PL235023B1 - Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu - Google Patents
Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu Download PDFInfo
- Publication number
- PL235023B1 PL235023B1 PL420947A PL42094717A PL235023B1 PL 235023 B1 PL235023 B1 PL 235023B1 PL 420947 A PL420947 A PL 420947A PL 42094717 A PL42094717 A PL 42094717A PL 235023 B1 PL235023 B1 PL 235023B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- sequence
- dihydroxyandrost
- transformation
- strain
- days
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 241000894120 Trichoderma atroviride Species 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- NOEMICWEDLSYHV-SNZQGMLHSA-N (4R,5S,8S,9S,10S,13S,14S,17R)-4,8,10,14-tetramethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,4,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-tetradecahydrocyclopenta[a]phenanthrene Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@@]2(C)[C@H]1CC[C@H]1[C@@]3(C)CCC[C@@H](C)[C@@H]3CC[C@]21C NOEMICWEDLSYHV-SNZQGMLHSA-N 0.000 description 1
- JBHBQOUDJGGVNA-ZENYQMPMSA-N (8R,9S,10R,13S,14S)-10,13-dimethyl-1,2,6,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthrene-3,7,17-trione Chemical compound C[C@@]12C(CC[C@H]1[C@@H]1C(CC3=CC(CC[C@]3(C)[C@H]1CC2)=O)=O)=O JBHBQOUDJGGVNA-ZENYQMPMSA-N 0.000 description 1
- PJMNEPMSGCRSRC-IEVKOWOJSA-N 4-androstene-3,6,17-trione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=O)C2=C1 PJMNEPMSGCRSRC-IEVKOWOJSA-N 0.000 description 1
- OLPSAOWBSPXZEA-JIEICEMKSA-N 7alpha-hydroxydehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](O)C=C21 OLPSAOWBSPXZEA-JIEICEMKSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000187469 Mycobacterium neoaurum Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 description 1
- LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N androsta-1,4-diene-3,17-dione Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 LUJVUUWNAPIQQI-QAGGRKNESA-N 0.000 description 1
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 description 1
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N disulfuric acid Chemical class OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000009329 sexual behaviour Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 33,63-di-hydroksyandrost-4-en-17-onu.
Metoda, według wynalazku może znaleźć zastosowanie w przemyśle chemicznym i farmaceutycznym do wytwarzania leku stosowanego w terapii hormonalnej (A.S. Clark, E.V. Harrold, A.S. Fast; Anabolic - androgenic steroid effects on the sexual behavior of intact male rats. Horm Behav 31, 1997, 35-46).
33.63- Dihydroksyandrost-4-en-17-onu jest prekursorem disulfonianu 33,63-dihydroksycholestanu, związku o wysokiej aktywności hamującej wzrost komórek ludzkiego raka prostaty (Cui J., Wang H, Huang Y, Xin Y, Zhou A, (2009) Synthesis and cytotoxic analysis of some disodium 33,63-dihydroxysterol disulfates. Steroids 74 1057-1060).
Leki steroidowe są po antybiotykach drugą co do wielkości grupą leków, odgrywającą ważną rolę w leczeniu i zapobieganiu różnym chorobom (Zhang WQ, Shao ML, Rao ZM, Xu MJ, Zhang X, Yang TW, Li H, Xu ZH (2013) Bioconversion of 4-androstene-3,17-dione to androst-1,4-diene-3,17-dione recombinant Bacillus subtilis expressing ksdd gene encoding 3-ketosteroid-A1-dehydrogenase from Mycobacterium neoaurum JC-12. J Steroid Biochem Mol Biol 135:36-42).
Biotransformacje są ekologiczną alternatywą względem klasycznej syntezy chemicznej w uzyskiwaniu aktywnych związków i są coraz częściej stosowane w przemyśle biofarmaceutycznym, zwłaszcza do produkcji leków steroidowych (M.-M. Chen, F.-Q. Wang, L.-C. Lin, K. Yao, D.-Z. Wei; Characterization and application of fusidane antibiotic biosynethsis enzyme 3-ketosteroid-A1-dehydrogenase in steroid transformation. Appl Microbiol Biotechnol 96, 2012 133-142).
33.63- dihydroksyandrost-4-en-17-onu był identyfikowany w niewielkich ilościach (2,5%) podczas inkubacji 7a-DHEA w plazmie komórek nowotworowych raka piersi (Skinner S.J.M., Tobler C.J.P., Couch R.A.F. (1977) A radioimmunoassay for 7a-hydroxydehydroepiandrosterone in human plasma. Steroids 30 315-330). Był również identyfikowany w moczu koni suplementowanych androst-4-en-3,6, 17-trionem (G.N.W. Leung, F.P.W. Tang, T.S.M. Wan, C.H.F. Wong, K.K.H. Lam, B.D. Stewart. (2010) In vitro and in vivo studies of androst-4-ene-3,6,17-trione in horses by gas chromatography-mass spectrometry. Biomed. Chromatogr. 2010; 24: 744-751).
Nie są znane mikrobiologiczne metody uzyskiwania 33,63-dihydroksyandrost-4-en-17-onu z 33-hydroksyandrost-5-en-17-onu.
Istota wynalazku polega na tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Trichoderma atrovinde KCh TRW. Po upływie co najmniej 48 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 33-hydroksyandrost-5-en-17-on o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą. Transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu, co najmniej trzy dni. Kolejno produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie.
Korzystnie jest, gdy stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,2 g : 1 L.
Korzystnie także jest, gdy proces prowadzi się w temperaturze 25 stopni Celsjusza.
Dodatkowo, korzystnie jest, gdy transformację prowadzi się przez sześć dni.
Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach szczepu Trichoderma atroviride KCh TRW, następuje steroselektywna redukcja grupy karbonylowej przy trzecim atomie węgla (C-3), która jest poprzedzona, regio- i stereoselektywnym wprowadzeniem grupy hydroksylowej przy szóstym atomie węgla (C-6), a to z kolei jest poprzedzone utlenieniem grupy hydroksylowej przy trzecim atomie węgla i izomeryzacją wiązania podwójnego z 5-en do 4-en. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem, przez ekstrakcję rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą (chloroform).
Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 33,63-dihydroksyandrost-4-en-17-onu z wydajnością izolowaną na poziomie 23% (według GC > 31%), w temperaturze pokojowej i przy pH naturalnym dla szczepu.
Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.
Metoda izolowania szczepu Trichoderma atroviride KCh TRW.
Próbkę gleby pobranej w Parku Tołpy - Wrocław, dzielnica Ołbin przeniesiono do sterylnej gilzy. Następnie w warunkach aseptycznych 1 g gleby rozpuszczono w 10 ml sterylnej wody. Pobrano 1 cm3 supernatantu i wykonano posiewy z kolejnych rozcieńczeń. Kolejnymi rozcieńczeniami badanego materiału zaszczepiono płytki agarowe (sterylne plastikowe płytki z 20 ml pożywki stałej o składzie: glukoza 3%, aminobak 1%, agar 0,8%). Z jednego z rozcieńczeń wyodrębniono czystą kulturę szczepu Trichoderma
PL 235 023 B1 atroviride KCh TRW, który wykorzystano do biotransformacji. Wyodrębniony szczep przechowywany jest na skosach agarowych w temperaturze +4°C w kolekcji Katedry Chemii Uniwersytetu Przyrodniczego we Wrocławiu, ul. C.K. Norwida 25, 50-375 Wrocław. Szczep dostępny jest również w Katedrze Biotechnologii i Mikrobiologii Żywności, Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu, ul. J. Chełmońskiego 37, 51-630 Wrocław.
P r z y k ł a d. Do kolby Erlenmajera o pojemności 2000 cm3, w której znajduje się 500 cm3 sterylnej pożywki zawierającej 5 g aminobaku i 15 g glukozy, wprowadza się szczep Trichoderma atroviride KCh TRW o sekwencjach 1, 2, 3: KX538952 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 1, KX538954 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 2 oraz KX538956 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 3. Po 72 godzinach jego wzrostu dodaje się 100 mg 33-hydroksyandrost-5-en-17-onu o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm3 THF. T ransformację prowadzi się w 25 stopniach Celsjusza przy ciągłym wstrząsaniu przez 6 dni. Następnie mieszaninę poreakcyjną ekstrahuje się trzykrotnie chloroformem, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymany ekstrakt oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaniny heksanu i acetonu w stosunku objętościowym 3:2. 33,63-dihydroksyandrost-4-en-17-on znajduje się we frakcji o wyższej polarności.
Na tej drodze otrzymuje się 23,3 mg 33,63-dihydroksyandrost-4-en-17-onu (wydajność 23%, według GC > 31%).
Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:
1H NMR (600MHz) (ppm) (CDCI3) δ: 0.88 (1H, ddd, J = 12.5, 10.9, 4.2 Hz, 9-H); 0.92 (s, 3H, 18-H); 1.21 (s, 3H, 19-H); 1.21-1.31 (m, 4H, 1-Ha, 7-Ha, 12-Ha, 14-H); 1.47 (qd, 1H, J = 13.3, 3.9 Hz,
11- Κβ); 1.55-1.64 (m, 2H, 8-H, 15-Κβ); 1.71 (ddd, 1H, J = 13.8, 7.0, 4.1 Hz, 11-Ha); 1.75 (dm, 1H, J = 14.4 Hz, 2-Ha); 1.83 (ddd, 1H, J = 14.3, 4.5, 3.9 Hz, 2-Κβ); 1.85 (ddd, 1H, J = 13.2, 4.1, 2.9 Hz,
12- Κβ); 1.96 (ddd, 1H, J = 12.4, 8.2, 5.9 Hz, 15-Ha); 2.02-2.09, 2H, 1-Κβ, 7-Κβ); 2.09 (dt, 1H, J = 19.2, 9.5 Hz, 16-Ha); 2.46 (ddd, 1H, J = 18.5, 8 5, 0.8 Hz, 16-Κβ); 4.14 (td, 1H, J = 4.5, 2.0 Hz, 3-Ha); 4.29 (t, 1 H, J = 2.8 Hz, 6-Ha); 5.73 (dd, 1 H, J = 4.7, 1.2 Hz, 4-H).
13C NMR (151MHz) (ppm) (CDCI3) δ: 13,95 (C-18); 20,64 (C-11); 20,83 (C-19); 21,91 (C-15); 27,94 (C-2); 29,84 (C-1); 31,59 (C-12); 32,65 (C-8); 35,97 (C-16); 37,19 (C-10); 37,81 (C-7); 47,92 (C-13); 51,24 (C-14); 53,97 (C-9); 63,81 (C-3); 74,44 (C-6); 126,66 (C-4); 149,50 (C-5); 221,18 (C-17).
PL 235 023 Β1
TAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGA ACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCGGGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGC CGGAGGGACCAACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAAATT CAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCG ATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTC TGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGACCTC GGGAGCCCCTAAGACGGGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGT AGTTTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCTGAAATGTTGA CCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCA
Sekwencja 1
CGTTACACTTTTGCTTCTACACTTTCCCATTTGCGTCGTACCAATACACCCATCGGAAGAGATGGTAAGCTG GCGAAGCCTCGACAGCTCCACAACACACACTGGGGTTTGGTGTGCCCGGCTGAGACCCCTGAAGGTCAAG CTTGTGGTCTGGTCAAGAATrTGTCTCTCATGTGCTACGTCAGTGTTGGATCTCCTTCTGAGCCTTTGATCG AGTTTATGATCAACAGAGGTATGGAAGTCGTTGAGGAGTATGAGCCACTGAGGTATCCCCATGCTACAAA GATCTTTGTGAATGGTGTCTGGGTTGGAATCCACCAAGACCCCAAGCATCTGGTAAACCAAGTTnGGATA CTCGTCGCAAATCCTATCTGCAGTACGAGGTCTCTCTGATCAGAGAAATTCGAGACCAAGAATTCAAAATC TTCTCTGACGCCGGCCGTGTCATGCGTCCCGTCTTCACTGTACAGCAGGAAGATGACCCGGAAACGGGTA TCAACAAGGGCCACCTGGTTTTGACCAAGGACCTTGTCAATAGACTGGCCAAAGAGCAGGCTGAGCCTCC AGAAGACCCAAGCATGAAGCTCGGATGGGAAGGGCTGATTAGAGCTGGTGCGGTGGAATATCTCGACGC CGAGGAAGAAGAAACGTCCATGATTTGCATGACACCGGAGGATCTGGAGCTCTATCGTCTTCAAAAGGCC GGCATTGCCACGGATGAAGACATAGGAGACGATCCAAATAAGCGTCTCAAGACCAAGACAAATCCGACA ACTCACATGTATACGCATTGCGAGATTCACCCGAGTATGATCTTAGGTATCTGTGCTAGTATCATTCCTTTC CCCGATCACAACCAGGTATGTCAACCCGAGAAGCTATCCTTTTCCCCCTTTGTCCAACTTTTCAGTCCCCTAC GGTCAGATCGCTAATTGATGCTATACAGTCCCCCCGTAACACCTACCAGTCTGCCATGGGTAAACAAGCCA TGGGCTTCTTCCTAACCAACTATTCTCGGCGTATGGACACCATGGCCAATATCCTCTACTACCCTCAGAAAC CGCTGGGCACTACTCGTTCTATGGAGTTTTTGAAATTCCGTGAGCTGCCAGCCGGACAAAACGCC
Sekwencja 2
TGTCCGACAATTCTGTCCTCAGTCTTGTCATTmTTTCCTCGCAGCATCACACCCCGCmACCTGTCTACCC CTCCTTTGGCACAGCAAAATTTTCTGGCTGCCTTGCTTGGCTTTTAGTGGGGTGCCAACTTTnTTTGTTTGG CTGCAACCCCGCTATCGCCACTGTCCCGTCCCAACGAATTGTACTCAATTGCATCGTCTTCTCCATCTCTGTG TGGTTCATTGTGCTAATCATGCTTCAATCAATAGGAAGCCGCCGAGCTCGGCAAGGGTTCTTTCAAGTATG CGTGGGTTCTTGACAAGCTCAAGGCCGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGACAKGCCCTCTGGAAGn CGAGACTCCCAAGTACTATGTCACCGTCATTGGTATGTTTTCGCTTTTCCTCATTGATACTTGGAGACCAAG ATTCTAACGTGCCGCTCTGTAGACGCTCCCGGTCACCGTGATTTCATCAAGAACATGATCACTGGTACTTCC CAGGCTGACTGCGCTATCCTGATTATCGCTGCCGGTACTGGTGAGTTCGAGGCTGGTATCTCCAAGGATG GCCAGACCCGTGAGCACGCTCTGCTCGCCTACACCCTGGGTGTCAAGCAGCTCATCGTTGCCATCAACAAG ATGGACACTGCCAACTGGGCCGAGGCTCGTTACCTTGAGATCATCAAGGAGACCTCCAACTTCATCAAGA AGGTCGGCTTCAACCCCAAGACCGTTGCCTTCGTCCCCATCTCCGGCTTCAACGGCGACAACATGTTGGCT GCCTCCACCAACTGCCCCTGGTACAAGGGCTGGGAGAAGGAGACCAAGGCTGGCAAGTCCACCGGCAAG acccttctcgaggccattgacgccattgagccccccaagcgtcccacagacaagcccctccgtcttcccctt caggatgtttacaagatcggtggtattggaacagtccctgtcggccgtatcgagactggtatcctcaagc ccggtatggtcgkaccttcgctccctccaacgtcaccactgaagtcaagtccgkgagatgcaccacgag cagctcgtcgagggtgtccccggtgacaacgttggattcaacgtcaagaacgtctccgtcaaggatatcc gccgtggtaacgttgccggtgactccaagaacgacccccccatgggtgccgcttctttcaacgcccaggtc atcgtcatgaaccaccctggccaggtcggtgccggata
Sekwencja 3
Claims (4)
1. Sposób wytwarzania 33,63-dihydroksyandrost-4-en-17-onu, znamienny tym, że do podłoża odpowiedniego dla grzybów strzępkowych wprowadza się szczep Trichoderma atroviride KCh TRW o sekwencjach 1 2, 3: ΚΧ538952 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 1, ΚΧ538954 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 2 oraz ΚΧ538956 przedstawionej na rysunku jako sekwencja 3, następnie po upływie co najmniej 48 godzin do hodowli wprowadza się substrat, którym jest 33-hydroksyandrost-5-en-17-on o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, transformację prowadzi się w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciągłym wstrząsaniu, co najmniej 3 dni, po czym produkt ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą i oczyszcza chromatograficznie.
2. Sposób według zastrz. 1., znamienny tym, że stosunek masy dodawanego substratu do objętości hodowli wynosi 0,2 g : 1 L.
3. Sposób według zastrz. 1., znamienny tym, że proces prowadzi się w temperaturze 25 stopni Celsjusza.
4. Sposób według zastrz. 1., znamienny tym, że transformację prowadzi się przez 6 dni.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL420947A PL235023B1 (pl) | 2017-03-22 | 2017-03-22 | Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL420947A PL235023B1 (pl) | 2017-03-22 | 2017-03-22 | Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL420947A1 PL420947A1 (pl) | 2018-09-24 |
| PL235023B1 true PL235023B1 (pl) | 2020-05-18 |
Family
ID=63578703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL420947A PL235023B1 (pl) | 2017-03-22 | 2017-03-22 | Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL235023B1 (pl) |
-
2017
- 2017-03-22 PL PL420947A patent/PL235023B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL420947A1 (pl) | 2018-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3620528B1 (en) | Use of a mutant lacking the acyl-coenzyme a thiolase gene | |
| Kollerov et al. | Hydroxylation of lithocholic acid by selected actinobacteria and filamentous fungi | |
| JP2017537656A5 (pl) | ||
| PL235023B1 (pl) | Sposób wytwarzania 3β,6β-dihydroksyandrost-4-en-17-onu | |
| PL235022B1 (pl) | Sposób wytwarzania 6β-hydroksyandrost-4-en-3,17-dionu | |
| JP2010531660A (ja) | ９α−ヒドロキシ−ステロイドの合成方法 | |
| PL235287B1 (pl) | Sposób wytwarzania androst-1,4-dien-3,17-dionu | |
| PL237126B1 (pl) | Sposób wytwarzania 6α-hydroksyandrost-4-en-3,17-dionu | |
| CN104352505B (zh) | 原人参三醇及其衍生物在制备治疗肝病药物中的应用 | |
| PL235399B1 (pl) | Sposób wytwarzania 17a-oxa-D-homo-androst-4-en-3, 17-dionu | |
| PL235018B1 (pl) | Sposób wytwarzania 17a-oxa-D-homo-androst-4-en-3,17-dionu | |
| Atif et al. | Solid phase microbial fermentation of anabolic steroid, dihydrotestosterone with ascomycete fungus fusarium oxysporum | |
| PL238288B1 (pl) | Sposób wytwarzania 6β, 11α-dihydroksy-16α, 17α-epoksyprogesteronu | |
| PL235020B1 (pl) | Sposób wytwarzania 3β,7α,17α-trihydroksyandrost-5-enu | |
| PL237135B1 (pl) | 3β,17α-Dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan i sposób wytwarzania 3β,17α-dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostanu | |
| PL237134B1 (pl) | 3β,11α-dihydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan-17- on i sposób wytwarzania 3β,11α-dihydroksy-5α-chloro-6,19- oksidoandrostan-17-onu | |
| PL228763B1 (pl) | Sposób wytwarzania7α-hydroksyandrost-4-en-3,17-dionu | |
| Eshrat et al. | Biotransformation of progesterone by Penicillium aurantiogriseum | |
| PL237128B1 (pl) | Sposób wytwarzania 6β, 11α-dihydroksyprogesteronu | |
| PL228070B1 (pl) | Sposób wytwarzania octanu androst -1,4,6 -trien -3-on -17 -olu | |
| PL228764B1 (pl) | Sposób wytwarzania 6β-hydroksyandrost-4-en-3,11,17-trionu | |
| PL237709B1 (pl) | Sposób wytwarzania 3β-hydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan- 17-onu | |
| Vyas et al. | Tracking the efficiency of cholesterol bioconversion by Nocardia sp. MTCC 1534 in presence of some ring cleavage inhibitors by gas chromatography | |
| PL237710B1 (pl) | Sposób wytwarzania 3β-hydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan- 17-onu | |
| PL237711B1 (pl) | Sposób wytwarzania 3β-hydroksy-5α-chloro-6,19-oksidoandrostan- 17-onu |