NO335704B1 - Hurtigtest og kitt for diagnose av Alzheimers sykdom. - Google Patents
Hurtigtest og kitt for diagnose av Alzheimers sykdom. Download PDFInfo
- Publication number
- NO335704B1 NO335704B1 NO20061758A NO20061758A NO335704B1 NO 335704 B1 NO335704 B1 NO 335704B1 NO 20061758 A NO20061758 A NO 20061758A NO 20061758 A NO20061758 A NO 20061758A NO 335704 B1 NO335704 B1 NO 335704B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- disease
- cells
- stimulation
- alzheimer
- surface markers
- Prior art date
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 46
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims abstract description 41
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 14
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 8
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 claims description 6
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 claims description 3
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 5
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- -1 CD45RO Proteins 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010033737 Pokeweed Mitogens Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000000506 liquid--solid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70514—CD4
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70517—CD8
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/7056—Selectin superfamily, e.g. LAM-1, GlyCAM, ELAM-1, PADGEM
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
Abstract
Den foreliggende oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for diagnostisering av Alzheimers sykdom, eller et tidlig stadium derav, eller predisponering for sykdommen. Fremgangsmåten er basert på kvanti fikasjon av mitogensk uttrykkbare overflatemarkører, fortrinnsvis CD69, og tilhørende periferisk tilgjengelige celler, for eksempel hudceller eller lymfocytter, (a) før og (b) etter mitogen stimulering. En spesiell stimuleringsindeks a b er et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller predisponering for sykdommen. Den foreliggende oppfinnelsen vedrører også kitt passende for å utføre den diagnostiske fremgangsmåten i følge oppfinnelsen.
Description
Den foreliggende oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å diagnostisere sykdom, eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen, ved hjelp av en pasients blodprøve. Oppfinnelsen vedrører også et kitt for diagnostisering av Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen.
Alzheimers sykdom kan ikke diagnostiseres med sikkerhet med kliniske virkemidler og de tilgjengelige parakliniske fremgangsmåter og fremgangsmåter basert på instrumenter og teknologi som sådan. Det krever alltid bekreftelse ved autopsi. Den diagnostiske differensieringen i forhold til andre årsaker til demens er ofte vanskelig, særlig i de tidlige stadier av sykdommen. I de svært tidlige stadiene til sykdommen er derimot sikker diagnostisering viktig av to grunner. På den ene siden tillater det diagnostisk differensiering av typer demens som potensielt kan behandles, og derved kan effektiv behandling utføres. På den andre siden er det en nødvendig forutsetning for enhver type behandling av den neurondegenerative prosessen tilstedeværende i Alzheimers sykdom, som bare kan være vellykket i løpet av disse tidlige stadiene. En slik diagnostisk sikkerhet kan bare garanteres av biomarkører på Alzheimers sykdom, med andre ord av lett biologiske forandringer som kan bestemmes med en tilstrekkelig sensitivitet og spesifisitet for denne sykdommen.
Biomarkører for Alzheimers sykdom er derfor av diagnostisk verdi, og kan særlig bidra til en sikker identifisering av risikogrupper og pasienter i prekliniske stadier og tidlige kliniske stadier. Biomarkører bidrar også i oppfølgingen og derved i prognosen og kontrollen av responsen på behandlinger. Modellbiomarkører bør tilfredsstille visse teoretiske og praktiske krav. De innbefatter særlig en høy spesifisitet og sensitivitet, og evnen til å identifisere prekliniske stadier, og en høy positiv og negativ predikativ verdi. Biomarkørene bør bestemmes, dersom mulig, uten inngrep og uten å tynge eller skremme pasienten. Analysen bør være billig og tilpasset til å lett kunne utføres og, dersom mulig, på et vanlig legekontor. Dessverre fyller ingen av de nåværende kjente biomarkørene på Alzheimers sykdom kravene nevnt ovenfor. De kjente biomarkørene er særlig ikke egnet for diagnostisk bruk pga. dårlig sensitivitet og spesifisitet. Andre diagnostiske undersøkelser som har en bedre sensitivitet og spesifisitet trenger kompliserte tekniske forutsetninger, og er derved uegnet for lokal anvendelse for en stor pasientgruppe.
DE19936035 omtaler et lymfocytt-proliferasjonskitt med antikoagulant og mitogene stimulanter, samt protein A eller nervevekstfaktor og et antistoff med CD69 spesifisitet.
Publikasjonen av Stieler, Jens T, et al., Neuroreport, vol 12, nr. 18, 2001, s. 3969-3972 omtaler proliferasjonsgraden hos perifere blodlymfocytter i friske individer og pasienter med AD.
Disse to publikasjoner beregner imidlertid stimuleringsmåten på en annen måte, og gir ikke mulighet for en presis og enkel diagnose.
Derved er oppfinnelsen hovedsakelig basert på det tekniske problemet med å frem-skaffe en enkel fremgangsmåte for diagnose av Alzheimers sykdom, som tillater diagnose av Alzheimers sykdom, påvising av prekliniske sykdomsstadier, og diagnostisk differensiering av Alzheimers sykdom i forhold til andre demenser, med tilstrekkelig sensitivitet og spesifisitet.
Dette tekniske problemet er løst ved å frembringe utførelsenekarakteriserti kravene.
Det var mulig å utvikle en diagnostisk fremgangsmåte basert på bestemmelse av den mitogene indeks (aktiveringsindeks) ved bruk av perifert tilgengelige pasient-celler, så som hudceller eller blodlymfocytter, med og uten mitogen stimulering, det vil si etter immunmagnetisk celleseparering. Aktiveringen av disse cellene er for-bundet med overflatepresentasjon av aktiveringsmarkører som kan påvises kvantitativt, fortrinnsvis ved hjelp av antigen-antistoff-interaksjoner, magnetiske partikler fortrinnsvis dekket av antistoffene som anvendes, som tillater den magnetiske cellesepareringen og påfølgende kvantefiseringen av antallet celler som bærer denne overflatemarkøren før og etter mitogen stimulering. Denne egenskapen viser sykdomsspesifikke avvik fra de normale funn. Fremgangsmåten i muliggjør derved diagnose av Alzheimers sykdom, detektering av prekliniske sykdomsstadier, og diagnostisk differensiering av Alzheimers sykdom fra andre demenser.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører således i et aspekt en fremgangsmåte for å diagnostisere sykdom, eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen, ved hjelp av en pasients blodprøve, kjennetegnet ved at fremgangsmåten omfatter trinnene: (a) mitogen stimulering av lymfocyttene i prøven med PWM; (b) kvantifisering av de mitogen stimulerte cellene i cellepopulasjonen før og etter trinn (a) ved hjelp av CD69 overflatemarkører uttrykt etter mitogen stimulering, hvor cellene som bærer CD69 overflatemarkørene separeres fra cellene som ikke bærer CD69 overflatemarkører ved bruk av antistoffer rettet mot CD69 overflatemarkørene; og (c) bestemmelse av stimuleringsindeksen som et forhold mellom antallet celler som bærer CD69 overflatemarkøren før og etter trinn (a),
hvor en stimuleringsindeks som når minst 10 ganger, maksimum 100 ganger, av den ikke-stimulerte kontrollprøven, er et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen.
I en utførelse er CD69<+>cellene videre spesifisert i henhold til CD4<+>og/eller CD8<+>subpopulasjoner.
I en utførelse stabiliseres blodet av én eller flere anti-koagulerende forbindelser før trinn (a).
I en utførelse er antistoffene i trinn (b) bundet til magnetiske artikler, og separeringen er utført ved immunmagnetisk separering.
I en utførelse blir stimuleringsindeksen fastslått ved bestemmelse av proteininnholdet og/eller nukleinsyreinnholdet til cellene som bærer overflatemarkører før og etter trinn (a).
En fagmann kjenner til egnede måter å frembringe pasientprøver som er egnet til fremgangsmåten i følge oppfinnelsen, som inneholder tilstrekkelig med mitogen stimulerbare celler. Passende prøver er for eksempel dermale vevsprøver, blod-prøver, fortrinnsvis fra venøst blod, celler fra cerebrospinalvæske, og celler fra urin.
I en foretrukket utførelse av den diagnostiske fremgangsmåten, for eksempel når en blodprøve anvendes, blir en anti-koagulerende forbindelse, for eksempel natriumcitrat eller heparin, tilsatt for stabilisering før de andre fremgangsmåtetrinnene.
Utrykket "diagnostisering av Alzheimers sykdom" som anvendt omfatter også opp-følging og derved prognose, kontroll av effektiviteten til terapeutiske behandlings-former og diagnostisk differensiering av sykdommen fra andre demenser.
Uttrykket "periferisk tilgjengelige celler" som anvendt her refererer til celler som kan fjernes fra den menneskelige organismen uten en operasjon eller i et (minimalt) inngrep, og de omfatter for eksempel hudceller og lymfocytter fra perifert blod, der det sistnevnte er foretrukket.
Mitogen stimulering for å oppnå ekspresjon av overflatemarkører kan frembringes ved hjelp av kjente simulanter, så som fytohemagglutinin (PHA), protein A, PWM eller andre forbindelser som har en trofisk eller mitogen effekt. Stimuleringen kan oppnås ved tilførsel av de individuelle forbindelsene eller ved en kombinert tilførsel.
En fagmann vil kjenne til passende eksperimentelle forhold for slik stimulering, for eksempel i forbindelse med konsentrasjonene av mitogenene anvendt, varigheten på stimuleringen, samt andre inkubasjonsforhold. Stimuleringen bør gjennomføres i passene beholdere som tillater tilstrekkelig gassutveksling. Konsentrasjonene av de respektive stimuleringsmidlene bør falle innenfor den fysiologiske rammen, som er 1 ug/ml til 20 ug/ml for PHA, 1 ug/ml til 50 ug/ml for PWM, og 10 ug/ml til 200 ug/ml for protein A. Stimuleringsintervallet er avhengig av ekspresjonsraten til molekylet som skal undersøkes. Men stimuleringsintervall på 2 til 24 timer kan være nødvendig for visse undersøkelser. For CD69 er et stimuleringsintervall på 4 timer optimalt. Stimuleringen bør utføres under fysiologiske forhold, og kan for eksempel utføres i en gassholdig inkubator ved 37°C og med 5 % CO2.
En fagmann kjenner også passende overflatemarkører hvorved en mitogen stimulering manifesteres, foreksempel CD69, CD25, CD45RO, CD63 og HLA-Dr, hvorav overflatemarkøren CD69 er foretrukket. For formålene med oppfinnelsen er det også mulig å utføre en bestemmelse av en kombinasjon av overflatemarkører, eller en videre spesifisering av cellene separert ved hjelp av en overflatemarkør, for eksempel CD69, i forbindelse med andre subpopulasjoner, for eksempel ved hjelp av (for eksempel CD4<+>og/eller CD8<+>og/eller CD19<+>og/eller CD56<+>) subpopulasjoner.
Stimuleringsindeksen (aktiveringsindeksen) følger forholdet mellom antallet celler som bærer overflatemarkøren eller markørene før og etter stimuleringen. En stimuleringsindeks som når minst 10 ganger, maksimum 100 ganger, av den ikke-stimulerte kontrollprøven, er et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering til sykdommen. Cellene som bærer overflate-markørene kan bestemmes ved konvensjonelle fremgangsmåter, for eksempel Western blot, ELISA, RIA, FACS, LSC, osv.
For å bestemme hvilke celler som bærer overflatemarkørene, separeres de fortrinnsvis fra cellene som ikke bærer noen overflatemarkører, eller bærer andre overflate-markører, ved hjelp av karakteristiske celletrekk.
I følge den diagnostiske fremgangsmåten blir cellene som bærer overflatemarkørene separert fra cellene som ikke bærer overflatemarkører ved hjelp av antistoffer mot de(n) ønskede overflatemarkøren(e). Antistoffer passende for dette formål kan være monoklonale, polyklonale eller syntetiske antistoffer eller fragmenter derav. I den forbindelse betyr utrykket "fragment" alle delene av et monoklonalt antistoff (for eksempel Fab, Fv eller enkeltkjedete Fv fragmenter) som har en epitop som er spesifikt den samme som den til det konkurrerende antistoffet. Produksjonen av slike fragmenter er kjent for fagmannen, og mange antistoffer rettet mot overflatemarkører er også kommersielt tilgjengelige.
Antistoffet eller antistoffene spesifikke for overflatemarkørene kan være bundet til magnetiske partikler, for eksempel paramagnetiske perler (for eksempel tilgjengelige fra DYNAL AS, postboks 158 Skøyen, N-0212 Oslo, Norge), som tillater at celler med de korresponderende overflatemarkørene kan separeres via immunmagnetisk separasjon ifølge de gjeldende fremgangsmåter.
Stimuleringsindeksen kan så spesifiseres ved bestemmelse av mengden celler separert ved den ønskelige overflatemarkøren, basert på dens nukleinsyreinnhold og/eller proteininnhold ved bruk av gjeldende fremgangsmåter, for eksempel etter lysering av cellene ved spektralfotometrisk bestemmelse av nukleinsyre- eller proteininnhold, eller etter farging av nukleinsyrene ved bruk av spesifikke fargestoffer, for eksempel etidiumbromid, propidiumjod, acridin oransje, DAPI, osv, ved fotometrisk kvantifisering. Antallet celler kan beregnes fra protein- og/eller nukleinsyreinnholdet i prøven ved hjelp av kalibreringskurver.
Den foreliggende oppfinnelse vedrører også et kitt for diagnostisering av Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen, kjennetegnet ved at kittet inneholder de følgende bestanddeler:
(a) en PWM for mitogen stimulering; og
(b) minst et antistoff rettet mot CD69 overflatemarkør uttrykt etter mitogen stimulering.
I en utførelse inneholder kittet også en anti-koagulerende forbindelse, og/eller en buffer for cellelysering.
I en utførelse er antistoffet bundet til en magnetisk partikkel.
I en utførelse inneholder kittet et anti-CD4 og/eller anti-CD8 antistoff.
Kittet kan inneholde
(a) minst en reaksjonsbeholder
(b) en anti-koaguleringsforbindelse og/eller en buffer for cellelysing; (c) en buffer for å fiksere cellene; (d) substanser nødvendige for kvantifiseringen av DNA og/eller protein konsentrasjonen, og tilberedte løsninger for produksjon av en kalibreringskurve; (e) en magnet for å separere cellene bundet til de magnetiske partiklene (tilstedeværende dersom det anvendes et antistoff bundet til en magnetisk partikkel); og (f) en reagens for å fjerne bundne magnetiske partikler (tilstedeværende dersom det anvendes et antistoff bunden til en magnetisk partikkel).
Til slutt kan kittet foreligge i en kombinasjon med en eller flere passende andre deteksjonsmidler, for eksempel fluorescenskoblet primære antistoffer, sekundære antistoffer, deteksjonsmidler for proteiner og/eller nukleinsyrer, for eksempel intercalaterende fargestoff, osv.
Eksempel
Bestemmelse av den mitogene stimuleringsindeksen ved hjelp av CD69 i pasienter som lider av Alzheimers sykdom.
Bestemmelse av de karakteristiske trekk som til nå er kjent for Alzheimers sykdom, som kan utføres på levende pasienter (biomarkører), viser bare utilstrekkelig sensitivitet og spesifisitet, eller er uegnet for undersøkelser av store antall tilfeller pga. kostnadene eller et svært komplisert prøvearrangement. Med kliniske metoder er den diagnostiske sikkerheten bare 80 % til 90 % og vanskelig særlig i de tidlige stadiene av sykdommen når det gjelder diagnostisk differensiering. Påvising av preklinisk sykdomsstadier er for tiden ikke mulig grunnet mangel på en passende biomarkør.
De nervedegenerative forandringene er basert på forstyrrede prosesser i den intracellulære frembringelse av trofiske og mitogene signaler når det gjelder Alzheimers sykdom. Disse dysfunksjonene av den intracellulære signalformidlingen er ikke begrenset til nervesystemet. De kan på lignende vis også finnes på hudceller og lymfocytter i det periferale blodet til disse pasientene. Pga. deres sykdomsspesifisitet er denne endringen av diagnostisk verdi og velegnet som biomarkør.
I eksempelet nedenfor ble spørsmålet om der finnes en dysfunksjon som er typisk for Alzheimers sykdom i den intracellulære formidlingen av tropiske og mitogene signaler bestemt ved immunmagnetisk celleseparering av lymfocytter som oppviser CD69 før og etter mitogen stimulering.
Blodet er innsamlet ved venøs punksjon ved bruk av et blodtakersystem fra SARSTEDT selskapet. Blodet blir da stabilisert i løpet av blodtakingen ved hjelp av anti-koagulanter som er integrert i bloduttrekkingssystemet, så som natriumcitrat eller natriumheparin. I denne form kan blodet lagres ved romtemperatur i 24 til 48 timer. Stimuleringseksperimentene ble utført i reaksjonsbeholdere som kan luftes godt ut, så som en 24-brønns suspensjonskulturplate fra selskapet Greiner bio-one. Til dette formål ble mitogenene fytohemagglutinin (PHA), protein A og kermesbær mitogen (pokeweed mitogen PWM) anvendt separat eller i forskjellige kombinasjoner for hver av 400 ul stabilisert helblod. De endelige konsentrasjonene av de respektive mitogenene var innenfor den fysiologiske rammen, og var 12 ug/ml for PHA, 50 ug/ml for protein A og 4 ug/ml for PWM i dette eksempelet. Stimuleringen ble utført under fysiologiske forhold ved 37°C og en CO2konsentrasjon på 5 % i en gassholdig inkubator i 4 timer. 100ul av hver av de stimulerte helblodprøvene ble innkubert med forskjellige antistoffovertrukne magnetiske partikler. I dette eksempelet ble det anvendt anti-CD4 og anti-CD8 overtrukne magnetiske partikler fra DYNAL selskapet. De korresponderende magnetiske partiklene ble tilsatt de bestemte prøvene i overskudd (10 ul magnetisk partikkelsuspensjon) for å sikre en total isolering av den korresponderende lymfocytt subpopulasjonen. Etter en inkubasjonstid på 30 minutter ved 4°C ble den korresponderende lymfocytt subpopulasjonen separert magnetisk, og etter påfølgende vasketrinn konvertert inn i 100 ul av et definert medium, i dette eksempelet RPMI1640 blandet med 1 % foetalt kalveserum (featal calf serum, FCS). De bundne magnetiske partiklene ble fjernet i dette eksempelet ved bruk av 10 ul DETACHaBEAD per prøve fra DYNAL selskapet. Etterfølgende en inkubasjonstid på 45 minutter ved romtemperatur ble de fjernede magnetiske partiklene separert og cellesuspensjonen ble tatt opp i et definert medium, i dette tilfelle RPMI1640, etter flere vasketrinn. Ved tilsetning av en spesifikk lysingsbuffer ble cellene brutt åpne, og DNAet ble merket med spesifikke DNA fargestoffer, så som etidiumbromid, propidiumjod, acridin oransje eller DAPI, og deretter kvantifisert fotometrisk. Proteininnholdet i prøvene ble sammenlignet ved hjelp av proteinbestemmelses-fremgangsmåten til Bradford. Celletallet ble beregnet fra DNA- og/eller proteininnholdet i prøven ved hjelp av kalibreringskurver. Denne prosedyren muliggjorde en direkte konklusjon om antallet celler. Beregningen av andelen fra antallet CDC69 fremvisende celler før og etter mitogen stimulering (stimuleringsindeks) gav informasjon om forandringer i den mitogene stimulerbarheten til disse cellene.
En stimuleringsindeks som når minst 10 ganger, maksimum 100 ganger, av den ikke-stimulerte kontrollprøven, er et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen. En stimuleringsindeks på mindre enn 10 ganger av den ikke-stimulerte kontrollprøven er ikke et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen.
I et annet eksperiment ble proteininnholdet til prøven bestemt og DNA innholdet ble bestemt uten tilføring av DNA-fargende substanser for kvantifisering av de CD69 fremvisende cellene. I dette tilfellet målte man absorberingen av lys som har en gitt bølgelengde (det vil si 260 nm eller 280 nm) for DNA eller protein.
Claims (9)
1. En fremgangsmåte for å diagnostisere sykdom, eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen, ved hjelp av en pasients blodprøve,karakterisert vedat fremgangsmåten omfatter trinnene: (d) mitogen stimulering av lymfocyttene i prøven med PWM; (e) kvantifisering av de mitogen stimulerte cellene i cellepopulasjonen før og etter trinn (a) ved hjelp av CD69 overflatemarkører uttrykt etter mitogen stimulering, hvor cellene som bærer CD69 overflatemarkørene separeres fra cellene som ikke bærer CD69 overflatemarkører ved bruk av antistoffer rettet mot CD69 overflatemarkørene; og (f) bestemmelse av stimuleringsindeksen som et forhold mellom antallet celler
som bærer CD69 overflatemarkøren før og etter trinn (a),
hvor en stimuleringsindeks som når minst 10 ganger, maksimum 100 ganger, av den ikke-stimulerte kontrollprøven, er et tegn på Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen.
2. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1,karakterisert vedat CD69<+>cellene er videre spesifisert i henhold til CD4<+>og/eller CD8<+>subpopulasjoner.
3. Fremgangsmåte i samsvar med et eller flere av krav 1 eller 2,karakterisert vedat blodet stabiliseres av én eller flere anti-koagulerende forbindelser før trinn (a).
4. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1,karakterisert vedat antistoffene i trinn (b) er bundet til magnetiske artikler, og separeringen er utført ved immunmagnetisk separering.
5. Fremgangsmåte i samsvar med et eller flere av krav 1 til 4,karakterisert vedat stimuleringsindeksen blir fastslått ved bestemmelse av proteininnholdet og/eller nukleinsyreinnholdet til cellene som bærer overflate-markører før og etter trinn (a).
6. Et kitt for diagnostisering av Alzheimers sykdom eller et tidlig stadium derav, eller en predisponering for denne sykdommen,karakterisert vedat kittet inneholder de følgende bestanddeler: (c) en PWM for mitogen stimulering; og (d) minst et antistoff rettet mot CD69 overflatemarkør uttrykt etter mitogen stimulering.
7. Kitt i samsvar med krav 6,karakterisert vedat det også inneholder: (e) en anti-koagulerende forbindelse; og/eller (f) en buffer for cellelysering.
8. Kitt i samsvar med krav 6 eller 7,karakterisert vedat antistoffet er et antistoff bundet til en magnetisk partikkel.
9. Kitt i samsvar med et av kravene 6 til 8,karakterisert vedat det også inneholder et anti-CD4 og/eller anti-CD8 antistoff.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10349162A DE10349162A1 (de) | 2003-10-22 | 2003-10-22 | Schnelltest zur Diagnose der Alzheimerschen Erkrankung |
| PCT/EP2004/010889 WO2005050219A1 (de) | 2003-10-22 | 2004-09-29 | Schnelltest zur diagnose der alzheimerschen erkrankung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20061758L NO20061758L (no) | 2006-07-06 |
| NO335704B1 true NO335704B1 (no) | 2015-01-26 |
Family
ID=34529710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20061758A NO335704B1 (no) | 2003-10-22 | 2006-04-20 | Hurtigtest og kitt for diagnose av Alzheimers sykdom. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20070218497A1 (no) |
| EP (1) | EP1685408A1 (no) |
| JP (1) | JP2007509331A (no) |
| KR (1) | KR101138343B1 (no) |
| CN (1) | CN1871519A (no) |
| AU (1) | AU2004290789B2 (no) |
| BR (1) | BRPI0415212A (no) |
| CA (1) | CA2540841A1 (no) |
| DE (1) | DE10349162A1 (no) |
| IL (1) | IL175004A0 (no) |
| NO (1) | NO335704B1 (no) |
| RS (2) | RS52875B (no) |
| RU (1) | RU2426130C2 (no) |
| WO (1) | WO2005050219A1 (no) |
| ZA (1) | ZA200603178B (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1876449A1 (en) * | 2006-07-07 | 2008-01-09 | Universität Leipzig | Cell cycle-based blood test to diagnose Alzheimer's disease |
| DK2389582T3 (en) * | 2009-01-20 | 2016-07-18 | Cambridge Entpr Ltd | Methods for prognosis of the risk of autoimmune diseases |
| GB201212084D0 (en) * | 2012-07-06 | 2012-08-22 | Randox Lab Ltd | Tropomyosin isoforms related to alzheimers disease and mild cognitive impairment |
| EP3011336A4 (en) * | 2013-06-20 | 2017-01-04 | Amarantus Bioscience Holdings Inc. | Methods, systems, and composition related to neural disorders |
| CN106885909B (zh) * | 2017-01-19 | 2018-11-20 | 上海市东方医院 | 一种用于早期诊断阿尔茨海默病的试剂盒 |
| AU2018230686B2 (en) * | 2017-03-06 | 2024-10-03 | Talaris Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for determining the potency of a therapeutic cellular composition |
| BR112022000322A2 (pt) * | 2019-07-10 | 2022-02-22 | Todos Medical Ltd | Um biomarcador para doença de alzheimer com o uso de amostras de sangue de indivíduos clinicamente diagnosticados com doença de alzheimer |
| CN117210549A (zh) * | 2023-08-29 | 2023-12-12 | 河络新图生物科技(上海)有限公司 | 检测人atp5d、cd69和cxcr4基因的物质及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19936035C2 (de) * | 1999-07-30 | 2002-11-21 | Univ Leipzig | Lymphozytenproliferationstestkit |
| US20020081635A1 (en) * | 2000-05-11 | 2002-06-27 | Thomas Terry E. | Novel antibody compositions for preparing enriched T cell preparations |
-
2003
- 2003-10-22 DE DE10349162A patent/DE10349162A1/de not_active Ceased
-
2004
- 2004-09-29 EP EP04765688A patent/EP1685408A1/de not_active Ceased
- 2004-09-29 US US10/576,142 patent/US20070218497A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 RS RS20060255A patent/RS52875B/en unknown
- 2004-09-29 RS YUP-2006/0255A patent/RS20060255A/sr unknown
- 2004-09-29 BR BRPI0415212-3A patent/BRPI0415212A/pt not_active Application Discontinuation
- 2004-09-29 CN CNA2004800310040A patent/CN1871519A/zh active Pending
- 2004-09-29 AU AU2004290789A patent/AU2004290789B2/en not_active Ceased
- 2004-09-29 CA CA002540841A patent/CA2540841A1/en not_active Abandoned
- 2004-09-29 RU RU2006112203/10A patent/RU2426130C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-09-29 KR KR1020067009613A patent/KR101138343B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2004-09-29 WO PCT/EP2004/010889 patent/WO2005050219A1/de active Application Filing
- 2004-09-29 JP JP2006535981A patent/JP2007509331A/ja active Pending
-
2006
- 2006-04-11 IL IL175004A patent/IL175004A0/en active IP Right Grant
- 2006-04-20 NO NO20061758A patent/NO335704B1/no not_active IP Right Cessation
- 2006-04-20 ZA ZA200603178A patent/ZA200603178B/xx unknown
-
2014
- 2014-07-09 US US14/326,520 patent/US20150079609A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2004290789B2 (en) | 2010-01-21 |
| JP2007509331A (ja) | 2007-04-12 |
| NO20061758L (no) | 2006-07-06 |
| BRPI0415212A (pt) | 2006-12-05 |
| AU2004290789A1 (en) | 2005-06-02 |
| ZA200603178B (en) | 2007-07-25 |
| EP1685408A1 (de) | 2006-08-02 |
| CA2540841A1 (en) | 2005-06-02 |
| US20070218497A1 (en) | 2007-09-20 |
| KR20060100423A (ko) | 2006-09-20 |
| RS52875B (en) | 2013-12-31 |
| RU2426130C2 (ru) | 2011-08-10 |
| WO2005050219A1 (de) | 2005-06-02 |
| US20150079609A1 (en) | 2015-03-19 |
| RS20060255A (en) | 2008-09-29 |
| RU2006112203A (ru) | 2007-11-27 |
| DE10349162A1 (de) | 2005-06-02 |
| IL175004A0 (en) | 2006-08-20 |
| CN1871519A (zh) | 2006-11-29 |
| KR101138343B1 (ko) | 2012-04-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO335704B1 (no) | Hurtigtest og kitt for diagnose av Alzheimers sykdom. | |
| NZ513005A (en) | Method for diagnosing and distinguishing stroke | |
| EP2673644A1 (en) | Methods for diagnosing systemic lupus erythematosus | |
| US11726100B2 (en) | Method of treating large vessel occlusion stroke | |
| CN109073654A (zh) | 用于预测早产的方法和组合物 | |
| US10191048B2 (en) | Fluorometric immunoassay for detection of anti-dsDNA antibodies | |
| Laurino et al. | An immunoassay for anti-neuronal antibodies associated with involuntary repetitive movement disorders | |
| CN110988351B (zh) | 血管细胞黏附分子在制备抑郁症诊断治疗相关产品的用途 | |
| RU2697395C1 (ru) | Способ прогнозирования идиопатического бесплодия мужчин | |
| US20220170908A1 (en) | Compositions and methods for characterizing and treating alzheimers disease | |
| US20200209242A1 (en) | Cancer diagnosis using ki-67 | |
| Ravindran et al. | β‐thalassaemia carrier detection by ELISA: A simple screening strategy for developing countries | |
| RU2803276C1 (ru) | Способ прогнозирования когнитивных нарушений у пациентов с сотрясением головного мозга и ушибом головного мозга лёгкой степени тяжести | |
| CN117741154B (zh) | 用于认知障碍检测的生物标志物组合及应用 | |
| MXPA06004451A (en) | Quick test for the diagnosis of alzheimer'disease | |
| Godbole et al. | Role of C-reactive protein (CRP) in determining neonatal infections | |
| Brown et al. | The Day phenotype: a “new” variant in the Kell blood group system | |
| Wolf et al. | Laboratory approaches for reproductive failure: immunological biomarkers for reproductive failures | |
| CN116970693A (zh) | 作为早老性痴呆诊断标志物的ddit4l剪切产物 | |
| CN118534130A (zh) | 一种用于脓毒症判别的单核细胞cd39检测试剂盒 | |
| Miseta et al. | 59th National Congress of the Hungarian Society of Laboratory Medicine | |
| Blanckaert et al. | 16th National Symposium of The Belgian Society of Clinical Biology | |
| Godbole et al. | White Paper 02: Role of C-reactive protein (CRP) in determining neonatal infections; Published in: International Journal of Clinical Biochemistry and Research, Volume 6 (2019) Page 294–298 | |
| WO2000063231A1 (en) | Lymphocyte platelet binding factor as a serum marker for cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |