NO338147B1 - Fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon og in vitro fremgangsmåte for produsering av T-celler. - Google Patents
Fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon og in vitro fremgangsmåte for produsering av T-celler. Download PDFInfo
- Publication number
- NO338147B1 NO338147B1 NO20040965A NO20040965A NO338147B1 NO 338147 B1 NO338147 B1 NO 338147B1 NO 20040965 A NO20040965 A NO 20040965A NO 20040965 A NO20040965 A NO 20040965A NO 338147 B1 NO338147 B1 NO 338147B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- antigen
- dendritic cells
- bcg
- ifnγ
- Prior art date
Links
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 282
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 112
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 127
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 162
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 162
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 162
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 59
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 43
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 43
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 claims description 40
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 claims description 40
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 claims description 38
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 32
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 claims description 32
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 31
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 24
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 23
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 12
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 claims description 10
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims description 10
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 8
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 5
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims 7
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims 7
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 31
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 30
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000037452 priming Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 23
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 18
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 18
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 14
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 11
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 10
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 10
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 10
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 10
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 7
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 6
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 6
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 6
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 5
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 5
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 5
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 5
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 4
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 4
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 4
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- -1 (GM-CSF) Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 3
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 3
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 2
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000055135 Vasoactive Intestinal Peptide Human genes 0.000 description 2
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007193 modulation by symbiont of host erythrocyte aggregation Effects 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N Ala-Leu-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KQBVNNAPIURMPD-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N Glu-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BDISFWMLMNBTGP-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PMCMLDNPAZUYGI-DCAQKATOSA-N Ser-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PMCMLDNPAZUYGI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 102000046689 human FOLH1 Human genes 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 108010061181 influenza matrix peptide (58-66) Proteins 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008884 pinocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5428—IL-10
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5434—IL-12
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/72—Undefined extracts from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
Abstract
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer preparater og fremgangsmåter for å bevirke modning av umodne dendrittceller (DC) og for å prime disse cellene for å bevirke en type 1-immunrespons. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også dendrittcelle-populasjoner som er nyttige for aktivering og for fremstilling av Tceller polarisert mot produksjon av type 1-cytokiner og/eller en type 1 -respons. Likeledes tilveiebringes det aktiverte, polariserte T-cellepopulasjoner, og fremgangsmåter for fremstilling av dem.
Description
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Antigen-presenterende celler (APC) er viktige ved utløsning av en effektiv immunrespons. Ikke bare presenterer de antigener for T-celler med antigen-spesifikke T-cellereseptorer, men tilveiebringer også signalene som er nødvendig for T-celleaktivering. Disse signalene er fremdeles ufullstendig definert, men innebærer mange forskjellige celleoverflatemolekyler, så vel som cytokiner eller vekstfaktorer. Faktorene som er nødvendig for aktiveringen av naive eller upolariserte T-celler kan være forskjellig fra dem som kreves for reaktivering av hukommelses-T-celler. Evnen som APC har til både å presentere antigener og avgi signaler for T-celleaktivering, blir vanligvis referert til som en aksessorisk cellefunksjon. Selv om monocytter og B-celler er blitt vist å være kompetente APC, synes deres antigen-presenterende kapasitet in vitra å være begrenset til re-aktivering av tidligere sensibiliserte T-celler. Derfor er de ikke i stand til direkte å aktivere funksjonelt naive eller ikke-primede T-cellepopulasjoner.
Dendrittceller (DCer) er de profesjonelle antigen-presenterende cellene i immunsystemet som antas å være i stand til å aktivere både naive og hukommel-ses-T-celler. Dendrittceller blir i stadig større grad fremstilt ex vivo for anvendelse i immunoterapi, spesielt immunoterapi ved kreft. Fremstilling av dendrittceller med optimale immunostimulerende egenskaper krever en forståelse og utnytting av biologien til disse cellene for dyrkning ex vivo. Forskjellige protokoller for dyrkning av disse cellene er blitt beskrevet, med forskjellige fordeler tilskrevet hver proto-koll. Senere protokoller innbefatter anvendelse av serum-frie medier, og anvendelse av modningsbetingelser som tildeler de ønskede immunostimulerende egenskaper til de dyrkede cellene.
Modning av dendrittceller er prosessen som omdanner umodne DCer, som er fenotypisk lik Langerhans-celler i huden, til modne, antigen-presenterende celler som kan migrere til lymfeknutene. Denne prosessen resulterer i tap av den krafti-ge antigen-opptakskapasiteten som kjennetegner de umodne dendrittcellene, og i oppreguleringen av ekspresjon av ko-stimulerende celleoverflatemolekyler og forskjellige cytokiner. Kjente modningsprotokoller er basert på in vivo-miljøet som DCer antas å møte under eller etter å ha vært utsatt for antigener. Det beste eksemplet på denne tilnærmingen er anvendelse av monocytt-betingede medier (MCM) som et celledyrkningsmedium. MCM blir frembragt in vitro ved dyrkning av monocytter, og anvendes som en kilde til modningsfaktorer. Hovedbestanddelene i MCM som er ansvarlige for modning, er rapportert å være de (pro)inflammatoriske cytokinene Interleukin 1 beta (IL-1p), Interleukin 6 (IL-6) og tumornekrosefaktor-alfa (TNFa). Andre modningsfaktorer innbefatter prostaglandin E2 (PGE2), poly-dldC, vasointestinalpeptid (VIP), bakterielt lipopolysakkarid (LPS), så vel som mycobakterier eller bestanddeler av mycobakterier, så som spesifikke cellevegg-bestanddeler.
Fullt modne dendrittceller skiller seg kvalitativt og kvantitativt fra umodne DCer. Fullt modne DCer uttrykker høyere nivåer av MHC klasse I- og klasse II-antigener, og av T-celle-ko-stimulerende molekyler, dvs. CD80 og CD86. Disse endringene øker kapasiteten som dendrittcellene har til å aktivere T-celler, fordi de øker antigen-tettheten på celleoverflaten, så vel som styrken av T-celleaktiverings-signalet gjennom motstykkende til de ko-stimulerende molekylene på T-cellene, som for eksempel CD28. I tillegg produserer moden DC store mengder cytokiner, som stimulerer og styrer T-celleresponsen. To av disse cytokinene er Interleukin 10 (IL-10) og Interleukin (IL12). Disse cytokinene har motsatt effekt på styringen av den induserte T-celleresponsen. IL-10 produksjon resulterer i induksjon av en Th-2-type-respons, mens IL-12-produksjon resulterer i en Th-1-type-respons. Den sistnevnte responsen er spesielt ønskelig når en cellulær immunrespons er ønsket, så som for eksempel ved kreft-immunoterapi. En Th-1-type-respons resulterer i induksjon og differensiering av cytotoksiske T-lymfocytter (CTL), som er effektorarmen til det cellulære immunsystemet. Denne effektorarmen er mest effektiv til å bekjempe tumorvekst. IL-12 induserer også vekst av naturlige dreper- (NK) celler, og har anti-angiogen aktivitet, som begge er effektive anti-tumorvåpen. Således er anvendelsen av dendrittceller som produserer IL-12, i teorien, optimalt egnet for anvendelse ved immunostimulering.
Visse dendrittcelle-modningsmidler, så som for eksempel baktierelt lipopolysakkarid, bakterielt CpG-DNA, dobbelttrådet RNA og CD40-ligand, er blitt rapportert å indusere umoden DC til å produsere IL-12 og til å prime umoden DC for en Th-1-respons. I motsetning til dette inhiberer anti-inflammatoriske molekyler så som IL-10, TGF-p, PGE-2 og kortikosteroider IL-12-produksjon, og kan prime celler for en Th-2-respons.
Nylig er økning av IL-12-produksjon ved hjelp av dendrittceller blitt rapportert, ved å kombinere interferon-gamma med visse dendrittcelle-modningsfaktorer, så som bakterielt lipopolysakkarid (LPS) og CD40. Både LPS og CD40 har imidlertid en kjent kapasitet til å indusere små mengder av IL-12 under modning. Således er det mulig at tilsetningen av IFNy kun øker den produksjonen. Interferon-gamma-signalisering anvender Jak2-Stat1 -banen, som innbefatter tyrosinfosforyle-ring av tyrosinresten i posisjon 701 på Statl, før dens migrering til kjernen og på-følgende økning av transkripsjon av interferon-gamma-responsive gener. Meget lite er imidlertid kjent om signaltransduksjonsbanene i humane monocytt-avledede dendrittceller. Mekanismen for interferon-gamma-virkning i disse cellene er ikke blitt konstatert.
HILKENS CATHARIEN M.U. ET AL., "Human dendritic cells require exoge-nous interleukin-12-inducing factors to direct the development of naive T-helper cells toward the Th 1 phenotype", Blood, W.B. Saunders, Philadelphia, VA, US, vol. 90, no. 5, 1997, side 1920-1926 angir at dendritiske celler (DC) er essensielle inducere av spesifikke primære immunresponser fordi de er de eneste antigenpresenterende cellene som effektivt kan aktivere naive T-hjelpeceller.
TSUJI SHOUTARO ET AL., "Maturation of human dendritic cells by cell wall skeleton of mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guérin:involvement of toll-like receptors", Infection and Immunity, American Society for Microbiology. Wa-shington, US, vol. 68, no. 12, 2000, side 6883-6890 beskriver at celleveggskjelet-tet til Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin (BCGCWS) induserer modning av humane dendritiske celler. Vidre beskrives en metode for modning av makrofager vha. BCG og IFN-y.
DEMANGEL CAROLINE ET AL., "Protection against aerosol Mycobacterium tuberculosis infection using Mycobacterium bovis bacillus Calmette Guérin-infected dendritic cells", European Journal of Immunology, vol. 29, no. 6, 1999, side 1972-1979, vedrører bruk av Mycobacterium bovis bacillus Calmette Guérin (BCG) infiserte dendritiske celler til beskyttelse av aerosol Mycobacterium tuberculosis infeksjon.
Den svekkede bovinstammen (Mycobacterium bovis) av Mycobacterium tuberculosis, nå kjent som bacille Calmette-Guerin (BCG) er blitt anvendt ved kreft-immunoterapi. I ett eksempel har intrablære-administrering av levende BCG vist seg å være effektiv for behandling av blærekreft, selv om mekanismen for denne behandlingen ikke er kjent. Effektene av BCG-administrering er postulert å være mediert av induksjonen av en immunrespons som angriper for eksempel kreftceller. Den spesifikke rollen til BCG i denne responsen antas å være en som generelt bevirker immunreaktivitet, så vel som at den har en hjelpestoff-funksjon i presentasjonen av tumor-antigener overfor immunsystemet.
BCG er også blitt funnet å være et kraftig modningsmiddel for dendrittceller, med evne til å oppregulere modningsmarkøren CD83. BCG kan også oppregulere MHC-molekyler og de ko-stimulerende molekylene CD80 og CD86, samtidig med en reduksjon i endocytt-kapasitet. I tillegg er BCG, eller BCG-avledede lipoarabi-domannaner, blitt rapportert å øke cytokinproduksjon, selv om, i motsetning til resultatene funnet med andre DC-modningsmidler, produksjonan av IL-12 ble funnet å bli spesifikt inhibert. Denne sistnevnte egenskapen, inhiberingen av IL-12-produksjon, reduserer det forlokkende ved å anvende BCG for modning av dendrittceller for immunoterapi, hvor en sterk cellemediert, cytotoksisk respons (Th-1-respons) er ønsket.
Anvendelsen av BCG i aktiv immunoterapi har således potensialet til å bevirke dendrittcelle-modning. Det er imidlertid et behov for preparater og fremgangsmåter for anvendelse av slike preparater som bevirker slik modning av dendrittceller og som samtidig tilveiebringer bred immunstimulering, og som primer disse dendrittcellene mot en type 1- (Th-1) immunrespons med en sterk cytototoksisk T-cellerespons.
KORT OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer fremgangsmåter for å bevirke modning av umodne dendrittceller (DC) med et middel som samtidig tilveiebringer bred immunstimulering (dvs. BCG), og for priming av disse cellene for en antigen-spesifikk, cytotoksisk T-cellerespons. I ett aspekt tilveiebringes det en fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon, som omfatter:
å tilveiebringe umodne dendrittceller; og
å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med bacillus Calmette-Guerin (BCG) og Interferon gamma (IFNy) under in vitro dyrkningsbetingelser som er egnet for modning av de umodne dendrittcellene, for å danne en moden dendrittcelle-populasjon;
hvor den modne dendrittcelle-populasjonen produserer minst omtrent et 1:1 forhold mellom Interleukin 12 og Interleukin 10. Den modne dendrittcelle-populasjonen produserer et høyere forhold mellom Interleukin 12 og Interleukin 10 enn en umoden dendrittcelle-populasjon som ikke er bragt i kontakt med BCG og IFNy alene under modning. De umodne dendrittcellene kan bringes i kontakt med et forhåndsbestemt antigen før eller under kontakten med BCG og IFNy. Det forhåndsbestemte antigenet kan for eksempel være et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen (for eksempel et syntetisk peptid-antigen), eller et isolert antigen.
I visse utførelsesformer kan fremgangsmåten eventuelt videre innbefatte å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere, og dyrkning av forløperne i nærvær av et differensieringsmiddel for å danne en populasjon av umodne dendrittceller. Egnede differensieringsmidler innbefatter for eksempel GM-CSF, Interleukin 4, en kombinasjon av GM-CSF og Interleukin 4, eller Interleukin 13. Monocytt-dendrittcelle-forløperne kan isoleres fra et menneske-individ. I en spesiell utførelsesform produserer de modne dendrittcellene et forhold mellom IL-12 og IL-10 på minst 1:1.
Det tilveiebringes følgelig en fremgangsmåte for produksjon av en moden dendrittcelle-populasjon Den resulterende, modne dendrittcelle-populasjonen produserer en type 1-immunrespons. De umodne dendrittcellene kan bli bragt i kontakt med et forhåndsbestemt antigen før eller i løpet av kontakten med BCG og IFNy. Det forhåndsbestemte antigenet kan for eksempel være et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen (dvs. et syntetisk peptid), eller et isolert antigen.
I visse utførelsesformer kan fremgangsmåten eventuelt videre innbefatte å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere, og å dyrke forløperne i nærvær av et dif ferensieringsmiddel for å danne de umodne dendrittcellene. Egnede differensieringsmidler innbefatter for eksempel GM-CSF, Interleukin 4, en kombinasjon av GM-CSF og Interleukin 4, eller Interleukin 13. Monocytt-dendrittcelle-forløperne blir isolert fra et menneske-individ. I en spesiell utførelsesform produserer de modne dendrittcellene et forhold mellom IL-12 og IL-10 på minst omtrent 1:1.
I enda et annet aspekt tilveiebringes en in vitro fremgangsmåte for produsering av T-celler, omfattende kontakting av modne dendrittceller produsert ved fremgangsmåten ifølge krav 2 eller krav 10 med naive T-celler for å danne aktiverte T-celler som produserer IFNy. De modne dendrittcellene kan følgelig bringes i kontakt med naive T-celler for å danne aktiverte T-celler som produserer IFNy og/eller polarisert for en type 1 - (Th-1) respons. Egnede antigener innbefatter for eksempel et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen (for eksempel et syntetisk peptid-antigen), eller et isolert antigen.
De umodne dendrittcellene kan bringes i kontakt samtidig med det forhåndsbestemte antigenet, BCG og IFNy, eller cellene kan bringes i kontakt med det forhåndsbestemte antigenet før de bringes i kontakt med BCG og IFNy. Det er mulig å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere, og å dyrke forløperne i nærvær av et differensieringsmiddel for å bevirke dannelsen av de umodne dendrittcellene. Egnede differensieringsmidler innbefatter for eksempel GM-CSF, Interleukin 4, en kombinasjon av GM-CSF og Interleukin 4, eller Interleukin 13. Monocytt-dendrittcelle-forløperne kan eventuelt isoleres fra et menneske-individ. I en spesiell utførelsesform er de umodne dendrittcellene og T-cellene autologe med hverandre.
Isolerte, modne dendrittceller som produserer mer Interleukin 12 (IL-12) i forhold til Interleukin 10 (IL-10) tilveiebringes også. De modne dendrittcellene kan tilveiebringes ved modning av umodne dendrittceller med et preparat som omfatter effektive konsentrasjoner av BCG og IFNy, under betingelser som er egnet for modning av dendrittcellene. Et forhåndsbestemt antigen kan eventuelt inkluderes med de isolerte, modne dendrittcellene. Isolerte, modne dendrittceller lastet med et forhåndsbestemt antigen tilveiebringes også. Dendrittcellene kan produsere mer Interleukin 12 (IL-12) enn Interleukin 10 (IL-10), så som foreksempel minst 10 ganger mer IL-12 enn IL-10 enn en lignende, umoden dendrittcelle-populasjon dyrket i nærvær av BCG, uten IFNy, under modning.
Det er mulig å frembringe en type 1- (Th-1) immunrespons i et dyr. Fremgangsmåten innbefatter generelt å tilveiebringe umodne dendrittceller; å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med effektive mengder av BCG og Interferon gamma (IFNy), og et forhåndsbestemt antigen, under dyrkningsbetingelser som er egnet for modning av de umodne dendrittcellene, for å danne modne dendrittceller. De modne dendrittcellene kan enten administreres til et dyr, eller kan bringes i kontakt med naive T-celler, for å danne aktiverte T-celler kjennetegnet ved fremstilling av Interferon gamma (IFNy) og/eller tumornekrosefaktor a (TNFa). De aktiverte T-cellene kan administreres til dyret som har behov for stimulering av en cytotoksisk T-cellerespons på det spesifikke antigenet. Egnede antigener innbefatter for eksempel et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen (for eksempel et syntetisk peptid-antigen), eller et isolert antigen. De umodne dendrittcellene kan eventuelt samtidig bli bragt i kontakt med det forhåndsbestemte antigen, BCG og IFNy, eller de umodne dendrittcellene kan bringes i kontakt med det forhåndsbestemte antigenet før det bringes i kontakt med BCG og IFNy. Det er mulig å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere fra dyret, og å dyrke forløperne i nærvær av et differensieringsmiddel for å danne de umodne dendrittcellene. Differensieringsmidlet kan for eksempel være GM-CSF, Interleukin 4, en kombinasjon av GM-CSF og Interleukin 4, eller Interleukin 13.
De umodne dendrittcellene og T-cellene kan være autologe med dyret, eller allogent med dyret. Alternativt kan de umodne dendrittcellene og T-cellene ha den samme MHC-haplotypen som dyret, eller dele en MHC-markør. I visse utførelses-former kan dyret være et menneske, eller kan være et dyr som ikke er et menneske.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer fremgangsmåter for å bevirke modning av umodne dendrittceller (DC) og for å prime disse cellene for en antigen-spesifikk, cytotoksisk T-cellerespons (Th-1 -respons). Det tilveiebringer også dendrittcelle-populasjoner som er nyttige for aktivering og for fremstilling av T-cellepopulasjoner polarisert mot produksjon av type-1-cytokiner (for eksempel IFNy, TNFa og/eller IL-2). Slike dendrittcelle-populasjoner innbefatter umodne monocytt-dendrittceller bragt i kontakt med BCG, IFNy og et forhåndsbestemt antigen under egenede modningsbetingelser. De umodne dendrittcellene kan bringes i kontakt med antigenet enten under, eller før, modning. Alternativt kan umodne monocytt-dendrittceller, allerede utsatt for antigen (for eksempel in vivo), bli bragt i kontakt med BCG og IFNy under egnede modningsbetingelser. De resulterende, modne dendrittcellene blir primet for å aktivere og polarisere T-celler mot en type 1-respons. En type 1-respons innbefatter produksjon av type 1-cytokiner (for eksempel IFNy og/eller IL-2), produksjon av mer IL-12 enn IL-10, en cytotoksisk T-cellerespons, produksjon av Th-1-celler, og produksjon av visse typer av antistoffer. Tumornekrosefaktor a (TNFa) kan også oppreguleres. I motsetning til dette er en type 2-respons kjennetegnet ved produksjon av IL-4, IL-5 og IL-10, produksjon av mer IL-10 enn IL-12, produksjon av Th-2-celler, og mangel på induksjon av en CTL-respons.
Det kan tilveiebringes preparater som omfatter et modningsmiddel for umodne dendrittceller, så som monocytt-dendrittcelle-forløpere, som også kan prime disse dendrittcellene for en type 1-respons. Slike modne, primede monocytt-dendrittceller kan øke hoved-histoforlikelighetskompleks (MHC) klasse-1-presentasjon av et forhåndsbestemt antigen, dvs. et forhåndsbestemt, eksogent antigen. MHC klasse l-presentasjon av antigen ønskes for å bevirke differensiering av cytotoksiske T-lymfocytter (CTL) og stimulering av antigen-spesifikk, CTL-mediert lyse av målceller. Slike preparater innbefatter BCG og IFNy, som kan blandes med en cellepopulasjon som omfatter umodne dendrittceller, for å modne de umodne dendrittcellene, og for å omdanne eller overvinne inhiberingen av IL-12 bevirket ved kontakt av de umodne dendrittcellene med BCG. Umodne dendrittceller bragt i kontakt med slike preparater gjennomgår modning, og produserer typisk større mengder av IL-12 enn IL-10, sammenlignet med en umoden dendrittcelle-populasjon bragt i kontakt med BCG alene.
Monocytt-dendrittcelle-forløperne oppnådd fra individer eller donorer kan bringes i kontakt med cytokiner (for eksempel GM-CSF og IL-4) for å oppnå umodne dendrittceller. De umodne dendrittcellene kan deretter bringes i kontakt med et forhåndsbestemt antigen, enten i kombinasjon med BCG og IFNy alene, eller i kombinasjon med et cytokin, for å modne dendrittcellene og for å prime cellene for å bevirke en type 1-immunrespons i T-celler. I visse utførelsesformer blir MHC klasse-l-antigen-prosessering stimulert, som er nyttig for å utløse en CTL-respons på celler som fremviser det forhåndsbestemte antigenet.
Dendrittceller er en uensartet populasjon av antigen-presenterende celler som finnes i mange forskjellige lymfoide og ikke-lymfoide vev. (Se Liu, Cell 106:259-62 (2001); Steinman, Ann. Rev. Immunol. 9:271-96 (1991)). Dendrittceller innbefatter lymfoide dendrittceller i milten, Langerhanske celler i epidermis, og tilslørte ("veiled") celler i blodsirkulasjonen. Dendrittceller blir kollektivt klassifisert som en gruppe, basert på sin morfologi, høye nivåer av overflate-MHC-klasse II-ekspresjon, og fravær av visse andre overflatemarkører uttrykt på T-celler, B-celler, monocytter og naturlige dreperceller. Spesielt uttrykker monocytt-avledede dendrittceller (også referert til som monocytt-dendrittceller) vanligvis CD11c, CD80, CD86, og er HLA-DR<+>, men er CD14".
I motsetning til dette er monocytt-dendrittcelle-forløpere (typisk monocytter) vanligvis CD14+. Monocytt-dendrittcelle-forløpere kan oppnås fra et hvilket som helst vev der de finnes, spesielt lymfoide vev, så som milten, benmargen, lymfeknutene og thymus. Monocytt-dendrittcelle-forløpere kan også isoleres fra sirkula-sjonssystemet. Perifert blod er en lett tilgjengelig kilde for monocytt-dendrittcelle-forløpere. Blod fra navlestrengen er en annen kilde til monocytt-dendrittcelle-forløpere. Monocytt-dendrittcelle-forløpere kan isoleres fra mange forskjellige organismer hvor en immunrespons kan utløses. Slike organismer innbefatter dyr, for eksempel, innbefattende mennesker, og dyr som ikke er menneske, så som primater, pattedyr (innbefattende hunder, katter, mus og rotter), fugler (innbefattende kyllinger), så vel som transgene arter derav.
Monocytt-dendrittcelle-forløperne og/eller umodne dendrittceller kan isoleres fra et friskt individ, eller fra et individ som har behov for immunostimulering, så som for eksempel en prostatakreftpasient eller et annet individ, for hvilken cellulær immunostimulering kan være fordelaktig eller ønsket (dvs. et indivis som har en bakterie- eller virusinfeksjon, og lignende). Dendrittcelle-forløpere og/eller umodne dendrittceller kan også oppnås fra et HLA-ti I passet, friskt individ for administrering til et HLA-tilpasset individ som har behov for immunostimulering.
Dendrittcelle- forløpere og umodne dendrittceller.
Fremgangsmåter for å isolere cellepopulasjoner beriket med dendrittcelle-forløpere og umodne dendrittceller fra forskjellige kilder, innbefattende blod og benmarg, er kjent på fagområdet. For eksempel kan dendrittcelle-forløpere og umodne dendrittceller isoleres ved å innsamle heparinisert blod, ved aferese eller leukaferese, ved fremstilling av buffy coats, rosettering ("rosetting"), sentrifugering, densitetsgradient-sentrifugering (for eksempel ved anvendelse av Ficoll (så som FICOLL-PAQUE<®>), PERCOLL<®>(kolloidale silikapartikler (15-30 mm diameter) be-lagt med ikke-dialyserbart polyvinylpyrrolidon (PVP)), sukrose og lignende), diffe-rensiallyse av celler, filtrering og lignende. I visse utførelsesformer kan en leuko-cytt-populasjon fremstilles, så som for eksempel ved å ta blod fra et individ, de-fibrinere for å fjerne blodplatene og å lyse de røde blodcellene. Dendrittcelle-forløpere og umodne dendrittceller kan eventuelt bli beriket med monocytt-dendrittcelle-forløpere ved for eksempel sentrifugering via en PERCOLL<®->gradient.
Dendrittcelle-forløpere og umodne dendrittceller kan eventuelt fremstilles i et lukket, aseptisk system. Slik de benyttes her, refererer uttrykkene "lukket, aseptisk system" eller "lukket system" til et system hvor utsettelse for ikke-sterilisert, omgivende eller sirkulerende luft, eller andre ikke-sterile betingelser, er minimali-sert eller eliminert. Lukkede systemer for isolering av dendrittcelle-forløpere og umodne dendrittceller utelukker generelt densitetsgradient-sentrifugering i rør med åpen topp, overføring av celler i friluft, dyrkning av celler på vevskulturplater eller i uforseglede kolber, og lignende. I en typisk utførelsesform tillater det lukkede sys-temet aseptisk overføring av dendrittcelle-forløperne og umodne dendrittceller fra et initielt innsamlingskar til et forseglbart vevskulturkar, uten utsettelse for ikke-steril luft.
I visse utførelsesformer blir monocytt-dendrittcelle-forløperne isolert ved tilklebing til et monocytt-bindende substrat, som beskrevet i US-patentsøknad nr. 60/307,978, innlevert 25. junli 2001 (Attorney Docket No. 020093-002600US), idet det som beskrives der er inntatt her, ved referanse. For eksempel kan en popula sjon av leukocytter (for eksempel isolert ved leukaferese) bli bragt i kontakt med et monocytt-dendrittcelle-forløper-klebende substrat. Når populasjonen av leukocytter blir bragt i kontakt med substratet, kleber monocytt-dendrittcelle-forløperne i leukocyttpopulasjonen seg fortrinnsvis til substratet. Andre leukocytter (innbefattende andre potensielle dendrittcelle-forløpere) oppviser redusert bindingsaffinitet til substratet, og tillater derved at monocytt-dendrittcelle-forløperne fortrinnsvis berikes på overflaten av substratet.
Egnede substrater innbefatter for eksempel slike som har et stort forhold mellom overflateareal og volum. Slike substrater kan for eksempel være et partikkelformig eller fibrøst substrat. Egnede partikkelformige substrater innbefatter for eksempel glasspartikler, plastpartikler, glassbelagte plastpartikler, glassbelagte polystyrenpartikler, og andre perler som er egnet for proteinabsorpsjon. Egnede fibrøse substrater innbefatter mikrokapillær-rør og mikrovilli-membran. Det partikkelformige eller fibrøse substratet tillater vanligvis at de tilklebede monocytt-dendrittcelle-forløperne blir eluert, uten vesentlig å redusere levedyktigheten til de tilklebede cellene. Et partikkelformig eller fibrøst substrat kan være i det vesentlige ikke-porøst, for å lette eluering av monocytt-dendrittcelle-forløpere eller dendrittceller fra substratet. Et "i det vesentlige ikke-porøst" substrat er et substrat hvor minst hoveddelen av porene som er til stede i substratet er mindre enn cellene, for å minimalisere innfangning av celler i substratet.
Tilklebing av monocytt-dendrittcelle-forløperne til substratet kan eventuelt økes ved tilsetning av bindingsmedier. Egnede bindingsmedier innbefatter monocytt-dendrittcelle-forløper-dyrkningsmedier (foreksempel AIM-V<®>, RPM11640, DMEM, X-VIVO 15<®>, og lignende), supplert, individuelt eller i en hvilken som helst kombinasjon, med for eksempel cytokiner (for eksempel Granulocyte/Macrophage Colony Stimulating Factor (GM-CSF), Interleukin 4 (IL-4), eller Interleukin 13 (IL13)), blodplasma, serum (foreksempel humant serum, så som autologe eller allogene sera), rensede proteiner, så som serumalbumin, toverdige kationer (for eksempel kalsium- og/eller magnesiumioner) og andre molekyler som hjelper til ved den spesifikke tilklebingen av monocytt-dendrittcelle-forløpere til substratet, eller som forhindre tilklebing av ikke-monocytt-dendrittcelle-forløpere til substratet. I visse utførelsesformer kan blodplasmaet eller serumet være varme-inaktivert. Det varme-inaktiverte plasmaet kan være autologt eller heterologt med leukocyttene.
Etter tilklebing av monocytt-dendrittcelle-forløpere til substratet blir de ikke-tilklebende leukocyttene adskilt fra monocytt-dendrittcelle-forøper/substrat-kompleksene. Hvilke som helst måter kan anvendes for å adskille de ikke-tilklebende cellene fra kompleksene. For eksempel kan blandingen av de ikke-tilklebende leukocyttene og kompleksene tillates å utfelles, og de ikke-tilklebende leukocyttene og medium dekantert eller tappet ut. Alternativt kan blandingen bli sentrifugert, og supernatanten som inneholder de ikke-tilklebende leukocyttende bli dekantert eller tappet utfra de pelleterte kompleksene.
Isolerte dendrittcelle-forløpere kan dyrkes ex vivo for differensiering, modning og/eller ekspansjon. (Slik det benyttes her, refererer isolerte, umodne dendrittceller, dendrittcelle-forløpere, T-celler, og andre celler, til celler som, ved men-neskelig hånd, eksisterer adskilt fra sitt native miljø, og derfor ikke er et produkt av naturen. Isolerte celler kan eksistere i renset form, i halv-renset form, eller i et ikke-nativt miljø). Kort sagt innebærer ex vivo-differensiering typisk dyrkning av dendrittcelle-forløpere, eller populasjoner av celler som har dendrittcelle-forløpere, i nærvær av ett eller flere differensieringsmidler. Egnede differensieringsmidler kan for eksempel være cellulære vekstfaktorer (for eksempel cytokiner, så som (GM-CSF), Interleukin 4 (IL-4), Interleukin 13 (IL-13), og/eller kombinasjoner derav). I visse utførelsesformer er monocytt-dendrittcelle-forløperne differensiert for å danne monocytt-avledede, umodne dendrittceller.
Dendrittcelle-forløperne kan dyrkes og differensieres under egnede dyrkningsbetingelser. Egnede vevskulturmedier innbefatter AIM-V<®>, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15<®>, og lignende. Vevskulturmediene kan suppleres med serum, aminosyrer, vitaminer, cytokiner, så som GM-CSF og/eller IL-4, toverdige kationer, og lignende, for å fremme differensiering av cellene. I visse utførelsesformer kan dendrittcelle-forløperne dyrkes i de serumfrie-mediene. Slike dyrkningsbetingelser kan eventuelt utelukke eventuelle dyre-avledede produkter. En typisk cytokinkom-binasjon i et typisk dendrittcelle-dyrkningsmedium er omtrent 500 enheter/ml av hver av GM-CSF og IL-4. Dendrittcelle-forløpere, når differensiert for å danne umodne dendrittceller, er fenotypisk lik Langerhans-celler fra hud. Umodne dendrittceller er typisk CD14" og CD11c<+>, uttrykker lave nivåer av CD86 og CD83, og er i stand til å innfange løselige antigener via spesialisert endocytose.
De umodne dendrittcellene blir modnet for å danne modne dendrittceller. Modne DC mister evnen til å ta opp antigen og oppviser oppregulert ekspresjon av ko-stimulerende celleoverflatemolekyler og forskjellige cytokiner. Spesifikt uttrykker modne DC høyere nivåer av MHC klasse I- og ll-antigener enn umodne dendrittceller, og modne dendrittceller blir generelt identifisert som CD80<+>, CD83<+>, CD86+ og CD14". Høyere MHC-ekspresjon fører til en økning i antigen-densitet på DC-overflaten, mens oppregulering av ko-stimulerende molekyler CD80 og CD86 styrker T-celle-aktiveringssignalet via motstykkene til de ko-stimulerende molekylene, så som CD28, på T-cellene.
Modne dendrittcellene kan fremstilles (dvs. modnes) ved å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med effektive mengder eller konsentrasjoner av BCG og IFNy. Effektive mengder av BCG ligger typisk i området fra omtrent 10<5>til 107 cfu pr. milliliter vevskulturmedium. Effektive mengder av IFNy ligger typisk i området fra omtrent 100-1000 U pr. milliliter av vevskulturmedium. Bacillus Calmette-Guerin (BCG) er en avirulent stamme av M. bovis. Slik det benyttes her, refererer BCG til hele BCG så vel som cellevegg-bestanddeler, BCG-avledede lipoarabido-mannaner, og andre BCG-bestanddeler som er forbundet med induksjon av en type 2-immunrespons. BCG blir eventuelt inaktivert, så som varme-inaktivert BCG, formalin-behandlet BCG, og lignende.
BCG øker ekspresjon av overflate-modningsmarkørene CD83 og CD86 på dendrittceller, samtidig med inhibering av IL-12-produksjon og eksklusjon av antigener fra endocytose. Uten å mene å være bundet til noen spesiell teori, er dend-rittcellemodning med BCG også blittkarakterisertsom å innebære homotypisk ag-gregering og frigivelse av tumornekrosefaktor-a (TNFa). (Se for eksempel Thurn-her, et al., Int. J. Cancer 70:128-34 (1997), innlemmet herved referanse). Modning av de umodne dendrittcellene med IFNy og BCG fremmer DC-produksjon av IL-12, og reduserer eller inhiberer produksjon av IL-10, og primer dermed de modne dendrittcellene for en type 1- (Th-1) respons.
De umodne DC blir typisk bragt i kontakt med effektive mengder av BCG og IFNy i omtrent én time til omtrent 24 timer. De umodne dendrittcellene kan dyrkes og modnes under egnede modningskultur-betingelser. Egnede vevskulturmedier innbefatter AlM-V<®>, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15<®>, og lignende. Vevskulturmedier kan suppleres med aminosyrer, vitaminer, cytokiner, så som GM-CSF og/eller IL-4, toverdige kationer, og lignende, for å fremme modning av cellene. En typisk cytokin-kombinasjon er omtrent 500 enheter/ml av hver av GM-CSF og IL-4.
Modning av dendrittceller kan overvåkes ved fremgangsmåter som er kjent på fagområdet. Celleoverflate-markører kan påvises i assays som er kjent på fagområdet, så som flytcytometri, immunohistokjemi, og lignende. Cellene kan også overvåkes med henblikk på cytokinproduksjon (for eksempel med ELISA, FACS, eller annet immunoassay). I en DC-populasjon modnet i henhold til foreliggende oppfinnelse, er IL-12-nivåene høyere enn IL-10-nivåene, for å fremme en type 1-(Th-1) respons. For eksempel kan DCene produsere forhold mellom IL-12/IL-10 på fra mer enn 1:1, til omtrent 10:1, eller omtrent 100:1. Modne DCer mister også evnen til å oppta antigen ved pinocytose, som kan analyseres ved optaks-assays som er kjent for en med alminnelig kunnskap på fagområdet. Dendrittcelle-forløpere, umodne dendrittceller og modne dendrittceller, enten primede eller ikke-primede, med antigener, kan kryokonserveres for anvendelse på et senere tids-punkt. Fremgangsmåter for kryokonservering er velkjent på fagområdet. Se for eksempel US-patent nr. 5.788.963.
Antigener.
De modne, primede dendrittcellene heri kan presentere antigener for T-celler. Modne, primede dendrittceller kan dannes ved å bringe umodne dendrittceller i kontakt med et forhåndsbestemt antigen, enten før eller under modning. Alternativt kan umodne dendrittceller, som allerede er blitt bragt i kontakt med antigen (for eksempel in vivo før isolering), bli bragt i kontakt med et preparat som omfatter BCG og IFNy, for å danne modne dendrittceller primet for en type 1- (Th-1) respons.
Egnede, forhåndsbestemte antigener kan innbefatte et hvilket som helst antigen som det ønskes en T-celle-aktivering overfor. Slike antigener kan for eksempel innbefatte bakterielle antigener, tumor-spesifikke eller tumor-tilknyttede antigener (for eksempel hele celler, tumorcellelysat, isolerte antigener fra tumorer, fusjonsproteiner, liposomer, og lignende), virus-antigener, og et hvilken som helst annet antigen eller fragment av et antigen, for eksempel et peptid- eller polypeptid-antigen. I visse utførelsesformer kan antigenet for eksempel være, men ikke begrenset til, prostata-spesifikt membran-antigen (PSMA), prostatinsyre-fosfatase (PAP), eller prostata-spesifikt antigen (PSA). (Se for eksempel Pepsidero et al., Cancer Res. 40:2428-32 (1980); McCormack et al., Urology 45:729-44 (1995)). Antigenet kan også være en bakteriecelle, bakterielysat, membranfragment fra et cellelysat, eller en hvilken som helst annen kilde kjent på fagområdet. Antigenet kan være uttrykt eller produsert rekombinant, eller til og med kjemisk syntetisert. Det rekombinante antigenet kan også være uttrykt på overflaten av en vertscelle (for eksempel bakterie-, gjær-, insekt-, virveldyr- eller pattedyrceller), kan være til stede i et lysat, eller kan være renset fra lysatet.
Antigen kan også være til stede i en prøve fra et individ. For eksempel kan en vevsprøve fra en hyperproliferativ eller annen tilstand hos et individ anvendes som en kilde for antigen. En slik prøve kan for eksempel oppnås ved biopsi eller ved kirurgisk reseksjon. Et slikt antigen kan anvendes som et lysat eller som et isolert preparat. Alternativt kan et membranpreparat av celler fra et individ (for eksempel en kreftpasient), eller en etablert cellelinje, også anvendes som et antigen, eller som en kilde til antigen.
I et eksempel på en utførelsesform, kan et prostatatumorlysat utvunnet fra kirurgiske prøver anvendes som en kilde til antigen. For eksempel kan en prøve av en kreftpasients egen tumor, oppnådd ved biopsi eller ved kirurgisk reseksjon, anvendes direkte for å presentere antigen for dendrittceller, eller for å tilveiebringe et cellelysat for antigen-presentasjon. Alternativt kan et membranpreparat av tumorceller fra en kreftpasient anvendes. Tumorcellen kan være fra prostata, lunge, eggstokk, tykktarm, hjerne, melanoma, eller en hvilken som helst annen type av tumorcelle. Lysater og membranpreparater kan fremstilles fra isolerte tumorceller, ved fremgangsmåter som er kjent på fagområdet.
I et annet eksempel på en utførelsesform, kan renset eller halv-renset prostata-spesifikt membran-antigen (PSMA, også kjent som PSM-antigen), som spesifikt reagerer med monoklonalt antistoff 7E11-C.5, anvendes som antigen. (Se generelt Horoszewicz et al., Prog. Clin. Biol. Res. 37:115-32 (1983), US-patent nr. 5.162.504; US-patent nr. 5.788.963; Feng et al., Proe. Am. Assoc. Cancer Res. 32: (Abs. 1418)238 (1991). I enda et annet eksempel på en utførelsesform, kan et antigenpeptid som har aminosyrerest-sekvensen Leu Leu His Glu Thr Asp Ser Ala Val (SEQ ID NO:1) (betegnet PSM-P1), som tilsvarer aminosyrerestene 4-12 av PSMA, anvendes som et antigen. Alternativt kan et antigenpeptid som har aminosyrerest-sekvensen Ala Leu Phe Asp Ile Glu Ser Lys Val (SEQ ID NO:2) (betegnet PSM-P2), som tilsvarer aminosyrerester 711-719 av PSMA, anvendes som antigen.
I en spesiell utførelsesform, kan et antigenpeptid som haren aminosyrerest-sekvens Xaa Leu (eller Met) Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val (eller Leu) (betegnet PSM-PX), hvor Xaa representerer en hvilken som helst aminosyrerest, anvendes som antigen. Dette peptidet ligner HLA-A0201-bindingsmotivet, dvs. et bindingsmotiv med 9-10 aminosyrerester med "anker-rester", leucin og valin funnet i HLA-A2-pasienter. (Se for eksempel Grey et al., Cancer Surveys 22:37-49
(1995)). Dette peptidet kan anvendes som antigen for HLA-A2<+->pasienter (se Central Data Analysis Committee "Allele Frequencies", Del 6.3, Tsuji, K. et al.
(eds.), Tokyo University Press, s. 1066-1077). Likeledes kan peptider som ligner andre HLA-bindingsmotiver anvendes.
Typiske blir umodne dendrittceller dyrket i nærvær av BCG, IFNy og det forhåndsbestemte antigenet under egnede modningsbetingelser, som beskrevet ovenfor. Eventuelt kan de umodne dendrittcellene blandes med det forhåndsbestemte antigenet i et typisk dendrittcelle-dyrkningsmedium uten GM-CSF og IL-4, eller et modningsmiddel. Etter minst omtrent 10 minutter til 2 dager med dyrkning med antigenet, kan antigenet fjernes og kulturmedier supplert med BCG og IFNy tilsettes. Cytokiner (for eksempel GM-CSF og IL-4) kan også tilsettes til mod-ningsmedier. Fremgangsmåter for å bringe dendrittceller i kontakt er generelt kjent på fagområdet. (Se generelt Steel and Nutman, J. Immunol. 160:351-60
(1998); Tao et al., J. Immunol. 158:4237-44 (1997); Dozmorovand Miller, Cell Immunol. 178:187-96 (1997); Inaba et al., J. Exp. Med. 166:182-94 (1987); Maca-tonia et al., J. Exp. Med. 169:1255-64 (1989); De Bruijn et al., Eur. J. Immunol. 22:3013-20 (1992).
De resulterende, modne, primede dendrittcellene blir deretter samtidig inkubert med T-celler, så som naive T-celler. T-celler, eller en undergruppe av T-celler, kan oppnås fra forskjellige lymfoide vev, for anvendelse som responder-celler. Slike vev innbefatter, men er ikke begrenset til, milt, lymfeknuter og/eller perifert blod. Cellen kan være samtidig dyrket med modne, primede dendrittceller som en blandet T-cellepopulasjon, eller som en renset T-celleundergruppe. T-cellerensing kan oppnås ved positiv, eller negativ, utvelgelse, innbefattende, men ikke begrenset til, anvendelse av antistoffer rettet mot CD2, CD3, CD4, CD8, og lignende.
Ved å bringe T-celler i kontakt med modne, primede dendrittceller, blir antigen-reaktive, eller aktiverte, polariserte T-celler eller T-lymfocytter, tilveiebragt. Slik det benyttes her, refererer uttrykket "polarisert" til T-celler som produserer høye nivåer av IFNy, eller på annen måte er primet for å indusere en type 1- (Th-1) respons. Slike fremgangsmåter innbefatter typisk å bringe umodne dendrittceller i kontakt med BCG og IFNy for å fremstille modne, primede dendrittceller. De umodne dendrittcellene kan bringes i kontakt med et forhåndsbestemt antigen under, eller før, modning. De umodne dendrittcellene kan ko-dyrkes med T-celler (for eksempel naive T-celler) under modning, eller samtidig dyrkes med T-celler (for eksempel naive T-celler) etter modning, og priming av dendrittcellene for å bevirke en type 1-respons. De umodne dendrittcellene kan berikes før modning. I tillegg kan T-celler berikes fra en populasjon av lymfocytter før de bringes i kontakt med dendrittcellene. I en spesifikk utførelsesform blir de berikede eller rensede populasjonene av CD4<+->T-celler bragt i kontakt med dendrittcellene. Samtidig dyr-king av modne, primede dendrittceller med T-celler, fører til stimulering av spesifikke T-celler som modner til antigen-reaktive CD4<+->T-celler eller antigen-reaktive CD8<+->T-celler.
Det er mulig å restimulere T-celler in vitro, ved å dyrke cellene i nærvær av modne dendrittceller primet til å bevirke en type 1- (Th-1) T-cellerespons. Slik T-celle kan eventuelt dyrkes på næringsceller ("feeder cells"). De modne, primede dendrittcellene kan eventuelt bestråles før de bringes i kontakt med T-cellene. Egnede dyrkningsbetingelser kan innbefatte ett eller flere cytokiner (for eksempel renset IL-2, Concanavalin A-stimulert miltcelle-supernatant, eller interleukin 15 (IL-15)). In vitro restimulering av T-celler ved tilsetning av umodne dendrittceller, BCG, IFNy og det forhåndsbestemte antigenet, kan anvendes til å fremme ekspansjon av T-cellepopulasjonen.
En stabil, antigen-spesifikk, polarisert T-cellekultur eller T-cellelinje kan opp-rettholdes in vitro i lange tidsperioder ved periodisk restimulering. T-cellekulturen eller T-cellelinjen skapt på denne måten kan lagres, og hvis konservert (for eksempel ved blanding med et kryokonserveringsmiddel og frysing) anvendes til å re-supplere aktiverte, polariserte T-celler ved ønskede intervaller for langtidsan-vendelse.
Aktiverte CD8<+->eller CD4<+->T-celler kan frembringes. Typisk er modne, primede dendrittceller, anvendt til å frembringe de antigen-reaktive, polariserte T-cellene, syngene med individet som de skal administreres til (er for eksempel opp nådd fra individet). Alternativt kan dendrittceller som har den samme HLA-haplotypen som individet som er ment å være mottager, bli fremstilt in vitro ved anvendelse av ikke-kreftceller (for eksempel normale celler) fra en HLA-tilpasset donor. I en spesifikk utførelsesform blir antigen-reaktive T-celler, innbefattende CTL- og Th-1-celler, ekspandert in vitro som en kilde til celler for immunostimulering.
In vivo- administrering av cellepopulasjoner.
Det er mulig å administrere modne, primede dendrittceller eller aktiverte, polariserte T-celler, eller en cellepopulasjon inneholdende slike celler, til et individ som har behov for immunostimulering. Slike cellepopulasjoner kan innbefatte både modne, primede dendrittcelle-populasjoner og/eller aktiverte, polariserte T-cellepopulasjoner. Det blir utført ved å oppnå dendrittcelle-forløpere eller umodne dendrittceller, differensiere og modne disse cellene i nærvær av BCG, IFNy og forhåndsbestemt antigen, for å danne en moden dendrittcelle-populasjon primet til Th-1-respons. De umodne dendrittcellene kan bli bragt i kontakt med antigen før, eller under, modning. Slike modne, primede dendrittceller kan administreres direkte til et individ som har behov for immunostimulering.
Videre kan de modne, primede dendrittcellene bli bragt i kontakt med lymfocytter fra et individ for å stimulere T-celler inne i lymfocyttpopulasjonen. De aktiverte, polariserte lymfocyttene, eventuelt fulgt av klonal ekspansjon i cellekultur med antigen-reaktive CD4<+->og/eller CD8<+->T-celler, kan administreres til et individ som har behov for immunostimulering. I visse utførelsesformer er aktiverte, polariserte T-celler autologe med individet.
I en annen utførelsesform har dendrittcellene, T-cellene og det mottagende individet samme MHC- (HLA) haplotype. Fremgangsmåter for å bestemme HLA-haplotypen til et individ, er kjent på fagområdet. I en beslektet utførelsesform er dendrittcellene og/eller T-cellene allogene med det mottagende individet. For eksempel kan dendrittcellene være allogene med T-cellene og mottageren, som har den samme MHC- (HLA) haplotypen. De allogene cellene blir typisk tilpasset til minst ett MHC-allel (deler for eksempel minst ett, men ikke alle, MHC-alleler. I en mindre typisk utførelsesform er dendrittcellene, T-cellene og mottager-individet alle allogene med hensyn til hverandre, men alle har minst ett vanlig MHC-allel felles.
T-cellene oppnådd fra samme individ, fra hvilket de umodne dendrittcellene ble oppnådd. Etter modning og polarisering in vitro, blir de autologe T-cellene ad-ministrert til individet for å provosere og/eller forsterke en eksisterende immunrespons. For eksempel kan T-celler administreres, ved intravenøs infusjon, for eksempel, i doser på omtrent 10<8->10<9>celler/m<2>kroppsoverflateareal (se for eksempel Ridell et al., Science 257:238-41 (1992). Infusjon kan gjentas ved ønskede intervaller, for eksempel månedlig. Mottagere kan overvåkes under og etter T-celle-infusjoner med tanke på eventuelle tegn på ugunstige effekter.
Dendrittceller modnet med BCG og IFNy i henhold til foreliggende oppfinnelse kan bli injisert direkte i en tumor, eller annet vev inneholdende et mål-antigen. Slike modne celler kan ta opp antigen og presentere dette antigenet for T-celler in vivo.
EKSEMPLER
De følgende eksemplene er tilveiebragt som en illustrasjon på forskjellige aspekter ved oppfinnelsen.
Eksempel 1: Produksjon av IL- 10 og IL- 12 under forskjellige modningsbetingelser: I dette eksemplet ble cytokinproduksjon bestemt ut fra populasjoner av umodne dendrittceller som ble bragt i kontakt med modningsmidlene BCG og/eller IFNy. Umodne DCer ble fremstilt ved å bringe monocytter fra perifert blod i kontakt med plast i nærvær av OptiMEM<®->medium (Gibco-BRL) supplert med 1% humant plasma. Ubundne monocytter ble fjernet ved vasking. De bundne monocyt-tene ble dyrket i X-VIVO 15<®->medium i nærvær av 500 U GM-CSF og 500 U IL-4 pr. milliliter i 6 dager.
I en første studie ble umodne dendrittceller modnet ved tilsetning av inaktivert BCG. Cytokinproduksjonen av de resulterende, modne dendrittcellene ble bestemt. Inaktivert BCG ble tilsatt i varierende konsentrasjoner til umodne dendrittceller i X-VIVO 15<®->medium, fulgt av dyrkning i 24 timer ved 37°C. Fortynning-en av BCG tilsatt pr. milliliter er spesifisert i tabellen, som starter med en 4,1 x 10<8>cfu/ml stamløsning. Cytokinproduksjon ble bestemt ved hjelp av ELISA-assay ved anvendelse av antistoffer mot cytokinet som skal påvises. Kort sagt blir et antistoff som er spesifikt for cytokinet (for eksempel IL-12 eller IL-10, anvendt til å innfange cytokinet på en fast overflate. Den faste overflaten blir deretter behandlet med et andre, merket antistoff mot cytokinet, for å påvise nærvær av det innfangede cytokinet. Det andre antistoffet blir typisk merket med enzym, for å lette påvisning med kolorimetri-assay. Resultatene av et representativt forsøk er vist neden-for,under i følgende tabell 1. Mengden av cytokin, eller cytokinproduksjon, er angitt som pg/ml.
Med henvisning til tabell 1, viser resultatene at tilsetningen av BCG kan øke produksjonen av cytokiner IL-12, IL-10, eller deres underenheter, selv om både de relative og absolutte nivåer av cytokinproduksjon er donor-avhengig. De høyeste nivåene av økning ble sett for IL-12 p40 og for IL-10, noe som antyder at det ob-serverte, lave nivået av IL-12 p70 (sammensatt av p35- og p40-underenheter), i forhold til nivået av IL-12 p40, skyldes en mangel på IL-12 p35-produksjon. Under alle betingelser, unntatt én, hvor BCG er til stede, er forholdet melllom nivåene av IL-12 p70 og IL-10 mindre enn, eller lik, 1, noe som antyder at modning av umodne dendrittceller i nærvær av BCG alene sannsynligvis vil polarisere naive T-celler mot en Th-2-respons.
Effektene av å innføre IFNy under lignende betingelser ble også bestemt, og er vist i følgende tabell 2. Cytokinproduksjon ble målt som beskrevet ovenfor. Ved sammenligning av tabeller 1 og 2, er det tydelig at tilsetning av IFNy i nærvær av et modningsmiddel (for eksempel BCG) økte produksjonen av IL-12 p70. Spesielt økte tilsetning av IFNy med BCG under modning IL-12 p35-produksjonen, og senket IL-10-produksjonen. Som et resultat var forholdet mellom IL-12 p70 og IL-10 konstant større enn 1 ved tilsetning av IFNy med BCG. I noen donorer, og under visse betingelser, kan forholdet mellom IL-12 p70- og IL-10-produksjon økes til mer enn 100:1, ved tilsetning av IFNy med BCG. Således viser disse resultatene overraskende at tilsetning av IFNy med modningsmidlet BCG, dramatisk kan øke IL-12 p70-produksjonen.
Eksempel 2: Nedregulering av IL- 10 ved hjelp av IFNy er dose- avhengig: I dette eksemplet blir evnen som IFNy i kombinasjon med BCG har til å nedregulere IL-10-produksjon i en populasjon av dendrittceller vist. Umodne dendrittceller ble fremstilt som beskrevet ovenfor. De umodne dendrittcellene ble inkubert alene, modnet i nærvær av én av to konsentrasjoner av BCG (1:1000- eller 1:250-fortynninger av 4,1 x 10<8>cfu/ml stamløsning), eller utsatt for IFNy alene, i konsentrasjoner i området fra 0 U til 1000 U pr. milliliter. IL-10-produksjon ved hjelp av de resulterende dendrittcellene ble målt ved hjelp av ELISA (ovenfor) ved anvendelse av et kommersielt tilgjengelig antistoff (for eksempel fra R&D Systems, Minneapo-lis, MN) og angitt som pg/ml. I kontrollen produserte umodne DCer dyrket alene (uten tilsetning av BCG eller IFNy) ikke noe påvisbart IL-10. I motsetning til dette produserte DC dyrket i nærvær av IFNy alene, en liten mengde IL-10 (omtrent 20-30 pg/ml). Mengden av IL-10 produsert var ikke dose-avhengig over området 10 U til 1000 U IFNy pr. milliliter.
I motsetning til dette produserte DCer ved modning i nærvær av BCG alene, betydelige mengder av IL-10: omtrent 150 pg/ml eller >250 pg/ml av IL-10 i nærvær av henholdsvis en 1:1000- eller 1:250-gangers fortynning av BCG-stam-løsningen. Tilsetning av IFNy til BCG i løpet av DC-modning resulterte i nedregulering av IL-10-produksjonen på en dose-avhengig måte. For DCer dyrket i nærvær av 1:1000-fotrynningen av BCG, sank IL-10-produksjonen fra omtrent 150 pg/ml av IL-10 (ikke noe IFNy) til omtrent 20-30 pg/ml av IL-10 (1000 U IFNy). For DCer dyrket i nærvær av 1:250-fotrynningen av BCG, økte IL-10-produksjonen fra omtrent 270 pg/ml av IL-10 (ikke noe IFNy) til omtrent 50 pg/ml av IL-10 (1000 U IFNy). Således var modning av umodne DCer i nærvær av BCG og IFNy i stand til å nedregulere IL-10-produksjonen, og til å overvinne den åpenbare stimuleringen av IL-10-produksjon bevirket av BCG alene.
Eksempel 3: Qppregulering av IL- 12 ved hjelp av IFNy er dose- avhengig: I dette eksemplet ble evnen som IFNy har til å oppregulere IL-12-produksjon vist. Umodne dendrittceller ble avledet fra seks dagers monocyttkulturer dyrket i nærvær av GM-CSF og IL-4, som beskrevet ovenfor. De umodne DC ble behandlet i ytterligere to dager med forskjellige fortynninger av BCG alene, eller med BCG i kombinasjon med forskjellige konsentrasjoner av IFNy. Dyrkningssupernatanter ble testet for nærvær av IL-12 p70 ved hjelp av ELISA-assay, som beskrevet ovenfor.
Resultatene fra et representativt forsøk er vist på figur 1. For hver kultur ble resultatene bestemt in triplo. Som respons på økende mengder av BCG alene, ble en relativt lav (<1000 pg/ml) gjennomsnittlig konsentrasjon av IL-12 p70 produsert av de modne DCene. Mengden av IL-12-produksjon sank på en dose-avhengig måte, etter hvert som mengden av BCG økte. I motsetning til dette, ved tilsetning av IFNy (10 U/ml) med BCG (1:1000-fortynning i stamløsningen), økte mengden av IL-12 dramatisk, til tilnærmet 5000 pg/ml. Ved tilsetning av 100 U/ml av IFNy med BCG (1:1000-fortynning av stamløsningen), økte mengden av IFNy til nesten 20.000 pg/ml. Tilsetning av IFNy i en mengde av 500 U/ml eller 1000 U/ml med BCG (1:1000-fortynning av stamløsningen) resulterte i IL-12-nivåer på henholdsvis tilnærmet 21.000 pg/ml og 22.000 pg/ml.
Som oppsummering, selv om BCG alene syntes å antagonisere IL-12-produksjonen, økte modningen av umodne DCer i nærvær av BCG og IFNy dramatisk IL-12-produksjonen.
Eksempel 4: Stimulering av antigen- spesifikke T- celler:
I dette eksemplet ble umoden DC modnet i nærvær av BCG og IFNy, vist å stimulere IFNy-produksjon ved hjelp av antigen-spesifikke T-celler. En T-cellelinje spesifikk for influenza A ble frembragt ved å inkubere mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) i en mengde av 2 x 106 celler/ml med 5 ug/ml influenza M1-peptid (GILGFVFTL; SEQ ID NO:3) i AIM-V<®->medium supplert med 5% humant serum. Disse dyrkningsbetingelsene resulterte i selektiv ekspansjon av T-cellene som er spesifikke for influenza M1-peptidet. Etter 2 dagers dyrkning ble 20 U/ml IL-2 og 5 ng/ml IL-15 tilsatt til kulturene. Etter omtrent 7 til 14 dagers dyrkning ble T-cellelinjene plassert i cytokinfritt medium over natten.
De antigen-spesifikke T-cellene ble deretter samtidig dyrket med umodne DCer, med DCer modnet med BCG alene, eller med DCer modnet med BCG og IFNy. Forholdet mellom antigen-spesifikke T-celler og DCer var 1:1. T-cellene og DCene ble inkubert ved 37°C i 24 timer. DCene hadde enten blitt direkte lastet eller osmotisk lastet med influenza M1-peptid. Kort sagt ble de umodne DC inn-høstet fra dyrkningskolbene og konsentrert ved sentrifugering. For osmotisk lasting ble cellene gjenoppslemmet i et lite volum av et hyperosmotisk medium, fulgt av tilsetning av en lik mengde av influenza M1-peptid i PBS. Etter ti minutters inkubasjon på is, ble cellene grundig vasket. For direkte lasting ble cellene gjenoppslemmet i et likt volum av X-VIVO 15<®->medium og influenza M1-peptid i PBS, og inkubert i 1 time ved 37°C. Cellene ble inkubert i 2 timer ved 37°C, for å tillate antigen-prosessering.
Etter samtidig dyrkning av T-cellene og DCene, ble T-celleresponsen målt ved hjelp av ELISA-kvantifisering av IFNy fra en 100 ul prøve av dyrkningssuper-natant. Resultatene indikerte at, uansett metode for DC-lasting, DCer stimulert med BCG og IFNy er overlegne stimulatorer av antigen-spesifikke T-celler. T-celler samtidig dyrket med umoden DC produserte meget lite IFNy (<2.000 pg/ml), mens T-celler samtidig dyrket med DCer modnet ved anvendelse av BCG alene, var mellomliggende produsenter av IFNy (>5.000 pg/ml). T-celler samtidig dyrket med DCer modnet ved anvendelse av BCG og IFNy, produserte høye nivåer av IFNy (>20.000 pg/ml for osmotisk lastede DCer eller >25.000 pg/ml for DCer lastet direkte).
Således var DC modnet med BCG og IFNy bedre stimulatorer av antigen-spesifikke T-celler, uavhengig av metoden for lasting av DC med antigen.
Eksempel 5: De novo- frembringelse av antigen- spesifikke T- celleresponser in vitro: T-cellelinjer som er spesifikke for nøkkelhull-"limpet"-hemocyanin (KLH) ble frembragt ved å stimulere PBMC med DC modnet ved anvendelse av enten BCG, eller BCG og IFNy, og lastet med KLH eller kontrollproteiner i et forhold mellom T-celler og DC på 10:1. T-cellene og moden DC ble gitt friskt medium (AIM-V®-medium supplert med 5% humant AB-serum, 20 U/ml IL-2, og 5 ng/ml IL-15) hve 3. til 4. dag. Cellene ble ekspandert til større kolber, etter behov. Fordi den totale forløper-frekvensen til et visst antigen var lav, og fordi naive celler krever kraftig stimulering for å respondere, ble stimulering gjentatt 3 til 4 ganger i intervaller på 10 til 21 dager. Cellene fikk gjenvinnes over natten i cytokinfritt medium før restimulering.
Et standard 3-dagers thymidin-innlemmelses-assay ble anvendt for å teste stimulerte T-cellelinjer med henblikk på KLH-spesifikk celleproliferasjon. Stimulerte T-celler ble inkubert i varierende DC til T-celle-forhold med KLH-pulsede, umodne dendrittceller. T-celleproliferasjon ble målt som tellinger pr. minutt (CPM). Cellulær proliferasjon, eller produksjon av cytokiner, som respons på stimulering, ble tatt som et bevis på antigen-spesifikk respons. For å kontrollere med henblikk på antigen-spesifisitet, ble et negativt kontroll-antigen (influenza A-virus) også ink-ludert i assayet.
Da DCer modnet med BCG alene ble benyttet til å stimulere T-celler, var T-celleproliferasjonen konsekvent lav (<5.000 CPM). Dette lave nivået av proliferasjon var lavt enten DCene ble bragt i kontakt med KLH eller influenza A-virus. Et lavt nivå av proliferasjon ble også observert som respons på inkubasjon med umodne DCer. Ingen signifikant forskjell ble observert mellom de tre gruppene av DCer anvendt som responder på stimulatorforhold på 50:1, 25:1 eller 12,5:1 (T-celler i forhold til DCer). I motsetning til dette ble dendrittceller modnet med BCG og IFNy anvendt til å stimulere T-cellene, KLH-pulsede DCer bevirket konsekvent høyere T-celleproliferasjon (tilnærmet 10.000-33.000 CPM) enn umodne DCer eller modne DCer pulset med influenza A. For modne DCer pulset med KLH-antigen, økte T-celleproliferasjonen i forhold til en økning av responder-til-stimulator-forholdet.
T-celle-effektorfunksjon ble også overvåket ved cytokinsekresjon. De KLH-spesifikke T-cellelinjene (frembragt som beskrevet ovenfor) ble stimulert ved anvendelse av DC modnet enten med BCG alene eller med BCG og IFNy. De stimulerte T-cellelinjene ble testet med henblikk på cytokinproduksjon ved hjelp av intra-cellulær cytokinfarging etter at cellene var ikke-spesifikt stimulert med anti-CD3-antistoff (50 ng/ml) og PMA (5 ng/ml). Cytokinproduksjon ble målt som en prosentandel av celler som produserte et spesielt cytokin. En meget lav til upåvisbar prosentandel (« 5%) av celleprøve produserte intracellulært IL-2, IL-4, IL-5 eller IL-10. IL-5 og IL-10 ble ikke påvist i T-celler stimulert ved hjelp av DCer modnet med BCG og IFNy. T-celler stimulert ved hjelp av DCer modnet ved hjelp av BCG alene, produserte lave nivåer av IFNy (<10%) og TNF-a (<15%). I motsetning til dette produserte betydelige andeler av T-celler stimulert med DCer modnet med IFNy og BCG IFNy (tilnærmet 35%) og TNFa (>45%). IFNy er en kjent stimulator av IL-12-produksjon. Således, ved å stimulere T-celler med DCer modnet med BCG og IFNy, blir T-cellene polarisert mot en type-1- (Th-1) respons.
Eksempel 6: Induksjon av Th- 1- cytokin- tumornekrosefaktor g ( TNFa): I dette eksemplet ble evnen som kombinasjonen av BCG og IFNy har til å oppregulere type-1 -cytokin-tumornekrosefaktor a (TNFa) vist. Kort sagt ble umodne dendrittceller avledet som beskrevet ovenfor og "prown" i nærvær av GM-CSF og IL-4. De umodne DCene ble dyrket med enten BCG alene eller i kombi nasjon med IFNy i omtrent 24 timer. Deretter ble en proteintransport-inhibitor (GolgiPlug™, PharMingen) tilsatt for å blokkere transporten av de produserte cytokinene fra golgi-komplekset, og cellene ble inkubert over natten. Cellene ble deretter innhøstet, permeabilisert og farget internt med et fluorescerende merkelapp-antistoff spesifikt for TNFa, eller et isotype-kontrollantistoff, ved anvendelse av fremgangsmåter som er velkjent på fagområdet. Frekvensen av DCer positive for TNFa og fluorescerings-intensiteten til cellene, ble bestemt ved FACS-analyse (tabell 3). Modning av DCene med BCG i nærvær av IFNy, ble funnet å øke kapasiteten som DCene har til å produsere Th-1-cytokinet TNFa.
Eksempel 7: Induksjon av respons mot celle- tilknyttet antigen:
I dette eksemplet ble DCer modnet i nærvær av BCG og IFNy vist å utløse en betydelig høyere tumor-spesifikk T-celle-INFy-frigjøring og lignende nivåer av
antigen-spesifikk cytotoksisitet, sammenlignet med DCer modnet med BCG alene. Umodne dendrittceller ble isolert som fremsatt ovenfor, og dyrket i nærvær av GM-CSF og IL-4. DCene ble deretter lastet med enten hele tumorceller (A549) tidligere infisert med rekombinant adenovirus som uttrykker enten grønt fluorescerende
protein (GFP) eller M1-proteinet i influenza A-virus. DCene ble modnet 24 timer senere med enten BCG eller BCG i kombinasjon med IFNy. De tumorlastede DCene eller GFP eller M1-ekspresjons-tumorcellene ble anvendt til å stimulere en autolog M1-spesifikk T-cellelinje. Tjuefire timer senere ble cellekultursupernatan-ter innhøstet og kjørt på et standard IFNy-ELISA. Bare DCer lastet med M1-ekspresjons-tumorceller var i stand til å stimulere IFNy-frigjøring, og DCer modnet
i BCG pluss IFNy var betydelig kraftigere når det gjelder å indusere denne responsen enn både umodne eller BCG-modnede DCer.
De foregående eksemplene er gitt for å illustrere oppfinnelsene som det kreves beskyttelse for.
Claims (23)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon, som omfatter: å tilveiebringe umodne dendrittceller; og å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med bacillus Calmette-Guerin (BCG) og Interferon gamma (IFNy) under in vitro dyrkningsbetingelser som er egnet for modning av de umodne dendrittcellene, for å danne en moden dendrittcelle-populasjon; hvor den modne dendrittcelle-populasjonen produserer minst omtrent et 1:1 forhold mellom Interleukin 12 og Interleukin 10.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, som videre omfatter å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med et forhåndsbestemt antigen før de bringes i kontakt med BCG og IFNy.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, som videre omfatter å samtidig bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med et forhåndsbestemt antigen, BCG og IFNy.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3, hvor det forhåndsbestemte antigenet er et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen eller et isolert antigen.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, som videre omfatter: å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere; og å dyrke forløperen i nærvær av et differensieringsmiddel for å danne de umodne dendrittcellene.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, hvor differensieringsmidlet er granulocytt-makrofag-koloni stimulerende faktor (GM-CSF), Interleukin 4 (IL-14), en kombinasjon av GM-CSF og IL-4 eller Interleukin 13 (IL-13).
7. Fremgangsmåte ifølge krav 5, hvor monocytt-dendrittcelle-forløperne er isolert fra et menneske-individ.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor de modne dendrittcellene produserer et forhold mellom IL-12 og IL-10 på minst omtrent 10:1, minst omtrent 100:1.
9. Fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon ifølge krav 1, hvor den modne dendrittcelle-populasjonen produserer en type 1 immunrespons.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, som videre omfatter å bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med et forhåndsbestemt antigen før de bringes i kontakt med BCG og IFNy.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 9, som videre omfatter å samtidig bringe de umodne dendrittcellene i kontakt med et forhåndsbestemt antigen, BCG og IFNy.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 10 eller 11, hvor det forhåndsbestemte antigenet er et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen, eller et isolert antigen.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 9, som videre omfatter: å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere; og å dyrke forløperne i nærvær av et differensieringsmiddel for å danne de umodne dendrittcellene.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, hvor differensieringsmidlet er GM-CSF, Interleukin 4, en kombinasjon av GM-CSF og IL-4, eller IL-13.
15. Fremgangsmåte ifølge krav 9, hvor monocytt-dendrittcelle-forløperne er isolert fra et menneske-individ.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 9, hvor de modne dendrittcellene produserer et forhold mellom IL-12 og IL-10 på minst omtrent 1:1, minst omtrent 10:1, eller minst omtrent 100:1.
17. In vitro fremgangsmåte for produsering av T-celler, omfattende kontakting av modne dendrittceller produsert ved fremgangsmåten ifølge krav 2 eller krav 10 med naive T-celler for å danne aktiverte T-celler som produserer IFNy.
18. Fremgangsmåte ifølge krav 17, hvor det forhåndsbestemte antigenet er et tumor-spesifikt antigen, et tumor-tilknyttet antigen, et virus-antigen, et bakterie-antigen, tumorceller, bakterieceller, rekombinante celler som uttrykker et antigen, et cellelysat, et membranpreparat, et rekombinant produsert antigen, et peptid-antigen, eller et isolert antigen.
19. Fremgangsmåte ifølge krav 17, hvor de umodne dendrittcellene samtidig blir bragt i kontakt med det forhåndsbestemte antigen, BCG og IFNy.
20. Fremgangsmåte ifølge krav 17, som videre omfatter: å isolere monocytt-dendrittcelle-forløpere; og å dyrke forløperne i nærvær av et differensieringsmiddel for å danne de umodne dendrittcellene.
21. Fremgangsmåte ifølge krav 20, hvor differensieringsmidlet er GM-CSF, IL-4, en kombinasjon av GM-CSF og IL- 4, eller IL-13.
22. Fremgangsmåte ifølge krav 20, hvor monocytt-dendrittcelle-forløperne blir isolert fra et menneske-individ.
23. Fremgangsmåte ifølge krav 17, hvor de umodne dendrittcellene og T-cellene er autologe med hverandre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US31759201P | 2001-09-06 | 2001-09-06 | |
| PCT/US2002/028620 WO2003022215A2 (en) | 2001-09-06 | 2002-09-06 | Compositions and methods for priming monocytic dendritic cells and t cells for th-1 response |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20040965L NO20040965L (no) | 2004-04-23 |
| NO338147B1 true NO338147B1 (no) | 2016-08-01 |
Family
ID=32654226
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20040965A NO338147B1 (no) | 2001-09-06 | 2004-03-05 | Fremgangsmåte for fremstilling av en moden dendrittcelle-populasjon og in vitro fremgangsmåte for produsering av T-celler. |
| NO20151562A NO20151562A1 (no) | 2001-09-06 | 2015-11-16 | Blandinger og fremgangsmåter for priming av monocytt-dendrittceller og T-celler i Th-1-respons. |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20151562A NO20151562A1 (no) | 2001-09-06 | 2015-11-16 | Blandinger og fremgangsmåter for priming av monocytt-dendrittceller og T-celler i Th-1-respons. |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20050059151A1 (no) |
| EP (3) | EP1441591B1 (no) |
| JP (3) | JP2005505270A (no) |
| KR (3) | KR101803702B1 (no) |
| CN (2) | CN1636229B (no) |
| AU (1) | AU2008221592B2 (no) |
| BR (1) | BRPI0212545B8 (no) |
| CA (1) | CA2459713C (no) |
| DK (2) | DK1441591T3 (no) |
| ES (2) | ES2766299T3 (no) |
| HK (1) | HK1079989A1 (no) |
| IL (3) | IL160720A0 (no) |
| MX (1) | MXPA04002147A (no) |
| NO (2) | NO338147B1 (no) |
| NZ (1) | NZ531530A (no) |
| PL (1) | PL372098A1 (no) |
| PT (2) | PT1441591T (no) |
| WO (1) | WO2003022215A2 (no) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT412145B (de) * | 2002-09-13 | 2004-10-25 | Forsch Krebskranke Kinder | Verfahren zur herstellung eines zellulären immuntherapeutikums auf basis von il-12-freisetzenden dendritischen zellen |
| US20040057935A1 (en) * | 2002-09-20 | 2004-03-25 | Cedars-Sinai Medical Center | Intratumoral delivery of dendritic cells |
| EP1567155B1 (en) * | 2002-12-06 | 2010-10-27 | NorthWest Biotherapeutics, Inc. | Administration of dendritic cells partially matured in vitro for the treatment of tumors |
| EP1604016B1 (en) * | 2003-02-27 | 2009-01-14 | NorthWest Biotherapeutics, Inc. | Generation of dendritic cells from monocytic dendritic precursor cells with gm-csf in the absence of additional cytokines |
| EP1484064A1 (en) | 2003-06-04 | 2004-12-08 | Gesellschaft für Biotechnologische Forschung | Therapeutical composition containing dentritic cells and use thereof |
| US20080199484A1 (en) * | 2003-10-06 | 2008-08-21 | Cedars-Sinai Medical Center | Use Of Cox-2 Inhibitor to Prevent T-Cell Anergy Induced By Dendritic Cell Therapy |
| JP5015601B2 (ja) * | 2003-10-21 | 2012-08-29 | セダーズ−シナイ メディカル センター | 中枢神経系の癌を含む癌の処置のための系および方法 |
| US20070269414A1 (en) * | 2003-11-04 | 2007-11-22 | Shinji Okano | Method for Producing Gene Transferred Denritic Cells |
| EP1775343A4 (en) | 2004-06-24 | 2007-11-14 | Dnavec Research Inc | ANTICANCER AGENTS CONTAINING A DENDRITIC CELL IN WHICH RNA VIRUSES HAVE BEEN TRANSFERRED |
| CN103589684A (zh) * | 2005-12-08 | 2014-02-19 | 西北生物治疗药物公司 | 用于诱导未成熟单核细胞的树突细胞的激活的组合物和方法 |
| EP1840206A1 (en) * | 2006-03-28 | 2007-10-03 | Gsf-Forschungszentrum Für Umwelt Und Gesundheit, Gmbh | Compositions for the preparation of mature dendritic cells |
| US8129184B2 (en) * | 2006-09-26 | 2012-03-06 | Cedars-Sinai Medical Center | Cancer stem cell antigen vaccines and methods |
| WO2008039974A2 (en) | 2006-09-28 | 2008-04-03 | Cedars-Sinai Medical Center | Cancer vaccines and vaccination methods |
| WO2010028066A2 (en) | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Cedars-Sinai Medical Center | Cd133 epitopes |
| ES2618573T3 (es) | 2009-05-07 | 2017-06-21 | ImmunoCellular Therapeutics,Ltd | Epítopos de CD133 |
| WO2013116541A1 (en) * | 2012-02-02 | 2013-08-08 | California Stem Cell, Inc. | Gamma interferon treated pluripotent germ layer origin antigen presenting cancer vaccine |
| EP2857498B1 (en) * | 2012-05-31 | 2018-04-25 | JW Creagene Inc. | Composition for maturing dendritic cells, and method for preparing antigen-specific dendritic cells using same |
| US9744193B2 (en) | 2012-09-06 | 2017-08-29 | Orbis Health Solutions Llc | Tumor lysate loaded particles |
| AU2020203845C1 (en) * | 2012-09-06 | 2022-08-11 | Orbis Health Solutions, Llc | Tumor lysate loaded particles |
| WO2014093454A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Orbis Health Solutions, Llc | Compositions and methods for tissue regeneration |
| EP2956544B1 (en) | 2013-02-14 | 2017-11-01 | Immunocellular Therapeutics Ltd. | Cancer vaccines and vaccination methods |
| CN112891522A (zh) * | 2013-09-05 | 2021-06-04 | 奥比思健康解决方案有限责任公司 | 装载了肿瘤裂解物的微粒 |
| EP3113759B1 (en) | 2014-03-05 | 2021-05-12 | Orbis Health Solutions LLC | Vaccine delivery systems using yeast cell wall particles |
| US9792656B1 (en) * | 2014-05-20 | 2017-10-17 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Fault determination with autonomous feature use monitoring |
| US10599155B1 (en) | 2014-05-20 | 2020-03-24 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle operation feature monitoring and evaluation of effectiveness |
| US9972054B1 (en) | 2014-05-20 | 2018-05-15 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Accident fault determination for autonomous vehicles |
| US11669090B2 (en) | 2014-05-20 | 2023-06-06 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle operation feature monitoring and evaluation of effectiveness |
| US10373259B1 (en) | 2014-05-20 | 2019-08-06 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Fully autonomous vehicle insurance pricing |
| US10540723B1 (en) | 2014-07-21 | 2020-01-21 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Methods of providing insurance savings based upon telematics and usage-based insurance |
| US9946531B1 (en) | 2014-11-13 | 2018-04-17 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle software version assessment |
| WO2017002045A1 (en) | 2015-06-30 | 2017-01-05 | Stemlab, Sa | A viable cell population, method for production and uses thereof |
| EP3317403A4 (en) * | 2015-06-30 | 2019-07-03 | NorthWest Biotherapeutics, Inc. | OPTIMALLY ACTIVATED DENDRITIC CELLS THAT INDUCE ENHANCED OR ENHANCED ANTI-TUMOR IMMUNE RESPONSE |
| US9805601B1 (en) | 2015-08-28 | 2017-10-31 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Vehicular traffic alerts for avoidance of abnormal traffic conditions |
| US10308246B1 (en) | 2016-01-22 | 2019-06-04 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle signal control |
| US11441916B1 (en) | 2016-01-22 | 2022-09-13 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle trip routing |
| US11719545B2 (en) | 2016-01-22 | 2023-08-08 | Hyundai Motor Company | Autonomous vehicle component damage and salvage assessment |
| US10324463B1 (en) | 2016-01-22 | 2019-06-18 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle operation adjustment based upon route |
| US11242051B1 (en) | 2016-01-22 | 2022-02-08 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle action communications |
| US10395332B1 (en) | 2016-01-22 | 2019-08-27 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Coordinated autonomous vehicle automatic area scanning |
| US10134278B1 (en) | 2016-01-22 | 2018-11-20 | State Farm Mutual Automobile Insurance Company | Autonomous vehicle application |
| KR102038114B1 (ko) * | 2016-02-26 | 2019-10-30 | 주식회사 엘지화학 | 광학 점착제용 (메타)아크릴레이트기 함유 벤조페논의 제조방법 및 광학 점착제 조성물 |
| WO2018160666A1 (en) * | 2017-02-28 | 2018-09-07 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Short-term activated dc1s and methods for their production and use |
| IL292009A (en) * | 2019-10-07 | 2022-06-01 | Northwest Biotherapeutics Inc | In vitro methods and preparations for improving the activation of dendritic cells and t cells, and inducing a th-1 immune response |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5162504A (en) * | 1988-06-03 | 1992-11-10 | Cytogen Corporation | Monoclonal antibodies to a new antigenic marker in epithelial prostatic cells and serum of prostatic cancer patients |
| US5366866A (en) * | 1991-07-25 | 1994-11-22 | Duke University | Method of diagnosing ovarian and endometrial cancer with monoclonal antibodies OXA and OXB |
| US5227471A (en) * | 1992-01-30 | 1993-07-13 | Eastern Virginia Medical School Of The Medical College Of Hampton Roads | Monoclonal antibody PD41 that binds to a prostate mucin antigen that is expressed in human prostatic carcinoma |
| US5788963A (en) * | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
| AU697539B2 (en) * | 1995-10-04 | 1998-10-08 | Immunex Corporation | Dendritic cell stimulatory factor |
| US7659119B2 (en) * | 1996-02-12 | 2010-02-09 | Argos Therapeutics, Inc. | Method and compositions for obtaining mature dendritic cells |
| ATE428769T1 (de) * | 1997-10-27 | 2009-05-15 | Univ Rockefeller | Methode und zusammensetzung zur herstellung von reifen dendritischen zellen |
| JP2000143534A (ja) * | 1998-11-13 | 2000-05-23 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 樹状細胞ワクチン及びその製造方法 |
| JP2000279181A (ja) * | 1999-04-01 | 2000-10-10 | Japan Science & Technology Corp | ヒト樹状細胞の発現遺伝子群 |
| US20030108527A1 (en) * | 1999-12-28 | 2003-06-12 | Tsukasa Seya | Maturation-promoting agent for immature dendrtic cells |
| US6247378B1 (en) * | 2000-01-06 | 2001-06-19 | Deere & Company | Operator control device for an infinitely variable transmission |
| ES2571979T3 (es) * | 2000-05-12 | 2016-05-27 | Northwest Biotherapeutics Inc | Procedimiento para aumentar la presentación de clase I de antígenos exógenos por células dendríticas humanas |
| JP2004520033A (ja) * | 2001-01-15 | 2004-07-08 | イ・デ・エム・イミュノ−デジネ・モレキュル | 分化拘束された成熟樹状細胞の調製用補助組成物 |
| WO2003010292A2 (en) * | 2001-07-25 | 2003-02-06 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Methods and apparatus for enrichment and culture of monocytic dendritic cell precursors |
-
2002
- 2002-09-06 KR KR1020147023675A patent/KR101803702B1/ko active IP Right Grant
- 2002-09-06 EP EP02761594.7A patent/EP1441591B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 CA CA2459713A patent/CA2459713C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 PT PT2761594T patent/PT1441591T/pt unknown
- 2002-09-06 CN CN028198174A patent/CN1636229B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 IL IL16072002A patent/IL160720A0/xx unknown
- 2002-09-06 CN CN201210470111.XA patent/CN102973928B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 US US10/488,744 patent/US20050059151A1/en not_active Abandoned
- 2002-09-06 ES ES10181985T patent/ES2766299T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 EP EP19202820.7A patent/EP3653055A1/en not_active Withdrawn
- 2002-09-06 KR KR1020117012621A patent/KR20110081341A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-09-06 WO PCT/US2002/028620 patent/WO2003022215A2/en active Application Filing
- 2002-09-06 JP JP2003526345A patent/JP2005505270A/ja active Pending
- 2002-09-06 KR KR1020047003386A patent/KR20050027163A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-09-06 BR BRPI0212545A patent/BRPI0212545B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 ES ES02761594.7T patent/ES2598109T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 DK DK02761594.7T patent/DK1441591T3/en active
- 2002-09-06 DK DK10181985.2T patent/DK2322603T3/da active
- 2002-09-06 PT PT101819852T patent/PT2322603T/pt unknown
- 2002-09-06 MX MXPA04002147A patent/MXPA04002147A/es active IP Right Grant
- 2002-09-06 NZ NZ531530A patent/NZ531530A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 PL PL02372098A patent/PL372098A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2002-09-06 EP EP10181985.2A patent/EP2322603B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-03-03 IL IL160720A patent/IL160720A/en active IP Right Grant
- 2004-03-05 NO NO20040965A patent/NO338147B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-01-04 HK HK06100064.5A patent/HK1079989A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-05-29 US US12/129,549 patent/US20080254064A1/en not_active Abandoned
- 2008-09-19 AU AU2008221592A patent/AU2008221592B2/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-07-04 JP JP2011148711A patent/JP5777956B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-04-18 IL IL219266A patent/IL219266A/en active IP Right Grant
-
2015
- 2015-03-02 JP JP2015040165A patent/JP6114768B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2015-11-16 NO NO20151562A patent/NO20151562A1/no not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DEMANGEL CAROLINE ET AL., "Protection against aerosol Mycobacterium tuberculosis infection using Mycobacterium bovis bacillus Calmette Guérin-infected dendritic cells", European Journal of Immunology, vol. 29, no. 6, 1999, side 1972-1979 , Dated: 01.01.0001 * |
| HILKENS CATHARIEN M.U. ET AL., "Human dendritic cells require exogenous interleukin-12-inducing factors to direct the development of naive T-helper cells toward the Th1 phenotype", Blood, W.B. Saunders, Philadelphia, VA, US, vol. 90, no. 5, 1997, side 1920-1926,, Dated: 01.01.0001 * |
| TSUJI SHOUTARO ET AL., "Maturation of human dendritic cells by cell wall skeleton of mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guérin:involvement of toll-like receptors", Infection and Immunity, American Society for Microbiology. Washington, US, vol. 68, no. 12, 2000, side 6883-6890, Dated: 01.01.0001 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6114768B2 (ja) | 単球性樹状細胞およびｔ細胞にｔｈ−１応答をプライミングするための組成物および方法 | |
| US20120244620A1 (en) | Compositions and methods for inducing the activation of immature monocytic dendritic cells | |
| KR20220098351A (ko) | 수지상 세포 및 T 세포의 활성화를 증진시키고 Th-1 면역 반응을 유도하기 위한 시험관내 방법 및 조성물 | |
| AU2013201707B2 (en) | Compositions and methods for priming monocytic dendritic cells and T cells for Th-1 response | |
| AU2002326846A1 (en) | Compositions and methods for priming monocytic dendritic cells and T cells for Th-1 response | |
| AU2013206016B2 (en) | Compositions and methods for inducing the activation of immature monocytic dendritic cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |