NO763344L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO763344L NO763344L NO763344A NO763344A NO763344L NO 763344 L NO763344 L NO 763344L NO 763344 A NO763344 A NO 763344A NO 763344 A NO763344 A NO 763344A NO 763344 L NO763344 L NO 763344L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- hepatitis
- antigen
- virus
- antibody
- antibodies
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 51
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 49
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 46
- 241000509391 A-2 plaque virus Species 0.000 claims description 44
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 25
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 22
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 14
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 8
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 claims description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 29
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 21
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 17
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 17
- 239000011162 core material Substances 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 description 3
- 101710088235 Envelope glycoprotein C homolog Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000012808 pre-inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 241000428198 Lutrinae Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101100070137 Seriola quinqueradiata hbab gene Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004523 agglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000007771 core particle Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000011344 liquid material Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32422—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32411—Hepatovirus, i.e. hepatitis A virus
- C12N2770/32434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Fremgangsmåte for påvisning av hepatittantigen og antistoff samt en fremgangsmåte for fremstilling av vaksine for hepatitt.
Foreliggende oppfinnelse angår påvisning av antistoffer og antigener samt vaksiner og fremgangsmåter for immunisering mot sykdommer. Mer spesielt angår oppfinnelsen fremstilling og oppformering av en kjent virus og bruk av denne for å indusere en antistoffdannelse og en etterfølgende immunisering hos pasienter, da spesielt mennesker, både mot virushepatitt av type A og type B. Spesielt angår oppfinnelsen bruken av virus-avledet materiale for å hindre hepatitt av typen A og typen B, samt fremgangsmåter for å påvise eb nærvær av hepatitt-B-kjerneantigen og antistoff samt hepatitt-A-antigen og antistoff.
Hepatitt eller gulsot er en virussykdom som er velkjent og vidt utbredt. Sykdommen er smittsom og karakteriseres ved en inflammasjon av leveren, gulfarge i huden, feber samt andre synjtomer. Man anerkjenner vanligvis to typer hepatitt, såkalt type A og type B, som hver er forbundet med en forskjellig virus.
Den virus som er forbundet med type B-virus-hepatitt blir ofte immunologisk identifisert som Australia Antigen (HAA). Type A-hepatitt er forbundet med en virus
som ganske enkelt karakteriseres som Hepatitis A Antigen.
Av hensiktsmessighetsgrunner skrives ofte hepatitt-A-antigen som HAAg og hepatitt-B-antigen som HBAg.
Den sykdom som frembringes av hver av disse organismer er i virkeligheten klinisk identiske. Skjont det kan være visse forskjeller med hensyn til inkuberingstiden, så vil sykdommens forlbp vanligvis være det samme. I begynnelsen vil den smittede pasient få hodepine, kvalme, muskel-kramper, feber, kuldegysninger, tretthet og generell matthet. Disse symptomer kan variere alt etter pasientens helsetil- stand, men blir vanligvis fulgt av det som betegnes som den ikteriske fase av sykdommen, hvor man får gulfarging av huden. Begynnelsen av denne fase skjer vanligvis mellom 29 og 100 dager etter infeksjonen, avhengig av den type or-ganisme som har frembragt inflammasjonen.
Antigen fra type B-hepatitt (HBAg) i en infisert pasient kan vanligvis finnes i hans serum, foruten ofte i spytt og i urinen. På den annen side vil antigen fra pasienter som er infisert med hepatitt av type A (HAAg) bli funnet i feces fra slike pasienter.
HBAg og HAAg lar seg skille ved hjelp av et elek-tronmikroskop, da spesielt ved en teknikk som kalles immuno-elektromikroskopi (IEM). Ved hjelp av et slikt apparat vil A-antigenet opptre som partikler med form av ikosohedroner, hvis storrelse varierer fra ca. 25 - 30 nanometer (nm). Hepatitt -B-virus vil man kjenne igjen som en blanding av partikler som kalles Dane-partikler samt avbrukkede stykker fra overflaten av disse partikler.
De såkalte Dane-partikler er kuler eller runde legemer som inneholder et beleggende protein som dekker én kjerne som vanligvis har form av et ikosohedron. Dane-partiklene har vanligvis en storrelse fra 40 - 45 nm, mens kjernen i partiklene har en. storrelse fra 27 - 30 nm. De avbrutte stykker fra Dane-partiklene slik det er nevnt ovenfor, vil vanligvis bestå av avbrutte stykker av det beleggende overflate-proteinlag, og manifesterer seg vanligvis i form av små ror eller kuler med en storrelse fra 20 - 25 nm. Ved hepatitt som skyldes hepatitt-B-virus er det kjernematerialet fra Dane-partikkelen som er den infiserende del.
Med henvisning til Dane-partikkelen vil det beleggende overflateprotein vanligvis betegnes som HBover-fiateA^
(også HB Ag) mens kjernematerialet betegnes HB, . Ag (også HBcAg). Det er viktig å bemerke at Dane-partikkelens over-flateproetein (HBsAg) samt avbrutte stykker som finnes i B-antigen er antigenisk like. Dette betyr atHB s-antigen tverr-reagerer med antistoffer fremstilt fra avbrutte stykker av heptatitt-B-antigen. På den annen side er Dane-kjernepartik-kelen (HB Ag) antigenisk forskjellig fra Dane-overflatepro-
teinet (HB s Ag). Dette "betyr at HB cAg ikke vil tverr-reagere med antistoffer som er indusert av HB sAg. På lignende måte vil HB c Ag ikke tverr-reagere med HBsAb. (Av hensiktsmessighetsgrunner er det vanlig i medisinsk litteratur ganske enkelt å betegne antistoffene som f.eks. HBsAb). Når be-grepene HBAg eller HBAb brukes i litteraturen, så betyr denne betegnelse vanligvis HB s Ag eller HB sAb. Dette betyr at vanligvis refereres til overflateantigenet fra Dane-partikkelen og/eller de avbrutte stykkene av B-antigenet. Dette er spesielt tilfelle med litteratur som er publisert.for 1974, da man ikke fullt ut var oppmerksom på forskjellen mellom kjerneantigenet og overflateantigenet. For tiden bruker man den nomenklatur som er anbefalt for antigener forbundet med virus-hepåtitt av typen B og som er fastlagt av U.S. National Academy of Sciences - Committee of Viral Hepatitis of the National Research Courcil. Denne nomenklatur er fblgende: Cytoplasmisk hepatitt-B-antigen (CHBAg) tilsvarer hepatitt-B-overflateantigen (HBsAg), mens kjernehepatitt-B-antigen (NHBAg) tilsvarer heptatitt-B-kjerneantigen (HB cAg). Antistoff til CHBAg (CHBAb) tilsvarer antistoff til HB Ag
(anti-HB ), mens antistoff til NHBAg (NHBAb) tilsvarer antistoff til HB Ag (anti-HB.).
o c
Som nevnt ovenfor antar man at det er to organismer som frembringer virushepatitt: HB cAg fra hepatitt-B-virus og HAAg fra heptatitt-A-virus. Det er ingen kjerne eller over-flatedistinksjon for hepatitt-A-antigen, ettersom formen på denne partikkelen er helt forskjellig fra den man finner hos B-virus. Immunologisk vil antistoffer indusert av B-antigen ikke tverr-reagere med A-antigen. På lignende måte vil antistoffer som er indusert av A-antigen ikke tverr-reagere med B-antigen.
Viktigheten av disse forhold vil være innlysende for fagfolk. For effektivt å kunne tilveiebringe immunisering mot et begynnende virusangrep, må man i en vert eller en pasient tilveiebringe et antigenisk stoff som er istand til å indusere antistoffer som vil tverr-reagere med virusen (dvs. den antigeniske forbindelse) som inngår i angrepet. For der-ved å indusere antistoffer mot hepatitt-A-virus, vil man nor- malt forst måtte indusere i verten en dannelse av hepatitt-A-antistoff. Dette kan utfores ved å tilfore et antigenisk stoff som er istand til å indusere antistoffer. Det samme kan sies når man vil hindre en infeksjon av hepatitt-B-virus. Til dags dato har ingen vært istand til å produsere type A-antigen eller type B-antigen utenfor en vert, samt å tilfore disse stoffer for å frembringe en. inimunisering, og dette har gjort at man til dags dato ikke har oppnådd en effektiv vak-si nepro duks jon.
A-2-lplaque"-virus ("plaque" er et opprinnelig fransk ord som etterhvert er blitt internasjonalt anvendt for en be-stemt type virus, og ordet brukes også i norsk medisinsk terminologi) ble forst isolert i 1963 ved the Virology Branch of the Armed Forces Institute of Pathology (AFIP) av dr. A.D. Felsenfeld. Denne virus ble isolert fra serum hos en pasient som var i den ikteriske fase av hepatitt, me en bekreftet hepatitt-B-inf eks jon slik det er beskrevet nedenfor. Ved studier over A-2-plaque-virus oppdaget man at nevnte virus induserte fremstillingen av antistoffer som reagerer med HB Ag. Denne oppdagelse ble publisert i desember 1973 id- Journal of Virology, bind 12, nr. 6, sidene 1598-1607 av E.D. Shaw et al. E.D. Shaw i denne artikkel er den samme som foreliggende soker. Inn-holdet i nevnte artikkel inngår således som en referanse. Nevnte artikkel angår påvisingen av overflateantigen fra hepatitt-B-virus og viser fremstillingen av A-2-plaque-virus, opp-formeringen av denne i vevskultur og fremstillingen av anti-serum for nevnte virus hos kaniner. Artikkelen viser også
en oppformeringsmetode for nevnte virus i serumsfattige media.
Et eksempelar av nevnte A-2-plaque-virus som er brukt i de foreliggende undersøkelser og i ovennevnte artikkel, er innsendt til the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, og har tilvekstnummer ATCC VR 812, og er tilgjenge-lig for offentligheten etter at dette patent er utstedt. Virusen er ikke taksonomisk klassifisert. Taksonomisk har
den imidlertid egenskaper som lar seg forene medppicornavirus-enterovirus. F.eks. har foreliggende virus en mindre diameter av størrelsesorden fra 27 - 29 nm, har en RNA kjerne, er varme-resistent (dvs. at den overlever 56°C i en halv time), motstår
divalente kationer, f.eks. kalsium og magnesium, motstår galle-salter, eter, actinomysin D og DNase, men er fblsom overfor RNase.
I den tidligere refererte artikkel fra Journal of Virology, desember 1973, er det på side 1598 indikert en fremgangsmåte ved hjelp av hvilken A-2-virusen forst ble påvist i serum fra mennesker med hepatitt i den ikteriske fase. Som nevnt der vil nevnte sera vise en cytopatisk effekt i menneske-embryonisk nyre (HEK) under fbrste gjennomgang. Den ble sub-kultivert ved tre ytterligere gjennomganger i menneske-embry-onisk nyre (HEKj fulgt av en pla-que-rensing under et overliggende agarlag i to passasjer i svinenyre og så gjennom forskjellige passasjer etter bnske i primær afrikansk grbnn apenyre (AGMK). Fortsatt gjennomgang i AGMK endrer ikke virus-ens egenskaper, men brukes bare for å oppnå store mengder.
Etter seleksjon og rensing av de plaque-dannende enheter (PFU) idet man brukte .overliggende agar, fikk man A-2-plaque-virus.
Slik det brukes her betyr begrepet "plaque-dannende enheter" (PFU) den mengde virus som oppnås fra vevskultur-plaque-dannelser slik det er beskrevet i eksempel I, f.eks.,
med en plaque-diameter på ca. 2 mm under overliggende agar.
En mengde som tilsvarer 2 x 10^ PFU pr. ml vevsvæske er ekvi-valent til en TCID^q (vevskulturinfiserende dose) på 10~^'^/. l ml idet man brukte standard vevskulturrbrtitreringer. I arbeid som er beskrevet her, vil A-2-plaque-virus ha gått gjennom minst 45 passasjer gjennom AGMK. Detaljert beskrivelse av oppformering av A-2-plaque-virus er beskrevet i eksempel 1.
foreliggende oppfinnelse er basert på cfen oppdagelse
at A-2-plaque-viruset har enestående og bemerkelsesverdige egenskaper ved at de kan indusere antistoffer som tverr-reagerer med både hepatitt-B-kjerneantigen og hepatitt-A-antigen.
På lignende måte vil A-2-plaque-virusantigen i seg selv tverr-reagere med antistoffer som er indusert av heptatitt-Aaantigen og hepatitt-B-antigen, både kjerne og overflatetypen. Ikke bare muliggjbr denne oppdagelse at man nå kan fremstille en vaksine mot hepatitt, men den muliggjbr også at man kan fremstille en vaksine for mennesker som vil immunisere både mot hepatitt av type A og type B. Dette siste er meget fordelaktig og oppsiktsvekkende, ettersom det er vanlig praksis at anti-'geniske stoffer bare er spesifikt overfor antistoffer fremstilt fra nevnte antigen.
Som et ytterligere aspekt av foreliggende oppfinnelse tilveiebringes nå en fremgangsmåte for å påvise et nærvær av hepatitt antigener eller antistoffer av type A eller type B i stoffer, da spesielt kroppsvæsker og faste stoffer. Dette er meget viktig innenfor medisinsk forskning.
Med hensyn til frestillingen av vaksine samt fremgangsmåte for anvendelse av denne ved immunisering av mennesker, dyrkes og oppformeres A-2-plaque-virus i vevskultur ved hjelp av kjent teknikk. De levende organismer som oppnås fra denne teknikk, f.eks. de som er beskrevet i eksemplene I og II, og i forannevnte Shaw et al-artikkel fra 1973, brukes så som et immuniseringsmiddel og kan direkte tilfores en pasient i en effektiv mengde alene, eller blandes med farmasøytisk akseptabelt medium alt etter bnske. Det er foretrukket å tilfore nevnte virus parenteralt i en farmasøytisk akseptabel væske,
og da spesielt intramuskulært i en enkelt dose. En effektiv
Q
mengde av materialet er en som innbefatter ca. 1 - 3 x 10
PFU av A-2-plaque-virus i et væskevolum som ér hensiktsmessig
å behandle, f.eks. fra 1-3 cm .
Som farmasøytisk akseptable media kan man f.eks. bruke et cellefritt vevskultur-vekstmedium, Freund's for-tynningsmiddel, isotonisk saltopplosning, et seriumfritt medium slik det er beskrevet av Leibovitz, Amer. J. Hyg. 78:173-180, og lignende. Det kan i visse tilfeller være ønskelig å
gi en supplerende dose et par uker etter den forste tilførsel-en for å få en. ytterligere bking av antistoff fremstilt fra nevnte A-2-plaque-virus. Dette kan gjores ved å bruke en tilsvarende dose som forste gang.
Hvis det er ønskelig, kan den levende virus drepes ved å bruke kjente teknikker og tilfores som dod virus. Det er i så tilfelle foretrukket å bruke formaliniserte virus-celler for systemisk tilførsel.
Foreliggende fremgangsmåte hvor man bruker en vaksine innbefatter en fremgangsmåte for å indusere i mennesker dannelsen av antistoffer av hepatitt-B-kjerneantigen og hepa- titt—A-antigen som innbefatter at man tilforer en pasient en effektiv mengde av renset A-2-plaque-virus, fortrinnsvis en som tilsvarer ATCC nr. VR 812.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer dessuten en fremgangsmåte for å påvise hepatitt-B-kjerneantigen i mennesker, fortrinnsvis væske eller væskeekstrakter som man mistenker å inneholde kjerneantigen som innbefatter at man kontakter nevnte væskemateriale i et system med antistoffer til A-2-plaque-virus, og hvor nevnte virus'fortrinnsvis tilsvarer ATCC nr. VR 812, hvor man får det eventuelt tilstedeværende kjerneantigen til å tverr-reagere med antistoffene hvorved man får en påvisbar immunologisk reaksjon. Opptreden av en slik reaksjon indikerer at kjerneantigenet var tilstede, mens et fravær av nevnte reaksjon indikerer at dette antigen ikke var tilstede. Forskjellen mellom reaksjon og ingen reaksjon kan bestemmes ved å velge en minimums-agglutineringsreaksjon under hvilken man angir negative verdier og over hvilken man angir positive verdier. En slik fremgangsmåte er velkjent innenfor medisinen.
Et kriterium for angivelse av en agglutinerings-aggregering, er beskrevet av Feinstone et al. Science, 180: 1026-1028 (1973) hvor aggregater på fra 3-5 partikler etter reaksjon med serum, angis som positive. Det er imidlertid foretrukket å angi som en positiv reaksjon en hvor det er minst to tette aggregater eller fortrinnsvis en tredimensjo-nal druelignende klynge som inneholder minst 14 partikler i hvert antigen/antistoffkompleks. Denne reaksjon som er klart positiv, er oftekarakterisert vedet nærvær av mer enn 200 viruspartikler. I tillegg til dette bor viruspartiklene i et aggregat for en stor del ha hule kjerner. " Ovennevnte kriterium er meget godt egnet når man bruker IEM som en teknikk for observering av reaksjonen. For CEP imidlertid, vil en enkel observasjon av utfellingsbånd være meget godt egnet for påvising av en positiv reaksjon.
På lignende måte vil foreliggende fremgangsmåte kunne anvendes for hepatitt-A-antigen, og dette antigen kan påvises ved å bruke antistoffet for A-2-plaque-virus slik det er beskrevet ovenfor i forbindelse med hepatitt-B-kjerneanti- genpåvisning. På tilsvarende måte tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for å påvise antistoff til både B-kjerneantigen og A-antigen ved ganske enkelt å bruke A-2-plaque-virus oppformet slik det er beskrevet her.
Det spesifikke immuno-påvisningssystem som brukes
i foreliggende fremgangsmåte er ikke kritisk, og man kan bruke enhver kjent fremgangsmåte. Det er imidlertid foretrukket å bruke for meget folsomt eksperimentelt forskningsarbeid av den type en såkalt immuno-elektronmikroskopisk metode (IEM). For kommersielle formål er det egnet å bruke en radioimmuni-seringsteknikk, eller immuno-motstromselektroforese(CEP).
På lignende måte kan man bruke partikkelagglutiner-ingsprbVer hvor man bruker latekspartikler, rode blodceller eller lignende. I slike tilfeller vil det være nbdvendig å kople A-2-plaqiff-virus antigenet eller antistoff til partikkelen for en etterfølgende reaksjon med den antatte komplementære partner. En slik teknikk for kopling er imidlertid velkjent og vil ikke bli ytterligere beskrevet her.
De fblgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel I
Oppformering av A- 2- plaque- virus i AGMK
Tryptiniserte suspensjoner av primære AGMK-celler ble oppformert ved 35°C under delvis CX^-atmosfære i stasjo-nære sammenflytende monolag med simianvirus-antistoff av typene 5 og 40 i vekstmedium av 10% kalveserum i Eagle's Minimum Essential Medium (Earle's salter) inneholdende peni-cillin og streptomycin. I lbpet av 5 - 7 dogn var monolagene av vevskulturen ferdig for inokulering og oppformering av A-2-plaque-virus.
Vevskultur-vekstmediet ble avhelt nevnte AGKM-monolag. Som vedvarende medium brukte man enten serumfritt L-15-medium (se Leibovitz, A. referanse ovenfor) eller Eagle's MEM med Earle's salter uten serum, men et innhold av 50 mikro-gram Gentamicin pr. ml, og dette ble brukt to ganger for å rense AGKM-monolagene. 1 ml med infiserende A-2-plaque-^virus (ATCC nr. VR 812) inokulum med ca. 2 x 10^ PFU pr. ml er tilstrekkelig til å infisere et areal på 110 cm 2av AGMK-monolag dekket med fra 50 - 60 ml av vedvarende medium i en tett lukket vevskultur-flaske. Etter inkubering ved 36°C i fra 24 til 36 timer i luftlukkede kolber, er den karakteristiske lytiske cytopato-geniske effekt (CPE) for destruksjon av AGMK-monolagene full-stendig.
Kolbene med de infiserte vevskulturene samt en negativ vevskultur-kontrollkolbe, ble frosset in situ ved -70°C. Etter alternerende tining og frysing av de infiserte vevskul-turer fra 2-3 ganger, ble innhold* av de inokulerte kolber slått sammen. Rensing av cellulært avfall ble utfort ved sentrifuigering fra 800 - 1.000 xg i fra 20 til 30 minutter i kulden. Den ovennevnte væske med klar A-2-plaque-virus ble helt over i de forbnskede volumer for lagring ved -70°C. Dette materiale kan så brukes som oppformeringsmedium for andre subkulturer. Dette materiale er angitt med ATCC til-velstsnummer VR 812, og inneholder ca. 2 x 10 plaque-dannende ;p-ry I"i m "1;enheter pr. ml, noe som tilsvarer TCID^q 10 ' '' * m når man bruker standard vevskulturrbrtitrering.
Eksempel II
Konsentrasjon av A- 2- plaque- virus
Renset A-2-plaque-virus fremstilt som i eksempel I ble ultrasentrifugert ved ca. 100.000 xg i 18 timer i kulden. Man fikk et pelletert virusmateriale som ble resuspendert
i den innvundne overliggende væske med en konsentrasjon som varierte fra 1 - 3 x 10 PFU pr. ml.
Dette materiale kan brukes som levende virus-immuno-genisk materiale for å immunisere pasienter, såsom mennesker. Det kan inaktiveres ved å bruke normal teknikk som f.eks. for-malindeaktivering. Det levende antigen kan også brukes ved en diagnostisk teknikk for å påvise antistoffer slik det er beskrevet nedenfor.
Eksempel III
Fremstilling av antistoffer for anti^ A- 2- plaque- virus A-2-plaque-virus fremstilt som i eksempel II (1 ml inneholdende ca. 2 x 10 Q PFU) ble injisert subkutenbst på dag 0 i 10 hvite New Zealand-kaniner for å stimulere antistoff-fremstilling. På dag 3 og 5 gav man intravenbst en annen og tredje injeksjon som hver var på 1 ml. Prbveblbdninger ble utfort fra dag 12 til og med 14 for å se om titreringsverdien var tilstrekkelig hoy. De kaniner som viste tilstrekkelig titreringsverdi ble så drept og blodet tappet ut på den 21. dag. Serum ble samlet opp og slått sammen og globulinfrak-sjonen ble utfelt med natriumsulfat idet man brukte kjent teknikk. Den resulterende fraksjon ble så opplost i fosfat-bufret^saltopplosning og dialysert i kulden mot bufferen i ca. 48 timer. Oppløsningen ble samlet opp og provet ved mot-stroms-immunoelektroforese og funnet å ha en titer på 1:64
mot A-2-plaque-virus og ved immuno-elektromikroskopi (IEM) fant man at den hadde en titer -sonT var lik eller stbrre enn 1:4,375 mot A-2-plaque-virus oppnådd som beskrevet i eksempel
II.
Eksempel IV
Påvisning av (1) HB C Ag og." (2) HB cAb
(1) Hepatitt-B-kjerneantigen ble fremstilt fra sjimpanse-lever hvis serum var positivt for HB_Ag ved å bruke den teknikk som er beskrevet av Barker, L. F. et al, Hepatitis B Core Antigen: Immunology and Electron Microscopy, J.Virology bind 14, nr. 6, sider 1552 - 1558 (1974). Kjerneantigenet ble lokalisert ved hjelp av radio-immuniseringsprove i den HB sAg-negative cesiumkloridfraksjon slik det er angitt i nevnte Barker-referanse. Kjerneantigenet ble bekreftet å være HB Ag ved uavhengig IEM i reaksjon med en rhesus-ape-hyperimmun hepatitt B kjerne-antistoff referanse-reagensmateriale som man fikk fra Reference Reagent Branch of the National Insti-tutes of Allergy and Infectious Diseases (NIAID), en avdeling av National Iniitutes of Health, Bethesda, Maryland. Ytterligere fikk man en uavhengig bekreftelse mot sjimpanseserum som man visste inneholdt kompleihentfikserings-hepatitt-B-kjerneantistoff ved en titer på 1:64.
En mengde på 0,2 ml av kjerneantigenet isoleres slik som beskrevet ovenfor, ble blandet med 0,05 ml av kaninaanti-A-2-plaque-virus fremstilt som angitt i eksempel III. Ved å bruke IEM- og CEP-teknikk, ble reaksjonene bedbmt for dannelsen av immunaggregater. Nevnte teknikker bekreftet at de dannede aggregater var antistoffer indusert av A-2-plaque-virus tverr-reagert med hepatitt-B-kjerneantigen (HB cAg). (2) a. Nevnte NIAID-rhesusreferanse-kjerneantistoff og s<r>jimpanse-kjerneantistoff beskrevet ovenfor under del (1), ble blandet i separate eksperimenter med A-2-plaque-virus oppnådd i eksempel II, og undersokt for tverr-reaksjon. Man kunne observere immunaggregater ved hjelp av IEM, noe som således indikerer at A-2-plaque-virus er et antigen som kan påvises ved et nærvær av hepatitt-B-kjerneantistoff. (2) b. Serumprover<1>fra en pasient med kliniske symptomer på hepatitt og diagnostisert med s\jimpanse-forbundet hepatitt, ble valgt for bedbmmelse. CEP-prbver hvor man brukte kommersiell HBgAb som antistoffet, bekreftet at pasienten var negativ for HB sAg. Leverhomogenatet fra. eksempel
IV (1), dvs. det uavhengig bekreftede hepatitt-B-kjerneantigen, ble brukt i en direkte og en indirekte hemnings-CEP-prove for å bekrefte nærværet eller fraværet av kjerneantistoff. Proven var positiv for HB Ab. Når A-2-plaque-virus-antigen fremstilt som beskrevet i .eksempel II ble brukt som det antigeniske materiale i nevnte direkte eller indirekte hemnings-CEP-prbve, kunne man observere et nærvær av HBcAb. Dette demonstrerer til-fredsstillende at det antigeniske materiale >representert, ved A-2-plaque-virus kan påvises i et nærvær av HB-kjerneantistoff.
En direkte CEP-prbve kan utfores ved kommersielle prover. Se f.eks. McKee, A.P. et al (1973), Vox Sang. 24:80-83, for en beskrivelse av lavspennings-CEP-teknikk for påvisning av Australia-antigen, og den tidligere refererte Shaw-artikkel fra 1973 for indirekte prover.
Eksempel V
Påvising av ( 1) hepatitt- A- antistoff og ( 2) hepatitt- A- antigen
(1) Man brukte frivillige pasienter som eksperimentelt var infisert med virushepatitt av type A. Man samlet opp både serum og avfbringsprbver fra disse pasienter både for og^tter infeksjon. Ved å bruke velkjent teknikk ble en diagnose Disse serumprover fra ovennevnte pasient ble tatt på fire forskjellige tidspunkter, en prove når pasienten fikk symptomer på sykdommen, den annen ca. seks uker etter forste prove, og den tredje serumprove ca. tre måneder etter den forste, mens den fjerde var fire måneder etter forste prove. De to forste serumprover var negative for HB AB når man brukte den foregående fremgangsmåte. Den tredje serumprove var positiv slik det er angitt ovenfor. En senere serumprove var negativ for kjerneantistoff.
på hepatitt-A bekreftet ved å påvise type A-partikler i av-føringen. Nærværet av type A-antistoff i serum ble uavhengig bekreftet ved tverr-reagering med type A-antigen oppnådd fra avforingen med serum ved en såkalt IEM-reaksjon. For å påvise for den foreliggende oppfinnelse at A-2 plaque-virus-antigen tverr-reagerer med type A-antistoff, ble serumprover tatt fra ovennevnte frivillige pasienter (3 i antall) og brukt ved hjelp av en CEP-teknikk mot A-2-plaque-virus-antigen fremstilt som beskrevet i eksempel 2, viste serum både fra den ikteriske fase og etter rekonvalesens å være positiv for HAAb, tidligere bekreftet som beskrevet ovenfor som hepatitt-A-antistoffet. Slike prover utfort på prover oppsamlet for infeksjonen var negative for HAAb og HAAg i avforingen. Tabellen nedenfor viser resultatene:
2. Påvising av hepatitt- A- antigen
Avforingsprbver fra de ovennevnte pasienter ble samlet opp. To av provene ble kodet positive og teks ble kodet negative. De ble undersbkt og provet ved en CEP-reaksjon med kanin-globulin-antistoff for A-2-plaqme-virus oppformert som beskrevet i eksempel III. Direkte reaksjoner ble observert i de to positivt kodede provene, men ikke i de seks negativt kodede avfbringsprbvene.
I dette eksempel ble fibrin utfelt fra plasmaet
i et forhold på 1 volum 1-molar CaC^ to 40 volumer plasma, og serum tatt ut som en overliggende væske fra sentrifuger-ingen med 2.000 omdreininger pr. minutt x 9 i 15 minutter i kulden.
Avfbringssuspensjonene ble fortynnet i normal salt-opplbsning fra en opprinnelig 1:5 til en sluttkonsentrasjon på 1:25 for klargjbring av avfall ved sentrifugering ved 100 ganger i 10 minutter. Etter ytterligere fortynning i normal saltopplosning ble hver suspensjon pelletert ved sentrifugering med 93.000 omdreininger pr. minutt i 3 timer i kulden og så resuspendert i minimale mengder normal saltopplosning. Antigener fra aforingen kunne således fortynnes til de forbnskede mengder for en reaksjon ved 37°C i 30 minutter enten med et utvalgt pre-inokuleringsserum eller serum fra en rekonvalesens-pasient. Avfbrings-antigen-antistoff-reaksjons-blandingene ble fortynnet 1:2 i sterilfiltrert destillert vann.
Eksempel VI
Påvising av antistoff av type A- hepatitt
Tre hvitleppede kloaper ble infisert med type A-hepatitt. Kloaper var på det tidspunkt da denne undersøkelse ble gjort, det eneste dyr bortsett fra mennesker som var kjent for å kunne bli utsatt for en hepatitt-A-infeksjon.
Kodet pre-inokuleringsserum og kodet rekonvalesens-serum ble hver bedbmt ved motstrbms-immunoelektroforese (CEP) for A-type antistoff ved å bruke A-2-plaque-virus fra eksempel III og man fant de fblgende resultater:
Det frangår at direkte CEP korrekt identifiserte alle de negative og alle bortsett fra én positiv serumsprbve (3b),
mens indirekte CEP ikke greide å påvise inhiberende A-2-plaque-antistoff. IEM gav den samme reaksjon som 3b, men ble senere bedbmt som positiv ved en fornyet undersøkelse idet man brukte det foretrukne kriterium for å bedbmme IEM-reaksjonsaggregater slik det er angitt tidligere.
Eksempel VII
To sjimpanser ble hver gitt en injeksjon på 1 ml av en 1:5-fortynning av uoppvarmet HB -antigen (en titer på 1:B0 ved kommersiell CEP - Hapindex Ortho Diagnostics Inc., Raritan, New Jersey). Preinokuleringsserum var negativ for HB5-antigen såvel som HB -antistoff og antistoff for A-2-plaque-virus.
Serum fra den forste sjimpansen (nr. 81) på den 21. dag etter inokulering, reagerte mot A-2-plaque-virus og viste at denne sjimpanse hadde produsert HB sAb som tverr-reagerte med A-2-plaque-antigen. Rekonvalesens serum 5i? måned etter injeksjonen ble positiv for HB s-antistoff såvel som antistoff for A-2-plaque-virus ved direkte og indirekte inhibering CEP og IEM for A-2-plaque-virus. Sjimpanse nr. 83 hadde samme serologimbnster, bortsett fra at sero-omdannelsen skjedde senere. I begge tilfeller var dyrene negative for kliniske symptomer på hepatitt og ble aldri HB -antigen-positive.
Claims (14)
1. Fremgangsmåte for å påvise.hepatitt-B-kjerneantigen eller hepatitt-A-antigen i et materiale man mistenker å inneholde én eller begge av de nevnte antigener, karakterisert ved at man kontakter nevnte materiale i et system med antistoffer for A-2-plaque-virus, hvorved nevnte antigen hvis det er tilstede, vil tverr-reagere med nevnte antistoffer, hvoretter man observerer systemet for å bestemme hvorvidt det har vært en tverr-reaksjon eller ikke.
2. Fremgangsmåte ifblge krav 1, karakterisert ved at antistoffene er antistoffer for A-2-plaque-virus tilfarende ATCC nr. VR 812.
3. Fremgangsmåte ifblge krav 2, karakterisert ved at man påviser hepatitt-B-kjerneantigen.
4. Fremgangsmåte ifblge krav 2, karakterisert ved at man påviser hepatitt-A-antigen.
5. Fremgangsmåte ifblge krav 2, karakterisert ved at nevnte system er en immuno-motstrbmselektro-forese, radioimmuniseringsprbve eller immuno-eléktronmikro-skopisk system.
6. Fremgangsmåte for å påvise hepatitt-B-kjerneanti stoff eller hepatitt-A—antistoff i et materiale man mistenker å inneholde ett eller begge de nevnte antistoffer, karakterisert ved at man kontakter nevnte materiale i et system med A-2-plaque-virus-antigen hvorved nevnte antistoff, hvis det er tilstede, vil tverr-reagere med nevnte antigen, hvoretter man observerer systemet for å påvise hvorvidt nevnte reaksjon har opptrådd eller ikke.
7. Fremgangsmåt e ifblge krav 6, karakterisert ved at A-2-plaque-virusanitigen tilsvarer ATCC nr. VR 812.
8. Fremgangsmåte ifblge krav 7, karakterisert ved at man påviser hepatitt-B-kjerneantistoff.
9. Fremgangsmåte ifblge krav 7, karakterisert ved at man påviser hepatitt-A-antistoff.
10. Fremgangsmåte Ifblge krav 7»karakterisert ved at nevnte system er en immuno-motstrbmselek-troforese, en radioimmunobestemmelsesprbve eller et immuno-elektronmikroskopisk system.
11. Fremgangsmåte for å indusere dannelsen i mennesker av antistoffer som tverr-reagerer med hepatitt-B-kjerneantigen og hepatitt-A-antigen, karakterisert ved at man tilforer et menneske en effektiv mengde av renset A-2-plaque-virus.
12. Fremgangsmåte ifblge krav 11, karakterisert ved at nevnte A-2-plaque-virus tilfores parenteralt i et farmasøytisk akseptabelt medium.
13. Fremgangsmåte ifblge krav 11, karakterisert ved at nevnte A-2-plaque-virus tilsvarer ATCC nr. VR 812.
14. Fremgangsmåte ifblge krav 11, karakterisert ved at nevnte antistoffer dannes uten at man får alvorlige symptomer på virus-hepatitt.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/618,644 US4100267A (en) | 1975-10-01 | 1975-10-01 | Method of detecting hepatitis B core antigen and antibody |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO763344L true NO763344L (no) | 1977-04-04 |
Family
ID=24478533
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO763344A NO763344L (no) | 1975-10-01 | 1976-09-30 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4100267A (no) |
| JP (1) | JPS5244230A (no) |
| AU (1) | AU1807776A (no) |
| BE (1) | BE846822A (no) |
| DE (1) | DE2644493A1 (no) |
| DK (1) | DK439576A (no) |
| FR (1) | FR2326205A1 (no) |
| NL (1) | NL7610853A (no) |
| NO (1) | NO763344L (no) |
| SE (1) | SE7610839L (no) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4241175A (en) * | 1978-12-18 | 1980-12-23 | Merck & Co., Inc. | Assay for hepatitis B core antibody |
| US6297355B1 (en) | 1978-12-22 | 2001-10-02 | Biogen, Inc. | Polypeptides displaying HBV antigenicity or hbv antigen specificity |
| US4464474A (en) * | 1980-07-09 | 1984-08-07 | Connaught Laboratories Limited | Non-A, non-B hepatitis assay and vaccine |
| US5866383A (en) * | 1982-11-30 | 1999-02-02 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | In vitro ligation of foreign DNA into large eukaryotic viruses |
| US4547368A (en) * | 1983-12-20 | 1985-10-15 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Hepatitis B core antigen vaccine made by recombinant DNA |
| US4547367A (en) * | 1983-12-20 | 1985-10-15 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Hepatitis B core antigen vaccine |
| US4752567A (en) * | 1984-06-21 | 1988-06-21 | Janssen Pharmaceutica N.V. | Method of visualizing individual submicroscopic metal particles |
| GB8604985D0 (en) * | 1986-02-28 | 1986-04-09 | Unilever Plc | Precipitated silicas |
| JPH085804B2 (ja) * | 1988-04-28 | 1996-01-24 | 財団法人化学及血清療法研究所 | Ａ型及びｂ型肝炎混合アジュバントワクチン |
| DE4422238C2 (de) * | 1994-06-24 | 1996-05-30 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Isolierung einer Antigenpräparation |
| JP2004532404A (ja) * | 2001-03-28 | 2004-10-21 | ジェネテック・バイオテクノロジー・（シャンハイ）・カンパニー・リミテッド | 多数のアナライトを検出するための装置および方法 |
-
1975
- 1975-10-01 US US05/618,644 patent/US4100267A/en not_active Expired - Lifetime
-
1976
- 1976-09-23 AU AU18077/76A patent/AU1807776A/en not_active Expired
- 1976-09-29 DK DK439576A patent/DK439576A/da unknown
- 1976-09-30 FR FR7629413A patent/FR2326205A1/fr not_active Withdrawn
- 1976-09-30 BE BE171143A patent/BE846822A/xx unknown
- 1976-09-30 NO NO763344A patent/NO763344L/no unknown
- 1976-09-30 SE SE7610839A patent/SE7610839L/xx unknown
- 1976-09-30 NL NL7610853A patent/NL7610853A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-10-01 JP JP51117354A patent/JPS5244230A/ja active Pending
- 1976-10-01 DE DE19762644493 patent/DE2644493A1/de active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2326205A1 (fr) | 1977-04-29 |
| DK439576A (da) | 1977-04-02 |
| SE7610839L (sv) | 1977-04-02 |
| AU1807776A (en) | 1978-04-06 |
| BE846822A (fr) | 1977-03-30 |
| NL7610853A (nl) | 1977-04-05 |
| JPS5244230A (en) | 1977-04-07 |
| US4100267A (en) | 1978-07-11 |
| DE2644493A1 (de) | 1977-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lee et al. | Prevalence of human astrovirus serotypes in the Oxford region 1976–92, with evidence for two new serotypes | |
| Mockett et al. | Comparative studies with an enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) for antibodies to avian infectious bronchitis virus | |
| JP4625215B2 (ja) | Ｎｓ１糖タンパク質を用いるフラビウイルスの早期検出 | |
| Tan et al. | E. coli‐expressed recombinant norovirus capsid proteins maintain authentic antigenicity and receptor binding capability | |
| Dimmock | New virus-specific antigens in cells infected with influenza virus | |
| Kalimo et al. | Solid-phase radioimmunoassay of human immunoglobulin M and immunoglobulin G antibodies against herpes simplex virus type 1 capsid, envelope, and excreted antigens | |
| Chau et al. | Detection of IgA class antibody to hepatitis E virus in serum samples from patients with hepatitis E virus infection | |
| Zhang et al. | Occurrence of hepatitis E virus IgM, low avidity IgG serum antibodies, and viremia in sporadic cases of non‐A,‐B, and‐C acute hepatitis | |
| NO763344L (no) | ||
| Itoh et al. | The infection of chimpanzees with ECHO viruses | |
| World Health Organization | Advances in viral hepatitis: report of the WHO Expert Committee on Viral Hepatitis [meeting held in Geneva from 11 to 16 October 1976] | |
| KR20080012449A (ko) | 뉴클레오캡시드 또는 스파이크 단백질을 이용한 사스진단방법 | |
| McCaustland et al. | Hepatitis E virus infection in chimpanzees: a retrospective analysis | |
| Sinha et al. | Purification and serological detection of mycoplasmalike organisms from plants affected by peach eastern X-disease | |
| Marshall et al. | Rapid detection of polyomavirus BK by a shell vial cell culture assay | |
| Van Loon et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for measurement of antibody against cytomegalovirus and rubella virus in a single serum dilution. | |
| Lipton et al. | Human coproantibody against polioviruses | |
| Pillot et al. | Immunological characterization of a viral agent involved in epidemic and sporadic non-A, non-B hepatitis | |
| Schmidt et al. | Immunodiffusion reactions with rubella antigens | |
| Zuckerman et al. | antigens and viruses in acute hepatitis. | |
| Settergren et al. | Detection of specific serum immunoglobulin M in nephropathia epidemica (Scandinavian epidemic nephropathy) by a biotin-avidin-amplified immunofluorescence method | |
| Chan et al. | Comparison of serodiagnosis of group B coxsackievirus infections by an immunoglobulin M capture enzyme immunoassay versus microneutralization | |
| Monto et al. | Detection of coronavirus infection of man by immunofluorescence | |
| Stevens et al. | Rapid identification of viruses by indirect immunofluorescence: standardization and use of antiserum pool to nine respiratory viruses | |
| Robertson et al. | Serological approaches to distinguish immune response to hepatitis A vaccine and natural infection |