NO343526B1 - Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen, anvendelse av disse samt produkter inneholdende disse. - Google Patents

Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen, anvendelse av disse samt produkter inneholdende disse. Download PDF

Info

Publication number
NO343526B1
NO343526B1 NO20084335A NO20084335A NO343526B1 NO 343526 B1 NO343526 B1 NO 343526B1 NO 20084335 A NO20084335 A NO 20084335A NO 20084335 A NO20084335 A NO 20084335A NO 343526 B1 NO343526 B1 NO 343526B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
lactobacillus
products
bread
dough
lactobacillus plantarum
Prior art date
Application number
NO20084335A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20084335L (no
Inventor
Eva Grahn Håkansson
Jennie Olofsson
Original Assignee
Probi Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Probi Ab filed Critical Probi Ab
Publication of NO20084335L publication Critical patent/NO20084335L/no
Publication of NO343526B1 publication Critical patent/NO343526B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A21D8/045—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes with a leaven or a composition containing acidifying bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/109—Types of pasta, e.g. macaroni or noodles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Description

MIKROORGANISMER AV LACTOBACILLUS-STAMMEN, ANVENDELSE AV DISSE SAMT PRODUKTER INNEHOLDENDE DISSE.
TEKNISK FELT
Den foreliggende oppfinnelsen relateres til Lactobacillus-slekten som har evnen til å overleve i høye temperaturomgivelser. Disse termostabile mikroorganismene har evnen til å produsere levedyktige antibakterielle virkemidler i forskjellige matprodukter etter varmebehandling. De termostabile mikroorganismene av Lactobacillus-slekten kan bli inkludert i matprodukter som krever høy temperatur. En videre hensikt med den foreliggende oppfinnelsen er evnen til et matprodukt som omfatter de termostabile mikroorganismene av Lactobacillus-slekten å fremme immuntoleranse og homeostase. Videre, er to nye stammer av Lactobacillus slekt beskrevet.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Probiotika (“probiotics”) er definert som "levende mikroorganismer administrert i adekvate mengder som kreerer en fordelaktig helseeffekt for verten". Det meste probiotika er bakterier, som er små, enkelt-cellede organismer av slektene Lactobacillus, Lactococcus eller Bifidobacterium.
Som et minimum, bør probiotiske produkter være trygge, effektive, og bør opprettholde deres effektivitet og potens inntil de er konsumert. Dette krever en ansvarlig tilnærming både av produsenten og konsumenten.
Ved fødselen er Lactobacillus-stammer sammen med Bifidobacteria og Lactococcus de første til å kolonisere de sterile tarmene. Hos voksne er Lactobacillus-stammer også den dominerende normale floraen i tarmen. Det har blitt kjent at det er fordelaktig å inkludere melkesyreproduserende bakterier slik som Lactobacillus i dietten. I dag blir mange av produktene som har inkludert melkesyrebakterier administrert i meieriprodukter eller er administrert i form av konsentrater av mikroorganismene, i form av passende formulerte fremstillinger inkludert pulvere, granulater, tabletter eller kapsler som inneholder et høyt antall av en eller flere arter av de fordelaktige mikroorganismene.
Mange av disse applikasjonene inkluderer protein eller sukker fra melk, som mange mennesker er intolerante eller allergiske mot. Det er fordelaktig å administrere de gunstige mikroorganismene som en del av den normale dietten. Derfor, er det ønskelig å inkorporere de gunstige mikroorganismene i typer av matprodukter som er konsumert universalt og regelmessig i betydelige kvanta av et flertall av konsumenter slik som brød eller andre kornprodukter. Likevel, flere matprodukter er utsatt for temperaturer som ofte dreper mikroorganismene i matproduktet før de når konsumenten.
Mennesker som lider av cøliaki (CD) er ikke i stand til å spise en diett som inneholder proteinet gluten som ofte er representert i brød og kornprodukter. Videre, kommersielt tilgjengelige gluten-fire matprodukter slik som pasta er av en lav sensorisk og matlagingskvalitet og vanligvis mye dyrere enn normal pasta. Derfor, er det et behov for å fremskaffe nye og mindre kostbare matprodukter slik som pasta, brød og kornprodukter som kan bli konsumert av mennesker som lider av cøliaki.
WO 94/00019 relateres til bakte produkter som inneholder ønskede levedyktige mikroorganismer. Det er konkludert at mikroorganismer slik som melkesyrebakterier er drept under baketrinn som et resultat av varmeinaktivering. Følgelig, et ferskt bakt produkt inneholder ikke noen levedyktige mikroorganismer i det hele tatt. Derfor, er en fremgangsmåte beskrevet hvori en suspensjon av de levedyktige mikroorganismene er injisert inn i det bakte produktet. Det er et essensielt trekk at bakeriproduktet er kjølt ned til en temperatur under 70 ºC før de levedyktige mikroorganismene er injisert. Det er flere problemer når det injiseres en suspensjon av levedyktige mikroorganismer med en høy konsentrasjon inn i et bakt produkt. De injiserte mikroorganismene viser ikke noen signifikant vekst i brødet. Det er vanskelig å oppnå en lik distribusjon i det bakte brødet og smaken kunne bli berørt. Videre, dyrt utstyr behøves for å injisere den levedyktige mikroorganismesuspensjonen og det er ikke sannsynlig at en slik fremgangsmåte kunne bli anvendt utenfor en stor-skala fremstillingsprosess. Det kostbare utstyret og den høye konsentrasjonen til suspensjonen med mikroorganismer vil ofte resultere i et kostbart produkt.
Derfor er det en hensikt med den foreliggende oppfinnelsen å løse disse problemene.
WO 1999/045099 beskriver en isolert stamme av Lactobacillus plantarum, også referert til som LB931 (tilgangsnummer DSM11918) som anvendelig for å behandle og/eller forhindre urogenitale infeksjoner, og/eller innblanding i farmasøytiske sammensetninger og i produkter for personlig pleie, så som feminine hygieneprodukter.
WO 1998/055131 beskriver farmasøytiske preparater inneholdende minst Lactobacillus casei rhamnosus LB21 for profylakse mot og/eller behandling av gastrointestinale lidelser.
DE 3335351 beskriver fremstillingen av et bruksklart, tørket, revitaliserbart, surdeigsholdig bakekonsentrat for direkte fremstilling av brød, rundstykker og lignende bakevareprodukter.
SAMMENDRAG AV OPPFINNELSEN
Oppfinnerne av den foreliggende oppfinnelsen har overraskende funnet at termostabile mikroorganismer av Lactobacillus-slekten som er i stand til å overleve temperaturer fra 85 ºC i mer enn 25 minutter og har evnen til å produsere levedyktige antibakterielle virkemidler i forskjellige matprodukter etter slik varmebehandling.
Spesielt, har Lactobacillus plantarum og Lactobacillus rhamnosus evnen til å overleve i høy temperatur og i mikrobølgestrålet miljø og fortsatt produsere et antibakterielt virkemiddel som også inhiberer vekst av mugg i matprodukter. Videre, er to spesifikke eksempler av kjente Lactobacillus-stammer beskrevet, Lactobacillus plantarum LB931 og Lactobacillus rhamnosus, LB21. Videre, er to nye stammer av Lactobacillus beskrevet, referert til som Lactobacillus plantarum LB7c og Lactobacillus plantarum LB3e.
Oppfinnerne har også vist at matprodukter som omfatter de termostabile levedyktige Lactobacillus-stammene valgt fra artene Lactobacillus plantarum og Lactobacillus rhamnosus og spesielt Lactobacillus plantarum LB931, Lactobacillus rhamnosus, LB21, Lactobacillus plantarum LB7c og Lactobacillus plantarum LB3e kan redusere den immunologiske responsen i tarmen på grunn av gluten. Et matprodukt som inneholder slike termostabile levedyktige Lactobacillus-stammer som fremmer immuntoleranse i autoimmune sykdommer slik som cøliaki.
DEFINISJONER
Som beskrevet heri, relateres termen “LB” til bakterier av slekten Lactobacillus.
Som beskrevet heri, relateres termen “termostabil” til bakterier som overlever i temperaturer høyere enn 80°C i mer enn 25 minutter.
Som beskrevet heri, relateres termen “melkesyrebakterier” til bakterier som produserer melkesyre, slik som bakterier som tilhører slektene Lactobacillus og Lactococcus.
Som beskrevet heri, relateres termen “CFU” til koloni-dannende enheter.
Som beskrevet heri, relateres termen “matprodukter” til matprodukter slik som brød, deig, kornprodukter slik som grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukter slik som supper, halvstekte produkter, enkle brød og stuet frukt.
Som beskrevet heri, relateres termen “varmekilde” til varmekilder som varmer matproduktet slik som en ovnsplate, komfyr, mikrobølgebestrålet miljø, mikrobølgeovn eller et vannbad.
En deig anvendt heri inneholder vanligvis en væske slik som melk eller vann, mel og gjær.
Som beskrevet heri, relateres termen “en skive brød” til en typisk skive brød som veier omtrent 15-40g.
Som beskrevet heri, relateres termen “halvstekte produkter” til semi-ferdige produkter der bakingen vil bli avsluttet etter levering til forbrukeren.
Som beskrevet heri, relateres termen “løselige substanser” til organiske syrer, uorganiske syrer, slik som melkesyre, ravsyre, eddiksyre, og propionsyre.
KORT BESKRIVELSE AV TEGNINGENE
Figur 1 beskriver overlevelsesevnen til frysetørket LB21 på korn lagret i romtemperatur.
Figur 2 beskriver overlevelsesevnen til frysetørket LB21 på korn lagret i 4ºC.
Figur 3 beskriver overlevelsesevnen til frysetørket LB931 og LB21 i snack-plater lagret i 4ºC.
Figur 4 beskriver overlevelsesevnen til LB931 og LB21 i mikrobølgebestrålet miljø.
Figur 5 beskriver overlevelsesevnen til LB931, LB7c, LB3e og L1A i 80ºC.
Figur 6 beskriver overlevelsesevnen til LB931 i 90ºC.
Figur 7 beskriver Lactobacillus-evnen til å overleve passasjen gjennom den gastrointestinale trakten i surdeigsbrød.
Figur 8 beskriver ekspresjon av organiske syrer i et Auto-Skalert Kromatogram av supernatanter av Lactobacillus-stammene LB931, LB3e, LB7c og LB21 (analyse ferdigstilt av Steins Laboratorium).
Figur 9 beskriver ekspresjon av melkesyrer i et Auto-Skalert Kromatogram av supernatanter av Lactobacillus-stammene LB931, LB3e, LB7c og LB21 (analyse ferdigstilt av Steins Laboratorium).
Figur 10 beskriver produksjonen av cytokiner fra polyklonale aktiverte T-celler i nærvær av de probiotiske bakteriestammene LB931, LB3, LB7 og LB21.
Figur 11 beskriver at både levende LB931 og levende LB21 ga de samme cytokinresponsene på aktiverte T-celler.
Figur 12 beskriver at lactobacillusen ikke økte IFN-γ-nivåene eller IL-4-nivåene til hvilende T-celler.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSE
Den foreliggende oppfinnelsen relateres til termostabile mikroorganismer av Lactobacillus-slekten som er i stand til å overleve temperaturer fra 80 ºC i mer enn 25 minutter.
Det er beskrevet at utvalgte arter av mikroorganismer av Lactobacillus-slekten valgt fra artene Lactobacillus plantarum og Lactobacillus rhamnosus har evnen til å produsere levedyktige antibakterielle virkemidler i forskjellige matprodukter etter varmebehandling.
Videre, er to nye stammer av Lactobacillus beskrevet, Lactobacillus-stamme valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB7c og Lactobacillus plantarum LB3e.
En utførelsesform er rettet mot mikroorganismer av Lactobacillus-stammen valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB3e og Lactobacillus plantarum LB7c som har blitt deponert ved Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, og har blitt tildelt adgangsnummer 17852 og 17853 respektivt som er i stand til å overleve temperaturer fra 80 ºC i mer enn 25 minutter.
En hvilket som helst av de to ovenfor nevnte Lactobacillus-stammene kunne bli anvendt i matprodukter slik som brød, deig, kornprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukter, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt.
Videre, et matprodukt slik som brød, deig, kornprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukt, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt karakterisert ved at ovennevnte matprodukt også inneholder en levedyktig Lactobacillus-stamme valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB3e og Lactobacillus plantarum LB7c, som har blitt deponert ved Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen og har blitt tilegnet tilgangsnummer henholdsvis 17852 og 17853.
Et brød- eller deigprodukt hvor brød- eller deigproduktet også inneholder en levedyktige Lactobacillus-stamme valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB931 som har blitt deponert ved Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen og har blitt tildelt adgangsnummer DSM 11918, Lactobacillus rhamnosus LB21 som har blitt deponert ved NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate og har blitt tildelt adgangsnummer NCIMB 40564, Lactobacillus plantarum LB3e (DSM 17852) og Lactobacillus plantarum LB7c (DSM 17853), hvor de deponerte stammene er i stand til å overleve temperaturer fra 85 °C i mer enn 25 minutter og nevnte lactobacilli av minst en av nevnte stammer er innblandet i nevnte brød – eller deigprodukt før en varmebehandling.
Et matprodukt fremstilt ved varmebehandling av et matprodukt-startmateriale som anvender en varmekilde som eksponerer ovennevnte matprodukt til en temperatur over 85 ºC hvori det ovennevnte matproduktet også inneholder en levedyktig Lactobacillus-stamme fortrinnsvis valgt fra Lactobacillus plantarum LB931 (DSM11918), Lactobacillus rhamnosus LB21 (NCIMB 40564), Lactobacillus plantarum LB7c (DSM 17853) og Lactobacillus plantarum LB3e (DSM 17852) respektivt.
I videre utførelsesformer er anvendelsen av de kjente levedyktige Lactobacillusstammene valgt fra artene Lactobacillus plantarum (DSM 11918), Lactobacillus rhamnosus LB21 (NCIMB 4056) for å fremstille et matprodukt slik brød, deig, kornprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukt, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt hvor matproduktet er fremstilt ved varmebehandling av en matprodukt utgangsmateriale ved bruk av en varmekilde som eksponerer nevnte matprodukt til en temperatur over 85 °C, og hvor lactobacilli av minst en av stammene er innblandet i nevnte matprodukt før en varmebehandling.
Et matprodukt nevnt over hvori den levedyktige Lactobacillus-stammen er foreliggende i en mengde over 1,0x10<3>CFU/g, fortrinnsvis over 1,0x10<4>CFU/g og mest foretrukket over 1,0x10<5>CFU/g, levende bakterier per gram av matproduktet etter varmebehandlingen.
En videre hensikt med den foreliggende oppfinnelsen er evnen til et matprodukt nevnt over hvori den termostabile levedyktige Lactobacillus-stammen valgt fra artene Lactobacillus plantarum og Lactobacillus rhamnosus reduserer den immunologiske responsen i tarmen på grunn av gluten og spesielt, Lactobacillus plantarum LB931 (DSM11918), Lactobacillus rhamnosus, LB21 (NCIMB 40564), Lactobacillus plantarum LB7c (DSM 17853) og Lactobacillus plantarum LB3e (DSM 17852).
Et matprodukt fremstilt ved varmebehandling av et matprodukt utgangsmateriale ved bruk av en varmekilde som eksponerer nevnte matprodukt til en temperatur over -85 °C er kjennetegnet ved at nevnte matprodukt også inneholder en levedyktig termostabil Lactobacillus-stamme valgt fra stammene av Lactobacillus plantarum LB931 (DSM11918), Lactobacillus rhamnosus, LB21 (NCIMB 40564), Lactobacillus plantarum LB7c (DSM 17853) og Lactobacillus plantarum LB3e (DSM 17852), hvor nevnte matprodukt fremmer immuntoleranse i autoimmune sykdommer slik som cøliaki.
Identiteten og deponeringstallet for stammene av den foreliggende oppfinnelsen er listet opp her.
LB931 ́en har blitt deponert 9. jan., 1998 ved DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1b D-38124 Braunschweig. Den har blitt tildelt adgangsnummer DSM11918.
LB21 ́en har blitt deponert 11. juni, 1993 ved NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, AB219YA, UK. Den har blitt tildelt adgangsnummer NCIMB 40564.
LB3e ́en har blitt deponert 6. jan., 2006 at DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1b D-38124 Braunschweig. Den har blitt tildelt adgangsnummer DSM 17852.
LB7c ́en har blitt deponert 6. jan, 2006 ved DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1b D-38124 Braunschweig. Den har blitt tildelt adgangsnummer DSM 17853.
Lactobacillus-stammene nevnt over kunne bli referert til som LB931 (DSM11918), LB21 (NCIMB 40564), LB3e (DSM 17852) og LB7c (DSM 17853).
Matprodukter i følge den foreliggende oppfinnelsen kan omfatte en eller flere stammer valgt fra LB-stammene definert over. Andre blandinger eller enkle termostabile LB-stammer kunne bli anvendt fordelaktig innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.
De over nevnte fire termostabile Lactobacillus-stammene har evnen til å overleve i en høy temperatur omgivelse dvs. over 80 ºC i mer enn 25 minutter og fortsatt produsere substanser (som kunne være løselige, slik som melkesyre, ravsyre, eddiksyre, og propionsyre) som inhiberer veksten av patogene mikroorganismer, slik som enterobakterier, gruppe B streptokokker, stafylokokker og gjær. Figur 8 beskriver ekspresjon av organiske syrer og Figur 9 beskriver ekspresjon av melkesyrer i et Auto-Skalert Kromatogram av supernatanter av Lactobacillus-stammene LB931, LB3e, LB7c og LB21.
Disse stammene er utholdende og overlever lett lange perioder med lagring i romtemperatur. Følgelig har produkter som inneholder LB931, LB21, LB3e og LB7c en lang holdbarhet. Stammene kan lett bli inkludert i forskjellige matprodukter.
Evnen for Lactobacillus til å overleve i forskjellige applikasjoner ble bestemt, se Eksempel 2. Ingen større reduksjon av CFU/g ble detektert i helkornvellingpulver-fremstillingen med fryse-tørret LB931 og LB21 som ble lagret i 37° i 31 dager.
Evnen for Lactobacillus til å overleve i snack-plater når de er satt på havrekorn ble bestemt, se Eksempel 3. Det er mulig å legge Lactobacillus-stammer på korn og de vil overleve i 8 måneder i romtemperatur og mer enn 8 måneder i 4°C.
Både LB931 og LB21 har evnen til å overleve i snack-plater i 25 dager. Snackplatene som inneholder LB931 hadde 7,6 x 10<6>CFU/ml ved dag 46.
Derfor, kan de termostabile LB-stammene holde ut lagring i lang tid, og det er mulig å indusere stammen i forskjellige typer av fremstillinger. De kunne bli anvendt i halvstekte produkter.
Overlevelseskapasiteten i et mikrobølgebestrålet miljø ble også evaluert, se Eksempel 4. Melkekorndrikker ble fremstilt sammen med Lactobacillusstammene ved en startkonsentrasjon på 10<7>CFU/ml. LB931 viste en høyere CFU/ml enn LB21 inntil 80 sekunder. CFU/ml av LB21 forble uforandret fra 30 sekunder til 90 sekunder. Lactobacillus har evnen til å overleve i kornprodukter i mikrobølgebestrålet miljø. Resultatene er presentert i Figur 4.
Drepingen av de fire forskjellige stammene av melkesyrebakterier med UV-lys ble undersøkt og en interferenstest ble anvendt til å teste de fire melkesyrestammene for deres evne til å inhibere vekst av patogener og derfor også deres kapasitet til å fungere som probiotika, resultatene er vist i Eksempel 5.
Den høye temperaturresistensen til Lactobacillus-stammene har blitt undersøkt, se Eksempel 6. LB931, LB3e og LB7c har evnen til å overleve i 80°C i mer enn 25 minutter og LB931 overlever i mer enn 5 minutter i 90°C.
Kontrollstammen, L1A, overlever ikke selv i 5 minutter i 80°C. Resultatene er presentert i Figur 5 og 6.
Vekstkapasitetene til Lactobacillus ́en i surdeigstartere har blitt undersøkt, se Eksempel 7. To forskjellige typer mel, hvete og rug, ble anvendt til å bestemme det beste miljøet for Lactobacillus ́en. Typen mel påvirket ikke utgangen av eksperimentet. Starterne økte en log og endte på den samme CFU/g uavhengig av meltypene. Som en kontroll, ble Lactococcus Lactis L1A anvendt. L1A vokste ikke i starteren. CFU/g ́en hadde minket fra dag 0 til dag 3.
I Eksempel 8 er overlevelsen av Lactobacillus ́en i brød vist. Temperaturene i forskjellige brød ble etablert, se tabell 13. Overlevelsen av bakteriene i brødet ble bestemt ved forskjellige tider, se tabeller 14-16. Lactobacillus Lactis L1A ble anvendt som kontroll. Alle Lactobacillus-stammene som ble testet overlevde i alle de forskjellige temperaturene og tidene. Kontrollen, L1A, overlevde ikke. Der var ingen visuell vekst av bakteriene fra dag 0.
Avhengig av matproduktet og formålet er det ønskelig at det omfatter den levedyktige Lactobacillus-stammen i en tilstrekkelig mengde som er fortrinnsvis så høy som mulig, for å fremskaffe de ønskelige effektene. De eksperimentelle resultatene viser at mengder over 1,0x10<10>CFU/g kan bli oppnådd. I et matprodukt bør den levedyktige Lactobacillus-stammen være foreliggende i en mengde over 1,0x10<3>CFU/g, fortrinnsvis over 1,0x10<4>CFU/g og mest foretrukket over 1,0x10<5>CFU/g, levende bakterier per gram av matproduktet.
Et eksempel er en skive brød som veier minst 15 gram hvori den levedyktige Lactobacillus-stammen er foreliggende i en mengde over 1,0 x 10<3>CFU/g, fortrinnsvis over 1,0 x 10<4>CFU/g og mest foretrukket over 1,0 x 10<5>CFU/g, levende bakterier per gram av en skive brød.
For eksempel, en levedyktig Lactobacillus-stamme hvori startkonsentrasjonen er omtrent 1 x 10<6>har en CFU over 1x10<3>etter å ha blitt eksponert for temperaturer fra 80 ºC i mer enn 25 minutter eller alternativt i mer enn 10 s i et mikrobølgebestrålet miljø.
Evnen til Lactobacillus til å fremme immuntoleranse i autoimmune sykdommer slik som cøliaki har blitt undersøkt i in vivo-studier. Lactobacillus-stammene er i stand til å redusere den inflammatoriske lesjonen i den øvre intestinale slimhinnen og redusere nivåene av antistoffer assosiert med autoimmune sykdommer. Eksempel 9a, 9b og 9c indikerer også at Lactobacillus ́en har evnen til å påvirke immunsystemet på en positiv måte. Barna som ble gitt Lactobacillus ́en opplevde ikke noen symptomer relatert til cøliakien. Alle barna som ble gitt placebo ble syke etter 1-3.5 måneder provokasjon med gluten. Biopsien viste normalt vev i gruppen gitt Lactobacillus og vevet viste indikasjon på inflammasjon i gruppen gitt placebo. Produkter i følge den foreliggende oppfinnelsen kan omfatte en eller flere stammer valgt fra den over definerte gruppen. Andre blandinger eller enkle LB-stammer kunne fordelaktig bli anvendt innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.
Den foreliggende oppfinnelsen vil nå bli beskrevet med referanse til de følgende eksemplene, som ikke bør bli betraktet som begrensende for omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.
EKSEMPLER
Eksempel 1
Isolering og identifisering av Lactobacillus-stammene.
LB931 ble isolert fra en frisk kvinne. Stammen ble klassifisert som Lactobacillus plantarum i følge test-kit ́et API 50 CH (API systems, BioMerieux, FR), og ble benevnt LB931. Stammen ble videre typet med DNA-analyse med SDS-page ved BCCM/LMG (Belgia) til å være Lactobacillus plantarum-pentosusparaplantarum.
LB21 ble isolert fra en frisk baby. Stammen ble klassifisert som Lactobacillus rhamnosus i følge test-kit ́et API 50 (API systems, BioMerieux, FR), og ble benevnt LB21. Stammen ble videre typet med DNA-analyse med SDS-page ved NCIMB (UK) til å være Lactobacillus rhamnosus.
LB3e ble isolert fra menneske. Stammen ble klassifisert som Lactobacillus plantarum i følge kit ́et API 50 (API systems, BioMerieux, FR), og ble benevnt LB3e. Stammen ble videre typet med 16S rDNA gensekvens ved DSMZ (Tyskland) til å være Lactobacillus plantarum.
LB7c ble isolert fra menneske. Stammen ble klassifisert som Lactobacillus plantarum i følge kit ́et API 50 (API systems, BioMerieux, FR), og ble benevnt LB7c. Stammen ble videre typet med 16S rDNA gensekvens ved DSMZ (Tyskland) til å være Lactobacillus plantarum.
Eksempel 2
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i forskjellige fremstillinger.
a) Skummetmelk-fremstillinger av LB931 ble fryse-tørret i følge standard fremgangsmåter. Til å bestemme holdbarheten av fremstillingene ble det oppnådde pulveret lagret i helkornvellingspulver ved 37°C i 31 dager for å symbolisere lagring i romtemperatur i 6 måneder. Antallet bakterier ble bestemt etter 31 dager og resultatene er beskrevet i tabell 1 under.
TABELL 1
b) LB931 oppløst i en suspensjon av like deler skummetmelk og 0.9% NaCl.
De oppløste bakteriene ble deretter inkubert ved forskjellige temperaturer. Mengden av bakterier ble kontinuerlig monitorert ved celletelling.
Resultatene er beskrevet i tabell 2 under.
TABELL 2
Resultatene viser at LB931 er stabile i en blanding av skummetmelk og NaCl i en periode på en måned ved 4°C.
c) En skummetmelk-fremstilling av LB931 ble fryse-tørret i følge standard fremgangsmåter. Det fremstilte pulveret ble lagret i Petriskåler ved romtemperatur og ved 6°C. Antall bakterier ble bestemt etter 7 dager og 25 dager, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabell 3 under.
TABELL 3
Antallet bakterier i det fryse-tørrede pulveret ble også monitorert hver fjerde uke opp til 68 uker. Etter et år, ved 6°C, kunne mer enn 10<5>CFU/g LB931 bli funnet.
d) En skummetmelk-fremstilling av LB21 ble fryse-tørret i følge standard fremgangsmåter. Det fremstilte pulveret ble lagret i en glassflaske ved 4°C. Antall bakterier ble bestemt etter 0, 10, 40 og 365 dager, respektivt.
Resultatene er beskrevet i tabell 4 under.
Tabell 4
Eksempel 3
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i forskjellige havreprodukter.
a) En fryse-tørret fremstilling av LB21 ble lagt på rullet havre. Seks forskjellige fremgangsmåter ble anvendt til å legge bakteriene på kornet. Den fryse-tørrede LB21 ́en ble blandet med maltodekstrin/glukose slik at de ville klistre seg til kornet. Bakteriene ble lagt på kornet ved forskjellige temperaturer og ble også tørket i forskjellig temperatur for å finne den beste fremgangsmåten. Resultatene er vist i Tabell 5.
TABELL 5
Kornet med bakterier ble lagret i både 25°C og i 4°C i 244 dager.
Overlevelsesevnen ble bestemt en gang i måneden. Resultatene er beskrevet i tabeller 6-7 under.
TABELL 6. Lagret i 25°C
TABELL 7. Lagret i 4°C
b) Snack-plater ble fremstilt med LB931 og LB21. Hver plate veide 25g før de ble delt i 4 biter. Hver bit ble puttet i en steril pose i 4°C. Antall bakterier ble bestemt etter 0, 10, 21 og 46 dager. Resultatene er beskrevet i tabell 8 under.
TABELL 8
Termostabile LB-stammer kan overleve i høy temperatur i forskjellige kornfremstillinger.
Eksempel 4
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i mikrobølgebestrålet miljø.
En fryse-tørret fremstilling av LB931 ble inkludert i det konvensjonelle melkekorndrikk-pulveret og i grøthavre. Melkekorndrikken og grøthavren ble fremstilt i følge instruksjonen på pakningen som resulterte i et volum på omtrent 200 ml. En mikrobølgeovn (850W) med det indre målet 30x29x20 cm ble anvendt som varmekilden. Derved var det indre volumet til mikrobølgeovnen omtrent 17 dm<3>. Antall bakterier ble bestemt etter 30 sekunder, 60 sekunder, 70 sekunder, 80 sekunder og 90 sekunder, respektivt. Temperaturen til melkekorndrikken etter 90 sekunder i mikrobølgeovnen var omtrent 60°C. Prosedyren ble repetert med overnattkultur av LB21. De termostabile LB-stammene er i stand til å overleve i mikrobølgebestrålet miljø. Resultatene er beskrevet i tabell 9 under.
TABELL 9
<,>
Eksempel 5
Drepingen av de fire forskjellige stammene av melkesyrebakterier med UV-lys ble undersøkt. De fire forskjellige stammene av melkesyrebakterier Lactobacillus plantarum; LB931 (isolert fra urinveien til menneske), LB3e (isolert fra saliva fra barn), LB7c (isolert fra tannoverflaten til barn) og LB21 (isolert fra avføring fra nyfødt barn) anvendt i dette eksempelet ble spredt på MRS-agarplater og inkubert i 20 t ved 37ºC, 5% CO2. De ble deretter inokulert i 3 ml MRS-buljong ved 37ºC, 5 % CO2 over natt som genererer omtrent 10<9>CFU/ml. Overnattkulturene av stammene ble tilsatt til et sluttvolum på 1 % i MRS-buljong og ble inkubert i 20 t ved 37ºC, 5% CO2. Bakteriene ble sentrifugert (3800 rpm, 20 min, 4ºC) og deretter vasket 2 ganger i 10 ml 0.9% NaCl. Bakteriene ble oppløst i 0.9% NaCl. Konsentrasjonen av bakteriene ble bestemt ved kolonidannende enhet (CFU) telling. Bakteriene ble bestrålt i forskjellige tider ved en avstand på 5 cm fra en UVC-lampe (Kendro laboratorieprodukter, 2x15W, 254 nm). Melkesyrebakterier LB7c og LB21 ble bestrålt i 9 t mens melkesyrebakterier LB3e og LB931 ble bestrålt i 10 t. Døden av bakteriene ble kontrollert på MRS agarplate, inkubert i 48 t ved 37ºC, 5% CO2.
Agar belegg-interferenstest
En interferenstest ble anvendt for å teste de fire melkesyrestammene (se tabell 10 for deres evne til å inhibere vekst av patogener. De fire Lactobacillusstammene i tabell 10 ble inokulert i 3 ml MRS-buljong og deretter inkubert i 37ºC, 5 % CO2 i 20 t.1 ml av kulturene ble blandet med 23 ml MRS-agar sammen med 2 ml 7,5M NaAc, platene ble deretter inkubert i 20 t i 37ºC, 5% CO2. Ni forskjellige interferenstest-stammer (ITS) (NUS, Umeå, Sverige), isolert fra mennesker med urinveisinfeksjoner, ble inokulert i M17 buljong og inkubert i 37ºC over natt. Et andre agarlag på 25 ml M17 med 750 µl 6,5M KH2PO4 ble funnet over det første. Teststammene, i stasjonær fase, ble replikert med hjelp av en Steers stålpinne (Steers et al., 1959) på M17 agaroverflaten og også på en kontrollplate og deretter inkubert i 37ºC, 5% CO2 over natten.
Inhibering av patogener med melkesyrebakterier
En interferenstest ble gjort for å teste de fire melkesyrebakteriestammene for deres evne til å inhibere patogener og derfor også deres kapasitet til å virke
som probiotika. Resultatet fra denne testen er vist i tabell 10. LB931 inhiberte totalt alle 8 patogener testet. LB3, LB7 og LB21 viste total inhibering av alle patogener unntatt Candida albicans, som ble delvis inhibert. Lactobacillus acidophilus ble anvendt som kontroll.
TABELL 10. Inhibering av patogener med melkesyrebakterier
V
, ingen inhibering; ±, delvis inhibering; -, total inhibering; ?, ikke utført
Eksempel 6
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i forskjellige temperaturer.
a) Forskjellige suspensjoner av Lactobacillus ble fremstilt av fryse-tørret LB931
i NaCl 0.9 % og overnattkultur av LB931, LB7c, LB3e og L1A.
Suspensjonene var ved 10<9>-10<11>CFU/ml.5ml av NaCl 0.9 % ble varmet opp til 80°C i et vannbad. Så snart NaCl ́et var 80°C ble 100µl bakteriesuspensjon tilsatt. Antall bakterier ble bestemt etter 5 minutter, 10 minutter, 15 minutter, 20 minutter og 25 minutter, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabell 11 under (NVG= ingen synlig vekst).
TABELL 11
5 0
b) 80°C i mer enn 20, 30, 40, 50, 60 minutter
5ml av MRS ble varmet til 85°C i et vannbad.500μl av en overnattkultur ble tilsatt til suspensjonen. Evnen til å overleve ble bestemt etter 20, 30, 40, 50 og 60 minutter respektivt. Resultatene er vist i tabell 12 under.
TABELL 12
VG= synlig vekst
c) En suspensjon av LB931 ble fremstilt ved å suspendere fryse-tørret LB931 i NaCl 0.9 % og også en overnattkultur av LB931. NaCl ́et ble varmet opp til 90°C i et vannbad. Så snart NaCl ́et var 80°C ble 100µl bakteriesuspensjon tilsatt. Antall bakterier ble bestemt etter 0.5 minutter, 1 minutt, 2 minutter, 3 minutter, 4 minutter og 5 minutter, respektivt.
Resultatene er beskrevet i tabell 13 under.
TABELL 13
En fryse-tørret fremstilling av LB931 og LB21 ble inkludert i det konvensjonelle melkekorndrikkpulveret og i grøthavren. Melkekorndrikken ble fremstilt i følge instruksjonen på pakningen. Ovnen ble anvendt som varmekilden. Antall bakterier ble bestemt etter at melkekorndrikken ble varmet opp til 37°C. Resultatene er beskrevet i tabell 14 under.TABELL 14
Eksempel 7
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i surdeigstarter.
a) Forskjellige surdeigstartere ble fremstilt av hvetemel som inneholder forskjellige stammer av Lactobacillus og Lactococcus. Mel og vann ble blandet til et volum på 3dl.10ml av tint bakteriesuspensjon ble inkludert i starterne. Surdeigstarterne ble holdt i romtemperatur i 3 dager. Hver dag ble surdeigstarterne gitt mer honning, mel og vann. Antall bakterier ble bestemt etter 3 dager. Etter de 3 dagene i romtemperatur ble starterne satt ved 4°C i 6 dager. Antall bakterier ble bestemt etter 3dager, og 6 dager, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabeller 15- 16 under.
TABELL 15
TABELL 16
b) Forskjellige surdeigstartere ble fremstilt av rugmel som inneholder forskjellige stammer av lactobacillus. Mel og vann ble blandet til et volum på 3dl. 10ml av tint bakteriesuspensjon ble inkludert i starterne.
Surdeigstarterne ble holdt i romtemperatur i 3 dager. Surdeigstarterne ble hver dag gitt mer honning, mel og vann. Antall bakterier ble bestemt etter 3 dager. Deretter ble starterne holdt i 4°C i 6 dager. Antall bakterier ble bestemt etter 3 dager og 6 dager, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabell 17-18 under.
TABELL 17
TABELL 18
Eksempel 8
Overlevelsesevnene til Lactobacillus i brød, visuell deteksjon av mugg i brødet og isolering av Lactobacillus i avføringsprøver
a) En surdeig ble fremstilt med 1dl hvete surdeigstarter som inneholder LB931, vann, mel av hvete og rug til et totalt volum på 6dl. Deigen ble hevet 2x45 minutter og bakt ved temperaturen mellom 230 - 240°C i 25-30 minutter. Temperaturen i brødet ble målt etter at brødet ble tatt ut av komfyren, 5 minutter, 10 minutter, 15 minutter og 20 minutter, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabell 19 under.
TABELL 19
b) Surdeigsbrød ble bakt med termostabil Lactobacillus. Overlevelsen av bakteriene i brødet ble bestemt etter 2 dager, 3 dager, 4 dager, 6 dager og 7 dager, respektivt. Resultatene er beskrevet i tabeller 20-25 under.
TABELL 20
Bakt i 230°C i 20 minutter (Surdeigstarter)
TABELL 21
Bakt i 230°C i 25 minutter (Rug Surdeigstarter)
TABELL 22
Bakt i 230°C i 35 minutter (Rug Surdeigstarter)
TABELL 23
Bakt i 240°C i 30 minutter vekst
c) Brød ble fremstilt av hvetemel som inneholder stammen LB21. Varmt vann, honning, gjær, salt, hvete og 5 ml LB21 ved CFU 1 x 10<9>ble kombinert i en stor blandebolle til et totalt volum på 1 liter. CFU/ml av deigen ble 1 x 10<6>. Deigen ble eltet i 10 minutter inntil den trakk bort fra sidene av bollen og føltes myk, smidig og glatt. Deigen ble dekket og etterlatt for å heve i 1 time. Den store batchen ble delt opp i mindre deler. Deigen ble dekket igjen og ble etterlatt i 45 minutter for å heve. Brødet ble bakt i 220 °C i 20 minutter og kjølt på et stativ. Overlevelsen av bakteriene i brødet ble bestemt etter 0 dager og 3 dager respektivt. Resultatene er beskrevet i tabell 24 under.
TABELL 24
Det er mulig at CFU/g kunne bli høyere dersom brødet kan bli kjølt raskere etter baking.
d) Visuell deteksjon av mugg i brødet, ingen synlig vekst (NVG).
Skiver av brød som inneholder Lactobacillus ble holdt i lufttette plastposer. Posene ble sjekket hver dag og vekstene av mugg ble bestemt. Resultatene er beskrevet i tabell 25 under.
TABELL 25
A ll b k i
g g
e) 3 friske individer konsumerte brød som inneholder LB931, LB21, LB3e og LB7c i ti etterfølgende dager, stammene kunne bli gjenvunnet fra avføringsprøver i alle 3 av de testede frivillige. Resultatene er beskrevet i tabell 26 under.
TABELL 26
p
Eksempel 9
a) En tilfellestudie ble gjort av en ni år gammel jente som var diagnostisert med cøliaki (CD). Hun ble gitt Lactobacillus (LB21) daglig i en høy konsentrasjon (10<10>CFU/dag) i 3 måneder før hun ble utfordret med gluten. Hennes antistoffnivåer av endomysium, transglutaminer og totalt IgA ble målt før og hver måned det første året og en gang i året i 6 år. Siden hun hadde vært på en begrenset diett i mange år før studiet ble ingen antistoffer detektert før studiet startet. I begynnelsen ble hun gitt en lav konsentrasjon av gluten (0.1g gluten/dag/kg kroppsvekt), men etter 4 måneder spiste hun en normal diett. Nivåene av endomysium og transglutaminer var normale i løpet av denne tiden og hun opplevde ikke noen bukhulesymptomer. En biopsi av tynntarmen ble utført når jenta var 13 år gammel. Resultatene viste inget betent slimhinnevev og hennes antistoffnivåer var normale.
b) En pilotstudie med 4 barn som lider av CD ble utført. Barna ble delt opp i grupper. Gruppe 1 ble gitt Lactobacillus (LB21) med 10<10>CFU/dag og gruppe 2 ble gitt placebo. Begge grupper ble utfordret med gluten som fulgte en standardisert skala. Barna ble gitt 0.1g gluten/dag/kg kroppsvekt i 4 uker og 0.2g gluten/dag/kg kroppsvekt deretter. Antistoffnivåene til endomysium, transglutaminer og totalt IgA ble målt under studiet. Hvis antistoffnivåene til barna økte eller hvis CD-symptomene forøket, ble en biopsi av tynntarmen utført. De to barna i placebogruppen ble syke etter 1-3.5 måneder med utfordret glutendiett. Biopsien viste skade på slimhinnemembranen til tynntarmen. Barna hadde også økte nivåer av endomysium, transglutaminer og total IgA. De to barna i den aktive gruppen opplevde ikke noen symptomer og nivåene av endomysium, transglutaminer og totalt IgA var normale. Etter 7 måneder med aktiv behandling ble en biopsi av tynntarmen utført. Biopsien viste normalt intestinalt vev.
c) En studie med 10 barn som lider av CD ble utført. Barna ble gitt Lactobacillus (LB21) av 10<10>CFU/dag. Barna ble utfordret med gluten der en standardisert skala ble fulgt. Barna ble gitt 0.025 g gluten/dag/kg kroppsvekt i 2 måneder og 0.05 g gluten/dag/kg kroppsvekt deretter.
Antistoffnivåene til endomysium, transglutaminer og totalt IgA ble målt under studiet. Hvis CD-symptomene forøkte, ble en biopsi av tynntarmen utført for å bekrefte de typiske CD-lesjonene. Barna opplevde ikke noen symptomer under studiet og etter 12 måneder med glutenprovokasjon under intervensjon av LB21 var barna fortsatt friske og symptom-frie, og hadde normal vekst.
Eksempel 10
Fremgangsmåte
En in vitro test ble utført for å evaluere de potensielle immunomodulatoriske karakteristikkene av de fire forskjellige lactobacillus-stammene. Venøst blod ble samlet inn fra friske kvinner og de perifere blod mononukleære cellene (PBMC) ble isolert ved å anvende Ficoll- Paque gradient. T-cellene ble polyklonalt aktivert ved å anvende mAb anti- CD 3 og mAb anti- CD 28. PBMC ́ene og de probiotiske bakteriene ble deretter blandet i ratio 1:1. Levende, døde og isolerte supernatanter ble anvendt til å undersøke hvorvidt det er bakteriene selv eller noen substanser det produserer som påvirker immunsystemet. Prøveoppsettet ble utført to ganger; ett oppsett ble inkubert i 6t og det andre oppsettet ble inkubert i 18 t. Etter 6 t inkubering, ble totalt RNA isolert og anvendt for kvantiteringen av cytokiner ved mRNA nivåer ved å anvende real-tids kvantitativ revers transkriptase-polymerase kjedereaksjon. Supernatantene fra prøvene inkubert i 18 t ble isolert og anvendt for kvantitering på proteinnivåer med cytometrisk kule-array.
Resultater
Figur 10 viser produksjonen av cytokiner ved polyklonale aktiverte T-celler i nærvær av de probiotiske bakteriestammene LB931, LB3, LB7 og LB21. Data er fra tre bloddonorer og de vertikale linjene viser aktiverte T-celler uten noen stimulering med probiotika og virker som en negativ kontroll. Alle fire stammer viser de samme responsene for de fire cytokinene målt på mRNA-nivå. Det samme mønsteret er også sett på proteinnivåer, hvor to av de fire stammene ble målt. Som sett i Figur 11 ga både levende LB931 og levende LB21 de samme cytokinresponsene på aktiverte T-celler. Døde LB931 og døde LB21 følger også hverandre når det kommer til økning i cytokinnivåer. Fra Figur 10 og 3 kan det bli sett at det er den levende lactobacillusen og døde lactobacillusen som øker eller minker cytokinresponsene til aktiverte T-celler. Supernatanter isolert fra de fem forskjellige lactobacillus-stammene påvirket ikke cytokinresponsene fra humane T-celler i det hele tatt.
Lactobacillus økte ikke IFN-γ-nivåene eller IL-4-nivåene til hvilende T-celler bemerkelsesverdig som sett i Figur 12. Dette viser at ingen av de fire melkesyrebakteriestammene har evnen til å påvirke hvilende T-celler.
Ingen statistisk signifikante forskjeller mellom de fire lactobacillus-stammene ble funnet ved å anvende Tukey's Multiple Comparison Test. Denne testen sammen med resultatene fra cytokinresponsene indikerer at LB931, LB3, LB7, LB21 stammer er like.

Claims (11)

Patentkrav
1.
Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB3e og Lactobacillus plantarum LB7c som har blitt deponert ved Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, og har blitt tildelt adgangsnummer 17852 og 17853 respektivt.
2.
Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB3e og Lactobacillus plantarum LB7c i henhold til krav 1, k a r -a k t e r i s e r t v e d at de er i stand til å overleve temperaturer fra 85 °C i mer enn 25 minutter.
3.
Anvendelse av Lactobacillus-stamme i følge krav 1 i matprodukter slik som brød, deig, kornprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukter, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt.
4.
Et matprodukt slik som brød, deig, kornprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukt, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt karakterisert ved at ovennevnte matprodukt også inneholder en levedyktig Lactobacillus-stamme i følge krav 1
5.
Brød- og deigprodukt hvor brød- og deigproduktene også inneholder en levedyktig Lactobacillus-stamme valgt fra artene Lactobacillus plantarum LB931, som har blitt deponert hos Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen og har blitt tildelt adgangsnummer DSM 11918, Lactobacillus rhamnosus LB21, som har blitt deponert hos NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate og har blitt tildelt adgangsnummer NCIMB 40564, Lactobacillus plantarum LB3e og Lactobacillus plantarum LB7c, som har blitt deponert hos Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen og har blitt tildelt adgangsnummer henholdsvis 17852 og 17853, hvor de deponerte stammene er i stand til å overleve temperaturer fra 85 °C i mer enn 25 minutter og nevnte Lactobacilli til minst en av stammene blir innbefattet i brødog deigproduktene før en varmebehandling.
6.
Brød- og deigprodukt i følge krav 5 fremstilt av varmebehandling av et matprodukt startmateriale ved å anvende en varmekilde som eksponerer ovennevnte matprodukt til en temperatur over 85 ºC,
k a r a k t e r i s e r t v e d at ovennevnte matprodukt også inneholder en levedyktig Lactobacillus-stamme valgt fra artene av henholdsvis Lactobacillus plantarum LB931 (DSM11918), Lactobacillus rhamnosus LB21 (NCIMB 40564), Lactobacillus plantarum LB7c (DSM 17853) og Lactobacillus plantarum LB3e (DSM 17852).
7.
Brød- og deigprodukt i følge krav 5 eller 6 hvori den levedyktige Lactobacillusstammen er foreliggende i en mengde over 1,0 x 10<3>CFU/g, fortrinnsvis over 1,0x10<4>CFU/g og mest foretrukket over 1,0 x 10<5>CFU/g, levende bakterier per gram av matproduktet etter varmebehandling.
8.
Brød- og deigprodukt i følge krav 5, 6 eller 7 hvori den termostabile levedyktige Lactobacillus-stammen valgt fra artene Lactobacillus plantarum og Lactobacillus rhamnosus for å fremme immuntoleranse i autoimmune sykdommer slik som cøliaki.
9.Fremgangsmåte for å forhindre mugg i matvareprodukter, hvor minst en Lactobacillus-stamme i henhold til krav 1 er innbefattet i matvareproduktene.
Fremgangsmåte for å forhindre mugg i matvareprodukter i henhold til krav 9, hvor matvareproduktene er valgt fra brød, deig, cerealprodukter, grøt, velling, müsli, granola, pulverisert kornbasert produkt, pasta, semiprodukter, supper, halvstekte produkter, enkle brød, stuet frukt.
11.
Fremgangsmåte for å forhindre mugg i brød- og deigprodukter, hvor en Lactobacillus-stamme i henhold til krav 5 er innbefattet i nevnte brød- og deigprodukter.
NO20084335A 2006-03-17 2008-10-16 Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen, anvendelse av disse samt produkter inneholdende disse. NO343526B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE0600606 2006-03-17
PCT/SE2007/050156 WO2007108764A2 (en) 2006-03-17 2007-03-14 Thermostable lactobacillus strains

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20084335L NO20084335L (no) 2008-10-16
NO343526B1 true NO343526B1 (no) 2019-04-01

Family

ID=38522848

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20084335A NO343526B1 (no) 2006-03-17 2008-10-16 Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen, anvendelse av disse samt produkter inneholdende disse.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US8137952B2 (no)
EP (1) EP1996696B1 (no)
CY (1) CY1118795T1 (no)
DK (1) DK1996696T3 (no)
ES (1) ES2619185T3 (no)
HU (1) HUE033028T2 (no)
LT (1) LT1996696T (no)
NO (1) NO343526B1 (no)
PL (1) PL1996696T3 (no)
PT (1) PT1996696T (no)
WO (1) WO2007108764A2 (no)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
LT2211626T (lt) * 2007-08-29 2019-11-11 Ganeden Biotech Inc Kepiniai
CA2707656C (en) * 2007-12-06 2018-05-22 Arla Foods Amba Probiotic bacteria and regulation of fat storage
DK2348888T3 (en) 2008-10-16 2016-09-12 Ganeden Biotech Inc PROBIOTIC CORN-BASED COMPOSITIONS
US20130121976A1 (en) * 2010-03-12 2013-05-16 Agusti Montserrat Carreras Lactic Acid Bacteria for Coeliac Disease
CN102304480B (zh) * 2011-02-16 2013-01-30 广西科学院 一株高产l-乳酸的鼠李糖乳杆菌菌株及发酵木薯、甘蔗糖蜜产乳酸的方法
EP3505983A1 (en) 2011-08-19 2019-07-03 Corning Incorporated Low bend loss optical fiber
WO2014108937A1 (ja) * 2013-01-11 2014-07-17 株式会社タカギ 新規乳酸菌
WO2016051358A1 (en) * 2014-10-01 2016-04-07 Triphase Pharmaceuticals Pvt. Ltd. Thermo-stable strains, products and methods thereof
ES2575828B1 (es) * 2014-12-31 2017-07-07 Universidad De León Empleo de probióticos en el incremento de la fertilidad masculina
CN105087452A (zh) * 2015-09-30 2015-11-25 厦门和美科盛生物技术有限公司 植物乳杆菌L.plantarum HM6159及其用途
CN105238713A (zh) * 2015-09-30 2016-01-13 厦门和美科盛生物技术有限公司 植物乳杆菌L.plantarum HM6008及其用途
EP3568144B1 (en) 2017-01-12 2024-05-08 Probi Ab Probiotic compositions and uses thereof
CN114287552A (zh) * 2021-12-23 2022-04-08 西藏安琪生物科技有限公司 一株自那曲牦牛奶疙瘩中分离出的鼠李糖乳杆菌及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3335351A1 (de) * 1983-09-29 1985-04-11 Diamalt AG, 8000 München Verfahren zur herstellung eines gebrauchsfertigen, getrockneten backkonzentrates und dessen verwendung
WO1998055131A1 (en) * 1997-06-02 1998-12-10 Essum Ab Pharmaceutical preparation comprising lactobacillus casei rhamnosus
WO1999045099A1 (en) * 1998-03-06 1999-09-10 Sca Hygiene Products Ab New agent

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4110477A (en) * 1977-05-13 1978-08-29 Kabushiki Kaisha Naruse Fermentation Laboratory Method for producing natto containing lactic acid bacteria
DK83292D0 (da) 1992-06-24 1992-06-24 Faellesforeningen For Danmarks Broedprodukt

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3335351A1 (de) * 1983-09-29 1985-04-11 Diamalt AG, 8000 München Verfahren zur herstellung eines gebrauchsfertigen, getrockneten backkonzentrates und dessen verwendung
WO1998055131A1 (en) * 1997-06-02 1998-12-10 Essum Ab Pharmaceutical preparation comprising lactobacillus casei rhamnosus
WO1999045099A1 (en) * 1998-03-06 1999-09-10 Sca Hygiene Products Ab New agent

Also Published As

Publication number Publication date
NO20084335L (no) 2008-10-16
EP1996696A2 (en) 2008-12-03
PT1996696T (pt) 2017-03-17
ES2619185T3 (es) 2017-06-23
EP1996696B1 (en) 2016-12-21
DK1996696T3 (en) 2017-03-20
HUE033028T2 (hu) 2017-11-28
US20090208606A1 (en) 2009-08-20
PL1996696T3 (pl) 2017-08-31
WO2007108764A3 (en) 2008-02-21
CY1118795T1 (el) 2017-07-12
LT1996696T (lt) 2017-03-10
US8137952B2 (en) 2012-03-20
WO2007108764A2 (en) 2007-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO343526B1 (no) Mikroorganismer av Lactobacillus-stammen, anvendelse av disse samt produkter inneholdende disse.
Adesulu-Dahunsi et al. Probiotic and technological properties of exopolysaccharide producing lactic acid bacteria isolated from cereal-based nigerian fermented food products
US10321704B2 (en) Probiotic grain-based compositions
Anukam et al. African traditional fermented foods and probiotics
Maragkoudakis et al. Probiotic potential of Lactobacillus strains isolated from dairy products
EP1034787A1 (en) Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria
JP7546829B2 (ja) 泌尿生殖器の酵母感染症および細菌感染症の治療に適したプロバイオティクスなラクトバチルス・クリスパタス株
CN102791849B (zh) 含乳酸菌制剂
JP5511649B2 (ja) 免疫調節製剤としてのラクトバチルス・パラカゼイｌｔ１２株
JP4336992B2 (ja) 血中コレステロール低減作用を有する新規乳酸菌
CN101918536A (zh) 用于人类和/或动物的营养的组合物、它们的应用和酵母菌
KR20090024175A (ko) 면역조절 활성이 높은 유산균의 배양법
EP1971231A1 (en) Probiotic bread and method of its production
WO2007108763A1 (en) Use of lactobacillus strains for promoting immunotolerance in autoimmune disease
CN103649304A (zh) 分离的微生物菌株植物乳杆菌（lactobacillus plantarum）mcc1 dsm 23881和格氏乳杆菌（lactobacillus gasseri）mcc2 dsm 23882及其用途
Soares et al. Sporeforming probiotic bacteria: Characteristics, health benefits, and technological aspects for their applications in foods and beverages
KR20130049554A (ko) 아토피 예방 또는 치료용 조성물
JP4308481B2 (ja) 抗アレルギー剤
WO2020116365A1 (ja) 鮒寿司から単離されたラクトバチルス・プランタラム種である乳酸菌及びそのスクリーニング方法
JP2022023806A (ja) 制御性ｔ細胞調節剤およびその用途

Legal Events

Date Code Title Description
CHAD Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften)

Owner name: PROBI AB, SE