Opublikowano dnia 15 sierpnia 1963 r. ?tz\ 4. lUrzeo owego! [Pilskiej PzeczypttiwHiej Lufrwii' POLSKIEJ RZECZYPOSPOLITEJ LUDOWEJ OPIS PATENTOWY Nr 47241 KI. 30 g, 6/02 KI. internat. A 61 j Hirgh James Davis Kopenhaga, Dania Sposób prxygotowywania próbek materialu komórkowego w postaci preparatów mikroskopowychi przyrzad do stosowania tego sposobu Patent trwa od dnia 29 maja 1962 r.Piejroszensfewo: 5 czerwca 1861 r. dla zastrz. 1—7^ 14—16, (Wielka Brytania) 16 pazdziernika 1961 r. dla zastrz. 8—10 (Wielka Brytania) 30 marca 1962 r. dla zastrz. 11—13 (Wielka Brytania) Wynalazek niniejszy dotyczy sposobu przy¬ gotowywania próbek materialu komórkowego w postaci preparatów mikroskopowych.Preparaty mikroskopowe materialu komór¬ kowego moga byc stosowane do celów diagno¬ stycznych lub do celów nauczania, a w oby¬ dwóch przypadkach duze znaczenie przywiazuje sie do tego, aby preparaty te byly jednakowej i wysokiej jakosci i aby nadawaly sie do do¬ kladnego odrózniania nienormalnych komórek od komórek normalnych.Uzyskiwanie i przygotowywanie próbek ma¬ terialu komórkowego obejmuje szereg zabiegów, które dawniej byly wykonywane przez rózne osoby w róznych miejscach. Material komórko¬ wy, który moze pochodzic z jamy ciala, musi byc uzyskiwany w okreslony sposób, a w celu zadawalajacego przygotowania, preparatu mikro¬ skopowego komórki musza byc odpowiednio spreparowane w laboratorium za pomoca sze¬ regu zabiegów, które obejmuja: traktowanie roztworem utrwalajacym oraz odwirowywanie w celu oddzielenia tych komórek od roztworu utrwalajacego, przed rozmieszczeniem ich na szkielku mikroskopowym.Ponadto trzeba przy tym zachowywac duza ostroznosc, w celu zapobiezenia pomieszaniu materialu komórkowego, który pochodzi od róz¬ nych osobników.Dotychczas bylo w zwyczaju przekazywanie pobierania materialu komórkowego, na przy¬ klad pochodzacego z jamy ciala, lekarzowi lub pielegniarce, a spreparowanie go — labora¬ torium. Nawet w szpitalach, gdzie preparowanie laboratoryjne moze byc wykpnane stosunkowo szybko po pobraniu próbki, tradycyjny sposóbtego preparowania jest kosztowny i zabiera wie¬ le czasu, poniewaz wymaga wysoce bieglego i wyspecjalizowanego personelu pobierajacego próbki, a zasadnicze wyposazenie laboratoryjne obejmuje pipety, strzykawki wciagajace, butle zbiorcze, rurki wirówkowe itd., potrzebne dla spreparowania poszczególnej próbki, a to w celu unikniecia zamiany.Pobieranie komórkowych próbek od osobni¬ ków z poza szpitala wymaga wstepnego utrwa¬ lania materialu komórkowego w celu doprowa¬ dzenia go do stanu, wymaganego dla proce¬ su laboratoryjnego, wówczas gdy komórki te zostana dostarczone do laboratorium. Wymaga to wysoce bieglych lekarzy lub pielegniarek, a jak na ogól pokazuje doswiadczenie, dodatko¬ wo do trudnosci, na jakie napotyka sie w labo¬ ratorium przy preparowaniu materialu komór¬ kowego w ten sposób pobranego, dochodzi to, ze tradycyjny sposób pobierania próbek unie¬ mozliwia wykonywanie zadawalajacych prepa¬ ratów mikroskopowych i czesto prowadzi do preparatów, które nie wykazuja tego rodzaju nienormalnych komórek, chociaz rzeczywiscie istnieja one w próbce materialu, lub do prepa¬ ratów, w których nienormalne komórki sa trud¬ ne do odróznienia od komórek normalnych.Celem niniejszego wynalazku jest stworzenie ulepszonego sposobu przygotowywania prepa¬ ratów mikroskopowych, który jest szybszy i pewniejszy, nie wymaga wysoce bieglego per¬ sonelu do pobierania próbnego materialu, calko¬ wicie usuwa niebezpieczenstwo zamiany, obniza czas przygotowywania w laboratorium i prowa¬ dzi do jednorodnych i bardzo dobrej jakosci pre¬ paratów mikroskopowych.Wedlug wynalazku uzyskuje sie to za pomoca zastosowania jednolitej, zawierajacej podatna banke konstrukcji pojemnikowej, przeznaczo¬ nej do wykonywania nastepujacych zabiegów: do pobierania próbek materialu komórkowego, uzytkujac ja wówczas jako pipete, do przesyla¬ nia próbek, uzytkujac ja jako pojemnik, do od¬ wirowywania materialu komórkowego, uzytku¬ jac ja jako pojemnik wirówkowy, oraz ewen¬ tualnie do rozmieszczania materialu komórko¬ wego na szkielku mikroskopowym, uzytkujac ja jako pipete.Ponadto wynalazek niniejszy stwarza przy¬ rzad do stosowania opisanego wyzej sposobu.Wedlug wynalazku przyrzad ten zawiera po pierwsze element, stanowiacy faktycznie po¬ jemnik plynu, a po wtóre element stanowiacy faktycznie konstrukcje pipetowa, zaopatrzona w banke oraz w czesc rurkowa dajaca sie wy¬ korzystywac do pobierania plynu z pojemnika i wciskania go z powrotem do tego pojemnika, przy czym pojemnik ten jest tak skonstruowa¬ ny, ze moze byc oddzielany od konstrukcji pipe¬ towej w celu wykorzystania go jako pojemnika wirówkowego, a ponadto w konstrukcji pipeto- wej zawiera element dajacy sie wykorzystac do przeksztalcania rurkowej czesci pipety we wlasciwa pipete, w celu odbierania plynu z po¬ jemnika wirówkowego.Wedlug wynalazku czesc konstrukcji przy¬ rzadu, która tworzy pojemnik plynu i jest rów¬ niez uzytkowana jako pojemnik wirówkowy, moze miec postac obudowy ochraniajacej pi¬ pete.Jako odmiana wynalazku, banka pipety moze byc wykonana ze stosunkowo sztywnego ma¬ terialu, nadajac sie przez to do uzytkowania jako pojemnik wirówkowy i bedac jednoczes¬ nie przystosowana do oddzielania od rurkowej czesci konstrukcji pipetowej.W obydwóch przypadkach zostala stworzona prosta i niekosztowna konstrukcja pojemniko- wa, która moze byc masowo produkowana przy malym koszcie i która moze byc wyrzucana po uzyciu.Wynalazek zostanie teraz opisany z powola¬ niem sie na rysunek, na którym fig. 1 jest sche¬ matycznym przekrojem wzdluznym jednej po¬ staci wykonania przyrzadu wedlug wynalazku w postaci pipety, fig. 2 — podobnym przekro¬ jem odmiennej konstrukcji pipety, fig. 3,4 i 5 sa rzutami aksonometrycznymi pipety pokaza¬ nej na fig. 2, ilustrujacymi rózne zabiegi spo¬ sobu wedlug wynalazku, fig. 6 jest przekrojem wzdluznym dalszej odmiany konstrukcji pipe¬ towej wedlug wynalazku wraz z obudowa ochronna, stosowana do transportu, fig. 7 — wzdluznym przekrojem jeszcze innej odmiany wykonania konstrukcji pipetowej wedlug wyna¬ lazku, fig. 8,9 i 10 sa rzutami aksonometryczny¬ mi konstrukcji pipetowej pokazanej na fig. 7, ilustrujacymi rózne zabiegi sposobu stosujacego te pipete, fig. 11 jest odmiana przyrzadu wedlug wynalazku, fig. 12 — odmiana przyrzadu, poka¬ zanego na fig. 11, fig. 13 — jeszcze inna odmiana przyrzadu, a fig. 14— odmiana przyrzadu poka¬ zanego na fig. 13.Na fig. 1 jest przedstawiona konstrukcja po- jemnikowa, która sama tworzy jednolita kon¬ strukcje pipetowa, zaopatrzona w czesc rur¬ kowa 10 oraz w konstrukcje bankowa, oznaczona jako calosc liczba 12, a zawierajaca dwie podat- — 2 —ne banki 12* i 12b. Otwarty koniec czesci rur¬ kowej 10 jest zamykany za pomoca kapturka 14.Przyklad wykonania pokazany na fig. 2 rózni sie od pokazanego na fig. 1 tym, ze mniejsza banka 12b jest umieszczona blizej konca czesci rurkowej 10, Sposób wedlug wynalazku, który na fig. 3,4 i 5 jest zilustrowany za pomoca konstrukcji po¬ kazanej na fig. 2 obejmuje nastepujace zabiegi: Pipeta jest dostarczana uprzednio napelniona odpowiednim roztworem, podstawe którego sta¬ nowi mieszanina alkoholu i soli fizjologicznych z dodatkiem malej ilosci substancji grzybobój¬ czej lub bakteriobójczej i który moze byc uzyty zarówno jako- roztwór pluczacy przy pobieraniu materialu komórkowego z jamjr ciafeiy na. przy¬ klad z pochwy, jak równiez jako roztwór kon¬ serwujacy. Stezenie alkoholu powinno byc wy¬ starczajaco duze, aby uniemozliwic rozwój bakterii i (lub) rozklad materialu komórkowego, ale jednoczesnie wystarczajaco slabe, aby nie wyrzadzac krzywdy pacjentowi lub nie zmieniac komórek w taki sposób, aby stwarzalo to trud¬ nosci przy dalszym ich preparowaniu. Stezenie solanki powinno byc wystarczajace dla zapobie¬ zenia pecznieniu i kurczeniu sie komórek. Naj¬ korzystniej jest gdy roztwór zawiera równiez odpowiedni indikator pH, na przyklad substan¬ cje barwiaca, która zmienia swój kolor, gdy zo¬ staje wytwarzany kwas.Za pomoca manipulowania podatna banka 12a material komórkowy zostaje zasysany z jamy ciala do wewnatrz pipety za pomoca roztworu pluczacego. Moze to wykonywac bez trudnosci sam pacjent w oparciu o opisana instrukcje, i nie jest potrzebny ani lekarz ani wykwalifiko¬ wana pielegniarka. Za pomoca powtórzenia kil¬ ka razy przeplukania i zassania plynu do we¬ wnatrz pipety, roztwór ten bedzie zawieral próbke komórkowego materialu pochodzacego z jamy ciala. Nastepnie naklada sie kapturek 14 w celu zamkniecia konca pipety i wówczas mozna wlozyc pipete do ochraniajacej obudo¬ wy 16, zaopatrzonej w gwintowany kapturek 18 (fig. 6), i wyslac ja nastepnie poczta do central¬ nego laboratorium.Jak juz bylo wspomniane wyzej odpowiedni roztwór zostal wynaleziony w celu ochraniania materialu komórkowego przez dluzszy czas, na przyklad cztery lub piec tygodni, który umoz¬ liwia pobranie i przesylke próbki z naj¬ bardziej oddalonej miejscowosci w celu sprepa¬ rowania jej w centralnym laboratorium.Po otrzymaniu próbki materialu przez labo¬ ratorium spreparowanie jej obejmuje zabieg umieszczenia pipety w standartowej wirówce.W tym celu rurkowaty koniec pipety moze byc odciety w miejscu C (fig. 4). Komora lub banka 12a zostaje wówczas uzyta jako pojemnik wi¬ rówkowy, a po zageszczeniu komórek w zam¬ knietym koncu komory 12a, komora ta moze byc odcieta w miejscu B w celu ulatwienia usu¬ niecia z niej znajdujacego sie u góry roztworu.Roztwór utrwalajacy, na przyklad 90% abso¬ lutnego alkoholu i 10% eteru, zostaje nastepnie wprowadzony do tej czesci konstrukcji, która byla uzyta jako pojemnik wirówkowy, i po¬ trzasa sie nia w celu zmieszania materialu ko¬ mórkowego z roztworem utrwalajacym. Miesza¬ nina taka zostaje ponownie odwirowana w celu zageszczenia komórek, a w razie zyczenia nad¬ miar znajdujacego sie u góry roztworu utrwala¬ jacego moze byc usuniety.Pomocnicza komora lub banka 12b tworzy wraz z czescia rurkowa 10 pomcnicza pipete, wówczas gdy jej koniec zostanie zamkniety za pomoca kapturka 14, i za pomoca tej pomocni¬ czej pipety koncentrat komórkowy wraz z roz¬ tworem utrwalajacym moze byc zassany i roz¬ mieszczony wprost z tej pipety na szkielko mikroskopowe.W podobny sposób moze byc uzyta konstruk¬ cja przedstawiona na fig 1. W tym przypadku material komórkowy jest zageszczany w bance lub czesci 12b pojemnika. Po usunieciu roztwo¬ ru, znajdujacego sie u góry po pierwszym od¬ wirowaniu i wprowadzeniu roztworu utrwalaja¬ cego do komory 12b, tak manipuluje sde ta ko¬ mora, aby material komórkowy przesunal sie do tylu do czesci 12a komory, a to w celu zmie¬ szania go z roztworem utrwalajacym, a nastep¬ nie po drugim odwirowaniu konstrukcje pipe- towa mozna rozciac w miejscu A, w celu uzycia banki 12b jako pomocniczej pipety, z której ma¬ terial komórkowy jest juz rozmieszczany na szkielko mikroskopowe.Zamiast polaczonej z konstrukcja pipetowa podatnej komory 12b i sztywnego kapturka do zamykania konca pipety, sam kapturek moze byc wykonany w postaci podatnego elementu, takiego jak podatny kapturek 14a (fig. 6), który mozna wykorzystywac jako banke pomocniczej pipety.W postaci wykonania pokazanej na fig. 7 konstrukcja pipetowa sklada sie z poszczegól¬ nych czesci, które moga byc rozdzielane i la¬ czone w rózny sposób. — 3 —W tym celu rurkowa czesc 10 pipety jest za¬ opatrzona w kolnierz 22, który ma rurowy wy¬ stap 20, nadajacy sie do laczenia w sposób usz¬ czelniony na ciecz z podatnym pojemnikiem 12a. Czesci te moga byc wytwarzane z mocno wciskanym pasowaniem lub w razie zyczenia moga byc laczone z nieznacznym uszczelnieniem na goraco, co jednakze nie stwarza bardziej trwalego polaczenia niz polaczenie nadajace sie do recznego rozmontowywania. Zamykajacy kapturek 12b jest równie podatny i jest zaopa¬ trzony w czesc 24, która pasuje do wnetrza "wy¬ stepu 20, tak ze nadaje sie do laczenia kapturka z rurowa czescia pipety w celu tworzenia po¬ mocniczej konstrukcji pipetowej. Koniec 28 rur¬ kowej czesci pipety pasuje wystarczajaco szczel¬ nie z wnetrzem kapturka, w celu umozliwienia: kapturkowi skutecznego zamykania konstrukcji pipetowej, a sasiadujacy koniec rurkowej czesci pipety jest zaopatrzony w czesc 26 o zmniejszo- nej srednicy lub ewentualnie moze byc zasto¬ sowany pierscieniowy wystep w poblizu konca rurkowej czesci pipety. Czesc 26 o zmniejszo¬ nej srednicy Lub równowazny wystep stwarza element dystansowy, który ulatwia rozmieszcza¬ nie materialu komórkowego na szkielku mikro¬ skopowym równa warstwa o grubosci wyzna¬ czanej przez ten element dystansowy.Przy uzytkowaniu pipety pokazanej na fig. 7, material komórkowy jest zasysany do wewnatrz tej pipety w sposób opisany wyzej.W laboratorium czesc 12a zostaje oddzielona od pozostalej konstrukcji (fig, &}, a material ko¬ mórkowy zostaje poddany odwirowaniu w czesci bankowej 12a, tak jak to bylo juz opisane wyzej.Po drugim odwirowaniu, kapturek 12b, po¬ laczony z rurowa czescia pipety w celu stwo¬ rzenia pomocniczej konstrukcji pipetowej, jest uzywany do pobierania materialu komórkowego z pojemnika 12a i rozmieszczenia go na szkielku mikroskopowym, korzystajac przy tym z ele¬ mentu dystansowego 26 (fig. 10).Zamiast uzytkowania jednolitej konstrukcji pipety jako zasysajacego pojemnika, magazynu¬ jacego pojemnika, wirówkowego pojemnika i pomocniczej pipety, mozna w ramach niniej¬ szego wynalazku w calosci lub czesciowo uzyt¬ kowac zewnetrzna obudowe ochronna jako po¬ jemnik przeznaczony do jednego lub do kilku z wymienionych celów.Na fig. 11 zwykla pipeta 10,12, zaopatrzona w banke 38, jest na swyin otwartym koncu oto¬ czona wydrazonym podluznym elementem 30, którego otwarty koniec 32 opiera sie o czesc W pipety, majacej w tym miejscu grubsza scianke.Element 3» faktycznie stwarza pojemnik 96, a drugi pojemnik 38 jest stworzony w czesci bankowej 12.Czesci te moga byc laczone w taki sposób, ze otwarty koniec rurkowej czesci 10 pipety wcho¬ dzi do wewnatrz elementu 30, który umozliwia uprzednie napelnienie tej konstrukcji roztwo¬ rem w taki sposób, ze jego skladniki sa rozdzie¬ lane, przy czym sól fizjologiczna znajduje sie tylko wewnatrz pipety, a alkohol i inne sklad¬ niki — w pojemniku 50, co ma te zalete, ze przeplukiwanie i pobieranie komórkowej próbki materialu moze odbywac sie tylko za pomoca, roztworu soli, dzieki czemu wykluczone zostaje jakiekolwiek niebezpieczenstwo wyrzadzenia krzywdy pacjentowi. Gdy roztwór soli zostal zassany z powrotem to pipety, to roztwór ten powinien byt nastepnie wtrysniety do czesci M pojemnika, przed zmontowaniem konstrufecji i odeslaniem jej do laboratorium, a mieszanin* powinna oyc przy tym wstrzasnieta. len przy¬ kladwykonani* stwarza równiez mozliwosc sto- . sowania nieco wiekszego stezenia alkoholu, azeby dac plyn o stóadzie, który zapewnia opty¬ malne leondycjonowanie komórek, dla przyszle¬ go ich preparowania.Na fig. 12 czesc 34 pipety im pierscieniowe wybranie dla przyjecia kolnierza 4? lub ele¬ mentu podobnego pojemnika tO, a to w celu za- pewnaenia zespolu azcaerinego na ciecz.W przykladzie wykonania pokazanym na fig. 13, zewnetrzny pojemnik przedstawiony na fig. « zostal zmodyfikowany i zawiera czesc 44, która ma 'byc uzytkowana jako pojemnik w taki sam sposób jak pojemnik 39 pokazany na fig. 11 i 12 i która jest polaczona z pipeta za pomoca gwintu wykonanego na zewnatrz srodkowej czesci 43 konstrukcji pipetowej. Kapturek 40 pojemnika, zaopatrzony je#t równiez w ©Apo* wiedni gwint.W odmianie pokazanej na fig. 14- zewnetrzny pojemnik 44 wraz z jego kapturkiem 48 ma po¬ dobny uklad jak pokazany na fig, 6 i nadaje sie do przyjecia pipety przy tarciowym polaczeniu lub polaczeniu podobnym za pomoca jej srofcr kowej czesci J*.Jest oczywiste; ze sposób przeprowadzany za pomoca przyrzadów pokazanych na fig. 11—14 obejmuje zassanie materialu komórkowego za pomoca samej konstrukcja pipetowej, zastoso¬ wanie pojemników 31T lub 4* jako pojemnika wirówkowego, a zasysanie materialu komórko¬ wego jako mieszaniny z iPitwoiem utrwalaja- — 4 —cyrri odbywa si^ za pomoca tej tamej pipefy, która byla zastosowana do pobrania próbki materialu komórkowego.Przy realizacji przyrzadu, który sklada sie z jednolitej konstrukcji pipetowej, sama pipeta jest wykonana z syntetycznej zywicy dowol¬ nego odpowiedniego do tego celu typu, najko¬ rzystniej, z przezroczystego materialu umozli¬ wiajacego wzrokowo kontrolowanie zawartosci czesci konstrukcji stosowanej od odwirowywa¬ nia. Jest oczywiste, ze scianka czesci bankowej musi byc wystarczajaco sztywna, aby mogla przeciwstawiac sie silom odsrodkowym, a jed¬ noczesnie musi miec podatnosc potrzebna do manipulowania nia jako banka pipetowa.W wykonaniach przedstawionych na fig. 11-14 czesc pojemnikowa 3fl lub 44 moze byc równiez wykonana z syntetycznej zywicy, chociaz w ra¬ mach niniejszego wynalazku mozna równiez stosowac metalowy pojemnik zewnetrzny, naj¬ korzystniej zaopatrzony wewnatrz w powloke z syntetycznej zywicy.Jak mozna bylo zorientowac sie z podanego wyzej opisu przyrzadu i sposobu wedlug wy¬ nalazku, poza uniknieciem koniecznosci korzy¬ stania z pomocy lekarza lub wykwalifikowanej pielegniarki do pobierania próbek materialu komórkowego, sposób wedlug wynalazku ma jeszcze te zalete, ze cale spreparowanie mate¬ rialu komórkowego od jednego pacjenta odby¬ wa sie w tym samym przyrzadzie, jaki byl za¬ stosowany dó pobrania próbki, tak ze usuniete zostalo niebezpieczenstwo jakiegokolwiek po¬ mieszania próbek. Ponadto w laboratorium sposób ten nie wymaga przekazywania otrzyj manego materialu próbki z przesylkowego pojemnika do sprzetu laboratoryjnego oraz zwiazanego z tym sterylizowania tego sprzetu, dzieki czemu czas preparowania zostaje skró¬ cony.O ile chodzi o sam przyrzad, to wszystkie przedstawione na rysunku i opisane przyklady jego wykonania maja postac nieskomplikowa¬ nego sprzetu, skladajacego sie z paru tylko czesci, które moga byc wytwarzane masowo i przy koszcie tak niskim, ze stanowi on tylko maly ulamek oszczednosci przewidywanych z zastosowania tego sposobu, i które moga byc wskutek tego wyrzucane po uzyciu. PL