PL53176B1 - - Google Patents

Description

Otrzymany produkt rozpuszcza sie w 200 ml goracego etanolu, dodaje sie 3 ml hydrazyny, po¬ zostawia sie na 24 godziny w temperaturze 20°C, dodaje sie 200 ml eteru, przesacza, przemywa eterem i suszy w prózni nad pieciotlenkiem fos¬ foru i stezonym kwasem siarkowym. Otrzymuje sie 51 g Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NH2.Tempera¬ tura topnienia 205°C. 8,8 g Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NH2 rozpuszcza sie w 30 ml dwumetyloformamidu, dodaje sie 10 ml wody, oziebia do temperatury —10°C, do¬ daje 5 ml 6 n kwasu solnego oraz 750 g siarczy¬ nu sodowego, miesza sie w ciagu 5 minut w tem¬ peraturze —5°C, dodaje sie 300 ml 0,2 n roztworu weglanu sodowego i odwirowuje.Otrzymany Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-N3 rozpuszcza sie w 50 ml dwumetyloformamidu, dodaje 20 g H-Glu-His-Fen-Arg-Try-Gli(For)Liz-Pro-Wal- -Gli-(For)-Liz-(For)-Liz-Arg-Arg-Pro-Wal-(For) Liz-Wal-Tyr-Pro-Wal-NH2 i 5 ml wody i trak¬ tuje sie trójetyloamina az do reakcji alkalicznej.Pozostawia sie na 12 godzin w temperaturze 0°C, dodaje sie jeszcze dalsza ilosc azydku czteropep- tydu otrzymana z 4,8 g Tri-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH- -NH2, pozostawia sie na 6 godzin w temperaturze 20°C, odparowuje w wysokiej prózni, przemywa goracym octanem etylu i chlorkiem metylenu i suszyl w prózni. Otrzymuje sie 23 g Tri-Ser-Tyr- -Ser-Nle-Glu-His-Fen-Arg-Try-Gli-(For)Liz - Pro- -Wal-Gli-(For) Liz - (For) Liz-Arg-Arg-Pro-Wal- (For)-Liz-Wal-Tyr-Pro-Wal-NH2.Przyklad XV. Amid L-serylo- L-tyrozylo- L-serylo- L-norleucylo L-glutamylo- L-histydy- lo- L-fenyloalanylo- L-arginylo- L-tryptofany- loglicylo- L-lizylo- L-prolilo- L-waliloglicylo- L-lizylo- L-lizylo- L-arginylo- L-arginylo- L- -prolilo- L-walilo- L-lizylo- L-walilo- L-tyrozy- lo- L-prolilo- L-waliny H-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Fen-Arg-Try - Gly- -Liz-Pro-Wal-Gli-Liz-Liz-Arg-Arg-Pro-Wal- -Liz-Wal-Tyr-Pro-Wal-NH2. a) 10 g chronionego pentakozapeptydu ogrzewa sie, mieszajac bez dostepu tlenu w 5000 ml 0,1 n kwasu solnego w ciagu 3 godzin w temperaturze 100°C, odparowuje sie w prózni, pozostalosc prze¬ mywa acetonem i eterem etylowym i suszy w prózni. Po przeciwpradowym rozdzieleniu w mieszaninie kwasu trójfluorooctowego, II rzed. butanolu i wody (1 -r- 120:160) otrzymuje sie 7,4 g glównej frakcji, która posiada takie same wlasciwosci jak kortikotropina i która w chro¬ matografii i elektroforezie zachowuje sie jedno- lodnie.Migracja w elektroforezie bibulowej przy pH 5,8 i napieciu 40 V/cm wynosi 56 mm w ciagu 60 minut (stosowana jako wzorzec histydyna przesuwa sie 61 mm). Migracja w elektroforezie 16 bibulowej przy pH 1,9 i napieciu 40 V/cm wy¬ nosi 121 mm w ciagu 60 minut (stosowany jako wzorzec kwas glutaminowy przesuwa sie 97 mm w tych samych warunkach). 5 Rf w chromatografii bibulowej w ukladzie n-butanol (kwas octowy) woda 70(10)20 wynosi 0,01 calkowita hydroliza daje nastepujacy sklad aminokwasów: Ser^a, Tryi,9 Nle^o Glu0,9 H Fenj Arg3,2Gli2,oLiz4,1Pro2,9Wal4,o (Tyrozynajak wiadomo 10 ulega rozkladowi przy calkowitej hydrolizie kwa¬ sowej). Produkt moze byc stosowany sam lub po przeksztalceniu w inna sóL Przechowuje sie go w stanie stalym, roztworze lub w postaci adsorbatu. 15 b) 10 g chronionego pentakozapeptydu roz¬ puszcza sie w mieszaninie 500 ml lodowatego kwasu octowego i 500 ml wody, ogrzewa w cia¬ gu 10 minut w temperaturze 100°C, odparowuje, rozpuszcza w 5000 mi 0,01 n kwasu solnego, 20 ogrzewa w ciagu 3 godzin w temperaturze 100°C i postepuje sie dalej jak w punkcie a). c) 10 g chronionego pentakozapeptydu rozpusz¬ cza sie w 1200 ml kwasu trójfluorooctowego, po¬ zostawia sie na 30 minut w temperaturze 20°C, 25 odparowuje, rozpuszcza w 5000 ml 0,2 n kwasu solnego, ogrzewa w ciagu 90 minut w tempera¬ turze 100°C i postepuje sie dalej jak w pun¬ kcie a). d) 10 g chronionego pentakozapeptydu rozpusz- 30 cza sie w 4500 ml 0,5 n metanolowego roztworu kwasu solnego, pozostawia sie mieszajac na 24 godziny w temperaturze 20°C, odparowuje, roz¬ puszcza w 1000 ml 0,1 n kwasu solnego, ogrzewa w ciagu 1 godziny w temperaturze 100°C i po- 35 stepuje dalej jak w punkcie a). PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia paten to we Sposób wytwarzania nowego polipeptydu o wzo- 40 rze amidu L-serylo- L-tyrozylo- L-serylo- L-nor¬ leucylo- L-glutamylo- L-histydylo- L-fenyloala¬ nylo- L-arginylo- L-tryptofanylo-glicylo- L-lizy¬ lo- L-prolilo- L-walilo-glicylo- L-lizylo- L-lizy¬ lo- L-arginylo- L-arginylo- L-prolilo- L-walilo- 45 L-lizylo- L-walilo- L-tyrozylo- L-prolilo- L-wa¬ liny, znamienny tym, ze pochodna polipeptydu o wzorze amidu N-A-L-serylo- L-tyrozylo- L-sery¬ lo- L-norleucylo- L-glutamylo- L-histydylo- L- -fenyloalanylo- L-arginylo- L-tryptofanylo- L- 50 L-glicylo- f-N-formylo- L-lizylo- L-prolilo- L- L-walilo-glicylo- f-N-formylo- L-lizylo- e-N- -formylo- L-lizylo- L-arginylo- L-arginylo- L- -prolilo- L-walilo- £-N-formylo- L-lizylo-. L- -walilo- £-N-formylo- L-lizylo- L-walilo- L- 55 -tyrozylo- L-prolilo- L-waliny, w którym A oznacza grupe nadajaca sie do ochrony grupy aminowej, zwlaszcza grupe karbobenzoksylowa odszczepialna przez uwodornienie, przez trakto¬ wanie bromowodorem w kwasie trójfluoroocto- 60 wym lub przez traktowanie metalem alkalicznym w cieklym amoniaku, albo przez hydrolize kwa¬ sna, grupe karboalkiloksylowa, odszczepialna przez kwasna hydrolize, grupe trójfluoroacetylowa od¬ szczepialna przez zmydlenie lub traktowanie hy- 65 drazyna, grupe acetylowa, chloroacetylowa lub for-53176 17 mylowa odszczepialna przez kwasna hydrolize, gru¬ pe karbo III rzed. butoksylowa lub p-nitro-karbo- benzoksylowa odszczepialna przez kwasna hydroli¬ ze, przez traktowanie bromowodorem w kwasie trójfluoro-octowym lub przez traktowanie kwasem trójfluorooctowym, lub grupe trójfenylometylowa i formylowa odszczepialna za pomoca bromowodo- ru w kwasie trójfluorooctowym za pomoca kwa¬ su trójfluorooctowego na drodze kwasnej hydro- 18 lizy lub przez traktowanie metalem alkalicznym w cieklym amoniaku, lub grupe formylowa od¬ szczepialna przez kwasna hydrolize, traktuje sie czynnikami odszczepiajacymi odpowiednie grupy 5 ochronne, przy czym proces ten prowadzi sie w jednym lub ewentualnie kilku stopniach, a tak otrzymany polipeptyd ewentualnie przeprowadza sie w sól z nieorganicznymi lub organicznymi kwasami.KI. 12 q, 6/01 53176 MKP C 07 e ¦£igs± CBO ,J CBO-\ Tyr \—OCP H-\ Pro Wal h-M CBO J CBO-\ Tyr Pro Wal -HH* CBO- VioL \-0CP H-\ Tyr WoL CBO-\ Wol Tyr kC/ -HHy. ?cr CBQ-| Liz |-QCP H- Pro We/ -M» For cao—£ Mta* Tyr Pro C§C-\ Wal \-OCP H- Liz Wal Tyr Wal For C#0-j Wt Tyr Pro For J H-l *»* WaL fd Fiq - 2 -| Arg y%z? H-l Pro -OT 8 Arg -OTa TOS CBO-| Arg U-OCP H- Arg Pro UOK For -OCP C80- H^ To5 Arg Tos l Arg TOS 1 A rg Tos Arg Pro Pro Liz Lqcp CBO- Hn For 1 Liz For Liz ;„ Arg Tos l A rg TOS 1 Arg Tos 1 Arg Pro Pro -OK cao-; For _J For -J ToS _| A rg Arg Pro For _J For Arg ProKI. 12 q, 6/01 53176 MKP C 07 c lifzl. For For Toi Tos CBO-\ Hal GLl \-OCP H-\ Li*. Liz Arg Arg Pro U-OH CBO-I Wal G/i Por p0r ToS yoi L/z Liz Arg Ar9 Pro L_oh 4 For _J Mai Liz Woi Tyr Pro tfaJ l-WW, CBO- Wal H-! /Vo/ GM' Gil For i Liz Por l Liz rr HZ r Liz Tos Arg rcs Ar9 TOS Arg Tjos Arg Pro Pro hial rJol Fr Liz Fr Liz Wal Wal Tyr Tyr PrC Pro wal r.'0l Fc9-H CBW Lir LOCP H- CBQ-| Li 3 Try GL\ -OC P rW Li? Tos _j_ CBO- Ar9 \-QQp H, Try GLi For Li z Pro For Try GLi Lii Pro -0TQ CBO- H - TOS 1 Arg Tos i Arg Try Try OLi GLi For LiL For Liz Pro ProKI. 12 q, 6/01 53176 MKP C 07 c Fiq-5 9-0- C80- Fen j-OCP H-l Arg Try Gli Liz Pro -0TB CBO- Fen Arg Try Gli Liz Pro CBO _| His |-W^ H- C80-| Ws C60-| His OT8 CBO-| Glu |-OCP H-| His OT 8 C80-' GLu His Fen Fen Fen Fen Fen Tos Arg Vs Arg Tps Arg ros Arg Tps Arg Try Try Try Try Try GLi Gli GLi Gli Gil For Liz For Liz F,or Liz Fpr LIZ r LIZ Pro Pro \- Pro - Pro ]- Pro For For Tos T( 'OS Tps FPr. -OH H-| Wal GLi Ltz Liz Arg Arg Pro WaL U 2 htal Tyr pro WoL \~* For For Tos Tos J3L CBO- Gili His Fen Arg Try GLi Liz Pro WaL Gli Liz Liz Arg Arg Pro WaL Liz WaL Tyr Pro Wal -WH^ _!r H- Glu His Fm Arg Try Git Liz Pro ^o/ Gli liz Liz Arg Arg Pro Wal Liz kol Tyr Pro Wal ~NH- /V g - 6 CB0-[ CBO-J Ser Nie -ONe TriA Ser Tyr\-N} H-J Ser Nie U-Me rri- Ser Tyr Ser Nie -OMe Tri-J Ser Tyr Ser KJg I—fi'HWf/, Trt'-| Ser Tyr Ser Nl9 |-^ H-| Glu His fpn Are Try fili Liz Pro WaL Gli Liz Liz kra Aro Pro WaL Liz Wal Tyr Pro Wal {-NH^ TriJ Ser Tyr Ser Wie G/u H/s Fen Arg Try Gh For Liz Pro WaL Gli For 1 LIZ Fpr Liz krq Arg Pro Fpr WaL Liz Wal Tyr Pro Wal H-| 5er Tyr Ser Nie Glu Hfs Fen Arg Try Gli Liz Pro Hol Gh Liz Liz Arg Arg Pro Wal Liz. WaL Tyr Pro Wal PZG w Pab., zam. 105-67 nakl. 270 egz. f. A-4 PL