NO332461B1 - Peptider og peptidomimetika med antiproliferativ aktivitet og/eller som forbedrer nukleinsyreskadende midler eller behandlinger. - Google Patents

Peptider og peptidomimetika med antiproliferativ aktivitet og/eller som forbedrer nukleinsyreskadende midler eller behandlinger. Download PDF

Info

Publication number
NO332461B1
NO332461B1 NO20043381A NO20043381A NO332461B1 NO 332461 B1 NO332461 B1 NO 332461B1 NO 20043381 A NO20043381 A NO 20043381A NO 20043381 A NO20043381 A NO 20043381A NO 332461 B1 NO332461 B1 NO 332461B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
arg
cell
ser
phe
seq
Prior art date
Application number
NO20043381A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20043381L (no
Inventor
Takumi Kawabe
Hidetaka Kobayashi
Original Assignee
Canbas Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Publication of NO20043381L publication Critical patent/NO20043381L/no
Application filed by Canbas Co Ltd filed Critical Canbas Co Ltd
Publication of NO332461B1 publication Critical patent/NO332461B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Peptider og peptidomimetika for behandling av celleproliferative lidelser assosiert med benigne og malignante tumorceller. G2 cellesyklus kontrollpunkt.

Description

TEKNISK OMRÅDE
Foreliggende oppfinnelse angår forbindelser inkludert peptider og peptiddomimetika med anti-celle proliferativ aktivitet alene, og i kombinasjon med behandlinger som enten direkte eller indirekte skader nukleinsyre (for eksempel DNA). Oppfinnelsens forbindelser er derfor nyttige for inhibering av celleproliferering og, som sådanne, for behandling av celleproliferative lidelser, inkludert cancer. Spesielt er oppfinnelsens forbindelser nyttige ved behandling av metastatiske og ikke-metastatiske faste eller flytende tumorer.
BAKGRUNN
Cellesyklusen omfatter S-fasen (DNA replikasjon), M-fasen (mitose) og to gap-faser (Gl - og G2-fasene) mellom S- og M-fasene. Kontrollpunkter i cellesyklusen sikrer nøyaktig progresjon som overvåking av tilstanden av DNA-integritet, DNA-replikasjon, cellestørrelse og den omgivende omgivelse (Maller, J.L. Curr. Opin. Cell Biol., 3:26
(1991)). Det er spesielt viktig for multicellulære organismer å opprettholde integritet av genomet og det er et antall kontrollpunkter som overvåker genomtilstanden. Blant disse eksisterer Gl - og G2-kontrollpunktene før DNA-replikasjonen henholdsvis mitose. Det er av avgjørende betydning å korrigere DNA-skade før man går inn i S-fasen, fordi når først skadet DNA replikeres, gir dette ofte opphav til mutasjoner (Hartwell, L. Cell, 7il: 543 (1992)). Progresjon gjennom Gl - og G2-kontrollpunktene uten å reparere utstrakt DNA-skade, induserer apoptose og/eller katastrofe.
De fleste cancerceller bærer abnormaliteter i Gl kontrollpunkt-relaterte proteiner som p53, Rb, MDM-2, pl6<mK4>og pl9<ARF>(Levine, AJ. Cell, 88: 323 (1997)). Alternativt kan mutasjoner forårsake overekspresjon og/eller aktivering av onkogene produkter, for eksempel Ras, MDM-2 og cyklin D, som reduserer stringensen av Gl kontrollpunktet.
I tillegg til disse mutasjoner kan overskytende vekstfaktorsignalering forårsakes av overekspresjonen av vekstfaktorer og kan redusere stringensen av Gl-kontrollpunktet. Sammen med tap- og vinst-av-funksjon-mutasjoner kan kontinuerlig aktivering av vekstfaktorreseptorer eller nedstrøms signaltransduserende molekyler forårsake celletransformasjon ved å overstyre Gl-kontrollpunktet. Abrogert Gl-kontrollpunkt bidrar til høyere mutasjonsgrader og de mange mutasjoner som observeres i cancerceller. Som et resultat avhenger de fleste cancerceller av G2-kontrollpunktet for overlevelse mot for stor DNA-skade (0'Connor og Fan, Prog. Cell Cycle Res., 2:165
(1996)).
Mekanismen som fremmer cellesyklus G2-stans etter DNA-skade antas å være bevart blant speciene fra gjær til menneske. I nærvær av skadet DNA holdes Cdc2/Cyklin B kinase inaktiv på grunn av det inhibitoriske fosforylering av treonin-14- og tyrosin-15-restene på Cdc2 kinase eller proteinnivået av Cyklin B reduseres. Ved starten av mitosen fjerner dualfosfatase Cdc25 disse inhibitoriske fosfater og aktiverer derved Cdc2/Cyklin B kinase. Aktiveringen av Cdc2/Cyklin B er ekvivalent med start av M-fasen.
I fisjonsgjær er proteinkinase Chkl påkrevet for cellesyklusstans som respons på skadet DNA. Chkl kinase virker nedstrøms flere radgenprodukter og modifiseres ved fosforylerering ved DNA-skade. Kinasene Rad53 av spirende gjær og Cdsl av fisjonsgjær er kjent for å lede signaler fra ikke-replikert DNA. Det synes som om det er en viss redundans mellom Chkl og Cdsl på grunn av at elimineringen av både Chkl og Cdsl kulminerte i disrupsjon av G2-stansen indusert av skadet DNA. Interessant er at både Chkl og Cdsl fosforylert Cdc25 og fremmer Rad24 binding til Cdc25 som sekvesterer Cdc25 til cytosol og forhindrer Cdc2/Cylin B aktivering. Derfor synes Cdc25 å være et felles mål for disse kinaser, noe som implikerer at dette molekylet er en uomgjengelig faktor i G2-kontrollpunktet.
WO 0121771 beskriver sammensetninger for behandling av cellevekstforstyrrelser slik som cancer. Spesifikt blir et isoloert eller rekombinant polypeptid på opp til 11 aminosyrer beskrevet. Disse peptidene forstyrrer G2 cellesyklus kontrollpunktet som fører til at kreftcellen blir mer mottakelig for et DNA ødeleggende middel.
Hos mennesker forforylerer både hChkl, en human homolog av fisjonsgjær Chkl, og Chk2/HuCdsl, en human homolog av den spirende gjær Rad53 og fisjonsgjæren Cdsl, Cdc25C ved serin-216, et kritisk, regulatorisk sete, som respons til DNA-skade. Fosforyleringen skaper et bindingssete for små, sure proteiner 14-3-3s, humanhomologer av Rad24 og Rad25 av fisjonsgjær. Den regulatoriske rolle for denne fosforylering ble tidlig antydet med det faktum at substitusjonen av serin-216 til alanin på Cdc25C disrupterte cellesyklus G2-stans i humane celler. Imidlertid var mekanismen for G2-kontrollpunktet ikke fullt forstått.
OPPSUMMERING
I henhold til oppfinnelsen tilveiebringes det peptider og peptidomimetika som spesifisert i kravene med en eller flere aktiviteter for inhibering av celleproliferering, stimulering av apoptose eller katastrofe, eller behandling av uønsket celleproliferering eller -overlevelse, som karakteriseres ved en celleproliferativ lidelse.
Foreliggende oppfinnelse omfatter sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens, kjennetegnet ved at den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:2);
P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:4);
P6,P5,P4,P3,P2,Pl, P7,P8,P9,P10,Pil, P12 (SEKIDNO:7);
P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, P11, P10, P9, P8, P7 (SEKID NO:8);
P7, P8, P9, P10, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO: 10);
P12, Pli, P10, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:12);
hvori
Pl er Cha;
P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F), Bpa eller Phe4N02;
P3 er en hvilken som helst aminosyre;
P4 erTrp;
P5 er en hvilken som helst aminosyre;
P6 er Bpa eller Phe4N02; og
hvori minst tre av P7, P8, P9, P10, Pl 1 og P12 er basiske aminosyrer og resten er hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også et kit (sett), kjennetegnet ved
at det omfatter peptid- eller den peptidomimetisk sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17 og instruksjoner for dets bruk.
Videre omfatter foreliggende oppfinnelse in vitro fremgangsmåte for inhibering av proliferering av en celle, kjenntegnet ved at den omfatter å bringe en celle i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17, tilstrekkelig til å inhibere proliferering av cellen, hvori nevnte celle ikke er en human embryonisk celle.
Omfattet av foreliggende oppfinnelse er også anvendelse av en mengde av et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17, som er effektiv i å behandle celleproliferativ lidelse, for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning for behandling av celleproliferativ lidelse.
I en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen, den følgende struktur: Pl, P2,P3,P4,P5,P6(SEKIDNO:l)ellerP6,P5', P4,P3,P2,P1 (SEKIDNO:2). Pl er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe^CF3), en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (f.eks. Tyr eller Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin- eller quinazolingruppe i sidekjeden; P2 er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4N02, en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (f.eks. Tyr eller Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrirnidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin-, eller quinazolingrupper i sidekjeden, P3, P4 og P5 er en hvilken som helst aminosyre (f.eks. P4 er Trp), eller der en eller flere av P3, P4 og P5 er en enkel karbonkjede (f.eks. 11-arninoundecansyre, 10-aminodecansyre, 9-aminononansyre, 8-aminokaprylsyre, 7-aminoheptansyre, 6-aminokapronsyre, eller en tilsvarende struktur med en eller flere umettede karbonbindinger) slik at avstanden mellom P2 og P6 er omtrent den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer; og P6 er Bpa, Phe4N02, en hvilken som helst aminosyre og Tyr (for eksempel Ser-Tyr), enhver aminosyre og Phe (for eksempel Ser-Phe), en hvilken som helst aminosyre eller ingenting.
I en annen utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen, den følgende struktur: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:3); P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKEDNO:4); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK IDNO:5); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEK IDNO:6); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKID NO:7); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, PU, PIO, P9, P8, P7 (SEKIDNO:8); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEKID NO:9); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ED NO: 10); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEKIDNO:l 1); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:12); P12, Pil, P6, P9, P8, P7, P2, Pl (SEK ID NO:13); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4,P7,P2,P1 (SEKIDNO:14);Pl, P2,P7,P8,P9,P6,Pil, P12(SEKIDNO:15);ellerPl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO: 16). Pl er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4N02, en aminosyre som opptar en tilsvarende sidekjede (for eksempel d- eller 1-Tyr, d- eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrirnidin-gruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin-, eller quinazolin-grappe i sidekjeden; P2 er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe- 3,4,5F), (Phe-4CF3), eller en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel Tyr eller Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrirnidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin-, quinazolingruppe i sidekjeden; P3, P4, P5 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel P4 er Tip), eller en eller flere av P3, P4, P5 er en enkelt karbonkjede (for eksempel 11-aminoundecansyre, 10-aminodecansyre, 9-aminononansyre, 8-aminocaprylsyre, 7-arninoheptansyre, 6-aminocapronsyre, eller en tilsvarende struktur med en eller flere umettede karbonbindinger) slik at avstanden mellom P2 og P6 er omtrent den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer, P6 er Bpa, Phe4N02, en hvilken som helst aminosyre og Tyr (for eksempel Ser-Tyr), en hvilken som helst aminosyre og Phe (for eksempel Ser-Phe); og minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 er basiske aminosyrer der resten er en hvilken som helst aminosyre eller er fraværende.
I nok en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen, den følgende struktur: P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO: 17); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, P1(SEK ID NO: 18); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, P1(SEK ED NO:19); eller P1, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID N0:20). Pl er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Ph&4CF3), Bpa, Phe4N02, en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom, eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin- eller quinazolin- gruppen i sidekjeden; P2 er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel Tyr eller Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, kroman-, quinoksalin-, quinazolingruppe i sidekjeden; P3, P4, P5 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel P4 er Trp), eller en eller flere av P3, P4, P5 er en enkelt karbonkjede (feks. arninoundecansyre eller 8-aminokaprylsyre) slik at avstanden mellom P2 og P6 er rundt den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer, P6 er Bpa, Phe4N02, en hvilken som helst aminosyre og Tyr (for eksempel Ser-Tyr), en hvilken som helst aminosyre og Phe (for eksempel Ser-Phe), en hvilken som helst aminosyre, eller ingenting; og minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 er basiske aminosyrer der resten er en hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
I en ytterligere utførelsesform inkluderer en kontinuerlig peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen, den følgende struktur Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:21) eller P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:22). Pl er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Pho4CF3), Bpa, Phe4N02, Tyr, eller Phe; P2 er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe-4CF3), Bpa, Phe4N02, Tyr, eller Phe; P3 er Ser, Arg, Cys, Pro, eller Asn; P4 er Trp; P5 er Ser, Arg, eller Asn; eller P3, P4, P5 er en enkel aminoundecansyre eller en enkelt 8-aminocaprylsyre; og P6 er Bpa, Phe4N02, (Ser-Tyr), eller (Ser-Phe).
I nok en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptictomimetisk sekvens også bekrevet i beskrivelsen, den følgende struktur Pl, P2,P3,P4,P5,P6,P7,P8,P9,P10,P11, P12 (SEK ID NO:23); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEK ID NO:24); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKID NO:25); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEK ID NO:26); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:27); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:28); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID N0:29); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5,P4, P3, P2, Pl (SEK ID N0:30); P12, PU, P6, P9J?8, P7, P2, Pl (SEK ID NO:31); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl (SEK ID NO:32); Pl, P2, P7, P8, P9, P6, Pil, P12 (SEK ID NO:33); eUer Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:34). Pl er Cha, Nal(2), (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Ph&4CF3), Bpa, Phe4N02, Tyr, eller Phe; P2 er Cha, Nal(2), (Phe-23,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Ph&4CF3), Bpa, Phe4N02, Tyr, eller Phe; P3 er Ser, Arg, Cys, Pro, eller Asn; P4 er Trp; P5 er Ser, Arg, eUer Asn; eller P3, P4, P5 er en enkelt aminoundekansyre eller en enkelt 8-aminokaprylsyre; P6 er Bpa, Phe4N02, (d-Ser-d-Tyr), eller (d-Ser-d-Phe); og minst Ire av P7, P8, P9, PIO, PU, P12 er Arg eller Lys der resten er en hvilken som helst aminosyre eller er fraværende.
I nok en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også bekrevet i beskrivelsen, den følgende struktur Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKID NO:35); P12, PU, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKID N0:36); P12, PU, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl (SEK ID N0:37); eller Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:38). Pl er Cha, eller Nal(2); P2 er (Phe-23,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F), (Phe^lCF3); P3 er Ser, P4 er Trp; P5 er Ser eller Asn; P6 er Bpa, Phe4N02, (Ser-Tyr), eller (Ser-Phe); og minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 er Arg der resten er en hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
I ennå en ytterligere utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også bekrevet i beskrivelsen, den følgende struktur Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:39) eller P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:40). Pl er Cha, eller Nal(2); P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F) eller (Ph&4CF3); P3 er Ser, P4 er Trp, P5 er Ser, og P6 er Bpa, eller (Ser-Tyr).
I ennå en ytterligere utførelsesform omfatter en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også bekrevet i beskrivelsen, den følgende struktur Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:41); P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKID NO:42); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12
(SEK ID NO:43); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEK ID NO:44); P6, P5, P4, P3,P2,P1, P7,P8,P9,P10,P11, P12(SEKIDNO:45);P6,P5,P4,P3,P2,Pl,P12,Pll, PIO, P9, P8, P7 (SEKED NO:46); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEKID NO:47); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKID NO:48); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEKID NO:49); P12, Pil, PIO, P9J?8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK IDNO:50);P12,P11, P6, P9, P8, P7, P2, Pl (SEKIDN0:51);P12,P11, P10,P6,P9,P4,P7,P2, Pl (SEK IDNO:52); P1, P2, P7, P8, P9, P6, Pil, P12 (SEK ID NO:53); eller P1, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:54). Pl er Cha, eller Nal(2); P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F), (Phe-3,4,5F)
(Phe-4CF3); P3 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel Ser, eller Pro); P4 er d- eller 1-Trp; P5 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel Ser, eller Pro); P6 er Bpa eller (Ser-Tyr); P7 er Arg; P8 er Arg; P9 er Arg; PIO er Gin eller Arg; Pl 1 er Arg; og P12 er d- eller 1-Arg.
I ytterligere utførelsesformer inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidometisk sekvens også bekrevet i beskrivelsen, den følgende struktur: Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:55); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:56); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl (SEKID NO:57); eller P1, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pli, P12 (SEKIDN0:58). Pl erChaellerNal(2);P2er(Phe-2,3,4,5,6-F);P3 er Ser, P4 er Trp; P5 er Ser, P6 er Bpa eller (Ser-Tyr); P7 er Arg; P8 er Arg; P9 er Arg; P10 erGln eller Arg; Pl 1 erArg;ogP12 er Arg.
Sammenhengende peptid- eller peptidometisk sekvens kan ha den følgende struktur (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)
(d-Phe-2,3,4,5,6-FX d-Cha)( d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:99); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)( d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-23,4,5,6-F)
(d-Cha) (SEK ID NO: 100); (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-SerXd-Phe-23,4,5,6-F)( dCha)( d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:59); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-23,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID N0:60); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)( d-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:61); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser) (d-Trp)(d-Ser)(d-BrÆ)(SEKIDNO:62);(d-Cha)(d-Phe-23,4,5,6-F) (d-SerXd-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:63); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-SerX d-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (SEK ID NO:64); (d-Arg)
(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-TrpXd-Ser) (d-Bpa)
(SEKIDNO:65); (d-Cha) (d-Phe-23,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Arg) (d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:66); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID N0:67); (d-Bpa) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4^,6-F)(dCha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(SEKIDNO:68);
(d-ArgXd-ArgXd-Bra)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg) (d-Phe-23,4,5,6-F) (d-Cha) (SEKIDNO:69); (d-Cha)
(d-Ph&-23,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-ArgX d-Arg) (SEK ID NO:70); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-23,4,5,6-F)(d-Cha) (SEKK) N0:71); (d-Cha)
(d-Phe-23,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:72); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID N0:73); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEKIDNO:74); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-FXd-Cha) (SEK ID NO:75); eller (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:76); (d-BpaXd-SerXd-TrpXd-Ser)(d-Phe-23,4,5,6-F) (dCha)(d-Arg) (d-ArgXd-ArgXd-<jlnXd-Arg)(d-Arg) (SEKIDNO:77).
I ytterligere aspekter inkluderer peptider og peptidomimetiske sekvenser en eller flere 1-type- eller d-type rester, en d-rest substituert med 1-rest; eller en 1-rest substituert med en d-rest
Peptider og peptidomimetiske sekvenser inkluderer en eller flere av de følgende aktiviteter inhiberer proliferering av en celle; abrogerer cellesyklus G2 kontrollpunkter for en celle; stimulerer apoptose av en celle; stimulerer katastrofe av en celle.
Peptider og peptidomimetiske sekvenser inkluderer en sekvens som har en lengde på fra rundt 6 til rundt 12,10 til rundt 20,18 til rundt 25,25 til rundt 100,25 til rundt 200, eller 50 til rundt 300 rester i lengde.
Videre tilveiebringes det preparater som inkluderer peptider og peptidomimetiske sekvenser ifølge oppfinnelsen. I en utførelsesform inkluderer et preparat et peptid eller en peptiddomimetisk sekvens og et nukleinsyreskadende middel. I en annen utførelsesform inkluderer et preparat et peptid eller peptiddomimetisk sekvens og et antiproliferativt middel. I en ytterligere utførelsesform inkluderer et preparat en farmasøytisk akseptabel bærer eller eksipient og et peptid eller en peptidomimetisk sekvens og eventuelt et nukleinskadende middel eller et antiproliferativt middel.
I tillegg tilveiebringes det et sett som inkluderer peptider og peptidomimetiske sekvenser ifølge oppfinnelsen, eventuelt i kombinasjon med en nukleinsyreskadende behandling (for eksempel et nukleinsyreskadende middel) eller et proliferativt middel. I en utførelsesform inkluderer et sett peptid eller peptidomimetisk sekvens og instruksjoner for bruk ved gjennomføring av en fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen. I et særlig aspekt er instruksjonene for inhibering av celleproliferering.
Oppfinnelsen tilveiebringer også in vitro metoder for å benytte peptidene og de peptidomimetiske sekvenser ifølge oppfinnelsen. I en utførelsesform inkluderer en in vitro metode å bringe en cellekontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetikum tilstrekkelig til å inhibere proliferering av cellen. I en annen utførelsesform inkluderer en in vitro metode å bringe en celle i kontakt med et nukleinsyreskadende middel eller å eksponere en celle til en nukleinsyreskadende behandling.
Oppfinnelsen tilveiebringer in vitro metoder for å øke sensitiviteten for en celle overfor et nukleinsyreskadende middel eller behandling. I en utførelsesform inkluderer en in vitro metode å bringe cellen i kontakt med en mengde av et peptid eller et peptidomimetikum tilstrekkelig til å øke sensitiviteten hos cellen for et nukleinsyreskadende middel eller en behandling.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre in vitro metoder for å øke nukleinsyreskaden på en celle. I en utførelsesform inkluderer in vitro metoden å bringe en celle i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetikum tilstrekkelig til å øke nukleinsyreskaden på cellen.
I forskjellige aspekter ved oppfinnelsen er cellen en dyrket celle. I andre aspekter inkluderer in vitro metoden videre å bringe cellen i kontakt med et nukleinsyreskadende middel eller å eksponere cellen overfor en nukleinsyreskadende behandling.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre anvendelse av en mengde av peptid eller peptidomimetikum for å behandle en celleproliferativ lidelse. I en utførelsesform inkluderer en anvendelse en mengde peptid eller peptidomimetikum effektivt til å behandle den celleproliferative lidelse. I spesielle aspekter omfatter den celleproliferative lidelse en benign eller malign fast eller flytende tumor (for eksempel metastatisk eller ikke-metastatisk sarkom eller karsinom, eller hematopoietisk cancer som en myelom, lymfom eller leukemi). I ytterligere, spesielle aspekter er minst en del av cellene som omfatter den celleproliferative lidelse lokalisert i blod, bryst, lunge, thyroid, hjerte eller hals, hjerne, lymfe, fordøyelseskanal, nasofarynx, genito-urinær kanal, blære, nyre, pankreas, lever, ben, muskel eller hud.
Oppfinnelsens anvendelse inkluderer administrering av en hvilken som helst vei. I spesielle utførelsesformer blir et peptid eller peptidomimetikum administrert lokalt, regionalt eller systemisk.
Oppfinnelsens anvendelse inkluderer behandlinger som resulterer i forbedring av tilstanden hos et individ. I spesielle utførelsesformer inkluderer en forbedring en eller flere av redusert celleproliferering, redusert antall celler, inhibert øket celleproliferering, inhibert økning av antallet celler, øket apoptose eller redusert overlevelse av i det minste en del av cellene som omfatter den celleproliferative lidelse.
Oppfinnelsens metoder inkluderer administrering av et nukleinsyreskadende middel, en nukleinsyreskadende behandling, et antiproliferativt middel, eller en antiproliferativ behandling, til individet. I spesielle aspekter omfatter midlet eller behandlingen et medikament (for eksempel et kjemoterapeutisk medikament som 5-fluorouracil (5-FU), rebeccamycin, adriamycin (ADR), bleomycin (Bleo), pepleomycin, et cisplatin-derivat som cisplatin (CDDP) eller oksaliplatin eller camptotecin (CPT)), stråling (for eksempel UV-stråling, IR-stråling, eller alfa-, beta- eller gamma-stråling), en radioisotop (for eksempel I131, 1125, 90Y,<177>Lu,<213>Bi eller<211>At), omgivelsessjokk (for eksempel hypertermi).
BESKRIVELSE AV FIGURENE
Figur 1 viser en dose-responskurve for hver forbindelse når den benyttes mot bleomycin-behandlede Jurkat-celler. X-aksen antyder dosen og Y-aksen indikerer %G2/M celler etter behandling. Figur 2 viser en dose-responskurve for hver komponent når den benyttes mot colchicin-behandlede Jurkat-celler. X-aksen antyder dosen og Y-aksen indikerer %G2/M celler etter behandling. Figurene 3A og 3B viser humanpankreatisk cancercelleavledet cellelinje MIAPaCa2 behandlet med (A) bleomycin (Bleo) eller (B) adriamycin (ADR) med forskjellige forbindelsesdoser. Høstede celler ble farget for sin DNA og analysert med strømningscytometri. % populasjon av sub-Gl cellene er antydet som døde celler. Figurene 4A til 4C er et skjematisk diagram av strukturaktivitetsammenhengen for G2 kontrollpunkt abrogator (1-Gly)(l-Arg)(l-Lys)(l-Lys)(l-Arg)(l-Arg)a-Gln) (1-Arg) (1-Arg)(l-aa)(l-Phe-2,3,4,5,6-F)(l-Arg)(l-Ser)(l-Pro)(l-Ser)(l-Tyr)(l-Tyr)(SEKTO NO:78): (A) G2 kontrollabrogeringsaktivitet av aminosyresubstitusjoner for 1-Cha i bleomycin- behandlede Jurkat-celler er indikert i rekkefølge: [1-Cha=l-Nal(2)] > [1-Ala(3-Bzt)=l-Nal(l)=l-Trp=l-Dph] >
[l-Ala(tBu)=Cys(tBu)=Leu]; (B) M fase kontrollabrogerende aktivitet og/eller ikke-spesifikk
toksisitet av aminosyresubstitusjoner 1-Cha i cholchicin- behandlede Jurkat-celler i rekkefølge, [Ala(3-Bzt)=l-Nal(l)=l-Dph] > [1-Cha=l-Nal(2)]; (C) G2 kontrollpunktabrogenerende aktivitet av aminosyresubstitusjonen for l-Phe-2,3,4,5,6-F er antydet i rekkefølge, l-(Phe-2,3,4,5,6-F)=l-(Phe-3,4,5-F)=l-(Phe^CF3)] > [l-(Phe-3Br,4Cl,5Br) =l-(Phe^Cl)=l-Tyr].
Figur 5 viser G2 abrogerende aktivitet for forskjellige argjninrike sekvenser. Antydede peptider ble satt til Jurkat-celler med eller uten bleomycin. %G2/M celler er antydet langs Y-aksen, X-aksen er som følger: 1, Bleomycin alene; 2,0.2 ug/ml; 3,0.39 ug/ml; 4,0.78 ug/ml; 5,1.56Hg/ml; 6,3.125 ug/ml; 7,6.25 ug/ml; 8,12.5 ug/ml; 9,25 ug/ml; og 10,50 ug/ml. Peptidsekvensene er som følger: rrrqrrkkr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5 6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Lys)(d-Lys)(d-Arg) (SEK ID NO:79); CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(SEK ID NO:80); no TAT, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEKIDNO:81); rqrr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-TrpXd-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg)(d-Gln)(d-Arg) (d-Arg)(SEK ID N0:82); rrqrr, (d-Bpa)(d-Ser) (d-Trp) (d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg)(d-Arg)(SEK ID NO:83); rrrq, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)
(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(SEK ID NO:84); og rrrqr, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg)(SEK ID NO:85). Figur 6 viser G2 abrogerende aktivitet for forskjellige peptider uten (d-Bpa). Indikerte peptider ble satt til Jurkat-celler med eller uten bleomycin. %G2/M celler er antydet langs Y-aksen, X-aksen er som følger: 1, Bleomycin alene; 2,0.2 ug/ml; 3,0.39 ug/ml; 4,0.78 ug/ml; 5,1.56Hg/ml; 6,3.125 ug/ml; 7,6.25 ug/ml; 8,12.5 ug/ml; 9,25 ug/ml; og 10,50 ug/ml. Peptidsekvenser er som følger: CBP0, (d-Arg)(d-Arg) (d-Arg)(d-Gln)(d-Arg) (d-Arg)(SEK ID N0:86); CBP451, (d-Tyr)(d-Ser)(d-Pro) (l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(SEKIDNO:87); CBP452, (d-Tyr)(d-Ser)a-Pro)a-Trp)a-Ser)(d-Phe-23,4,5,6-F) (d-ChaXd-ArgXd-Arg) (d-ArgXd-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(SEKIDNO:88); og æP501, (d-Br*)(d-Ser)(d-Tro)(d^ ArgXd-Arg) (SEKK>NO:80). Figur 7 viser G2-abrogerende aktivitet av forskjellige argininrike og lysinrike peptidsekvenser. Indikerte peptider ble satt til Jurkat-celler som ovenfor og %G2/M celler beregnet (Y-aksen). Peptidsekvensene er som følgen CBP603, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe4N02)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(SEK ID NO:89); CBP607, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(SEKIDNO:90); CBP608, (d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d -Phe-23,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)
(d-ArgXSEK K> N0:91:); og CBP609, (d-BpaXd-SerXd-Trp) (d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d -Cha)
(d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (d-Lys) (SEKK>NO:92).
Figur 8 viser at lokasjonen av den argininrike del av sekvensen kan varieres. Antydede peptider ble satt til Jurkat-celler som ovenfor og %G2/M celler beregnet (Y-aksen). Peptidsekvenser er som følgen CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-23,4,5,6-F) (d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (SEKIDNO:80); CBP510, (d-Arg)(d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg) (d-ChaXd-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-SerXd-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (SEKIDNO:93); CBP511, (d-Arg)(d-Arg)
(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg)(d-Arg) (d-Bpa)(d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-23,4,5,6-F)(d-Cha) (SEKK) NO:94); ogCBP512, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d<fø)(d-Ph&-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (SEKEDNQ95).
Figur 9 viser strukturen for flere studerte, substituerte peptidsekvenser. G2-abrogerende aktivitet økte med de lystonede substitusjoner (<*>), M-fase kontrollpunkt-abrogerende aktivitet og/eller ikke-spesifikk toksisitet økte med mørkere tonede substitusjoner (<**>) og forble omtrent den samme for resten av substitusjonene. Figur 10 viser inhibering av tumorveksten (human pankreas carcinom) i seid mus etter behandling med CBP5 01 ogcisplatin. Dag 0 antyder behandlingsinitiering. Midlere tumorstørrelser med standardavvik for hver behandlingsgruppe er antydet langs Y-aksen og antallet dager etter behandlingsinitiering er antydet langs X-aksen. Figur 11 viser G2-abrogerende aktivitet for peptider med et kinaseinhiberende sekvensområde og et sekvensområde basert på en HIV-T AT transduksjonssekvens, som ovenfor. %G2/M-celler er antydet langs Y-aksen. X-aksen er som følger: 1, Bleomycin alene; 2,0.2 ^ig/rnl; 3,0.39 ug/ml; 4,0.78^ig/ml; 5, 1. 56^ig/ml; 6,3.125^ig/ml; 7,6.25fig/ml; 8,12.5 jig/ml; 9,25 jig/ml; og 10,50fig/ml. Peptidsekvensene er som følger: CBP501, (d-BpaXd-SerXd-TrpXd-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-FXd-Cha) (d-ArgXd-ArgXd-Arg)(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:80); CBP700, (d-Arg)(d-ArgXd-Bpa) (d-Arg)
(d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO:96); CBP701, (d-Arg) (d-Arg)
(d-Arg) (d-Bpa) (d-ArgXd-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID N0:97); CBP702, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-23 A5,6-FXd-Cha) (SEK ID NO:98); CBP703, (d-Arg) (d-Arg)(d-ArgXd-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-FX d-Cha) (SEKIDNO:99).
Figur 12 viser en sammeriUgning mellom G2-abrogerende aktivitet og M-abrogerende aktivitet og/eller ikke-spesifikk toksisitet for peptider med bleomycin for G2-abrogeringsanalyse og colchicin for M-abrogeringsaktivitet og/eller ikke-spesifikk toksisitet. Antydede peptider ble satt til Jurkat-celler med bleomycin eller colchicin. %G27M-cellene er antydet langs Y-aksen, X-aksen er som følger: 1, Bleomycin eller Colchicin alene; 2,0.2 ug/ml; 3,0.39 ug/ml; 4,0.78 jig/ml; 5,1.56 jig/ml; 6,3.125 ug/ml; 7,6.25 jig/ml; 8,12.5 jig/ml; 9,25 (ig/ml; og 10,50fig/ml. Peptidsekvensen er som følger: CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-ArgXd-ArgXd-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:80).
DETALJERT BESKRIVELSE
Oppfinnelsen tilveiebringer forbindelser inkludert peptider og peptidomimetika som inhiberer celleproliferering. Oppfinnelsens forbindelser er derfor anvendbare for behandling av celleproliferative lidelser eller fysiologiske tilstander som karakteriseres ved ikke-ønskelig eller uønsket celleproliferering, som benigne og maligne tumorceller. Evnen til oppfinnelsens peptider og peptidometika til å inhibere celleproliferering synes å skyldes i det minste delvis abrogering av cellesyklus G2-kontrollpunktet. Fordi cellene kan induseres til og tre inn i cellesyklus G2-kontrollpunktet som respons på nukleinsyreskade for å tillate cellen å reparere skaden før DNA-replikering og celledeling inntrer, sensitiserer oppfinnelsens peptider og peptidometika celler, ved inhibering av G2-kontrollpunktet, overfor nukleinsyreskadende midler og behandlingsprotokoller. Celler som akkumulerer tilstrekkelig nukleinsyreskade, vil være ute av stand til å fullføre reparasjon av den skadede nukleinsyre fordi G2-kontrollpunktet er avbrutt. Slike celler vil vise redusert proliferering (for eksempel på grunn av mutasjon av gen som er kritisk for overlevelse og som ikke er reparert), og til sist undergå apoptose.
Celler med en normal Gl er mindre tilbøyelige til å akkumulere skadet nukleinsyre fordi nukleinsyrereparasjonen også kan skje under Gl. Således er normale celler mindre ømfintlige overfor effektene av oppfinnelsens forbindelser. Imidlertid vil celler med et forringet eller disruptert cellesyklus Gl-kontrollpunkt mer sannsynlig akkumulere skadet nukleinsyre fordi Gl-kontrollpunktet er forringet eller disruptert og derved gjør det mindre sannsynlig at cellen fullstendig kan reparere den skadede nukleinsyre. Behandling av Gl-forringede eller disrupterte celler med et peptid eller peptidomimetika ifølge oppfinnelsen og som disrupterer G2-kontrollpunktet, gjør cellene således ennå mindre i stand til å fullføre reparasjon av den skadede nukleinsyre. Gl-forringede eller disrupterte celler er derfor spesielt sensitive overfor slike peptider eller peptidomimetika ifølge oppfinnelsen. Således inkluderer oppfinnelsens forbindelser peptider og peptidomimetika som kan benyttes for å inhibere eller forhindre celleproliferering generelt og særlig å inhibere proliferering av celler med et forringet eller disruptert Gl-kontrollpunkt.
Celler med et forringet eller disruptert Gl cellesykluskontrollpunkt inkluderer, men er ikke begrenset til, celler som prolifererer hurtig. Celleproliferative lidelser og fysiologiske betingelser som karakteriseres ved hurtigvoksende celler, uønsket voksende celler eller celler som overlever i stedet for å undergå apoptose, har hyppig forringet eller disruptert Gl cellesykluskontrollpunkt. Således synes det som om evnen hos oppfinnelsens peptider og peptidomimetika til å inhibere proliferering eller stimulering av apoptose i det minste delvis skyldes disruptering av G2 cellesykluskontrollpunktet, celler som hurtig eller på uønsket måte prolifererer på grunn av forringet eller disruptert Gl kontrollpunkt er spesielt attraktivt mål.
Oppfinnelsens forbindelser inkludert peptider og peptidomimetika kan også undertrykke celleproliferering per se uten ytterligere behandling som skader nukleinsyre eller som har antiproliferativ aktivitet fordi disruptering av G2 kontrollpunktet sannsynligvis vil føre til en akkumulering av nukleinsyreskade når cellen deler seg. I henhold til dette kan abnormal eller uønsket proliferering eller overlevende celler behandles med en forbindelse ifølge oppfinnelsen alene, eller i kombinasjon med en nukleinsyreskadende behandling (for eksempel et kjemisk middel eller en behandlingsprotokoll), for å inhibere eller forhindre proliferering av cellene eller stimulere celleapoptose-katastrofe.
Til forskjell fra konvensjonelle, anticelleproliferative midler som målsøker hurtigprolifererende celler, uansett hvorvidt cellene er normale eller unormale (for eksempel cancerceller) sikter oppfinnelsens forbindelser fortrinnsvis på celler med et forringet eller disruptert cellesyklus Gl kontrollpunkt. For eksempel påvirker CBP501, til forskjell fra cisplatin, ikke veksten av HUVEC-celler (se for eksempel Tabell 3). CBP501 påvirker heller ikke M-fase cellesyklusstans og/eller ikke-spesifikk toksisitet indusert av kolchicin (se for eksempel figur 12). Som en konsekvens er det mindre sannsynlig at oppfinnelsens forbindelser vil gi for mange uønskede bivirkninger assosiert med konvensjonelle, anticelleproliferative behandlingsmidler, som benmargsuppresjon, kvalme, appetittap, diaré og hårtap. I tillegg og fordi den største andel av cancerceller har et forringet eller disruptert cellesyklusgenkontrollpunkt, vil cancerceller vise økende sensitivitet overfor oppfinnelsens forbindelser som abrogerer cellesyklus G2 kontrollpunktet. At normale celler er mindre ømfintlige betyr også at oppfinnelsens forbindelser inkludert peptider og peptidomimetika, kan benyttes i større mengder.
I henhold til oppfinnelsen tilveiebringes det forbindelser som inkluderer peptider og peptidomimetika som spesifisert i kravene med anticelle-proliferativ aktivitet og/eller som abrogerer G2 cellesykluskontrollpunktet. Disse peptider eller peptidomimetika inkluderer sekvenser som inhiberer proliferering av en celle eller som stimulerer apoptose av en celle. Disse peptider eller peptidomimetika inkluderer også sekvenser som abrogener cellesyklus G2 kontrollpunktet. I en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende struktur: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID N0:1) eller P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:2); der Pl er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller l-(Phe-3,4,5F), d- eller l-(Phe-4CF3), en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d- eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidin-gruppe(r) eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-gruppe, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, quinazolingruppe i sidekjeden; P2 er d- eller 1 -Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller l-(Phe-3,4,5F), d- eller l-(Phe^CF3), d- eller 1-Bpa, d-eller l-Phe4N02, en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d-eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, eller quinazolin-gruppe i sidekjeden; P3, P4, P5 er en hvilken som helst aminosyre eller en eller flere av P3, P4, P5 er en enkel karbonkjede slik at avstanden mellom P2 og P6 er omtrent den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer (d- eller 1 -Trp er et eksempel på P4;) P6 er d- eller 1 -Bpa, d- eller 1-Phe4N02, en hvilken som helst aminosyre eller d- eller 1 -Tyr (for eksempel d-Ser-d-Tyr), en hvilken som helst aminosyre og d- eller 1-Phe (for eksempel d-Ser-d-Phe), en hvilken som helst aminosyre, eller ingenting. I forskjellige aspekt er aminosyren med en enkelt karbonkjede d- eller 1-11-aminoundekansyre, d- eller 1-10-aminodecansyre, d- eller 1-9-aminononansyre, d- eller 1-8-aminokaprylsyre, d- eller 1-7-aminoheptansyre, d- eller 1-6-aminokaprosyre, eller en tilsvarende struktur med en eller flere umettede karbonbindinger.
I en annen utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende strukturen: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:3); P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:4); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:5); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEKIDNO:6); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKIDNO:7); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, Pil, PIO, P9, P8, P7 (SEKIDNO:8); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEKIDNO:9); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKIDNO:10); P12, PU, PIO, P9, P8, P7, Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID N0:11); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO: 12); P12, Pil, P6, P9, P8, P7, P2, Pl (SEK ID NO: 13); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4,P7, P2, Pl (SEK ID NO:14); Pl, P2, P7, P8, P9, P6, P11,P12 (SEK ID NO:15); eller Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:16); der Pl er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller 1-(Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller l-(Phe-3,455F), d- eller l-(Phe-4CF3), d- eller 1-Bpa, d- eller 1-Phe4N02, en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d-eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r), eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, eller quinazolingruppe i sidekjeden; P2 er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller l-(Phe-3,4,5F), d- eller l-(Phe-4CF3), eller en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d- eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r) eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalengruppe, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, quinazolingruppe(r) i sidekjeden; P3, P4, P5 er en hvilken som helst aminosyre eller en eller flere av P3, P4, P5 er en enkelt karbonkjede slik at avstanden mellom P2 og P6 er omtrent den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer (d- eller 1 -Trp er et eksempel på P4); P6 er d- eller 1 -Bpa, d- eller l-Phe^NOz, en hvilken som helst aminosyre og d- eller 1-Tyr (for eksempel d-Ser-d-Tyr), en hvilken som helst aminosyre og d- eller 1-Phe (for eksempel d-Ser-d-Phe), og minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pil, Pli er basiske aminosyrer der resten er en hvilken som helst aminosyre eller er fraværende. I forskjellige aspekter er aminosyren med en enkelt karbonkjede d- eller 1-11-aminoundecansyre, d- eller 1-10-arninodecansyre, d- eller 1-9-aminononansyre, d- eller 1-8-aminocaprylsyre, d- eller 1-7-aminoheptansyre, d- eller 1- 6-aminocapronsyre eller en tilsvarende struktur med en eller flere umettede karbonbindinger.
I en ytterligere utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende struktur: Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:17); P12, Pli, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, PI (SEK ID NO:18); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl (SEK ID NO: 19); eller Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pli, P12 (SEK IDN0:20); der Pl er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller 1- (Phfc-2,3,4,5,6-F), d- eller 1- (Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Phe-4CF3), d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe+NC^, en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d- eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r) eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, eller quinazolingruppe i sidekjeden; P2 er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller 1- (Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller 1- (Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Phe- 4CF3), en aminosyre som opptar et tilsvarende sidekjederom (for eksempel d- eller 1-Tyr, d- eller 1-Phe), eller en hvilken som helst aminosyre med en eller to aromatiske, piperidin-, pyrazin-, pyrimidin-, piperazin-, morfolin- eller pyrimidingruppe(r) eller en indol-, pentalen-, inden-, naftalen-, benzofuran-, benzotiofen-, quinolin-, indolin-, chroman-, quinoksalin-, quinazolingruppe i sidekjeden; P3, P4, P5 er en hvilken som helst aminosyre eller en eller flere av P3, P4, P5 er en enkelt karbonkjede slik at avstanden mellom P2 og P6 er omtrent den samme som avstanden når hver av P3, P4, P5 er aminosyrer (d- eller 1-Trp er et eksempel ved P4); P6 er d- eller 1-Bpa, d- eller l-PhejNOi en hvilken som helst aminosyre og d- eller 1-Tyr (for eksempel d-Ser-d-Tyr), en hvilken som helst aminosyre og d- eller 1-Phe (for eksempel d-Ser-d-Phe), en hvilken som helst aminosyre eller ingenting; og minst tre av P7, P8, P9, Pl O, Pil, P12 er basiske aminosyrer idet resten er en hvilken som helst aminosyre eller fraværende. I forskjellige aspekter er aminosyren med en enkelt karbonkjede d- eller 1-aminoundecansyre eller d- eller 1-8-aminocaprylsyre.
I nok en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende struktur Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:21) eller P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID N0:22); der Pl er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller l-(Phe-23,4,5,6-F), d- eller 1- (Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Phe-4CF3), d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe^NOz, d- eller 1-Tyr, eller d- eller 1-Phe; P2 erd- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller 1- (Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller 1- (Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Ph&4CF3), d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe^O* d- eller 1-Tyr, eller d- eller 1-Phe; P3 erd- eller 1-serin, d- eller 1-arginin, d- eller 1-cystein, d- eller 1-prolin, eller d- eller 1-asparagin; P4 er d- eller 1-tryptofan; ogP5 erd- eller 1-serin, d- eller 1-arginin, eller d- eller 1-asparagin; eller P3, P4, P5 er en enkel d- eller 1 -aminoundecansyre eller en enkel d- eller 1 -8-aminocaprylsyre; P6 er d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe^Qz, (d-Ser-d-Tyr), eller (d-Ser-d-Phe).
I nok en utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende struktur P1, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12
(SEK
IDN0:23);P1, P2,P3,P4,P5,P6,P12,P11, P10,P9,P8,P7 (SEKIDNO:24);P6,P5,
P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKIDNO:25); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, Pil, PIO,P9,P8, P7 (SEKIDNO:26);P7,P8,P9,PIO,Pil, P12,Pl, P2, P3,P4,P5,P6(SEKID N0:27); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKIDNO:28); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:29); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKIDNO:30);P12,P11, P6,P9,P8,P7,P2,P1 (SEKIDNO:31);P12,P11, P10,P6,P9,P4, P7, P2, Pl (SEKID NO:32); Pl, P2, P7, P8, P9, P6, Pil, P12 (SEKIDNO:33); eller P1, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pli, P12 (SEK ID NO:34); der Pl er d- eller 1-Cha, Nal(2), d- eller 1- (Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller 1- (Phe-3,4,5F), d- eller l-(Phe-4CF3), d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe^NOz, d- eller 1-Tyr, eller d- eller 1-Phe; P2 er d- eller 1-Cha, d- eller 1-Nal(2), d- eller 1- (Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller 1-
(Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Phe-4CF3), d- eller 1-Bpa, d- or l-Phe^Oz, d- eller 1-Tyr, eller d- eller 1-Phe; P3 er d- eller 1-serin, d- eller 1-arginin, d- eller 1-cystein, d- eller 1-prolin, eller d- eller 1-asparagin; P4 er d- eller 1 -tryptofan; P5 er d- eller 1 -serin, d- eller 1 -arginin, eller d- eller 1 -asparagin; eller P3, P4, P5 er en enkelt d- eller 1-arninoundecansyre eller en enkel d- eller 1-8-aminocaprylsyre; P6 er d- eller 1-Bpa, d- eller l-Phe^Qz, (d-Ser-d-Tyr), eller (d-Ser-d-Phe); og minst tre av P7, P8, P9, P10, P11, P12 er d- eller 1 -Arg eller d- eller 1 -Lys idet resten er en hvilken som helst aminosyre eller er fraværende.
I ytterligere en utførelsesform inkluderer en kontinuerlig peptid- eller peptidomimetisk sekvens også beskrevet i beskrivelsen den følgende struktur: Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKIDNO:35); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKIDNO:36); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl(SEKIDNO:37); eller Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEKID NO:38); der Pl er d- eller 1-Cha, eller d- eller 1-Nal(2); P2 er d- eller l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d- eller 1-(Phe-3,4,5F), d- eller 1- (Phe-4CF3); og minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pl 1, P12 er d- eller 1-Arg idet resten er en hvilken som helst aminosyre eller fraværende; P3 er d- eller 1-serin; P4 er d- eller 1-tryptofan; P5 er d- eller 1-serin eller d- eller 1-asparagin; P6 er d- eller 1-Bpa, d- eller 1-Phe/|N02, (d-eller 1-Ser-d- eller 1-Tyr), eller (d- eller 1-Ser-d- eller 1-Phe).
I nok en ytterligere utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens den følgende struktur: P1, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID NO:39) eller P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:40); der Pl er d- eller 1-Cha, eller d- eller 1-Nal(2); P2 er (d- eller l-Phe-2,3,4,5,6-F), (d- eller 1-Phe-3,4,5F) eller(d- eller l-Phe^CF3); P3 erd- eller 1-Ser; P4 er d- eller 1-Trp; P5 erd-eller 1-Ser; P6 er d- eller I-Bpa, eller (d- eller 1-Ser-d- eller 1-Tyr).
I en ytterligere utførelsesform inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens den følgende struktur: Pl, P2, P3, P4, P5, P6 (SEK ID N0:41); P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEKIDNO:42); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKIDNO:43); Pl, P2, P3, P4, P5, P6, PU, PU, PIO, P9, P8, P7 (SEK ID NO:44); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, PIO, PU, P12 (SEKIDNO:45); P6,P5, P4, P3, P2, Pl, P12, Pil, PIO, P9,P8,P7 (SEKID NO:46);P7,P8,P9,PIO,Pli, P12,Pl,P2,P3, P4, P5,P6 (SEKIDNO:47); P7, P8,P9, PIO, Pil, P12,P6,P5,P4,P3,P2,P1 (SEKIDNO:48);P12,Pll, PIO, P9, P8,P7,P1,P2,P3,P4, P5, P6 (SEK ID NO:49); P12, PU, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:50); P12,P11, P6, P9,P8,P7,P2,P1 (SEKIDN0.51);P12,PU, P10,P6,P9,P4, P7,P2,P1 (SEKIDN0:52); Pl, P2, P7, P8, P9, P6, PU, P12 (SEKIDNO:53); eller PI, P2,P7,P4, P9, P6, PIO, PU, P12 (SEK ID NO:54); der Pl er d- eller 1-Cha, eller d- eller 1-Nal(2); P2 er (d-eller l-Phe-2,3,4,5,6-F), (d- eUer 1-Phe-3,4,5F) eUer (d- eUer 1-Phe-4CF3); P3 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel d- eUer 1-Ser, eUer d- eUer 1-Pro); P4 er d- eUer 1-Trp; P5 er en hvilken som helst aminosyre (for eksempel d- eller 1-Ser); P7 er d- eller 1-Arg; P8 er d- eller 1-Arg; P9 er d- eller 1-Arg; P10 er d- eller 1-Gln eller d- eller 1-Arg; Pil er d- eller 1-Arg; P12 er d- eller 1-Arg; P6 erd- eller 1-Bpa eller (d- eller 1-Ser-d- eller 1-Tyr).
Det kontinuerlig peptid- eller peptidomimetisk sekvens kan også ha den følgende struktur: Pl, P2, P3, P4, P5, P6, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEKIDNO:55); P12, Pil, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:56); P12, Pil, PIO, P6, P9, P4, P7, P2, Pl (SEK ID NO:57); eller Pl, P2, P7, P4, P9, P6, PIO, Pil, P12 (SEK ID NO:58); der Pl er d- eller 1-Cha eller d- eller 1-Nal(2); P2 er (d- eller l-Phe-2,3,4,5,6-F); P3 er d- eller 1-Ser, P4 er d- eUer 1-Trp; P5 er d- eller 1-Ser; P7 er d- eller 1-Arg; P8 er d- eller 1-Arg; P9 er d- eller 1-Arg; PIO er d- eller 1-Gln eller d- eller 1-Arg; Pl 1 er d- eller 1-Arg; P12 er d- eller 1-Arg; P6 er d- eller 1-Bpa eller (d-eller 1-Ser-d- eller 1-Tyr).
Den sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens kan også inkludere den følgende struktur: (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-233,4,5,6-F) (d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)
(d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:99); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)( d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO: 100); (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)( d-Cha)( d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:59); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser)
(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO:60); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:61); (d-Arg) (d-Arg)
(d-Arg) (d-Gln)(d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa)
(SEK ID NO:62); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp) (d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg)
(d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:63); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Bpa) (SEK ID NO:64); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (SEK ID NO:65); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:66); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:67); (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)
(d-Arg) (SEK ID NO:68); (d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)( d-Cha) (SEK ID NO:69); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)( d-Arg) (SEK ID NO:70); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:71); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:72); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:73); (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)
(d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:74); (d-Arg) (d-
Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:75); or (d-Cha) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-ArgXd-Arg) (SEK ID NO:76).
I foretrukne utførelsesformer inkluderer en sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens den følgende struktur: (d-BpaXd-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Pte Arg)(d-Arg) (SEK ID NO:77).
Oppfinnelsens peptider og peptidomimetika inneholder eventuelt en poly-lys og/eller arg sekvens for å understøtte traversering av cellemembranen. Fordi andre aminosyresekvenser (for eksempel HIV tat, ligander for celleoverflate-reseptorer/proteiner, osv.) er i stand til å trenge gjennom membranen og andre molekyler, kan benyttes for å lette celleinngang av G2 abrogene peptider og peptidomimetika (for eksempel liposomer, miceller og andre lipidmolekyler, virale og andre vektorer, elektroporering, osv.) er inkludert av poly-lys og/eller poly-arg sekvenser eventuelt. I ytterligere utførelsesformer har således peptidene og peptidomimetika ikke noen poly-lys og/eller poly-arg sekvenser som assisterer celleinngangen. en minimumsekvens kan inkludere uten noen poly-lys/arg sekvens som understøtter cellemembrantraverseringen, P6, P5, P4, P3, P2, Pl for eksempel d-Bpa, d-Ser, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha (SEK ID NO:101); og d-Tyr, d-Ser, d-Pro, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha (SEK ID NO: 102). I to ytterligere, spesielle utførelsesformer inkluderer en rninimumssekvens uten poly-lys/arg sekvens som understøtter cellemembrantraverseringen for eksempel d-Bpa, d-Cys, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha, d-Cys (SEK ID NO: 103); og d-Tyr, d-Cys, d-Pro, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, dCha, dCys (SEK ID NO: 104); idet Cys-resten eventuelt er ringsluttet
Som diskutert har oppfinnelsens forbindelser anti-celleproliferativ aktivitet eller G2-abrogerende aktivitet per se. Anti-celleproliferativ aktivitet kan økes ved å kombinere slike forbindelser ifølge oppfinnelsen med behandlinger som direkte eller indirekte forårsaker nukleinsyreskade. Anti-celleproliferativ aktivitet kan også økes ved å kombinere slike forbindelser ifølge oppfinnelsen med behandlinger som inhiberer celleproliferering uansett eller ikke om behandlingene skader nukleinsyre. Oppfinnelsen tilveiebringer derfor videre preparater inkludert forbindelser ifølge oppfinnelsen (for eksempel et peptid eller peptidomimetrisk sekvens) og et nukleinsyreskadende middel, og preparater som inkluderer en forbindelse ifølge oppfinnelsen (for eksempel en peptid- eller peptidomimetrisk sekvens) og et antiproliferativt middel.
Som benyttet her, betyr uttrykkene "abrogere cellesyklus G2-kontrollpunktet", "disrupterer cellesyklus G2-kontrollpunktet", "forringer cellesyklus G2-kontrollpunktet" og gramatikalske varianter derav, inhibering av en celle til å stanse cellesyklusen på G2-kontrollpunktet. En celle hvori cellesyklus G2-kontrollpunktet er abrogert, oppviser en reduksjon i den tidslengde cellen befinner seg i G2-kontrollpunktet som kan ligge fra fravær av G2-kontrollpunktet og til et G2-kontrollpunkt med en reduksjon i varighet på minutter, timer, dager, uker eller mer under egnede betingelser. Således har en celle som er brakt i kontakt med forbindelser ifølge oppfinnelsen en G2-kontrollpunktstid som i lengde er kortere enn det cellen normalt ville ha i fravær av forbindelsen. For eksempel vil en reduksjon i lengden av G2-kontrollpunkttiden bety at en celle som er i G2 et visst tidsrom, for eksempel 4 timer, vil være i G2 mindre enn 4 timer når den er i kontakt med en forbindelse ifølge oppfinnelsen, for eksempel 3,5, 3, 2,5, 2, 1 eller færre timer.
Som benyttet her, henviser uttrykket "apoptose" til programmert celledød, og assosierte forandringer i cellefysiologien, for eksempel nukleinsyrefragmentering, kaspaseaktivering, osv., slik fagmannen vil vite. Uttrykket "katastrofe" betyr celledød som stammer fra en feil i den mitotiske prosess. I en katastrofe er det færre trekk tilstede enn det som er karakteristisk for apoptose, for eksempel kaspaseaktivering, kromosomkondensering, osv.
Som benyttet her, anvendes uttrykkene "peptid", "polypeptid" og "protein" om hverandre og henviser til to eller flere aminosyrer som kovalent er forbundet av en amidbinding eller en ikke-amidekvivalent. Peptidene ifølge oppfinnelsen kan ha en hvilken som helst lengde. For eksempel kan peptidene ha fra rundt 5 til 100 eller flere rester, for eksempel 5 til 12,12 til 15,15 til 18,18 til 25, 25 til 50, 50 til 75, 75 til 100, eller flere. Peptidene ifølge oppfinnelsen inkluderer 1- og d-isomerer og kombinasjoner av 1- og d-isomerer. Peptidene kan inkludere modifikasjoner som karakteristisk assosieres med posttranslasjonell prosessering av proteiner, for eksempel ringslutning eller cyklisering (for eksempel disulfid- eller amidbinding), fosforylering, glykosylering, karboksylering, ubiquitinering, myristylering eller lipidering.
Peptider som beskrevet her, inkluderer videre forbindelser med aminosyrestrukturelle og -funksjonelle analoger, for eksempel peptidomimetika med syntetiske eller ikke-naturlige aminosyrer eller aminosyreanaloger, så lenge disse peptidomimetika har en eller flere funksjoner eller aktiviteter. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen inkluderer derfor "mimetiske" og "peptidomimetiske" former.
Som benyttet her, henviser uttrykkene "mimetisk" og "peptidomimetisk" til en syntetisk, kjemisk forbindelse som har i det vesentlige samme strukturelle og/eller funksjonelle karakteristika som peptidene ifølge oppfinnelsen. Disse mimetika kan fullt ut bestå av syntetiske, ikke-naturlige aminosyreanaloger, eller kan være et kimerisk molekyl inkludert en eller flere naturlige peptidaminosyrer og en eller flere ikke-naturlige aminosyreanaloger. Disse mimetika kan også omfatte et hvilket som helst antall naturlige aminosyrekonservative substitusjoner så lenge slike substitusjoner ikke ødelegger det angjeldende mimetikums aktivitet. På samme måte som med polypeptidet ifølge oppfinnelsen som er konservative varianter, kan rutinetesting benyttes for å bestemme hvorvidt et mimetikum har den nødvendige aktivitet, for eksempel har en detekterbar cellesyklus G2-kontrollpunkt abrogerende aktivitet. Et mimetikum, administrert til et individ eller brakt i kontakt på en celle, som detekterbart distrupterer G2-cellesykluskontrollpunktet, vil derfor ha G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet.
Peptidmimetikapreparater kan inneholde en hvilken som helst kombinasjon av ikke-naturlige, strukturelle komponenter, som karakteristisk er fra tre strukturelle grupper: a) restbindingsgrupper andre enn den naturlige amidbindings ("peptidbinding") bindinger,
b) ikke-naturlige rester i stedet for naturlig forekommende aminosyrerester; eller c) rester som induserer sekundært, strukturelt mimikri, dvs. induserer eller stabiliserer en
sekundær struktur, for eksempel en betasving, gammasving, et betaark, en alfa helixkonformasjon og lignende. For eksempel kan et polypeptid karakteriseres som et mimetikum når en eller flere av restene er forenet ved kjemiske midler andre enn en amidbinding. Individuelle peptidomimetiske rester kan være forenet av amidbindinger, ikke naturlige og ikke-amidkjemiske bindinger, andre kjemiske bindinger eller koblingsmidler, inkludert for eksempel glutaraldehyd, N-hydroksysuccinimidestere, bifunksjonelle maleimider, N,N'-dicykloheksylkarbodiimid (DCC) eller N,N'-diisopropylkarbodiimid (DIC). Bindende grupper som er alternativer til amidbindingen inkluderer for eksempel ketometylen (for eksempel -C(=0)-CH2- for -C(=0)-NH-), aminometylen (CH2-NH), etylen, olefin (CH=CH), eter (CH2-0), tioeter (CH2-S), tetrazol (CN4-), tiazol, retroamid, tioamid eller ester (se for eksempel Spatola (1983) i Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, Vol. y, s. 267-357, "Peptide and Backbone Modifications" Marcel Decker, NY).
Som diskutert kan et peptid karakteriseres som et mimetikum ved å inneholde en eller flere ikke-naturlige rester i stedet for naturlig forekommende aminosyrerester. Ikke-naturlige rester er velkjente i teknikken. Spesielt, ikke-begrensende eksempler på ikke-naturlige rester som kan brukes som mimetika av naturlige aminosyrerester er mimetika av aromatiske aminosyrer inkludert for eksempel D- eller L-naftylalanin; D- eller L-fenylglycin; D- eller L-2 tienylalanin; d- eller L-l, -2, 3- eller 4-pyrenylalanin; D- eller L-3 tienylalanin; D- eller L-(2-pyridinyl)-alanin; D- eller L-(3-pyridinyl)-alanin; D-eller L-(2-pyrazinyl)-alanin; D- eller L-(4-isopropyl)-fenylglycin; D-(trifluormetyl)-fenylglycin; D-(trifluormetyl)-fenylalanin; D-p-fluor-fenylalanin; D- eller L-p-bifenylfenylalanin; K- eller L-p-metoksy-bifenylfenylalanin; D- eller L-2-indol(alkyl)alaniner; og D- eller L-alkylalaniner, der alkyl kan være substituert eller usubstituert metyl, etyl, propyl, heksyl, butyl, pentyl, isopropyl, iso-butyl, sec-isotyl, iso-pentyl, eller en ikke-sur aminosyre. Aromatiske ringer av en ikke-naturlig aminosyre som kan benyttes i stedet for en naturlig, aromatisk ring inkluderer for eksempel tiazolyl-, tiofenyl-, pyrazolyl-, benzimidazolyl-, naftyl-, furanyl-, pyrrolyl- og pyridylaromatiske ringer.
Mimetika av sure aminosyrer kan genereres ved substituering med ikke-karboksylataminosyrer mens man opprettholder en negativ ladning; (fosfono)alanin; og sulfatert treonin. Karboksylsidegrupper (for eksempel aspartyl eller glutamyl) kan også modifiseres selektivt ved omsetning med karbodiimider (R'-N-C-N-R') inkludert for eksempel l-cykloheksyl-3(2-morfolinyl-(4-etyl) karbodimid eller l-etyl-3(4-azonia-4,4-dimetylpentyl) karbodiimid. Aspartyl- eller glutamylgrupper kan også konverteres til asparaginyl- og glutaminylgrupper ved omsetning med ammoniumioner.
Mimetika av basiske aminosyrer kan genereres ved substituering, for eksempel i tillegg til lysin og arginin, med aminosyrene ornitin, citrullin eller (guanidino)-eddiksyre, eller (guanidino)alkyl-eddiksyre, der alkyl kan være substituert eller usubstituert metyl, etyl, propyl, heksyl, butyl, pentyl, isopropyl, iso-butyl, sec-isotyl, iso-pentyl eller en ikke-sur aminosyre. Nitrilderivater (for eksempel inneholdende CN-delen i stedet for COOH) kan substitueres for asparagin eller glutamin. Asparaginyl- og glutaminylrester kan deamineres til de tilsvarende aspartyl- eller glutamylrester.
Argininmimetika kan genereres ved å omsette arginyl med en eller flere reagenser inkludert for eksempel fenylglyoksal, 2,3-butandion, 1,2-cykloheksandion eller ninhydrin, eventuelt under alkaliske betingelser. Tyrosinrestmimetika kan genereres ved omsetning av tyrosyl med aromatiske diazoniumforbindelser eller tetranitrometan. N-acetylimidazol og tetranitrometan kan benyttes for å danne O-acetyl tyrosylspecier henholdsvis 3-nitroderivater.
Lysinmimetika kan genereres (og aminoterminalrester endres) ved å omsette lysinyl med rav- eller andre karboksylsyreanhydrider. Lysin og andre alfa-amino-inneholdende restmimetika kan også genereres ved omsetning med imidoestere, som metylpikolinimidat, pyridoksalfosfat, pyridoksalkloroborhydrid, trinitrobenzensulfonsyre, O-metylisourea, 2,4, pentandion og transamidasekatalyserte reaksjoner med glyoksylat.
Metioninmimetika kan genereres ved omsetning med metioninsulfoksid. Prolinmimetika inkluderer for eksempel pipekolinsyre, tiazolidinkarboksylsyre, 3- eller 4-hydroksyprolin, dehydroprolin, 3- eller 4-metylprolin og 3,3-dimetylprolin. Histidinmimetika kan genereres ved å omsette histidyl med dietylprokarbonat eller para-bromfenacylbromid. Andre mimetika inkluderer for eksempel de som er generert ved hydroksylering av prolin og lysin; fosforylering av hydroksylgruppene av seryl- eller trionylester; metylering av alfa-aminogruppene i lysin, arginin og histidin; acetylering av det N-terminale amin; metylering av hovedkjedeamidrestene eller substituering med N-metylaminosyrer; eller amidering av C-terminale karboksylgrupper.
En eller flere rester kan også erstattes av en aminosyre (eller peptidomimetisk rest) av motsatt chiralitet. Således kan en hvilken som helst aminosyre som naturlig forekommer i L-konfigurasjon (som også kan angis som R eller S, avhengig av strukturen av den kjemiske entitet) erstattes av den samme aminosyre eller et mimetikum, men med motsatt chiralitet, angitt som D-aminosyren, men som i tillegg kan angis som R- eller S-formen.
Oppfinnelsens peptider og peptidomimetika inkluderer videre modifiserte former av sekvenser som angitt her, forutsatt at den modifiserte form bibeholdes, i det minste delvis, funksjonen til et ikke-modifiserte eller referansepeptid eller -peptidomimetikum. For eksempel vil modifisert peptid eller peptidomimetikum bibeholde minst en del av celleproliferativ inhiberende G2-abrogerende aktivitet, men kan ha øket eller redusert celleproliferativ inhibering eller G2-abrogerende aktivitet i forhold til referansepeptidet eller referansepeptiddomimetikumet.
Modifiserte peptider og peptidomimetika kan ha en eller flere aminosyrerester erstattet av andre rester, addert til sekvensen eller deletert fra sekvensen. I en utførelsesform har det modifiserte peptid eller peptidomimetikum en eller flere aminosyresubstitusjoner, -addisjoner eller -delesjoner (for eksempel 1-3, 3-5, 5-10 eller flere). I et aspekt skjer substitusjonen med en aminosyre eller et mimetikum hvis sidekjede opptar tilsvarende rom med referanseaminosyren eller det angjeldende mimimetikum (den aminosyre eller det mimetikum som er substituert). I et annet aspekt er substitueringen med en ikke-human aminosyre som strukturelt er lik den humane rest. I et spesielt aspekt er substitueringen en konservativ aminosyresubstituering.
Som benyttet her, betyr uttrykket "tilsvarende rom" en kjemisk del som opptar et tredimensjonalt rom som i størrelse tilsvarer referansedelen. Typisk vil en del som opptar tilsvarende rom, være tilsvarende i størrelse til referansedelen. En aminosyre eller et mimetikum som "opptar et tilsvarende sidekjederom" har en sidekjede som opptar et tredimensjonalt rom som i størrelse tilsvarer referanseaminosyren eller det angjeldende mimetikum. Spesifikke eksempler for d-(Phe-2,3,4,5,6-F), l-(Phe-2,3,4,5,6-F), d-(Phe-3,4,5F), l-(Phe-3,4,5F), d-(Phe-4CF3) eller l-(Phe-4CF3), er (1 eller d-Phe-2Rl, 3R2, 4R3, 5R4, 6R5) der RI, R2, R3, R4, R5 kan være klorid, bromid, fluorid, jodid, hydrogen, hydrogenoksid eller fraværende. For små molekyler, for eksempel fluorid som har en størrelse på rundt 1 Ångstrøm, kan tilsvarende rom bety fravær av en del.
Uttrykket "konservativ substituering" betyr erstatning av en aminosyre med en biologisk, kjemisk eller strukturell tilsvarende rest. Biologisk tilsvarende betyr at substitueringen er kompatibel med biologisk aktivitet, for eksempel anti-celle proliferativ eller G2-abrogerende aktivitet. Strukturelt tilsvarende betyr at aminosyrene har sine sidekjeder med tilsvarende lengde som alanin, glycin og serin, eller har tilsvarende størrelse. Kjemisk likhet betyr at restene har den samme ladning og er begge hydrofile eller hydrofobe. Spesielle eksempler inkluderer substituering av en hydrofob rest som isoleucin, valin, leucin eller metionin med en annen, eller substituering av en polarrest med et amin som substituering av arginin for lysin, glutamin fra aspartinsyre eller glutamin for asparagin, serin for treonin og lignende. Oppfinnelsens peptider og peptidomimetika inkluderer derfor peptider og peptidomimetika med en sekvens som er ikke-identisk med sekvensen av peptid- og peptidomimetikasekvenser som angitt i Tabell 1. Beskrevet heri er et peptid eller et peptidomimetikum en sekvens med 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% eller mer identitet med en sekvens som angitt i Tabell 1. Videre kan identiteten over et definert område av sekvensen, for eksempel amino- eller karboksyterminalt 3-5 restene.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen, inkludert peptider og peptidomimetika, kan fremstilles og isoleres ved bruk av en hvilken som helst kjent metode. Peptider kan syntetiseres, helt eller delvis, ved bruk av i og for seg kjente metoder (se for eksempel Caruthers (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 215-223; Horn (1980) Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 225-232, og Banga, A.K. Therapeutic Peptides and Proteins, Formulation Processing and Delivery Systems (1995) Technomic Publishing Co., Lancaster, PA). Peptidsynteser kan gjennomføres ved bruk av forskjellige fastfaseteknikker (for eksempel Roberge (1995) Science 269:202; Merrifield (1997) Methods Enzymol. 289: 3-13) og automatiserte synteser kan oppnås for eksempel ved bruk av en ABI43 IA Peptide Synthesizer (Perkin Eimer) i henhold til produsentens instruksjoner.
Individuelle, syntetiske rester og polypeptider som inneholder mimetika kan syntetiseres ved bruk av et antall prosedyrer og metodologier som velkjent i teknikken (se for eksempel Organic Syntheses Collective Volumes, Gilman et al. (Eds) John Wiley & Sons, Inc., NY). Peptider og peptidomimetika kan også syntetiseres ved bruk av kombinatoriske metodologier. Teknikker for generering av peptid- og peptidomimetiske biblioteker er velkjente og inkluderer for eksempel multipin-, tepose-og splittparblandingsteknikker (se for eksempel al-Obeidi (1998) Mol. Biotechnol. 9: 205 - 223; Hruby (1997) Curr. Opin. Chem. Biol. 1:114-119; Ostergaard (1997) Mol. Divers. 3: 17-27; og Ostresh (1996) Methods Enzymol. 267: 220-234). Modifiserte peptider kan videre fremstilles ved kjemiske modifiseringsmetoder (se for eksempel Belousov (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3440-3444; Frenkel (1995) Free Radic. Biol. Med. 19: 373-380; og Blommers (1994) Biochemistry 33: 7886-7896).
Peptider kan også syntetiseres og uttrykkes som fusjonsproteiner med ett eller flere ytterligere domener forbundet dertil for å gi et mer immunogent peptid, for letter å isolere et rekombinant syntetisert peptid, eller for å identifisere og isolere antistoffer eller antistoffuttrykkende B-celler. Domener som letter detektering og rensing inkluderer for eksempel metallchelaterende peptider som polyhistidintrakter og histidintryptofanmoduler som tillater rensing på immobiliserte metaller; protein A domener som tillater rensing på immobilisert immunoglobulin; og domene som benyttes ved FLAGS-forlengelse/affinitetsrensingssytem (Immunex Corp., Seattle WA). Innarbeiding av en spaltbar linksekvens som faktor Xa eller enterokinase (Invitrogen, San Diego, CA) mellom et rensedomene og peptid, kan benyttes for lette peptidrensingen. For eksempel kan en ekspresjonsvektor inkludere en peptidkodende nukleinsyresekvens forbundet til seks histidinrester fulgt av et tioredoksin- og et enterokinasespaltingssete (se for eksempel Williams (1995) Biochemistry 34: 1787-1797; Dobeli (1998) Protein Expr. Purif. 12: 404-14). Histidinrestene letter detektering og rensing av fuskjonsproteinet mens enterokinasespaltingssetet gir et middel for å rense peptidet fra resten av fusjonsproteinet. Teknologi hva angår vektorer som koder fusjonsproteiner og anvendelse av fusjonsproteiner er velkjente i teknikken (se for eksempel Kroll (1993) DNA Cell. Biol, 12: 441-53).
Beskrevet heri er også nukleinsyrer som koder peptidene ifølge oppfinnelsen. Spesielt kan en nukleinsyre som koder oppfinnelsens peptidsekvens ha en lengde på rundt 8 til 12,12 til 15,15 til 18,15 til 20, 18 til 25,20 til 25,25 til 35,25 til 50 eller 50 til 100 aminosyrer eller mer.
Uttrykkene "nukleinsyre" og "polynukleotid" benyttes om hverandre for å henvise til alle former for nukleinsyre inkludert deoksyribonukleinsyre (DNA) og ribonukleinsyre (RNA). Nukleinsyrene kan være dobbelt-, enkelttrådet eller triplekse, lineære eller sirkulære. Nukleinsyrer inkluderer genomisk DNA, cDNA og antisens. RNA-nukleinsyre kan være spleiset eller ikke-spleiset mRNA, rRNA, tRNA eller antisens (for eksempel RN Ai). Nukleinsyrer ifølge oppfinnelsen inkluderer naturlig forekommende, syntetiske så vel som nukleotidanaloger og derivater. Slike endrede eller modifiserte polynukleotider inkluderer analoger som for eksempel gir nukleaseresistens. Nukleinsyrelengdene kan også være mindre enn de eksemplifiserte peptidsekvenser. For eksempel kan en subsekvens av en hvilken som helst av peptidsekvensene kode et peptid med en antiproliferativ eller en G2-abrogerende aktivitet.
Nukleinsyre kan fremstilles ved bruk av et antall velkjente standardklonings- og/eller kjemiske syntesemetoder og kan endres med hensikt ved seterettet mutagenese eller ved andre rekombinante teknikker som er velkjente for fagmannen. Renheten for polynukleotidene kan bestemmes ved sekvensering, gelelektroforese og lignende. Nukleinsyrer kan settes inn i et nukleinsyrekonstrukt hvori ekspresjonen av nukleinsyren påvirkes eller reguleres av et "ekspresjonskontrollelement" der kombinasjonen anvendes som en "ekspresjonskassett". Uttrykket "ekspresjonskontrollelement" betyr ett eller flere sekvenselementer som regulerer eller påvirker ekspresjonen av en nukleinsyresekvens hvortil den operativt er forbundet. Et ekspresjonskontrollelement som operativt er forbundet med en nukleinsyresekvens kontrollerer transkripsjonen og, eventuelt, translasjonen av nukleinsyresekvensen.
Uttrykket "operativt forbundet" henviser til en funksjonell posisjonering der komponentene som beskrives slik er i en sammenheng som tillater at de virker på den tilsiktede måten. Typiske ekspresjonskontrollelementer er anbrakt nær 5'- eller 3'-enden av genet, men kan også være intronisk. Promotere er generelt posisjonert 5' av kodingssekvensen. En "promoter" betyr et minimalt sekvenselement som er tilstrekkelig til å styre transkripsjonen.
Ekspresjonskontrollelementer inkluderer promotere, enhancere, transkripsjonsterminatorer, gen "silencers", en startkodon (for eksempel ATG) i front av et proteinkodende gen. Ekspersjonskontrollelementer aktiverer konstitutiv transkripsjon, induserbar transkripsjon (for eksempel krever et eksternt signal for aktivering) eller undertrykket transkripsjon (dvs. et signal slår transkripsjonen av; fjerning av signalet aktiverer transkripsjonen). Ekspresjonskassetter kan også inkludere kontrollelementer som er tilstrekkelig til å gjøre ekspresjonen kontrollerbar for spesifikke cellertyper eller vev (dvs. vevspesifikke kontrollelementer).
Nukleinsyrer ifølge oppfinnelsen kan settes inn i et plasmid for propagering i en vertscelle og for etterfølgende genetisk manipulering. Et plasmid er en nukleinsyre som stabilt kan propageres i en vertscelle; plasmider inneholder eventuelt ekspresjonskontrollelementer for å drive ekspresjonen av nukleinsyrekodende peptid i vertscellen. Uttrykket "vektor" benyttes her synonymt med et plasmid og kan også inkludere et ekspresjonskontrollement for ekspresjon i en vertscelle. Plasmider og vektorer inneholder generelt minst en replikasjonsopprinnelse for propagering i en celle, og en promoter. Plasmider og vektorer er derfor brukbare for genetisk manipulering av peptidkodende nukleinsyrer, for fremstilling av peptider og for å uttrykke peptider i vertsceller eller hele organismer, som eksempler.
Peptider kan derfor uttrykkes i bakterisystemer ved bruk av konstitutive promotere som T7, eller induserbare promotere som pL av bakteriofag X, plac, ptrp, ptac (ptrp-lac hybridpromoter); i gjærsystemer ved bruk av konstitutive promotere som ADH eller LEU2 eller en induserbar promoter som GAL (se for eksempel Ausubel et al, i Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 2, Ch. 13, ed., Greene Publish. Assoc. & Wiley Interscience, 1988; Grant et al. Methods in Enzymology, 153: 516 (1987), eds. Wu & Grossman; bitter Methods in Enzymology, 152: 673 (1987), eds. Berger & Kimmel, Acad. Press, N.Y.; og Strathern et al., The Molecular Bology of the Yeast Saccharomyces (1982) eds. Cold Spring Harbor Press, Vols. I og II; R. Rothstein In: DNA Cloning, A Practical Approach, Vol. 11, Ch. 3, ed. D. M. Glover, IRL Press, Wash., D.C., 1986); i insektcellesystemer ved bruk av konstitutive eller induserbare promotere som ecdyson; og i en pattedyrcelle, systemer som bruker konstitutive promotere som SV40, RSV, eller induserbare promotere avledet fra genomet av pattedyrceller som metallotionein ILA promoteren, varmesjokkpromoteren, eller avledet fra pattedyrviruser som adenovirus sen promoter eller den induserbare muse-mammaære tumorvirus langterminalrepetisjon. Peptidekspresjonssystemer inkluderer videre vektorer som er konstruert for in vivo anvendelse inkludert adenovirale vektorer (US patent nr. 5.700.470 og 5.731.172), adenoassosierte vektorer (US patent nr. 5.604.090) herpes simplex virusvektorer (US patent nr. 5.501.979) og retrovirale vektorer (US patent nr. 5.624.820, 5.693.508 og 5.674.703 og WLPO publikasjoner WO92/05266 og W092/14829). Bovint papillomvirus (BPV) er også benyttet i genterapi (US patent nr. 5.719.054). Slike genterapivektorer inkluderer også CMV-baserte vektorer (US patent nr. 5.561.063).
Beskrevet er derfor også nukleinsyre som koder for peptider ifølge oppfinnelsen, innskutt i vertsceller. Vertscellene en prokaryot celle, en eukaryotisk celle slik som gjær- eller en pattedyr (for eksempel human-, primat, osv.) celle.
Som benyttet her er en "vertscelle" en celle inn i hvilken en nukleinsyre innføres som kan progageres, transkriberes eller et kodet peptid uttrykkes. Uttrykket inkluderer også ethvert avkom av den angjeldende vertscelle.
Vertsceller inkluderer, men er ikke begrenset til, mikroorganismer som bakterier eller gjær; og plante-, insekts- og pattedyrceller. For eksempel tilveiebringes det bakterier transformert med rekombinant bakteriofagnukleinsyrer -plasmidnukleinsyre- eller kosmidnukleinsyreekspresjonsvektorer; gjær som er transformert med rekombinante gjærekspresjonsvektorer; plantecellesystemer som er infektert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (for eksempel blomkålmosaikkvirus, CaMV; tobakkmosaikkvirus, TMV) eller transformert med rekombinante plasmidekspresjonsvektorer (for eksempel Ti plasmid); insektcellesystemer som er infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (for eksempel baculovirus); eller animalcellesystemer som er infisert med rekombinante virusekspresjonsvektorer (for eksempel retroviruser, adenovirus, vaksinevirus), eller tranformerte animalcellesystemer som er konstruert for stabil ekspresjon.
Ekspresjonsvektoren kan også inneholde en nukleinsyre som koder en selekterbar markør som gir resistens mot et selektivt trykk eller ikke-identifiserbar markør (for eksempel P-galaktosidase) for derved å tillate cellene å ha vektoren som skal identifiseres, dyrkes og ekspanderes. Alternativt kan en selekterbar markør være på en andre vektor som blir kotransfektert inn i en vertscelle sammen med en første vektor inneholdende et polynukleotid ifølge oppfinnelsen. Et antall seleksjonssystemer kan benyttes, inkludert, men ikke begrenset til, herpes simplex virus tymidinkinasegenet (Wigler et al., Cell 11: 223 (1997)), hypoxantin-guanin fosforibosyltransferasegenet (Szybalska et al, Proe. NatLAcad. Sei. USA 48: 2026 (1962)), og adeninfosforibosyltransferase (Lowy et al., Cell 22: 817 (1980)) genene kan benyttes i tk-, hgprt- eller aprt-celler. Antimetabolitt resistens kan benyttes som basis for seleksjon for dhfr, som gir resistens mot metotreksat (0'Hare et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 78: 1527 (1981)); gpt-genet som gir resistens mot mykofenolsyre (Mulligan et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 78: 2072 (1981)); og neomycin-genet som gir resistens mot aminoglykosid G-418 (Colberre-Garapin et al, J. Mol. Biol. 150: 1(1981)); og hygromycin-genet som gir resistens mot hygromycin (Santerre et al., Gene 30: 147
(1984)). Ytterligere seleksjonerbare gener inkluderer trpB, som tillater cellene å benytte indol i stedet for tryptofan; hisD, som tillater cellene å benytte histinol i stedet for histidin (Hartman et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85: 8047 (1988)); og ODC (ornitindekarboksylase), som gir resistens mot ornitin dekarboksylaseinhibitoren, 2-(difluormetyl)-DL-ornitin, DFMO (McConlogue (1987) i: Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory).
Som benyttet her, betyr uttrykkene "nukleinsyreskadende behandling" og "nukleinsyreskadende middel" ethvert behandlingsregime som direkte eller indirekte skader nukleinsyre (for eksempel DNA, cDNA, genomisk DNA, mRNA, tRNA og rRNA). Spesifikke eksempler på slike midler er alkyleringsmidler, nitrosoureaer, antimetabolitter, plantealkaloider, planteekstrakter og radioisotoper. Spesifikke eksempler på midler inkluderer også nukleinsyreskadende medikamenter, for eksempel 5-fluoruracil (5-FU), capecitabin, S-l (Tegafur, 5-klor-2,4-dihydroksypyridin og oksonsyre), 5-etynyluracil, arabinosylcytosin (ara-C), 5-azacytidin (5-AC), 2',2'-difluor-2'-deoksycytidin (dFdC), purin antimetabolitter (merkaptopurin, azatiopurin, tioguanin), gemcitabin hydroklorid (Gemzar), pentostatin, allopurinol, 2-fluor-arabinosyl-adenin (2F-ara-A), hydroksyurea, svovelsennep (biskloretylsulfid), mekloretamin, melfalan, klorambucil, cyklofosfamid, ifosfamid, tiotepta, AZQ, mitomycin C, dianhydrogalaktitol, dibromoducitol, alkylsulfonat(busulfan), nitrosoureaer (BCNU, CCNU, 4-metyl CCNU eller ACNU), prokarbazin, dekarbazin, rebeccamycin, antracykliner som doksorubicin (adriamycin, ADR), daunorubicin (Cerubicin), idarubicin (Idamycin) og epirubicin (Ellence), antracyklinanaloger som mitoksantron, actinimycin D, ikke-interkalerende topoisomeraseinhibitorer som epipodofyllotoksiner (etoposid = VP16, teniposid = VM-26), podofylotoksin, bleomycin (Bleo), pepleomycin, forbindelser som gir addukter med nukleinsyre inkludert platinaderivater (for eksempel cisplatin (CDDP), transanalog av cisplatin, karboplatin, iproplatin, tetraplatin og oksaliplatin), kamptotecin, topetecan, irinotecan (CPT-11) og SN-38. Spesifikke eksempler på nukleinsyreskadende behandling inkluderer stråling (for eksempel ultrafiolett), infrarød (IR), eller alfa-, beta- eller gammastråling) og omgivelsessjokk (for eksempel hypertermi).
Som anvendt her, betyr uttrykkene "antiproliferativ behandling" og "antiproliferativt middel" ethvert behandlingsregime som direkte eller indirekte inhiberer proliferering av en celle, virus, bakterie eller en annen unicellulær eller multicellulær organisme, uansett hvorvidt eller ikke behandlingen eller middelet skader nukleinsyren. Spesielle eksempler på antiproliferative midler er antitumor- og antivirale medikamenter som inhiberer celleproliferering eller virusproliferering eller -replikering. Spesifikke eksempler er blant annet cyklofosfamid, azatioprin, cyklosporin A, prednisolon, melfalan, klorambucil, mekloretamin, busulfan, metotreksat, 6-merkaptopurin, tioguanin, cytosinarabinosid, taksol, vinblastin, vincristin, doksorubicin, aktinomycin D, mitramycin, karmustin, lomustin, semustin, streptozotocin, hydroksyurea, cisplatin, mitotan, prokarbazin, dakarbazin og dibrommannitol. Som antiproliferative midler som forårsaker nukleinsyrereplikeringsfeil og inhibering av nukleinsyrereplikering, kan nevnes nukleosid- og nukleotidanaloger (for eksempel AZT eller 5-AZC).
Oppfinnelsens peptider og peptidomimetika kan også øke den anticelleproliferative aktivitet av mikrotubule stabiliserende eller -destabiliserende midler som vinca alkaloider (vinblastin = VLB, vincristin = VCR, vinoelbin = VRLB, vinflunin = VFL) og taksaner (paklitaksel og docetaksel=taksoter). Således kan slike midler i tillegg inkluderes i preparatene ifølge oppfinnelsen og benyttes i metodene ifølge oppfinnelsen.
Celler som kan behandles med forbindelsene ifølge oppfinnelsen inkluderer en hvilken som helst celle hvis proliferering ønskes inhibert eller forhindret in vitro, ex vivo eller in vivo. Spesielle målceller viser en kortere enn normal cellesyklus Gl-kontrollpunkttid eller har en forringet cellesyklus med et kontrollpunkt slik at cellene trer ut av Gl-kontrollpunktet før tilstrekkelig tid er gått med for å fullstendiggjøre nukleinsyrereparasjonen. Kandidatceller inkluderer derfor celler som hurtig prolifererer uansett om cellene er normale eller abnormale. Spesifikke eksempler er benigne eller tumorøse, metastatiske eller ikke-metastatiske celler. Ytterligere kandidatceller kan identifiseres ved å måle deres prolifereringshastighet eller tidslengden cellene forblir i Gl-fasen. Kandidatceller kan også identifiseres ved å bringe en testcelle i kontakt med en forbindelse ifølge oppfinnelsen alene, eller i kombinasjon med en nukleinsyreskadende behandling, og bestemme hvorvidt denne celle viser redusert proliferering eller øket celledød eller apoptose/katastrofe.
Oppfinnelsens forbindelser er derfor anvendbare for å inhibere celleproliferering in vitro, ex vivo og in vivo. Som sådanne kan individer som har en risiko for å ha en lidelse eller en fysiologisk tilstand som karakteriseres ved abnormale eller uønsket celleproliferering eller celleoverlevelse, eller abnormale eller defekt celledifferensiering, behandles med en forbindelse ifølge oppfinnelsen alene eller i kombinasjon med en behandling som direkte eller indirekte forårsaker nukleinsyreskade eller antiproliferativ behandling.
Således blir det ifølge oppfinnelsen tilveiebrakt in vitro metoder for å inhibere celleproliferering, in vitro metoder for å øke sensitiviteten for en celle overfor et nukleinsyreskadende middel eller en behandling, og in vitro metoder for å øke nukleinsyreskade på en celle in vitro, ex vivo og in vivo. I en utførelsesform inkluderer in vitro metoden å bringe en celle (for eksempel en dyrket celle eller en celle som er tilstede i et individ) i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetika ifølge oppfinnelsen, tilstrekkelig til å inhibere proliferering av cellen. I en annen utførelsesform inkluderer in vitro metoden å bringe cellene i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetika ifølge oppfinnelsen, tilstrekkelig til å øke sensitiviteten hos cellen mot et nukleinsyreskadende middel eller en behandling. I nok en utførelsesform inkluderer in vitro metoden å bringe en celle i kontakt med en mengde av peptid eller peptidomimetika ifølge oppfinenlsen, tilstrekkelig til å øke nukleinsyreskaden i cellen. I forskjellige aspekter inkluderer in vitro metoden videre å bringe cellen i kontakt med et nukleinsyreskadende middel eller eksponere cellen til en nukleinsyreskadende behandling.
Videre tilveiebringes det anvendelser av en mengde av peptid eller peptiodomimetikum for behandling av en celleproliferativ lidelse eller differensiativ lidelse hos et individ inkludert tilstander som karakteriseres ved uønsket celleproliferering eller celleoverlevelse, tilstander som karakteriseres ved defektiv eller aberrant apoptose, tilstander som karakteriseres ved aberrant eller defektiv celleoverlevelse, så vel som tilstander som karakteriseres ved aberrant eller defektiv celledifferensiering. I en utførelsesform inkluderer en anvendelse mengde av et peptid eller peptidomimetika ifølge oppfinnelsen, effektivt til å behandle den celleproliferative lidelse. I et ytterligere aspekt er mengden tilstrekkelig til å forbedre individets tilstand. I spesielle aspekter inkluderer forbedring, i i det minste en del av målcellene (for eksempel abnormal prolifererende celler), redusert celleproliferering, redusert antall celler, inhibering av økningen av antall celler, øket apoptose, eller redusert overlevelse. Individet kan gis en forbindelse ifølge oppfinnelsen før, samtidig med eller etter administrering av en behandling som inhiberer celleproliferering. I tillegg er, spesielle aspekter, i det minste en del av cellene av den celleproliferative lidelse lokalisert i blod, bryst, lunge, tyroid, hode eller hals, hjerne, lymfe, fordøyelseskanal, genito-urinærkanal, nyre, pankreas, lever, ben, muskel eller hud.
I en ytterligere utførelsesform inkluderer en anvendelse administrering av en mengde forbindelser til individet for behandling av fast tumor. I nok en utførelsesform inkluderer anvendelsen administrering av en mengde av forbindelsen til individet for å behandle flytende tumor. Individet med tumoren kan gis oppfinnelsens forbindelse før, samtidig med eller etter en annen antitumorterapi.
Som benyttet her, betyr uttrykkene "proliferativ lidelse" og "proliferativ tilstand" en hvilken som helst patologisk eller ikke-patologisk, fysiologisk tilstand som karakteriseres ved feilaktig eller uønsket proliferering (for eksempel av en celle, virus, bakterie, fungus, osv.). Uttrykket "celleproliferativ lidelse" og "celleproliferativ tilstand" betyr en hvilken som helst patologisk eller ikke-patologisk, fysiologisk tilstand som karakteriseres ved feilaktig eller uønsket celleproliferering og inkluderer også tilstander som karakteriseres ved uønsket celleproliferering eller celleoverlevelse (for eksempel på grunn av defektiv apoptose), tilstander som karakteriseres ved defektiv eller feilaktig apoptose, så vel som tilstander som karakteriseres ved feilaktig eller ønsket celleoverlevelse. Uttrykket "differensiativ lidelse" betyr enhver patologisk eller ikke-patologisk, fysiologisk tilstand som karakteriseres ved feilaktig eller defektiv differensiering.
Proliferative eller differensiative lidelser som er egnet for behandling, inkluderer sykdommer og ikke-patologiske, fysiologiske tilstander, både benigne og neoplastiske, som karakteriseres ved abnormal eller uønsket celleantall, cellevekst eller celleoverlevelse. Slike lidelser eller tilstander kan derfor utgjøre en sykdomstilstand og inkludere alle typer cancerøs vekst eller onkogeniske prosesser, metastatiske vev eller malignanttransformerte celler, vev eller organer, eller kan være ikke-patologisk, dvs. et avvik fra normalt, men som ikke typisk assosieres med sykdom. Et spesifikt eksempel på en ikke-patologisk tilstand som kan behandles ifølge oppfinnelsen, er vevgjenvekst fra sårheling som resulterer i arrdannelse.
Celler med proliferativ eller differensiativ lidelse kan aggregeres i en cellemasse eller dispergeres. Uttrykket "fast tumor" henviser til neoplasier eller metastaser som karakteristisk aggregerer og danner en masse. Spesielle eksempler inkluderer viserale tumorer som gastriske eller koloncancer, hepatomer, venalkarcinomer, lunge- og hjernetumorer/cancere. En "flytende tumor" henviser til neoplasier i det hematopoetiske system som lymfomer, myelomer og leukemier, eller neoplasier som er diffuse av art, da de ikke typisk danner noen fast masse. Spesielle eksempler på leukemier inkluderer akutt og kronisk lymfoblastisk, myeolblastisk og multippel myelom.
Slike lidelser inkluderer neoplasmer eller cancere, som kan påvirke så å si enhver celle eller vevtype, for eksempel karcinom-, sarkom-, melanom- eller metastatiske lidelser eller hematopoietiske, neoplastiske lidelser. En metastatisk tumor kan stamme fra et antall av primærtumortyper, inkludert, men ikke begrenset til, bryst, lunge, tyroid, hode og hals, hjerne, lymfoid, gastrointestinal (munn, øsofagus, mage, tynntarm, kolon, rektum), genito-urinærkanalen (uterus, ovari, cervix, blære, testikkel, penis, prostata), nyre, pankreas, lever, ben, muskel, hud, osv.
Karcinomer henviser til malignitet i epitel- eller endokrint vev og inkluderer luftveissystemkarcinomer, gastrointestinalsystemkarcinomer,
genitalurinærsystemkarcinomer, brystkarcinomer, prostatakarcinomer, endokrinsystemkarcinomer og melanomer. Eksempel på karcinomer inkluderer de som dannes fra cervix, lunge, prostata, bryst, hode og hals, kolon, lever og ovarie. Uttrykket inkluderer også karcinosarkomer som for eksempel inkluderer maligne tumorer bestående av karcinomatøst og sarkomatøst vev. Adenokarcinomer inkluderer et karcinom av et glandulærvev, eller der tumoren danner en kjertellignende struktur.
Sarkomer refererer til maligne tumorer av mesenchymal celleopprinnelse. Eksempler på sarkomer er for eksempel lymfosarkom, liposarkom, osteosarkom og fibrosarkom.
Som benyttet her, betyr uttrykket "hematopoietisk proliferativ lidelse" en sykdom som involverer hyperplastiske/neoplastiske celler av hematopoietisk opprinnelse, for eksempel som stammer fra myeoloide, lymfoide eller erytroide linjer, eller forløperceller derfor. Typisk stammer sykdommen fra dårlig differensierte, akutte leukemier, for eksempel erytroblastisk leukemi og akutt megakaryoblastisk leukemi. Ytterligere eksempler på myeloide lidelser inkluderer, men er ikke begrenset til, akutt promyeloid leukemi (APML), akutt myelogen leukemi (AML) og kronisk myelogen leukemi (CML); lymfoid malignanser inkluderer, men er ikke begrenset til, akutt lymfoblastisk leukemi (ALL), som inkluderer B-linje ALL og T-linje ALL, kronisk lymfocytisk leukemi (CLL), prolymfocytisk leukemi (PLL), hårcelleleukemi (HLL) og Waldenstrøms makroglobulinemi (WM). Ytterligere, maligne lymfomer inkluderer, men er ikke begrenset til, ikke-Hodgkin lymfom og varianter derav, perifere T-cellelymfomer, adult T-celleleukemi/lymfom (ATL), kutane T-cellelymfomer (CTCL), storgranulær lymfocytisk leukemi (LGF), Hodgkins sykdom og Reed-Sternberg sykdom.
Behandlinger for bruk i kombinasjon med oppfinnelsens forbindelser inkluderer hvilke som helst antiproliferative, nukleinsryeskadende eller antitumorbehandling som beskrevet her eller kjent i teknikken. For eksempel kan en anticelleproliferativ eller antitumorbehandling omfatte strålingsbehandling eller kirurgisk reseksjon eventuelt i kombinasjon med medikamentbehandling. Behandlingen kan omfatte administrering av kjemisk substans som en radioisotop, et medikament som et kjemoterapeutisk middel, eller genetisk terapi som et antionkogen (for eksempel Rb, DCC, p53, osv.) et dominant negativt onkogen eller en antisens til et onkogen. Forbindelsene kan administreres før, samtidig med eller etter behandlingsprotokollene. For eksempel kan et kandidatindivid for anticelleproliferativ terapi (for eksempel strålingsterapi, kjemoterapi, genterapi, kirurgisk reseksjon, osv.) administrere en forbindelse ifølge oppfinnelsen før det initieres en anticelleproliferativ terapi. Således tilveiebringes det profylaktiske behandlingsmetoder.
Uttrykket "individ" henviser til dyr, særlig pattedyr som primater (mennesker, aper, gibboner, sjimpanser, orangutanger, makaker), husdyr (hunder og katter), gårdsdyr (hester, kveg, geiter, sauer, griser) og forsøksdyr (mus, rotter, kanin, marsvin). Individer inkluderer dyresykdomsmodeller (for eksempel tumorbærende mus).
Individer som er egnet for behandling inkluderer de som undergår eller er kandidater for behandling for en proliferativ eller differensiativ lidelse eller (for eksempel antitumorterapi). Ytterligere kandidatindivider inkluderer for eksempel individer som risikerer å utvikle en celleproliferativ lidelse. Oppfinnelsens anvendelser er derfor anvendelige for behandling av et individ som risikerer utvikling av en celleproliferativ lidelse, men som ennå ikke har vist åpne symptomer av denne. Et risikoindivid kan identifiseres som å ha en genetisk predisposisjon eller en familiehistorie for utvikling av en celleproliferativ lidelse. For eksempel er individer med et aktivert onkogen eller med en mutasjon eller delesjon av et tumorsuppressorgen, kandidatindivider. Risikoindivider kan derfor identifiseres ved bruk av genetisk rutinescreening med henblikk på nærværet av den genetiske lesjon, eller skaden i individets familiehistorie for å etablere at de er i risiko når det gjelder denne lidelse. Et spesielt eksempel på et risikoindivid vil være et med en familiehistorie eller andre genetiske karakteristika som indikerer predisposisjon for cancer hvori de neoplastiske eller medikamentresistente neoplastiske celler uttrykker CD40. Et spesielt, spesifikt eksempel på en genetisk sykdom er retinoblastom som forårsakes av en defekt i Rb-tumorsuppresorgenet.
Mengder som kan administreres er typisk "effektive mengder" eller "tilstrekkelige mengder", hvilket vil si mengder som er tilstrekkelige til å gi den ønskede effekt. Effektive mengder inkluderer derfor en eller flere av: redusert celleproliferering, redusert antall celler, inhibering av øket proliferering, inhibering av øket antall celler, økning av apoptose, eller redusert overlevelse, av i det minste en del av cellene omfattende de prolifererende celler (for eksempel minst noen av målcellene). Der det for eksempel er ønskelig å inhibere celleproliferering, vil således en effektiv mengde være en mengde som detekterbart reduserer celleproliferering eller antallet prolifererende celler, eller øker celleapoptose eller reduserer celleoverlevelse. Mengden kan derfor være tilstrekkelig til å redusere målcelleantallet, stabilisere målcelleantallet eller inhibere økninger i målcelleantallet. Der for eksempel lidelsen omfatter en fast tumor, er en reduksjon av tumorstørrelsen, stabilisering av tumorstørrelsen eller prevensjon av ytterligere vekst av tumoren, og minst en del av tumoren (for eksempel inhibering av veksten av 5 til 10% av cellene, eller 10 til 20% eller mer av cellene omfattende tumormassen) et tilfredsstillende, klinisk sluttpunkt. Der lidelsen omfatter en flytende tumor, er reduksjon av antallet tumorceller, stabilisering av tumorcelleantallet eller inhibering av ytterligere økning av tumorcelleantallet, av minst en subpopulasjon av tumorcellene (for eksempel inhibering av veksten av 5 til 10% av cellene, eller 10 til 20% eller mer av cellene) et tilfredsstillende klinisk sluttpunkt.
I tillegg kan mengder som anses effektive forhindre eller inhibere progresjonen av tilstanden eller lidelsen. For eksempel kan visse tumorer, når de skrider frem, bli økende aggressive inkludert forløperne til metastatiske former. Således anses mengder også som effektive når de resulterer i en reduksjon eller prevensjon av tumorer fra å bli økende aggressive eller fra metastasedannende. I henhold til dette er inhibering eller prevensjon av en forverring av lidelsen eller tilstanden, for eksempel stabilisering av tilstanden, et ytterligere, tilfredsstillende klinisk sluttpunkt.
Undersøkelse av en biologisk prøve inneholdende en flytende tumor (for eksempel blod eller en vevprøve) kan påvise hvorvidt tumorcellemassen eller tumorcelleantallet er redusert, eller det inntrådt inhibering av tumorcelleproliferering. For en fast tumor kan invasive og ikke-invasive billedgivende metoder sikre en reduksjon i tumorstørrelse, eller inhibering av økningen av tumorstørrelse. Synkende reseptorantall av en reseptorpositiv tumor kan benyttes for å bedømme reduksjonen eller inhiberingen av tumorcelleproliferering. Mengder av hormon av en hormonproduserende tumor, for eksempel bryst-, testikkel- eller ovariecancer, kan benyttes for å bedømme en reduksjon eller inhibering av prolifereringen av tumoren. Effektive mengder kan også objektivt eller subjektivt redusere eller minske alvoret eller frekvensen av symptomer forbundet med lidelsen eller tilstanden. For eksempel er en mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen som reduserer smerte, kvalme eller annet ubehag, eller øker appetitten eller det subjektive velværet, et tilfredsstillende, klinisk sluttpunkt.
Effektive mengder inkluderer også en reduksjon i mengden (for eksempel dosen) eller behandlingsfrekvensen med en annen protokoll, noe som anses som et tilfredsstillende, klinisk sluttpunkt. For eksempel kan en cancerpasient som er behandlet med en forbindelse ifølge oppfinnelsen, kreve mindre nukleinsyreskadende behandling for å inhibere cancercelleproliferering. I dette eksempel vil en effektiv mengde inkludere en mengde som reduserer dosefrekvensen eller mengden av et nukleinsyreskadende middel som individet gis sammenlignet med dosefrekvensen eller mengden som gis uten behandling med en forbindelse ifølge oppfinnelsen.
Anvendelsene ifølge oppfinnelsen som fører til en forbedring av individets tilstand eller en terapeutisk fordel, kan være av relativt kort varighet, for eksempel kan forbedringen vare noen timer, dager eller uker, eller forlenges over et lengre tidsrom, for eksempel måneder eller år. En effektiv mengde behøver ikke være en fullstendig ablasjon av et hvilket som helst eller alle symptomer på tilstanden eller lidelsen. Således blir et tilfredsstillende, klinisk sluttpunkt for en effektiv mengde oppnådd der det er en subjektiv eller objektiv forbedring av individets tilstand, bestemt ved bruk av et hvilket som helst av de ovenfor nevnte kriterier eller andre kriterier som er kjent i teknikken, egnet for bestemmelse av status av en lidelse eller tilstand, over et kort eller langt tidsrom. En mengde som er effektiv til å gi en eller mer fordelaktige effekter, som beskrevet her eller kjent i teknikken, anses som en "forbedring" av individets tilstand eller "terapeutisk fordelaktig" for individet.
En effektiv mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen kan bestemmes basert på dyrestudier eller eventuelt i humankliniske prøver. Fagmannen på området vil erkjenne at forskjellige faktorer kan påvirke den dosering og timing som er nødvendig for å behandle et spesielt individ inkludert for eksempel den generelle helse, alder eller kjønn, videre tilstandens alvor, tidligere behandling, tilbøyelighet til uønskede bivirkninger, klinisk ønsket resultat og nærværet av andre lidelser eller tilstander. Slike faktorer kan påvirke doseringen og den timing som er nødvendig for å gi en mengde tilstrekkelig til terapeutisk fordel. Doseregimer må også ta i betraktning farmakokinetikk, dvs. det farmasøytiske preparats absorpsjonshastighet, biotilgjengelighet, metabolisme og klaring (se for eksempel Egleton (1997) "Bioavailability and transport of peptides and peptide drugs into the brain" Peptides 18: 1431-1439; og Langer (1990) Science 249: 1527-1533). I tillegg kan doser eller behandlingsprotokoller skreddersys for individet eller modifiseres basert på farmakogenomiske data.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan derfor administreres alene eller som et farmasøytisk preparat, systemisk, regionalt (for eksempel rettet mot et organ eller et vev, for eksempel ved injeksjon i portalvenen for behandling av en celleproliferativ lidelse i leveren), eller lokalt (for eksempel direkte i en tumormasse), i henhold til en hvilken som helst protokoll eller vei som gir den ønskede effekt. Forbindelsene og de farmasøytiske preparater kan administreres som en enkelt eller en multippel dose hver dag (for eksempel ved en lav dose) eller intermittent (for eksempel hver annen dag, en gang pr. uke, osv. i en høyere dose). Forbindelsen og de farmasøytiske preparater kan administreres via inhalering (for eksempel intratrakealt), oralt, intravenøst, intraarterielt, intravaskulært, intratekalt, intraperitonealt, intramuskulært, subkutant, intrakavitært, transdermalt (for eksempel topisk), transmukosalt (for eksempel bukalt, via blære, vaginalt, uterint, rektalt eller nasalt), ved flere administrasjoner, opprettholdt frigivning (for eksempel gradvis perfusjon med tiden) eller som enkeltbolus. Implanterbare innretninger inkludert mikrofabrikerte innretninger, for administrering av medikamenter er velkjent og også anvendelige for avlevering av forbindelser ifølge oppfinnelsen, til et individ.
Forbindelser kan administreres intravenøst (IV) og vil utgjøre rundt 0,01 mg/time til rundt 1,0 mg/time over flere timer (karakteristisk 1, 3 eller 6 timer), som kan repeteres en eller flere uker i intermittente sykler. Tenker man på høyere doseringer (for eksempel i området opp til rundt 10 ug/ml) kan disse benyttes, særlig når medikamentet administreres til et bortgjemt sete og ikke inn i blodstrømmen, for eksempel i et kroppshulrom eller i lumen av et organ, for eksempel det cerebrospinale fluid (CSF).
Oppfinnelsen tilveiebringer derfor videre farmasøytiske preparater. Slike farmasøytiske preparater er brukbare for administrering til et individ in vivo eller ex vivo, og for eksempel for behandling av et individ ved oppfinnelsens forbindelser.
Som benyttet her, inkluderer uttrykket "farmasøytisk akseptabel" og "fysiologisk akseptabel" oppløsningsmidler (vandige eller ikke vandige), oppløsninger, emulsjoner, dispergeringsmedia, belegg, isotonisk og absorpsjonsfremmende eller forsinkede midler, kompatible med farmasøytisk administrering. Et "farmasøytisk preparat" eller en "farmasøytisk formulering" henviser derfor til en blanding som er egnet for farmasøytisk bruk i et individ. De farmasøytiske preparater og formuleringer inkluderer en mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, for eksempel en effektiv mengde av et peptid eller peptidomimetikum, en nukleinsyre som koder disse, en vektor eller en celle ifølge oppfinnelsen, og en farmasøytisk eller fysiologisk akseptabel bærer.
Farmasøytiske preparater kan formuleres til å være kompatible med en spesiell administreringsvei, systemisk eller lokal. Således inkluderer farmasøytiske preparater bærere, diluenter eller eksipienter som er egnet for administrering via forskjellige veier.
Formuleringer eller enteral (oral) administrering kan inneholdes i en tablett (belagt eller ikke belagt), kapsel (hard eller myk), mikrosfære, emulsjon, pulver, granul, krystall, suspensjon, sirup eller elixir. Konvensjonelle, ikke-toksiske faste bærere som for eksempel inkluderer farmasøytiske kvaliteter av mannitol, laktose, stivelse, magnesiumstearat, natriumsakkarid, talkum, cellulose, glukose, sukrose, magnesiumkarbonat, kan benyttes for å fremstille faste formuleringer. Ytterligere aktive forbindelser (for eksempel preserveringsmidler, antibakterielle midler, antivirale eller antifugale midler) kan også innarbeides i formuleringen. En flytende formulering kan også benyttes for enteral administrering. Bæreren kan velges fra forskjellige oljer, inkludert petroleum, animalsk, vegetabilsk eller syntetisk olje, for eksempel jordnøtt-, soyabønne-, mineral- eller sesamolje. Egnede farmasøytiske eksipienter inkluderer for eksempel stivelse, cellulose, talkum, glukose, laktose, sukrose, gelatin, malt, ris, mel, kalk, silikagel, magnesiumstearat, natriumstearat, glyserolmonostearat, natriumklorid, tørket skummet melk, glycerol, propylenglykol, vann eller etanol.
Farmasøytiske preparater for enteral, parenteral eller transmukosal avlevering inkluderer for eksempel vann, saltoppløsning, fosfatbufret saltoppløsning, Hanks oppløsning, Ringers oppløsning, dekstrose/saltoppløsning og glukoseoppløsninger. Formuleringene kan inneholde hjelpestoffer for tilnærming til fysiologiske betingelser som buffermidler, tonisitetsjusterende midler, fuktemidler, detergenter og lignende. Additiver kan også inkludere ytterligere aktive bestanddeler som bakterisider eller stabilisatorer. For eksempel kan oppløsningen inneholde natriumacetat, -laktat, -klorid, kaliumklorid, kalsiumklorid, sorbitanmonolaurat eller dietanolaminoleat. Ytterligere parenterale formuleringer og metoder er beskrevet av Bai (1997) J. Neuroimmunol. 80: 65-75; Warren (1997) J. Neurol. Sei. 152:31 - 38; og Tonegawa (1997) J. Exp. Med. 186: 507-515. Parenteralpreparatene kan være anordnet i ampuller, engangssprøyter eller multippeldoseampuller av glass eller plast.
Farmasøytiske preparater for intradermal eller subkutan administrering kan inkludere en steril fortynner som vann, saltoppløsning, fikserte oljer, polyetylenglykoler, glycerin, propylenglykol eller andre syntetiske oppløsningsmidler; antibakterielle midler som benzylalkohol eller metylparabener; antioksidanter som askorbinsyre, glutation eller natriumbisulfitt; chelateringsmidler som etylendiamintetraeddiksyre; buffere som acetater, sitrater eller fosfater og midler for justering av tonisiteten som natriumklorid eller dekstrose.
Farmasøytiske preparater for injeksjon inkluderer vandige oppløsninger (der forbindelsene er vannoppløselige) eller dispersjoner og sterile pulvere for ekstemporanfremstilling av sterile, injiserbare oppløsninger eller dispersjoner. For intravenøs administrering inkluderer egnede bærere fysiologisk saltoppløsning, bakteriostatisk vann, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) eller fosfatbufret saltoppløsning (PBS). Bæreren kan være et oppløsningsmiddel eller et dispergeringsmedium inneholdende for eksempel vann, etanol, polyol (som glycerol, propylenglykol og flytende polyetylenglykol, og lignende) og egnede blandinger derav. Fluiditeten kan for eksempel opprettholdes ved bruk av et belegg som leeitin, ved opprettholdelse av en nødvendig partikkelstørrelse når det gjelder en dispersjon og ved bruk av surfaktanter. Antibakterielle og antifungale midler inkluderer for eksempel parabener, klorbutanol, fenol, askorbinsyre og timerosal. Isotoniske midler er for eksempel sukkere, polyalkoholer som manitol, sorbitol eller natriuimklorid, og kan inkluderes i preparatet. De resulterende oppløsninger kan pakkes for bruk per se, eller lyofiliseres, der det lyofiliserte preparat eventuelt kan kombineres med en steril oppløsning før administrering.
Farmasøytisk akseptable bærere kan inneholde en forbindelse som stabiliserer, øker eller forsinker absorberingen eller klaringen. Slike forbindelser inkluderer for eksempel karbohydrater som glukose, sukrose eller dekstraner; lavmolekylvektsproteiner; preparater som reduserer klaringen eller hydrolysen av peptider; eller eksipienter eller andre stabilisatorer og/eller buffere. Midler som forsinker adsorpsjon inkluderer for eksempel aluminiummonostearat og gelatin. Detergenter kan også benyttes for å stabilisere eller å øke eller å redusere absorpsjonen av det farmasøytiske preparat, inkludert liposomale bærere. For beskyttelse mot digestering kan forbindelsene kompleksdannes med et preparat for å gjøre det resistent mot sur og enzymatisk hydrolyse, eller forbindelsen kan kompleksdannes i en egnet resistent bærer som et liposom. Midler for å beskytte forbindelser mot digestering er velkjent i teknikken (se for eksempel Fix (1996) Pharm Res. 13: 1760-1764; Samanen (1996) J. Pharm. Pharmacol. 48: 119-135; og US patent 5.391.377 som beskriver lipidpreparater for oral avlevering av terapeutiske midler).
For transmukosal eller transdermal administrering blir det benyttet penetranter som er egnet for barriere som skal gjennomtrenges. Slike penetranter er generelt nevnt i teknikken og inkluderer for eksempel, for transmukosal administrering, detergenser, gallesalter og fusidinsyrederivater. Transmukosal administrering kan skje via nesespray eller suppositorier (se for eksempel Sayani (1996) "Systemic delivery of peptides and proteins across absoptive mucosae" Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 13: 85-184). For transdermal administrering kan den aktive forbindelse formuleres til salver, lotioner, geler, kremer som velkjent i teknikken. Transdermale avleveringssystemer kan også oppnås ved bruk av puter.
For inhaleringsavlevering kan den farmasøytiske formulering administreres i form av en aerosol eller tåke. For aerosol administrering, kan forbindelsen tilføres i finoppdelt form sammen med en surfaktant og et drivmiddel. I en annen utførelsesform er innretningen for avlevering av formuleringen til respiratorisk vev den der formuleringen fordamper. Et annet avleveringssystem som er kjent i teknikken er avlevering av tørrpulver aerosoler, væskeavleveringssystemer, inhalatorer, luftstråleforstøvere og drivmiddelsystemer (se for eksempel Patton (1998) Biotechniques 16: 141-143; Dura Pharmaceuticals, San Diego, CA; Aradigm, Hayward, CA; Aerogen Santa Clara, CA og Inhale Therapeutic Systems; San Carlos, CA).
Det kan benyttes bionedbrytbare, biokompatible polymerer som for eksempel etylenvinylacetat, polyanhydrider, polyglykolsyre, kollagen, polyortoestere og polyeddiksyre. Metoder for fremstilling av slike formuleringer er velkjente for fagmannen. Materialene kan også oppnås kommersielt fra for eksempel Alza Corporation og Nova Pharmaceuticals, Inc. Liposomale suspensjoner (inkludert liposomer innsiktet på celler eller vev ved bruk av antistoffer eller virale belegningsproteiner) kan også benyttes som farmasøytisk akseptable bærere. Disse kan fremstilles i henhold til metoder som er i og for seg kjente, for eksempel som beskrevet i US patent nr. 4.235.871; 4.501.728; 4.522.811; 4.837.028; 6.110.490; 6.096.716; 5.283.185; 5.279.833; Akimaru (1995) Cytokines Mol. Ther. 1: 197-210; Alving (1995) Immunol. Rev. 145: 5-31; og Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9: 467). Bionedbrytbare mikrosfærer eller kapsler eller andre bionedbrytbare polymerkonfigurasjoner som er i stand til å opprettholde avlevering av små molekyler, inkludert peptider, er velkjente (se for eksempel Putney (1998) Nat. Biotechnol. 16: 153-157). Forbindelser ifølge oppfinnelsen kan innarbeides i miceller (se for eksempel Suntres (1994) J. Pharm. Pharmacol. 46: 23-28, Woodle (1992) Pharm. Res. 9: 260-265). Peptider kan festes til overflaten av lipidmonosjiktet eller bisjikt. For eksempel kan peptider festes til hydrazid-PEG-(distearoylfosfatidyl)etanolaminholdige liposomer (se for eksempel Zalipsky (1995) Bioconjug. Chem. 6: 705-708). Alternativt kan en hvilken som helst form for lipidmembran, for eksempel et plant lipidmembran eller cellemembranen av en intakt celle, for eksempel et rødt blodlegeme, benyttes. Liposomale og lipidholdige formuleringer kan avleveres på en hvilken som helst måte, inkludert for eksempel intravenøs, transdermal (se for eksempel Vutla (1996) J. Pharm. Sei. 85: 5-8), transmukosal eller oral administrering.
En farmasøytisk akseptabel formulering kan omfatte rundt 1 til 99, 9% av den aktive bestanddel (for eksempel peptid eller peptidomimetikum). De farmasøytiske preparater kan steriliseres ved konvensjonelle, velkjente steriliseringsteknikker, eller kan sterilfiltreres.
Ytterligere farmasøytiske formuleringer og avleveringssystemer er velkjente i teknikken og er anvendelige ved metodene og preparatene ifølge oppfinnelsen (se for eksempel Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18. utgave, Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12. utgave, Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa., (1993); og Poznansky et al., Drug Delivery Systems, R.L. Juliano, ed., Oxford, N.Y. (1980), s. 253-315).
De farmasøytiske formuleringer kan pakkes i enhetsdoseform for enkel administrering og enhetlig dosering. "Enhetsdoseform" slik uttrykket her benyttes, henviser til fysisk diskrete enhetsdoser for administrering til individet som skal behandles; hver enhet inneholder en på forhånd bestemt mengde forbindelse som gir en ønsket effekt i kombinasjon med en farmasøytisk bærer eller eksipient.
Oppfinnelsen tilveiebringer videre sett som inkluderer oppfinnelsens forbindelser og farmasøytiske formuleringer derav, eventuelt pakket i egnet emballasje. Et sett inkluderer karakteristisk en merkelapp eller et pakkeinnlegg som inkluderer en beskrivelse av komponentene eller instruksjoner for bruk in vitro, in vivo eller ex vivo, av forbindelsene som foreligger. Et sett kan inneholde en kolleksjon av slike komponenter, for eksempel to eller flere forbindelser ifølge oppfinnelsen eller en forbindelse ifølge oppfinnelsen i kombinasjon med et nukleinsyreskadende middel eller et antiproliferativt middel.
Uttrykket "emballasjemateriale" henviser til en fysisk struktur som inneholder settets komponenter. Lnnpakningsmaterialet kan holde komponentene sterile og kan være laget av materialer som vanligvis benyttes for slike formål (for eksempel papir, bølgefibere, glass, plast, folie, ampuller, osv.). Merkelappen eller pakkeinnlegget kan inkludere egnet, skrevet instruksjon. Sett ifølge oppfinnelsen kan derfor i tillegg inkludere merkelapper eller instruksjoner for bruk av settkomponentene ved en hvilken som helst metode ifølge oppfinnelsen. Instruksjoner kan inkludere instruksjoner for å gjennomføre en hvilken som helst av fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen som her beskrevet, inkludert behandlings-, detekterings-, håndterings- eller diagnostiske metoder. Således kan for eksempel et sett inkludere en forbindelse ifølge oppfinnelsen i en pakke, eller en dispenser, sammen med instruksjoner for administrering av forbindelser i en behandlingsmetode ifølge oppfinnelsen. Instruksjoner kan i tillegg inkludere indikasjoner på et tilfredsstillende, klinisk sluttpunkt, eller hvilke som helst ugunstige symptomer som kan inntre, eller ytterligere informasjon som er krevet av regulatoriske myndigheter som "Food and Drug Administration" når det gjelder anvendelse på menneskelige individer.
Instruksjonene kan være "trykket materiale", for eksempel på papir eller papp i eller festet til settet, eller på en merkelapp som er festet til settet eller emballasjen, eller festet til en ampulle eller et rør inneholdende en av settets komponenter. Instruksjoner kan i tillegg inkluderes i et datamaskinlesbart medium, for eksempel en diskett (floppydisk eller harddisk), optisk CD eller som CD- eller DVD-ROM/RAM, magnetbånd, elektriske lagringsmedia som RAM og ROM, IC tip og hydrider av disse som magnetiske/optiske lagringsmedia.
Oppfinnelsens sett kan i tillegg inkludere et buffermiddel eller et preserveringsmiddel eller et stabiliseringsmiddel i en farmasøytisk formulering. Hver komponent i settet kan være innelukket i en individuell beholder og alle de forskjellige beholdere kan foreligge innen en enkelt pakke. Oppfinnelsens sett kan være konstruert for kald lagring.
De følgende forkortelser er benyttet her:
Cha: Cykloheksyl-alanin
Phe-2,3,4,5,6-F: Fluorider er i posisjonene 2,3,4,5,6, på fenylresten av fenylalanin
F: Fluorid
Bpa: Benzoyl-fenylalanin
Nal(2): 2-Naftyl-alanyl
AIa(3-Bzt): (3-Benzotienyi)-alanin
NalO): 1-Naftyl-alanyl
Dph: Difenyl-alanin
Ala(tBu): t-Butyl-alanyl
CysflBu): t-Butyl-cystein
Phe-3,4,5-F: Fluorider er i posisjonene 3,4,5 av fenyl i fenylalanin
Phe-4CF3: CF3 befinner seg i posisjon 4 på fenylresten av fenylalanin
Phe-3Br,4CL5Br: Brom befinner seg i posisjon 3, klor i posisjon 4 og brom i posisjon 5 av fenyl i fenylalanin
Phe-4C1: Klor befinner seg ved posisjon 4 på fenyl I fenylalanin
PL P2, P3, P4, P5, P6, etc, og (PL P2, P3, P4, PS, P6, ete.); og P7, P8, P9, PIO,
PIL P12, etc, og (P7, P8, P9, PIO, PIL P12, etc.): sammenhengende sekvens av P1, P2, P3, P4, P5, P6, etc.; henholdsvis P7, P8, P9, PIO, Pl 1, P12.
Hvis ikke annet er sagt, har alle tekniske og vitenskapelige uttrykk som her benyttes, den samme betydning som vanligvis benyttes av fagmannen på det området oppfinnelsen tilhører. Selv om metoder og materialer tilsvarende ekvivalente det som er beskrevet her, kan benyttes ved gjennomføring eller testing av oppfinnelsen, er egnede metoder og materialer beskrevet her.
Som benyttet her, inkluderer entallsformer og som flertallsreferanser hvis ikke konteksten klart sier noe annet. Henvisning til for eksempel "en" inkluderer et antall forbindelser, og referansen til "en rest" eller "en aminosyre" inkluderer referanser til en eller flere rester og aminosyrer.
EKSEMPLER
Eksempel 1
Dette eksempel beskriver materialer og diverse metoder. Eksemplet beskriver altså sekvensene av analyserte peptider/peptidomimetika.
Kjemikalier os reagenser: Bleomycin ble ervervet fra Wako Pure Chemical Co.
(Osaka, Japan) og ble oppløst i destillert H20 til 10 mg/ml. Propidiumjodid (PI) og adriamycin ble ervervet fra Sigma (St. Louis, MO).
Cellekultur: En human T-celle leukemiavledet cellelinje, Jurkat, ble dyrket i RPMI 1640 (Sigma) supplert med 10% føtalt kalveserum (IBL: Immuno-Biological Laboratories, Gunma, Japan) ved 37°C/5% C02. Human pankreatiske canceravledet cellelinje, MIAPaCa2 ble dyrket i DMEM med 10% føtalt kalveserum ved 37°C/5% co2.
Cellesyklusanalyse: Cellesyklusstatusen for cellen behandlet med bleomycin eller adriamycin ble analysert ved strømningscytometri som beskrevet av Kawabe (1997) Nature 385: 454-458. Kort sagt ble to millioner celler resuspendert og inkubert i 200 ul Krishans oppløsning (0,1% natriumcitrat, 50 ug/ml PI, 20 ug/ml RNase A og 0,5% NP-40) i 1 time ved 4°C og analysert ved strømningscytometri, FACScan™ (Beckton Dickinson, Mountain View, CA) med programmet CELLQuest™ (Beckton Dickinson).
Eksempel 2
Dette eksempel beskriver data som antyder at den G2 abrogene aktivitet av forskjellige peptider, og virkningen av forskjellige sekvenspermutasjoner på aktiviteten, inkluderer virkningen av synkende sekvenslengde.
Strømningscytometrianalyse av G2 kontrollpunktabrogen ble gjennomført ved bruk av humanleukemi avledede Jurkat-cellelinjer. Kort sagt ble dyrkede celler behandlet med forskjellige doser peptid/peptidomimetika og 40 ug/ml bleomycin i 24 timer. DNA av cellene ble farget med propidiumjodid og analysert ved strømningscytometri. Disse
resultatene er oppsummert i Tabell 2.
En doseresponskurve for hvert peptid/peptidomimetikum, benyttet mot bleomycinbehandlede Jurkat-celler er vist i figurene 1, 5, 6, 7, 8,11 og 12; Y-aksen indikerer % G2/M Jurkatceller, 24 timer etter behandling.
Strømningscytometeranalyse av M-fase kontrollpunktabrogering av forbindelsene ble gjennomført ved bruk av human T-celle leukemi Jurkat-cellelinje behandlet med colchicin (5 ug/ml eller 0,5 ug/ml) og forskjellige doser peptid/peptidomimetikum i 24 timer (figur 12). Cellenes DNA ble farget og analysert ved strømningscytometri som beskrevet ovenfor. Resultatene er også oppsummert i Tabell 2.
Doseresponskurvene for hvert peptid/peptidomimetikum, benyttet mot colchicin-behandlede Jurkat-celler, er vist i figurene 2 og 14; Y-aksen antyder %G2/M Jurkat-celler 24 timer etter behandling.
"Opptreden av bivirkninger ved anvendelse alene" antyder den peptid/peptidomimetiske dose som produserte Jurkat cellesyklusforstyrrelse, dvs. opptredenen av signifikante mengder SubGl-celler (dødceller) eller celler hvori DNA-innholdet varierte mer enn vanlig. For eksempel oppviser Gl-celler vanligvis en skarp topp ved FACS-analyse, men etter behandling ble toppen bredere og lavere når cellesyklusen forstyrres, noe som antyder gal cellesyklusprogresjon eller begynnelsen av celledød. Den "G2-abrogerende dose" antyder den peptid/peptidomimetikumdose med 40 ug/ml bleomycin som gir detekterbar G2-kontrollpunkt abrogeringsaktivitet etter behandling i 24 timer. "Opptreden av bivirkninger ved anvendelse med colchicin" antyder den peptid/peptidomimetikumdose med 5 ug/ml colchicin som ga Jurkat-cellesyklusforstyrrelse etter behandling i 24 timer.
Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet av CBP501 ved kombinasjon med cis-platin, ble studert i forskjellige cellelinjer. Kort sagt ble cis-platin (3 ug/ml) og CBP501 (0,4, 2 og 10 uM) samtidig satt til cellekulturen som ble inkubert i 3 timer ved 37° med 5% CO2. Mediet ble aspirert, friskt medium uten disse forbindelser ble tilsatt og cellene inkubert i ytterligere 45 timer. Cellene som inkluderte flytende celler ble høstet ved bruk av trypsin-EDTA-oppløsning, inkubert med Krishans oppløsning og analysert på DNA-innhold ved strømningscytometri som beskrevet tidligere. Resultatene er oppsummert i Tabell 3. Skyggelagte fremhevninger, bortsett fra HUVEC, angir cellelinjer med et signifikant tap av G2-populasjonen og øket subGl-populasjonen, noe som antyder G2-kontrollpunktabrogering og sensitisering overfor cis-platin med CBP501. Den observasjon av HUVEC-celler som er celler med et normalt Gl-kontrollpunkt, ikke ble sensitisert, i det minste opp til 50 uM CBP501, antyder at CBP501 er spesifikk for G2-kontrollpunktet heller enn en ikke-spesifikk.
Den G2-kontrollpunktabrogene aktivitet av forskjellige forbindelser ved forskjellige doser på den humanpankreatiske canceravledede cellelinje MIAPaCa2 behandlet med bleomycin (Bleo) eller adriamycin (ADR) ble studert. Kort sagt ble cellene inkubert med forbindelsene og bleomycin (10 ug/ml) eller adriamycin (1 ug/ml) i 3 timer. Mediet ble forandret og det hele inkubert i ytterligere 21 timer. Høstede celler ble farget for DNA med propidiumjodid og analysert ved strømningscytometri som beskrevet tidligere. % sub-Gl-cellepopulasjonen er antydet som døde celler i figur 3. Resultatene antyder at CBP501 sensitiserte MIAPaCa2 celler både mot bleomycin og adriamycin på en doseavhengig måte.
Figur 4A og 4C er en oppsummering av den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet som utføres med par av peptider i hvilke en aminosyrerest er forskjellig fra den andre. Den G2-kontrollabrogerende aktivitet for disse peptider ble analysert ved bruk av bleomycinbehandlede Jurkat-celler som beskrevet ovenfor. Figur 4B er en oppsummering av M-kontrollpunktabrogerende aktivitet og/eller ikke-spesifikk toksisitetsanalyse gjennomført med parapetpid hvori en aminosyrerest er forskjellig fra den andre. Den M-kontrollpunktabrogerende aktivitet og/eller ikke-spesifikke toksisitet for disse peptider ble analysert ved bruk av colchicin-behandlede Jurkat-celler som beskrevet ovenfor.
Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet for forskjellige argininrike sekvenser ved forskjellige doser på celler behandlet med bleomycin, ble studert. Kort sagt ble peptider satt til kulturmedium av Jurkat-celler med bleomycin (40 ug/ml) ved 0,2 ug/ml, 0,39 ug/ml, 0,78 ug/ml, 1,56 ug/ml, 3,125 ug/ml, 6,25 ug/ml, 12,5 ug/ml og 50 ug/ml. Celler ble deretter høstet etter 24 timer, farget med Krishans oppløsning og analyserte ved strømningscytometri som beskrevet ovenfor. %G2/M-celler (Y-aksen) ble plottet mot peptiddosene (X-aksen) i figur 5. Disse data antyder at den "(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg) (SEK ID NO: 137)" basiske restrike sekvens er den beste sekvens sammenlignet med sekvenser med et lavere eller høyere antall rester.
Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet for peptidene uten (D-Bpa) ved forskjellige doser på celler som ble behandlet med bleomycin, ble studert. Kort sagt ble peptider satt til kulturmedium av Jurkat-celler med bleomycin (40 ug/ml) ved 0,2 ug/ml og 50 ug/ml. Celler ble deretter høstet og analysert ved strømningscytometri som beskrevet ovenfor. %G2/M celler (Y-aksen) ble plottet mot peptiddosene (X-aksen) i figur 6. Resultatene antyder at sekvensen (Tyr)(Ser)(Pro)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha) (SEK ID NO: 138) hadde en sammenlignbar G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet til sekvensen (Bpa)(Ser)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha) (SEK ID NO: 139).
Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet av argininrike og lysinrike sekvenser i forskjellige doser på celler behandlet med bleomycin ble studert. Kort sagt ble peptidene satt til kulturmediet av Jurkat-celler med bleomycin (40 ug/ml) ved den antydede dose (X-aksen). Cellene ble deretter høstet og analysert ved strømningscytometri som beskrevet ovenfor. %G2/M celler (Y-aksen) ble plottet mot peptiddosene i figur 7. Resultatene antyder at Arg-sekvensene synes å gi bedre aktivitet enn Lys-sekvensene for den basiskaminosyrerike sekvens og at Gin ikke er vesentlig for sekvensens funksjonering.
Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet av sekvenser der lokasjonen av det
argininrike området varieres, ble studert. Kort sagt ble peptider satt til dyrkingsmedium av Jurkat-celler med bleomycin (40 ug/ml) ved den antydede dose (X-aksen) i 24 timer. Celler ble deretter høstet og analysert ved strømningscytometri som beskrevet tidligere. %G2/M celler (Y-aksen) ble plottet mot peptiddosene i figur 8.
Data antyder at den G2-abrogerende aktivitet av peptidene ikke endres signifikant ved endring av lokasjonen for det argininrike området. I tillegg var CBP501 oppløselig i vann, mens CBP511 ikke var. Denne forskjell kan være fordelaktig for spesielle medikamentavleveringssystemer, fordi disse systemer foretrekker vannuoppløselige forbindelser.
Figur 9 viser en oppsummering av analysen gjennomført med forskjellige peptidpar hvori kun en aminosyrerest var forskjellig mellom parene. Den G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet for disse peptider ble analysert ved bruk av bleomycinbehandlede Jurkat-celler som beskrevet.
Størrelse, ladning og hydrofobisitet for aminosyre bestemmer hvor effektivt sekvensen passer inn i et målmolekyl. Sidekjeden til peptidet eller det angjeldende peptidomimetikum vil bevege seg fritt og så med en eller to ugunstige sidekjeder kan peptidet eller peptidomimetikummet passe i en lomme eller et spor i målmolekylet. Oppsummeringen antyder at det er foretrukne størrelser for hver sidekjede som antyder størrelsen av bindingsområdet (lomme eller spor) på målproteinet for hver sidekjede. For eksempel bestemmer sidekjeder med en ringstruktur som benzen, indol og cykloheksan styrken av G2-abrogering eller M-abrogering og/eller ikke-spesifikk toksisitet, se figurene 9 og 4, der ringstrukturer større enn femleddet påvirker den G2-abrogerende aktivitet (moderat størrelse ved Pl og P2 øker G2-abrogeringsaktiviteten mens en for stor struktur (Pl, P5 og P6) øker M-abrogering og/eller ikke-spesifikk toksisitet.
Sidekjeder uten en ringstruktur opptrer nøytrale. For således å oppnå en bedre aktivitet er en riktig ringstruktur ved Pl, P2, P4 og P6 og enten ingen ringstruktur ved P3 og P5 eller en ringstruktur mindre enn 6-leddet, ønskelig. En riktig ring for Pl, P2 og P6 er fra en 1- til en 6-leddet ring ved fusjon mellom to ringer med enten 5- eller 6-leddede. For P4 er riktig ringstørrelse en fusjon av to ringer, hver av hvilke er 5- eller 6-leddet. For Pl synes således Cha eller Nal(2) å være de beste tilpasninger, for P2 synes Phe-2,3,4,5,6F, Phe-3,4,5F eller Phe-CF3 å være de beste. Disse sidekjedestørrelser antyder at det enten er to lommer eller en enkelt, større lomme i målmolekylet der dette området interagerer. For P3 og P5 er en liten sidekjede som Ser eller Pro aksepterbare og en større sidekjede som Arg er også aksepterbar, noe som antyder at det ikke er noen lomme i dette området på målmolekylet således at sidekjeden kan ligge akkurat overfor målet. Imidlertid er det mulig at en ringstruktur kan muliggjøre at peptidet eller peptidomimetikummet interagerer med et annet molekyl (for eksempel annet enn målmolekylet) som i sin tur kan øke bivirkningen. For P6 synes Bpa eller Ser-Tyr bedre enn Tyr alene eller en mindre sidekjede, noe som antyder et dypere spor som ligger horisontalt i målet. Det kan også være en grunn og bredere lomme for P4 i målet basert på størrelsene av restene for P4.
De følgende peptider ble analysert ved bruk av Jurkat og bleomycin som beskrevet. Sekvensene for peptidene er som følger: CBP501, (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:80); CBP700, (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO:96); CBP701, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:97); CBP702, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK ID NO:98); og CBP703, (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg) (d-Arg)
(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO:99). Resultatene antyder at CBP700,701, 702, 703, selv om de er kortere enn andre eksemplifiserte peptider, bibeholder en G2-kontrollpunkt-abrogerende aktivitet sammenlignbar med andre peptider med signifikant G2-kontrollpunkt-abrogerende aktivitet (figur 11).
En sammenligning mellom G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet og ikke-spesifikk toksisitet (M-kontrollpunktabrogering) med CB501, ble gjennomført. Kort sagt ble Jurkat-celler behandlet med 40 ug/ml bleomycin eller 0,5 ug/ml colchicin for G2-kontrollpunktabrogerende aktivitet henholdsvis ikke-spesifikk toksisitet. DNA-mengden i hver av de behandlede celler ble analysert ved strømningscytometri som beskrevet tidligere. Data antyder at G2-kontrollpunktet ble abrogert på en doseavhengig måte for CBP501 mens ikke-spesifikk toksisitet var fraværende opp til 50 uM peptid, bestemt ved den uendrede prosentandel M-fasestansede celler (figur 12).
Eksempel 3
Dette eksempel beskriver peptid/peptidomimetisk kinaseinhibering aktivitet- og serumstabilitetanalyse av forskjellige peptider.
Fordi to kinaser,Chkl og Chk2, er viktige for G2-kontrollpunktmekanismen ble det gjennomført en kinaseinhiberingsanalyse for begge enzymer. In vitro kinaseinhiberingsanalyser ble gjennomført ved bruk av "PepTag(<R>) Non-Radioactive Protein Kinase Assays", Promega, i henhold til firmaets protokoll, bortsett fra at det ble benyttet renset CHK2 kinase i stedet for PKC. Renset PKC ble ervervet fra Upstate Biotechnology, Inc.. Disse resultaterer er vist i Tabell 4A.
In vitro kinaseinhiberingsanalysen ble gjennomført av CycLex, Co. Ltd. Nagano, Japan. Kort sagt ble baculovirusavledet rekombinant human fullengde Chkl med histidin tag eller E. Coli avledet rekombinant human fullengde Chk2 fusert med GST, benyttet som kinase. E. Coli avledet rekombinant GST-Cdc25C (aminosyrer 167-267) ble benyttet som substrat. Reaksjonsbetingelsene var: 20 mM Hepes-KOH (pH 7,5), 1 mM DTT, 80Hg/ml BSA, 10 mM MgCb og 50 mM ATP ved 30° i 60 minutter. Fosforyleringen av serin 216 på GST-Cdc25C ble detektert med anti-Cdc25C-fosforylert S216 antistoff med enzymbundet immunanalyse. Resultatene er vist i Tabell 4B.
Data antyder at både Chkl- og Chk2-kinaseinhibering opptrer ved en dose høyere enn den G2-abrogerende dose (IC50for G2-abrogering ved CBP500, 501, 505, 506, 603 er alle mindre enn 1 uM). Disse resultater antyder at disse peptider har en virkningsmekanisme i tillegg til å inhibere Chkl/2 molekyler. Alternativt akkumulerer peptidene eventuelt cellene slik at deres konsentrasjon er større i cellene enn i det omgivende medium.
Seriumanalyse ble gjennomført for å bestemme stabiliteten av peptider i muse- og humanserum. Kort sagt ble peptider (10 mM eller 2,5 mM) inkubert med nypreparert humanserum ved 37° i 1 time. CBP501 (10 mM) ble inkubert med nypreparert museserum i 1 time ved 37°. Jurkat-celler ble behandlet med serum med eller uten peptider og bleomycin (40 ug/ml) og inkubert i 24 timer. Populasjonen av G2-faseceller ble bestemt ved strømningscytometri som beskrevet tidligere. Rest-G2-kontrollpunktabrogeringsaktiviteten for serumbehandlede peptider ble bestemt ved å sammenligne %G2-celler i det behandlede serum og standardkurven satt opp med mediumbehandlede peptider, bleomycin og Jurkat-celler (Tabell 5A). Rest-CBP501 mengden ble bestemt ved HPLC etter deproteinering med etanolbehandling (Tabell 5B). Data antyder at peptid med d-type aminosyrer som CBP501 og CBP603 er mer stabile i serum enn peptid med 1-type aminosyre som CBP413.
Eksempel 4
Dette eksempel beskriver den anti-celleproliferative aktivitet av CBP501 på dyrkede celler. Eksemplene beskriver også data som demonstrerer in vivo aktivitet for peptidene/peptidomimetikaene.
For å demonstrere anti-celleproliferativ aktivitet for forbindelsene ble dyrkede MIAPaCa2 human pankreatiske karsinomceller behandlet med CBP501 (10 umM), cisplatin (1, 3 eller 9 ug/ml) og oksaliplatin (1, 3 eller 9 ug/ml) alene, og i kombinasjon. Kort sagt ble cellene brakt på plater med 300 celler pr. brønn i 6 brønners plater, inkubert over natten og behandlet med forbindelsene i 3 timer. Mediet ble forandret og dyrket i ytterligere 10 dager. Cellene ble deretter fiksert med 70% metanol, farget med 0,1% krystallfiolett og visualisert. Kolonidannelsesanalyseresultater antydet at CBP501 økte den cytotoksiske aktivitet for både cisplatin og oksaliplatin mot MIAPaCa2 celler.
Tilsvarende studier ble gjennomført ved bruk av normale human-umbilikale endoteliale celler (HUVEC). Fordi normale celler ikke danner kolonier, ble de brakt i plater med 3000 celler/brønn i stedet for 300 celler/brønn. Resultatene antyder at peptidet per se ikke forstyrrer veksten av normale celler og heller ikke øker peptidet den cytotoksiske aktivitet for cisplatin og oksaliplatin mot cellen. Peptidene synes derfor ikke å vise noen signifikant G2-abrogerende aktivitet mot normale celler underkastet nukleinsyreskadende behandling, i motsetning til hyperprolifererende celler som cancerceller, som sensitiserer mot nukleinsyreskadebehandling. Resultatene antyder spesifisiteten for peptidet for sensifisering av prolifererende celler, men ikke normale celler mot nukleinsyreskadende behandling.
Alamar blå analyse ble gjennomført for å analysere den vekstinhiberende aktivitet av CBP501 med og uten cisplatin. Kort sagt ble MIAPaCa2 celler eksponert til 1, 3, 10, 30, 100 uM cisplatin eller 0,22, 0,67, 2,6 og 18 uM CBP501 med eller uten 10 uM cisplatin i 3 timer i 96 brønners plater ved 2500 celler/brønn i duplikat. Mediet ble forandret og det ble inkubert i ytterligere 24,48 eller 72 timer. Etter inkubering ble 20 fil alamarblå 90% reagens satt til hver brønn i ytterligere 6 timer for detektering av cellelevedyktighet ved fluorescent intensitet. Fluorescentintensiteten ble målt ved bruk av en Spektrafluor Pluss plateleser med eksitering 530 nm og emittering 590 nm. IC50-verdien ble beregnet (Tabell 6).
Denne studie antyder at CBP501 alene inhiberer cellevekst bedre enn cisplatin i molardose. DBP501 undertrykket celleveksten ved meget lavere dose ved kombinasjon med 10 uM cisplatin, noe som er omtrent den dose cisplatin som benyttes for cancerbehandling. Videre var den vekstundertrykkende aktivitet av CBP501 lenger enn cisplatin; IC50ved 72 timer var meget bedre når CBP501 ble benyttet, enn tilfellet var med cisplatin.
In vivo halveringstiden for CBP501 ble bestemt ved å kvantitere CBP501 i museserum 1, 3 henholdsvis 6 timer etter intraperitoneal injeksjon av CBP501 (40 mg/kg). Gjenværende intakt CBP501 mengde ble bestemt ved HPLC etter deproteinering av museserum trukket fra injiserte mus ved etanolbehandling (Tabell 7).
For å bestemme toleransen for peptider, ble grupper på ti mus intravenøst injisert en gang med CBP501 (5, 8 eller 10 mg/kg) eller intraperitonealt injisert en gang med CBP501 (50, 80 eller 100 mg/kg). Injiserte mus ble observert en uke med henblikk på overlevelse (Tabell 8).
For å studere in vivo effektiviteten av forbindelsene ble MIAPaCa2 human pankreatiske karsinomceller implantert subkutant i scid-mus. Behandlingen ble initiert når størrelsen av primærtumoren ble 0,1 cm<3>(dag 0) eller større, for eksempel 7 eller 8 mm i diameter. CDDP (3 mg/kg) og CBP501 (10 eller 40 mg/kg) ble administrert intraperitonealt alene eller i kombinasjon. Tumorstørrelsen ble målt ved bruk av kaliper tre ganger pr. uke og volumene ble beregnet ved bruk av formelen: vekt (mg) = [bredde (mm)<2>x lengde (mm)]/2. Midlere tumorstørrelser for hver behandlingsgruppe plottes (n=4) mot dagene etter behandingsstart (figur 10).
«»«*««« for cisp^r "-^ wdere at cb<p>501"tø -*

Claims (48)

1. Sammenhengende peptid- eller peptidomimetisk sekvens,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:2); P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:4); P6, P5, P4, P3, P2, P1, P7, P8, P9, PIO, Pl 1, P12 (SEK ID NO:7); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, P11, PIO, P9, P8, P7 (SEKIDNO:8); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:10); P12, Pli, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK LD NO:12); hvori Pl er Cha; P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F), Bpa eller Phe4N02; P3 er en hvilken som helst aminosyre; P4 er Trp; P5 er en hvilken som helst aminosyre; P6 er Bpa eller Phe^C^; og hvori minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pl 1 og Pl2 er basiske aminosyrer og resten er hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
2. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P12,P11, P10,P9,P8,P7,P6,P5,P4,P3,P2,P1 (SEKE>NO:18); hvori P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F).
3. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F) eller Phe4N02.
4. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat P2 er (Phe-2,3,4,5,6-F).
5. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1 eller 2,karakterisert vedatP3 eller P5 er Ser.
6. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1 eller 2,karakterisert vedatP6er Bpa.
7. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedatP2er Phe4N02.
8. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:22); hvori P3 er Ser, Arg, Cys, Pro eller Asn; og P5 er Ser, Arg eller Asn.
9. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pil, P12 (SEK ID N0:25); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12,Pil, PIO, P9, P8,P7 (SEKIDNO:26); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:28); P12, PU, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:30); hvori P3 er Ser, Arg, Cys, Pro eller Asn; P5 er Ser, Arg eller Asn; og hvori minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pl 1 og P12 er Arg eller Lys og de resterende en hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
10. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P12, P11, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:36); hvori P3 er Ser; P5 er Ser eller Asn; hvori minst tre av P7, P8, P9, PIO, Pl 1 og P12 er Arg og de resterende en hvilken som helst aminosyre eller fraværende.
11. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK LD N0:40); hvori P3 er Ser; og P5 er Ser.
12. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK ID NO:42); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P7, P8, P9, PIO, Pl 1, P12 (SEKLDN0:45); P6, P5, P4, P3, P2, Pl, P12, Pl 1, PIO, P9, P8, P7 (SEKLDNO:46); P7, P8, P9, PIO, Pil, P12, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK LD NO:48); P12, P11, PIO, P9, P8, P7, P6, P5, P4, P3, P2, Pl (SEK LD NO:50); hvori P4 er d-eller 1-Trp; P6 er Bps; P7 er Arg; P8 er Arg; P9 er Arg; PIO er Gin eller Arg; Pil er Arg; og P12 er d- eller 1-Arg.
13. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge hvilket som helst av kravene 1,3 eller 12,karakterisert vedatP3 eller P5 er Ser eller Pro.
14. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: P12,Pil, PIO,P9,P8,P7,P6,P5,P4,P3,P2,Pl (SEKEDN0:56); hvori P3 er Ser P5 er Ser; P6 er Bpa; P7 er Arg; P8 er Arg; P9 er Arg; PIO er Gin eller Arg; Pil er Arg; og P12 er Arg.
15. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)(d-Ser) (d-Phc-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gin) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:80); (d-Bpa) (d-Ser)(d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-233,4,5,6-F) (d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:99); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln)( d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa)( d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO: 100); (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)( d-Cha)( d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID NO:59); (d-Arg) (d-Arg) (d-Gln) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)( d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK ID NO:60); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Ser)( d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK LD NO:67); (d-Bpa) (d-Ser) (d-Trp)(d-Ser) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (SEK ID N0:68); (d-Arg) (d-Arg) (d-Arg) (d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp) (d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha) (SEK LD NO:71); (d-ArgXd-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa) (d-Arg)(d-Trp)(d-Arg) (d-Phe-2,3,4,5,6-F) (d-Cha) (SEK LDNO:73).
16. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: (d-BpaXd-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-23,4,5,6-F)(d-Clm)(d-Arg)(d-Arg)(d-ArgXd-ArgXd-Arg) (SEK ID NO. 77).
17. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge krav 1,karakterisert vedat den omfatter følgende struktur: d-Bpa, d-Ser, d-Trp, d-Ser, d-Phe-2,3,4,5,6F, d-Cha (SEK ID NO:101).
18. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17,karakterisert vedat a) en eller flere rester er 1-type; eller b) en eller flere rester er d-type.
19. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 15-16,karakterisert vedat en d-rest er substituert med en 1-rest.
20. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17,karakterisert vedat a) sekvensen inhiberer proliferering av en celle; b) sekvensen abrogerer cellesyklus G2-kontrollpunktet hos en celle.
21. Peptid- eller peptidomimetisk sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17,karakterisert vedat sekvensen har en lengde fra rundt 6 til rundt 12, 10 til rundt 20, 18 til rundt 25,25 til rundt 200 eller 50 til rundt 300 rester.
22. Sammensetning,karakterisert vedat den omfatter peptid- eller den peptidomimetiske sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17.
23. Sammensetning ifølge krav 22,karakterisert vedat den er en farmasøytisk sammensetning.
24. Sammensetning ifølge krav 22 eller 23,karakterisertv e d at den omfatter peptid- eller den peptidomimetiske sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17 og et nukleinsyreskadende middel eller et antiproliferativt middel.
25. Kit,karakterisert vedat det omfatter peptid- eller den peptidomimetiske sekvens ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17 og instruksjoner for dets bruk.
26. Kit ifølge krav 25,karakterisert vedat instruksjonene for bruk inkluderer instruksjoner for inhibering av celleproliferering i kombinasjon med en nukleinsyreskadende behandling.
27. Kit ifølge krav 25 eller 26,karakterisert vedat det ytterligere omfatter et nukleinsyreskadende middel eller et antiproliferativt middel.
28. In vitro fremgangsmåte for inhibering av proliferering av en celle,karakterisert vedat den omfatter å bringe en celle i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17, tilstrekkelig til å inhibere proliferering av cellen, hvori nevnte celle ikke er en human embryonisk celle.
29. In vitro fremgangsmåte for økning av sensitiviteten av en celle overfor et nukleinsyreskadende middel eller behandling,karakterisertv e d at den omfatter å bringe cellen i kontakt med et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17 tilstrekkelig til å øke sensitiviteten hos cellen overfor et nukleinsyreskadende middel eller behandling, hvori nevnte celle ikke er en human embryonisk celle.
30. In vitro fremgangsmåte for økning av nukleinsyreskade på en celle,karakterisert vedat den omfatter å bringe en celle i kontakt med en mengde av et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17, tilstrekkelig til å øke nukleinsyreskaden på cellen, hvori nevnte celle ikke er en human embryonisk celle.
31. In vitro fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 28-30,karakterisert vedat den videre omfatter å bringe cellen i kontakt med et nukleinsyreskadende middel eller eksponere cellen overfor en nukleinsyreskadende behandling.
32. In vitro fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 28-31,karakterisert vedat cellen er en dyrket celle.
33. Anvendelse av en mengde av et peptid eller peptidomimetikum ifølge et hvilket som helst av kravene 1-17 som er effektiv i å behandle celleproliferativ lidelse, for fremstilling av en farmasøytisk sammensetning for behandling av celleproliferativ lidelse.
34. Anvendelse ifølge krav 33, hvori den celleproliferative lidelse er lokalisert i blod, bryst, lunge, thyroid, hjerte eller hals, hjerne, lymfe, fordøyelseskanal, nasofarynx, genito-urinær kanal, blære, nyre, pankreas, lever, ben, muskel eller hud.
35. Anvendelse ifølge krav 33 eller 34, hvori den farmasøytiske sammensetning administreres lokalt, regionalt eller systemisk.
36. Anvendelse ifølge hvilket som helst av kravene 33-35, hvori den celleproliferative lidelse omfatter benign eller malign fast eller utflytende tumor.
37. Anvendelse ifølge krav 36, hvori tumoren er metastatisk eller ikke-metastatisk.
38. Anvendelse ifølge krav 36, hvori tumoren omfatter et sarkom eller karsinom.
39. Anvendelse ifølge krav 36, hvori tumoren omfatter hematopoietisk cancer.
40. Anvendelse ifølge krav 39, hvori hematopoietisk cancer omfatter myelom, lymfom eller leukemi.
41. Anvendelse ifølge hvilket som helst av kravene 36-40, hvori behandlingen resulterer i forbedring av individets tilstand.
42. Anvendelse ifølge krav 41, hvori forbedringen omfatter redusert celleproliferering, redusert antall celler, inhibering av øket celleproliferering, inhibering av økning av antallet celler, øket apoptose eller redusert overlevelse av i det minste en del av cellene som omfatter den celleproliferative lidelse.
43. Anvendelse ifølge hvilket som helst av kravene 39-42, hvori den farmasøytiske sammensetning ytterligere omfatter et nukleinsyreskadende middel, nukleinsyreskadende behandling eller et antiproliferativt middel.
44. Anvendelse ifølge krav 43, hvori middelet omfatter et medikament eller en radioisotop, eller den nukleinsyreskadende behandling omfatter stråling eller omgivelsessjokk.
45. Anvendelse ifølge krav 44, hvori medikementet omfatter et kjemoterapeutisk medikament.
46. Anvendelse ifølge krav 45, hvori medikamentet omfatter fluorouracil (5-FU), rebeccamycin, adriamycin (ADR), bleomycin (Bleo), pepleomycin, et cisplatin-derivat eller camptotecin (CPT).
47. Anvendelse ifølge krav 46, hvori cisplatin-derivatet omfatter cisplatin (CDDP) eller oksaliplatin.
48. Anvendelse ifølge krav 44, hvori a) radioisotopen omfatter I131, 1125,9<0>Y,<177>Lu,<213>Bi eller<21>At; b) strålingen omfatter UV-stråling, IR-stråling, eller alfa-, beta- eller gamma-stråling; eller c) omgivelsessjokket omfatter hypertermi.
NO20043381A 2002-01-17 2004-11-17 Peptider og peptidomimetika med antiproliferativ aktivitet og/eller som forbedrer nukleinsyreskadende midler eller behandlinger. NO332461B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US35020802P 2002-01-17 2002-01-17
PCT/IB2003/000425 WO2003059942A2 (en) 2002-01-17 2003-01-17 Peptides and peptidomimetics having anti-proliferative activity and their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20043381L NO20043381L (no) 2004-10-12
NO332461B1 true NO332461B1 (no) 2012-09-24

Family

ID=23375680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20043381A NO332461B1 (no) 2002-01-17 2004-11-17 Peptider og peptidomimetika med antiproliferativ aktivitet og/eller som forbedrer nukleinsyreskadende midler eller behandlinger.

Country Status (19)

Country Link
US (3) US6995135B2 (no)
EP (1) EP1483290B1 (no)
JP (3) JP4041066B2 (no)
KR (2) KR100863090B1 (no)
CN (2) CN100360564C (no)
AT (1) ATE404584T1 (no)
AU (2) AU2003235576C1 (no)
CA (1) CA2471192C (no)
CY (1) CY1108470T1 (no)
DE (1) DE60322845D1 (no)
DK (1) DK1483290T3 (no)
ES (1) ES2311703T3 (no)
HK (1) HK1069179A1 (no)
IL (2) IL162836A0 (no)
NO (1) NO332461B1 (no)
PT (1) PT1483290E (no)
SI (1) SI1483290T1 (no)
WO (1) WO2003059942A2 (no)
ZA (1) ZA200405455B (no)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL162836A0 (en) * 2002-01-17 2005-11-20 Canbas Co Ltd Peptides and peptidommetics having anti-proliferative activity and/or that augment nucleic acid damaging agents or treatments
US7030111B2 (en) * 2002-06-06 2006-04-18 Canbas Co., Ltd. Compounds that abrogate DNA-damage-induced cell cycle G2 checkpoint and/or augment the anti-cancer activity of DNA damaging treatments
US20090238811A1 (en) * 2002-09-09 2009-09-24 Mcdaniel C Steven Enzymatic Antimicrobial and Antifouling Coatings and Polymeric Materials
US20050058689A1 (en) * 2003-07-03 2005-03-17 Reactive Surfaces, Ltd. Antifungal paints and coatings
US20040109853A1 (en) * 2002-09-09 2004-06-10 Reactive Surfaces, Ltd. Biological active coating components, coatings, and coated surfaces
US20110070376A1 (en) * 2002-09-09 2011-03-24 Reactive Surfaces, Ltd. Anti-fouling Paints & Coatings
US20100233146A1 (en) * 2002-09-09 2010-09-16 Reactive Surfaces, Ltd. Coatings and Surface Treatments Having Active Enzymes and Peptides
US20100210745A1 (en) * 2002-09-09 2010-08-19 Reactive Surfaces, Ltd. Molecular Healing of Polymeric Materials, Coatings, Plastics, Elastomers, Composites, Laminates, Adhesives, and Sealants by Active Enzymes
US7125842B2 (en) * 2003-04-07 2006-10-24 Canbas Co. Ltd. Anti-fungal compounds and methods of use
JP4705567B2 (ja) * 2003-06-25 2011-06-22 株式会社 キャンバス 免疫調整活性、抗炎症活性、および抗ウイルス活性を有するペプチドおよびペプチド模倣物
US8618066B1 (en) 2003-07-03 2013-12-31 Reactive Surfaces, Ltd., Llp Coating compositions having peptidic antimicrobial additives and antimicrobial additives of other configurations
EP1664340A1 (en) * 2003-08-08 2006-06-07 Canbas Co., Ltd. Sensitivity test to predict efficacy of anti-cancer therapies
US20060286006A1 (en) * 2005-06-21 2006-12-21 Mcdaniel C S Method and apparatus for the treatment of fluid waste streams
US20100135903A1 (en) * 2006-10-11 2010-06-03 Medvet Science Pty. Ltd. Use of a dna damaging agent and a ligand for the treatment of cancer
US9178387B2 (en) * 2008-05-13 2015-11-03 Qualcomm Incorporated Receive antenna for wireless power transfer
PE20091924A1 (es) * 2008-05-14 2010-01-04 Takeda Pharmaceutical Compuesto peptidico y su uso
US8388904B1 (en) 2008-12-22 2013-03-05 Reactive Surfaces, Ltd., Llp Equipment decontamination system and method
FR2942798B1 (fr) * 2009-03-05 2011-04-08 Centre Nat Rech Scient Peptides utilisables pour le traitement de la leucemie lymphoide chronique
EP3041491A1 (en) * 2011-08-31 2016-07-13 New York University Thioether-,ether-, and alkylamine-linked hydrogen bond surrogate pertidomimentics
PT3013351T (pt) * 2013-06-24 2020-01-17 Canbas Co Ltd Péptidos e peptidomiméticos em utilizações e tratamentos combinados para subpopulações de pacientes com cancro
HUE045872T2 (hu) 2014-05-21 2020-01-28 Entrada Therapeutics Inc Sejteket penetráló peptidek és ezek elõállítására és alkalmazására szolgáló eljárások
US10815276B2 (en) 2014-05-21 2020-10-27 Entrada Therapeutics, Inc. Cell penetrating peptides and methods of making and using thereof
EP3185880B1 (en) 2014-08-27 2020-02-12 Ohio State Innovation Foundation Improved peptidyl calcineurin inhibitors
US10149887B2 (en) * 2015-10-23 2018-12-11 Canbas Co., Ltd. Peptides and peptidomimetics in combination with t cell activating and/or checkpoint inhibiting agents for cancer treatment
TWI805542B (zh) * 2015-10-23 2023-06-21 日商坎巴斯有限公司 用於癌症治療之肽及擬肽與ｔ細胞活化劑及／或查核點抑制劑之組合
US11576946B2 (en) 2018-01-29 2023-02-14 Ohio State Innovation Foundation Peptidyl inhibitors of calcineurin-NFAT interaction
TW201945014A (zh) 2018-02-22 2019-12-01 美商安卓達治療股份有限公司 用於治療粒線體性神經胃腸腦病變之組合物及方法
WO2019217682A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Ohio State Innovation Foundation Cyclic cell-penetrating peptides with one or more hydrophobic residues
CN114989254B (zh) * 2022-06-17 2023-11-03 中山大学 一种多肽及其设计方法和在制备抑制具核梭杆菌产品或预防结直肠癌药物中的应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1218494T3 (da) * 1999-09-22 2005-08-08 Canbas Co Ltd Præparater og fremgangsmåder til inhibering af C2-cellecyklusstandsning og sensibilisering af celler til DNA-beskadigende midler
WO2001094411A1 (en) * 2000-06-05 2001-12-13 The Regents Of The University Of California Peptides modulating protease activated receptors and methods of using same
IL162836A0 (en) * 2002-01-17 2005-11-20 Canbas Co Ltd Peptides and peptidommetics having anti-proliferative activity and/or that augment nucleic acid damaging agents or treatments

Also Published As

Publication number Publication date
IL162836A (en) 2011-09-27
WO2003059942A9 (en) 2003-11-27
AU2009201711B2 (en) 2011-12-15
US20040248783A1 (en) 2004-12-09
KR101103412B1 (ko) 2012-01-06
WO2003059942A2 (en) 2003-07-24
ATE404584T1 (de) 2008-08-15
NO20043381L (no) 2004-10-12
AU2009201711A1 (en) 2009-05-21
AU2003235576B2 (en) 2009-01-29
AU2003235576A1 (en) 2003-07-30
US20060084610A1 (en) 2006-04-20
PT1483290E (pt) 2008-09-19
CN1642978A (zh) 2005-07-20
CY1108470T1 (el) 2014-04-09
US7476657B2 (en) 2009-01-13
JP4873646B2 (ja) 2012-02-08
US6995135B2 (en) 2006-02-07
JP2008044946A (ja) 2008-02-28
ZA200405455B (en) 2005-08-31
CA2471192A1 (en) 2003-07-24
HK1069179A1 (en) 2005-05-13
EP1483290B1 (en) 2008-08-13
AU2003235576C1 (en) 2009-12-10
ES2311703T3 (es) 2009-02-16
CA2471192C (en) 2014-05-20
CN100360564C (zh) 2008-01-09
CN101092455B (zh) 2012-07-04
CN101092455A (zh) 2007-12-26
DE60322845D1 (de) 2008-09-25
EP1483290A2 (en) 2004-12-08
KR100863090B1 (ko) 2008-10-13
WO2003059942A3 (en) 2004-10-07
JP2005529845A (ja) 2005-10-06
KR20080006649A (ko) 2008-01-16
US20090253635A1 (en) 2009-10-08
SI1483290T1 (sl) 2009-02-28
KR20040081750A (ko) 2004-09-22
JP4041066B2 (ja) 2008-01-30
JP2011037896A (ja) 2011-02-24
IL162836A0 (en) 2005-11-20
DK1483290T3 (da) 2008-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO332461B1 (no) Peptider og peptidomimetika med antiproliferativ aktivitet og/eller som forbedrer nukleinsyreskadende midler eller behandlinger.
AU2003235576B8 (en) Peptides and peptidomimetics having anti-proliferative activity and/or that augment nucleic acid damaging agents or treatments
RU2732440C2 (ru) Пептиды и пептидомиметики для комбинированного применения и лечения в субпопуляциях пациентов с раковыми заболеваниями
EP3911365A1 (en) Bicyclic peptide ligands specific for cd38
NZ715285B2 (en) Peptides and peptidomimetics in combination uses and treatments for cancer patient subpopulations

Legal Events

Date Code Title Description
ERR Erratum

Free format text: KORREKT INNGIVELSEDAG ER 2004.08.13.

MK1K Patent expired