PL101773B1 - A method of producing reduced aniline blue as indicator of ph-value - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania zredukowanego blekitu anilinowego, bedacego wskazni¬ kiem wartosci pH, który moze byc stosowany do wykrywania obecnosci mikroorganizmów w srodowiskach hodowlanych.' Znany jest sposób wykrywania obecnosci okreslonych mikroorganizmów w analizowanych próbkach za pomoca tac lub tablic ze sztucznego tworzywa, zawierajacych szeregi wysuszonych czynników czyli srodowisk hodowlanych, umieszczonych w oddzielnych lecz polaczonych komórkach, przy czym kazde z tych srodowisk jest wlasciwe dla jednego organizmu. Gdy badana próbke umieszcza sie w tablicy, miesza z czynnikiem hodowla¬ nym w komórkach i poddaje hodowli w urzadzeniu, wówczas organizm lub organizmy znajdujace sie w próbce reaguja z czynnikiem hodowlanym wlasciwym dla danego organizmu, powodujac zmiane tego czynnika, która jest rejestrowana przez urzadzenie i wskazuje na obecnosc takiego organizmu. Zmiana w srodowisku powoduje zmiane jego zdolnosci przenoszenia swiatla, np. zmiane zabarwienia lub stopnia zmetnienia. Zmiana ta moze byc powodowana przez metaboliczne dzialanie organizmów, które moga np. wytwarzac kwas wywolujacy zmiane wskaznika zawartego w srodowisku i reagujacego na zmiane wartosci pH. Zmiana zdolnosci przenoszenia swiatla przez srodowisko moze byc takze powodowana wytwarzaniem sie w srodowisku osadu na skutek metabolicznego dzialania organizmu albo na skutek wzrostu organizmu.Specjalne srodowiska przewidziane do stosowania w tych tablicach sa tak dobierane, aby wzmagaly rozwój jednego mikroorganizmu i hamowaly rozwój innych. Powinny one nadawac sie do suszenia przez wymrazanie i powinny dzialac skutecznie przy malej zawartosci tlenu w zaglebieniach tablicy.W przypadku srodowisk do wykrywania E.coli, drozdzy i grzybów i do wykazywania obecnosci kazdego z tych mikroorganizmów wykorzystuje sie metaboliczne dzialanie organizmu, który wytwarza kwas, powodujac zmiane wartosci pH.Wskaznik wytworzony sposobem wedlug wynalazku, wprowadzony do srodowiska zmienia barwe przy najmniejszej zmianie wartosci pH w kierunku tej, która odpowiada srodowisku kwasnemu, dzieki czemu mozna szybko wykrywac i identyfikowac mikroorganizm opisanym wyzej sposobem.2 101 773 Zredukowany blekit anilinowy ma przy wartosci pH = 7,0 barwe brazowa lub jest bezbarwny i pod dziala¬ niem kwasu wytwarzanego przez badane mikroorganizmy przyjmuje ponownie barwe niebieska. Zmiana ta naste¬ puje w ciagu 12-18 godzin, dzieki czemu mozna szybko wykrywac mikroorganizmy w próbkach klinicznych, stosujac analizator wykrywajacy blekit.Zgodnie z wynalazkiem blekit anilinowy redukuje sie za pomoca soli sodowej kwasu tioglikolowego.Stosowanie tego srodka redukujacego jest o tyle korzystne, ze w odróznieniu od innych chemicznych srodków redukujacych nie hamuje on wzrostu mikroorganizmów. Blekit anilinowy zredukowany sposobem wedlug wyna¬ lazku stanowi bardzo czuly wskaznik wartosci pH w srodowiskach hodowlanych przeznaczonych do stosowania w tablicach i wglebieniach urzadzenia analizujacego. Wskaznik ten jest równiez odporny na dzialanie protein zawartych w srodowiskach hodowlanych i powodujacych bledy przy stosowaniu innych wskazników.Blekit anilinowy jest barwnikiem rozpuszczalnym w wodzie. W celu przygotowania podstawowego roztwo¬ ru na 500 ml roztworu stosuje sie 4,0-6,0 g, korzystnie 5,0 g blekitu anilinowego.Normalnie blekit anilinowy nie jest ceniony jako wskaznik wartosci pH, poniewaz reaguje zbyt powoli na zmiany tej wartosci i jest bardzo wrazliwy na dzialanie protein, dajac przy oznaczaniu bledy. Wad tych nie ma blekit anilinowy zredukowany sposobem wedlug wynalazku, zgodnie z którym redukuje sie i usuwa co najmniej jedna, a ewentualnie dwie grupy aminowe. Po takiej redukcji zwiazek ten wykrywa bardzo szybko zmiany wartosci pH i umozliwia bezbledne analizowanie równiez w obecnosci protein.Blekit anilinowy moze byc redukowany za pomoca róznych srodków redukujacych, ale sposoby te nie daja dobrych wyników, poniewaz z reguly srodki te hamuja rozwój mikroorganizmów, które maja byc wykrywane.Korzystnie redukuje sie blekit anilinowy w 100%, poniewaz przy niepelnym zredukowaniu otrzymuje sie wskaznik nietrwaly, mianowicie ulegajacy latwo utlenianiu podczas przechowywania go.Redukcje blekitu anilinowego sposobem wedlug wynalazku, w celu otrzymania wskaznika odpowiedniego do oznaczania E.coli w analizowanej brzeczce, jak równiez drozdzy Candida i innych grzybów, prowadzi sie stosujac nastepujace zabiegi. 1) 5 g rozpuszczalnego w wodzie blekitu anilinowego rozpuszcza sie mieszajac i nieco ogrzewajac w miesza¬ ninie 100 ml 1 n wodorotlenku sodowego i 400 ml destylowanej wody. 2) Do otrzymanego roztworu dodaje sie 7,5 g soli sodowej kwasu tioglikolowego i mieszanine utrzymuje sie w stanie wrzenia w ciagu okolo 45 minut, zachowujac objetosc mieszaniny 500 ml. 3) Zabieg opisany w ustepie 2) powtarza sie stosujac mniejsze ilosci tioglikolanu sodowego i krótszy czas gotowania, az do zredukowania blekitu anilinowego w 100%. 4) Zredukowany preparat blekitu anilinowego chlodzi sie.) Otrzymany roztwór uzupelnia sie woda do 500 ml.Nadmiar tioglikolanu sodowego nie wplywa ujemnie na przebieg procesu i zasadniczym warunkiem jest calkowite zredukowanie blekitu anilinowego.Podczas redukcji z roztworu wywiazuje sie amoniak. Jak wyzej wspomniano, zredukowany blekit anilino¬ wy ma przy wartosci pH 7,0 barwe brazowa, która zanika i otrzymuje sie roztwór bezbarwny. Calkowita zmiana barwy nastepuje przy wartosci pH 6,4—6,6.P r z y k l a d. W wycechowanej zlewce o pojemnosci 1000 ml umieszcza sie 5,0 g blekitu anilinowego, 100 ml 1 n roztworu wodorotlenku sodowego i 400 ml destylowanej wody, po czym miesza sie az do calkowite¬ go rozpuszczenia blekitu anilinowego. Nastepnie roztwór ogrzewa sie nieco, dodaje 7,5 g tioglikolanu sodowego, ogrzewa i utrzymuje w stanie wrzenia w ciagu 45 minut, po czym dodaje sie 2,5 g tioglikolanu sodowego i utrzy¬ muje sie w stanie wrzenia w ciagu 3 minut. Otrzymany roztwór pozostawia sie do ochlodzenia i uzupelnia destylowana woda do objetosci 500 ml. PL PL PL PL PL PL PL PL

Claims (1)

1.