PL149014B1 - Method of obtaining 4-j125-iodophenylisothiocyanate - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania 4-J125-jodofenyloizotiocyjanianu znajdu¬ jacego zastosowanie jako grupowo swoisty odczynnik do znakowania centrów hydrofobowych w bialkach lub do analizy sekwencji aminokwasów w bialkach.Zwiazek ten jest zwiazkiem nowym, nigdzie w literaturze nie opisanym. Ze stosowania znany jest 4-jodofenyloizotiocyjanian jako grupowo swoisty odczynnik do znakowania centrów hydro¬ fobowych w bialkach.Z grupy odczynników o wymienionym przeznaczeniu znany jest fenyloizotiocyjanian C firmy Jscommerz z NRD. Jako odczynnik hydrofobowy jest on znacznie mniej swoisty od 4-jodofenyloizotiocyjanianu.Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania 4-J °-jodofenyloizotiocyjanianu.Istota wynalazku polega na tym, ze 4-nitroanilinc diazuje sie azotynem sodowym w obecnosci kwasu solnego, a otrzymany roztwór chlorku 4-nitrofenylodiazoniowego miesza sie z jodkiem potasowym z dodatkiem jodku sodowego J125, po czym zawiesine alkalizuje sie i otrzymany 4-J125-jodonitrobenzen redukuje sie podsiarczynem sodowym. Otrzymana 4-J125-jodoaniline eks¬ trahuje sie chloroformem i uzyskany ekstrakt chloroformowy poddaje sie reakcji z tiofosgenem, otrzymujac 4-J125-jodofenyloizotiocyjanian, który oczyszcza sie za pomoca chromatografii kolu¬ mnowej na zelu krzemionkowym, eluujac heksanem i zbierajac frakcje o Rf 0,5.Nie jest mozliwa wymiana jodu niepromieniotwórczego, zimnego, na jod125 jak i na inny izotop promieniotwórczy w jodofenyloizotiocyjanianie, nie jest tez mozliwa reakcja podstawienia wodoru w fenyloizotiocyjanianie. Wyprowadzenie jodu promieniotwórczego okazalo sie mozliwe przez dodanie soli jodu125 w mieszaninie z sola jodu zimnego, naturalnych izotopów, do roztworu chlorku 4-nitrofenylodiazoniowego. W ten sposób mozna uzyskac trwale znakowanie zwiazku jodem 125 i w dalszych reakcjach, po redukcji i reakcji z tiofosgenem, otrzymac 4-125-jodofenylo- izotiocyjanian.Otrzymany sposobem wedlug wynalazku nowy zwiazek 4-125-jodofenyloizotiocyjanian zna¬ cznie podnosi czulosc stosowanych metod analitycznych w porównaniu do analiz wykonanych z2 149 014 uzyciem tylko samego 4-jodofenyloizotiocyjanianu. Znakowanie jodem-125 jest trwale w warun¬ kach degradacji bialka, co umozliwa zastosowanie tego odczynnika takze do analizy sekwencji aminokwasów. Natomiast zastosowanie odczynnika zawierajacego promieniotwórczy izotopjodu zamiast izotopu wegla C14, zawartego w fenyloizotiocyjanianie C14, zmniejsza zagrozenie wynikajace z ewentualnego skazenia promieniotwórczego, ze wzgledu na stosunkowo krótki czas póltr- trwania jodu12*, wynoszacy 60,2 dni, w porównaniu do 5730 lat dla wegla C14. Koszt otrzymanego w ten sposób odczynnika jest znacznie nizszy od fenyloizotiocyjanianu C14.Przedmiot wynalazku jest przedstawiony w przykladzie wykonania.Przyklad. 138 mg (1 mmol) 4-nitroaniliny, 0,5cm3 stezonego kwasu solnego i 2cm3 wody miesza sie i po rozpuszczeniu skladników ochladza w lazni lodowej, po czym dodaje 0,98 cm3 (0,98 mmola) roztworu azotynu sodowego i nadal miesza przez 20 minut w lazni lodowej, a nastepnie dodaje 1 cm3 (1 mmol) roztworu jodku potasowego z dodatkiem 0,01 cm3 roztworu jodku sodo¬ wego J125/37 MBq bez nosnika, produkcji Instytut Badan Jadrowych w Swierku. Skladniki miesza sie przez 1 godzine w temperaturze pokojowej, po czym zawiesine alkalizuje sie przez dodanie 1,2 cm3 (6 mmoli) roztworu wodorotlenku sodowego. Nastepnie do zawiesiny dodaje sie 5 cm3 etanolu i ogrzewa na lazni wodnej, dodajac przy ciaglym mieszaniu 0,8 g podsiarczynu sodowego porcjami po okolo 0,1 g, a nastepnie chlodzi do temperatury pokojowej otrzymana zawiesine i poddaje trzykrotnej ekstrakcji za pomoca 3 cm3 chloroformu. Otrzymany ekstrakt chloroformowy przemywa sie woda w ilosci 5 cm i nastepnie ponownie dodaje 5 cm3 wody oraz 0,07 cm3 tiofos- genu. Po 5 minutach wstrzasania faza chloroformowa oddziela sie i odparowuje na wyparce obrotowej. Pozostalosc rozpuszcza sie w 2 cm3 heksanu i nanosi na kolumne chromatograficzna z zelem krzemionkowym o wymiarach 1,5 X 12 cm. Kolumne eluuje sie heksanem zbierajac frakcje o Rf 0,5-zel krzemionkowy/heksan. Otrzymuje sie 80 mg 4-J125-jodofenyloizotiocyjanianu o akty¬ wnosci 7,5 X I012dpm/mol, z wydajnoscia równa okolo 30% wydajnosci teoretycznej.Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania 4-J125-jodofenyloizotiocyjanianu, znamienny tym, ze 4-nitroaniline dia- zuje sie azotynem sodowym w obecnosni kwasu solnego, a otrzymany roztwór chlorku 4- nitrofenylodiazoniowego miesza sie z jodkiem potasowym z dodatkiem jodku sodowego J125, po czym zawiesine alkalizuje sie i otrzymany 4-J125-jodonitrobenzen redukuje sie podsiarczynem sodowym, natomiast otrzymana 4-J125-jodoaniline ekstrahuje sie chloroformem i uzyskany eks¬ trakt chloroformowy poddaje reakcji z tiofosgenem, otrzymujac 4-J125-jodofenyloizotiocyjanian, który oczyszcza sie za pomoca chromatografii kolumnowej na zelu krzemionkowym, eluujac heksanem i zbierajac frakcje o Rf 0,5.Pracownia Poligraficzna UP RP.Naklad 100 egz.Cena 1500 zl PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób wytwarzania 4-J125-jodofenyloizotiocyjanianu, znamienny tym, ze 4-nitroaniline dia- zuje sie azotynem sodowym w obecnosni kwasu solnego, a otrzymany roztwór chlorku 4- nitrofenylodiazoniowego miesza sie z jodkiem potasowym z dodatkiem jodku sodowego J125, po czym zawiesine alkalizuje sie i otrzymany 4-J125-jodonitrobenzen redukuje sie podsiarczynem sodowym, natomiast otrzymana 4-J125-jodoaniline ekstrahuje sie chloroformem i uzyskany eks¬ trakt chloroformowy poddaje reakcji z tiofosgenem, otrzymujac 4-J125-jodofenyloizotiocyjanian, który oczyszcza sie za pomoca chromatografii kolumnowej na zelu krzemionkowym, eluujac heksanem i zbierajac frakcje o Rf 0,5. Pracownia Poligraficzna UP RP.Naklad 100 egz. Cena 1500 zl PL