NO854168L - Antigen peptidforbindelse. - Google Patents
Antigen peptidforbindelse.Info
- Publication number
- NO854168L NO854168L NO854168A NO854168A NO854168L NO 854168 L NO854168 L NO 854168L NO 854168 A NO854168 A NO 854168A NO 854168 A NO854168 A NO 854168A NO 854168 L NO854168 L NO 854168L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- peptide
- ldh
- amino acid
- antigenic
- glu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 36
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical group 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- -1 1-ethyl- Chemical group 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001130170 Mus musculus L-lactate dehydrogenase C chain Proteins 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKGCFBNYQJDIGS-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-azaniumyl-6-(phenylmethoxycarbonylamino)hexanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCCCNC(=O)OCC1=CC=CC=C1 CKGCFBNYQJDIGS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 4-(4-diazoniophenyl)benzenediazonium Chemical compound C1=CC([N+]#N)=CC=C1C1=CC=C([N+]#N)C=C1 HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102100031357 L-lactate dehydrogenase C chain Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 1
- 229920006026 co-polymeric resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012351 deprotecting agent Substances 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 229940124566 female contraceptive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012836 macromolecular constituent Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical class O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920003053 polystyrene-divinylbenzene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Pattedyrspermatozoer har vært kjent for å være antigene
i mange år. Mere nylig har det vært påvist at pattedyrsæd inneholder et antigent enzym som er kjent som C^-isozymet av lactat-dehydrogenase, (LDH-C4). LDH-C4er blitt isolert i ren, krystallinsk form fra musetestikler. Goldberg (1972)
J. Biol. Chem. 247:2044-2048. Enzymet har en molekylvekt på 140.000 og består av fire identiske C underenheter. Amino-syrerekkefølgen og den tredimensjonale struktur av LDH-C^
er blitt beskrevet av flere forskere: Musick et al. (1976)
J. Mol. Biol. 104:659-668; Wheat et al. (1977) Biochem. & Biophys. Res. Comm. 74:1066-1077; Li et al (1983) J. Biol. Chem. 258:7017-7028; og Pan et al. (1983) 258:7005-7016.
I 1974 undersøkte dr. Erwin Goldberg virkningene av immunisering med LDH-C^på fruktbarhet og fremkastet den tanke at "ved anvendelse av en bestemt makromolekylær bestand-del av sæd blir det mulig å undersøke dens primære struktur uttrykt i aminosyrerekkefølge, for å kartlegge spesielt den eller de antigene determinanter som er ansvarlig for å be-virke ufruktbarhe t, og så konstruere syntetiske peptider inneholdende disse determinanter". Å ha muligheten for å syntetisere et molekyl med slike egenskaper gjør den immuno-logiske vei til fruktbarhetsregulering mulig. Karolinska Symposia on Research Methods in Reproductive Endocrinology,
7th Symposia: Immunological Approaches to Fertility Control, Geneve, 1974, 202-222.
Senere undersøkelser av dr. Goldberg og hans forsknings-forbindelser har identifisert flere aminosyrerekker av mus-LDH-C4 som i isolert form (f.eks. som kortkjedede peptider) bindes til LDH-C4-antiserum. Wheat et al. (1981), i Rich et al., Peptides: Synthesis-Structure-Function, Proe. 7th Amer. Peptide Symp., s. 557-560; og Gonzales-Prevatt et al. (1982) Mol. Immunol. 19:1579-1585. Antigene peptidforbindelser basert på Goldberg-rekkefølgene er blitt patentert. Se US patenter 4 290 944, 4 310 456, 4 353 822, 4 377 516 og 4 392 997.
Disse antigene peptider er nyttige ved fremstilling av vaksiner for å nedsette fruktbarhet hos hunner. Immunisering av hunnpattedyr fører til utvikling av sirkulerende anti legemer spesifikke for LDH-C^. Disse immunoglobiner når reproduksjonskanalen hos hunnen som et transsudat av serum. Kille et al. (1977), Biol. Reprod. 20:863-871. Antilegeme i cervikal mucus, uterine væsker og oviducale væsker forenes med LDH-C^på spermoverflaten og sinker fremkomsten av den hannlige kjønnscelle, antagelig ved agglutinering. Systemisk immunisering med LDH-C^griper tydelig forstyrrende inn i spermtransporten i reproduksjonskanalen hos hunnen. Kille et al. (1980) J. Reprod. Immunol. 2:15-21.
Den nåværende status for forskning på LDH-C^og antigene peptider for anvendelse i kontraseptive vaksiner for hunner er oppsummert i to nylig utkomne publikasjoner fra Goldberg-gruppen: Goldberg et al. (1983), i Immunology of Reproduction, kapittel 22, s. 493-504; og Wheat et al.
(1983), i Isozymes: Current Topics in Biological and Medical Research, bind 7, s. 113-140.
Undersøkelsen efter ytterligere antigene peptider inneholdende antilegeme-bindingsrekker hos mus-LDH-C^har fortsatt. Skjønt det er kjent at dette isozym inneholder flere antigene områder, er det ingen godtatt basis for å be-stemme slike områder eller for å forutsi deres effektivitet for å binde antilegemer til LDH-C4eller for i hunnpattedyr å utvikle antilegemer som er i stand til å gripe forstyrrende inn i spermtransporten. Effektiviteten av immuno-kontrasep-sjon ad denne vei avhenger antagelig av tilstrekkelig høye konsentrasjoner av antilegemer i reproduksjonskanalen. Hittil har laboratorieforsøk- og feil-eksperimentering vært den eneste tilnærmelse.
En ny antigen peptidforbindelse som bindes til LDH-C^-antisera, er nu blitt oppdaget. 13-aminosyrepeptidet om-fatter den lineære rekke Val-Asn-Met-Thr-Ala-Gly-Glu-Glu-Gly-Leu-Leu-Lys-Lys. Denne rekke antas å svare til aminosyrene MC 304-316 i mus-LCH-C^som oppregnet av Li et al.
(1983) J. Biol. Chem. 258:7017-7028. Peptidforbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse kan innbefatte andre aminosyrer av LDH-C^bundet til og innbefattende motstående rekke, eller kortere segmenter derav innbefattende det antigene område som antas å være multippelt. Denne forbindelse kan an vendes til å fremstille vaksiner for å redusere fruktbarheten av hunnpattedyr innbefattende kvinnen, da mus-LDH-C^er homologt med menneskelig LDH-C^.
Standardforkortelser og symboler vil bli anvendt her for å betegne aminosyren som er til stede i peptidforbindelsen ifølge oppfinnelsen. Disse er:
Den antigene peptidforbindelse ifølge oppfinnelsen om-fatter forbindelsen svarende til aminosyrerekkefølgen MC 304 til 316 av mus-LDH-C4eller segmenter derav innbefattende det antigene område eller områder derav. Mere spesifikt er forbindelsen representert ved rekken: V-N-M-T-A-G-E-E-G-L-L-K-K. Ovenstående formel representerer et lineært peptid vist i venstre- til høyre-fremstilling, idet den N-terminale aminosyre er på venstre side, og C-terminal-aminosyrene er på høyre side. Alle aminosyrene representert er L-aminosyre med unntagelse av glycin (G) som har bare én form.
Peptidforbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse kan syntetiseres fra sine aminosyrekonstituenter. Eksempelvis kan syntesen utføres ved Merrifield fast-fase-metoden som beskrevet i J.A.C.S. 85:2149-2154 (1963). Denne fast-fase-metode for syntetisering av rekker av aminosyrer er også beskrevet i Stewart og Young: Solid Phase Peptide Synthesis (W. H. Freeman and Co., San Francisco, 1969),
sider 1-4. I denne metode blir C-ende-aminosyren bundet, til klormethylerte polystyren—divinylbenzen-copolymerperler.
Hver efterfølgende aminosye, med passende beskyttelsesgruppe, blir så tilsatt i rekkefølge til den voksende kjede. F.eks. kan, som beskrevet i Merrifleid - artikkelen, den beskyttende gruppe være en carbobenzoxygruppe. Ved fremgangsmåten med kobling, avbeskyttelse og kobling av den neste aminosyre, kan den ønskede aminosyrerekkefølge og kjedelengde oppnåes. Som et endetrinn blir den beskyttende gruppe fjernet fra N-ende-aminosyren (dvs. lysin), og C-ende-aminosyren spaltes fra harpiksen under anvendelse av et passende reagens som trifluoreddiksyre og hydrogenbromid. Da denne syntese for-løper som vel kjent, er det ikke trolig at det vil være nødvendig å beskrive den ytterligere her.
For anvendelse av det antigene peptid ifølge oppfinnelsen i form av en fruktbarhetsreduserende vaksine blir peptidet konjugert med et bærermolekyl som fortrinnsvis er et protein som selv fremkaller en antigen respons og som trygt kan administreres. Eksempelvis kan peptidet kobles til tetanus toxoid for administrering ved intramuskulær injeksjon. F. eks. kan en blanding av l^,umol tetanus toxoid, 6Cyumol antigent peptid og 18 millimol 1-ethyl-£-(3-dimethyl-aminopropyl)-carbodiimid-hydroklorid omsatt i vann (pH 6) i 12 timer ved værelsetemperatur og 24 timer ved 4°C gi et produkt som inneholder 3,5 mol peptid/mol tetanus toxoid. Overskudd av reaktanter kan fjernes ved dialyse eller gel-filtrering. Se Pique et al., Immunochemistry, 15:55-60
(1978) . Alternativt kan peptidet kobles under anvendelse av bisdiazotisert benzidin (Bassiri et al., Endocrinology, 90:722 (1972)) eller glutaraldehyd. For å lette kobling til et protein kan en ytterligere aminosyre som cystein, bindes til N-ende-valinet. F.eks. ville forbindelsen fremstilt i en form for kobling være: N-Cys-Val-Asn-Met-Thr-Ala-Gly-Glu-Glu-Gly-Leu-Leu-Lys-Lys.
For intramuskulær injeksjon kan det koblede peptid suspenderes i en steril isotonisk saltoppløsning eller annet bekvemt medium, og, om ønskes, kan et hjelpemiddel tilsettes. En foretrukken anvendelse av en slik vaksine er for administrering til kvinner. Antilegemer vil bli dannet, hvilket vil komme til syne i eggledervæskene og derved be-virke en betraktelig reduksjon i fruktbarhet. Til dette formål vil mengden som skal administreres, variere fra ca. 1 til 10 mg av det antigene peptid.
Forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse og deres antigene egenskaper illustreres videre av de følgende eks-empler .
Eksempel 1
Rensingen av peptider ved revers fase-høyeffektiv væskekromatografi er blitt beskrevet av Wheat et al. (1981) nevnt ovenfor. Ren mus-LDH-C^reduseres og carboxymethyleres med jodeddiksyre. Oppslutning med trypsin (4% vekt/vekt) forløper i 4 timer i nærvær av 2M urea. Efter avsaltning på Sephadex® G-10 blir det oppsluttede fraksjonert på en^u"Bondapak" C-^g kolonne (3,9 mm x 30 cm; Waters Associates) med en gradient av økende acetonitril. Trifluoreddiksyre (0,4%) er til stede i gradienten. Kolonneavløpet overvåkes ved 214 nm, og fraksjoner oppsamles manuelt basert på topp-absorbans. Fraksjoner tørres under en nitrogenstrøm og lyofiliseres fra vann. Renheten bestemmes isocratisk i samme kromatografiske system, og peptider gjenrenses efter behov. Efter hydrolyse (6N HC1, 107°, 40 timer) bestemmes aminosyre-sammensetningene ved revers fase-kromatografi av o-fthal-aldehydderivater. Se Hill et al., (1979) Anal. Chem. 51:1338-1341. Aminosyrerekkefølgene ble bestemt ved den manuelle Edman-nedbrytning. Se Tarr (1977) i Methods in Enzymology, bind 47, s. 335-357; og Tarr (1981) Anal. Biochem. 111:27-32.
Ved å følge denne metode fikk man et segment som senere ble bestemt til å være rekkefølgen Val-Asn-Met-Thr-Ala-Gly-Glu-Glu-Gly-Leu-Leu-Lys-Lys. Peptidet ble prøvet på anti-legemebindingsaktivitet som følger: Antilegemebinding ved det rensede peptid ble bestemt ved en fast matriks-radioimmunobestemmelse. Peptidet ble påført på veggene av en polyvinylklorid-mikrotiterplate ved inkubering over natten ved 4°C, en oppløsning inneholdende
5 nraol av peptid i 100^ul 0,05 M NaP04, 0,14 M NaCl (PBS) i hver brønn. Hver brønn ble vasket med 200 ml pr. brønn 10% hesteserum i PBS og inkubert i 1 time i samme oppløsning. Efter vasking ble platen inkubert med 50yUl gamma-globulin-fraksjonen av forenet kanin-antimus-LDH-C4.-serum.Efter 4 timers inkubasjon ble platen vasket og derpå inkubert med 125
100yul/brønn av I-geit-kanin-gammaglobulin i 16 timer ved 4°C. Efter utstrakt vasking ble bundet radioaktivitet bestemt under anvendelse av en gammateller.
Eksempel 2
Syntese av peptidet Val-Asn-Met-Thr-Gly-Glu-Glu-Gly-Leu-Leu-Lys-Lys kan utføres under anvendelse av fast fase-metoder som nå er velkjente i faget. Ved en foretrukken fremgangsmåte blir aminobeskyttet lysin, som representerer -COOH-endegruppen av ovennevnte peptid, koblet til en kon-vensjonell fast-fase-peptid-synteseharpiks som klormethyl-polystyren tverrbundet med 1 til 2% divinylbenzen. Den amino-beskyttende gruppe fjernes så selektivt under anvendelse av et passende reagens hvis natur vil avhenge av den anvendte beskyttende gruppe. I den foretrukne utførelsesform anvendes t-butyloxycarbonylgruppen (Boe) for aminogruppebeskyttelse, og 40% trifluoreddiksyre i methylenklorid er det utvalgte av-beskyttelsesmiddel.
Efter avbeskyttelse behandles lysinet med beskyttet lysin, fortrinnsvis aBoc- carbobenzoxy-L-lysin, og dicyclo-hexycarbodiimid på i og for seg kjent måte for å danne en peptidbinding mellom den frie aminogruppe av lysinresten og carboxylgruppen av beskyttet lysin.
Syklusen med avbeskyttelse og kobling med aminosyre-derivater og dicyclohexylcarbodiimid gjentas så med de gjen-værende aminosyrer i rekkefølgen av ovenstående peptid. Noen av aminosyrene krever sidekjede-blokkerende grupper foruten ot-aminobeskyttelse. Slike aminosyrer og de blokkerende grupper er som følger:
Thr(oBzl) Lys(Z) Glu(oBzl) (oNP)
hvor Bzl er benzyl og N er nitrofenyl og Z er 6-carbobenzoxy.
Avslutning av syntesen ga det følgende tridecapeptid koblet til styren-divinylbenzen-copolymerharpiksen: Val-Asn (oNP) -Met-Thr (Bz])-Ala-Gly-Glu (oBZl) -Glu (oBzl) - Gly-Leu-Leu-Lys(Z)-Lys(Z).
Avkobling av peptidet fra harpiksen oppnås ved behandling med flytende hydrogenfluorid med samtidig avspaltning av alle beskyttende grupper for å få det ønskede peptid.
Antilegeme-bindingsaktiviteten for peptidet, fremstilt som beskrevet, kan bestemmes som beskrevet i eksempel 1.
Claims (1)
- Antigen peptidforbindelse som bindes til LDH-C^ anti-sera representert ved rekken av N-ende- til C-ende-aminosyrer, karakterisert vedV-N-M-T-A-G-E-E-G-L-L-K-K, hvor G er glycin, og V, N, M, T, A, E, G, L og K er L-aminosyreformene av valin, aspartinsyre, methionin, threonin, alanin, glutaminsyre, leucin og lysin.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/663,058 US4578219A (en) | 1984-10-19 | 1984-10-19 | Antigenic peptide compound |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO854168L true NO854168L (no) | 1986-04-21 |
Family
ID=24660317
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO854168A NO854168L (no) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Antigen peptidforbindelse. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4578219A (no) |
| EP (1) | EP0178676A3 (no) |
| JP (1) | JPS61100598A (no) |
| AU (1) | AU4885985A (no) |
| DK (1) | DK480985A (no) |
| NO (1) | NO854168L (no) |
| ZA (1) | ZA858070B (no) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4782136A (en) * | 1986-12-01 | 1988-11-01 | Northwestern University | Synthetic peptide compounds producing anitbodies binding to human LDH-C.sub. |
| US5433219A (en) * | 1992-09-23 | 1995-07-18 | Spery; Nanette S. | Receptive condom assembly |
| CN103175952A (zh) * | 2011-12-22 | 2013-06-26 | 兰风华 | 一种用于检测免疫不育相关自身抗体的新型抗原 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4290944A (en) * | 1980-07-31 | 1981-09-22 | Northwestern University | Antigenic peptide compound |
| US4353822A (en) * | 1981-05-26 | 1982-10-12 | Northwestern University | Antigenic linear peptide compounds |
| US4392997A (en) * | 1981-07-06 | 1983-07-12 | Northwestern University | Antigenic peptide compounds |
| AU7646981A (en) * | 1981-09-21 | 1983-04-08 | Northwestern University | Antigenic peptide compound |
-
1984
- 1984-10-19 US US06/663,058 patent/US4578219A/en not_active Expired - Fee Related
-
1985
- 1985-10-18 DK DK480985A patent/DK480985A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-10-18 EP EP85113239A patent/EP0178676A3/en not_active Withdrawn
- 1985-10-18 AU AU48859/85A patent/AU4885985A/en not_active Abandoned
- 1985-10-18 NO NO854168A patent/NO854168L/no unknown
- 1985-10-19 JP JP60234386A patent/JPS61100598A/ja active Pending
- 1985-10-21 ZA ZA858070A patent/ZA858070B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU4885985A (en) | 1986-04-24 |
| JPS61100598A (ja) | 1986-05-19 |
| EP0178676A3 (en) | 1988-08-17 |
| US4578219A (en) | 1986-03-25 |
| EP0178676A2 (en) | 1986-04-23 |
| DK480985D0 (da) | 1985-10-18 |
| DK480985A (da) | 1986-04-20 |
| ZA858070B (en) | 1986-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tam | Synthetic peptide vaccine design: synthesis and properties of a high-density multiple antigenic peptide system. | |
| CA1341030C (en) | Protein active in humoral hypercalcemia of malignancy-pthrp | |
| Lai et al. | Chemistry of cholera toxin: the subunit structure | |
| Schechter et al. | Combining sites of antibodies with L-alanine and D-alanine peptide specificity and the effect of serum proteolytic activity on their estimation | |
| NO179164B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av et immunogenkonjugat | |
| Elsayed et al. | Synthetic allergenic epitopes from the amino-terminal regions of the major allergens of hazel and birch pollen | |
| US4392997A (en) | Antigenic peptide compounds | |
| WO1991008220A1 (en) | A method for the stepwise, controlled synthesis of chemical species, particularly peptides, coupled products obtained by the method and the use of these coupled products, e.g. as vaccines | |
| US6455244B1 (en) | Methods for the detection of antibodies associated with autoimmune disorders and infectious agents employing immunoretroid peptides derived from antigens associated with said disorders and agents | |
| US4290944A (en) | Antigenic peptide compound | |
| RU2163243C2 (ru) | Белки из печени козы, обладающие противоопухолевой активностью, фармацевтическая композиция | |
| Haimovich et al. | Combining Sites of IgG and IgM Antibodies of Poly‐d‐Alanyl Specificity | |
| US4585587A (en) | Antigenic peptide compounds | |
| US4310456A (en) | Antigenic linear peptide compound | |
| US4578219A (en) | Antigenic peptide compound | |
| AU652611B2 (en) | Analogs of piscine LHRH | |
| US4782136A (en) | Synthetic peptide compounds producing anitbodies binding to human LDH-C.sub. | |
| US4353822A (en) | Antigenic linear peptide compounds | |
| EP0079934B1 (en) | Antigenic linear peptide compounds | |
| US4377516A (en) | Antigenic linear peptide compounds | |
| US4354967A (en) | Antigenic linear peptide compound | |
| EP0088752B1 (en) | Antigenic peptide compound | |
| CA1181742A (en) | Antigenic linear peptide compound | |
| Oda et al. | Production of propeptide-directed antibody: its application to the purification of proalbumin and analysis of proalbumin processing | |
| IE52165B1 (en) | Antigenic linear peptide compounds |