PL211793B1 - Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie - Google Patents
Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanieInfo
- Publication number
- PL211793B1 PL211793B1 PL379880A PL37988006A PL211793B1 PL 211793 B1 PL211793 B1 PL 211793B1 PL 379880 A PL379880 A PL 379880A PL 37988006 A PL37988006 A PL 37988006A PL 211793 B1 PL211793 B1 PL 211793B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- membrane
- cellulose
- group
- broad
- polymer
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 title description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 47
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 239000004604 Blowing Agent Substances 0.000 claims description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 14
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 13
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 13
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 11
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims description 10
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 9
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 8
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 claims description 8
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 claims description 8
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims description 7
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 7
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 7
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 claims description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 4
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 claims description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical class CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 4
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 claims description 4
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 4
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000012604 3D cell culture Methods 0.000 claims description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- QKSIFUGZHOUETI-UHFFFAOYSA-N copper;azane Chemical compound N.N.N.N.[Cu+2] QKSIFUGZHOUETI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 claims description 3
- 238000000614 phase inversion technique Methods 0.000 claims description 3
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 claims description 2
- JJLJMEJHUUYSSY-UHFFFAOYSA-L Copper hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Cu+2] JJLJMEJHUUYSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 16
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 8
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 8
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 4
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 229920002292 Nylon 6 Polymers 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest szerokoporowaty podkład wykonany z polimerów syntetycznych, a przeznaczony do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, a zwłaszcza komórek przeznaczonych do wszczepów wraz z podkładem i/lub konstruowania biosztucznych narządów przywracających i/lub zastępujących utracone funkcje, a także sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie.
Znanych jest wiele typów podłoży, na których prowadzi się hodowle komórkowe i tkankowe. Jednakże są to wszystko hodowle „płaskie czyli typu 2D. W chwili obecnej coraz powszechniej przyznaje się, że nie jest to naturalna metoda hodowli i powinno się je prowadzić na podłożach przestrzennych, czyli typu 3D. Jest to bardzo wyraźnie akcentowane w hodowli hepatocytów [J. Hepatology 26(1997)1379-1392, J. Biosc. Bioeng. 99(2005)311-319]. Jest to szczególnie ważne w przypadku takich hodowli komórkowych jak chondrocyty, gdzie konieczne jest uzyskanie dostatecznej masy komórkowej, aby można było zastąpić zniszczoną tkankę chrzestną, nową wyhodowaną in vitro. Okazało się, że można chondrocyty z powodzeniem namnażać nie tylko na podłożach kolagenowych, ale również na płaskich membranach polisulfonowych [M. Płończak, J. Czubak, J. Kawiak: Transplantation Proceedings (2006).
Podczas przygotowania przez Zgłaszającego takich membran, okazało się niespodziewanie, że możliwe jest opracowanie szerokoporowatych podkładów polimerowych do hodowli komórkowych o gruboś ci od uł amka milimetra do kilku milimetrów, w których w cał ej obję toś ci narastają komórki. Dzięki temu można uzyskać dostateczną masę komórkową do wszczepu. Jednocześnie podkład jest na tyle wytrzymały mechanicznie, że jest w stanie utrzymać komórki w dostateczniej masie nawet pod obciążeniem, jak ma to miejsce w stawach. Dotychczas stosowane podłoża kolagenowe nie spełniały tego warunku. Stosując biozgodne materiały można w ten sposób przygotowywać odpowiednią masą komórkową w formie umożliwiającej jej implantację wraz z podkładem.
Nieoczekiwanie, okazało się, że szerokoporowaty podkład i sposób według wynalazku wypełnia istniejącą do tej pory lukę, pozwalając na otrzymywanie podkładu biologicznie obojętnego i pozbawionego wad dotychczas stosowanych podkładów.
Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stanowi szerokoporowatą membranę typu membran półprzepuszczalnych wykonaną z polimeru lub mieszaniny polimerów syntetycznych, dających się formować metodą inwersji faz, o porach niezapadających się podczas wielokrotnego suszenia, wybranych z grupy obejmującej polieterosulfony, polisulfony, poliamidy lub poliimidy, z dodatkiem poroforów wybranych z grupy obejmującej celulozę naturalną i przetworzoną oraz jej pochodne, oraz ewentualnie niskocząsteczkowe alkohole poliwinylowe, poliglikole etylenowe i propylenowe oraz poliwinylopirolidony.
Porofory te są usuwane w trakcie otrzymywania membrany, generując pory o wielkości odpowiadającej wielkościom zastosowanego prekursora porów (porofora).
Sposób wytwarzania szerokoporowatego podkładu do hodowli komórkowych, według wynalazku polega na tym, że nasyca się w znany sposób podkład celulozowy z celulozy naturalnej, celulozy regenerowanej, korzystnie wiskozy, celulozy mikrokrystalicznej lub podkład wykonany z mieszaniny powyższych wersji celulozy, roztworem polimeru membranotwórczego wybranego z grupy obejmującej polieterosulfony, polisulfony, poliamidy lub poliimidy, w rozpuszczalniku polimeru, korzystnie wybranym z grupy obejmującej DMF (N,N-dimetyloformamid) DMA (N,N-dimetyloacetamid), NMP (N-metylopirolidon) lub ich mieszaninę, ewentualnie z dodatkiem poroforu, następnie membranę formuje się metodą inwersji faz, przez suszenie naniesionej cienkiej warstwy membranotwórczej, lub korzystnie przez wytrącanie nierozpuszczalnikiem, a po wypłukaniu z powstałej membrany poroforu, lub poroforów polimerowych i ewentualnie celulozy za pomocą tetraaminowego związku kompleksowego miedzi, usuwa się osadzone na powierzchni membrany nierozpuszczalne związki i doprowadza odczyn membrany do pH 7.
W sposobie wedł ug wynalazku, korzystnie z membrany wypł ukuje się porofory za pomocą nierozpuszczalnika polimeru, korzystnie wody i/lub alkoholu C1-7, a celulozę za pomocą tetraaminowego związku kompleksowego miedzi korzystnie w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego.
Roztwór polimeru membranotwórczego lub polimerów membranotwórczych, korzystnie zawiera poza polimerem membranotwórczym jeden lub kilka poroforów, wybranych z grupy obejmującej celulozę naturalną i przetworzoną oraz jej pochodne, ewentualnie niskocząsteczkowe alkohole poliwinyloPL 211 793 B1 we, poliglikole etylenowe i propylenowe oraz poliwinylopirolidony. korzystnie wybrane z grupy obejmującej niskocząsteczkowe alkohole poliwinylowe, poliglikole etylenowe i/lub propylenowe, celulozę mikrokrystaliczną oraz poliwinylopirolidony.
Jako podłoże wsiąkliwe, korzystnie stosuje się bibułę jakości chromatograficznej, włókninę wiskozową lub włókninę bawełnianą.
Dzięki wypłukaniu celulozy w podkładzie powstają makropory.
Szerokoporowaty podkład według wynalazku może służyć do hodowli komórek zwierzęcych i/lub ludzkich takich jak np. hepatocyty, chondrocyty, komórki przytarczyc. Mogą to być również komórki genetycznie modyfikowane lub komórki patologicznie zmienione. Podkład szerokoporowaty może służyć również jako podłoże do hodowli mikroorganizmów, w tym GMO i tkanek roślinnych. Hodowle prowadzi się w typowych, używanych powszechnie pożywkach w naczyniach o powierzchni odpowiedniej do zamierzonej wielkości podkładu, w warunkach jałowych.
Materiał i sposób według wynalazku przedstawiono w poniższych przykładach wykonania.
P r z y k ł a d I.
Bibułę chromatograficzną Whatman nr 3 nasyca się roztworem polimerów o składzie:
100 g dimetyloformamid g polisulfonu Udel 1700 g poliwinylopirolidon K30 i natychmiast po nasyceniu zanurza się w wodzie demineralizowanej na okoł o 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę woda destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d II.
Bibułę chromatograficzną Whatman nr 2 nasyca się roztworem polimerów o składzie:
100 g dimetyloformamid g polisulfonu Udel 1700 i natychmiast po nasyceniu zanurza się w wodzie demineralizowanej na okoł o 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę wodą destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d III.
Bibułę chromatograficzną Whatman nr 1 nasyca się roztworem polimerów o składzie:
g dimetyloacetamidu g metylopirolidonu g polieterosulfonu Ultrason 2020 P g poliwinylopirolidon K50 g celulozy mikrokrystalicznej i natychmiast po nasyceniu zanurza się w wodzie demineralizowanej na okoł o 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę wodą destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V.
Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
PL 211 793 B1
P r z y k ł a d IV.
Bibułę chromatograficzną Whatman nr 1 nasyca się roztworem polimerów o składzie:
g metylopirolidonu g dimetyloformamidu g polieterosulfon Ultrason 2020 P g glikolu polieytlenowego 20.000 D i natychmiast po naniesieniu mieszaniny membranotwórczej całość zanurza się w wodzie demineralizowanej z dodatkiem 0,5% CaCl2 i 0,5% MgCl2 na około 2 godziny. Następnie membranę przenosi się do wody demineralizowanej na około 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę wodą destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d V.
Włókninę wiskozową prasowaną nasyca się roztworem polimerów o składzie:
g metylopirolidonu g dimetyloformamidu g polisulfon Ultrason 2020 P g glikolu polipropylenowego 40.000 D g celulozy mikrokrystalicznej i natychmiast po naniesieniu mieszaniny membranotwórczej całość zanurza się w wodzie demineralizowanej z dodatkiem 0,2% CaCl2 i 1,1% MgCl2 na około 2 godziny. Następnie membranę przenosi się do wody demineralizowanej na około 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę wodą destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d VI.
Włókninę wiskozową prasowaną nasyca się roztworem polimerów o składzie:
g kwasu mrówkowego g kwasu octowego g poliamidu 6 M32000 g poliwinylopirolidon K30 g glikolu polipropylenowego 40.000 D g alkoholu poliwinylowego 5000 D i natychmiast po naniesieniu mieszaniny membranotwórczej cał o ść zanurza się w wodzie demineralizowanej na około 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę woda destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d VI.
150 g celulozy mikrokrystalicznej wymieszano dokładnie z roztworem o składzie:
g kwasu mrówkowego g kwasu octowego g poliamidu 6 M32000 g poliwinylopirolidon K30
PL 211 793 B1 g glikolu polipropylenowego 40.000 D g alkoholu poliwinylowego 5000 D
Taką mieszaninę rozprowadza na podkładzie stałym, np. na płytce szklanej formując warstwę o żądanej grubości np. 0,4 mm i natychmiast po uformowaniu tej warstwy cało ść zanurza się w wodzie. Po upływie 30 minut oddziela się powstałą membranę od podłoża szklanego i płucze się ją w wodzie demineralizowanej na około 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę wodą destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze l100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
P r z y k ł a d VII
Sprasowaną warstwę waty bawełnianej nasyca się roztworem polimerów o składzie:
g dimetyloacetamidu g metylopirolidonu g polieterosulfonu Ultrason 2020 P g poliwinylopirolidon K60 g celulozy mikrokrystalicznej i natychmiast po nasyceniu zanurza się w wodzie demineralizowanej na okoł o 12 godzin. Po tym czasie, płucze się jeszcze raz w wodzie demineralizowanej i zanurza w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego na 72 godziny, delikatnie mieszając roztwór, co 4 godziny. Po tym czasie płucze się otrzymaną membranę woda destylowaną, aż do zaniku niebieskiego zabarwienia i następnie zanurza na 15 minut w 0,5% roztworze kwasu azotowego V. Po kąpieli kwasowej membranę płucze się wodą demineralizowaną lub destylowaną, aż odciek będzie miał odczyn obojętny. Membrana po wysuszeniu w temperaturze 100°C przez 30 minut jest gotowa do sterylizacji za pomocą dowolnie wybranej typowej metody np. termicznie, parą, chemicznie, tlenkiem etylenu, alkoholami.
Claims (8)
1. Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, znamienny tym, że stanowi on szerokoporowatą membranę typu membran półprzepuszczalnych wykonaną z polimeru lub mieszaniny polimerów syntetycznych, wybranych z grupy obejmującej polieterosulfony, polisulfony, poliamidy lub poliimidy, z dodatkiem poroforów wybranych z grupy obejmującej celulozę naturalną i przetworzoną oraz jej pochodne, ewentualnie z dodatkiem poroforów wybranych z grupy obejmującej niskocząsteczkowe alkohole poliwinylowe, poliglikole etylenowe i propylenowe oraz poliwinylopirolidony.
2. Sposób wytwarzania szerokoporowatego podkładu do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, znamienny tym, że nasyca się w znany sposób podkład celulozowy z celulozy naturalnej, celulozy regenerowanej, korzystnie wiskozy, celulozy mikrokrystalicznej lub podkład wykonany z mieszaniny powyższych wersji celulozy, roztworem polimeru membranotwórczego wybranego z grupy obejmującej polieterosulfony, polisulfony, poliamidy lub poliimidy w rozpuszczalniku polimeru, korzystnie wybranym z grupy obejmującej DMF (N,N-dimetyloformamid) DMA (N,N-dimetyloacetamid), NMP (N-metylopirolidon) lub ich mieszaniny, ewentualnie z dodatkiem poroforu, następnie membranę formuje się metodą inwersji faz, przez suszenie naniesionej cienkiej warstwy membranotwórczej, lub korzystnie przez wytrącanie nierozpuszczalnikiem, a po wypłukaniu z powstałej membrany poroforu, lub poroforów polimerowych i ewentualnie celulozy za pomocą tetraaminowego związku kompleksowego miedzi, usuwa się osadzone na powierzchni membrany nierozpuszczalne związki i doprowadza odczyn membrany do pH 7.
3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako podłoże wsiąkliwe stosuje się bibułę jakości chromatograficznej.
4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako podłoże wsiąkliwe stosuje się włókninę wiskozową.
PL 211 793 B1
5. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako podłoże wsiąkliwe stosuje się włókninę bawełnianą.
6. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako porofor stosuje się poliwinylopirolidon i/lub glikol polietylenowy i/lub glikol polipropylenowy i/lub niskocząsteczkowy alkohol poliwinylowy lub/i celulozę mikrokrystaliczną, którą wypłukuje się za pomocą tetraaminowego związku kompleksowego miedzi, korzystnie w kąpieli zawierającej nasycony roztwór wodorotlenku tetraaminomiedziowego.
7. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako nierozpuszczalnik stosuje się pojedyncze indywiduum chemiczne, lub mieszaninę kilku substancji, wybranych z grupy obejmującej wodę i alkohole od C1 do C7.
8. Zastosowanie szerokoporowatego podkładu według zastrz. 1, do hodowli komórkowych, 3D.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379880A PL211793B1 (pl) | 2006-06-07 | 2006-06-07 | Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL379880A PL211793B1 (pl) | 2006-06-07 | 2006-06-07 | Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL379880A1 PL379880A1 (pl) | 2007-12-10 |
| PL211793B1 true PL211793B1 (pl) | 2012-06-29 |
Family
ID=43027954
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL379880A PL211793B1 (pl) | 2006-06-07 | 2006-06-07 | Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL211793B1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL235794B1 (pl) * | 2017-12-21 | 2020-10-19 | Inst Biocybernetyki I Inzynierii Biomedycznej Im Macieja Nalecza Polskiej Akademii Nauk | Sposób wykrywania pozostałości celulozy w półprzepuszczalnych membranach szerokoporowatych |
-
2006
- 2006-06-07 PL PL379880A patent/PL211793B1/pl not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL379880A1 (pl) | 2007-12-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20020005600A1 (en) | Reverse fabrication of porous materials | |
| CA2631345C (en) | Method of producing chitosan scaffold having high tensile strength and chitosan scaffold produced using the method | |
| CN101897994B (zh) | 一种修复骨缺损的生物复合支架及其制备方法 | |
| US20030012805A1 (en) | Implant for cartilage tissue regeneration | |
| US20110263020A1 (en) | Membrane for cell expansion | |
| KR101181738B1 (ko) | 다공성 3차원 나노섬유 스캐폴드의 제조방법 | |
| JP6892874B2 (ja) | 免疫隔離膜、移植用チャンバー、および移植用デバイス | |
| US7151120B2 (en) | Degradable porous materials with high surface areas | |
| KR20160035917A (ko) | 조직 및 뼈 재생을 위한 실크 피브로인 다공성 3차원 지지체 제작 방법 | |
| KR100486367B1 (ko) | 외벽에 반투막이 형성된 생분해성 이중 다공성 스캐폴드및 이를 이용한 조직세포 배양방법 | |
| WO2010034469A1 (en) | Device for renal cell expansion | |
| JP7023717B2 (ja) | 半透膜及びその製造方法 | |
| CN102085392A (zh) | 纳米钙磷盐/胶原复合支架及其制备方法与应用 | |
| CN109276763A (zh) | 多糖修饰mbg支架、组织修复支架及其制备方法和应用 | |
| KR101712862B1 (ko) | 다공성 고분자 미세입자, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 바이오 소재 | |
| US4932964A (en) | Artificial body for a prosthesis | |
| JP5769159B2 (ja) | 複合多孔質足場材 | |
| PL211793B1 (pl) | Szerokoporowaty podkład do hodowli komórkowych, zwłaszcza do hodowli komórkowych 3D, sposób jego wytwarzania i jego zastosowanie | |
| PL242762B1 (pl) | Sposób wytwarzania rusztowania komórkowego o dużej elastyczności | |
| KR20190058215A (ko) | 생체적합성 소재를 활용한 인공혈관 및 그의 제조방법 | |
| KR101507589B1 (ko) | 전기방사된 젤라틴/bcp와 키토산 하이드로젤 조성의 골 지혈제 제조방법 | |
| JP5339323B2 (ja) | 多孔質体とその製造方法 | |
| US6979700B2 (en) | Non-degradable porous materials with high surface areas | |
| JP2003284767A (ja) | 組織工学用スキャホールド材及び人工血管 | |
| RU2714671C1 (ru) | Трехмерный пористый композитный материал и способ его получения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20130607 |