PL203281B1 - Zastosowanie supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) i kompozycja spożywcza lub farmaceutyczna - Google Patents
Zastosowanie supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) i kompozycja spożywcza lub farmaceutycznaInfo
- Publication number
- PL203281B1 PL203281B1 PL350776A PL35077600A PL203281B1 PL 203281 B1 PL203281 B1 PL 203281B1 PL 350776 A PL350776 A PL 350776A PL 35077600 A PL35077600 A PL 35077600A PL 203281 B1 PL203281 B1 PL 203281B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cells
- bacteria
- strain
- milk
- culture
- Prior art date
Links
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 title abstract description 26
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title abstract description 25
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title abstract description 23
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 title abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 14
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 10
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 7
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 6
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims description 5
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 241001468155 Lactobacillaceae Species 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 70
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 56
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 29
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 14
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 13
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 13
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 12
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 12
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 11
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 8
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 8
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 8
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 8
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 8
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 4
- 230000017307 interleukin-4 production Effects 0.000 description 4
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010048832 Colon adenoma Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 241001607429 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium str. SL1344 Species 0.000 description 3
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000741 diarrhetic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002953 anti-rotaviral effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108700010850 rotavirus proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000011767 Acute-Phase Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062271 Acute-Phase Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 description 1
- 101100421200 Caenorhabditis elegans sep-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000224432 Entamoeba histolytica Species 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 1
- 101710168537 High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 description 1
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241001493038 Rotavirus G4 Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000702678 Simian rotavirus A/SA11 Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 208000037063 Thinness Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000798 anti-retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000000369 enteropathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000009920 food preservation Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 1
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 235000016046 other dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 229960005404 sulfamethoxazole Drugs 0.000 description 1
- JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N sulphamethoxazole Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1 JLKIGFTWXXRPMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 206010048828 underweight Diseases 0.000 description 1
- 210000002438 upper gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G9/00—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor
- A23G9/32—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G9/36—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G9/363—Frozen sweets, e.g. ice confectionery, ice-cream; Mixtures therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C19/00—Cheese; Cheese preparations; Making thereof
- A23C19/06—Treating cheese curd after whey separation; Products obtained thereby
- A23C19/061—Addition of, or treatment with, microorganisms
- A23C19/062—Addition of, or treatment with, microorganisms using only lactic acid bacteria, e.g. pediococcus, leconostoc or bifidus sp., or propionic acid bacteria; Treatment with non-specified acidifying bacterial cultures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C2270/00—Aspects relating to packaging
- A23C2270/05—Gelled or liquid milk product, e.g. yoghurt, cottage cheese or pudding being one of the separate layers of a multilayered soft or liquid food product
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S426/00—Food or edible material: processes, compositions, and products
- Y10S426/807—Poultry or ruminant feed
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/853—Lactobacillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Confectionery (AREA)
- Cereal-Derived Products (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 (NCC 2461) i kompozycja spożywcza lub farmaceutyczna.
Wynalazek niniejszy dotyczy zastosowania supernatantu nowych mikroorganizmów z rodziny Lactobacillaceae, szczególnie z rodzaju Lactobacillus, przydatnych do zapobiegania i leczenia biegunki.
Organizmy, które wytwarzają kwas mlekowy jako główny produkt przemiany materii, są znane od dawna. Bakterie te mogą znajdować się w mleku bądź w zakładach przetwórstwa mleczarskiego, w żywych lub rozkładających się roślinach ale tak że w jelitach ludzi i zwierząt. Mikroorganizmy te, określane mianem „bakterie kwasu mlekowego, tworzą niejednorodną grupę i obejmują na przykład bakterie z rodzaju Lactococcus, Lactobacillus, Streptococcus, Bifidobacterium, Pediococcus itp.
Bakterie kwasu mlekowego są stosowane jako czynniki fermentacyjne do konserwowania żywności, gdzie do hamowania rozwoju bakterii powodujących jej psucie się wykorzystane jest niskie pH i działanie produktów fermentacji powstających podczas fermentacji. Wreszcie bakterie kwasu mlekowego używane są do wytwarzania wielu różnych produktów żywnościowych, takich jak ser, jogurt i inne produkty mleczarskie.
Ostatnio zwrócono uwagę na pewne szczepy bakterii kwasu mlekowego, które, spożyte, wykazują cenne własności dla ludzi i zwierząt. W szczególności stwierdzono, że pewne szczepy Lactobacillus i Bifidobacterium mogą zasiedlać śluzówkę jelita i pomagają w utrzymaniu dobrego stanu zdrowia ludzi i zwierząt.
Nawiązując do tego, w patencie EP 0 768 375 ujawniono pewne szczepy bakterii z rodzaju Bifidobacterium, zdolne do zasiedlania jelita i przylegania do jego komórek.
Bifidobakterie opisane w tym patencie pomagają w immunomodulacji i są zdolne do kompetycyjnego zakłócania przywierania bakterii patogennych do komórek jelita pomagając w utrzymaniu dobrego stanu zdrowia organizmu ludzkiego lub zwierzęcego.
W ciągu ostatnich kilku lat badania skupione były na potencjalnym zastosowaniu bakterii kwasu mlekowego jako czynników probiotycznych. Za probiotyki uważa się zdolne do życia preparaty mikrobiologiczne, chroniące naturalną mikroflorę jelitową, co ma wpływ na utrzymanie dobrego stanu zdrowia.
Preparat mikrobiologiczny może być powszechnie akceptowany jako probiotyk w przypadku, gdy mikroby w nim zastosowane są skuteczne, a ich sposób działania jest znany. Uważa się, że probiotyki przylegają do śluzówki jelita oraz zasiedlają drogi jelitowe i ponadto zapobiegają rozwojowi szkodliwych mikroorganizmów w jelitach. Warunkiem wstępnym decydującym o działaniu probiotyków jest dotarcie mikroorganizmów probiotycznych do śluzówki jelit w odpowiedniej, zdolnej do życia formie, nie zniszczonych w górnym odcinku przewodu pokarmowego, zwłaszcza przez wpływ niskiego pH panującego w żołądku.
Nawiązując do tego, w patencie WO 97/00078 ujawniono jako probiotyczny pewien szczep, okreśłony jako Lactobacillus GG (ATCC 53103). Mikroorganizm ten jest w szczególności wykorzystany do zapobiegania lub leczenia reakcji nadwrażliwości, przez podawanie go biorcy z pokarmem poddanym procesowi hydrolizy z udziałem pepsyny i/lub trypsyny. Wyselekcjonowany szczep bakterii Lactobacillus opisano jako wykazujący właściwości adhezyjne i kolonizacyjne, a także mający układ enzymów proteazowych, z udziałem których materiał białkowy zawarty w pożywieniu jest dalej hydrolizowany przy udziale proteaz wydzielanych przez swoisty szczep Lactobacillus. Sposób omówiony w tym dokumencie prowadzi do wychwytu materiału białkowego przez jelita, tak, że materiał ten nie wykazuje już istotnych ilości materiału alergennego.
W patencie EP 0 577 903 dokonano odniesienia do zastosowania takich bakterii kwasu mlekowego, które mają zdolność do zastąpienia Helicobacter pylori, uznanej przyczyny rozwoju wrzodów, w przygotowaniu preparatu wspierającego leczenie lub profilaktykę choroby wrzodowej związanej z dział aniem Helicobacter pylori.
W dokumencie WO 99/29833 opisano konkretny szczep, LMG P 17806, który niesie trzy plazmidy o określonym rozmiarze. Opisano, że szczep ten jest zdolny do zapobiegania inwazji Salmonella typhimurium na komórki jelita.
W stanie wiedzy dotycz ą cej przydatnych wł a ś ciwoś ci okreś lonych szczepów bakterii kwasu mlekowego istnieje zapotrzebowanie na dodatkowe szczepy bakterii kwasu mlekowego, które są korzystne dla zachowania dobrego stanu zdrowia ludzi i/lub zwierząt.
PL 203 281 B1
W konsekwencji, rozwiązaniem według niniejszego wynalazku jest zastosowanie supernatantów z dodatkowych szczepów bakterii wykazujących nowe, korzystne dla ludzi i zwierząt własności.
W powyż szym zastosowaniu wykorzystano supernatanty nowych mikroorganizmów, mianowicie bakterii kwasu mlekowego, należących do rodzaju Lactobacillus o zdolności zapobiegania kolonizacji śluzówki jelita patogennymi bakteriami wywołującymi biegunki i zapobiegania infekcji komórek nabłonka jelit przez rotawirusy. Wynalazek dotyczy zastosowania supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116 (NCC 2461) do wytwarzania doustnego materiału nośnikowego, którym jest kompozycja spożywcza wybrana z mleka, jogurtu, twarogu, sera, fermentowanych mlek, fermentowanych produktów opartych na mleku, lodów, fermentowanych produktów zbożowych, mleka w proszku, mieszanki dla niemowląt.
Korzystnie materiał nośnikowy jest stosowany do leczenia i/lub profilaktyki zaburzeń towarzyszących biegunkom.
Wykazano, że drobnoustrój, którego supernatant wykorzystano w zastosowaniu według wynalazku wykazuje następujące własności: jest gram-dodatni, katalazo-ujemny, ujemny pod względem wytwarzania NH3 z argininy i ujemny pod względem wytwarzania CO2. Wytwarza L(+) kwas mlekowy, jest zdolny do wzrostu w obecności soli żółciowych w stężeniu do około 0,4% i może zasadniczo zapobiegać infekcji komórek nabłonka przez rotawirusy.
Supernatanty szczepu CNCM 1-2116 mogą być użyte do przygotowania różnych materiałów nośnikowych, takich jak mleko, jogurt, twaróg, zsiadłe mleko, mleczne produkty fermentowane, zbożowe produkty fermentowane, produkty wytwarzane w oparciu o mleko w proszku, mieszanki dla niemowląt i mogą być zawarte w tych materiałach nośnikowych w ilości od około 105 cfu/g do około 1011 cfu/g. W przypadku niniejszego wynalazku skrót cfu oznacza „jednostkę tworzącą kolonię określoną jako ilość komórek bakteryjnych ujawnioną przez zliczanie mikrobiologiczne na płytkach agarowych.
Wynalazek obecny dotyczy również kompozycji spożywczej lub farmaceutycznej, która zawiera supernatant z hodowli szczepu Lactobacillus CNCM I-2116 (NCC 2461).
Korzystnie kompozycja jest wybrana z mleka, jogurtu, twarogu, sera, fermentowanych mlek, fermentowanych produktów opartych na mleku, lodów, fermentowanych produktów zbożowych, mleka w proszku, mieszanki dla niemowlą t, tabletek, ciekł ych zawiesin bakteryjnych, suchych doustnych dodatków pokarmowych, mokrych doustnych dodatków pokarmowych, suchej lub mokrej żywności w tubkach.
Aktywność supernatantów u szczepu CNCM I-2116 w jelicie osobnika jest zależna od dawki. Im więcej supernatantu tego szczepu wprowadza się do powyższego spożywanego materiału pokarmowego lub kompozycji farmaceutycznej, tym wyższa jest jego aktywność ochronna i/lub lecznicza. Supernatant szczepu CNCM I-2116 nie jest szkodliwy dla ludzi i zwierząt.
Opis figur:
Na figurze 1 przedstawiono schemat ilustrujący badanie przesiewowe hodowli komórkowej określające właściwości ochronne szczepów bakteryjnych chroniących przed rotawirusem.
Na figurze 2 przedstawiono zakwaszenie szczepu Lactobaciiius casei CNCM 1-2116 (określonego jako ST11) w różnych pożywkach wzrostowych.
Na figurze 3 przedstawiono wskaźnik przeżycia szczepu Lactobaciiius casei ST11 w temperaturze 10°C mierzony w ciągu 30 dni.
Na figurze 4 przedstawiono wzorzec mRNA interleukiny IL-12 i IL-10 w mysich komórkach przylegających pochodzących ze szpiku kostnego po inkubacji komórek z serią kolejnych rozcieńczeń ST11.
Na figurze 5 przedstawiono wynik różnicowania Th2 jako wynik malejącego wytwarzania IL-4.
W obszernych opracowaniach prowadzących do niniejszego wynalazku zgłaszający badali niemowlęce kały i wyizolowali z nich różnorodne szczepy bakterii. Następnie badano zdolność tych szczepów bakterii do zapobiegania infekcji komórek nabłonka przez rotawirusy, o których wiadomo, że wywołują biegunkę.
Badano przesiewowe własności hamujące rozwój rotawirusa u kilku rodzajów bakterii zawierających Lactobacilus, Lactococcus i Streptococcus. Testy prowadzono zasadniczo na trzech serotypach rotawirusa (serotypy G1, G3 i G4) stanowiących główny czynnik etiologiczny biegunek wirusowych u ludzi.
Różne bakterie kwasu mlekowego hodowano w odpowiedniej pożywce, takiej jak MRS, Hugo-Jago lub M17, w temperaturze od około 30 do 40°C, co odpowiada temperaturze optymalnej dla wzrostu
PL 203 281 B1 bakterii. Po osiągnięciu stacjonarnej fazy wzrostu bakterie odwirowywano i zawieszano w fizjologicznym roztworze NaCl. W okresie pomiędzy poszczególnymi testami przechowywano bakterie w stanie zamrożonym (-20°C).
Testy rotawirusowe
Przygotowano różne roztwory podstawowe rotawirusów przez zakażenie zlewnych jednowarstwowych komórek. Rotawirusy inkubowano przed infekcją. Komórki infekowano 20 dawkami zakaźnej hodowli tkankowej.
Właściwości antyrotawirusowe oceniano na podstawie dwóch różnych protokołów. Zgodnie z pierwszym protokołem badano różne szczepy bakteryjne pod względem ich bezpoś rednich interakcji z rotawirusem, podczas gdy w trakcie drugiego protokoł u przeprowadzono badanie przesiewowe bakterii pod względem ich interakcji z komórkowymi receptorami rotawirusa. Protokół pierwszy obejmował kontaktowanie odpowiedniej zawiesiny bakteryjnej z różnymi szczepami rotawirusa i inkubowania jej w odpowiednim oś rodku. Nastę pnie wirusowo-bakteryjną mieszaninę dodawano do jednowarstwowych niezróżnicowanych komórek ludzkiego gruczolaka okrężnicy HT-29 i kontynuowano inkubację. Później oceniano replikację wirusa.
Protokół drugi obejmował inkubowanie odpowiedniej zawiesiny bakterii najpierw z jednowarstwowymi niezróżnicowanymi komórkami ludzkiego gruczolaka okrężnicy HT-29, a następnie dodanie wirusa. Po dalszej inkubacji oznaczono replikację wirusa.
Replikację rotawirusa można z łatwością ocenić przez barwienie histoimmunologiczne białek rotawirusa w zainfekowanych komórkach.
Działanie hamujące wobec rotawirusa przypisywano danej bakterii, gdy liczba zainfekowanych komórek w hodowli komórkowej inokulowanej rotawirusem i wskazaną bakterią była zmniejszona o 90% w porównaniu z komórkami inokulowanymi jedynie rotawirusem.
Spośród 260 pierwotnie izolowanych różnych szczepów bakterii zaledwie w 9 przypadkach można było wykazać zasadniczo zahamowaną replikację rotawirusa. Stwierdzono, że bakterie te należą do rodzaju Lactobacillus podgatunek rhamnosus lub paracasei. Jeden szczep określony jako Lactobacillus casei ST11, zdeponowany zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim pod numerem depozytu NCC 2461 (1-2116), wykazał szczególną skuteczność w zapobieganiu zakażeniu komórek ludzkich przez rotawirusy. Ponadto, ten konkretny szczep wykazuje znakomite właściwości wzrostowe, jak to można przedstawić przez zakwaszenie w różnych pożywkach. Wykazuje on również wysoki wskaźnik przeżycia w czasie przechowywania w niskich temperaturach około 10°C, co sprawia, że może być doskonałym kandydatem do włączenia do żywności lub kompozycji farmaceutycznych, które należy przechowywać w warunkach lodówki.
Testy przeciwko bakteriom patogennym:
Dla określenia właściwości przeciwbakteryjnych wybrano następujące podejścia. Zgodnie z jednym protokołem hodowany szczep Lactobacillus badano na zdolność do zapobiegania przyleganiu patogennych bakterii wywołujących biegunkę do komórek jelita lub inwazji patogenów do komórek jelita, odpowiednio. Na koniec doprowadzono do kontaktu komórek jelitowych z patogennymi bakteriami i hodowanym szczepem Lactobacillus i odpowiednio oceniono stopień przylegania lub inwazji. Zgodnie z drugim protokołem supernatant hodowli komórkowej szczepów Lactobacillus stosowany zgodnie z niniejszym wynalazkiem dodano razem z patogennymi drobnoustrojami do komórek jelitowych i określono odpowiednio stopień adhezji lub inwazji. W trakcie eksperymentowania wykazano, że hodowany Lactobacillus i supernatant okazały się być nadzwyczaj skuteczne w zapobieganiu zarówno przyleganiu jak i inwazji do komórek jelitowych wskazując, że składniki metaboliczne wydzielane przez nowy mikroorganizm są prawdopodobnie odpowiedzialne za aktywność przeciwbiegunkową w odniesieniu do patogennych bakterii.
Oprócz powyższych wyników badań można było wykazać, że szczep ten nieoczekiwanie wykazuje właściwości antyalergiczne, co przejawia się tym, że szczep ten ma wpływ na syntezę różnych mediatorów immunologicznych.
Przyjmuje się na ogół, że za humoralną odpowiedź immunologiczną oraz reakcje alergiczne odpowiedzialne są limfocyty T CD4+ o fenotypie typu 2 (Th2). Limfocyty Th2 charakteryzują się zwiększoną produkcją interleukiny 4 (IL-4), cytokiny wymaganej przy sekrecji IgE, klasy przeciwciał odgrywającej główną rolę w reakcjach alergicznych.
Różnicowanie limfocytów Th2 jest zaburzane przez IFN-γ, szczególną cytokinę produkowaną przez wzajemnie wykluczające się limfocyty Th1 typu CD4+ limfocytów T. Limfocyty Th1 są z kolei silnie indukowane przez interleukinę 12 (IL-12). W przeciwieństwie do tej interleukiny, inna cytokina
PL 203 281 B1
IL-10 ma silny wpływ supresyjny na proliferację limfocytów Th1, i dlatego też uważa się, że pełni ona ważną rolę w mechanizmach immunosupresyjnych.
Podsumowując, zarówno IL-12 jak i IL-10 mają silny wpływ regulacyjny na rozwój limfocytów T CD4+, oddziałując na rozwój podgrupy Th1. IL-12 jest kluczową cytokiną regulatorową w procesie indukcji rozwoju Th1, hamującą tym samym wytwarzanie odpowiedzi Th2. Dlatego główny szlak hamowania limfocytów Th2 jest upatrywany w stymulacji syntezy IL-12 przez komórki pomocnicze.
Jest dobrze znanym faktem, iż niektóre składniki bakterii gram-ujemnych, takie jak LPS, wywołują wysoki poziom IL-12 w komórkach przylegających, takich jak makrofagi i komórki dendrytyczne. Zgodnie z tym, wykazano, że bakterie gram-ujemne mogą kierować rozwój limfocytów T CD4+ w kierunku fenotypu Th1.
Mikroorganizm ST11, jako przykład szczepu Lactobacillus prezentowanego w tym wynalazku, był testowany pod względem potencjalnej roli w indukowaniu cytokin związanych z regulowaniem procesu różnicowania limfocytów T CD4+. W szczególności, badano wpływ ST11 na fenotyp limfocytów T CD4+ przechodzących różnicowanie w kierunku Th2.
W odniesieniu do powyższego, zdolność ST11 do indukowania syntezy mRNA, kodującego te dwie cytokiny regulatorowe, w mysich komórkach przylegających pochodzących ze szpiku kostnego, porównano z czterema innymi szczepami Lactobacillus oraz gram-ujemną bakterią (E. coli K12) użytą w charakterze kontroli. Poziom mRNA mierzono przy pomocy półilościowej techniki RT-PCR po sześciogodzinnej inkubacji komórek z seryjnymi rozcieńczeniami bakterii w zakresie od 109 do 107cfu/ml.
Choć wszystkie szczepy Lactobacillus mogą indukować do pewnego stopnia transkrypcję mRNA IL-12, szczep ST11 okazał się mieć najsilniejsze właściwości indukcyjne, ponieważ silny sygnał PCR mógł być wykrywany nawet przy najmniejszej dawce bakterii. Rzeczywiście, zdolność ST11 do indukowania transkrypcji mRNA IL-12 była tak silna, jak wykazywana przez E. coli. Indukcja mRNA interleukiny IL-10 była generalnie słabsza niż w przypadku mRNA IL-12, ponieważ sygnał wykrywano jedynie przy wyższych dawkach bakterii. W porównaniu z innymi szczepami Lactobacillus oraz kontrolą E. coli, szczep ST11 najsilniej indukował transkrypcję mRNA IL-10.
Zatem można uznać, że szczep ST11 efektywnie indukuje cytokiny immunoregulacyjne związane z procesem różnicowania limfocytów T CD4+. Jego silne zdolności do indukowania IL-12 czynią go odpowiednim kandydatem do hamowania odpowiedzi Th2, a jego wymierna zdolność indukowania IL-10 może zapobiegać odpowiedziom zapalnym.
W dodatku do powyższych wniosków, oceniano również, czy ST11 ma wpływ hamujący na limfocyty T CD4+ ulegające różnicowaniu w kierunku Th2, oraz pozytywny wpływ na funkcje Th1. Użyto dobrze opracowanego systemu różnicowania komórek w hodowli, w którym limfocyty prekursorowe T CD4+ były aktywowane poliklonalnie i modulowane do przejścia różnicowania w kierunku Th1 lub Th2, w zależności od rodzaju dostarczonych w pożywce hodowlanej ko-stymulatorów. Różnicowanie Th1/Th2 indukowano podczas siedmiodniowej hodowli pierwotnej, po której komórki ponownie stymulowano przez dwa dni w hodowli wtórnej zawierającej samą pożywkę, a nagromadzenie specyficznego fenotypu (Th1 lub Th2) oceniano na podstawie pomiaru produkowanych cytokin obecnych w supernatancie (IFN-γ wobec IL-4).
Powszechnie wiadomo, że limfocyty prekursorowe T CD4+ od myszy BALB/c korzystnie różnicują się w kierunku przeważającego fenotypu Th2 (wysoki poziom IL-4, niski poziom IFN-γ w supernatantach z hodowli wtórnej) po aktywacji w warunkach obojętnych (sama pożywka w hodowli pierwotnej). Ten fenotyp może całkowicie rewertować w kierunku wzoru Th1 (wysoki poziom IFN-γ, niski poziom IL-4) po dodaniu do pierwotnej hodowli blokującego przeciwciała monoklonalnego przeciwko IL-4.
W celu zbadania potencjalnej roli ST11 w inhibicji Th2, podczas pierwotnej hodowli aktywowano oczyszczone komórki prekursorowe T CD4+ od myszy BALB/c w obecności komórek przylegających ze szpiku kostnego, jako komórek pomocniczych. Komórki te hodowano wspólnie albo w samej pożywce, albo w obecności LPS (1 mg/ml), lub ST11 (108 cfu/ml), lub też innego szczepu Lactobacillus (108 cfu/ml). Następnie płukano komórki i ponownie oczyszczano limfocyty T CD4+, które znów stymulowano w hodowli wtórnej przeprowadzanej w samej pożywce. Poziom cytokin produkowanych przez zróżnicowane limfocyty T CD4+ mierzono po dwóch dniach. Zgodnie z oczekiwaniami, komórki ulegające różnicowaniu w samej pożywce wykazywały dominujący fenotyp Th2. Dodanie ST11 do hodowli pierwotnej silnie modyfikowało wynik różnicowania Th2, prowadząc do ośmiokrotnego zmniejszenia produkcji IL-4. Ta inhibicja przybierała rozmiary podobne do procesu inhibicji obserwowanego w hodowlach uzyskanych z komórek różnicujących się w obecności LPS. Natomiast inny
PL 203 281 B1 szczep Lactobacillus nie wykazywał zauważalnego wpływu na poziom IL-4. Co ciekawe, poziom IFN-γ nie ulegał podwyższeniu po dodaniu ST11 do hodowli pierwotnej.
Podsumowując, ST11 specyficznie zaburzał produkcję IL-4 przez limfocyty T CD4+ ulegające różnicowaniu, lecz nie zwiększał w istotny sposób wydzielania IFN-γ. Fakt nie-zwiększania produkcji IFN-γ pod wpływem ST11 może wynikać ze zdolności ST11 do indukowania IL-10, co w konsekwencji prowadzić może do niewielkiego efektu zapalnego pomimo aktywności Th2. Można więc wykazać, że ST11 jest szczepem Lactobacillus wykazującym wyraźny charakter anty-Th2, co czyni ten szczep doskonałym kandydatem do roli bakterii o aktywności przeciwalergicznej i probiotycznej.
Niniejszy wynalazek zostanie opisany w następujących przykładach.
Pożywki i roztwory:
MRS (Difco)
Hugo-Jago (Tryptone Difco 30 g/l., ekstrakt drożdżowy Difco 10 g/l., laktoza 5 g/l. Difco, KH2PO4 5g/l., wyciąg wołowy Difco 2g/l, agar Difco 2 g/l)
M17 (Difco)
M199 (Seromed) roztwór Ringera (Oxoid)
PBS (NaCl 8 g/l, KCl 0,2 g/l, Na2HPO4 1,15 g/l, KH2PO4 0,2 g/l) bulion fosforanu tryptozy (Flow) roztwór trypsyna- EDTA (Seromed)
Rotawirus ludzki Wa (serotyp G1) i rotawirus małpi SA-11 (serotyp G3) otrzymano z P.A. Offit, Children's Hospital of Philadelphia, USA. Mieszany wirus DS.-1xRRV otrzymano od A Kapikian, NIH Bethesda, USA. Ludzki rotawirus Hochi, serotyp 4 otrzymano od P. Bachmann, University of Munich, Niemcy.
E. coli DAEC C 1845 otrzymano z Washington University, Seattle, a E. coli JPN15 otrzymano z Center for Vaccine Development of the University of Maryland, USA). Szczep Salmonella typhimurium SL1344 otrzymano z departamentu mikrobiologii, Stanford University, CA, USA).
P r z y k ł a d 1
Izolacja bakterii mlekowych z kału niemowląt
Świeży kał zebrano z pieluszek 16 zdrowych niemowląt (wiek 15-27 dni). 1 g świeżego kału umieszczono w warunkach beztlenowych w celu transportu do laboratorium. W ciągu dwóch godzin od pobrania przeprowadzono analizę mikrobiologiczną, polegającą na seryjnych rozcieńczeniach próbek w roztworze Ringera i posiewach na podłożach selekcyjnych. Do wyizolowania bakterii mlekowych używano agaru MRS z dodatkiem antybiotyków (fosfomycyna 80 μg/ml, sulfametoksazol 93 μg /ml, trimetoprim 5 μg /ml). Płytki inkubowano w temperaturze 37°C przez 48 godzin. Kolonie wybrano losowo i oczyszczono. Izolowane bakterie scharakteryzowano pod kątem fizjologicznym i genetycznym.
P r z y k ł a d 2
Testowanie szczepów w hodowli komórkowej na aktywność antyrotawirusową
Wyselekcjonowano kilka rodzajów bakterii (Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus ) i zbadano je pod względem działania antyrotawirusowego w hodowli komórkowej za pomocą testów inhibicyjnych. Rodzaj Lactococcus był reprezentowany przez pojedynczy gatunek (Lc. lactis) zawierający dwa podgatunki (Lc. lactis supsp. lactis i cremoris). Przebadano 30 szczepów. Rodzaj Streptococcus był reprezentowany przez pojedynczy gatunek (S. thermophilus), w którym zbadano 45 szczepów. Rodzaje Leuconostoc i Propionibacterium były reprezentowane przez tylko jeden gatunek, (6 szczepów), podczas gdy każdy z rodzajów Enterococcus i Staphylococcus był reprezentowany przez 2 gatunki, a całkowita liczba szczepów wynosiła 17.
W sumie przebadano 260 szczepów bakterii na aktywność hamowania rozwoju rotawirusów.
Protokół 1:
Zmieszano 30 μl zawiesiny bakterii (zawierającej średnio 3x106 bakterii) z 70 μl pożywki M199 wzbogaconej 10% bulionu fosforanu tryptozy (Flow) i 5% roztworem trypsyna- EDTA (Seromed) (rozcieńczonej w stos. 1 : 4 w przypadku komórek HT29) oraz 100 μl zawiesiny wirusa w pożywce wzbogaconej M199. Mieszaninę wirusowo-bakteryjną inkubowano najpierw przez 1 godzinę w temp. 4°C, a następnie przez 1 godzinę w temp. 37°C. Niezróżnicowane komórki ludzkiego gruczolaka okrężnicy HT-29, hodowane jako konfluentne jednowarstwy w 96-studzienkowych płytkach do mikromiareczkowania, płukano trzykrotnie w PBS, pH 7,2. Mieszaninę wirusowo-bakteryjną dodano do wyżej wymienionych, komórek i naczynka do mikromiareczkowania inkubowano przez 18 godzin, w inkubatorze Heraeus w obecności CO2. Replikację wirusa oznaczono w opisany poniżej sposób.
PL 203 281 B1
Protokół 2
Zmieszano 30 μl zawiesiny bakteryjnej (Supra) z 70 μl pożywki M199 wzbogaconej 10% bulionu fosforanu tryptozy (Flow) i 5% roztworem trypsyna-EDTA (Seromed), (rozcieńczonej w stosunku 1 : 4 w przypadku komórek HT-29) i naniesiono bezpośrednio na płytki do mikromiareczkowania. Po godzinnej inkubacji w 37°C do komórek w płytkach do mikromiareczkowania dodano 100 μl wirusa we wzbogaconej pożywce M199. Inkubację kontynuowano przez 18 godzin w inkubatorze (Heraeus). Ocenę replikacji wirusa opisano poniżej.
Replikację wirusa oceniono przez barwienie histoimmunologiczne białek rotawirusa w zainfekowanych bakteriach, co zostało opisane.
Jeden dzień po infekcji pożywkę usunięto z płytek, a komórki utrwalano bezwodnym etanolem absolutnym przez 10 minut. Etanol usunięto a płytki trzykrotnie przemyto buforem PBS. Następnie do każdej studzienki dodano 50 μl surowicy antyrotawirusowej (skierowanej głównie przeciwko białku VP6) wytworzonej przez króliki (otrzymane z ISREC University of Lausanne), rozcieńczonej w PBS w stosunku 1 : 2000 i dodano do każdej studzienki i inkubowano przez 1 godzinę, w temperaturze 37°C, pod przykryciem, w celu uniknięcia wysychania studzienek. Następnie surowicę odpornościową usunięto, a płytki trzykrotnie przemyto PBS. Kolejnym etapem było dodanie do każdej studzienki 50 μl przeciwciała z surowicy odpornościowej wytworzonej przez kozy przeciw króliczej immunoglobulinie G (IgG, sprzężonego z peroksydazą (GAR-IgG-PO; Nordic), rozcieńczonego w PBS w stosunku 1:500 i inkubowanie przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. Surowicę usunięto, a płytki po raz kolejny trzykrotnie przemyto PBS. Następnie dodano do każdej studzienki 100 ggl mieszaniny podłoża o następującym składzie: 10 ml 0,05 M Tris-chlorowodorku (pH 7,8), 1 ml H2O2 (30% Suprapur, rozcieńczonego wodą w stosunku 1:600; Merck) i 200 μl 3-amino-9-etylokarbazolu (0,1 g/10 ml etanolu przechowywanego w porcjach 200 gl, w temperaturze -80°C; A-5754; Sigma). Płytki inkubowano w temperaturze pokojowej przez co najmniej 30 minut. Następnie podłoże usunięto, a studzienki napełniono 200 gl wody, aby przerwać reakcję. Ogniska zakażonych komórek liczono przy użyciu mikroskopu odwróconego (Diavert; Leitz).
Jedynie kilka szczepów bakterii wchodziło w interakcję z rotawirusem. Spośród pierwotnie wybranych 260 komórek bakterii zaledwie 9 hamowało replikację rotawirusa w co najmniej jednym protokole. Szczep Lactobacillus paracasei NCC 2461 (ST11) wykazał wyjątkowo dużą aktywność przeciwko rotawirusowi serotyp 1, rotawirusowi SA-11 serotyp 3 i rotawirusowi Hochi serotyp 4.
P r z y k ł a d 3
Hodowanie komórek Caco-2
Do bakteryjnych (patogennych)testów inhibicyjnych wykorzystano jako model jelita linię komórkową Caco-2. Ta linia komórkowa wykazuje charakterystyczne dla komórek jelitowych cechy, takie jak np. polaryzacja, ekspresja enzymów jelitowych, produkcja niektórych polipeptydów strukturalnych itd.
2
Komórki hodowano na trzech różnych podłożach, a mianowicie na plastikowych szalkach (25 cm2, Corning) podczas wzrostu i rozmnażania, na odtłuszczonych i wysterylizowanych 6-studzienkowych płytkach szklanych (22x22 mm, Croning) podczas przeprowadzania testu adhezyjnego, oraz na 24-studzienkowych płytkach szklanych (Corning) podczas testów inhibicyjnych.
Po drugim dniu hodowli pożywka (DMEM) była zmieniana codziennie. Przed użyciem, do pożywki dodawano penicylinę ze streptomycyną (100 U/ml), amfoterynę (1 pg/ml) oraz FCS (20%), inaktywowana w temperaturze 56°C przez 30 minut. Hodowle prowadzono w temperaturze 37°C w atmosferze zawierającej 90% powietrza i 10% CO2. Komórki pasażowano co sześć dni. Odrywano komórki od ścianek traktując je buforem PBS zawierającym trypsynę (0,25%) i EDTA (3 mM, pH 7,2). W celu neutralizacji efektu trypsyny dodawano równą objętość FCS do uzyskanej zawiesiny komórek. Mieszaninę wirowano (10 minut przy 1000 obrotach na minutę), a osad używano do dalszej hodowli. Przenoszono około 3,5 x 105 komórek do nowego naczynia hodowlanego, i hodowano do uzyskania warstwy komórek w stadium konfluencji.
P r z y k ł a d 4
Hodowanie bakterii
ST11:
Szczep bakteryjny przechowywano w temperaturze -20°C w pożywce MRS zawierającej 15% glicerolu. Bakterie hodowano w warunkach beztlenowych w pożywce MRS a przed użyciem w teście inhibicyjnym pasażowano je dwukrotnie do nowej pożywki w odstępach 24-godzinnych. W teście stosowano bakterie w stężeniu 2 x 109 cfu/ml.
PL 203 281 B1
E. coli:
Używano dwóch szczepów E. coli, E. coli DAEC C 1845 (Diffuse Adhesion E. coli) oraz E. coli JPN15 (EPEC; Entero-Pathogenic E. coli).
Pierwszy pasaż po rozmrożeniu bakterii przeprowadzano używając agaru CFA - Muller Hinton, który znajduje zastosowanie w badaniach dotyczących modyfikowania ekspresji czynników adhezyjnych przez bakterie.
Przed każdym doświadczeniem inkubowano komórki bakteryjne w temperaturze 37°C, przenosząc je dwukrotnie do nowej pożywki w odstępach 24-godzinnych. Ponieważ JPN15 zawiera gen oporności na ampicylinę, podczas hodowli do selekcji używano tego antybiotyku.
Salmonella:
Szczep Salmonella typhimurium SL1344, którego używano w doświadczeniach, hodowano przed użyciem w pożywce LB.
P r z y k ł a d 5
Test inhibicyjny dla E. coli
Po drugim pasażu do nowej pożywki, patogenne szczepy bakterii były znakowane radioizotopem przy użyciu octanu-C14 w stężeniu 10 μ^/ml w pożywce LB. Bakterie inkubowano w tej pożywce przez 18 godzin w temperaturze 37°C.
Następnie poddawano zawiesinę bakteryjną wirowaniu (1041 g, 15 minut) w celu pozbycia się supernatantu zawierającego pozostały octan-C14. Osad zawieszano i płukano w PBS, po czym zawieszano komórki (w stężeniu około 108 komórek na ml) w sterylnym roztworze mannozy (1%). Wiadomo, iż mannoza hamuje niespecyficzną adhezję.
Różne patogenne szczepy bakterii (E. coli) poddawano kontaktowi z pojedynczą warstwą komórek Caco-2 (37°C, 10% CO2, 90% powietrze) przez trzy godziny. Te same doświadczenia przeprowadzano używając supernatantu (otrzymanego przez wirowanie przy 20000 obrotach na minutę przez 40 minut). W ramach kontroli, poddawano warstwę komórek Caco-2 kontaktowi z patogennymi bakteriami bez jednoczesnego dodawania ST11 lub supernatantu z hodowli. Po trzech godzinach inkubacji wymieniano pożywkę i płukano warstwę komórek trzy razy buforem PBS. Każdy etap płukania obejmował dwudziestokrotne zamieszanie roztworu PBS w celu całkowitego wyeliminowania niespecyficznej adhezji. Następnie lizowano komórki przez dodanie 1 ml węglanu sodowego i inkubację w temperaturze 37°C przez 40 minut. Po homogenizacji pobierano 250 μl i rozcieńczano w 5 ml płynu scyntylacyjnego (Hionic-fluor Packcard) i zliczano sygnał (Packard 2000). Procentowy udział patogennych bakterii które uległy adhezji do komórek Caco-2 obliczano wobec kontroli, której wartość przyjęto jako 100% (adhezji; lub inwazji w przykładzie 5).
P r z y k ł a d 6
Test inhibicyjny dla Salmonelli
Salmonella należy do bakterii, które dokonują inwazji komórek nabłonkowych i namnażają się w ich wnętrzu. W celu określenia aktywności inhibicyjnej szczepu ST11, inkubowano szczep Salmonella typhimurium SL1344 (według powyższego opisu) w pożywce zawierającej octan-C14 i poddawano doświadczeniom opisanym w przykładzie 4.
Po inkubacji płukano komórki Caco-2 buforem PBS w celu wyeliminowania wszystkich bakterii nieulegających adhezji. Następnie dodano pożywkę zawierającą gentamycynę (20 μg/ml) i kontynuowano inkubację przez 1 godzinę w temperaturze 37°C. Gentamycyna jest antybiotykiem, który nie penetruje komórek jelitowych, co pozwala na zabicie wszystkich zewnątrzkomórkowych mikroorganizmów, podczas gdy bakterie Salmonella, które wniknęły do komórek jelitowych, powinny przetrwać. Po dwukrotnym przepłukaniu komórek buforem PBS poddano je lizie przez dodanie sterylnej wody destylowanej, po czym dokonano pomiaru radioaktywności według opisu zawartego w przykładzie 4.
Wyniki doświadczeń 5 i 6 pokazano w fig. 6-9. Widać wyraźnie, że hodowane komórki ST11 a także supernatant hodowlany były wyjątkowo skuteczne jeżeli chodzi o zapobieganie adhezji i inwazji patogennych mikroorganizmów, wywołujących biegunkę, do komórek jelitowych.
P r z y k ł a d 7
Właściwości ST11
Szczep ST11 poddano inkubacji w płynie o właściwościach przypominających sok żołądkowy. Płyn przypominający sok żołądkowy przygotowano rozpuszczając pepsynę (3 g/l) w sterylnym roztworze soli (0,5% wagowo/objętościowy) i doprowadzając pH do wartości odpowiednio 2,0 i 3,0 przy użyciu stężonego HCl. Szczep ST11 hodowano w różnych ilościach powyższej pożywki i określono oporność mikroorganizmów.
PL 203 281 B1
Wyniki podsumowano w tabeli I, przedstawionej poniżej. T a b e a I a I
| pH | cfu/ml T=0 | cfu/ml T=1 min | cfu/ml T=15 min | cfu/ml T=30 min | cfu/ml T=60 min |
| 2,0 | 2,0 x 109 | 1,8 x 109 | 1,2 x 108 | 3,7 x 108 | 7,0 x 103 |
| 3,0 | 2,0 x 109 | 1,9 Xx109 | 1,7 x 109 | 1,7 x 109 | 8,4 x 108 |
Bakterie szczepu ST11 mają następujące właściwości, zdefiniowane według metod ujawnionych w The Genera of lactic acid bacteria wyd. B.J.B. Wood i W.H. Holzapfel, Blackie A&P.
- gram-dodatnie- katalazo-ujemne
- nie wytwarzają NH3 z argininy
- nie wytwarzają CO2
- wytwarzają kwas mlekowy L(+)
- rosną w obecności soli kwasu żółciowego w stężeniu do około 0,4%
P r z y k ł a d 8
Hodowla szczepu ST11 w różnych warunkach
Bakterie szczepu ST11 inkubowano w różnym czasie w temperaturze 37°C w pożywce pomidorowej (4% pomidorowy proszek uwodniony w destylowanej wodzie) uzupełnionej sacharozą (0; 0,5; 1; lub 2%), lub peptonem sojowym (0,5%), lub też glukozą (0,5%). Wyniki przedstawiono na fig. 2.
Bakterie szczepu ST11 dodawano następnie (w ilości 2,5 %) do pożywki składającej się z mąki ryżowej (3%), mąki pszennej (2%) oraz sacharozy (3%), i inkubowano w temperaturze 37°C do czasu osiągnięcia pH 4,4. Po ostudzeniu, produkt ten pakowano z dodatkiem witaminy C (lub bez) i przechowywano w temperaturze 10°C.
P r z y k ł a d 9
Komórki szpiku kostnego izolowano z kości udowych i kości piszczelowych ośmiotygodniowych myszy C57BL/6, wolnych od specyficznych patogenów, i inkubowano (w stężeniu 2 x 106 komórek/ml) w pożywce RPMI (Gibco) zawierającej 10% płodową surowicę bydlęcą, 1 mM L-glutaminy, 12 mM
Hepes, 0,05 mM 2-merkaptoetanolu, penicylinę (100 U/ml) oraz streptomycynę (100 μg/ml, wszystkie odczynniki z Gibco) przez 12 godzin w temperaturze 37°C w atmosferze 5% CO2. Nieprzylegające komórki odrzucano przeprowadzając trzy kolejne płukania w ciepłej pożywce hodowlanej, a pozostałe przylegające komórki zbierano i inkubowano w stężeniu 106 komórek/ml przez sześć godzin w obecności bakterii lub bez. Wcześniej ustalono, że sześć godzin reprezentuje optymalny punkt czasowy dla syntezy mRNA cytokiny przez komórki przylegające w odpowiedzi na LPS. Bakterie dodawano w różnych stężeniach w zakresie od 107 do 109 cfu/ml. Bakterie hodowano i przechowywano według powyższego opisu.
Pod koniec sześciogodzinnego okresu hodowli izolowano komórki przez wirowanie i lizowano je używając zestawu odczynników TRIzol (GibcoBRL, Nr kat. 15596-018), zgodnie z zaleceniami producenta. Całkowity RNA izolowano przez precypitację w izopropanolu, po czym uzyskiwano cDNA metodą odwrotnej transkrypcji przez 90 minut w temperaturze 42°C, używając 200 jednostek odwrotnej transkryptazy (Superscrit II, BRL) w objętości reakcyjnej 40 μ!, zawierającej 200 mM Tris (pH 8,3), 25 mM KCl, 1 μg/ml oligo-d(T)15 (Boehringer Mannheim) 1 mM DTT (Boehringer Mannheim) 4 mM każdego dNTP (Boehringer Mannheim) oraz 40 U/ml Rnasin (Promega). Startery i warunki dla reakcji PCR stosowano zgodnie z opisem w Kopf i in., (Jurnal of Experimental Medicine, 1996, Sep 1, 184(3):1127-36). Normalizowano ilości cDNA w próbkach używając starterów specyficznych wobec genu β-2-mikroglobuliny (należącego do grupy genów powszechnie wyrażanych). Produkty reakcji PCR rozdzielano na 2% żelu agarozowym i analizowano prążki w świetle UV.
Jak pokazano na fig. 4, szczep ST11 wykazał najsilniejszą indukcję mRNA IL-12 i IL-10, w zakresie porównywalnym do wartości obserwowanych dla kontroli pozytywnej (E. coli). Różnice są najlepiej widoczne przy małym stężeniu bakterii (107 cfu/ml).
P r z y k ł a d 10
Supresja syntezy IL-4 przez ST11
Limfocyty T CD4+ oczyszczono ze śledziony myszy BALB/c, wolnych od specyficznych patogenów, używając zestawu MiniMACS z firmy Miltenyi Biotec (Nr kat. 492-01). Limfocyty T CD4+ hodowano w stężeniu 2 x 105 komórek/ml w pożywce RPMI zawierającej płodową surowicę bydlęcą (10%),
PL 203 281 B1
L-glutaminę (1 mM), Hepes (12 mM), 2-merkaptoetanol (0,05 mM), penicylinę (100 U/ml) oraz streptomycynę (100 μg/ml) i aktywowano w ciągu tygodnia przez sieciowanie ze związanymi na płytce monoklonalnymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko CD3 (klon 2C11) i CD28 (klon 37.51, oba przeciwciała z firmy Pharmingen). Podczas hodowli pierwotnej, limfocyty T CD4+ hodowano wspólnie z komórkami przylegającymi ze szpiku kostnego (izolowanymi jak opisano powyżej), jako komórkami pomocniczymi, oraz z bakteriami ST11 (108 cfu/ml), lub bakteriami Lal (108 cfu/ml), lub 1 mg/ml LPS, lub też z samą pożywką. Po inkubacji, komórki płukano, a następnie znów oczyszczano limfocyty T CD4+ przy użyciu technologii z zestawem MiniMACS, i ponownie stymulowano je we wtórnej hodowli zawierającej samą pożywkę. Poziom cytokin produkowanych przez zróżnicowane limfocyty T CD4+ mierzono w supernatantach po dwóch dniach, używając metody kanapkowa ELISA (zestawy z firm Endogen i Pharmingen).
Wyniki przedstawiono na fig. 5. Komórki zróżnicowane w obecności samej pożywki wykazywały dominację fenotypu Th2, charakteryzującego się wysokimi poziomami IL-4. Dodatek bakterii ST11 do hodowli pierwotnych miał silny modulujący wpływ na wynik różnicowania Th2, co dawało ośmiokrotny spadek produkcji IL-4. Rozmiary tej inhibicji przypominały wartości obserwowane w hodowlach pochodzących od komórek zróżnicowanych w obecności LPS. W przeciwieństwie do tego, drugi szczep Lactobacillus nie miał mierzalnego wpływu na poziomy IL-4. Co ciekawe, poziomy IFN-γ nie wzrastały po dodaniu ST11 do hodowli pierwotnej.
Jak można zauważyć na podstawie powyższego, szczep wykorzystywany w niniejszym wynalazku może być dobrze przygotowany do wytwarzania żywnościowego lub farmaceutycznego materiału nośnikowego biorąc pod uwagę korzystne właściwości mikroorganizmu.
P r z y k ł a d 11
Szczep ST11 poddano testowi klinicznemu przeprowadzonemu w społeczności zamieszkującej obrzeża miasta Gwatemala, w którym sprawdzano zdolność tych bakterii do wpływania na przenoszenie się i doświadczanie ostrej choroby biegunkowej sezonu deszczowego przez większość dzieci z tego obszaru. Ogółem zarejestrowano w tym badaniu 203 dzieci, w wieku od 35 do 70 miesięcy, które otrzymywały porcję 1010 żywych organizmów (ST11) lub nie (placebo), w okresie karmienia przez 29 dni. Dzieci wyselekcjonowane do obu grup, testowej i kontrolnej (placebo), odpowiednio, miały typowe objawy niedowagi i obniżonego wzrostu (względem norm dla poszczególnych grup wiekowych) na skutek niedożywienia.
Przed rozpoczęciem testu karmienia u dzieci w wieku przedszkolnym, przeprowadzono analizę bezpieczeństwa testu w oparciu o badania in vitro oraz in vivo. Badania in vitro wykazały wzór oporności antybiotykowej podobny do tych, które obserwuje się w przypadku innych bakterii Lactobacillus, mających zastosowanie spożywcze i nie mających potencjału do tworzenia biogennych amin, degradacji mucyn oraz rozkładu soli kwasu żółciowego. W badaniu klinicznym opartym o grupę kontrolną (placebo), przeprowadzonym na 42 ochotnikach, stwierdzono, że ST11 jest dobrze tolerowany i nie wywołuje żadnych szkodliwych działań wśród potencjalnych objawów monitorowanych, takich jak wzdęcia z oddawaniem wiatrów, liczba stolców w ciągu dnia i ich konsystencja; poziom białek ostrej fazy w surowicy krwi również nie wzbudził żadnych zastrzeżeń co do potencjalnej możliwości wzbudzenia reakcji zapalnej.
Próbki testowe oraz placebo pakowano w saszetki wyprodukowane przez oddział Nestle Product Technology Center w Konolfingen (Szwajcaria), i wysyłano zamrożone do Gwatemali. Każda 10-gramowa saszetka zawierała nośnik o smaku czekoladowym i albo 0,2 g ST11 (1010 cfu), albo w przypadku placebo 0,2 g mleka w proszku. Nośnik o smaku czekoladowym składał się ze sproszkowanego ziarna kakaowego, cukru, lecytyny sojowej, waniliny i cynamonu. Saszetki przechowywano w temperaturze 4-6°C do dwóch godzin przed użyciem. Przed użyciem należało rozpuścić ich zawartość w 100 ml wody (dostarczonej przez Nestlee), wolnej od jakichkolwiek zanieczyszczeń bakteryjnych.
Zgodnie z zastosowanym protokołem, biegunkę zdefiniowano jako wystąpienie trzech lub więcej płynnych lub nieuformowanych wypróżnień w przeciągu 24 godzin. Epizod biegunkowy został zdefiniowany jako zdarzenie obejmujące występowanie objawów biegunki (trzy wypróżnienia biegunkowe w ciągu 24 godzin). Jego całkowitą długość w godzinach obliczano od momentu pierwszego z serii trzech wskaźnikowych stolców do momentu pojawienia się pierwszego uformowanego stolca, lub też okresu 48 godzin bez opróżnień. Określenie nowego epizodu u dziecka oznaczało, że od poprzedniego epizodu upłynęło co najmniej 48 godzin. W przeciwnym wypadku, był on traktowany jako kontynuacja tego samego epizodu, którego całkowity okres trwania był później uwzględniany przy ocenach.
PL 203 281 B1
Jako przypadek określano dziecko, które doświadczyło jednego lub więcej udokumentowanych epizodów biegunki w ciągu 29-dniowego okresu obserwacji. Ocena intensywności epizodu biegunkowego oparta była na całkowitej liczbie wytworzonych luźnych stolców. Elementy ostrości przebiegu epizodu obejmowały takie objawy jak obecność krwi, śluzu lub ropy w stolcach, a także objawy gorączki i wymiotów. Intensywność siedmiu stolców w ciągu 24 godzin, lub też konieczność profesjonalnej interwencji medycznej w klinice, szpitalu, lub centrum medycznym, były oznaką pozwalającą zaklasyfikować dany przypadek jako ciężki.
Gdy w ramach systemu obserwacji u pacjentów zdiagnozowano epizod biegunkowy, pobierano próbkę stolca biegunkowego do badań mikroskopowych i do hodowania w celu identyfikacji potencjalnych patogenów odpowiedzialnych za ten epizod. Próbkę diagnozowano pod kątem antygenów rotawirusa, lamblii (Giardia) i E. histolytica, jeśli był to przypadek czerwonkowy, oraz pod kątem obecności patogenów bakteryjnych, takich jak Shigella, Salmonella, Aeromonas, Plesiomonas shigelloides, E. coli oraz możliwej V. cholerae.
Podczas prowadzenia badania pobierano próbki aplikowanego produktu, w celu sprawdzenia przeżywalności mikroorganizmów (w tym także w okresie ich podawania). Wykazano, że mikroorganizmy zachowywały żywotność w saszetkach w przeciągu całego okresu badań. Nawet pod koniec badania saszetki dostarczały 1010 żywych mikroorganizmów po rozpuszczeniu w wodzie.
Badanie ujawniło, że próbka zawierająca probiotyczny mikroorganizm zmniejsza występowanie biegunki o 30% w porównaniu z grupą kontrolną (placebo). Także kontrolna grupa wykazywała zmniejszoną liczbę biegunek w porównaniu z normalną populacją nie otrzymującą ani badanej próbki, ani placebo. Ten ostatni wynik można częściowo wyjaśnić faktem otrzymywania przez dzieci dodatkowego wartościowego pożywienia i wolnej od zanieczyszczeń wody. Jednakże, ponieważ badanie przeprowadzono w terenie, można z niego jasno wywnioskować, że ST11 może z pewnością zmniejszyć występowanie biegunki in vivo.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowanie supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) do wytwarzania doustnego materiału nośnikowego, którym jest kompozycja spożywcza wybrana z mleka, jogurtu, twarogu, sera, fermentowanych mlek, fermentowanych produktów opartych na mleku, lodów, fermentowanych produktów zbożowych, mleka w proszku, mieszanki dla niemowląt.
- 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że materiał nośnikowy jest stosowany do leczenia i/lub profilaktyki zaburzeń towarzyszących biegunce.
- 3. Kompozycja spożywcza lub farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera supernatant z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461).
- 4. Kompozycja według zastrz. 3, znamienna tym, że jest wybrana z mleka, jogurtu, twarogu, sera, fermentowanych mlek, fermentowanych produktów opartych na mleku, lodów, fermentowanych produktów zbożowych, mleka w proszku, mieszanki dla niemowląt, tabletek, ciekłych zawiesin bakteryjnych, suchych doustnych dodatków pokarmowych, mokrych doustnych dodatków pokarmowych, suchej lub mokrej żywności w tubkach.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99104924A EP1034788A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| EP99104922A EP1034787A1 (en) | 1999-03-11 | 1999-03-11 | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL350776A1 PL350776A1 (en) | 2003-02-10 |
| PL203281B1 true PL203281B1 (pl) | 2009-09-30 |
Family
ID=26152924
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL350776A PL203281B1 (pl) | 1999-03-11 | 2000-03-02 | Zastosowanie supernatantu pochodzącego z hodowli szczepu Lactobacillus paracasei CNCM I-2116 (NCC 2461) i kompozycja spożywcza lub farmaceutyczna |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6887465B1 (pl) |
| EP (1) | EP1165105A1 (pl) |
| JP (1) | JP3765983B2 (pl) |
| CN (1) | CN1244684C (pl) |
| AU (1) | AU779789B2 (pl) |
| BR (1) | BR0008920A (pl) |
| CA (1) | CA2364440A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ20013269A3 (pl) |
| HK (1) | HK1046864B (pl) |
| HU (1) | HUP0200374A2 (pl) |
| IL (2) | IL145080A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA01009017A (pl) |
| NO (1) | NO20014298L (pl) |
| NZ (1) | NZ513804A (pl) |
| PL (1) | PL203281B1 (pl) |
| RO (1) | RO121700B1 (pl) |
| WO (1) | WO2000053202A1 (pl) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1034787A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria |
| EP1034788A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Société des Produits Nestlé S.A. | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhea |
| AU7843201A (en) | 2000-05-25 | 2001-12-03 | Nestle Sa | Novel probiotics for pet food applications |
| KR100419132B1 (ko) * | 2000-12-29 | 2004-02-18 | 조성근 | 위·장 점막 부착성과 증식성, 내산성, 내담즙성 및헬리코박터 파일로리, 대장균 0157:ｈ7에 대한 항균성이우수한 락토바실러스 파라카제이 서브스패시즈 파라카제이ｃｓｋ 01 |
| GB0124580D0 (en) | 2001-10-12 | 2001-12-05 | Univ Reading | New composition |
| KR100356672B1 (ko) * | 2001-12-27 | 2002-10-19 | 주식회사 바이로박트 | 신규한 락토바실러스 속 미생물 및 그 용도 |
| EP1384483A1 (en) * | 2002-07-23 | 2004-01-28 | Nestec S.A. | Probiotics for treatment of irritable bowel disease (IBS) through improvement of gut neuromuscular function |
| ATE466070T1 (de) * | 2004-02-24 | 2010-05-15 | Chr Hansen As | Tiefgefrorene granulatbildende milchsäurebakterienkultur |
| MY143693A (en) * | 2004-03-24 | 2011-06-30 | Nestec Sa | Shelf stable product wih living micro-organisms |
| PL1951273T3 (pl) | 2005-10-06 | 2014-07-31 | Probi Ab | Zastosowanie lactobacillus do leczenia chorób autoimmunologicznych |
| EP1952703B1 (de) * | 2007-02-02 | 2010-08-25 | May, Amadeus Alexander | Produkt mit lebenden probiotischen Mikroorganismen |
| PT2429539T (pt) * | 2009-05-11 | 2017-01-12 | Nestec Sa | Lactobacilos johnsonii la1 ncc533 não replicativo (cncm i-1225) e distúrbios imunitários |
| EP2485744A4 (en) * | 2009-10-09 | 2014-01-22 | Prothera Inc | COMPOSITIONS AND METHODS COMPRISING THE PEDIOCOCCUS TO REDUCE AT LEAST ONE SYMPTOM ASSOCIATED WITH DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER IN A PERSON IN WHICH A DEVELOPMENT-INVASIVE DISORDER HAS BEEN DIAGNOSED |
| JP6073857B2 (ja) * | 2011-04-08 | 2017-02-01 | セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ | 合成抗微生物効果 |
| JP6028962B2 (ja) * | 2012-02-16 | 2016-11-24 | 国立大学法人金沢大学 | ウイルス感染予防乳酸菌組成物及びウイルス感染予防乳酸発酵食品 |
| CN112869169B (zh) * | 2019-11-29 | 2023-07-18 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 副干酪乳杆菌et-22提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用 |
| CN118020940A (zh) * | 2019-11-29 | 2024-05-14 | 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 | 副干酪乳杆菌k56提升肠道细菌感染抗性和肠道免疫力的应用 |
| CN115024382B (zh) * | 2022-05-05 | 2023-03-14 | 浙江大学 | 一株抗动物腹泻动物联合乳杆菌zjuids-r2及其应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ239370A (en) * | 1990-08-22 | 1994-04-27 | Merck & Co Inc | Bioerodible implantable controlled release dosage form comprising a poly(ortho ester) or a polyacetal with an active agent incorporated into the chain backbone |
| ATE161181T1 (de) | 1992-07-06 | 1998-01-15 | Nestle Sa | Lactobacillus acidophilus enthaltende antigastritis-mittel |
| DE760848T1 (de) * | 1994-05-26 | 1997-08-28 | Bracco Spa | Lactobazillusstämme menschlichen ursprungs, ihre zusammensetzung und deren verwendung |
| US5837238A (en) | 1996-06-05 | 1998-11-17 | Biogaia Biologics Ab | Treatment of diarrhea |
| IT1284877B1 (it) * | 1996-08-09 | 1998-05-22 | Dicofarm Spa | Trattamento delle diarree acute del bambino e prevenzione della sensibilizzazione allergica verso alimenti introdotti nella fase |
| IT1289984B1 (it) * | 1997-02-27 | 1998-10-19 | Proge Farm Srl | Ceppi di lattobacilli utili nel trattamento di disfunzioni del sistema gastrointestinale |
| SE510813C2 (sv) * | 1997-12-08 | 1999-06-28 | Arla Ekonomisk Foerening | Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen |
-
2000
- 2000-03-02 CZ CZ20013269A patent/CZ20013269A3/cs unknown
- 2000-03-02 NZ NZ513804A patent/NZ513804A/en unknown
- 2000-03-02 WO PCT/EP2000/001798 patent/WO2000053202A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 CN CNB00807402XA patent/CN1244684C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 HU HU0200374A patent/HUP0200374A2/hu unknown
- 2000-03-02 JP JP2000603691A patent/JP3765983B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 IL IL14508000A patent/IL145080A0/xx active IP Right Grant
- 2000-03-02 EP EP00909292A patent/EP1165105A1/en not_active Withdrawn
- 2000-03-02 PL PL350776A patent/PL203281B1/pl unknown
- 2000-03-02 CA CA002364440A patent/CA2364440A1/en not_active Abandoned
- 2000-03-02 AU AU31629/00A patent/AU779789B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 BR BR0008920-6A patent/BR0008920A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 MX MXPA01009017A patent/MXPA01009017A/es not_active Application Discontinuation
- 2000-03-02 RO ROA200101019A patent/RO121700B1/ro unknown
- 2000-03-02 US US09/936,542 patent/US6887465B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-23 IL IL145080A patent/IL145080A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-04 NO NO20014298A patent/NO20014298L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-11-22 HK HK02108478.2A patent/HK1046864B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP0200374A2 (en) | 2002-06-29 |
| WO2000053202A1 (en) | 2000-09-14 |
| RO121700B1 (ro) | 2008-02-28 |
| EP1165105A1 (en) | 2002-01-02 |
| JP3765983B2 (ja) | 2006-04-12 |
| BR0008920A (pt) | 2001-12-18 |
| CN1244684C (zh) | 2006-03-08 |
| AU3162900A (en) | 2000-09-28 |
| JP2002537867A (ja) | 2002-11-12 |
| CZ20013269A3 (cs) | 2002-04-17 |
| AU779789B2 (en) | 2005-02-10 |
| CA2364440A1 (en) | 2000-09-14 |
| NO20014298D0 (no) | 2001-09-04 |
| IL145080A0 (en) | 2002-06-30 |
| NO20014298L (no) | 2001-11-05 |
| CN1350462A (zh) | 2002-05-22 |
| HK1046864B (zh) | 2006-10-27 |
| PL350776A1 (en) | 2003-02-10 |
| HK1046864A1 (en) | 2003-01-30 |
| NZ513804A (en) | 2001-09-28 |
| US6887465B1 (en) | 2005-05-03 |
| IL145080A (en) | 2006-12-10 |
| MXPA01009017A (es) | 2002-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6835376B1 (en) | Lactobacillus paracasei strain for preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria | |
| EP1165104B1 (en) | Lactobacillus parcasei strain capable of preventing diarrhoea | |
| JP4176715B2 (ja) | プロバイオティクス菌株、その選択方法、その組成物、およびその使用 | |
| US6887465B1 (en) | Lactobacillus strains capable of preventing diarrhoea caused by pathogenic bacteria and rotaviruses | |
| PL195110B1 (pl) | Biologicznie czyste kultury bakterii kwasu mlekowego Lactobacillus rhamnosus, kompozycje do immunostymulacji i zastosowanie biologicznie czystych kultur | |
| MXPA01008976A (en) | Lactobacillus strains preventing diarrhoea pathogenic bacteria | |
| MXPA01008927A (en) | Lactic acid bacteria strains capable of preventing diarrhoea |