PL222382B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowejInfo
- Publication number
- PL222382B1 PL222382B1 PL402666A PL40266613A PL222382B1 PL 222382 B1 PL222382 B1 PL 222382B1 PL 402666 A PL402666 A PL 402666A PL 40266613 A PL40266613 A PL 40266613A PL 222382 B1 PL222382 B1 PL 222382B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- bioremediation
- crude oil
- inoculum
- parts
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 title claims abstract description 19
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 title claims abstract description 19
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 15
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 title 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 29
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims abstract description 28
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 24
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003630 growth substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 6
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 12
- 241001673062 Achromobacter xylosoxidans Species 0.000 claims description 10
- 241000194106 Bacillus mycoides Species 0.000 claims description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 238000001994 activation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 3
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960003010 sodium sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 claims 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 claims 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 14
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 6
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 6
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 4
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 3
- 241001656677 Gordonia alkanivorans Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 3
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000985506 Penicillium meridianum Species 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 2
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588625 Acinetobacter sp. Species 0.000 description 1
- 241000122824 Aspergillus ochraceus Species 0.000 description 1
- 241001465318 Aspergillus terreus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007960 acetonitrile Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagających bioremediację środowisk zanieczyszczonych ciężką frakcją P31 ropy naftowej. W drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-150, polega na uaktywnieniu szczepu przechowywanego na stałym podłożu zawierającym brzeczkę piwowarską, agar oraz ciężką frakcję P31 ropy naftowej, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników solą fizjologiczną z dodatkiem środka powierzchniowo czynnego, zaszczepieniu otrzymanym inokulum ciekłego podłoża hodowlanego i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 29-31 °C w czasie 96-120 godzin na wytrząsarce, a potem odsączeniu otrzymanej biomasy, przemyciu jej wodą destylowaną, odwodnieniu acetonem, suszeniu i mechanicznym rozdrobieniu. Sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej ciężką frakcją P31 ropy naftowej polega na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w trakcie której, między 12-16 dniem bioremediacji, do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów. Sposób bioremediacji środowiska wodnego zanieczyszczonego ciężką frakcją P31 ropy naftowej polega na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w trakcie której, między 7-10 dniem bioremediacji, do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów.
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 222382 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 402666 (51) Int.Cl.
C12N 1/26 (2006.01) B09C 1/10 (2006.01) C02F 3/34 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 04·02·2013 C12P 39/00 (2006.01)
C12R 1/685 (2006.01)
Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska (54) zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej
| (73) Uprawniony z patentu: POLITECHNIKA ŁÓDZKA, Łódź, PL | |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: | (72) Twórca(y) wynalazku: |
| 18.08.2014 BUP 17/14 | ARKADIUSZ POLEWCZYK, Opoczno, PL OLGA MARCHUT-MIKOŁAJCZYK, Łódź, PL EWA KWAPISZ, Łódź, PL TADEUSZ ANTCZAK, Łódź, PL |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL |
| 29.07.2016 WUP 07/16 | KRZYSZTOF ŚMIGIELSKI, Łódź, PL (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Ewa Kaczur-Kaczyńska |
PL 222 382 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowisk zanieczyszczonych węglowodorami ciężkiej frakcji P31 ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją P31 ropy naftowej.
Z opisu patentowego PL 166006 jest znany sposób otrzymywania ciekłego kompleksu enz ymów celulolitycznych w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90. Szczep ten przechowywany na skosach agarowych w temperaturze 4°C przeszczepia się do sterylnego podłoża inokulacyjnego o pH = 4,8-5,4, zawierającego w procentach wagowych 0,5-1,3% KH2PO4, 0,2-0,4% (NH4)2SO4, 0,05-0,2% CO(NH2)2, 0,05% MgSO4 x 7 H2O oraz wyciągu z otrąb pszennych do 100%, a nadto 0,5-2% glukozy, a następnie hoduje w czasie 36-65 godzin w temperaturze 28-30°C na wstrząsarce, po czym otrzymane inokulum przeszczepia się na podłoże hodowlane o składzie w procentach wagowych 0,5-1,3% KH2PO4, 0,2-0,4% (NH4)2SO4, 0,05-0,2% CO(NH2)2, 0,05% MgSO4 x 7 H2O oraz do 100% wyciągu z otrąb pszennych, zawierające nadto 4,8-5,8% pyłu bawełnianego i 2-3% kiełków słodowych i poddaje hodowli powierzchniowej w temperaturze 28-30°C w czasie 8-14 dni.
Z opisu patentowego PL 209161 jest znany sposób otrzymywania kompleksu enzymów w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-90, polegający na tym, że ze szczepu przygotowuje się materiał posiewowy na podłożu stałym lub ciekłym i materiałem tym szczepi się ci ekłe podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 50-120 części kiełków słodowych, 20-80 części pektyny jabłkowej i ewentualnie wytłoków jabłkowych, ewentualnie 10-40 części pyłu bawełnianego, ewentualnie 10-50 części wysłodków buraczanych, 5-50 części celulozy mikrokrystalicznej lub otrąb pszennych i/lub odpadów przemysłu owocowo-warzywnego zawierających celulozę i pektynę oraz 1000 części wody wodociągowej zawierającej substancje mineralne i prowadzi hodowlę produkcyjną wgłębną w temperaturze 25-30°C w czasie 80-150 godzin w obecności emulsji silikonowej doprowadzając do fermentora powietrze i mieszając zawartość fermentora. Materiał posiewowy szczepu otrzymuje się w drodze uaktywnienia szczepu na podłożu stałym zawierającym brzeczkę słodową lub ekstrakt słodowy oraz agar, w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni lub na podłożu ciekłym zawierającym kiełki słodowe pektynę jabłkową i ewentualnie wytłoki jabłkowe, ewentualnie pył bawełniany, ewentualnie wysłodki buraczane, celulozę mikrokrystaliczną lub otręby pszenne i/lub odpady przemysłu owocowo-warzywnego zawierające celulozę i pektynę oraz wodę wodociągową zawierającą składniki mineralne i prowadząc hodowlę wgłębną w obecności emulsji silikonowej w temperaturze 25-30°C w czasie 24 godzin doprowadzając do fermentora powietrze i mieszając zawartość fermentora.
Natomiast z opisu patentowego PL 209163 znany jest sposób otrzymywania kompleksu enzymów w drodze hodowli szczepu grzyba Aspergillus niger IBT-90 na podłożu produkcyjnym zawierającym wysłodki buraczane, otręby pszenne, kiełki słodowe, pektynę jabłkową, ewentualnie skórki z p omidorów oraz wodę wodociągową zawierającą składniki mineralne, w temperaturze pokojowej w czasie 1-8 dni. Szczep grzyba uaktywnia się na podłożu stałym zawierającym brzeczkę słodową lub ek strakt słodowy oraz agar w temperaturze 10-40°C w czasie 3-8 dni.
Z opisu zgłoszenia patentowego P. 398611 jest znana hodowla szczepu grzyba Aspergillus niger IBT-90 na podłożu produkcyjnym stałym zawierającym wysłodki buraczane, otręby pszenne, kiełki słodowe, ewentualnie skórki z pomidorów lub odpady cytrusowe, ewentualnie pektynę jabłkową, a nadto wodę wodociągową zawierającą rozpuszczone składniki mineralne, jak diwodorofosforan (V) potasu, siarczan (VI) magnezu, chlorek wapnia, siarczan (VI) żelaza (II), siarczan (VI) kobaltu, siarczan (VI) manganu, siarczan (VI) cynku, siarczan (VI) miedzi oraz mocznik, prowadzonej w temperaturze 28°C w czasie 120 godzin w obecności emulsji silikonowej przy doprowadzaniu do fermentora sterylnego powietrze.
Znane jest wykorzystanie szczepów bakterii do bioremediacji środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ropopochodnymi.
I tak w czasopiśmie Journal of Hazardous Materials 2010 r., t. 176, s. 27-34 opisano wykorzystanie szczepów bakterii Acinetobacter sp. i Pseudomonas oraz konsorcjum szczepów Gordonia alkanivorans i Rhodococcus erythropolis do biodegradacji ogólnej puli węglowodorów ropy naftowej.
W opisie patentowym PL 206565 ujawniono sposób otrzymywania biopreparatu do degradacji węglowodorów cięższych frakcji ropy naftowej, polegający na wyselekcjonowaniu ze środowiska sk ażonego szczepów bakterii Gordonia alkanivorans S7, Pseudomonas fluorescens SI-3 i Bacillus substiPL 222 382 B1 lis P-31.2, które namnaża się w formie mieszaniny na pożywce zawierającej glukozę lub sacharozę, azotan lub siarczan amonu, wodorofosforan sodu, substancje wzrostowe oraz dodatek węglowodorów cięższych frakcji ropy naftowej, w warunkach tlenowych.
Natomiast w opisie patentowym PL 206566 ujawniono sposób otrzymywania biopreparatu do degradacji węglowodorów oleju napędowego, polegający na wyselekcjonowaniu ze środowiska skażonego szczepów bakterii Gordonia alkanivorans S7, Micrococcus luteus A.32.1 i Pseudomonas circulans Bp i namnożeniu tych szczepów na pożywce w warunkach tlenowych.
W czasopiśmie Bioresource Technology 2003 r., t. 87, s. 81-86 opisano wykorzystanie Aspergillus niger ATCC 9642 do degradacji hexdekanu w procesie solid state.
Z czasopisma Marine Pollution Bulletin 2007 r., t. 54, s. 1692-1696 jest znane wykorzystanie Aspergillus niger, Aspergillus ochraceus i Penicillium chrysogenum do degradacji n-alkanów z piasków otrzymanych z plaż Al-Qurum, Al-Hail, Al-Sawadi.
W czasopiśmie International Biodeterioration & Biodegradation 2011 r., t. 65, s. 649-655 ujawniono wykorzystanie Penicillium chermesinum, Penicillium indicum i Aspergillus terreus w oczyszczaniu gleby pobranej z pola bioremediacyjnego.
W procesach bioremediacji gleby jak również środowiska płynnego zanieczyszczonego substancjami ropopochodnymi fundamentalnym problemem jest rozkład trudno degradowalnych zwią zków. Transformacji tych zanieczyszczeń w związki łatwiej przyswajalne przez mikroorganizmy może sprzyjać obecność niektórych enzymów z klasy oksydoreduktaz, na przykład lakkazy i peroksydazy oraz enzymów z klasy hydrolaz.
Znane są sposoby wspomagania procesów bioremediacji środowisk zanieczyszczonych substancjami ropopochodnymi za pomocą enzymów otrzymanych w hodowli grzybów nitkowatych.
W zgłoszeniu patentowym P-399980 opisano wykorzystanie preparatu enzymów Mucor circinelloides UD254 do wspomagania bioremediacji gruntów zanieczyszczonych olejem napędowym, za pomocą pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o zdolności degradacji węglowodorów.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się szczep grzyba nitkowatego Aspergillus niger oznaczony symbolem IBT-150 wyizolowany ze środowiska naturalnego oraz szczepy bakterii Achromobacter xylosoxidans oznaczony symbolem G21 i Bacillus mycoides oznaczony symbolem NS1020.
Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagających bioremediację środowisk zanieczyszczonych ciężką frakcją P31 ropy naftowej, w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger, polegający na uaktywnieniu szczepu przechowywanego na stałym podłożu zawierającym brzeczkę piwowarską o stężeniu 6-10° Blg w ilości 1000 części wagowych, agar w ilości 3% wagowych, w temperaturze 29-31°C w czasie 48 godzin, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników solą fizjologiczną z dodatkiem środka powierzchniowo czynnego o stężeniu 80% dodanego w ilości 4-6% v/v, zaszczepieniu otrzymanym inokulum, użytym w ilości 2% v/v, wysterylizowanego ciekłego podłoża hodowlanego i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 29-31°C na wytrząsarce przy szybkości 200 obrotów/min, a następnie odsączeniu otrzymanej biomasy, przemyciu jej wodą destylowaną, odwodnieniu acetonem, suszeniu w temperaturze 25°C i mechanicznym rozdrobieniu do wielkości drobin 5-10 μm, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-150, który uaktywnia się na podłożu stałym zawierającym dodatkowo ciężką frakcję P31 ropy naftowej w ilości 0,001% w/w, o pH 7, przy czym proces uaktywniania prowadzi się co najmniej 3-krotnie, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu hodowlanym zawierającym ekstrakt z otrębów pszennych, chlorek wapnia, siarczan żelaza, siarczan manganu, siarczan cynku, siarczan magnezu, siarczan sodu, chlorek kobaltu, diwodorofosforan potasu, o pH 4,5 w czasie 96-120 godzin.
Sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej ciężką frakcją P31 ropy naftowej, polegający na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów, jak Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w temperaturze 25-30°C w czasie 35-60 dni przy wilgotności 25-40%, w trakcie której do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów i po wprowadzeniu tego preparatu kontynuuje się proces bioremediacji, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się preparat enzymów Aspergillus niger IBT-150 otrzymany opisanym wyżej sposobem, który wprowadza się
PL 222 382 B1 w okresie między 12-16 dniem bioremediacji stosując 1-2 g preparatu na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanej glebie.
Natomiast sposób bioremediacji środowiska wodnego zanieczyszczonego ciężką frakcją P31 ropy naftowej, polegający na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów, jak Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w temperaturze 25-30°C w czasie 14 dni, w trakcie której do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów i po wprowadzeniu tego preparatu kontynuuje się proces bioremediacji według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się preparat enzymów Aspergillus niger IBT-150 otrzymany opisanym wyżej sposobem, który wprowadza się w okresie między 7-10 dniem bioremediacji stosując 1-2 g preparatu na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanym środowisku.
Przedmiot wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I.
Szczep pleśni Aspergillus niger IBT-150 wyodrębniony ze środowiska naturalnego przeszczepiono na aktywujące podłoże stałe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 0,001 część ciężkiej frakcji P31 ropy naftowej, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 10° Blg, o pH 7 i prowadzono hodowlę uaktywniającą na tym podłożu w temperaturze 29°C w czasie 48 godzin, po czym przeszczepiano na podłoże hodowlane o analogicznym składzie i prowadzono kolejną hodowlę uaktywniającą. Procedurę kolejnych hodowli uaktywniających powtarzano 3-krotnie. Kolonie wyrosłe po 3-ej hodowli zalano 10 ml soli fizjologicznej z dodatkiem Tween'u o stężeniu 80% w ilości 4% v/v, zmyto grzybnię z powierzchni skosu ezą, po czym otrzymaną zawiesiną, użytą w ilości 2% v/v szczepiono aktywujące podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 50 części otrąb pszennych, 10 części KH2PO4, 13 części NaNO3, 0,3 części MgSO4 x 7 H2O, 15 części CaCl2, 0,05 części FeSO4 x 7 H2O, 0,00156 części MnSO4 x H2O, 0,0014 części ZnSO4 x 7 H2O, 0,00336 części CoCI2 x 6 H2O, 1000 części woda wodociągowa, o pH skorygowanym do wartości 4,5. Prowadzono hodowlę wstrząsaną przez 120 godzin w temperaturze 29°C na wytrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szybkości 200 min- . Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsą3 czeniu na lejku Buchnera 3-krotnie odwadniano acetonem stosując 15 cm acetonu o temperaturze 4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C i rozdrobiono w młynie udarowym do wielkości ziaren 5-10 pm. Jednocześnie przygotowano inokulum szczepu Achromobacter xylosoxidans G21 w drodze hodowli wstrząsanej na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 20 części ek straktu drożdżowego, 15 części Na2HPO4, 25 części NH4CI, 1000 części wody wodociągowej, o pH 6,5 3 w czasie 48 godzin. Do kuwety o objętości 1000 cm , zawierającej 0,50 kg gleby skażonej frakcją P-31 3 w ilości 4% w/w dodawano 48-godzinne kultury bakterii z hodowli płynnej w ilości 40 cm na 1 kg gleby, mieszając próby co 2 dni. Po upływie 12 dni do kuwety dodano stały preparat enzymatyczny Aspergillus niger IBT-150 w proporcji 1 g na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanej glebie. Bioremediację prowadzono przez okres 60 dni, utrzymując wilgotność gleby na poziomie 25%. Stwierdzono 55%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 15% większy niż w przypadku bioremediacji prób gleby prowadzonej wyłącznie z udziałem bakterii, bez dodatku stałego preparatu enzymatycznego z Aspergillus niger IBT-150.
P r z y k ł a d II.
Procedurę aktywowania szczepu pleśni Aspergillus niger IBT-150 wyodrębnionego ze środowiska naturalnego prowadzono jak w przykładzie I. Wyrosłe kolonie zalano 10 ml soli fizjologicznej z dodatkiem 4% v/v Tween'u o stężeniu 80% i zmyto grzybnię z powierzchni skosu ezą. 2% v/v otrzymanej zawiesiny szczepiono aktywujące podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 40 części otrąb pszennych, 10 części KH2PO4, 13 części NaNO3, 0,3 części MgSO4 x 7 H2O, 15 części CaCl2, 0,05 części FeSO4 x 7 H2O, 0,00156 części MnSO4 x H2O, 0,0014 części ZnSO4 x 7 H2O, 0,00336 części CoCI2 x 6 H2O, 1000 części wody wodociągowej, którego pH skorygowano do wartości 4,5 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przez godzin w temperaturze 31°C na wytrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szyb-1 kości 200 min- . Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsączeniu na lejku Buchnera, 3-krotnie
PL 222 382 B1 odwadniano acetonem stosując 15 cm acetonu o temperaturze 4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C i rozdrobiono w młynie udarowym do wielkości ziaren 5-10 gm. Jednocześnie przygotowano inokulum konsorcjum szczepów Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020 w drodze hodowli wstrząsanej na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C i w czasie 20 minut, podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 20 części ekstraktu drożdżowego, 15 części Na2HPO4, 25 części NH4CI, 1000 części wody wodociągowej, o pH 6,5 w czasie 48 godzin. Do kuwety o objętości 1000 cm , zawierającej 0,50 kg gleby skażonej frakcją P-31 w ilości 4% w/w, dodano 48-godzinne kultury bakterii z hodowli płynnej stosując 3 cm na 1 kg gleby, mieszając próby co 2 dni. Po upływie 16 dni do kuwety dodawano stały preparat enzymatyczny Aspergillus niger IBT-150 w proporcji 2 g na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanej glebie. Bioremediację prowadzono przez 35 dni, utrzymując wilgotność gleby na poziomie 40%. Po okresie bioremediacji stwierdzono 60%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 20 % większy niż w przypadku bioremediacji prób gleby prowadzonej wyłącznie z udziałem bakterii, bez dodatku preparatu enzymatycznego z Aspergillus niger IBT-150.
P r z y k ł a d III.
Szczep pleśni Aspergillus niger IBT-150 wyodrębniony ze środowiska naturalnego uaktywniano na podłożu stałym jak w przykładzie I. Wyrosłe kolonie zalano 10 ml soli fizjologicznej z dodatkiem 6% v/v Tween'u o stężeniu 80% i zmyto grzybnię z powierzchni skosu ezą. Otrzymaną zawiesiną, użytą w ilości 2% v/v, szczepiono podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 50 części otrąb pszennych, 10 części KH2PO4, 13 części NaNO3, 0,3 części MgSO4 x 7 H2O, 15 części CaCl2, 0,05 części FeSO4 x 7 H2O, 0,00156 części MnSO4 x H2O, 0,0014 części ZnSO4 x 7 H2O, 0,00336 części CoCI2 x 6 H2O, 1000 części wody wodociągowej, którego pH korygowano do wartości 4,5 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przez 120 godzin w temperaturze 31°C na wytrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szybkości 200 obrotów /min. Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsączeniu na lejku Buchnera, 3-krotnie odwadniano 3 acetonem stosując 15 cm3 acetonu o temperaturze 4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C i rozdrobiono w młynie udarowym do wielkości ziaren 5-10 gm. Jednocześnie przygotowano inokulum szczepu Bacillus mycoides NS1020 w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym, w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 20 części ekstraktu drożdżowego, 15 części Na2HPO4, 25 części NH4CI, 1000 części wody wodociągowej, o pH 6,5 w czasie 48 godzin. Do kolby o pojemności 1 l zawierającej 100 ml wody wodociągowej dodano: 4 g ciężkiej frakcji P31 ropy naftowej, 2 g glukozy, 2 g ekstraktu drożdżowego, 1,5 g Na2HPO4, 2,5 g NH4CI i sterylizowano w temperaturze 121°C przez 20 minut, po czym szczepiono Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020. Hodowlę prowadzono w temperaturze 25°C na wstrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szybkości obrotów 200 min- . Po 7 dniach dodano stały preparat Aspergillus niger IBT-150 w proporcji 1 g na 1 kg związków ropopochodnych. Po 14 dniach prowadzenia procesu stwierdzono 80%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 10% większy niż w przypadku prowadzenia próby bioremediacji wyłącznie z udziałem bakterii, bez dodatku preparatu enzymatycznego z Aspergillus niger IBT-150.
P r z y k ł a d IV.
Szczep pleśni Aspergillus niger IBT-150 wyodrębniony ze środowiska naturalnego aktywowano na podłożu stałym jak w przykładzie I. Wyrosłe kolonie zalano 10 ml soli fizjologicznej z dodatkiem 6% v/v Tween'u o stężeniu 80% i zmyto grzybnię z powierzchni skosu ezą. Otrzymaną zawiesiną, użytą w ilości 2% v/v szczepiono podłoże ciekłe, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, o składzie w częściach wagowych: 40 części otrąb pszennych, 10 części KH2PO4, 13 części NaNO3,
0,3 części MgSO4 x 7 H2O, 15 części CaCl2, 0,05 części FeSO4 x 7 H2O, 0,00156 części MnSO4 x
H2O, 0,0014 części ZnSO4 x 7 H2O, 0,00336 części CoCI2 x 6 H2O, 1000 części wody wodociągowej, którego pH korygowano do wartości 4,5. Hodowlę wstrząsaną prowadzono przez 90 godzin w tempe-1 raturze 30°C na wytrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szybkości 200 min- .
Uzyskaną w wyniku hodowli biomasę, po odsączeniu na lejku Buchnera, 3-krotnie odwadniano aceto3 nem stosując 15 cm acetonu o temperaturze 4°C na 1 g odsączonej biomasy, suszono 18 godzin w temperaturze 20°C i rozdrobiono w młynie udarowym do wielkości ziaren 5-10 gm. Jednocześnie przygotowano inokulum konsorcjum szczepów Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020 w drodze hodowli wstrząsanej na, wysterylizowanym w temperaturze 121 °C w czasie 20 minut, podłożu płynnym o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 20 części ekstraktu
PL 222 382 B1 drożdżowego, 15 części Na2HPO4, 25 części NH4CI, 1000 części wody wodociągowej, o pH 6,5 w czasie 48 godzin. Do kolby o pojemności 1 l zawierającej 100 ml wody wodociągowej dodawano: 4 g ciężkiej frakcji P31 ropy naftowej, 2 g glukozy, 2 g ekstraktu drożdżowego, 1,5 g Na2HPO4, 2,5 g NH4CI i sterylizowano w temperaturze 121°C przez 20 minut, po czym szczepiono Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020. Hodowlę prowadzono w temperaturze 30°C na wstrząsarce mimośrodowej o amplitudzie drgań 4,5 cm przy szybkości obrotów 200 obrotów/min. Po 10 dniach dodano stały preparat Aspergillus niger IBT-150 w proporcji 2 g na 1 kg związków ropopochodnych. Po 14 dniach prowadzenia procesu stwierdzono 90%-owy ubytek ogólnej puli węglowodorów tj. o 20% większy niż w przypadku prowadzenia prób bioremediacji wyłącznie z udziałem bakterii, bez dodatku preparatu enzymatycznego z Aspergillus niger IBT-150.
Claims (3)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagających bioremediację środowisk zanieczyszczonych ciężką frakcją P31 ropy naftowej, w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Aspergillus niger, polegający na uaktywnieniu szczepu przechowywanego na stałym podłożu zawierającym brzeczkę piwowarską o stężeniu 6-10° Blg w ilości 1000 części wagowych, agar w ilości 3% wagowych, w temperaturze 29-31°C w czasie 48 godzin, następnie zmyciu wyhodowanych zarodników solą fizjologiczną z dodatkiem środka powierzchniowo czynnego o stężeniu 80% dodanego w ilości 4-6% v/v, zaszczepieniu otrzymanym inokulum, użytym w ilości 2% v/v, wysterylizowanego ciekłego podłoża hodowlanego i prowadzeniu hodowli produkcyjnej w temperaturze 29-31°C na wytrząsarce przy szybkości 200 obrotów/min, a następnie odsączeniu otrzymanej biomasy, przemyciu jej wodą destylowaną, odwodnieniu acetonem, suszeniu w temperaturze 25°C i mechanicznym rozdrobieniu do wielkości drobin 5-10 μm, znamienny tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Aspergillus niger IBT-150, który uaktywnia się na podłożu stałym zawierającym dodatkowo ciężką frakcję P31 ropy naftowej w ilości 0,001% w/w, o pH 7, przy czym proces uaktywniania prowadzi się co najmniej 3-krotnie, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu hodowlanym zawierającym ekstrakt z otrębów pszennych, chlorek wapnia, siarczan żelaza, siarczan manganu, siarczan cynku, siarczan magnezu, siarczan sodu, chlorek kobaltu, diwodorofosforan potasu, o pH 4,5 w czasie 96-120 godzin.
- 2. Sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej ciężką frakcją P31 ropy naftowej, polegający na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów, jak Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w temperaturze 25-30°C w czasie 35-60 dni przy wilgotności 25-40%, w trakcie której do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów i po wprowadzeniu tego preparatu kontynuuje się proces bioremediacji, znamienny tym, że stosuje się preparat enzymów Aspergillus niger IBT-150 otrzymany sposobem opisanym w zastrzeżeniu 1, który wprowadza się w okresie między 12-16 dniem bioremediacji stosując 1-2 g preparatu na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanej glebie.
- 3. Sposób bioremediacji środowiska wodnego zanieczyszczonego ciężką frakcją P31 ropy naftowej, polegający na przygotowaniu inokulum pojedynczego szczepu lub konsorcjum szczepów bakterii o właściwościach degradacji węglowodorów, jak Achromobacter xylosoxidans G21 oraz Bacillus mycoides NS1020, w drodze hodowli wstrząsanej na wysterylizowanym podłożu płynnym zawierającym przyswajalne źródło węgla, azotu, fosforu oraz substancje wzrostowe, następnie wprowadzeniu namnożonego inokulum do oczyszczanej gleby i prowadzeniu hodowli w warunkach tlenowych, w temperaturze 25-30°C w czasie 14 dni, w trakcie której do oczyszczanego środowiska wprowadza się zawieszony w sterylnej wodzie preparat enzymów i po wprowadzeniu tego preparatu kontynuuje się proces bioremediacji, znamienny tym, że stosuje się preparat enzymów Aspergillus niger IBT-150 otrzymany sposobem opisanym w zastrzeżeniu 1, który wprowadza się w okresie między 7-10 dniem bioremediacji stosując 1-2 g preparatu na 1,5 kg substancji ropopochodnych zawartych w oczyszczanym środowisku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL402666A PL222382B1 (pl) | 2013-02-04 | 2013-02-04 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL402666A PL222382B1 (pl) | 2013-02-04 | 2013-02-04 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL402666A1 PL402666A1 (pl) | 2014-08-18 |
| PL222382B1 true PL222382B1 (pl) | 2016-07-29 |
Family
ID=51302416
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL402666A PL222382B1 (pl) | 2013-02-04 | 2013-02-04 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL222382B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024167426A1 (en) | 2023-02-07 | 2024-08-15 | Green Tree Group Sp. Z O.O. | Method of obtaining liquid agent and method for biodegradation of thermoplastic polymeric materials in compost |
-
2013
- 2013-02-04 PL PL402666A patent/PL222382B1/pl unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024167426A1 (en) | 2023-02-07 | 2024-08-15 | Green Tree Group Sp. Z O.O. | Method of obtaining liquid agent and method for biodegradation of thermoplastic polymeric materials in compost |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL402666A1 (pl) | 2014-08-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240284915A1 (en) | Microbial fermentation methods and compositions | |
| US10757946B2 (en) | Microbial inoculant formulations | |
| JP2016521980A (ja) | 細菌の発酵法及び組成物 | |
| US5208159A (en) | Antibacterial, anti-nematode and/or plant-cell activating composition, and chitinolytic microorganisms for producing the same | |
| Guerin-Laguette et al. | Growth stimulation of a Shiro-like, mycorrhiza forming, mycelium of Tricholoma matsutake on solid substrates by non-ionic surfactants or vegetable oil | |
| Ibrahim et al. | Potential use of nylon scouring pad cubes attachment method for pectinase production by Aspergillus niger HFD5A-1 | |
| JP5030066B2 (ja) | 石油汚染土壌の浄化方法 | |
| PL222382B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej | |
| RU2735870C1 (ru) | Способ выделения микроорганизмов для очистки и восстановления нефтезагрязненных почв и грунтов методом фитобиоремедиации | |
| JP2014088548A (ja) | 石油汚染土壌の浄化剤 | |
| JP2001245656A (ja) | 新規微生物および当該微生物を利用した馬鈴薯そうか病防除方法 | |
| JP2958359B2 (ja) | 遅効性抗菌剤 | |
| RU2354633C2 (ru) | Способ утилизации жиросодержащих отходов и продукт, получаемый этим способом | |
| Mgbede et al. | Pectinase production from a local isolate of Aspergillus niger using orange bagasse as a carbon source | |
| LT4794B (lt) | Štamas trichoderma harzianum vnb-16, skaidantis mazutą, jo gavimo būdas ir panaudojimas | |
| Yaneva et al. | CULTIVATION OF PLEUROTUS OSTRE 4 TUS MUSHROOMI ON VVASTE PRODUCTS AND COMPOST FOR PHENOL, DEGRADATION | |
| JP2007209308A (ja) | 油脂分解微生物及びそれを含む資材並びに生ゴミ処理方法 | |
| PL219884B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oraz sposób bioremediacji gleby zanieczyszczonej olejem napędowym wspomaganej tym preparatem |