PL249129B1 - Urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta zawierające aktywator zwiększający poziom endogennego inhibitora szlaku Wnt - Google Patents

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest jednokomorowy system wykonany z poliwęglanu, zawierający w swoim wnętrzu aktywator obdarzony powierzchniowym ładunkiem statycznym. System ten pozwala na selektywną aktywację frakcji osocza, dzięki czemu jest ono wzbogacone o czynniki wzrostu i białka w tym białko DKK-1, będące inhibitorem szlaku Wnt.

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest jednokomorowe urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta, które zawiera aktywator zwiększający poziom endogennego inhibitora szlaku Wnt.

Obecnie obserwuje się rosnące zainteresowanie stosowaniem terapii autologicznych w medycynie. Spowodowało to potrzebę opracowania wyrobu autologicznego mającego na celu aktywację osocza bogatopłytkowego skutkującą uwolnieniem podwyższonej ilości czynników wzrostu, czemu często towarzyszy także wzrost ilości cytokin prozapalnych, wynikający z pełnej aktywacji kaskady krzepnięcia.

Rozwiązanie prezentowane w niniejszym zgłoszeniu wynalazku zakłada użycie jednokomorowego urządzenia do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta (w tym także, ale nie wyłącznie osocza bogatopłytkowego z krwi obwodowej) zawierającego aktywator. Wyizolowane frakcje zawierają dodatkowo skoncentrowaną ilość czynników wzrostu i białek charakterystycznych dla aktywacji elementów morfotycznych oraz białko DKK-1, będące inhibitorem szlaku Wnt, przy czym, w wyizolowanej frakcji, nie odnotowuje się wzrostu ilości czynników, w tym cytokin, prozapalnych.

Proces selektywnej aktywacji i izolacji pożądanej frakcji odbywa się w jednokomorowym systemie z dodatkiem aktywatora. Pozwala to na skrócenie czasu i uproszczenie procedury w porównaniu do każdego innego zestawu, co z kolei daje możliwość śródzabiegowego przygotowania frakcji płynu autologicznego z aktywnymi składnikami. Jest to o tyle istotne, że modulacja sygnalizacji Wnt przez białko DKK-1 stanowi obiecującą strategię profilaktyki i zahamowania progresji chorób.

Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie jednokomorowego urządzenia z aktywatorem, aby móc uzyskać wyizolowaną frakcję płynów autologicznych.

Przedmiotem wynalazku jest urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta, które

- posiada cylindryczny korpus wykonany z poliwęglanu, zwężający się ku górze tworząc szyjkę, na obwodzie której znajdują się cztery pierścienie, w dolnej części korpus posiada gwint,

- korek przystosowany jest do umieszczenia w środkowej części podstawy korka a następnie we wnętrzu korpusu, tak aby tworzyły jedną całość, natomiast gwint korpusu przystosowany jest do okrągłej nakrętki,

- górna część szyjki posiada zawieszoną zatyczkę do zamykania,

- urządzenie w korpusie zawiera aktywator wykonany z materiału naładowanego elektrostatycznie o kształcie kulistym lub owalnym, lub drobin, korzystnie ze szkła borokrzemowego o średnicy od 0,1 do 10 mm, który stanowi od 1 do 10% objętości korpusu urządzenia.

Korzystnie urządzenie charakteryzuje się tym, że pierścienie posiadają wcięcie.

Korzystnie urządzenie charakteryzuje się tym, że aktywator zaprojektowany jest w sposób umożliwiający zwiększenie zawartości inhibitora szlaku Wnt poprzez kontakt z aktywatorem trwający od 1 do 15 minut.

Określenia stosowane powyżej oraz w opisie i zastrzeżeniach patentowych, mają następujące znaczenie:

Szlak Wnt - szlak sygnalizacyjny utworzony z białek komórki odgrywających rolę w embriogenezie i karcynogenezie w prawidłowych komórkach dorosłych organizmów.

Urządzenie - jednokomorowy system do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta. Jednokomorowe urządzenie umożliwia szybkie i bezpieczne pozyskanie wysokiej jakości preparatów krwiopochodnych.

Urządzenie z aktywatorem - jednokomorowe urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta z aktywatorem.

Opis figur i tabel:

Fig. 1A przedstawia zarys urządzenia składającego się z komory (1), aktywatora (2) (urządzenie z aktywatorem) umieszczonego wewnątrz wymienionej komory, stożka/szyjki z pierścieniami stabilizującymi na zewnątrz komory oraz miejsca nakręcania zakrętki, a następnie śruby kontrolera, umożliwiającego przesunięcie płynu z komory.

Fig. 1B przedstawia korek w widok z boku (B1), podstawę korka w widok z boku (B3) i z góry (B4), zakrętkę korpusu urządzenia w widok z boku (B5) i z góry (B6) oraz zatyczkę szyjki urządzenia w widok z góry (B7), z obu boków (B8-9) oraz od dołu (B10) umożliwiającej procesowanie w systemie zamkniętym zapewniającym sterylność procedury.

Fig. 1B przedstawia widok z góry pierścieni stabilizujących z wcięciem i zamknięciem zatyczką.

PL 249129 BI

Fig. 2 przedstawia średnią koncentrację DKK-1 w osoczu bogatopłytkowym przygotowanym wg standardowej procedury stosowanej w tym celu w urządzeniu oraz procedury przygotowania będącej przedmiotem zastrzeżenia patentowego, uśrednione dla nie mniej niż 8 pacjentów (Słupki błędu SEM, test t-studenta, p*<0,05).

Tabela 1. Koncentracja czynników pro- i przeciwzapalnych we frakcji osocza wyizolowanego z urządzenia (TNF-α - czynnik martwicy nowotworów, BMP-2 - białka morfogenetyczne kości będące czynnikiem wzrostu należącym do nadrodziny białek TNF-β, VEGF - czynnik wzrostu śródbłonka naczyń, IGFBP-1 - białko łączące typu 1 insulinopodobnego czynnika wzrostu, IL-Ιβ - interleukina 1β, IL-4 - interleukina 4, IL-6 - interleukina 6, IL-8 - interleukina 8, IL-10 - interleukina 10; J - poziom poniżej wykrywalności testu) i po zastosowaniu procedury przygotowania z użyciem systemu z aktywatorem (urządzenie z aktywatorem).

Wynalazek ilustruje następujący przykład wykonania, niestanowiący jego ograniczenia.

Przykład 1

Krew obwodowa pacjentów została pobrana do strzykawki z antykoagulantem (cytrynian sodu w ilości 10% objętości zawiesiny docelowej). Ze strzykawki przeniesiono tak przygotowaną krew do urządzenia z aktywatorem, gdzie uległa zmieszaniu z aktywatorem. Po 10 minutach inkubacji, w trakcie której mieszano krew przez 1 min. w temperaturze pokojowej, krew w urządzeniu z aktywatorem została rozdzielona przez 5-minutowe wirowanie z przyśpieszeniem 1200 G na frakcję czerwonych krwinek, wzbogaconą frakcję osocza bogatopłytkowego i frakcję ubogopłytkowego osocza. Następnie przeniesiono poszczególne frakcje do strzykawek.

Jako kontrolę uzyskano osocze bogatopłytkowe za pomocą urządzenia.

W każdym przypadku oznaczono w osoczu bogatopłytkowym stężenie inhibitora DKK-1 zestawem ELISA umożliwiającym oznaczenie białka DKK-1 w osoczu oraz poziom wybranych cytokin i czynników wzrostu za pomocą multipleksowego panelu do oceny zawartości czynników wzrostu, cytokin oraz chemokin podczas jednej analizy.

Pokazano na fig. 2, że poziom DKK-1 w osoczu bogatopłytkowym uzyskanym w urządzeniu z aktywatorem był wyższy niż uzyskany w urządzeniu bez dodatku aktywatora. Nie odnotowano przy tym wzrostu zawartości cytokin prozapalnych ponad poziom wykrywalności, jak pokazano w Tabeli 1.

Tabela 1

	Czynniki
Prozapalne (pg/ml)	Przeciwzapalne (pg/ml)
~ΝΓalfa	BMP-?	Ι1-1β	.1 -6	VFGr	IGrBP-1	Ι·-4 -	11-8	tl-10
Xerthra™	<11.00j	43,06(4,10)	<18.911	<3.581	18,06(4,00)	15942(3604)	22,00(1,40)	4,52(0,30)	<15.851
System z aktywatorem	<11.001	37,15(3,80)	<18.911	<3.581	38,49(12,5)*	17087(3491)	23,23(1,61)	4,24(0,10)	<15.851

Preparat bogatopłytkowy uzyskany w urządzeniu z aktywatorem jest bezpieczny w sposób analogiczny do osocza uzyskiwanego w wielu innych wyrobach, jednak wzbogacony jest o DKK-1, inhibitor szlaku Wnt.

Aktywator:

- materiał naładowany elektrostatycznie, korzystnie szkło,

- szkło borokrzemowe,

- postać kulek lub owalnych drobin,

- średnica 0,1-10 mm,

- stanowi od 1 do 10 % objętości korpusu urządzenia.

Jak przedstawiono na Fig. 1A urządzenie wykonane z poliwęglanu ma kształt cylindryczny (okrągły korpus) zwężający się ku górze tworząc szyjkę, na której obwodzie ma cztery stabilizatory w postaci pierścieni z wycięciami (Fig. 1B - 2); w dolnej części korpus posiada gwint, na który nakłada się okrągłą nakrętkę. Elementami urządzenia są korek (Fig. 1B - 1), podstawa korka (Fig. 1B - 3, 4), oraz nakrętka (Fig. 1B - 5, 6). Korek wciska się na podstawę korka (środkowa część). Całość umieszcza się we wnętrzu korpusu, tworząc jedną całość. Następnie na gwint nakręca się okrągłą nakrętkę, tym samym zamyka się korpus urządzenia od dołu. Na końcu szyjki znajduje się zawieszona zatyczka z zamknięciem (Fig. 1B-7, 8, 9).

Całe jednokomorowe urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta z aktywatorem jest urządzeniem sterylnym.

Claims (3)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Urządzenie do izolacji i separacji frakcji płynów autologicznych pacjenta znamienne tym, że

   - posiada cylindryczny korpus wykonany z poliwęglanu, zwężający się ku górze tworząc szyjkę, na obwodzie której znajdują się cztery pierścienie, w dolnej części korpus posiada gwint,

   - korek przystosowany jest do umieszczenia w środkowej części podstawy korka a następnie we wnętrzu korpusu, tak aby tworzył jedną całość, natomiast gwint korpusu przystosowany jest do okrągłej nakrętki,

   - górna część szyjki posiada zawieszoną zatyczkę do zamykania,

   - urządzenie w korpusie zawiera aktywator wykonany z materiału naładowanego elektrostatycznie o kształcie kulistym lub owalnym, lub drobin, korzystnie ze szkła borokrzemowego o średnicy od 0,1 do 10 mm, który stanowi od 1 do 10% objętości korpusu urządzenia.
2. 2. Urządzenie według zastrz. 1, znamienne tym, że pierścienie posiadają wcięcie.
3. 3. Urządzenie według zastrz. 1, znamienne tym, że aktywator zaprojektowany jest w sposób umożliwiający zwiększenie zawartości inhibitora szlaku Wnt poprzez kontakt z aktywatorem trwający od 1 do 15 minut.