PL59792B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano: 9. V. 1970 59792 KI. 6 b, 16/03 MKP C 12 d PZYTCLNIA UKD <3\oo Wspóltwórcy wynalazku: mgr Tadeusz Szczesniak, mgr Leonaid KUTaUui,- mgr Danuta Kotiuszko, mgr Barbara Ostrowska, dr Marian Tyc, mgr Krystyna Wituch, mgr Jadwiga Wolf, Slawomir Ulikowski, Andrzej Korona, Romuald Szewczak, Jan Piorunowski, Barbara Sokolowska Wlasciciel patentu: Instytut Antybiotyków, Warszawa (Polska) Sposób podpowierzchniowej hodowli mikroorganizmów Przedmiotem wynalazku jest sposób podpo¬ wierzchniowej hodowli mikroorganizmów.Dotychczas do podpowierzchniowej hodowli mi¬ kroorganizmów stosowano pozywki w sklad któ¬ rych, jalko zródlo wegla lub jako srodki przeciw- pienne wchodzily tluszcze roslinne i zwierzece np. olej arachidowy, olej sojowy i smalec.W przypadku pewnych procesów biosyntezy na pozywkach zawierajacych wymienione tluszcze czas hodowli mikroorganizmów byl stosunkowo dlugi.Sposób wedlug wynalazku eliminuje powyzsze wady przez zastosowanie jako zródla wegla i/lub srodka przeciwpiennego w pozywkach, tluszczu pozelatynowego. Sposobem tym skraca sie jczas hodowli mikroorganizmów oraz uzyskuje wyzsze wydajnosci produktów biosyntezy niz przy kon¬ wencjonalnych metodach podpowierzchniowej ho¬ dowli.Tluszcz pozelatynowy jest tluszczem otrzymy¬ wanym podczas jednego z etapów procesu techno¬ logicznego produkcji zelatyny. Jest zbierany z po¬ wierzchni bulionu w trakcie gotowania rozdrob¬ nionych kosci i miesa.Jako produkt uboczny otrzymywany przy pro¬ dukcji zelatyny spozywczej, jest surowcem latwo dostepnym, nie zawiera substancji toksycznjych, natomiast obecne w nim sladowe ilosci skladników bialkowych i niektórych witamin stymuluja pro¬ cesy wzrostu mikroorganizmów. Tluszcz pozela- 10 15 20 25 30 tynowy charakteryzuje sie nastepujaca przyblizo¬ na zawartoscia kwasów tluszczowych o liczbie atomów wegla Ci4—C2o: C14H28O2—1,4%; Ci6H3202—23,5%; Ci6H30O2--i,0%; Ci6H2802^0,5 C18H34O2—55,0%; C18H3202—3,3%; C20H38O2—1,5%;.W odróznieniu od innych tluszczów roslinnych i zwierzecych tluszcz pozelatynowy zawiera do¬ datkowo nastepujace nienasycone kwasy tlusz¬ czowe: CwHsoOi—4,Wo; Ci6H2802—0,5%; C16H2602—0,5%; C2oH3802—1,5% i z tego wzgledu jest surowcem wykazujacym zwiekszona czynnosc w procesach biologicznych. Powyzsze procenty oznaczaja pro¬ centy wagowe.Ilosciowy i jakosciowy sklad kwasów tluszczo¬ wych w tluszczu pozelatynowym i innych tlusz¬ czach obrazuje tablica 1.Dodatkowa zaleta tego sposobu jest ta, ze tluszcz pozelatynowy posiada silne wlasnosci przeciwpien- ne i tym samym ogranicza lub wyklucza calkowi¬ cie koniecznosc stosowania innych srodków prze- ciwpiennych podczas hodowli mikroorganizmów.Sposób wedlug wynalazku odnosi sie zwlaszcza do procesów biosyntezy witamin i antybiotyków w których stosowane sa mikroorganizmy: nalezacy do klasy Ascomycetes, grzyb Ashbya gossypii wy¬ twarzajacy ryboflawine oraz nalezace do promie¬ niowców gatunki Streptomyces species 88 wytwa¬ rzajacy tetracykline i Streptomyces erythreus wy- 5979259792 3 4 Tablica 1 Ilosciowy i jakosciowy sklad kwasów tluszczowych w róznych tluszczach Wzór sumaryczny kwasu tluszczowego C14H28O2 C16H32O2 Ci6H3o02 CieH2802 CieBCeOir"^' "; - l C18H36O2 | Cl8?34°2 C18H32O2 Kwasy .wysoko nienasycone 0 18 atomach C C20H38O2 Zawartosc kwasów tluszczowych w procentach wagowych **) Tluszcz pozelatynowy 1,4 23,5 4,0 0,5 0,5 10,3 55,0 3,3 — 1,5 *) Olej arachidowy — 4,0—8,5 — — — 2,6—6,3 53,4—71,3 13,0—27,4 — — *) Olej sojowy 0,0—0,6 11,2—14,3 — — — 11,2—14,3 25,9—33,7 52,0—58,8 2,1—5,8 — *) Smalec 0,7—4,7 24,3—30,8 — 1 — — 8,5—21,4 41,3—60,5 0,8—13,0 — — *) — wedlug Profic I., Stepniewski L.., Smidtagal E., Zyss B., „Technologia tluszczów". Wydawnictwo Min.Przem. Lekkiego i Spoz., 1954 r. cz. I str. 48. **) — wedlug analizy próbki wykonanej na zlecenie Instytutu Antybiotyków w Instytucie Przemyslu Tlusz¬ czowego. twarzajacy erytromycyne, Streptomyces species wytwarzajacy wiomycyne.Sposób wedlug wynalazku polega na podpo- wierzchniowej hodowli mikroorganizmów na po¬ zywkach zawierajacych tluszcz jako zródlo wegla i/lub srodek przeciwpienny. Jako tluszcz stosuje sie tluszcz pozelatynowy w ilosci 0,1—10,0% obje¬ tosciowych w stosunku do ilosci pozywki. Tluszcz pozelatynowy wprowadza sie do pozywki bezpo¬ srednio przed jej sterylizacja korzystnie w ilosci 0,1—6,0°/o objetosciowych lub w sposób jalowy podczas hodowli mikroorganizmów korzystnie w ilosci 0,1—5,0% objetosciowych przy czym ilosci procentowe odnosza sie do ilosci pozywki.Tluszcz pozelatynowy wprowadza sie do pozywki podczas hodowli mikroorganizmów pomiedzy 6— 120 godzina hodowli.Tluszcz pozelatynowy dodawany bezposrednio do pozywki jesit zródlem wegla dla mikroorganizmów i w tym przypadku jest hydcrolizowany do glice¬ ryny i kwasów tluszczowych, a w nastepnych eta¬ pach metabolizmu skladniki te zostaja calkowicie zuzyte.Niezaleznie od jego bezposredniej roli odzywczej jako niejonowy zwiazek powierzchniowo czynny powoduje obnizenie napiecia powierzchniowego po¬ miedzy membranami komórkowymi i pozywka.W konsekwencji zmienia sie przepuszczalnosc scia¬ ny (komórkowej i tym samym zwieksza sie prze¬ nikanie innych skladników pozywki do wnetrza komórki oraz zwieksza sie takze wydzielanie z ko¬ mórki do srodowiska zewnetrznego produktów me¬ tabolizmu takich jak witaminy i antybiotyki. 40 Ponadto tluszcz pozelatynowy obnizajac napie¬ cie powierzchniowe plynnych pozywek zmniejsza 35 równiez znacznie, wzglednie likwiduje calkowicie pienienie sie pozywek.Tluszcz pozelatynowy dodawany do pozywki podczas hodowli mikroorganizmów moze spelniac jedna lub obie role opisane powyzej w konse¬ kwencji czego powoduje wystapienie drugiego cy¬ klu wzrostu mikroorganizmów i wytwarzanie pro¬ duktów biosyntezy.W przypadku stosowania tluszczu pozelatynowe- go bezposrednio do pozywki postepuje sie naste- 45 pujaco: do plynnych pozywek hodowlanych beda¬ cych roztworem lub zawiesina nieorganicznych i organlczaiych skladników pozywki, wprowadza sie tluszcz pozelatynowy w ilosci 0,1—6,0% obje¬ tosciowych w stosunku do ilosci pozywki, nasta¬ wia pH do wartosci 6,0—7,5 w zaleznosci od zasto¬ sowanego mikroorganizmu i wyjalawia w tempe¬ raturze od 110—120°C w ciagu 30—200 minut.Schlodzone pozywki szczepi sie zawiesina odpo¬ wiedniego mikroorganizmu. W przypadku stosowa¬ nia tluszczu pozelatynowego podczas hodowli jako zródla wegla i/lub srodka przeciwpiennego, tluszcz ten wprowadza sie w sposób jalowy do kultur mikroorganizmów rosnacych na pozywkach przy¬ gotowanych metoda wyzej opisana, miedzy 6—120 godzina hodowli w ilosci 0,1—5,0% objetosciowych w stosunku do objetosci pozywki.Zwiekszenie wydajnosci produktów biosyntezy w pozywkach zawierajacych tluszcz pozelatyno¬ wy w stosunku do wydajnosci otrzymywanych 65 w pozywkach z innymi tluszczami, podczas ho- 50 55 6059792 6 15 20 dowli podpowierzchniowej mikroorganizmów przedstawiaja szczególowe przyklady, w których procenty oznaczaja procenty wagowe o ile nie zaznaczono inaczej. 5 Przyklad I. Przygotowywano plynna po¬ zywke do otrzymywania astkospor grzyba Ashbya goissypii o skladzie: Glukoza czysta (100% suchej masy) 1,0% :. Tiaimitna HC1 — (chlorowodorek tiaiminy) 0,l°/o 10 Woda drozdzowa (0,5% suchej masy) do 100,0% objetosciowych. (Woda drozdzowa — jest to wo¬ dny wyciag z drozdzy spozywczych; zawiera wolne aminokwasy, kwas mlekowy, kwas octowy i wi¬ taminy — tiamine (Bi), biotyne (H), pirydoksal (Be) oraz inne witaminy z zespolu B, a takze me- zoinozytol, zwiazek, którego rola metaboliczna nie jest znana, a iktory jest niezbedny dla wzrostu i zycia licznych mikroorganizmów).Wartosc pH pozywki nastawiano na 6,9 za pomo¬ ca wodorotlenku potasu. Tak przygotowana pozyw¬ ke rozlewano po 10 ml do probówek i wyjalawia¬ no w temperaturze 110° w ciagu 30 minut.Probówki z pozywka szczepiono 5-dniiowa kolo- 25 nia grzyba wyhodowana na pozywce'stalej.Przygotowywano pozywke stala o nastepujacym skladzie: Glukoza czysta (100% suchej masy) 2,0°/o Agar 2,0% 30 Woda drozdzowa (0,5% suchej masy) do 100,0% objetosciowych.Wartosc pH pozywki nastawiano za pomoca wo¬ dorotlenku potasu do 7,2 i wyjalawiano w tem¬ peraturze 110° w ciagu 30 minut. 35 Pozywke rozlewano do plytek Petanego po 20 ml.Pozywke stala szczepiono zawiesina askospor wy¬ hodowana na pozywce plynnej. Inkubacje prze¬ prowadzano w temperaturze 28° w ciagu 5 dni. 40 Otrzymane w ten sposób kolonie grzyba stoso¬ wano do szczepienia plynnej pozywki posiewo- wej I.Przygotowano plynna pozywke posiewowa I o skladzie: Glukoza czysta (100% suchej masy) 1,0% Laktoza czysta (100% suchej masy) 0,3% Enzymatyczny hydrolizat maki rybnej 0,5% Woda drozdzowa (0,5% suchej masy do 100,0% objetosciowych.Wartosc pH pozywki nastawiano na 6,5 za po¬ moca wodorotlenku potasu, rozlewano po 50 ml do kolb Erlenmeye^a o pojemnosci 500 ml i wy¬ jalawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut. 55 Kazda kolbe z plynna pozywka posiewowa I stadium szczepiono 5^dniowa kolonia grzyba wy¬ hodowana na pozywce stalej.Hodowle prowadzono w zaciemnionym pomiesz¬ czeniu, na trzesawce obrotowej o 220 obr./min. eo i mimoisrodzie 25 mm w temperaturze 28 °C w ciagu 24 godzin, Otrzymana w ten sposób zawiesine grzyfbnd sto¬ sowano do szczepienia plynnej pozywki posie¬ wowejII. «5 45 Przygotowywano plynna pozywke posiewowa II o skladzie: Drozdze paszowe 2,0% Olej sojowy 1,5% objetosciowych Wyciag namokowy kukurydzy (50% suchej masy) 3,0% Woda wodociagowa do 100,0% objetosciowych Wartosc pH pozywki nastawiano na 7,2 rozle¬ wano po 50 ml do kolb Erlenmeye^a o pojem¬ nosci 500 ml i wyjalawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut.Kazda kolbe z plynna pozywka posiewowa II szczepiono 1 ml zawiesiny grzybni z plynnej po¬ zywki posiewowej I.Hodowle prowadzono w ciagu 24 godzin w ta¬ kich samych warunkach jak na plynnej pozywce posiewowej I.Otrzymana w ten sposób zawiesina grzybni szczepiono plynna pozywke produkcyjna.Przygotowywano plynna pozywke produkcyjna o skladzie: Zelatyna 3,0% Wyciag namokowy kukurydzy (50% suchej masy) 6,0% Glicyna 0,15% KH2P04 0,15% Mg++ 1 jLig/ml Co++ 2 //g/ml Mn++ 5 ^g/ml Zn++ 10 jug/ml Wartosc pH pozywki nastawiano na 6,8 za po¬ moca wodorotlenku potasu.Pozywke rozlewano po 30 ml do kolb Erlenme- yer'a o pojemnosci 500 ml i rozlewano na cztery partie. Do kazdej kolby z okreslonej partii po¬ zywki dodawano tylko jeden z tluszczów, odpowie¬ dnio olej arachidowy, olej sojowy, smalec i tluszcz . pozelatynowy.Tluszcze dodawano w ilosci 4,0% objetosciowych* Wszystkie pozywki wyjalawiano w temperaturze 110° w ciagu 3 godzin.Kazda kolbe z pozywka szczepiono 1 ml za¬ wiesiny grzybni z plynnej pozywki posiewowej II.Hodowle prowadzono w zaciemnionym pomie¬ szczeniu na trzesawce obrotowej o 220 obr./min. i mimoSTodzie 25 mim w temperaturze 28° w jcia- gu 168 godzin.Zawartosc ryboflawiny (witaminy B2) w pozyw¬ kach z róznymi tluszczami po 168 godzinach ho¬ dowli Ashbya gossypii przedstawione sa w tabli¬ cy II.Tablica II Pozywka zawierajada Olej ara¬ chidowy 2020 ^g/ml Olej sojowy 2201 /*g/ml Smialec 870 jug/ml Tluszcz pozelaty¬ nowy 2419 jug/ml7 Ja!k. wykazano wyzej tluszcz pozelatynowy do¬ dany bezposrednio do pozywlki hodowlanej — pro¬ dukcyjnej wplywa na zwiekszenie wydajnosci ry¬ boflawiny w porównaniu z wydajmosciami otrzy¬ manymi w pozywkach z innymi tluszczami.Przyklad II. Sklad jakosciowy i ilosciowy pozywek, sposób ich przygotowywania oraz spo¬ sób przeszczepiania i warunki hodowli Ashbya gossypii byly takie same jak w przykladzie I.Do poszczególnych partii kolb z plynnymi po¬ zywkami produlkcyjnymi zawierajacymi' jeden z badanych tluszczów w ilosci 4,0% objetoscio¬ wych dodawano odpowiednio taki sam tluszcz w ilosci 2,5°/o objetosciowych w 72 godzinie ho¬ dowli Ashbya gossypii.Zawartosc ryboflawiny (witaminy B2) w pozyw¬ kach z róznymi tluszczami po 168 godzinach ho¬ dowli Ashbya gossypii przedstawione sa w ta¬ blicy III.Tablica III Pozywka zawierajaca Olej ara¬ chidowy i 3105 jug/ml Olej sojowy 3183 jug/rt\\ Smalec 858 /^g/ml Tluszcz pozelafty- nowy 3325 /*g/ml I Jak wykazano wyzej tluszcz pozelatynowy do¬ dany do pozywki w 72 godzinie hodowli Ashbya gossypii wplywa na zwiekszenie wydajnosci rybo- flawiiny w porównaniu z wydajniosciami otrzy¬ manymi w pozywkach z innymi tluszczami.Przyklad III. Sklad jakosciowy i ilosciowy pozywek, sposób ich przygotowywania oraz spo¬ sób przeszczepiania i warunki hodowli Ashbya gossypii byly takie same jak w przykladzie I.Do poszczególnych partii kolb z plynnymi po¬ zywkami produkcyjnymi zawierajacymi jeden z badanych tluszczów w ilosci 4,0% objetoscio¬ wych dodawano odpowiednio taki sam tluszcz w ilosci 2,5% objetosciowych w 72 i 120 godzinie hodowli Ashbya gossypii.Zawartosci ryboflawiny (witaminy B2) w po¬ zywkach z róznymi tluszczami po 168 godzinach hodowli Ashbya gossypii przedstawione sa w ta¬ blicy IV.Tablica IV Pozywka zawierajaca Olej ara¬ chidowy 2857 /*g/ml Olej sojowy 3349 jug/ml Smalec 923 //g/ml Tluszcz pozelaty¬ nowy 3781 //g/ml | Jak wykazano wyzej tluszcz pozelatynowy do¬ dany do pozywki w 72 i 120 godzinie hodowli Ashbya gossypii wplywa na zwiekszenie wydaj¬ nosci ryboflawiny w porównaniu z wydajnosciami otrzymanymi w pozywkach z innymi tluszczami. 8 Przyklad IV. Do kolb Erlen nosci 500 ml, zawierajacych po 50 ml pozywki o skladzie nizej podanym, przeniesiono zarodniki szczepu Streptomyces species 106, zebrane oczkiem ezy z hodowli agarowej.Sklad pozywki posiewowej i produkcyjnej: Maka sojowa 3,0% Glukoza techniczna 3,0°/o Skrobia 1,0% NaN03 techniczny l,0°/o CaC03 0,3% Wyciag namokowy kukurydzy (50% suchej masy) 0,5°/o Olej sojowy (lub olej arachidowy lub tluszcz pozelatynowy) 2,0% Woda wodociagowa ad 100°/o Pozywke sterylizowano w temperaturze 117° w ciagu 30 imtinut przy wartosci pH = 6,6—6,8 po sterylizacji.Zaszczepione pozywki w kolbach umieszczono na trzesawce obrotowej o 220 obr./min. Hodowle prowadzono w temperaturze 27—29° w ciagu 42—46 godzin. Otrzymana hodowla (stadium po- siewowe) sluzyla jako inoculum do szczepienia pozywek stadium produkcyjnego. Do kolb produk¬ cyjnych dodano inoculum w ilosci 1—4% w sto¬ sunku do objetosci pozywki. Warunki fermentacji stadium produkcyjnego byly takie same jak sta¬ dium posiewowego. Czas potrzebny do uzyskania maksymalnej wydajnosci antybiotyku w brzeczce fermentacyjnej wynosil 115—140 godzin.Zaleznosc miedzy stezeniem wiomycyny w brzeczce pofermentacyjnej i rodzajem uzytego tluszczu przedstawia tablica V.Tablica V Pozywka zawierajaca Olej sojowy 1 2600 //g/ml Olej arachi¬ dowy 2400 /ug/ml Tluszcz po¬ zelatynowy 2600 /^g/ml 45 Przyklad V. Przygotowywano pozywke stala do otrzymywania zarodników Streptomyces spe¬ cies 88 o skladzie: Platki owsiane 2,0°/* Agar 1,8% 58 Woda wodociagowa do 100,0% Wartosc pH pozywki nastawiano na 7,0 za po¬ moca wodorotlenku sodu. Tak przygotowana po¬ zywke rozlewano po 10 ml do probówek i wyja¬ lawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut. 55 Probówki z pozywka szczepiono zarodnikami Streptomyces species 88 wyhodowanymi na takiej samej pozywce.Inkubacje przeprowadzono w temperaturze 28° w ciagu 7 dni. 6§ Otrzymane w ten sposób zarodniki stosowano do szczepienia plynnej pozywki posiewowej.Przygotowywano plynna pozywke posiewowa o skladzie: Maka owsiana 1,0% 65 Skrobia 2,5%59792 Wyciag namokowy kukurydzy (100,0% suchej masy) KH2P04 (NH4)2S04 CaCQ3 0,6% 0,1% 0,4% 0,5% 5 Woda wodociagowa do 100,0% Wartosc pH pozywki nastawiano na 6,8 za po¬ moca wodorotlenku sodu, rozlewano po 30 ml do kolb Erlenmeye^a o pojemnosci 500 ml i wyja¬ lawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut. 10 Kazda kolbe z plynna pozywka posiewowa szczepiono zarodnikami pobranymi z pozywki stalej.Hodowle prowadzono na trzesawce obrotowej o 220 obr./min. i mimosrodzie 25 mm w tempe- 15 raturze 28° w ciagu 24 godzin.Otrzymana w ten sposób zawiesine grzybni sto¬ sowano do szczepienia plynnej pozywki produk¬ cyjnej.Przygotowywano plynna pozywke produkcyjna 20 o skladzie: Maka arachidowa 2,0% Maka ziemniaczana 2,0% Maka owsiana 2,0% Wyciag namokowy kukurydzy (50% 25 suchej masy) 1,25% CaCQ3 0,4% NaCl 0,2% NH4NO3 0,5% Woda wodociagowa do 100,0% 30 Wartosc pH pozywki nastawiano na 7,2 za po¬ moca wodorotlenku sodu.Pozywke rozlewano po 30 ml do kolb Erlen- meye^a o pojemnosci 500 ml i rozdzielano na cztery partie. Do kazdej kolby z okreslonej partii pozywki dodawano tylko jeden z tluszczów, od¬ powiednio olej arachidowy, olej sojowy, smalec i tluszcz pozelatynowy. Tluszcze dodawano w ilo¬ sci 1,0% objetosciowego w stosunku do ilosci po¬ zywki.Wszystkie pozywki wyjalawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut.Kazda kolbe z pozywka szczepiono 3 ml zawie¬ siny grzybni z plynnej pozywki posiewowej.Hodowle prowadzono na trzesawce obrotowej o 220 obr/min. i mimosrodzie 25 mm w tempe¬ raturze 28° w ciagu 42 godzin.Zawartosci tetracykliny w pozywkach z róz¬ nymi tluszczami po 42 godzinach hodowli Strep- 50 tomyces species 88 przedstawione sa w tablicy VI.Tablica VI Pozywka zawierajaca Olej arachi¬ dowy Olej sojowy Smalec 2211 fig/mir 2281 jug/ml 2018 ^g/ml Tluszcz pozelaty- niowy 2326 fig/ml 35 40 45 55 60 Jak wykazano wyzej tluszcz pozelatynowy do¬ dawany bezposrednio do plynnej pozywki pro¬ dukcyjnej wplywa na zwiekszenie wydajnosci te- 65 10 tracykliny w porównaniu z wydajnosciaimi otrzy¬ manymi w pozywkach z innymi tluszczami.Przyklad VI. Przygotowywano pozywke sta¬ la do otrzymywania zarodników Streptomyces erythreus o skladzie: Wyciag drozdzowy 1,0% Wyciag miesny 1,0% Pankreatyczny hydrolizat kazeiny 2,0% Laktoza 0,2% Agar 2,5% Woda destylowana do 100,0% Wartosc pH pozywki nastawiano na 7,5 za po¬ moca wodorotlenku sodu. Tak przygotowana po¬ zywke rozlewano po 10 ml do probówek i wyja¬ lawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut.Probówki z pozywka, szczepiono zarodnikami Streptiomyces erythreus wyhodowanymi na takiej samej pozywce.Inkubacje przeprowadzano w temperaturze 30° w ciagu 6 dni.Otrzymane w ten sposób zarodniki stosowano do ^szczepienia plynnej pozywki posiewowej.Przygotowywano plynna pozywke posiewowa o skladzie: Sacharoza 3,0% Wyciag namokowy kukurydzy (50% suchej masy) 3,0% (NH4)2S04 0,4% CaC03 0,6% Woda wodociagowa do 100,0% Wartosc pH pozywki nastawiano na 6,5 za po¬ moca wodorotlenku sodu rozlewano po 50 ml do kolb Brlenmeyei^a o pojemnosci 500 ml i wyja¬ lawiano w temperaturze 110° w ciagu 30 minut.Kazda kolbe z plynna pozywka posiewowa szczepiono zarodnikami pobranymi z pozywki stalej.Hodowle prowadzono na trzesawce obrotowej o 220 obr7min. i mimosrodzie 25 mm w tempe¬ raturze 32° w ciagu 48 godzin.Otrzymana w ten sposób zawiesine grzybni sto¬ sowano do szczepienia plynnej pozywki produ¬ kcyjnej.Przygotowywano plynna pozywke produkcyj¬ na o skladzie: Maka sojowa 3,0% Skrobia 2,0% Glukoza 4,0% NaCl 0,5% CaC03 0,6% Alkohol propylowy 0,9% Woda wodociagowa do 100,0% Wartosc pH pozywki nastawiano na 7,5 za po¬ moca wodorotlenku sodu.Pozywke rozlewano po 50 ml do kolb Erlen- meye^a o pojemnosci 500 ml i rozdzielano na dwie partie. Do kazdej kolby z okreslonej partii pozywki dodawano tylko jeden z tluszczów, od¬ powiednio olej sojowy i tluszcz pozelatynowy.Tluszcze dodawano w ilosci 0,8% objetosciowych w stosunku do ilosci pozywki.Wszystkie pozywki wyjalawiano w tempera¬ turze 110° w ciagu 30 minut.59792 11 Kazda kolbe z pozywka szczepiono 5 ml zawie¬ siny grzybni z plynnej pozywki posiewowej.Hodowle przeprowadzano na trzesawce obróto- 1. wej o 220 obr./min. i mimosrodzie 25 mm w tem¬ peraturze 32° w ciagu 120 godzin. 5 Zawartosci erytromycyny w pozywkach z ole¬ jem sojowym i tluszczem pozelatynowym po 120 godzinach hodowli Stireptomyces erythreus przed¬ stawione sa w tablicy VII. 10 Tablica VII 2.Pozywka (zawierajaca | Olej sojowy 2393 jug/ml Tluszcz pozelatynowy 2612 ^g/mll i Jak wykazano wyzej tluszcz pozelatynowy do- 20 dawany bezposrednio do plynnej pozywki produ¬ kcyjnej wplywa na zwiekszenie wydajnosci ery¬ tromycyny w porównaniu z wydajinosciami otrzy¬ mywanymi w pozywce z olejem sojowym. 12 PL

Claims (1)

1. Z a s t r z e z e ni a patentowe Sposób podpowierzchniowej hodowli mikro¬ organizmów na pozywkach zawierajacych tluszcz jako zródlo wegla i/lub srodek przeciw- pienny znamienny tym, ze jako tluszcz sto¬ suje sie tluszcz pozelatynowy w ilosci 0,1— 10,0°/o objetosciowych w stosunku do ilosci pozywki. Sposób wedlug zasitrz. 1 znamienny tym, ze tluszcz pozelatynowy wprowadza sie do po¬ zywki bezposrednio przed jej sterylizacja w ilosci 0,1—6,0°/o objetosciowych lub w spo¬ sób jalowy podczas hodowli mikroorganizmów w ilosci 0,1—5,0°/o objetosciowych w stosunku do ilosci pozywki. Sposób wedlug zaistrz. 1, 2 znamienny tym, ze tluszcz pozelatynowy wprowadza sie do po¬ zywki podczas hodowli mikroorganizmów po¬ miedzy 6—120 godzina hodowli. Krak 1 z. 1/70 220 PL