PL65442B1 - - Google Patents

Description

Kazda z tych penicylin mozna stosowac w postaci soli z takim kationem, który nie przeszkadza w hydrolizie enzymatycznej; najbardziej rozpowszechnione sa sole metali ziem alkalicznych lub metali alkalicznych, takie jak sole sodowe, wapniowe i potasowe.Penicyliny o ogólnym wzorze 2, w którym R oznacza rodnik R4XCH2, stosowane jako surowce w sposobie wedlug wynalazku, obejmuja penicyliny otrzymane w wyniku fermentacji z uzyciem prekiursora w sposób opi¬ sany w opisach patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2562410, 2479295, 2479296 oraz 2854450, które dotycza otrzymywania wielu biosyntetycznych pe¬ nicylin. Takie penicyliny obejmuja, na przyklad, feno- ksymetylopenicyline (penicyline V) oraz takie jednopod- stawione fenoksymetylopenicyliny, jak p-metoksyfenoksy- penicylina, p-nitrofenoksymetylopenicylina, hydroksyfe- 5 noksymetylopenicylina, p-chlorofenoksymetylopenicylina, p- i m-toli'loksyfenoksymetylapenicylina.Do tych penicylin zalicza sie tez takie alkoksymetylo- penicyliny takie jak, na przyklad, etoksymetylopenicyli- na, n-butoksymetylopenicylina, izoamyloksymetylopeni- 10 cylina, heksyloksymetylopenicylina, alkenyloksymetylo- penicyliny, jak na przyklad, alliloksymetylopenicylina, 2-metyloalliloksymeityilopenicyiina itp. oraz penicyliny zawierajace atom siarki jak na przyklad p-tolilotiomety- lopenicylina, p-naftylotiometylopenicylina, etylotiomety- 15 lopenicylina, n^butylotiometylopenicylina, allilotiomety- lopenicylina itp.Kazda z tych penicylin mozna stosowac w postaci jej soli z kationem nie przeszkadzajacym w hydrolizie enzy¬ matycznej. Najbardziej rozpowszechnione sa sole metali 20 alkalicznych i metali zieni alkalicznych, takie, jak sole sodowe, wapniowe i potasowe.W sposobie wedlug wynalazku najbardziej korzystne jest stosowanie penicyliny V lub G oraz ich soli w roz¬ tworze wodnym o stezeniu 2—15 %. 25 Sposób wytwarzania jednej z amidaz penicylinowych w postaci stalej, jak równiez roztworu wodnego, która mozna zastosowac w sposobie wedlug wynalazku, a be¬ dacej znanym enzymem lub mieszanina enzymów opisali K. Sakaguchi i S. Murao (J. Agr. Chem. Soc. Japan, 30 23, 411 (1950); patrz równiez CA., 45, 119) (1951) oraz, bardziej szczególowo S. Murao (J. Agr. Chem. Soc. Ja¬ pan, 29, 400-^107 (1955), CA., 51, 8160 g (1957)). Za¬ równo K. Sakaguchi, jak i S. Murao, do wytwarzania enzymu stosowali Penicillium chrysogenum Q 176, który 35 to szczep jest iszeroko stosowany w przemysle penicyli¬ nowym (patrz referat: CJ. Salivar i wspólpracownicy, „Separation and Identification -of Penicillin Species in Commercial Penicillin (Q-176 Gulture)", 1947 oraz opisy patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2479296 40 i 2562407).Korzystna kultura, opisana w opisie zatentowym Sta¬ nów Zjednoczonych Ameryki nr 3014845 jakoL szczep Streptomyces lavendulac stosowany (Jo wytwarzania ami¬ dazy penicylinowej zlozona jest w depozycie American 45 Type Culture Collection, Washington, D.C i oznaczona symbolem A.T.CC nr 13664. Inna, znajdujaca sie tam kultura, A.T.CC nr 13665 na ogól daje mniej pigmentu niz A.T.CC 13664 i mozna ja równiez stosowac do Wytwarzania amidazy penicylinowej. 50 Najbardziej korzystna kultura w przypadku sposobu wedlug wynalazku jest kultura oznaczona symbolem A.T.CC nr 21138. Organizm ten jest mutantem szczepu rodzicielskiego identyfikowanego jako Streptomyces la- vendulae. 55 W sposobie wedlug wynalazku mozna równiez stoso<- wac hydrazyd w kombinacji z innymi amidazami peni¬ cylinowymi otrzymanymi z róznych, wytwarzanych ami¬ daze penicylinowa mikroorganizmów, takich jak grzyby Botrytis cinerea i Penicillium chrysogenum, jak równiez 60 pewne inne grzyby z modzaju Alternaria, Aspergillus, Epiccus, Fusarium, Mucor, Penicillium, Phoma i Tri- choderma, Drozdze Cryptococcus albidus i gatunek Tri- chosporonu oraz pewne Actinomycetes z rodzaju Strep¬ tomyces wytwarzaja równiez amidaze penicylinowa. 65 Stwierdzono takze zwiekszenie wydajnosci procesu otrzy-(5442 mywania 6-APA, o ile uzyje sie szczepów Bacterium proteus, Esoherichia coli A.T.C.C. 9637, Escherichia coli A.T.C.C. 11105 oraz Aerobacter aerogenes w obecnosci hydrazydu.Amidaze penicylinowa z mikroorganizmów z rodzaju Streptomyces produkujacych amidaze penicylinowa otrzy¬ muje sie ponizej opisanym ogólnym sposobem zilustro*- wanym równiez bardziej szczególowo przykladami. Od¬ powiedni enzym do sposobu wedlug wynalazku mozna otrzymac w sposób nastepujacy.W pierwszym etapie na pozywke agarowa przeszcze¬ pia sie przechowywane w ziemi zarodniki mikroorga¬ nizmu z rodzaju Streptomyces, zdolnego do wytwarzania amidazy penicylinowej. Po odpowiednim wzroscie i wy¬ tworzeniu duzej ilosci zarodników otrzymuje sie inoku- lum do drugiego etapu, który polega na dalszym wzros¬ cie grzybni na nowej pozywce o tym samym skladzie.Wytworzone zarodniki odmywa sie wyjalowiona woda, a otrzymana zawiesine zarodników przenosi sie asep- tycznie do naczyn zawierajacych bulion odzywczy.Po 24—48 godzinach fermentacji brzeczke przenosi sie do wiekszego tanku zawierajacego bulion odzywczy.Po wymieszaniu i przewietrzaniu w ciagu 2—4 dni grzybnie usuwa sie, a pozostaje klarowny plyn pofer¬ mentacyjny. W zaleznosci od zastosowanego organizmu amidaza penicylinowa znajduje sie albo w plynie pofer¬ mentacyjnym lub tez w calej masie komórkowej. Jezeli stosuje sie organizm wybrany do sposobu wedlug wyna¬ lazku, wówczas pozadana amidaza penicylinowa znajduje sie w calej masie komórkowej, która sie dalej przerabia w calosci. —= jPonizej przedstawiono korzystna metode otrzymywa¬ nia komórek Streptomyces Lavendulae A.T.C.C. nr 21138 zawierajacych amidaze penicylinowa stosowana w sposobie wedlug wynalazku.Kultura Streptomyces A.T.C.C. nr 21138 rosnie w wytrzasanych butelkach oraz w tankach fermentacyjnych o pojemnosci 10 i 90 litrów na pozywce skladajacej sie z bulionu o stezeniu 20 g/l i o rpH = 7,3—7,4; sklad bulionu podano ponizej: 65% wodny roztwór glukozy (wagowo) 3,0% maczka sojowa 2,5% wyciag drozdzowy (Difco) 0,5% chlorek sodowy 0,5% weglan wapniowy 0,2% Pierwsze cztery skladniki miesza sie razem, pH do¬ prowadza do wartosci 6,8 i dodaje sie weglan wapniowy.Nastepnie zaszczepia sie kulture mikroorganizmu i pro¬ wadzi sie hodowle przez 30 godzin w temperaturze oko¬ lo 27°C, caly czas mieszajac i przewietrzajac. Okolo 7% objetosciowych hodowli stanowi inokulum dla fermenta¬ cji koncowej.Fermentacje koncowa prowadzi sie przez 96 godzin w temperaturze 26—28°C, mieszajac i przewietrzajac; grzybnie usuwa sie na drodze filtracji lub wirowania.Zebrane grzybnie przemywa sie i miesza z woda w ilosci dwukrotnie wiekszej objetosciowo niz ilosc bulionu wyjs¬ ciowego. Do tak otaymanej zawiesiny dodaje sie peni¬ cyline z pewna iloscia hydrazydu.Reakcje nalezy prowadzic w obecnosci przynajmniej okolo 0,5 mola aktywnego hydrazydu na mol penicyliny, korzystniej 0,5—-2,0 moli hydrazydu na mol penicyliny, a najkorzystniej 0,7 mola — 1,5 mola hydrazydu na mol penicyliny. Stosowany hydrazyd winien byc wybra- maczka sojowa maka kukurydziana (NH4)2S04 CaC03 40 g/l 40 g/l 1 g/l 40 g/l ny z wyzej opisanych aktywnych hydrazydów, korzystnie z grupy hydrazydów aromatycznych, a najkorzystniej' benzyhydrazyd. pH mieszaniny reakcyjnej utrzymuje sie w granicach okolo 6,0—11,0, korzystnie w zakresie okolo 5 6,5—9,0 a najkorzystniej w zakresie okolo 7,5—8,5.Temperatura reakcji lezy w granicach od okolo 10° do 60°C, korzystnie w zakresie okolo 20° — 50°C, a najkorzystniej w granicach 35° —45°C. .Wydajnosc procesu syntezy 6-APA zmienia sie oczy- 10 wiscie wraz ze zmiana warunków prowadzenia procesu.Mozna stosowac dluzszy lub krótszy czas reakcji, niz opisany ponizej, ale maksimum wydajnosci otrzymuje sie, jezeli proces prowadzi sie w ciagu 2—24 godzin, a zwykle w ciagu 2—6 godzin. 15 W sposobie wedlug wynalazku zamiast pozywki opi¬ sanej powyzej mozna równiez stosowac pozywke o na¬ stepujacym skladzie: 20 Pozywka ta jest dobra do otrzymywania komórek Streptomyces lavendulae; wymaga ona ustalenia pH rów- 25 nego 7,2 — 7,4 przed zaladowaniem do autoklawu. Skla¬ dy innych pozywek podano w przykladzie I.Podczas prowadzenia doswiadczen znaleziono wiele hydrazydów, które wplywaja na zwiekszenie wydajnosci syntezy 6-APA. Do pierwszej grupy nalezy zaliczyc hy- 30 drazydy aromatyczne o ogólnym wzorze 3, w którym R1, R2 i R3 oznaczaja wodór, niskoczasteczkówe rodniki alkilowe (najkorzystniej Ci — C2), niskoczasteczkówe rodniki alkoksylowe, grupe hydroksylowa oraz amino¬ wa, N-alkiloaminowa lub N,N-dwualkiloaminowa, przy 35 czym rodnik alkilowy oznacza tu grupe niskoczastecz- kowa. Rodniki R1, R2 i R3 moga byc takie same lub rózne. Przykladami takich hydrazydów sa: benzhydra- zyd, hydrazyd kwasu salicylowego, 1-aminobenzhydra- zyd- 4-metylobenzhydrazyd lub podobne; najkorzystniej- 40 szy wplyw na wydajnosc procesu wytwarzania 6-APA ma jednak benzhydrazyd.Do drugiej grupy nalezy zaliczyc inne hydrazydy, któ¬ re wplywaja na zwiekszenie wydajnosci reakcji syntezy 6-APA, na przyklad: karbazyd, hydrazyd kwasu fenylo- 45 octowego, hydrazyd kwasu naftylooctowego, hydrazyd kwasu indolokarboiksylowego-3, hydrazyd kwasu tiofeno- karboksylowego-2, hydrazyd kwasu bursztynowego, hy¬ drazyd glicyny, hydrazyd tyrozyny, hydrazd kwasu ma^ slowego, hydrazynoikarboksylan III-rzed. butylu, hydrazyd 50 kwasu cyklopentanokarboksylowegoitp. - Hydrazydy aromatyczne zwiekszaja wydajnosc synte¬ zy 6-APA w róznym stopniu. Najkorzystniejszym jest benzhydrazyd, biorac pod uwage zarówno efekywnosc dzialania, jak i koszty. Karbazyd zwieksza wydajnosc 55 syntezy 6-APA bardziej niz benzydrazyd, jednak w jego obecnosci zauwazyc mozna pewne tendencje do rozkladu 6-APA na skutek katalizowania w wiekszym stopniu rozkladu pierscienia -laktamowego. W wyniku badan stwierdzono, ze szereg innych hydrazydów nie wykazalo 60 aktywnosci; sa to: hydrazyd kwasu szczawiowego, mrów¬ kowego, semikarbazyd, acetylohydrazyd i hydrazyd kwa¬ su izonikotynowego.Analiza roztworu macierzystego otrzymanego po „ami-- dazowej" hydrolize penicyliny V (kwasu fenojksyaceto* 65 amidopenicylanowego) przeprowadzonej w obecnosci(5442 8 benzydrazydu wykazala obecnosc nastepujacych skladni¬ ków: peiiicylina V, kwas. 6-aminopemcylanowy, kwas fe- noksyoctowy, benzhydrazyd i benzhydrazyd kwasu feno- ksyoctowego.W celu ustalenia optymalnych warunków prowadzenia enzymatycznej hydrolizy w obecnosci calych komórek Streptomyces lavendulae A.T.T.C. 21138 przeprowadzo¬ no badania kinetyczne. Badano wplyw nastepujacych pa¬ rametrów na szybkosc hydrolizy: stezenie penicyliny, ste¬ zenie i rodzaj hydrazydu, temperatura i pH. Przeprowa¬ dzono intensywne badania stosujac penicyline G (benzy- lopenicyline) i penicyline V jako materialy wyjsciowe; najchetniej stosowano penicyline V.Jezeli proces prowadzono w warunkach ustalonych przed opracowaniem sposobu zwiekszenia wydajnosci przez zastosowanie hydrazydu, to wydajnosc procesu wy¬ twarzania 6-APA z 2% rozwtoru nietoksycznej soli pe¬ nicylin V (sodowej, potasowej itp.) w obecnosci komó¬ rek Streptomyces lavendulae wynosila srednio 30 do 40% po 4—12 godzinach. Stwierdzono nastepnie, ze bodanie 2 % benzhydrazydu do 2 % roztworu penicyliny V moze zwiekszyc wydajnosc do ponad 90%, przy czym wydaj¬ nosc taka uzyskuje sie w ciagu 2 do 3 godzin. .Dotychczasowa wada enzymatycznego rozkladu peni¬ cylin bylo to, ze w procesie mozna bylo stosowac roz¬ twory penicyliny w znacznym stopniu. rozcienczone, a mianowicie o stezeniu 2—3%. Niezbeidne zatem bylo zastosowanie olbrzymich tanków reakcyjnych, w których otrzymywano bardzo male ilosci 6-APA. Nalezy dodac, ze wydajnosc syntezy 6-APA byla odwrotnie proporcjo¬ nalna do stezenia penicyliny. I tak na przyklad: stosu¬ jac 2% roztwór otrzymywano srednio wydajnosc 30— 40% liczona na 6-APA, stosujac 5% roztwór uzyskanoi wydajnosc 15—20%, a stosujac 10% roztwór otrzymano wydajnosc zaledwie 5 %.W sposobie wedlug wynalazku, w obecnosci hydra¬ zydu wplyw stezenia na wydajnosc reakcji jest nieco zmniejszony aczkolwiek nie jest calkowicie wyelimino¬ wany. Na przyklad, prowadzac synteze sposobem we¬ dlug wynalazku z 2% roztworu penicyliny V w obec¬ nosci 2% benzhydrazydu otrzymuje isie 6-APA z wy¬ dajnoscia ponad 90%, z 8% roztworu otrzymuje sie 6-APA z wydajnoscia 70—80% a z 10% roztworu uzy¬ skuje sie 6-APA z wydajnoscia 60—70%; wydajnosci te uzyskuje sie w ciagu 4—6 godzin prowadzenia re¬ akcji.Biorac pod uwage wszystkie czynniki majace znacze¬ nie w procesie rozpadu enzymatycznego to jest: szyb¬ kosc hydrolizy, stosowany enzym, wydajnosc 6-APA i stabilnosc produkowanego 6-APA stwierdzono, ze naj¬ lepszym hydrazydem jset benzhydrazyd.W celu dobrania odpowiedniego stezenia benzhydra¬ zydu przeprowadzono szereg prób z 8% roztworem pe¬ nicyliny V w temperaturze 40°C i przy pH = 7.Benzhydra¬ zyd 2 3 4 Szybkosc powstawania 6-APA mg/godz. 8,4 10,6 12,7 % 6-APA w stanie . równowagi 63 70 75 Bilans materialowy 91 87 86 10 15 20 25 30 35 40 .45 50 55 60 65 Badania wykazaly, ze najkorzystniejsze stezenie benz¬ hydrazydu zawarte jest w granicach od okolo 3—4%.Przekroczenie tego zakresu powoduje wzrost rozkladu pierscienia (3-laktamowego.Badania prowadzone przy uzyciu 8% roztworu peni¬ cyliny V i 3 % benzhydrazydu, przy pH = .7, 8 i 9 pozwo¬ lily stwierdzic, ze najwieksza wydajnosc uzyskuje sie w obrebie pH = 7—8. Przy pH znacznie powyzej 8 nastepuje gwaltowny rozklad penicyliny i 6-APA, co powoduje znaczne straty (ponad 20% rozkladu |3-lakta- mu).Optymalna temperatura, w której nalezy prowadzic proces lezy w granicach od okolo 35°C do okolo 45°C, przy czym najkorzystniejsza temperatura wynosi okolo 40°C. W temperaturze powyzej 40°C obserwuje sie de- naturacje enzymu i zmniejszenie wydajnosci procesu wy¬ twarzania 6-APA na skutek wzrostu szybkosci rozkladu P-laktamu. Tym niemniej reakcje mozna prowadzic w temperaturze od 10°C do okolo 60°C.Ponadto w celu ustalenia najkorzystniejszych warun¬ ków hydroliny przeprowadzono równiez szereg innych prób. Stwierdzono, ze zwiekszenie stezenia peniceliny wyjsciowej powyzej 15% nie powoduje znacznego wzro¬ stu wydajnosci syntezy 6-APA. Hydrolize mozna prowa¬ dzic przy wyzszych stezeniach, ale najkorzystniejsze jest stezenie w granicach 7—10%.Biorac pod uwage kinetyke procesu najlepsze wyniki (maksimum wydajnosci 6-APA o dobrej jakosci) otrzy¬ mano stosujac nastepujace proporcje skladników i wa¬ runki reakcji: penicylina V w ilosci 70 do 100 g/l, benz¬ hydrazyd w ilosci 30 g/l, komórlri Streptomyces laven- dulae w ilosci odpowiedniej do otrzymanej z 600 ml kultury Streptomyces lavendulae, której .sposób wytwa¬ rzania opisano poprzednio i w przykladzie I, pH = okolo 7,5—8,5 korzystnie pH = 8), temperatura — okolo 35—45 °C. Hydroliza osiaga stan równowagi (ma¬ ksimum 6-APA) w ciagu okolo 2—24 godzin, zwykle w ciagu 2—6 godzin. Po zakonczeniu hydrolizy enzyma¬ tycznej nieprzereagowana penicylina, hydrazyd i acylo- hydradyzydy usuwane sa ze srodowiska reakcji droga ekstrakcji rozpuszczalnikami organicznymi, na przyklad octanem butylu, metyloizobutyloketonem itp. po zakwa¬ szeniu roztworu macierzystego do pH = 2—3.Dalsze oczyszczanie prowadzi sie po neutralizacji roz¬ tworu wodnego; za pomoca rozpuszczalników takich jak aceton, metanol lub etanol, wytraca sie zanieczyszcze¬ nia, które nastepnie odwirowuje sie. pH klarownego roztworu ewentualnie wstepnie zatezonego, doprowadza sie do wartosci 6,5—7 i przepuszcza przez zywice jono¬ wymienna w celu zaadsorbowania produktu.Korzystne jest stosowanie kolumny wypelnionej zy¬ wica anionowa silnie zasadowa, w formie chlorkowej, typu usieciowanego polistyrenu zawierajacego czwarto¬ rzedowy atom azotu, jak na przyklad Dowex I i De Acidite FF; obydwie zywice dostepne sa na rynku. Moz¬ na równiez stosowac zywice kationowa typu sulfonowa¬ nego, usieciowanego polistyrenu, na przyklad Amberlit IR 120. Korzystne jest stosowanie zywicy w ilosci 4 kg na 15 litrów roztworu zawierajacego od 40—60 g kwasu 6-aminopenicylanowego. Kolumne eluuje sie za pomoca rozcienczonego roztworu kwasu solnego, na przyklad 0,05 n. Sposób odzyskiwania kwasu 6-aminopenicylano¬ wego z roztworów wodnych podano równiez w belgij¬ skim opisie patentowym nr 569728.65442 10 Ponizej podano szereg przykladów ilustrujacych spo¬ sób wedlug wynalazku.Przyklad I. Kwas 6-aimmopenicylanowy z 2 % pe¬ nicyliny V (1% benzhydrazydu). Kultura Streptomyces lavendulae A.T.C.C. 21138 zaszczepiono pozywke o na¬ stepujacym skladzie: sacharoza — 2,5%, pharmamedia — 1,5%, wyciag namokowy kukurydzy — 1%, siarczan amonowy — 03% i weglan wapniowy — 0,2%. Kul¬ tura pdsiewowa rosla w ciagu 24 do 48 godzin, po czym calosc stala sie inokulum dla koncowej fermentacji Strep- tomyces lavendulae. 1 litrem inokulum zaszczepiono 9—10 litrów bulionu o nastepujacym skladzie: nutrisoy — 3,0%, pharmame¬ dia — 0,5%, chlorek sodowy — 0,5%, weglan wap¬ nia — 0,3%, cereloza — 5,0%, sacharoza — 2%. Fer¬ mentacje prowadzono w ciagu 4 do 6 dni, a nastepnie grzybnie odzyskiwano na drodze filtracji lub wirowania.Grzybnie odmyto, a nastepnie uzyto do hydrolizy enzy¬ matycznej penicylin, prowadzacej do otrzymania 6-APA.Przemyta mase grzybni, otrzymana z 600 ml kultury sposobem wyzej opisanym zmieszano z 1 litrem wody destylowanej, a nastepnie pH mieszaniny doprowadzono do 7. Dodano 20 g soli potasowej penicyliny V i 10 g benzhydrazydu. Zawiesine utrzymywano w temperaturze 35°C, a przez dodanie wodorotlenku sodowego utrzy¬ mywano pH = 7. Pobierane periodycznie próbki ozna¬ czano metoda chromatograficzna. Maksimum wydajnosci procesu wytwarzania 6-APA uzyskano po 2—4 godzi¬ nach prowadzenia reakcji; wydajnosc wynosila ponad 90% wydajnosci teoretycznej.Przyklad II. Kwas 6-amino-penicylanowy z 2% penicyliny V. (2% benzhydrazydu). Ptrzemyta mase grzyb¬ ni otrzymana z 500 ml kultury sposobem opisanym w przykladzie I zmieszano z 1 litrem wody destylowanej. pH mieszaniny doprowadzono do 8, a nastepnie doda¬ no 20 g soli potasowej penicyliny V znaczonej w czesci acylowej weglem C14, oraz 20 g benzhydrazydu. Zawie¬ sine utrzymywano w temperaturze 35°C. Pobierane periodyczne próbki oznaczano metoda chromatograficz¬ na. Maksimum wydajnosci procesu tworzenia 6-APA otrzymano po 3 godzinach prowadzenia reakcji; wynio¬ sla ona ponad 90% wydajnosci teoretycznej. Wiekszosc wegla radioaktywnego znaleziono w benzhydrazydzie kwasu fenoksyoctowego, a reszte w kwasie fenoksyocto- wym.Przyklad III. Kwas 6-aminopenicylanowy z 8% penicyliny V. (3% benzhydrazydu). Przemyta grzybnie, otrzymana z 500 ml kultury sposobem opisanym w przy¬ kladzie I, zmieszano z 1 litrem wody destylowanej. pH mieszaniny doprowadzono do 7,8—8,2 i dodano 8 g soli potasowej penicyliny V oraz 30 g benzhydrazydu. Za¬ wiesine utrzymywano w temperaturze 40°C, caly czas mieszajac. Pobierane periodycznie próbki oznaczano metoda chromatograficzna oraz innymi metodami anali¬ tycznymi. Maksimum wydajnosci procesu tworzenia PL

Claims (7)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania wodnego roztworu kwasu 6-aminopenicylanowego, polegajacy na tym, ze wodny roztwór naturalnej penicyliny lub jej soli inkubuje sie z calymi lub zmacerowanymi komórkami bakterii lub grzybów zdolnych do wytwarzania amidazy penicylino¬ wej lub tez z otzrymana z nich rozpuszczalna amidaza penicylinowa przy pH = 6,0—11,0 i w temperaturze okolo 10—60°C znamienny tym, ze proces prowadzi sie w obecnosci przynajmniej okolo 0,5 mola korzystnie 0,5—2,0 moli aktywnegoi hydrazydu na mol penicyliny.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze peni¬ cyline lub jej sól imkubuje sie z calymi lub zmacerowa¬ nymi komórkami produkujacego amidaze penicylinowa szczepu Streptomyces lavendulae lub tez z rozpuszczal¬ na "amidaza penicylinowa z niego otrzymana w tempera¬ turze 20°—50°C w ciagu okolo 2—24 godzin, przy czym jako hydrazyd stosuje sie karbazyd, hydrazyd kwasu fe¬ nylooctowego, hydrazyd kwasu naftylooctowego, hydra¬ zyd, kwasu indolokarbpksylowego-3, hydrazyd kwasu 12 bursztynowego, hydrazyd glicyny, hydrazyd tyrozyny, hy¬ drazyd kwasu maslowego, hydrazynokarboksylan III- -nzed.-butylu, hydrazyd kwasu cyklopentanokarboksylo- wego lub tez hydrazydy o ogólnym wzorze 3, w którym 5 rodniki R1, R2, R3 oznaczaja wodór, niskoczasteczkowy rodnik alkilowy, niskoczasteczkowy rodnik alkoksylowy, grupe hydroksylowa aminowa, odnik N-alkiloaminowy i N,N-dwualkiloaminowy, przy czym rodniki alkilowe sa grupami niskoczasteczkowymi. 10

3. Sposób wedlug zastrz. 2, znamienny tym, ze jako naturalna penicyline stosuje, sie otrzymana w wyniku fermentacji i z uzyciem prekursora penicyline o wzorze ogólnym 2, w którym R oznacza rodnik alkilowy za¬ wierajacy 1—10 atomów wegla wlacznie, rodnik alkeny- 15 Iowy zawierajacy 3—10 atomów wegla wlacznie lub tez rodnik R4XCH2, w którym X oznacza atom siarki lub tlenu, a R4 oznacza rodnik alkilowy zawierajacy 2—6 atomów wegla wlacznie, rodnik alkenylowy zawie¬ rajacy 3—6 atomów wegla wlacznie, rodnik fenylowy, 20 ewentualnie jednopodstawiony atomem chloru, bromu, jodu, fluoru, grupa nitrowa, rodnikiem alkilowym zawie¬ rajacym 1—6 atomów wegla wlacznie, rodnikiem alkeny- lowym zawierajacym 3—6 atomów wegla wlacznie lub tez rodnikiem alkoksylowym zawierajacym 1—6 atomów 25 wegla wlacznie.

4. Sposób wedlug zastrz. 3, znamienny tym, ze stoso¬ wana penicyline lub jej sól inkubuje sie z calymi komór¬ kami Streptomyces lavendulae A.T.C.C. nr 21138 w obecnosci okolo 0,5—1,5 mola hydrazydu na mol penicy- 30 liny przy pH wynoszacym okolo 6,5—9,0.

5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze jako penicyline stosuje sie roztwór wodny penicyliny V lub- penicyliny G lub ich soli o stezeniu 2—15%, a jako hydrazyd stosuje sie karbazyd lub hydrazyd aromatycz- 35 ny o ogólnym wzorze —4, w którym R1 ma znaczenie podane w zastrz. 2, przy czym okres inkubacji wynosi okolo 2—12 godzin.

6. Sposób wedlug zastrz. 5, znamienny tym, ze jako hydrazyd stosuje sie benzhydrazyd, a inkubacje prowa- ^ dzi sie w temperaturze 35—45°C.

7. Sposób wedlug zastrz. 6, znamienny tym, ze jako penicyline stosuje sie roztwór wodny penicyliny V lub jej soli o stezeniu 2—12%, przy czym inkubacje prowa¬ dzi sie przy pH = 7,5—8,5.KI. 12p, 4/01 65442 MKP C07d 99/16 H,N—CH- / 0 /CH3 ¦CH C( | | XCH3 N CH—C02H Wzorl 0 W R-C-HN 0^ CH-CH C—N -CH. CH. CH—C00H Wzór 2 Rl "?1 O \—p_MU— 1r C-NH-NH. Wzór 3 R1 fW-l-m- C-NH-NHc Wzór 4 PL PL