NO761979L - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO761979L NO761979L NO761979A NO761979A NO761979L NO 761979 L NO761979 L NO 761979L NO 761979 A NO761979 A NO 761979A NO 761979 A NO761979 A NO 761979A NO 761979 L NO761979 L NO 761979L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- clumping factor
- germs
- cleavage products
- fibrinogen
- suspension
- Prior art date
Links
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 21
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 21
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 20
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims description 19
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims description 19
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims description 19
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 16
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 16
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 16
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 8
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 108010069898 fibrinogen fragment X Proteins 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 3
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/14—Streptococcus; Staphylococcus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/305—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F)
- G01N2333/31—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Micrococcaceae (F) from Staphylococcus (G)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/882—Staphylococcus
- Y10S435/883—Staphylococcus aureus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Stabil clumpingfaktor.til påvisning
av fibrinogen- og fibrinspaltprodukter og fremgangsmåte til dens fremstilling.
Oppfinnelsen vedrører en lagringsdyktig, stabil clumpingfaktor, egnet som reagens til påvisning av fibrinogen-og f ibrinspalt.produkter samt en fremgangsmåte til dens'fremstilling.
Aktiveringen av det fibrinolytiske system fører til en proteolytisk avbygning av fibrinogen resp. fibrin. Ved. avbygning av fibrinogenet oppstår i første rekke det såkalte fragment X og ytterligere spaltprodukter som betegnes med A,
B og C Fragmentet X viser i-størrelse og egenskap den sterk-este likhet med fibrinogen'og lar seg langsomt bringe til koagulering med trombin. Ved fremadskridende proteolytisk avbygning av fragmentet X oppstår fragmentene' Y og D. Fragmentet Y bringes ikke mere til koagulering med trombin. En videreførende proteolyse av fragmentet Y fører til spaltproduktene D og E.
De mindre spaltprodukter D og E har ikke mere alle antigene determinanter av fibrinogen. Fibrinspaltproduktene er indika-torer for bestemte sykdommer og delvis inhibitorer av fibrin-dannelsen, sålede's at det består en klinisk interesse i å be-stemme innholdet av fibrinogen- og/eller fibrinspaltprodukter og dermed graden av en intraversalfibrinolyse.
Grunnlaget for en fremgangsmåte til bestemmelse
av de nevnte spaltprodukter består i at visse mikroorganismer, spes.ielt stammer av stafylokokker reagerer med fibrinogen■ og • fibrinspaltproduktene X og Y under makroskopisk synlig klump-dannelse. Egenskapene av klumpdannelsen av stafylokokkene til-, skrives et cellebundet enzym som bare er utilstrekkelig'karakterisert. Dét betegnes som "clumpingfaktor". Undertiden forstås herunder også den cellebundne koagulase. Den hurtige gjennomfør-barhet og høye følsomhet av prøvesystemet som beror på clumpingfaktoren, spesielt for bestemmelse av fibrinspaltproduktene X og Y>gjør dette prøvesystem spesielt egnet for rutinediagnostikk
av fibrinolyse..
Det har imidlertid vist seg at de ifølge teknikkens stand fremstilte suspensjoner av egnede stafylokokker bare få timer har den nødvendige aktivitet til påvisning av fibrinspaltprodukter og at de for konservering av aktiviteten frysetørkede .produkter hyppig ikke mere-lar seg suspendere.homogent i, oppløs-ning eller sammenklumper uspesifikt. Følsomheten av de resus-penderte kimer avtar hurtig. De er etter få timer uegnet som reagens til påvisning av fibrinspaltprodukter.
Det er nå funnet at clumpingfaktor-positivé mikro-' organismer, spesielt stafylokokker som er suspendert i en pufret vandig oppløsning av treverdig alkohol ikke taper deres egenskap
i nærvær av fibrinogen- og/eller fibrinspaltprodukter å klumpe, heller ikke etter månedslang lagring ved temperaturer under 25°C.
Oppfinnelsens gjenstand er følgelig en homogen suspensjon av drepte dumping-faktor-positive mikroorganismer, fortrinnsvis stafylokokker i en pufret vandig oppløsning av pH-verdi 7,0 til 7,7 inneholdende en deri oppløst flerverdig alkohol i en konsentrasjon på 3-50$?.
For det angjeldende prøvesystem er det allerede hyppig omtalt anvendelsen av Staphylococcus aureus Newman D2C. Ved stammen dreier det.seg ora'en clumpingfaktor-positiv oppløse-lig koagulase-negativ variant av stammen Newman, som med hensyn til dannelsen av clumpingfaktoren ble selektivisert av E.S. Duthie, Southampton, fra kulturer av Staphylococcus aureus Newman, deponert ved den nasjonale kolleksjon av typekulturer under nr. 8178.
Clumpingfaktor-positive stammer, som dessuten for-mår å stamme oppløselig koagulase er som det likeledes er kjent fra litteraturen å anvende for bestemmelse av fibrinspaltepro-dukter når den oppløselige koagulase eksempelvis ødelegges ved et oppvarmningstrinn. Således forbehandlede stafylokokker kan likeledes stabiliseres ifølge oppfinnelsen. Spesielt gunstige
resultater med hensyn til følsomhet og stabilitet av reagenser
.til påvisning av fibrinogen og fibrinspaltprodukter gir en Staphylococcus aureus med betegnelsen I.J.7 deponert ved American Type Culture Collection under nr. ATCC 31153, hvis morfologi kan-beskrives på følgende måte: Stammen ble opprinnelig isolert fra et menneskelig munnavstryk og selektert med hensyn til dannelsen av cellebunden koagulase. I flytende næringsmedium vokser stammen i små grupper eller parvis med en del på inntil ca. J>0% som enkelte cellekolonier. Stammen innfarves med de vanlige anilinfarve-stoffer.' Den er grampositiv.
Karakteristika av Staphylococcus aureus I.J.7 på følgende faste næringsmedier er:
Stammen Staphylococcus aureus I..J.7 viser følgende stoffskifte-ytelser:
Allerede ved1 fermentåsjonsfremgangsmåten, ifølge hvilke bakteriemassen ble fremstillet, er det å påse en god suspenderbarhet av kimene og et tilstrekkelig utbytte med hen-
syn til clumpingaktiviteten. Således er det hensiktsmessig å foreta formeringen av kimene i et medium som i det vesentlige består av en vandig oppløsning av kjøttpepton, melkesyre, resp. dens salter,. vitaminer'og glukose, alkali- og jordalkaliioner, fortrinnsvis i form av deres fysiologisk tålbare salter, som klorider, sulfater og fosfater. De i flasker, kar eller fermen-terere formerte ved filtrering eller sentrifugering fra nærings-mediet adskilte kimer hindres ved forholdsregler i deres for-meringsevne, som så lite som mulig nedsetter aktiviteten av
.clumpingfaktoren. På egnet og kjent måte foretas.utrydningen
av kimene ved oppvarmning til ca. 60-70°C i 30-90 minutter.
Den vesentlige stabiliserende effekt av clumping-faktoraktive stafylokokk-suspensjoner ligger i suspensjonsmediets innhold av 3-50% av en flerverdig alkohol. Derunder er innen oppfinnelsens ramme å forstå forbindelser som i en hydr<p>karbon-struktur, fortrinnsvis en alifatisk hydrokarbonstruktur på flere naboplasserte C-atomer hver har en hydroksylgruppe og' omfatter et molekylvektsområdé fra ca. 90 til ca. 500.000. De enkleste forbindelser av denne stoffklasse er den toyerdige alkoholglykol og den treverdige alkoholglycerol. Fordelaktige stabiliserende effekter viser eksempelvis også representanter for de seksverdige alkoholer som mannit og kullhydrater som glukose. Ved siden av de lavmolekylære forbindelser kan det ifølge oppfinnelsen også anvendes de høymolekylære glykoler som polyetylenglykol til stabilisering av suspensjonen. Spesielt fordelaktige egenskaper viser dessuten kullhydrater, spesielt deres høymolekylære representanter som såvel kan være av naturlig som også syntetisk opp-rinnelse. Som eksempler hertil skal det nevnes det naturlige forekommende glukosepolymerisatdekstran eller .det syntetiske polysakkarid av råsukker som fåes i handelen under betegnelsen "Ficoll" (varemerke fra Firma Pharmacia'Uppsala).
En forutsetning for anvendbarheten av de flerverdige alkoholer er deres oppløselighet i den pufrede. vandige oppløsning, som eventuelt kan tilsettes nøytralsalter for å frem- stille et tilnærmet-isotonisk miljø for mikroorganismecellene som skal suspenderes.
Suspensjonen av stafylokokkene innstilles hensikts-lessig ved hjelp av et pufferstoff slik det anvendes vanligvis ved biokjemiske arbeider, innstillet'på ønsket pH-verdi. Egnede pufferstoffer er hertil eksempelvis de som omtales av Good og andre i Biochemistry 5, ^72 (19 6 6 ) . Konsentrasjonen av bakteriene-som er suspendert i den pufrede vandige oppløsning som inneholder den flerverdige alkohol utgjør 1-20 x 10^/ml, hvis stafylokokksuspensjonen- skal anvendes direkte i prøvefremgangsmåteh til bestemmelse av fibrinogen- og/eller f ibrinspaltprodukter.. Sta-biliteten av clumpingfaktoren er imidlertid også sikret når kim-tettheten foreligger vesentlig forhøyet eller nedsatt i forhold,
til den angitte verdi.
Oppfinnelsens gjenstand er videre fremgangsmåten
til stabilisering av til mikroorganismer bundet clumpingfaktor, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat clumpingfaktor-dannende mikroorganismer,.fortrinnsvis stafylokokker, som dyrkes etter en kjent fremgangsmåte og utryddes under oppnåelse av clumpingfaktoren, suspenderes-homogent i en til pH 7,0 til 7,7, fortrinnsvis 7,3 til 7,5, pufret vandig oppløsning med et innhold.av 3-50/S av en flerverdig alkohol. Det består selvsagt ingen hinder til stabiliserte mikroorganismesuspensjon ifølge oppfinnelsen å sette ytterligere fra biokjemien, spesielt fra enzymkjemien kjente stoffer som bibeholder eller aktiverer den enzymatiske aktivitet, som f.eks. proteiner, spesielt albumin eller gelatinavbygningsprodukter. For hindring av en med mikro-biell kontaminasjon kan suspensjonen tilsettes et antimikrobielt middel, eksempelvis et antibiotikum.
En ytterligere gjenstand for oppfinnelsen er et reagens til påvisning av fibrinogen- og/eller ^ibrinspaltprodukter som som vesentlig bestanddel inneholder 1-20 x 10"^ kimer pr.
ml homogen suspenderte clumpingfaktor-positive mikroorganismer i en pufret vandig oppløsning som inneholder■en flerverdig alkohol og fremgangsmåten til dets fremstilling.
Endelig er en gjenstand for fremgangsmåten anvendelsen av den stabile stafylokokksuspensjon for bestemmelse av fibrinogen- og/eller fibrinspaltprodukter i kroppsvæsker, for-, trinnsvis i plasma eller serum etter kjente fremgangsmåter. Bestemmelsen av fibrinogen- og/eller fibrinspaltproduktene foretas eksempelvis således at serumet som skal undersøkes fremstilles fra en fortynningsrekkeblandes med en konstant, fortrinnsvis en lik mengde av stafylokokksuspensjonen ifølge oppfinnelsen, hvoretter det i løpet av få minutter registreres den høyeste serumfortynning, som ennu har en positiv klumping av kimene.
Settes denne verdi i forhold med en verdi som er oppnådd ved fortynning av serum av sunne personer kan deretter resultatet fastslås som avvikelse fra normalverdien..
Bestemmelsen foretas på kjent måte enklest på en
obj ektbærer hvorpå reaksjonsdeltagerne sammenblandes.i' like deler.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av noen eksempler.
Eksempel.
Fremstilling av kimsuspensjon.
Stafylokokkus aureus I.J.7 (ATCC 31153) oppfylles i 4 liter med vann i et medium av følgende sammensetning
og utstyres med følgende tilsetninger:
formeres inntil en konsentrasjon på 15 x 10 8 kimer pr. ml.
Deretter blir fermentereren, hvori formeringen ble foretatt oppvarmet 90 minutter ved 70°C. Kimene utvinnes ved hjelp av en sentrifuge ved 6500 omdreininger pr. minutt. Det overstående næringsmediunr kasseres og kimene suspenderes og sen-trifugeres flere ganger i isotonisk koksaltoppløsning. Endelig suspenderes de sentrifugerte kimer i en pufferoppløsning av følgende sammensetning.
Ojl M/l tris-hydroksymetyl-aminometan,
0,3 M/l natriumklorid,
0,02$ kloramfemikol,'
0,02$ humanalbumin.
Oppløsningens pH-verdi innstilles med 1 N saltsyre til 7,4, hvoretter det til en volumdel av pufferoppløsningen settes, en volumdel glycerol. Deretter innstilles suspensjonens kimtetthet- på 1 x 10^ pr. ml.
Den oppnådde suspensjon viser i følgende prøve-. system et liktblivende resultat over 12 måneder:
1. U tvinning av serum fra en frisk normal person.
5 ml friskt uttatt blod blandes omhyggelig med
,0,1 ml av en polyvalent proteinaseinhibitor tilsvarende 10 entiplasmin-enheter og 0,1 ml av en trombinoppløsning tilsvarende 10 NIH-enheter. Blandingen inkuberes 2 timer ved 37°C og deretter adskilles det overstående serum fra det dannede blodkoagu-lat ved sentrifugering.
2. Prøveblanding.
Under anvendelse av 0,1 M ■ tris-hydroksymetyl-amino-metansaltsyrepuffer av pH-verdi 7,4 fremstilles en geometrisk fortynninsrekke. av serumet, således at det fremkommer en fortynning på 1:1, 1:2, 1:4, 1:8 etc. Hver gang 0,05 ml av serum-fortynningen blandes med 0,05 ml av den tilsvarende til fore-lagte eksempel fremstillet stafylokokksuspensjon på en objekt-bærer. Man lar blandingen rotere, forsiktig i 2 minutter, og av-leser klumpingsreaksjonen mot en sort.bakgrunn. Det er å på-vise en klumping inntil en fortynning på 1:256. Det samme resultat fåes, når det istedenfor, som. angitt i eksemplet, den anvendte puffer blandes med 50$ glycerol med følgende stoffer.
Claims (8)
1. Homogen suspensjon av døde clumpingfaktor—positive mikroorganismer i en pufret vandig oppløsning av pH-verdi 7,0 til 7,7 med et innhold av 3 - 50% av minst en deri oppløselig
flerverdig alkohol.
2.. Suspensjon ifølge krav 1, k a r a .k t ' e r i s e ;r t ved at det som clumpingfaktor-positive mikroorganismer anvendes clumpingfaktor-positive kimer av Staphylococcus aureus.
3- Suspensjon ifølge krav 1 og 2, karakteri-. sert ved at det som clumpingfaktor-positive mikroorganismer anvendes kimer av Staphylococcus aureus I.J.7 (ATCC 31153)-.
4- . Suspensjon ifølge krav 1-3, karakteri-'sert ved at molekylvekten av den flerverdige alkohol
ligger i området mellom 90 og 500.000.
5> Fremgangsmåte til stabilisering av den til mikro-organismen bundede clumpingfaktor, karakterisert ved at clumpingfaktor-dannende mikroorganismer'dyrkes ifølge en kjent fremgangsmåte, utryddes under bibehold av clumpingfaktoren og suspenderes homogent i en pufret: vandig oppløsning av pH-verdi 7,0 til 7,7 med et innhold på 3 - 50% av minst et
deri oppløst flerverdig alkohol.
6. Reagens til påvisning av fibrinogen- og/eller fibrinspaltprodukter inneholdende som vesentlig bestanddel en suspensjon ifølge krav 1.-.4 med.et kimtall på 1 - 20 x 10^ ® kimer/ml.
7- Anvendelse av reagenset ifølge krav 6 for bestemmelse av fibrinogen-'og/eller fibrinspaltprodukter i kroppsvæsker.
8. Staphylococcus. aureus I.J.7 (ATCC 31153)-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2525804A DE2525804B2 (de) | 1975-06-10 | 1975-06-10 | Stabiler Clumping-Faktor, Verwendung desselben zum Nachweis von Fibrinogen- und Fibrinspaltprodukten und Herstellung desselben |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO761979L true NO761979L (no) | 1976-12-13 |
Family
ID=5948731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO761979A NO761979L (no) | 1975-06-10 | 1976-06-09 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4245039A (no) |
| JP (1) | JPS5953039B2 (no) |
| AT (1) | AT352902B (no) |
| BE (1) | BE842800A (no) |
| CA (1) | CA1067843A (no) |
| CH (1) | CH622827A5 (no) |
| DE (1) | DE2525804B2 (no) |
| DK (1) | DK254676A (no) |
| ES (1) | ES448571A1 (no) |
| FI (1) | FI761619A (no) |
| FR (1) | FR2314251A1 (no) |
| GB (1) | GB1551064A (no) |
| IL (1) | IL49735A (no) |
| IT (1) | IT1061405B (no) |
| LU (1) | LU75107A1 (no) |
| NL (1) | NL7606087A (no) |
| NO (1) | NO761979L (no) |
| SE (1) | SE7606613L (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2644622C3 (de) * | 1976-10-02 | 1979-11-29 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Extraktion von Mikroorganismen und diese enthaltende diagnostische Mittel |
| DE3330699A1 (de) * | 1983-08-25 | 1985-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur gleichzeitigen bestimmung von fibrinogen und fibrinogen-spaltprodukten im plasma |
| US4719114A (en) * | 1985-01-04 | 1988-01-12 | Durkee Industrial Foods, Corp. | Encapsulated yeast |
| DE3502878A1 (de) * | 1985-01-29 | 1986-07-31 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur bestimmung des fibrinolytischen zustands von plasma |
| US6692739B1 (en) * | 1998-08-31 | 2004-02-17 | Inhibitex, Inc. | Staphylococcal immunotherapeutics via donor selection and donor stimulation |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3843453A (en) * | 1970-11-27 | 1974-10-22 | Miles Lab | Process and composition for use in microbiological quality assurance |
| JPS502730B1 (no) * | 1970-12-26 | 1975-01-29 | ||
| ZA738333B (en) * | 1972-11-03 | 1974-11-27 | Shannon Ltd | Document filing systems |
| US3853710A (en) * | 1973-01-15 | 1974-12-10 | Ass For Pharmacologic Res Inc | Serum diagnostic test for maladies causing change in fibrinolytic activity in the blood |
| ES431736A1 (es) * | 1973-11-13 | 1977-05-16 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la preparacion de un agente para diagnos-tico para el proposito de efectuar el control de la capaci- dad de coagulacion de la sangre. |
| US3990947A (en) * | 1975-03-07 | 1976-11-09 | Warner-Lambert Company | Composition for detecting fibrinogen, fibrinogen split products and fibrin split products |
-
1975
- 1975-06-10 DE DE2525804A patent/DE2525804B2/de active Granted
-
1976
- 1976-05-10 SE SE7606613A patent/SE7606613L/xx unknown
- 1976-06-04 NL NL7606087A patent/NL7606087A/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-06-04 ES ES448571A patent/ES448571A1/es not_active Expired
- 1976-06-08 LU LU75107A patent/LU75107A1/xx unknown
- 1976-06-08 US US05/693,906 patent/US4245039A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-06-08 CH CH719376A patent/CH622827A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-06-08 IT IT24052/76A patent/IT1061405B/it active
- 1976-06-08 IL IL49735A patent/IL49735A/xx unknown
- 1976-06-08 FI FI761619A patent/FI761619A/fi not_active Application Discontinuation
- 1976-06-09 AT AT420176A patent/AT352902B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-06-09 CA CA254,388A patent/CA1067843A/en not_active Expired
- 1976-06-09 DK DK254676A patent/DK254676A/da unknown
- 1976-06-09 NO NO761979A patent/NO761979L/no unknown
- 1976-06-10 JP JP51068188A patent/JPS5953039B2/ja not_active Expired
- 1976-06-10 GB GB24057/76A patent/GB1551064A/en not_active Expired
- 1976-06-10 FR FR7617591A patent/FR2314251A1/fr active Granted
- 1976-06-10 BE BE167798A patent/BE842800A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI761619A (no) | 1976-12-11 |
| AT352902B (de) | 1979-10-10 |
| CA1067843A (en) | 1979-12-11 |
| DK254676A (da) | 1976-12-11 |
| IL49735A (en) | 1978-10-31 |
| FR2314251B1 (no) | 1980-04-30 |
| ATA420176A (de) | 1979-03-15 |
| US4245039A (en) | 1981-01-13 |
| LU75107A1 (no) | 1977-03-09 |
| SE7606613L (sv) | 1976-12-11 |
| FR2314251A1 (fr) | 1977-01-07 |
| CH622827A5 (no) | 1981-04-30 |
| IT1061405B (it) | 1983-02-28 |
| GB1551064A (en) | 1979-08-22 |
| NL7606087A (nl) | 1976-12-14 |
| BE842800A (fr) | 1976-12-10 |
| JPS5953039B2 (ja) | 1984-12-22 |
| DE2525804B2 (de) | 1980-04-03 |
| DE2525804A1 (de) | 1976-12-16 |
| ES448571A1 (es) | 1977-11-16 |
| JPS5234790A (en) | 1977-03-16 |
| DE2525804C3 (no) | 1980-12-04 |
| IL49735A0 (en) | 1976-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| McCARTY | THE LYSIS OF GROUP A HEMOLYTIC STREPTOCOCCI BY EXTRACELLULAR ENZYMES OF STREPTOMYCES ALBUS: I. PRODUCTION AND FRACTIONATION OF THE LYTIC ENZYMES | |
| Tillett et al. | The fibrinolytic activity of hemolytic streptococci | |
| McCarty | The occurrence of nucleases in culture filtrates of group A hemolytic streptococci | |
| US3360440A (en) | Cold water reconstitutable microbiological medium, process for preparation and use, ad product | |
| US4038143A (en) | Test kit for the genetic detection of microorganisms | |
| Duthie | The production of penicillinase by organisms of the subtilis group | |
| US3278378A (en) | Staphylococcus-derived antibiotic | |
| Chapman et al. | The coagulation of plasma by staphylococci | |
| NO761979L (no) | ||
| Sperber | The identification of staphylococci in clinical and food microbiology laboratories | |
| Corper et al. | The enzymes of the tubercle bacillus | |
| Murray et al. | The detection and assay of hyaluronidase by means of mucoid streptococci | |
| US3990947A (en) | Composition for detecting fibrinogen, fibrinogen split products and fibrin split products | |
| US3983003A (en) | Mycobacteria culture medium and method for in vitro cultivation of leprosy mycobacteria employing same | |
| Maegraith et al. | The mechanism of red blood cell destruction | |
| US3594284A (en) | Lysostaphin fermentation with accelerated time cycle | |
| US3669843A (en) | Process for the production of uricase | |
| Noguti et al. | Semi-in vitro repair of radiation-induced damage in transforming DNA of Bacillus subtilis | |
| CN113151081A (zh) | 一种百日咳鲍特菌培养基及其制备方法 | |
| Johansson | Response to and assay of vitamin B12 by a mutant of Escherichia coli. | |
| US3855065A (en) | Production of streptokinase | |
| CN113736684B (zh) | 一种利用西洋参内生菌发酵制备溶栓酶的方法 | |
| Gochnauer et al. | The production of hyaluronidase by Lancefield's Group B streptococci | |
| US3897363A (en) | Blood control standard | |
| Diehl | The specificity of bacterial proteolytic enzymes and their formation |