Opublikowano dnia 30 kwietnia 1959 r.L A POLSKIEJ RZECZYPOSPOLITEJ LUDOWEJ OPIS PATENTOWY Nr 41903 KI. 30 h, 2/04 Jeleniogórskie Zaklady Farmaceutyczne Przedsiebiorstwo Panstwowe *) Jelenia Góra. Polska Sposób otrzymywania czynnika wewnetrznego (intrinsic factor) Patent trwa od dnia 11 lutego 1957 r.Wiadomo, ze w anemii pierwoitnej zoladek nie wydziela czynnika wewnetrznego (initrinsic fac¬ tor), niezbednie potrzebnego do asymilowania dostarczanej w pokarmach Witaminy B12. Wia¬ domo równiez, ze czynnik wewnetrzny, wy¬ odrebniony z zoladków zwierzecych najkorzyst¬ niej ze swinskich i stosowany doustnie w przy¬ padku anemii pierwotnej przeciwdziala wyda¬ laniu sie z organizmu Witaminy Bi2.Znane sposoby otrzymywania czynnika we¬ wnetrznego polegaja na mieleniu zoladków zwierzecych, suszeniu ich pod zmniejszonym cisnieniem w temperaturze okolo 30°C i nastep¬ nym wyodrebnieniu czynnika wewnetrznego za pomoca organicznych rozpuszczalników np. ace¬ tonu, wysokoprocentowego alkoholu itp. Wada *) Wlasciciel patentu oswiadczyl, ze wspól¬ twórcami wynalazku sa inz. Adolf Mankow¬ ski, dr Fritz Wadehn, Franciszek Krzyzanow¬ ski i Bronislawa Swieton, tych sposobów jest to, ze wymagaja stasowania zarówno podwyzszonej temperatury, jak i roz¬ puszczalników organicznych, które wplywaja ujemnie na czynnik wewnetrzny.Sposób wedlug Wynalazku umozliwia wyizo¬ lowanie czynnika wewnetrznego w temperaturze nlie wyzszej od pokojowej i bez stosowania or¬ ganicznych rozpuszczalników. W sposobie tym mielone swieze lub uprzednio mrozone zolad¬ ki zwierzece ewentualnie wraz z czesciami je¬ lit, graniczacych z zoladkiem trawi s?ie w tem¬ peraturze pokojowej dkolo 2%-owym roztwo¬ rem chlorku sodowego. Nastepnie calosc mie¬ sza sie lub wytrzasa a otrzymany roztwór 0o oddzieleniu od nierozpuszczonych pozostalosci Oczyszcza dalej za pomoca 10%-ego kwasu sol^ nego. Z roztworu zakwaszonego kwasem sol¬ nym do pH = 3 wytracaja sie zanieczyszcze¬ nia, które odsacza sie. Z koled przez wprowa- dzemie 10°/o-Wego wodorotlenku sodowego usta¬ la sie pH roztworu w gffairiicach 5—3 i wytracaczynnik wewnetrzny (intrinsic factor) za pom/o- * ca iHcnstaJicznego eiarczanu amonowego lub so- dfowego. Oczyszczanie ro^Jworu za pomoca kwa¬ su solnego^ mozW przeprowadzie dwukrotnie z tym, ze najpierw usuwa sie zanieczyszczenia * | roztworu o pH = 3, a nastepnie roztwór al- .. „ Jcalizuje sie 10°/o-owym wodorotlenkiem sodo¬ wym do pH =¦ 9 i znowu zakwasza kwasem solnym do pH = 1,6. Wytracone zanieczyszcze¬ nia odsacza sie a z roztworu doprowadzonego nastepnie do pH ¦¦= 5 — 6 wytraca czynnik we¬ wnetrzny, sposobem wyzej opisanym.Wytracony czynnik wewnetrzny razem z roz¬ tworem pozostawia sie przez kilkanascie godzin w lodówce, po czym dopiero odwirowuje sie go, prasuje i suszy w temperaturze pokojowej.Odmiana sposobu wedlug wynalazku zoladki trawi sie woda destylowana, zakwaszona kwa¬ sem solnym do pH = 2 — 4. W tym przy¬ padku oczyszczanie roztworu najkorzystniej przeprowadza sie za pomoca 15%-wego roztwo¬ ru siarczanu amoniowego lub sodowego. Po od¬ dzieleniu zanieczyszczen i nastepnym nastawie¬ niu roztworu wodorotlenkiem sodowym do pH = 5, wytraca sie czynnik wewnetrzny kry¬ stalicznym siarczanem amonowym lub sodowym.Sposobem wedlug wynalazku mozna rów¬ niez przerabiac suche i sproszkowane zoladki zwierzece pod warunkiem jednak, ze suszenie ich przeprowadzono w temperaturze pokojowej.Otrzymany wedlug wynalazku czynnik we¬ wnetrzny (intrinsic factor) jest nieuszkodzony i stanowi wysokoaktywny preparat do stosowa¬ nia doustnego.Przyklad I. 2 kg swiezych lub uprzed¬ nio mrozonych zoladków swinskich miele sie dwukrotnie i zadaje trzema litrami 2°/owego roztworu chlorku sodowego. Mieszanine miesza sie lub wytrzasa w temperaturze pokojowej przez dwie godziny. Po oddzieleniu roztworu pozostalosc wytrawia sie powtórnie przy uzy¬ ciu 1V2 litra 2%-wego roztworu chlorku so¬ dowego. Zlaczone roztwory z obu trawien na¬ stawia sie za pomoca 10°/o-wego kwasu solnego na pH = 3 i powstaly osad usuwa sie. Z kolei roztwór doprowadza sie 10%-wym wodorotlen¬ kiem sodowym do pH = 6 i zadaje krystalicz¬ nym siarczanem amonowym tak dlugo, dopóki wydziela slie osad. Roztwór wraz z osadem po¬ zostawia sie przez kilkanascie godzin w lodów¬ ce, po czym osad odwirowuje sie, przenosi do worków, silnie prasuje a nastepnie rozdrabnia i suszy w temperaturze pokojowej.Przykladu. Roztwór nastawiony w przy¬ kladzie I do pH = 3, po oddzieleniu osadu, do¬ prowadza sie za pomoca 10%-wego wodorotlen¬ ku sodowego do pH = 9 i zadaje 10%-wym kwasem solnym, az do uzyskania pH = 1,6.Wytracony osad odrzuca sie, a pozostaly roz¬ twór nastawia 10°/o-wym wodorotlenkiem so¬ dowym do pH = 6. Dalej postepuje sie jak w przykladzie I.Przyklad III. 2 kg zoladków swinskich miele Sie dwukrotnie i zadaje trzema litrami wody destylowanej, zakwaszonej kwasem sol¬ nym do pH = 3. Calosc miesza sie przez dwii godziny. Po oddzieleniu nierozpuszczonych cze¬ sci, roztwór zadaje 15°/o-wym siarczanem amo¬ nowym. Powstaly osad oddziela sie i odrzuca, a roztwór doprowadza za pomoca wodorotlenku sodowego do pH -: 5. Nastepnie za pomoca krystalicznego siarczanu amonowego wytraca sie z roztworu czynnjk wewnetrzny i postepuje dalej jak w przykladzie I. PL