PL59570B1 - - Google Patents

Description

Przedmiotem niniejszego wynalazku jest sposób wytwarzania D-serylo-L-tyrozylo-L-serylo-L-me- tionylo-L-glutamylo-L-histydylo-L-fenyloalanilo-L- -agrinilo-L-tryptpfanylo-glicylo-L-lizylo-L-prolilo- -L-walilo-glicylo-L-lizylo-L-lizylo-L-lizylo- 1- lizy¬ ny, jak tez odpowiedniego zwiazku, który zamiast reszty glutamylowej zawiera reszte glutaminy, ich soli addycyjnych z kwasami, pochodnych ta¬ kich jak estry, amidy i hydrozydy lub zwiazków kompleksowych.Z belgijskiego opisu patentowego nr 668250 zna¬ ny jest sposób wytwarzania peptydów, które od¬ znaczaja sie wzmocnionym dzialaniem adrenokor- tikotropowym i które róznia sie od znanych pep¬ tydów o dzialaniu ACTH tym, ze na koncu ami¬ ny jako pierwszy a-aminokwas zawieraja D-ami- nokwas.Jako peptyd o bardzo dobrym dzialaniu adreno- kortikotropowym opisany jest w belgijskim opi¬ sie patentowym H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Fe- -Arg -Try-Gli-Liz-Pro-Wal-Gli - Liz-Liz-Arg-Arg- -Pro-OH (D-Seri-^-^-kortikotropina).Stwierdzono, ze amid oktadekapeptydu, który zamiast reszty argininy zawiera w pozycji 17, 18 reszte lizyny, wykazuje prawie tak samo dobre dzialanie adrenokortikotropowe. Nowy peptyd, stanowiacy amid D-Ser1, Liz17*18-/?1—18-kortikotro- piny, w którym grupa amidowa znajduje sie w pozycji Liz18, jest latwiejszy do otrzymania anizeli D-Ser1-^1—19-kortikotropine, poniewaz nie 10 15 zawiera on reszt argininy w pozycji 17, 18, utrud¬ niajacych wytworzenie peptydu ze wzgledu na reszte guanidynowa w lancuchu bocznym.Otrzymany sposobem wedlug wynalazku poli- peptyd mozna nastepnie przeprowadzic w sole addycyjne z kwasami, w pochodne takie jak estry, amidy, hydrazydy jak tez w zwiazki komplekso¬ we.Jako sole addycyjne z kwasami wymienia sie szczególnie sole kwasów nadajacych sie do sto¬ sowania w terapii, jak kwas solny, kwas octowy, przede wszystkim jednak sole trudnorozpuszczal- ne jak siarczany, fosforany lub sulfoniany.Jako pochodne nalezy rozumiec np. estry, jak nizsze estry alkilowe np. metylowy, etalowy, pro¬ pylowy, IH-rzed. butylowy, lub estry benzylowe niepodstawione albo podstawione np. grupa nitro¬ wa, atomami chlorowca, nizszymi grupami alki¬ lowymi albo alkoksylowymi, poza tym hydrazydy i amidy, zwlaszcza amid D-Seri-Liz^^s-^-kortiko- tropino-lizyny18.Jako zwiazki kompleksowe nalezy rozumiec ta¬ kie zwiazki, które powstaja przez traktowanie peptydów zwiazkami organicznymi lub nieorga¬ nicznymi powodujacymi przedluzenie ich dziala¬ nia. Struktura tych zwiazków nie zostala jeszcze wyjasniona.Stosowanymi substancjami nieorganicznymi sa zwiazki wywodzace sie z metali jak wapn, mag¬ nez, glin, kobalt a zwlaszcza cynk, przede wszyst- 5957059570 kim trudno rozpuszczalne sole jak fosforany i pi- rofosforany jak tez wodorotlenki tych metali.Organicznymi substancjami powodujacymi przed¬ luzenie dzialania sa np. antygenna zelatyna np. oksypolizelatyna, poliwinylopirolidon i karbo- ksymetyloceluloza, poza tym estry kwasów sul¬ fonowego i fosforowego z kwasem alginowym, dekstryna, polifenolami i polialkoholami, przede wszystkim fosforan polifloretyny i kwasu fityno- wego, jak tez polimery i kopolimery aminokwa¬ sów np. protaminy a zwlaszcza aminokwasów, które wykazuja przewazajacy udzial kwasnych a-aminokwasów, jak kwas glutaminowy lub aspa¬ raginowy* Nowe zwiazki wykazuja, jak juz wspomniano, znacznie zwiekszona aktywnosc adrenokortikotro- powa, anizeli odpowiednie zwiazki z konfigura¬ cja L przy pierwszym aminokwasie. Nalezy je odpowiednio do tego stosowac w medycynie i we¬ terynarii np. zamiast naturalnego hormonu.Nowe peptydy otrzymuje sie w znany sposób przy zastosowaniu D-seryny jako N-koncowego aminokwasu. Aminokwasy laczy sie przy tym po¬ jedynczo wedlug wymienionej kolejnosci, albo po uprzednim utworzeniu peptydów o mniejszych czasteczkach. Po przeprowadzonej syntezie od- szczepia sie grupy ochronne jednostopniowe lub ewentualnie w kilku stopniach.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze z D-serylo-L-tyrozylo-L-serylo-L-metionylo-L-glu- tamylo-L-histydylo-L-feriylo-alanylo-Li-arginylo-L- -tryptofyló-glicylo-L.-lizylo-L-prolilo-L- walilo-gli- cylo-Lr-lizylo-L-lizylo-L-lizylo-L-lizyny albo z od¬ powiedniego zwiazku, zawierajacego zamiast re¬ szty glutamylowej reszte glutaminowa, w których to peptydach chronione sa co najmniej grupa a-aminowa i grupy aminowe w lancuchach bocz¬ nych jak tez koncowa grupa karboksylowa i ewentualnie obecna w lancuchu bocznym grupa karboksylowa, odszczepia sie grupy ochronne i je¬ zeli to jest pozadane, otrzymane zwiazki przepro¬ wadza sie w sole addycyjne.z kwasami, pochodne lub w zwiazki kompleksowe.Polaczenie aminokwasów i/lub peptydów o mniejszych czasteczkach nastepuje w ten sposób, ze aminokwas lub peptyd z chroniona grupa a-aminowa i z aktywowana koncowa grupa kar¬ boksylowa poddaje sie reakcji z aminokwasem lub peptydem z wolna grupa a-aminowa i z wol¬ na lub chroniona np. zestryfikowana lub zamido- wana koncowa grupa karboksylowa lub amino¬ kwas albo peptyd z aktywowana grupa a-aminowa i chroniona koncowa grupa karboksylowa pod¬ daje sie reakcji z aminokwasem lub peptydem z wolna koncowa grupa karboksylowa i z chro¬ niona grupa a-aminowa. Grupe karboksylowa mozna aktywowac np. przez przeprowadzenie w halogenek kwasowy, azydek, bezwodnik, imi- dazol, izoksazolid lub w aktywowany ester jak ester cyjanometylowy, karboksymetylowy, p-nitro- fenylowy lub przez reakcje za pomoca karbo- dwuimidu (ewentualnie z dodatkiem imidu kwa¬ su N-hydroksybursztynowego) lub N^-karbonylo- -dwuimidoazolu, zas grupe aminowa mozna akty¬ wowac przez reakcje z fosfatoamidem. Jako naj¬ bardziej korzystne metody wymienia sie metode 20 karbodwuimidowa, azydowa, metoda aktywowa¬ nych estrów i metoda bezwodnikowa. Podkreslic nalezy równiez tzw. synteze z nosnikiem stalym, w której peptyd rozbudowuje sie od konca grupy 5 karboksylowej, zwiazanej estrowo z polimerem, przez kolejne dokondensowywanie aminokwasów.Wolne grupy funkcjonalne nie biorace udzialu w reakcji chroni sie korzystnie za pomoca reszt dajacych sie latwo odszczepic na drodze hydrolizy 10 lub redukcji i tak grupy karboksylowe korzystnie przez zestryfikowanie np. metanolem, III-rzed. butanolem, alkoholem benzylowym, alkoholem p-nitrobenzylowym lub przez utworzenie amidu, grupy aminowe np. przez wprowadzenie grupy 15 toluenosulfonylowej, trójfenylometylowej, formy- lowej, trójfluoroacetylowej, o-nitrofenylosulfeny- lowej, ftalilowej lub grupy karbobenzoksylowej albo barwnych grup ochronnych jak grupy p-fe- nylo-azo-benzylooksykarbonylowej i grupy p-/p'- -metoksy-fenyloazo/-benzylooksykarbonylowej lub przede wszystkim III-rzed. reszty butylooksykar- bonylowej. Do ochrony grupy aminowej w ugru¬ powaniu guanidowym argininy odpowiednia jest grupa nitrowa; wymieniona grupa aminowa argi¬ niny nie musi byc jednak koniecznie chroniona podczas reakcji. Grupe iminowa histydyny mozna chronic grupa benzylowa lub trójfenylometylowa.Przeksztalcenie chronionej grupy aminowej lub iminowej w wolna grupe jak tez przeprowadze¬ nie funkcjonalnie zmienionej grupy karboksylo¬ wej w wolna grupe karboksylowa przeprowadza sie w trakcie procesu znanymi metodami przez traktowanie srodkami powodujacymi hydrolize wzglednie redukcje.Korzystny sposób polega na tym, ze trójpeptyd zawierajacy pierwsze 3 aminokwasy, H.D. Ser- -Tyr-Ser-OH(skróty odnosza sie do L-aminokwa- sów, jezeli D nie zaznaczono specjalnie), lub czte- ropeptyd, który oprócz tego zawiera czwarty ami¬ nokwas poddaje sie kondensacji z heptapeptydem 40 wzglednie heksapeptydem nastepnych aminokwa¬ sów az do 10 aminokwasu, korzystnie metoda azydowa, a nastepnie dekapeptyd kondensuje sie z estrem lub amidem oktapeptydu aminokwasów 11—18. 45 Przy kondensacji tej jako metode sprzegania stosuje sie metode karbodwuimidowa lub metode aktywowanych estrów, przede wszystkim za po¬ moca estru p-nitrofenylowego. iW ostatnim przy¬ padku nie konieczne jest izolowanie samego estru 50 p-nitrofenylowego dekapeptydu, lecz mozna go równiez wytworzyc w trakcie kondensacji z de¬ kapeptydu z wolna grupa karboksylowa, p-nitro- fenolu i dwucykloheksylokarbodwuimidu. Deka¬ peptyd wystepuje wiec jako a-amino-chroniony 95 peptyd z wolna grupa karboksylowa albo z grupa p-nitrofenyloestrowa. Grupy aminowe obecne w lancuchach bocznych odcinków (czastek sklado¬ wych) peptydu poddawanych kondensacji chroni sie korzystnie za pomoca grupy III-rzed. butylo- 60 oksykarbonylowej a grupy karboksylowe za po¬ moca grupy III-rzed. butyloestrowej. Grupy ochronne mozna odszczepic w ostatnim stopniu za pomoca kwasu trójfluoroootowego.Wynalazek dotyczy równiez tych postaci wy- 65 konania sposobu, wedlug których wychodzi sie 3559570 6 ze zwiazku otrzymanego jako produkt posredni na dowolnym stopniu procesu, po czym przepro¬ wadza sie brakujace stopnie procesu, lub proces przerywa sie na dowolnym stopniu, jak tez otrzy¬ mane przy tym produkty posrednie.W zaleznosci od sposobu prowadzenia procesu nowe zwiazki otrzymuje sie w postaci zasad lub ich soli. Z soli mozna otrzymac w znany sposób zasady. Z tych ostatnich mozna znowu otrzymac sole przez reakcje z kwasami, które prowadza do uzyskania soli nadajacych sie do terapeutycznego stosowania np. z kwasami nieorganicznymi jak kwasy chlorowcowodorowe np. kwas solny lub kwas bromowodorowy, kwasy nadchlorowy, azo¬ towy lub tiocyjanowy, kwas siarkowy lub fosfo¬ rowy, lub z kwasami organicznymi jak kwas mrówkowy, octowy, propionowy, glikolowy, mle¬ kowy, pirogronowy, szczawiowy, malonowy, bur¬ sztynowy, maleinowy, fumarowy, jablkowy, wi¬ nowy, cytrynowy, askorbinowy, hydroksymaleino- *wy, dwuhydroksymaleinowy, benzoesowy, fenylo¬ octowy, 4-aminobenzoesowy, 4-hydroksybenzoeso- wy, antranilowy, cynamonowy, migdalowy, sali¬ cylowy, 4-aminosalicylowy, 2-fenoksybenzoesowy, 2-acetoksybenzoesowy, metanosulfonowy, etano- sulfonowy, hydroksyetanosulfonowy, benzenosulfo- nowy, p-toluenosulfonowy, naftalenosulfonowy lub sulfanilowy.Peptydy otrzymane sposobem wedlug wynalazku moga znalezc zastosowanie jako leki w postaci preparatów farmaceutycznych. Preparaty te za- ^wieraja peptydy w mieszaninie z farmaceutycz¬ nym organicznym lub nieorganicznym nosnikiem nadajacym sie do stosowania doustnego lub tez pozajelitowego. Jako nosniki brane sa pod uwage substancje, które nie reaguja z peptydarni jak np. zelatyna, cukier mlekowy, glukoza, sól ku¬ chenna, skrobia, stearynian magnezu, talk, oleje roslinne, alkohole benzylowe, guma, poliglikole alkilenowe, wazelina, cholesteryna lub inne znane nosniki leków. Preparaty farmaceutyczne moga wystepowac np. w postaci liofilizatów lub w po¬ staci cieklej, jako roztwory, zawiesiny lub emul¬ sje. Ewentualnie sa one sterylizowane l/lub za¬ wieraja substancje pomocnicze jak srodki kon¬ serwujace, stabilizujace, zwilzajace lub emulgu¬ jace. Moga one równiez zawierac inne terapeu¬ tycznie wartosciowe skladniki.Nowe zwiazki, tak jak naturalny ACTH mozna równiez podawac w postaci preparatu o przedlu¬ zonym dzialaniu jak np. z oksypolizelatyna, fosfo¬ ranem polifloretyny, karboksymetyloceluloza, albo z wyzej wymienionymi trudno rozpuszczalnymi zwiazkami metali zwlaszcza fosforanami, pirofos- foranami lub wodorotlenkiem cynku.Poza tym, w celu przedluzenia dzialania no¬ wych peptydów, mozna przeprowadzic je w kom¬ pleksy z polimerami lub kopolimerami aminokwa¬ sów, zwlaszcza tych, które zawieraja przewaza¬ jaca ilosc kwasnych grup a-aminokwasowych, jak kwas glutaminowy lub asparaginowy o konfigu¬ racji L-, D- lub D,L-. Wymienione polimery lub kopolimery posiadaja w bocznych lancuchach wolne grupy karboksylowe, podczas gdy koncowa grupa karboksylowa jest wolna lub zmieniona pod wzgledem funkcjonalnym i moze wystepowac np. jako grupa estrowa lub jako grupa amidowa niepodstawiona lub podstawiona resztami weglo¬ wodorowymi, przede wszystkim nizszymi grupa¬ mi alkilowymi. Ciezar czasteczkowy polimerów 5 moze wynosic 1000—100000, korzystnie wynosi 2000—15000. Do wytwarzania preparatów stosuje sie korzystnie rozpuszczalna w wodzie sól, do¬ puszczalna fizjologicznie np. sól sodowa lub amo¬ nowa albo sól z organiczna zasada jak trójetylo- io amina, prokaina, dwubenzyloamina lub z innymi trzeciorzedowymi zasadami zawierajacymi azot.Polimery sa znane lub mozna je wytworzyc znanymi metodami np. wedlug sposobu opisanego przez M. Idelson'a i innych w J. Am. Chem. Soc. 15 80, 4631 et seq (1958). Tak np. ester: kwas gluta- minowy-a-karboksybezwodnk-y-benzylowy lub -III-rzed. butylowy w dioksanie, poddaje sie re¬ akcji z amoniakiem lub z amina w okreslonym stosunku molowym np. 100:1 (w 'zaleznosci od po- 20 zadanego stopnia polimeryzacji), a po skonczonej polimeryzacji odszczepia grupy ochronne np. gru¬ pe benzylooksylowa bromowodorem w lodowatym kwasie octowym, a III-rzed. grupe butylooksylowa kwasem trójfluorooctowym. W celu wytworzenia 25 polimerów o jednolitej, okreslonej dlugosci lancu¬ cha, mozna wytwarzac je na drodze syntezy me¬ todami przyjetymi w chemii peptydów (metoda karbodwuimidowa, metoda azydowa itd.).Stezenie polimerów w preparatach farmaceu- 30 tycznych zalezy od rozpuszczalnosci danej soli i od lepkosci. Polimer powinien wystepowac w postaci rozpuszczonej i nadajacej sie do iniekcji.Stezenie peptydu czynnego adrenokortikotropo- wo dobiera sie tak, azeby preparat wykazywal 35 np. 10—50 jednostek miedzynarodowych (I.E.) 1 ml.Sposób wedlug wynalazku objasnia ponizszy przyklad. Temperatury podane sa w stopniach Celsjusza.Uklady chromatogramów cienkowarstwowych 40 oznaczono nastepujaco: Uklad 43 A: III-rzed. al¬ kohol amylowy-izopropanol-woda (100:40:10). Uklad 43C: III-rzed. alkohol amylowy-izopropanol i wo¬ da (100:40:55). Uklad 52: n-butanol-lodowaty kwas octowy-woda (100:10:30), Uklad 52A: n-butanol- 45 -lodowaty kwas octowy-woda (67:10:23). Uklad 100: octan etylu-pirydyna-lodowaty kwas octowy¬ goda (62:21:6:11). Uklad 101: -n-butanol-piry- dyna-lodowaty kwas octowy-woda (30:20:6:24).Stosuje sie nastepujace skróty: Z = grupa karbobenzylowa BOC — grupa III-rzed. butylooksykarbonyIowa tBu — grupa III-rzed. butylowa 50 Przyklad 1) Z-Liz(BOC)-Liz(BOC)-NH2 5 g Z-Liz(BOC)-Liz(BOC)-OCH3 rozpuszcza sie w 55 100 ml absolutnego metanolu, nasyca amoniakiem w temperaturze pokojowej i odstawia na 30 go¬ dzin w zamknietej kolbie. Roztwór zageszcza sie nastepnie do okolo 25 ml i odstawia na noc do krystalizacji w lodówce. Odsacza sie, przemywa 60 mala iloscia zimnego metanolu i suszy krysztaly w prózni. Otrzymuje sie 3,95 g Z-Liz(BOC)- -Diz(BOC)-NH2 o temperaturze topnienia 165°.Zwiazek wykazuje przy chromatografowaniu cien¬ kowarstwowym na silikazelu nastepujace warto- 65 sci Rf:7 Rf (chloroform-metanol = 95:5) = 0,11 Rf (chloroform-metanol — 8:2) = 0,75 Rf(43A) = 0,76 Stosowany jako material wyjsciowy Z-Liz(BOC)- -Li1z(BOC)-OCH8, o temperaturze topnienia 78—84° mozna wytworzyc z Z-Liz(BOC)-OH i H-Liz(BOC)- -OCH8 przez kondensacje za pomoca dwucyklo¬ heksylokarbodwuimidu, wedlug sposobu podanego w belgijskim opisie patentowym nr 594 338. 2) H-Liz(BOC)-Liz(BOC)-NH2 3 g Z-Liz(BOC)-Liz(BOC)-NHa rozpuszcza sie, lek¬ ko ogrzewajac w 100 ml metanolu i uwodornia w temperaturze pokojowej we wstrzasarce w obec¬ nosci 500 mg 10% palladu na weglu, przy czym absorbuje sie powstajacy dwutlenek wegla. Uwo¬ dornienie prowadzi sie przez okolo 1 godziny, a po uplywie nastepnej godziny odsacza sie kataliza¬ tor, a przesacz zageszcza do sucha. Otrzymany z ilosciowa wydajnoscia surowy produkt przekry- stalizowuje sie z ukladu octan etylu-eter nafto¬ wy, po czym wykazuje on temperature topnienia 110—112°.Na silikazelu otrzymuje sie nastepujace warto¬ sci Rf: Rf (chloroform-metanol = 8:2) = 0,32 Rf(43A) = 0,35 Rf(52) = 0,65 3) Z-Liz(BOC)-Pro-iWal-Gli-Liz(BOC)-Liz(BOC)- -Liz(BOC)-Liz(BOC)-NH2 5,13 g Z-Liz(BOC)-Pro-iWal-Gli-Liz(BOC)-Liz(BOC)- -NHNH2 (G. nr 2209) 63 [Case 5247/5123] rozpusz¬ cza sie w 60 ml absolutnego dwumetyloformamidu i oziebia do temperatury —25°. W temperaturze tej dodaje sie kroplami, mieszajac 8,8 ml 2,115n kwasu solnego, a nastepnie 0,973 ml 5n roztworu azotynu sodowego. Roztwór reakcyjny miesza sie przez 15 minut w temperaturze —10°, po czym dodaje do niego wstepnie oziebiony do tempera¬ tury —10° roztwór 2,0 g H-Liz(BOC)-Liz(BOC)- -NHa w 10 ml dwumetyloformamidu, a nastepnie wkrapla jeszcze 2,6 ml trójetyloaminy. Miesza sie przez 30 minut w temperaturze 0°, w tej samej temperaturze pozostawia przez okolo 20 godzin, po czym zageszcza sie do okolo 30 ml, wytraca 150 ml wody i odsacza klaczkowato-galaretowaty osad. Po dwukrotnym przekrystalizowaniu z me¬ tanolu i wody (2:1) chroniony oktapeptyd otrzy¬ muje sie w postaci drobnokrystalicznej i czystej chromatograficznie. Temperatura topnienia = 220— —221° z rozkladem. Wykazuje on na silikazelu nastepujace wartosci Rf: Rf (chloroform-metanol = 9:1) = 0,47 Rf(43A) = 0,75 4) H-Liz(BOC)-Pro-Wal-GH-Liz(BOC)-Liz(BOC)- -Liz(BOC)-Liz(BOC)-NH2 1,0 g wyzej opisanego zwiazku karbobenzoksylo- wego rozpuszcza sie w,250 ml metanolu i uwodar- nia we wstrzasarce 200 mg 10% palladu na weglu w temperaturze pokojowej i przy obsorpcji dwu¬ tlenku wegla. Po 6 godzinach odsacza sie katali¬ zator, przesacz zageszcza do sucha, a pozostalosc 8 wytraca jeszcze dwukrotnie z ukladu metanol- -woda. Otrzymuje sie 738 mg chromatograficznie jednorodnej pochodnej oktapeptydu, która na si¬ likazelu wykazuje nastepujace wartosci Rf: 5 Rf (chloroform-metanol. ^ 9:1) = 0,14 Rf(52) = 0,63 Rf(43A) = 0,28 5) BOG-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Fe- 10 -Arg-Try-Gli-Liz(BOC)-Pro-Wal-Gli-Liz(BOC)-Liz- (BOC)-Liz(BOC)-Liz(BOC)-NH2 988 g BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Fe- -Arg-Try-Gli-OH i 736 gm H-Liz(BOC)-Pro-Wal- -Gli-Liz(B(X:)-Liz(B 15 zawiesza sie w 20 ml pirydyny i po dodaniu 0,3 ml wody i 0,835 ml 1-n kwasu solnego miesza przez 15 minut w temperaturze 50°. Po dodaniu 378 mg dwucykloheksylokarbodwuimidu miesza sie przez 3 godziny w temperaturze 50°C, dodaje powtórnie 20 taka sama ilosc dwucykloheksylokarbodwuimidu, miesza przez dalsze 3 godziny w tej samej tem¬ peraturze i zageszcza do powstania pólstalej po¬ zostalosci. Przez ogrzewanie z 20 ml dwumetylo¬ formamidu peptydy zostaja, rozpuszczone i na drodze odsaczenia oddzielone od nierozpuszczal¬ nego dwucykloheksylomocznika.Przesacz zageszcza sie do uzyskania gestej po¬ zostalosci, dodaje 50 ml wody, przy czym wytraca 30 sie mazisty surowy produkt, który oddziela sie od lugu macierzystego i suszy. Przez dwukrotne wytracenie z ukladu dwumetyloformamid-meta- nol-octan etylu otrzymuje sie 1,29 g surowego pro¬ duktu, który w celu ostatecznego oczyszczenia poddaje sie rozdzialowi wedlug Craig'a w ukla¬ dzie rozpuszczalników metanol-bufor-chloroform- -czterochlorek wegla (10:3:7:4) [bufor = 28,5 ml . lodowatego kwasu octowego + 19,25 g octanu amonu w 960 ml wody] przy objetosci faz po 10 ml. (Na poczatku substancja równomiernie roz¬ dzielona napelnia sie pierwszych 5 elementów).Po 171 stopniach wydziela sie z elementów nr 50— —75 (Emax = 62; K = 0,57) przez zageszczenie do sucha i odsublimowanie octanu amonu w tempe¬ raturze 40° w wysokiej prózni, jednolity chroma- 45 tograficznje chroniony amid oktapeptydu, w po¬ staci czystego, bezpostaciowego proszku o tempe¬ raturze topnienia okolo 210—225° z rozkladem.Na silikazelu wykazuje on nastepujace wartosci Rf: 50 Rf (chloroform-metanol = 75:25) = 0,51 Rf (43c) = 0,62 Rf (52) = 0,55 * Rf (100) = 0,43 55 Stosowana jako substancja wyjsciowa pochodna dekapeptydu opisana jest w patencie belgijskim nr 668 250. 60 6) H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Fe-Arg-Try- -Gli-Liz-Pro-Wal-Gli-Liz-Liz-Liz-Liz-NHg (Amid D-Seri-Liz^^s-^i-^-kortikotropino-lizyny18). 400 mg chronionego amidu aktapeptydu rozpusz¬ cza sie w 8 ml 90% kwasu trójfluorooctowego i 65 pozostawia do odstania na 30 minut w tempera-59570 9 turze 25°. Nastepnie zageszcza sie do objetosci okolo 3 ml dodaje 20 ml wody, jeszcze raz za¬ geszcza i liofilizuje. Otrzymany tak trójfluoro- octan amidu oktadekapeptydu w celu przeksztal¬ cenia w octan rozpuszcza sie w malej ilosci wody i powoli saczy przez kolumne (0 = 11 mm; 1 = 16 cm) slabo zasadowego wymieniacza jono¬ wego (np. Merck nr II) w postaci octanowej.Eluat zateza sie do malej ilosci objetosci, liofili¬ zuje i dodatkowo suszy w wysokiej prózni w tem¬ peraturze 40°. Otrzymuje sie 301 mg chromatogra¬ ficznie i elektroforetycznie jednorodnego octanu amidu D-Seri-Liz17*18-/?1—18-!kortikotropmo-lizyny18 w postaci bezpostaciowego bialego proszku o nie¬ ostrej temperaturze rozkladu wynoszacej okolo 170—180°. Na chromatogramie cienkowarstwowym na tlenku glinu otrzymuje sie nastepujace war¬ tosci Rf: Rf (52A) = 0,13 Rf (101) = 0,32 Przy elektroforezie bibulowej (16 Volt/cm) przy pH = 6,1 (bufor-octan pirydyny) zwiazek przesu¬ wa sie w ciagu 2 godzin 11,5 cm w kierunku ka¬ tody. 10 PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania nowych peptydów o dzia¬ laniu ACTH, znamienny tym, ze z D-serylo-L-ty- 5 rozylo-L-serylo-L-metionylo-L-glutamylo^L-histy- dylo-L-fenyloalanylo-L-arginylo-L-tryptofylo-gli- cylo-L-lizylo-L-propylo-L-waliloglicylo-L-lizylo-L- -lizylo-L-lizylo-L-lizyny lub z odpowiedniego zwiazku, który zamiast reszty glutamylowej za- 10 wiera reszte glutaminy, w których to peptydach chronione sa co najmniej grupa a-aminowa i gru¬ py aminowe w lancuchach bocznych jak tez kon¬ cowa grupa karboksylowa i grupa karboksylowa ewentualnie obecna w lancuchu bocznym, odszcze- 15 pia sie grupy ochrenne i ewentualnie otrzymane zwiazki przeprowadza sie w ich sole addycyjne z kwasami, w pochodne takie jak estry, amidy i hydrazydy lub w zwiazki kompleksowe.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 20 grupy ochronne odszczepia sie z peptydu, w któ¬ rym grupy aminowe chronione sa przez grupe III-rzed. butylooksykarbonyIowa, a grupy karbo¬ ksylowe przez grupe III-rzed. butyloestrowa.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 2, znamienny tym, ze 25 wszystkie grupy ochronne odszczepia sie za po¬ moca kwasu trójfluorooctowego. PL