PL208054B1 - Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie - Google Patents
Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanieInfo
- Publication number
- PL208054B1 PL208054B1 PL383287A PL38328707A PL208054B1 PL 208054 B1 PL208054 B1 PL 208054B1 PL 383287 A PL383287 A PL 383287A PL 38328707 A PL38328707 A PL 38328707A PL 208054 B1 PL208054 B1 PL 208054B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- carrier
- weight
- lipid
- composition
- dotap
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
- A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych charakteryzuje się tym, że zawiera 38,7% wagowych fosfatydylocholiny (PC), 15,4% wagowych distearoilofosfatydyloetanoloaminowej pochodnej glikolu polietylenowego 2000 (sól amonowa) (DSPE-PEG), od 10,9 do 16,8% wagowych dioleiolofosfatydyloetanolaminy (DOPE), od 4,05 do 6,75% wagowych 3ß-N-dimetyloetanokarbamoilo cholesterolu (DC-CHOL) i od 23,4 do 30,6% wagowych soli trimetyloamoniowej 1,2 -dioleilopropanu (DOTAP), przy czym PC, DOPE i DC-CHOL stanowią zewnętrzna błonę nośnika, a DOTAP wchodzi skład rdzenia nośnika zamkniętego w jego wnętrzu.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i zastosowanie tej kompozycji. Kompozycja lipidowa tworząca postać liposomu służy do przenoszenia genetycznych leków takich jak plazmidowy DNA, oligonukleotydy antysensowe, siRNA stanowiących składnik terapii genowej.
Terapia genowa jest obiecującą strategią w leczeniu wielu chorób genetycznych. Terapia genowa może być alternatywą w leczeniu chorób nowotworowych, które są oporne na stosowane do tej pory chemioterapeutyki, czy radioterapię. Wyniki wielu badań wskazują, że ta metoda może być bardzo skuteczna w leczeniu różnych typów nowotworów. Do grupy tej należą między innymi ostre białaczki. Skuteczność terapii genowej zależy jednak od zastosowania odpowiedniego nośnika dla leków genetycznych. Lipidowe systemy dostarczania kwasów nukleinowych szeroko badane od wielu lat są w wielu przypadkach bardzo skuteczne. Ogromna różnorodność naturalnych oraz syntetycznych lipidów i polimerów pozwala tak manipulować parametrami nośnika (rozmiar cząstek nośnika, ładunek powierzchniowy, swoistość komórkowa czy tkankowa, stabilność w określonych warunkach pH, temperatury itd.), aby przy minimum skutków ubocznych (np. aktywność hemolityczna, czy cytotoksyczność w stosunku do komórek zdrowych) wydajnie dostarczał lek do miejsc docelowych.
Liposomy są już od dawna rozważane, jako obiecujące i biokompatybilne systemy dostarczania leków. Jest to alternatywa dla nośników wirusowych, które pomimo wysokiej skuteczności transfekcji, posiadają szereg wad, takich jak immunogenność, czy niebezpieczeństwo mutacji insercyjnych, co ogranicza w znacznym stopniu możliwość ich powszechnego stosowania. Cząsteczki te nie są jednak zdolne do pokonania bariery błony komórkowej, endotelium, czy bariery krew-mózg. Dodatkowo, silnie ujemny ładunek, jaki posiadają, promuje ich opsonizację i usuwanie z krwiobiegu przez makrofagi układu retikuloendotelialnego. Są one także bardzo wrażliwe na działanie nukleaz obecnych w płynach biologicznych. Ze stanu techniki znany jest liposom i kompozycja liposomalna zawierająca fosfatydylocholinę, która łączy się z D,L -& -tokoferolem oraz pBB w odpowiednim stosunku wagowym: 180-90:5-40:1-15:1-100, korzystnie 113:1:10 (WO 2004/100860). W niniejszym zgłoszeniu liposom służy do enkapsulacji jadu zwierząt i nie znajduje zastosowania w terapii genowej. Zgłoszenie WO 99/05303 dostarcza kompozycję i sposób jej wytwarzania, która znajduje zastosowanie do tworzenia kompleksów lipidowo - kwasowych w celu dostarczenia produktów nukleinowych do układów biologicznych (przykładowo plazmidowy DNA, cząstki antysensowne, rybozymy, inne). Sposób wprowadzenia cząstki kwasu nukleinowego obejmuje zastosowanie kompleksu lipidowo-kwasowego złożonego z EYPC (fosfotydylocholina białka kurzego), DOTAP, rybozymu i koniugatu PEG-Cer. Kompozycja umożliwiająca transport katalizatora zawiera koniugat PEG-lipid, przy czym lipidem jest fosfotydyloetanoloamina.
W ś wietle stanu techniki kluczowym zadaniem pozostaje nadal opracowanie skutecznej kompozycji do wytwarzania nośnika lipidowego umożliwiającego dostarczenia terapeutyków do komórek nowotworowych i osiągnięcie wydajnej transfekcji w celu wymiany nieprawidłowego genu lub wyciszenia genu (genów) odpowiedzialnych za powstanie jednostki chorobowej.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nośnika lipidowego, który w efektywny sposób mógłby być stosowany w terapii genowej. Celem wynalazku jest uzyskanie nośnika lipidowego, który chroniłby leki genetyczne (np. oligonukleotydy antysensowe, siRNA) przed degradacją przez enzymy nukleolityczne, a jednocześnie nie zmieniając właściwości leków, skutecznie dostarczał je do wnętrza komórek docelowych, w szczególności do białaczkowych linii komórek, i umożliwiał efektywną transfekcję, prowadząc tym samym do zahamowania transkrypcji lub translacji określonego genu. Celem wynalazku jest również uzyskanie nośnika, zachowującego swoje parametry podczas przechowywania w bardzo niskich temperaturach, co jest szczególnie istotne w przypadku niektórych leków genetycznych takich jak siRNA, które relatywnie szybko ulegają degradacji w trakcie przechowywania w dodatnich temperaturach.
Nieoczekiwanie określony powyżej cel został osiągnięty w niniejszym wynalazku. Przedmiotem wynalazku jest kompozycja lipidowa, służąca do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych (przykładowo plazmidowego DNA, oligonukleotydów antysensowych, siRNA) zawierająca 38,7% wagowych fosfatydylocholiny (PC), 15,4% wagowych distearoilofosfatydyloetanoloaminowej pochodnej glikolu polietylenowego 2000 (sól amonowa) (DSPE-PEG) (ang. ((1,2-Distearoyl-SA7-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Amino(PolyethyleneGlycol)2000](AmmoniumSalt)), od 10,9 do 16,8% wagowych dioleiolofosfatydyloetanolaminy (DOPE) (ang. 1,2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine),
PL 208 054 B1 od 4,05 do 6,75% wagowych 3e-N-dimetyloetanokarbamoilo cholesterolu (DC-CHOL) (ang. ((3β-Ν-[dimethylaminoethane]carbamoyl)cholesterol)) i od 23,4 do 30,6% wagowych soli trimetyloamoniowej 1,2-dioleilopropanu (DOTAP) (ang. 1,2-Dioleoyl-3-Trimethylammonium-Propane), przy czym PC, DOPE i DC-CHOL stanowią zewnętrzną błonę nośnika, a DOTAP wchodzi skład rdzenia nośnika zamkniętego w jego wnętrzu.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja lipidowa, służąca do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych (przykładowo plazmidowego DNA, oligonukleotydów antysensowych, siRNA), która korzystnie zawiera 38,7% wagowych fosfatydylocholiny (PC), 15,4% wagowych distearoilofosfatydyloetanoloaminowej pochodnej glikolu polietylenowego 2000 (sól amonowa) (DSPE-PEG) (ang. ((1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Amino(PolyethyleneGlycol)2000](AmmoniumSalt)), 13,6% wagowych dioleiolofosfatydyloetanolaminy (DOPE) (ang. 1,2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine), 5,4% wagowych 3e-N-dimetyloetanokarbamoilo cholesterolu (DC-CHOL) (ang. ((3e-N-[dimethylaminoethane]carbamoyl)cholesterol)) i 27% wagowych soli trimetyloamoniowej 1,2-dioleilopropanu (DOTAP) (ang. 1,2-Dioleoyl-3-Trimethylammonium-Propane).
Kolejno przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji lipidowej według wynalazku do otrzymywania lipidowego nośnika dla leków genetycznych (przykładowo plazmidowego DNA, oligonukleotydów antysensownych, siRNA). Nieoczekiwanie odkryto, że zastosowanie DC-cholesterolu oraz DOPE w zewnętrznej otoczce nośnika, oraz odpowiedni dobór parametrów fizykochemicznych m.in. składu lipidowego, proporcji stosowanych lipidów, zawartości lipidu kationowego kompleksującego pDNA (stosunek ładunków +/-) oraz zastosowany bufor umożliwiają skuteczne wprowadzenie leków genetycznych do białaczkowych linii komórek, które są szczególnie trudne do transfekcji. Należy zaznaczyć, że większość znanych, skutecznych lipidowych nośników kwasów nukleinowych jest skierowana do zastosowań w przypadku komórek nowotworowych pochodzących od guzów litych.
Rozwiązanie według przedmiotowego wynalazku pozwala na otrzymanie stabilnego i skutecznie działającego liposomu o kompozycji składników, która dla znawcy w dziedzinie nie wynika w sposób oczywisty ze stanu techniki.
Kompozycja lipidowa według wynalazku zawiera fosfolipid występujący naturalnie w błonach komórkowych (fosfatydylocholinę) oraz syntetyczne lipidy decydujące o skuteczności transfekcyjnej otrzymanego nośnika (DOTAP, DC-CHOL, DOPE, DSPE-PEG). Strukturę nośnika buduje rdzeń, który stanowi obdarzony ładunkiem dodatnim DOTAP skompleksowany z plazmidowym DNA, opłaszczony otoczką lipidowa w skład, której wchodzą pozostałe lipidy.
Wynalazek dostarcza stabilnych rozmiarowo liposomów o średnicy około 105 +/- 15 nm, których wielkość mierzono techniką dynamicznego rozpraszania światła. Otrzymane liposomy zamykają duże ilości DNA i mogą być długo przechowywane w postaci zawiesiny (12 miesięcy) jak również w postaci liofilizatów (3 miesiące). Liposomy według wynalazku są stabilne co do wielkości cząstki oraz potencjału zeta (-5,4 +/-1,2 mV) w okresie dwunastomiesięcznego przechowywania w postaci zawiesiny w 4°C (fig 1). Utrzymują także wysoką zawartość plazmidowego DNA zamkniętego w ich wnętrzu (fig. 2). Zamrażany w temperaturze -80°C w obecności sacharozy jako krioprotektanta preparat liposomowy (stosunek w/w sacharoza:lipid 5:1) a następnie liofilizowany i przechowywany w temperaturze -20°C przez okres 3 miesięcy pozwala nadal na uzyskanie stabilnych co do rozmiaru (fig. 3) i potencjału zeta (fig. 4) liposomów. Również wielogodzinna inkubacja liposomów z 50% surowicą ludzką w czasie od 30 min do 30 h w temperaturze 37°C nie powoduje zmian ich właściwości. Frakcję liposomową oddzielano na mikrokolumnie Sepharoze 4B. Badania potwierdzają, że nośnik według wynalazku jest stabilny zarówno pod względem jego średnicy (fig. 5) jak i potencjału zeta (fig. 6).
Otrzymany preparat liposomowy nie wykazuje aktywności hemolitycznej w stosunku do ludzkich erytrocytów; uzyskane wartości mieszczą się w granicach błędu metody. Aktywność hemolityczna nośnika oceniano badając wypływ hemoglobiny z wyizolowanych z ludzkiej krwi erytrocytów po inkubacji z liposomami (fig. 7).
Otrzymany preparat liposomowy wykazuje niewielką toksyczność w stosunku do badanych komórek. Toksyczność liposomów oceniano na podstawie przeżywalności komórek po inkubacji z różnymi objętościami zawiesiny liposomowej w czasie 24-48 godzin. Inkubacje prowadzono w różnych warunkach: w pełnym medium, w medium pozbawionym surowicy oraz w buforze PBS. Przeżywalność komórek oceniano na podstawie barwienia błękitem trypanu, który znakuje komórki martwe.
Kompozycja lipidowa według wynalazku wykazuje również wysoką skuteczność transfekcyjną proponowanego nośnika dla plazmidowego DNA w dwóch liniach komórkowych ostrych białaczek, którą zbadano na podstawie fluorescencji komórek. Jako gen reporterowy zastosowano gen gfp kodujący
PL 208 054 B1 białko GFP (ang. Green Fluorescence Protein) lub czerwoną odmianę tego białka dsRed (fig. 8 i fig. 9). Skuteczność transfekcyjną nośnika według wynalazku dla plazmidowego DNA badano dla komórek Jurkat T (ostra białaczka limfoidalna) i HL-60 (ostra białaczka mieloidalna).
Eksperymenty wykorzystujące techniki RT-PCR oraz Western Biot wykazały, że proponowany lipidowy nośnik kwasów nukleinowych skutecznie wycisza ekspresję genu bcl-2 i obniża poziom ekspresji białka Bcl-2 przez oligonukleotydy antysensowe dostarczane do komórek Jurkat T, HL 60 oraz K 562.
Przedmiot wynalazku został uwidoczniony na rysunkach, na których figury 1-10 przedstawiają kolejno:
Fig. 1 przedstawia zmiany poziomu stabilności średnicy cząstek nośnika w trakcie przechowywania w postaci zawiesiny w 4°C.
Fig. 2 przedstawia zmiany poziomu zawartości plazmidowego DNA w liposomach w okresie 12 miesięcy w temperaturze 4°C.
Fig. 3 przedstawia zmiany poziomu stabilności liposomów w postaci liofilizowanej przechowywanych w temperaturze -20°C przez okres 3 miesięcy.
Fig. 4 przedstawia zmiany potencjału zeta liposomów w postaci liofilizowanej przechowywanych w temperaturze -20°C przez okres 3 miesięcy
Fig. 5 poziom zmiany poziomu stabilności liposomów po wielogodzinnej inkubacji liposomów z 50% surowicą ludzką.
Fig. 6 przedstawia zmiany potencjału zeta liposomów po inkubacji liposomów z 50% surowicą ludzką.
Fig. 7 przedstawia poziom aktywności hemolitycznej liposomów w stosunku do ludzkich erytrocytów.
Fig. 8 przedstawia skuteczność transfekcyjną lipidowego nośnika w komórkach linii białaczkowych Jurkat T (ostra białaczka limfoidalna).
Fig. 9 przedstawia skuteczność transfekcyjną lipidowego nośnika w komórkach linii białaczkowych HL-60 (ostra białaczka mieloidalna).
Fig. 10a przedstawia wynik wyciszania ekspresji genu bcl-2 przez oligonukleotydy antysensowe dostarczane do komórek za pomocą liposomów. Elektroforeza w żelu agarozowym produktów RT-PCR bcl-2 i aktyny (K- „nagie” ODN, podane bezpośrednio do pożywki, K'- ODN w odwróconej orientacji zamknięte w liposomach CCL-PEG, 1, 2, 3- zastosowano ODN 1*, 3- zastosowano ODN 2*).
Fig. 10b przedstawia wynik wyciszania ekspresji genu bcl-2 przez oligonukleotydy antysensowe dostarczane do komórek za pomocą liposomów. Analiza Western Blot (K- kontrola, komórkom nie podano ODN, K'- kontrola, komórkom podano ODN w odwrotnej orientacji, 24h-, 48h-, 72h- rezultat po 24, 48 i 72 godzinach, 1,2-zastosowano ODN 1, 3, 4- zastosowano ODN 2. * ODN 1, ODN 2 - oligonukleotydy antysensowe skierowane na gen kodujący białko Bcl-2).
Niniejszy opis został wzbogacony o umieszczony poniżej przykład realizacji zastrzeganego wynalazku. Służy on jedynie lepszemu zobrazowaniu istoty przedmiotowego rozwiązania i nie powinien być uznany za ograniczające zakres żądanej ochrony.
P r z y k ł a d 1
W celu otrzymania 1 ml kompozycji lipidowej w postaci zawiesiny liposomowej, służącej do zamknięcia 100 μg kwasu nukleinowego (asODN lub siRNA) 150 μΐ wodnego roztworu pDNA (zawierającego 100 μg pDNA) łączy się ze 150 μl chloroformowego roztworu DOTAP (zawierającego 3 mg DOTAP (stosunek wodny roztwór kwasu nukleinowego : chloroform 1:1). Następnie dodaje się 300 μΐ metanolu aż do uzyskania jednej fazy. Kolejno roztwór inkubuje się 30 minut w temperaturze pokojowej, po czym dodaje się 600 μl ddH2O i 600 μl chloroformu, odwirowuje się przez 10 minut przy 800 x g w temperaturze pokojowej. Następnie, usuwa się fazę górną, a do fazy dolnej dodaje się mieszaninę chloroformowych roztworów lipidów (PC (4,3 mg), DSPE-PEG (1,7 mg), DOPE (1,5 mg), DC-CHOL (0,6 mg)) oraz 1200 μl buforu PBS. Zawiesinę poddaje się dezintegracji ultradźwiękami przez 2 minuty przy chłodzeniu próbki w łaźni lodowej. Kolejno usuwa się rozpuszczalniki organiczne w wyparce próżniowej i uzupełnia buforem PBS do objętości 1 ml. Zawiesinę liposomów kalibruje się w ekstruderze ciśnieniowych stosując filtry poliwęglanowi (Nucleopore, WHATMAN) o średnicy 400, 200 i 100 nm, przez każdy filtr przeciska się zawiesinę przynajmniej dziesięciokrotnie.
Wielkość otrzymanych pęcherzyków mierzy się techniką dynamicznego rozpraszania światła przy użyciu aparatu ZetaSizer, firmy Malvern Ltd., UK.2 Proporcje poszczególnych składników kompozycji
PL 208 054 B1 według wynalazku mogą być modyfikowane w pewnym zakresie bez istotnych strat pożądanych właściwości tej kompozycji. Ustalono, że skład kompozycji powinien leżeć w zakresie:
• 38,7% wagowych fosfatydylocholiny (PC), • 15,4% wagowych distearoilofosfatydyloetanoloaminowej pochodnej glikolu polietylenowego 2000 (sól amonowa) (DSPE-PEG) (ang. ((1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-[Amino(PolyethyleneGlycol)2000](AmmoniumSalt)), • od 10,9 do 16,8% wagowych dioleiolofosfatydyloetanolaminy (DOPE) (ang. 1,2-Dioleoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine), • od 4,05 do 6,75% wagowych 3e-N-dimetyloetanokarbamoilo cholesterolu (DC-CHOL) (ang. ((3e-N-[dimethylaminoethane]carbamoyl)cholesterol)) • od 23,4 do 30,6% wagowych soli trimetyloamoniowej 1,2-dioleilopropanu (DOTAP) (ang. 1,2-Dioleoyl-3-Trimethylammonium-Propane).
Claims (5)
1. Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych, znamienna tym, że zawiera 38,7% wagowych fosfatydylocholiny (PC), 15,4% wagowych distearoilofosfatydy loetanoloaminowej pochodnej glikolu polietylenowego 2000 (sól amonowa) (DSPE-PEG), od 10,9 do 16,8% wagowych dioleiolofosfatydyloetanolaminy (DOPE), od 4,05 do 6,75% wagowych 3e-Ndimetyloetanokarbamoilo cholesterolu (DC-CHOL) i od 23,4 do 30,6% wagowych soli trimetyloamoniowej 1,2-dioleilopropanu (DOTAP), przy czym PC, DOPE i DC-CHOL stanowią zewnętrzna błonę nośnika, a DOTAP wchodzi skład rdzenia nośnika zamkniętego w jego wnętrzu.
2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawartość DOPE stanowi korzystnie 13,6% wagowych w zewnętrznej błonie nośnika.
3. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawartość DC-CHOL stanowi korzystnie 5,4% wagowych w zewnętrznej błonie nośnika.
4. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawartość DOTAP stanowi korzystnie 27% wagowych w rdzeniu nośnika.
5. Zastosowanie kompozycji lipidowej według zastrz. 1-4 do otrzymywania lipidowego nośnika do leków genetycznych stosowanych w terapii genowej.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL383287A PL208054B1 (pl) | 2007-09-06 | 2007-09-06 | Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie |
| PCT/PL2008/000062 WO2009031911A1 (en) | 2007-09-06 | 2008-09-02 | Cationic liposome carrier for genetic drugs |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL383287A PL208054B1 (pl) | 2007-09-06 | 2007-09-06 | Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL383287A1 PL383287A1 (pl) | 2009-03-16 |
| PL208054B1 true PL208054B1 (pl) | 2011-03-31 |
Family
ID=40325840
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL383287A PL208054B1 (pl) | 2007-09-06 | 2007-09-06 | Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL208054B1 (pl) |
| WO (1) | WO2009031911A1 (pl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2014014196A (es) * | 2012-05-23 | 2015-08-14 | Univ Ohio State | Composiciones de nanoparticulas de albumina recubiertas con lipido y metodos de preparacion y metodo de uso de las mismas. |
| US10253315B2 (en) * | 2012-08-30 | 2019-04-09 | Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives | Method for transfection of nucleic acids into eukaryotic cells in 3D scaffold |
| PL233741B1 (pl) | 2014-04-18 | 2019-11-29 | Wroclawskie Centrum Badan Eit Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia | Kompozycja lipidowa sluzaca do wytworzenia kierowanego za pomoca przeciwcial liposomowego nosnika lekow genetycznych oraz jej zastosowanie |
| PL407947A1 (pl) * | 2014-04-18 | 2015-10-26 | Wrocławskie Centrum Badań Eit + Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością | Ukierunkowana, liposomowa postać kompleksu oligonukleotyd-polietylenoimina, jej zastosowanie oraz sposób otrzymywania |
| WO2017220099A1 (en) | 2016-06-24 | 2017-12-28 | Statens Serum Institut | Adjuvants with modified drainage properties |
| CN110101664A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-09 | 西安交通大学医学院第一附属医院 | 用于递送具有特异性剪切hpv16型基因功能的核酸类药物的系统及其制备方法 |
| CN111603571A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-09-01 | 中国药科大学 | 线粒体靶向类脂质载体Mito-Aliposome、其复合物，制备方法和用途 |
| CN114699420A (zh) * | 2022-03-08 | 2022-07-05 | 南方科技大学 | 一种用于治疗前列腺癌组合物及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI225412B (en) * | 1997-06-23 | 2004-12-21 | Sequus Pharm Inc | Liposome-entrapped polynucleotide composition and method |
| CA2445947A1 (en) * | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Targeted Genetics Corporation | Lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| KR20060130057A (ko) * | 2003-11-21 | 2006-12-18 | 알자 코포레이션 | 절단가능한 ｐｅｇ 표면 변형을 갖는 리포좀-ｄｎａ복합체에 의해 매개되는 유전자 송달 |
-
2007
- 2007-09-06 PL PL383287A patent/PL208054B1/pl unknown
-
2008
- 2008-09-02 WO PCT/PL2008/000062 patent/WO2009031911A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2009031911A1 (en) | 2009-03-12 |
| PL383287A1 (pl) | 2009-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Leung et al. | Lipid nanoparticles for short interfering RNA delivery | |
| US6120798A (en) | Liposome-entrapped polynucleotide composition and method | |
| Ko et al. | Self-assembling micelle-like nanoparticles based on phospholipid–polyethyleneimine conjugates for systemic gene delivery | |
| Paleos et al. | Formation of artificial multicompartment vesosome and dendrosome as prospected drug and gene delivery carriers | |
| Khatri et al. | Development and characterization of siRNA lipoplexes: effect of different lipids, in vitro evaluation in cancerous cell lines and in vivo toxicity study | |
| PL208054B1 (pl) | Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie | |
| US20100285111A1 (en) | Self-assembling micelle-like nanoparticles for systemic gene delivery | |
| US20180049991A1 (en) | Oligonucleotide Lipid Nanoparticle Compositions, Methods of Making and Methods of Using the Same | |
| ES2229534T3 (es) | Complejos en forma de particulas estables, con carga global neutra o negativa de estructura laminar. | |
| Nsairat et al. | Recent advances in using liposomes for delivery of nucleic acid-based therapeutics | |
| EP2892505B1 (en) | Lipid assemblies comprising anionic lysolipids and use thereof | |
| JP2002538096A (ja) | 生理活性複合体のリポソームへのカプセル化 | |
| Momekova et al. | Long-circulating, pH-sensitive liposomes sterically stabilized by copolymers bearing short blocks of lipid-mimetic units | |
| Ying et al. | Delivery of kinesin spindle protein targeting siRNA in solid lipid nanoparticles to cellular models of tumor vasculature | |
| Palmer et al. | Transfection properties of stabilized plasmid–lipid particles containing cationic PEG lipids | |
| JP2007524604A (ja) | 非対称の脂質被膜を有する脂質粒子およびその製造方法 | |
| Dreaden et al. | RNA‐peptide nanoplexes drug DNA damage pathways in high‐grade serous ovarian tumors | |
| US20130195962A1 (en) | Lipid membrane structure | |
| WO2014030601A1 (ja) | アニオン性を有する新規ナノバブルポリ－リポ・プレックスの製造方法 | |
| Sharma et al. | Liposomes: vesicular system an overview | |
| Navarro et al. | The “non-viral” approach for siRNA delivery in cancer treatment: a special focus on micelles and liposomes | |
| Nele et al. | Lipid nanoparticles for RNA delivery: Self-assembling vs driven-assembling strategies | |
| Wölk et al. | Lipid-Based Nanosystems for Gene and Drug Co-delivery in Cancer Therapy | |
| JP2004520288A (ja) | 中性及び陰イオン性の遺伝子送達用コロイド粒子 | |
| Arpac | Overcoming biological barriers by lipid-based nanocarriers |