMHIIMI'I .?»•¦ ii !¦¦¦¦»•¦ ••¦?.¦-•¦¦¦¦¦¦¦ 1 11 1 1 1 1i 1 1 1 1 jfgffi 1 I |[ liilll Uf MII ¦i ¦¦¦¦¦ ¦¦«¦¦¦¦ ImM i. eaasr -Htt ||#j ) 11T t'i :s i-t-H- 111 r xtf 11II III 1II == iiii rfll 11luf I''1J|1I111I Tl 11111 nH" .30 .40 50 .60 .70

1.0 OO 10 11 12 13 14 15KI. 12p,4/01 67 956 MKP C07d 99/16 CU. 0 S xCH» V " / \ / % C— C— HM-CH-CM C-CH *W. O CH-COOH * PL PL