PL34858B1

PL34858B1 -

Info

Publication number: PL34858B1
Application number: PL34858A
Authority: PL
Filing date: 1951-06-01
Publication date: 1952-02-28

Description

Hydrolizaty bialkowe sa powszechnie stoso¬ wanym preparatem w przypadku niedoboru bial¬ kowego, a szczególnie po operacjach «w przypad¬ kach niemoznosci podania bialka doustnie. Za¬ potrzebowanie na hydrolizaty wynosi okolo 300 1 na 10 lózek chirurgicznych rocznie.Glównym celem podawania tych preparatów jest odzywianie organizmu chorego. Odpowied¬ nio przygotowane hydrolizaty sa doskonale przy¬ swajane przez organizm i wykorzystanie ich do¬ chodzi do 90%. Wartosc hydrolizatów zalezy od jakosciowego i ilosciowego skladu aminokwasów, przy czym niezbedna jest obecnosc aminokwa¬ sów egzogennych, a mianowicie: trypto£anu, tre- *). Wlasciciel patentu oswiadczyl, ze wyna¬ lazcami sa: Irena Chmielewska, Konstancja Ra- czynska-Bojanowska, Bronislawa Jurecka w Warszawie i Jerzy Manicki w Jablonnie. oniny, metioniny, histydyny, fenyloalaniny, wa- liny, leucyny, izoleucyny, argininy i lizyny. Waz¬ na jest równiez jednoczesna obecnosc w hydro¬ lizacie aminokwasów endogennych, gdyz moga byc one wytwarzane przez ustrój) ze zbyt mala szybkoscia.Hydrolizaty zawieraja 50i—86% wolnych ami¬ nokwasów. Pozostale aminokwasy zwiazane sa w niskoezlonowych peptydach i moga byc bez¬ posrednio zuzywane do syntezy bialka przy nie¬ wielkim udziale systemu enzymatycznego.Hydrolizaty bialkowe stosowane byc moga do¬ ustnie lub droga pozajelitowa. Wartosc prepa¬ ratu doustnego zalezy jednak wylacznie od ro¬ dzaju bialka i stopnia jego hydrolizy, podczas gdy preparat .pozajelitowy powinien posiadac szereg wlasciwosci pozwalajacych na wprowa¬ dzenie go bezposrednio do krwiobiegu bez szko¬ dy dla organizmu: , . a) powinien byc absolutnie jalowy, {' •b) nie moze zawierac cial pyrogennych, sub¬ stancji podwyzszajacych cisnienie krwi i sub-; stancji alergicznych, c) nie moze zawierac znacznych ilosci chlor¬ ku sodu ze wzgledu na ujemny wplyw soli na nerki, d) nier korzystna jest obecnosc znacznych ilo¬ sci aminokwasów dwuzasadowych, które po po¬ daniu dozylnym wywoluj a. wymioty, e) stezenie jonów wodorowych w hydroliza¬ cie powinno byc zblizone do pH krwi. Przy pil nizszym od 6,5 obnizona zostaje zdolnosc wiaza¬ nia CO2 i naruszona zostaje rezerwa zasadowa krwi.Hydrolizaty bialkowe otrzymuje sie z bialek o duzej wartosci biologicznej, a wiec z kazeiny, krwi a miesni.Preparaty otrzymywane z kazeiny, posiada¬ ja szereg wad. Sklad ilosciowy hydrolizatu ka¬ zeiny mleka odbiega od pozadanego dla organiz¬ mu stosunku aminokwasów, bialko to bowiem zawiera niewystarczajaca ilosc lizyny i histydy- ny w stosunku do innych aminokwasów, po¬ nadto duze ilosci aminokwasów dwuzasadowych szkodliwie oddzialywajacych przy podawaniu dozylnym. Literatura dotyczaca preparatu kazei¬ nowego podkresla niebezpieczenstwo wprowa¬ dzenia do hydrolizatu cial pyrogennych, zawar¬ tych w surowcu. Niekorzystna tez jest koniecz¬ nosc stosowania przy tym bardzo znacznej daw¬ ki enzymu.Znane sposoby otrzymywania hydrolizatów bialkowych z krwi przy uzyciu kwasów lub za¬ sad albo tez przy uzyciu enzymów przez zastoso¬ wanie wstepnej fermentacji drozdzowej, odzna¬ czaja sie powaznymi wadami. Przeprowadzenie hydrolizy za jpomoca kwasów lub zasad powo¬ duje zniszczenie pewnych aminokwasów (trypto- fanu), ich racemizacje braz zwieksza zawartosc soli, co przy niektórych schorzeniach dyskwalifi¬ kuje preparat. Oczyszczanie bialka krwi przez fermentacje drozdzowa nie jest korzystne, ponie¬ waz zwieksza mozliwosc zakazenia wytwarzane¬ go preparatu, jak równiez ze wzgledu na konie¬ cznosc usuniecia z hydrolizatu drozdzy i produ¬ któw ich metabolizmu. Takze znane sposoby otrzymywania hydrolizatów o wysokim stezeniu Jonów wodorowych (pH — 4,5) sa niekorzystne, preparaty bowiem takie naruszaja silnie zasa¬ dowe rezerwy krwi.Powyzszych wad unika lsie przez zastosowa¬ nie sposobu wedlug wynalazku. W sposobie tym jako materialu wyjsciowego uzywa sie pelnej krwi bydlecej, stwierdzono* bowiem, ze pelna krew bydleca zawiera wszystkie aminokwasy egzogenne potrzebne dla ustroju ludzkiego, a ich ilosc bezwzgledna oraz wzajemny stosunek ilo¬ sciowy bardziej odpowiada wymaganiom orga¬ nizmu ludzkiego anizeli sklad innych bialek zwierzecych. Poza tym zhydrolizowane bialko krwinek pochodzenia hemowego w hydrolizacie pelnej krwi jest korzystne przy wyrównywaniu zaburzen anemicznych w organizmie. Waznym jest tez fakt, ze hydrolizaty bialek krwi sa lat¬ wiej przyswajane przez organizm niz peptydy innych bialek.Sposobem wedlug wynalazku skoagulowane bialko oczyszcza sie mechanicznie, po czym roz¬ ciencza sie je stosunkowo niewielka, w porów¬ naniu z dotychczas znanymi sposobami, iloscia wody. Rozcienczanie bialka duza iloscia wody (3 1 wody na litr krwi uzytej do otrzymania bialka) oraz nastepne zageszczanie jest zbedne.Otrzymana zawiesine poddaje sie hydrolizie za pomoca enzymów trzustki, np. za pomoca swie¬ zej trzustki aktywowanej, przy czym w celu wy¬ korzystania dzialania zarówno proteaz jakipe- ptydaz, enzymy dodaje sie w 2 — 3 porcjach przy róznej wartosci pH. Poniewaz swieza ^trzustka zawiera tluszcze i kwasy tluszczowe, które powinny byc usuniete, ekstrakcje tych skladników przeprowadza sie w celu uproszcze¬ nia postepowania przez zastosowanie przy hy¬ drolizie takich srodków bakteriostatycznych, które jednoczesnie sa rozpuszczalnikami tluszczy i kwasów tluszczowych. Po/ zakonczeniu hydro¬ lizy . roztwór oczyszcza sie chromatograficznie, przy czym stosuje sie wegiel aktywowany odpo¬ wiednio przygotowany. W celu unikniecia na¬ ruszenia zasadowych rezerw krwi hydrolizat do¬ prowadza sie do pH = 6,7 — 6,8.Preparat otrzymany sposobem wedlug wyna¬ lazku, jest przezroczysta ciecza bez zapachu, jas¬ no zóltej barwy, o slonawym smaku. Zawiera on wszystkie aminokwasy egzogenne w postaci wolnej, w ilosci odpowiadajacej 60 — 90% ich zawartosci w bialku niezhydrolizowanym. Przy podaniu dozylnym w ilosci 2 1 dziennie nie wy¬ woluje dreszczy, podwyzszenia temperatury itd.Zaleznie od ilosci wody, uzytej do zawieszenia skoagulowanego bialka, mozna uzyskac bez za¬ geszczenia preparaty zawierajace 5 — 10 g sub¬ stancji azotowych w 100 ml roztworu. Ilosc azo¬ tu aminowego wynosi 60 — 82%. Jako przyklad podano sklad aminokwasów hydrolizatu, zawie¬ rajacego w 100 ml cieczy, 5,1 g suchej masy, 0,13 g soli nieorganicznych (NaCl), 0,69 g azotu ogólnego (0,48 g azotu aminowego).Jak wynika z podanej nizej tabelki, otrzy¬ many hydrolizat jest pelnowartosciowym prepa¬ ratem bialkowym. — 2- —Aminokwas Fenyloalanina Histydyna Izoleucyna Leucuna Lizyna Metionina Trepnina Tryptofan AYalina Minimalne zapotrzebowa¬ nie dzienne w gramach wedlug Rose'a 1,10 — 0,70 1,10 0,80 1 1,10 0,50 t 0.25 0,80 pozadane zapotrzebowa¬ nie dzienne uj gramach wedlug Rose'a 2,2 2,2 1,4 2.2 1,6 2,2 1,0 0,5 1.6 ilosc dostarczana przez 21 hydrolizatu, podanego dozylnie w gramach 3,6 4,0 1,6 12,0 6,0 1,8 4,0 1,0 5,2 Przyklad. Krew pobrana przy uboju poddaje sie bezposredniemu odwlóknieniu przez mechaniczne trzepanie. Najpózniej w szesc go¬ dzin po odwlóknieniu przeprowadza sie koagu¬ lacje, doprowadzajac do naczyn z krwia prze¬ grzana pare wodna az do calkowitego zdenaturo- wania bialka. Skoagulowane bialko oczyszcza sie mechanicznie za pomoca wielokrotnego prze¬ mywania woda, po czym zawiesza sie je w ilo¬ sci wody, odpowiadajacej 1 — 1,5 objetosci uzy¬ tej krwi, i poddaje w ciagu 5 — 8 dni trawieniu w temperaturze 40 — 42^C za pomoca zaktywo- wanych w temperaturze 0 — 5°C w ciagu 24^— 72 godzin (autoaktywacja) enzymów trzustki. Do hydrolizowania bialka krwi uzywa sie trzustki w ilosci 3 — 5 g suchej masy na 1 1 zawiesiny.Zamiast trzustki mozna tez stosowac pankrea- tyne. Enzym dodaje sie w 2—3 porcjach, pierw¬ szego, ewentualnie drugiego i trzeciego lub czwartego dnia trawienia, utrzymujac w - po¬ czatkowym okresie hydrolizy pH = 8 — 9 przez dodawanie odpowiedniej ilosci wodorotlenku so¬ du, ostatnia zas porcje enzymu dodaje sie przy pH = 6 — 7. Podczas hydrolizy nastepuje za¬ kwaszenie wlasne, wskutek czego odpada ko¬ niecznosc stosowania dodatkowej hydrolizy sla¬ bym kwasem.W celu unikniecia zakazenia preparatu w cza¬ sie jego otrzymywania oraz w celu usuniecia z niego substancji tluszczowych hydrolize pro¬ wadzi sie w obecnosci srodków bakteriostatycz- nych, lzejszych od wody i nie mieszajacych sie z nia a bedacych jednoczesnie rozpuszczalnikami tluszczów, np. w obecnosci toluenu.Po uplywie 5 — 8 dni enzym inaktywuje sie, roztwór oczyszcza chromatograficznie przy uzy¬ ciu wegla aktywowanego, zaktywowanego do¬ datkowo przez kilkakrotne wygotowanie z lekko zakwaszona woda i przemycie. Roztwór odbar¬ wia sie z ciemnego do jasno zóltego. Nastepnie doprowadza sie pH hydrolizatu dokladnie do wartosci 6,7 — 6,8, sterylizuje preparat, spraw¬ dza go na jalowosc i ewentualna obecnosc cial goraczkotwórczych.Sucha masa hydrolizatu zawiera wylacznie substancje azotowe organiczne {produkty hydro¬ lizy bialka) oraz chlorek sodu, przy czym ilosc NaCl jest utrzymana w„granicach ponizej jego zawartosci w krwi ludzkiej.^Preparat otrzymany sposobem wedlug wy¬ nalazku daje dobre wyniki przy stosowaniu w terapii ludzkiej. Sposób wytwarzania jak równiez potrzebna aparatura isa proste i tanie, PL

Claims

Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania hydrolizatu bialka do podawania pozajelitowego przez hydrolize skoagulowanego bialka krwi za pomoca enzy¬ mów, znamienny tym, ze skoagulowane bial¬ ko krwi oczyszcza sie mechanicznie, rozcien¬ cza woda, poddaje w ciagu 5 — 8 dni trawie¬ niu za pomoca enzymów trzustki, przy czym enzymy dodaje sie w 2 — 3 porcjach przy róznej wartosci pH a hydrolize prowadzi sie w obecnosci srodków bakteriostatycznych lzejszych od wody i nie mieszajacych sie z nia i bedacych jednoczesnie rozpuszczalni¬ kami substancji tluszczowych, po czym po zakonczeniu hydrolizy hydrolizat oczyszcza sie chromatograficznie za pomoca odpowied¬ nio przygotowanego wegla aktywowanego i doprowadza koncowa wartosc pH hydroliza¬ tu do .wartosci 6,7 — 6,8.
2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny, tym, ze jako mechaniczne oczyszczanie bialka skoa¬ gulowanego stosuje sie wielokrotne przemy¬ wanie woda.
3. Sposób wedlug zastrz. 1 — 2, znamienny tym, ze skoagulowane bialko rozciencza sie woda w ilosci równej 1 — 1,5 objetosci krwi, uzytej do otrzymania tego bialka.
4. Sposób wedlug zastrz. 1 — 3, znamienny tym, ze jako enzym stosuje sie trzustke swie¬ za, zaktywowana. *~ 3 —
5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze enzymy trzustki poddaje sie autoaktywacji w temperaturze 0 — 5°C w ciagu 24 — 72 godzin.
6. Sposób wedlug zastrz. 1 — 5, znamienny tym, ze przed dodaniem pierwszej porcji en¬ zymu doprowadza sie zawiesine do wartosci pH = 8 — 9, a ostatnia porcje enzymu doda¬ je sie przy wartosci pH = 6 — 7.
7. Sposób wedlug zastrz. 1 — 6, znamienny tym, ze jako srodek bakteriostatyczny i roz¬ puszczalnik substancji tluszczowych stosuje sie toluen.
8. Sposób wedlug zastrz, 1 — 7, znamienny tym, ze wegiel aktywowany, sluzacy do chro¬ matograficznego oczyszczania hydrolizatu, poddaje sie dodatkowej aktywacji przez kil¬ kakrotne wygotowanie z lekko zakwaszona woda i przemycie. Glówny Instytut Chemii Przemyslowej Zastepca: Kolegium Rzeczników Patentowych K f-.i ^ Druk. LSW. W-wa. Zam. 259c 2 dn. 29.111.62 r. 3-B-12714 PL