PL209609B1 - Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia - Google Patents
Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszeniaInfo
- Publication number
- PL209609B1 PL209609B1 PL381485A PL38148507A PL209609B1 PL 209609 B1 PL209609 B1 PL 209609B1 PL 381485 A PL381485 A PL 381485A PL 38148507 A PL38148507 A PL 38148507A PL 209609 B1 PL209609 B1 PL 209609B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- flax
- construct
- retting
- cells
- accelerated
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 241000208202 Linaceae Species 0.000 title claims abstract description 34
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 title claims abstract description 30
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims abstract description 16
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000228215 Aspergillus aculeatus Species 0.000 claims description 12
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 claims description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 claims description 4
- 101710198144 Endopolygalacturonase I Proteins 0.000 claims description 3
- 101710191566 Probable endopolygalacturonase I Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004753 textile Substances 0.000 abstract description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N diphenyl Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 5
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001096557 Dickeya dadantii (strain 3937) Rhamnogalacturonate lyase Proteins 0.000 description 3
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 3
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N D-galactopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-YMDCURPLSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 101100288095 Klebsiella pneumoniae neo gene Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- UBXYXCRCOKCZIT-UHFFFAOYSA-N biphenyl-3-ol Chemical group OC1=CC=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1 UBXYXCRCOKCZIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- General Factory Administration (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia polega na tym, że do genomu komórek lnu wprowadza się konstrukt zawierający cDNA kodujący grzybowy enzym uczestniczący w degradacji pektyn. Wynalazek znajduje zastosowanie w przemyśle tekstylnym.
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania lnu o poprawionym procesie roszenia.
Prezentowany jest nowatorski sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia, który polega na utworzeniu nowych roślin transgenicznych z nadekspresją grzybowych enzymów modyfikujących poziom niecelulozowych polisacharydów w ścianie komórkowej (pektyn). Wynalazek znajduje zastosowanie w przemyśle tekstylnym.
Proces roszenia lnu, polegający na oddzieleniu włókien lnianych od epidermy i części korowej łodygi wskutek degradacji pektyn i hemiceluloz przez mikroorganizmy, jest jednym z głównych czynników limitujących efektywną produkcję odpowiedniego włókna.
Roszenie lnu na mokro (ang. water retting) polegające na fermentacji matriks polisacharydowej przez anaerobowe bakterie z powodu wysokich kosztów pracy, suszenia i zanieczyszczenia wywołanego procesem fermentacji jest zastępowane metodą roszenia na sucho (ang. dew retting). W metodzie tej zebrane rośliny lnu rozkłada się w polu, gdzie ulegają kolonizacji przez występujące naturalnie w środowisku grzyby, degradujące polisacharydy w ścianie komórkowej roślin. Zasadniczo dwa czynniki mają istotny wpływ na przebieg procesu roszenia a przez to na jakość włókna, a mianowicie rozmiar lignifikacji ścian komórkowych łodyg oraz warunki klimatyczne podczas roszenia. Optymalny przebieg procesu roszenia jest wtedy, gdy lignifikacja łodyg jest niewielka i w otoczeniu panuje stosunkowo wysoka temperatura i wilgotność. W celu zoptymalizowania procesu roszenia rośliny lnu wyrywa się w 107 dniu ich wegetacji, a zatem przed osiągnięciem dojrzałości i stosuje się suchą metodę roszenia. Postępowanie chociaż skutecznie poprawia jakość włókna jest niekorzystne ze względu na mniejszy plon oraz niedogodność polegającą na konieczności przestrzegania reżimu czasowego wegetacji roślin.
W stanie techniki znane są własności enzymów liazy ramnogalakturonowej oraz poligalakturonazy wykorzystywanych do degradacji i modyfikacji pektyn występujących w ścianach komórkowych roślin. W Carbohydrate Research, Schols et al. Vol. 206, no. 1, 30 Sept 1990 opisano wysoką aktywność ramnogalakturonazy w lizie pektyn występujących w ścianie komórkowej jabłka. W szczególności podkreśla się skuteczność działania enzymów w hydrolizowaniu wysoko- i nisko-estryfikowanych wiązań pektynowych otrzymywanych ze szczepów bakteryjnych np. Bacillus (WO 9902663) i szczepów grzybów Aspergillus w zestawieniu z czystymi przygotowanymi w sposób techniczny preparatami pektynaz i cellulaz (US 06013489).
Przygotowanie preparatów enzymatycznych pochodzących ze szczepu Aspergillus aculeatus obejmujących liazę ramnogalakturonową oraz poligalakturonazę zostało szeroko opisane w literaturze patentowej (WO 92/19728). Ostatnie publikacje patentów ujawniły sposoby izolacji genów poligalakturonazy ze szczepów Aspergillus aculeatus oraz sposób konstrukcji nadprodukujących transformantów (EP 0421919). Transformaty stanowią grupę grzybów (EP 0421919, US 6013489), komórek bakteryjnych oraz komórek roślin (US 6013489). W zgłoszeniu US 6013489 przedstawiono metodę dotyczącą pozyskiwania rekombinowanego materiału DNA zawierającego sekwencję pochodzącą ze szczepu Aspergillus aculeatus kodującą enzym o aktywności ramnogalakturonazy. Polipeptyd izoluje się z zawiesiny komórek gospodarzy ekspresjonują cych rekombinowane DNA. Pozyskane tym sposobem enzymatyczne preparaty wykorzystywane są do macerowania owoców, klarowania owocowych lub warzywnych soków. Wynalazcy nie wspominają jednak o możliwości zastosowania komórek lnu, ani co więcej o stworzeniu z takich komórek transgenicznej rośliny, w której uaktywnia się obecność enzymu liazy ramnogalakturonowej mającej zasadniczy wpływ na poprawę procesu roszenia.
Badania na temat efektywności enzymów degradujących polisacharydy znajdujące się w ścianie komórkowej rośliny mające praktyczne zastosowanie w procesie roszenia lnu przedstawiono w opisie patentowym EP 0673447. Wynalazek dotyczy metody kontrolowanego enzymatycznego roszenia włókien lnu obejmującej zewnętrzne działanie roztworem do enzymatycznego roszenia zawierającym mieszaninę enzymów poligalaktoturonazy na włókna lnu. Publikacja ta ujawnia wyłącznie metodę wykorzystania gotowego preparatu enzymatycznego do traktowania włókien lnu w warunkach in vitro. Podobne wykorzystanie preparatów enzymatycznych do zraszania i obróbki włókien lnu zostało ujawnione w zgłoszeniu WO9902663. We wzmiankowanym zgłoszeniu preparaty zawierały mieszaninę liazy ramnogalakturonowej i poligalakturonazy wyizolowanych ze szczepów grzybów i bakterii, preferencyjnie ze szczepu Bacillus.
Celem wynalazku jest dostarczenie sposobu pozwalającego uzyskać rośliny lnu o poprawionym procesie roszenia.
PL 209 609 B1
Dla przyspieszenia i usprawnienia procesu roszenia utworzono transgeniczne rośliny lnu z nadekspresją grzybowych enzymów niezbędnych do degradacji pektyn.
Sposób wytwarzania lnu o poprawionym procesie roszenia według wynalazku polega na tym, że do genomu komórek lnu wprowadza się konstrukt zawierający cDNA, który koduje poligalakturonazę I z Aspergillus aculeatus, PGI, (GenBank Acc no AF054893) przedstawiony jako Seq Id Nr: 1 lub konstrukt zawierający cDNA kodujący liazę ramnogalaturonową z A. aculeatus RHA (GenBank Acc no S80208) przedstawiony jako Seq Id Nr: 2 (cDNA pochodziło od Dr Urte Schluter). Konstrukt wytwarza się przez wprowadzenie do wektora pBinAR genów zawierających cDNA kodujący poligalakturonazę I z A. aculeatus pod kontrolą silnego, konstytutywnego promotora 35S CaMV oraz wyposażony w terminator OCS (Rys.).
W alternatywnym sposobie według wynalazku do genomu komórek lnu wprowadza się konstrukt cDNA kodujący liazę ramnogalaturonową z A. aculeatus. Konstrukt wytwarza się przez wprowadzenie do wektora pBinAR genów zawierających cDNA kodujący liazę ramnogalaturonową z A. aculeatus pod kontrolą silnego, konstytutywnego promotora 35S CaMV oraz wyposażony w terminator OCS (Rys. 2).
Obydwa konstrukty wprowadza się do genomu komórek lnu przez inkubację z kulturą Agrobacterium tumefaciens, zawierającą ten konstrukt.
P r z y k ł a d 1. Wprowadzenie konstruktów genowych do komórek bakterii
Obydwa konstrukty wprowadza się do komórek Agrobacterium tumefaciens linii C58C1: pGV2260 metodą elektroporacji przy użyciu urządzenia „gene pulser firmy BioRad przy napięciu 2500 V. Wprowadzenie konstruktu do bakterii sprawdza się przez analizę restrykcyjną enzymami EcoR I i Sal I. Uzyskuje się produkty o wielkości 14 kb, 1240 bp, 500 bp w przypadku transformacji konstruktem PGI oraz produkty o wielkości 14 kb, 1,2 kb, 940 bp, 100 bp w przypadku transformacji konstruktem RHA. Obecność powyższych produktów świadczy o prawidłowości konstruktu wprowadzonego do bakterii.
P r z y k ł a d 2. Wprowadzenie konstruktów genowych do komórek lnu
Wprowadzenie do komórek roślinnych obydwu konstruktów dokonuje się przez inkubację (przez dni w ciemności) liścieni i hypokotyli lnu z 50 μΐ kultury Agrobacterium tumefaciens zawierających konstrukt PGI lub RHA. Po inkubacji i odpłukaniu w sterylnej wodzie liścienie i hypokotyle przenosi się na stałe podłoże (pożywka indukująca kallus i zawierająca antybiotyk, jako marker selekcyjny, kanamycynę) w celu uzyskania niezróżnicowanej tkanki kallusowej. Uzyskaną tkankę kallusową hoduje się na podłożu regeneracyjnym (pożywka indukująca pęd i zawierająca kanamycynę) które stymuluje różnicowanie się komórek i uzyskuje się wykształcone łodygi. Otrzymane pędy hoduje się do osiągnięcia odpowiedniej wielkości i przenosi na podłoże indukujące tworzenie korzeni i nie zawierające antybiotyków, finalnie ukorzenione rośliny przenosi się do ziemi.
Wbudowanie konstruktów do genomu lnu i stabilność ich ekpresji sprawdza się technikami PCR z użyciem specyficznych starterów, wykrywających gen oporności na kanamycynę (nptll) oraz metodą RT-PCR (real-time PCR). Wpływ konstruktów na wydajność procesu roszenia dokonano na podstawie modyfikowanego testu Fried'a.
P r z y k ł a d 3. Analiza wydajności roszenia lnu zmodyfikowanym testem Fried'a (Henriksson et al. 1997)
W celu oznaczenia stopnia roszenia lnu pobrano 5 cm fragmenty ze środkowej części łodyg lnu pochodzących z uprawy polowej i umieszczono w 20 ml wody, następnie inkubowano odpowiednio przez 1, 2 i 3 tygodnie w temp. 22°C bez przykrycia, co pozwalało na kontakt z powietrzem i patogenami. Następnie analizowane fragmenty łodyg lnianych umieszczono w probówkach zawierających 30 ml gotującej wody, a probówki mieszano na vorteksie przez 10s. Oceny wyroszenia dokonano przez porównanie do tkanek nieroszonych i roszonych tkanek lnu typu dzikiego (wt) a wyniki wyrażono w trójstopniowej skali: 0-łodygi nienaruszone, 3-włókna całkowicie uwolnione z łodyg. Uzyskane rośliny transgeniczne charakteryzowały się znacznie poprawioną wydajnością roszenia (o 40%) w porównaniu do roślin niemodyfikowanych. Stopień wyroszenia po pierwszym tygodniu inkubacji dla roślin transgenicznych wynosił 65-90%, a dla roślin kontrolnych 35%. Po trzech tygodniach inkubacji wszystkie rośliny transgeniczne były wyroszone w 100%, a rośliny kontrolne w 60%.
Wpływ konstruktów na poziom pektyn dokonano metodą bifenylową na podstawie analizy spektrofotometrycznej. Transgeniczny len wytwarzany wyżej opisanym sposobem zawiera obniżony od 56% do 68% poziom pektyn w porównaniu do roślin kontrolnych.
Analiza zawartości pektyn metodą bifenylową
Do oznaczenia zawartości pektyn wykorzystano ekstrakt roślinny pozostały po oznaczeniu cukrów prostych i skrobi. Do każdej próby dodano 2 ml 0,05 M Na2CO3 zawierającego 10 mM NaBH4, próby inkubowano przez 24 h w temp. pokojowej i delikatnie mieszano. Następnie próby zwirowano (4000 rpm,
PL 209 609 B1 min), a supernatant przemyto dwukrotnie wodą i ponownie zwirowano (4000 rpm, 5 min). Zebrany supernatant zawierał pektyny, które oznaczono metodą bifenylową. Wyizolowane pektyny zneutralizowano kwasem octowym i dializowano (wielkość porów 3500 kDa). Następnie próby zliofilizowano i zawieszono w 1 ml wody oraz 100 μΐ 0,0125 M Na2B4O7 w kwasie siarkowym. Następnie próby wytrząsano i inkubowano w 100°C przez 5 min. Po schłodzeniu do każdej próby dodano 10 μ z m-hydroksy-bifenylu (0,15%) w NaOH (0,5%) i inkubowano w temp. pokojowej przez 10 min. Pektyny oznaczono spektrofotometrycznie w 540 nm. Do sporządzenia krzywej standardowej użyto kwasu galakturonowego.
Wykaz sekwencji
Wykaz sekwencji <110> Uniwersytet Wrocławski <120> Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia <130> PK/0361/RW <160> 2 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 1344 <212> DNA <213> Aspergillus aculeatus <400> 1 accaagacaa cccgaagctt gaaccctctt ggcccaaatc caacaatgca ccttaacacc accctactcg tctcgctcgc cctcggggcc gcgagcgtcc tcgccagccc agccccacca gcaatcacgg ccccgcccac ggccgaggag atcgcgaagc gcgcgacgac ctgcacgttc tccggatcga acggcgcctc gtcggccagc aagtccaaga cctcgtgctc gaccattgtg ttgtcgaatg tggccgttcc gtcggggacg acgctggacc tgaccaagct gaacgacggg actcatgtga tcttctcagg cgaaaccacc ttcggctaca aggaatggag cggccccctg atctccgtct ccgggagcga cctgaccatc accggggcga gcgggcacag catcaacggg gacggcagcc ggtggtggga cggcgagggc gggaacgggg gcaagacgaa gcccaagttc ttcgcggcgc acagcctgac caactcggtg attagcgggc tgaagatcgt caactcgccg gtgcaggttt tcagcgttgc ggggtcggat tatctgaccc tcaaggatat cacgatcgac aactcggacg gcgacgacaa tggcgggcat aataccgatg cgtttgatat cggcacgagc acgtatgtca cgatctcggg cgccacggtg tataatcagg atgattgcgt ggctgtgaat tcgggggaga atatctactt ctcgggcggc tactgctccg gtggacacgg cttgtccatt ggttcggtgg gcggacgcag tgataatacg gttaagaacg tgacgtttgt ggattcgacg atcattaact cagataatgg cgtccgcatc aaaaccaaca tcgacaccac cggctccgtg tccgacgtca cctacaagga catcacgctc acctccatcg ccaagtacgg gatcgtggtg cagcagaact acggcgacac gtcatcgacg cccacgacgg gggtgccgat cacggacttt gtgctggaca acgtgcacgg ctcggtggtc agctcgggga ccaacatcct catctcgtgc gggtcgggca gttgttcgga ttggacgtgg acggatgtga gtgtcagtgg ggggaagacg agttccaagt gtacgaatgt gccgagtggg gctagttgtt gattctctgg ttgtttgtgg ttgagagggg gagggggggt gatttctcaa gctggaaggg gttcttcgag cttaggaggt ctcaggctta gtttggagag cggaagcggg gtctcttgac tacttaggtt gctcttgttt gaatgggaaa aaaaaaaaaa aaaa <210> 2 <211> 3250 <212> DNA <213> Aspergillus aculeatus <400> 2 ggatccctgc agaatcgctg tggagtatac ctcgctttct aggactgctg atgggtgaaa taccgcgtcc tgagagatga cgagaatggc tatgggccac ggggtaaagg gttcattgat catgtcgata ttccagagag cgttgagcga gcgtttcatg gcttagagcg cgggatacta ggatcggaac tagccaagag atgactctga ttggtcaaag cttgctcttt agattatctt caagactatt tcgactcttc ataatatggt agtccccagg atagtacagc tatcgtaggc agagtgccct gacgaaacga tgacgacatt ctgtattact cggttatcaa atgcggacac aggcgtcaaa tatcaagcga ctttggcgtc gcgaatgtga tgctgggccg tcttggtagg gcctgagcgc tgggtgcaac acgaagaaca caaccggcac gtaacccact gggtactcgg ccgtcactca cccgacagct gctcttgaac aatgtcttct ttcctgctcg catcaaatca acccggaatt tcagggcaga agctttatgg tgattgcttg ttgcatgcat caccccgccg cacgtacccc acaaagtcat caggcgatgc atctagctga gggggatgag ttcctgtttg acatttgccg agatgaaccc tcctagccgc ccctggaact aaatccttcg cagaaatcac tatcaatttg ggatgtgatc agcgcttcaa gcctcgagac ggatgctcaa gtagtgctga caccggcttg cgtggcggta taatcaatca gaattctcca tgaataagga gaagcttggg gtttgaagcc tcgatgaaga agcttgactc cggtcactcc actgagcttc tgagcgaaag cagtagagat catcatcgaa aggggttctg acacttaatg tcacaaggca ggaagccaca atcaacatcc gacaggacgg agaatcttca gcctgcttga gtctcagcgc ctggcggggg
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1344
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
PL 209 609 B1 tggaggatga gtatacgttg tagattctcc ggtggacatg agcccttgac cataatcacc 1080 atgaaggctc cttactgcga tataaaagct gcagtttctg cgtaggttct tgaggagaat 1140 cccaagaatc aagcaaatcg aggttgctcc cattgattca agtgaatcat gcgtgctctt 1200 ttccttcttg cgctgggttc tatcccggcg ctcgtcagcg gtcaactctc tggcagtgtt 1260 ggccccttga cctctgcttc caccaaaggt gcgacaaaaa catgcaatat cctcagctac 1320 ggcgcagtgg ccgacaactc gaccgatgtt gggcctgcca ttacatcggc ctgggctgca 1380 tgcaagagcg gaggtcttgt ctacatccca tctggcaact atgccttaaa cacctgggtc 1440 accctgactg gaggcagtgc gaccgcaatc cagctggatg gtatcattta tcgcacaggt 1500 accgccagtg ggaacatgat tgcagtcact gacaccaccg acttcgagct gttcagtagc 1560 acctccaaag gtgctgtgca gggattcggc tatgtgtacc atgcggaggg aacctacgga 1620 gcacggattc tgcgcttgac tgatgtgacc catttctctg tgcatgatgt gatcttggtg 1680 gatgcgcctg ctttccactt taccatggat acctgctccg atggggaggt gtacaacatg 1740 gcgattcgtg gtggcaatga gggcggcttg gacgggattg atgtctgggg aagcaacatc 1800 tgggttcacg atgtaagtca cgcccgagtg gcaatatgct acttctctgt cgctcacgag 1860 atgtgcactc atttaggttg aagtgaccaa caaggatgaa tgtgtaacag tcaaggtaag 1920 gctttccctt gcaagcacga attgacgcgc tcgagccttg attgacagac ggaccgcaga 1980 gcccggccaa caatattctg gtggagagca tctattgcaa ctggagtggt ggttgcgcaa 2040 tggggtcgct cggggccgac accgacgtca ccgatattgt ctaccgcaat gtttacacct 2100 ggtcatcgaa ccagatgtac atgatcaaga gcaatggcgg tagtggaacg gtgtcgaatg 2160 ttttgctgga aaatttcatc ggtcagtgct gctgcctatg cccccacctt tctggcttga 2220 aactgttaac tgatcccctt tatttagggc acggtaatgc gtactcgctc gacatcgacg 2280 gctactggag cagcatgact gcggtggccg gggacggggt gcagctgaac aacatcacgg 2340 tgaagaactg gaagggcacc gaggcgaacg gagcgacccg accaccgatc cgagtggtgt 2400 gtagtgacac ggcgccttgc acggacttga cgctggaaga cattgccatc tggaccgaaa 2460 gcggctcgag tgaactgtac ctgtgccgtt ccgcttacgg atcgggatac tgtttgaagg 2520 acagctcttc gcacacatcc tacaccacaa ccagcactgt cacggcggct ccctcaggat 2580 attcggcgac aaccatggca gccgacttgg caaccgcatt tggtctcact gcttccattc 2640 ccattccgac catcccgacc tcgttttatc ccgggttgac cccgtacagt gccttggcag 2700 gctagtaggt gtgaaagcaa ggtgggattg atgtgtcacc gtcgcagtgg aaggaatgtc 2760 gggagaagga gaaggagaag gagaaggaga aggaggagag atcgttgaat cgttgagtcg 2820 ttgagtcgtt gagatcatgg atcaggctgg taatcgttac ctcacgattc cgtaggtgtt 2880 tgtaagtaag tatgtatgtt atatcaatca aaaggaagat cctccttcgt atctcgagat 2940 ttctttcatg caggactggg aaggaggaag tttgaggagt tcatgtgagc tgcagtcgtc 3000 agtttctcag tcactcattg tccgatcgcg ccatcccttc ctggtcactt ctagtgcgct 3060 tccttgccct ttttttacct ttctctccca tcatcgttct ctttctcttt ctctcactcc 3120 tctcgcaggt tctgactctt tgatcccatt gcaaatatac cacctgcatc tttctggaag 3180 cgattgagga gatggtgaag tgatcaagtg gagaagaggt gaaagtggaa gctgcaccga 3240 gaataagctt 3250
Claims (3)
1. Sposób wytwarzania lnu o poprawionym procesie roszenia, znamienny tym, że do genomu komórek lnu wprowadza się konstrukt zawierający cDNA kodujący grzybowy enzym uczestniczący w degradacji pektyn wybrany z grupy zawieraj ą cej: cDNA poligalakturonazy I z Aspergillus aculeatus (PGI) przedstawiony jako SEQ ID No 1 oraz cDNA liazy ramnogalaturonowej z Aspergillus aculeatus (RHA) przedstawiony jako SEQ ID No 2.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że konstrukt wytwarza się przez wprowadzenie do wektora pBinAR cDNA kodującego grzybowy enzym uczestniczący w degradacji pektyn pod kontrolą promotora 35S CaMV i terminatora OCS.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że konstrukt wprowadza się do genomu komórek lnu przez inkubację z kulturą Agrobacterium tumefaciens zawierającą ten konstrukt.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL381485A PL209609B1 (pl) | 2007-01-05 | 2007-01-05 | Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL381485A PL209609B1 (pl) | 2007-01-05 | 2007-01-05 | Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL381485A1 PL381485A1 (pl) | 2008-07-07 |
| PL209609B1 true PL209609B1 (pl) | 2011-09-30 |
Family
ID=43035693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL381485A PL209609B1 (pl) | 2007-01-05 | 2007-01-05 | Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL209609B1 (pl) |
-
2007
- 2007-01-05 PL PL381485A patent/PL209609B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL381485A1 (pl) | 2008-07-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Quesada et al. | Antisense down-regulation of the FaPG1 gene reveals an unexpected central role for polygalacturonase in strawberry fruit softening | |
| CN110157719B (zh) | 核盘菌SsMAS3基因及其在植物菌核病抗性育种中的应用 | |
| Perini et al. | Overexpression of the carbohydrate binding module from Solanum lycopersicum expansin 1 (Sl-EXP1) modifies tomato fruit firmness and Botrytis cinerea susceptibility | |
| WO2007102346A1 (ja) | グルカン量を低減させることなくリグニン量およびセルロース量を低減させた植物体およびその生産方法、並びにこれらの利用 | |
| CN110713529B (zh) | VvDUF642基因引起植物种子败育的用途 | |
| US20190136332A1 (en) | Methods and Compositions for Increasing Storage-Life of Fruit | |
| CN112876550A (zh) | 梨PbrSTONE基因及其应用 | |
| JP3538428B2 (ja) | 植物プロモーターおよび該プロモーターを用いた遺伝子発現方法 | |
| AU2020100459A4 (en) | THE IAA-LEUCINE RESISTANT1-LIKE HYDROLASE GENE PpIAAH1 IN PEACH AND APPLICATIONS THEREOF | |
| CN111454967B (zh) | 一种油菜BnMAN7基因及其应用 | |
| WO2011160050A2 (en) | Systems to reduce recalcitrance of cellulosic biomass and increase yields of fermentable sugars | |
| PL209609B1 (pl) | Sposób wytwarzania lnu o przyspieszonym procesie roszenia | |
| Tateishi et al. | Heterologous expression of tomato glycoside hydrolase family 3 α‐L‐arabinofuranosidase/β‐xylosidases in tobacco suspension cultured cells and synergic action of a family 51 isozyme under antisense suppression of the enzyme | |
| CN118440956A (zh) | Pgip2基因在调控作物耐渍性中的应用 | |
| HUP0300811A2 (en) | Pear genes codifying for betha-galactosidase, pectin methylesterase, polygalacturonase, expansins and their use | |
| Hrazdina et al. | Down regulation of ethylene production in'Royal Gala'apples | |
| CN117088954A (zh) | 来源于谷子的蛋白质及其调控其表达的物质的应用 | |
| US20090158472A1 (en) | Transformant plant | |
| CN118185980A (zh) | 大豆免疫负调控基因海藻糖酶GmTRE、其编码蛋白及应用 | |
| KR102038481B1 (ko) | 레스퀘렐라 유래 PfFAD3-1 유전자로 형질전환된 수확량이 증가된 콩 식물체 및 이의 제조방법 | |
| TW200407424A (en) | Genetically modified plants with enhanced resistance to fungal diseases and a method of production thereof | |
| CN119307521B (zh) | 一种酚胺和水杨酸生物合成的双功能基因簇及其应用 | |
| CN118792343B (zh) | 一种木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因的应用 | |
| JP2016214218A (ja) | 転写抑制因子を利用した植物の二次細胞壁の量的形質を改変する方法 | |
| CN104561040A (zh) | 植物抗热基因htt3及其应用 |