NO325631B1 - Fremgangsmate for bestemmelse av infeksjoner pa proteser - Google Patents
Fremgangsmate for bestemmelse av infeksjoner pa proteser Download PDFInfo
- Publication number
- NO325631B1 NO325631B1 NO20003919A NO20003919A NO325631B1 NO 325631 B1 NO325631 B1 NO 325631B1 NO 20003919 A NO20003919 A NO 20003919A NO 20003919 A NO20003919 A NO 20003919A NO 325631 B1 NO325631 B1 NO 325631B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- polysaccharide
- supernatant
- staphylococcus
- centrifugation
- suspending
- Prior art date
Links
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 32
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 32
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 claims description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 8
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 claims description 2
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims 6
- 238000011033 desalting Methods 0.000 claims 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 claims 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 26
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010056559 Graft infection Diseases 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QJVHTELASVOWBE-AGNWQMPPSA-N (2s,5r,6r)-6-[[(2r)-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]-3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;(2r,3z,5r)-3-(2-hydroxyethylidene)-7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21.C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 QJVHTELASVOWBE-AGNWQMPPSA-N 0.000 description 1
- GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 9-fluoro-3-methyl-10-(4-methylpiperazin-1-yl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-[1,4]oxazino[2,3,4-ij]quinoline-6-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C3N2C(C)COC3=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010065152 Coagulase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 238000002768 Kirby-Bauer method Methods 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 239000006156 Mannitol salt agar Substances 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229920001284 acidic polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000004805 acidic polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 238000013130 cardiovascular surgery Methods 0.000 description 1
- 229960000603 cefalotin Drugs 0.000 description 1
- GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N cefoperazone Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(O)=O)=C(CSC=3N(N=NN=3)C)CS[C@@H]21 GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N 0.000 description 1
- 229960004682 cefoperazone Drugs 0.000 description 1
- VUFGUVLLDPOSBC-XRZFDKQNSA-M cephalothin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C([O-])=O)C(=O)CC1=CC=CS1 VUFGUVLLDPOSBC-XRZFDKQNSA-M 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002181 esophagogastroduodenoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002682 general surgery Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229960001699 ofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56938—Staphylococcus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Dental Preparations (AREA)
- Dental Tools And Instruments Or Auxiliary Dental Instruments (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse omhandler en fremgangsmåte for bestemmelsen av infeksjoner i proteser i hvilke minst en staphylococcusstamme er involvert. Fremgangsmåten er basert på påvisningen av antistoffer som reagerer med et slimpoly-sakkarid produsert virulente staphylococcus epidermidis-eller S.aureus-stammer fra blodprøver eller andre biologiske fluidprøver, hvor fremgangsmåten omfatter de trekk som er angitt i krav 1.
Oppfinnelsen gir også en fremgangsmåte for å fremstille et polysakkarid som angitt i krav 4 for anvendelse i oven nevnte fremgangsmåte, startende fra kulturer av slike virulente staphylococcusstammer.
Infeksjoner på proteser representerer et alvorlig problem innen generell kirurgi, kardiovaskulær kirurgi, ortopedi, oftalmologi og odontologi, alle sektorer hvor introduksjonen av biomaterialer har blitt rutine. Proteseanordninger blir også vidt anvendt i onkologi for kunstig ernæring og kj emoterapi.
De viktigste aspekter av infeksjoner på proteser er de føl-gende : - deres forekomst blir generelt rapportert til å være 2 til 6% av tilfellene, etter den første introduksjonen av biomaterialet; - når et biomateriale blir erstattet med et nytt, som en konsekvens av en infeksjon, er forekomsten av re-infeksjoner omkring 60%; - infeksjoner kan forårsake funksjonstap i organer eller deres deler eller til og med pasientens død i 25 til 45% av tilfellene, selv om i noen spesielle tilfeller, som for kardial kirurgi, er dødeligheten mye høyere og i noen områder av medisin, for eksempel odontologi, asso-sieres vanligvis ingen dødelighet med infeksjoner på proteser; - hospitalisering av pasienter er ofte svært langvarig og dyrt; - diagnose av disse infeksjonene er vanskelig på grunn av det nesten fullstendige fravær av spesifikke kliniske tegn; - den største delen av disse infeksjonene (over 85%) er forårsaket av koagulase negative staphylococcuser (og i en mindre utstrekning av koagulase positive staphylococcuser), selv om andre mikroorganismer, som enteriske bakterier, pseudomonas og enterococcer, også kan isoleres i ulike tilfeller (ofte i sammenheng med minst en staphylococcusstamme).
Mens de forårsaker disse infeksjonene er bakteriene sterkt klistret til overflaten av biomaterialer, og danner kolonier som utvikles med tiden i biofilmer som nesten kan dekke overflaten til biomaterialet fullstendig, og danne en skjevhet i dets vevsintegrasjon.
Etter adhesjon gjennomgår bakteriene viktige metabolske modifikasjoner, som reduserer deres replikasjonshastighet, selv om en høy biosyntetisk aktivitet opprettholdes. Hoved-produktene fra denne aktiviteten er ekstracellulære polysakkarider (generelt indikert som slim) som danner er tykt og tett fiberlag som beskytter bakterieceller mot kjemika-lier, stråling, fagocytter og antistoffer.
Slim-omsluttede bakterier, som vokser på biomaterialer, viser, når de eksponeres for antibiotika, minimale inhibi-toriske og minimale bakterisidale konsentrasjoner som kan være flere hundre ganger høyere enn de tilsvarende verdier oppnådd når bakterier vokser i fravær av biomaterialet. Når en biofilm når en bestemt kritisk masse, frigir den i det omgivende væskemiljø små aggregater av bakterieceller som kan bevege seg for å kolonisere nye overflater av biomaterialet .
Infeksjoner på proteser blir ofte karakterisert ved knappe og ikke-spesifikke kliniske tegn, som som regel blir for-vekslet med mindre betydelige virøse episoder, og som for-svinner ved å følge vanlig antibiotika-behandling for å slå ut igjen etter en tid. Disse episodene er vanligvis på grunn av frigivelsen av små bakterielle aggregater fra bio-filmen, som mens de sirkulerer i blod enkelt gjenkjennes av vertens immunforsvar, forårsakende feber, og som, fordi de er i den planktoniske form, enkelt drepes av vanlige antibiotika, og dermed etterapende utryddelsen av infeksjonen. Kliniske signaler blir åpenbare i den fremskredne fasen av infeksjonen med dannelse av store hevelser av det myke vevet som omgir transplantasjonen, eller fistler, eller åpenbare tegn på generell kompromittering.
På grunn av disse særegne karakteristikkene, er tidlig diagnose ekstremt vanskelig, også som en konsekvens av den høye forekomsten av falske negativer etter kultiverte mikrobiologiske analyser, avhengig av det faktum at sessile bakterier ikke er i stand til en hurtig tilpasning til in vitro dyrkningsbetingelser.
Til nå har diagnose av vaskulære transplantasjonsinfeksjo-ner vært basert på analysen av objektive kliniske paramet-re, blodparametre, og instrumentelle data oppnådd ved ultrasonografi, datatomografi, magnetresonans, esofag-gastro-duodenoskopi, og scintigrafi etterfulgt injeksjon med radiomerkede leukocytter. På denne måten er det i de fleste tilfeller ikke mulig å avsløre de tidlige fasene av infeksjon på grunn av den utilstrekkelige sensitiviteten eller på grunn av mangel på godt definerte kriterier for tolkning av data eller bilder.
Totalt er de faktiske diagnostiske mulighetene absolutt utilstrekkelige, spesielt i de tidlige fasene av sykdommen som er mer gunstige for en vellykket behandling.
Det er tidligere kjent fra en artikkel i Arch. Biochem. Biophys. Vol 342, s. 389-395 (1997) av Karamanos NK et al. Isolering av et sulfatert 20-kDa surt polysakkarid fra slimproduserende Staphylococcus epidermidis diagnostisering av S. epidermidis-infeksjoner på proteser.
Fra G-B-A 992132 er det tidligere kjent en fremgangsmåte for preparering av polysakkarid fra S. av reus-stammer, og som fremmer dannelsen av beskyttende antistoff mot Staphylococcus-infeksjoner. I WO/9003398 er det beskrevet en fremgangsmåte for rensing av et klebrig polysakkarid fra slim dannet av en virulent S.epidermidis-stamme, som fremstilling av antistoff mot dette polysakkaridet som kan inhibere kolonisering av S. epidermidis på proteiner.
Det har nå blitt funnet, og det er formålet med foreliggende oppfinnelse, en pålitelig og billig fremgangsmåte, som enkelt kan anvendes på serumprøver eller andre biologiske væsker, i stand til å avsløre nærværet av infeksjoner som involverer proteseinnretninger også i de tidlige utvik-lingsfasene. Denne fremgangsmåten kan rutinemessig utføres for den konstante overvåkningen av pasienter som ble behan-dlet med innføring av enhver form for proteseinnretning og har risiko for infeksjon, spesielt forårsaket av staphylococcuser.
Denne fremgangsmåten omfatter kvantitativ bestemmelse av nærværet av antistoffer, spesielt rettet mot ekstracellulære polysakkarider, ekstrahert fra virulente staphylococcusstammer
Videre, gir foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å fremstille og rense disse ekstracellulære polysakkaridene fra hensiktsmessig dyrkede stammer av Staphylococcus epidermidis og Staphylococcus aureus.
Staphylococcusstammer som kan anvendes i denne fremgangsmåten er i stand til å produsere slim. Spesielt, er slike virulente Staphylococcus epidermidis eller Staphylococcus aureus-stammer benyttet.
Disse stammene kan oppnås enten direkte eller fra pasienter som lider av infeksjoner på proteser eller av standard dyrkede samlinger av referansestammer. Karakteristikkene av slike typiske stammer blir rapportert i det følgende Eksempel 1. Forsøk var også indikerende når utført ved anvendelse av Staphylococcus aureus stammen avsatt av søkeren på DSMZ Nr. 11942.
Bakterier dyrkes i det flytende mediet beskrevet i Hussain et al. J. Med. Microbiol. 34:143-147, 1991 (HHW medium), med noen modifikasjoner som rapportert i det følgende Eksempel 2.
Fremgangsmåten for å fremstille polysakkaridene i henhold til oppfinnelsen involverer de følgende trinn: a) dyrke en slimproduserende virulent Staphylococcus epidermidis eller S. aureus-stamme i et medium som har HHW-sammensetning i en periode på 4-6 dager; b) homogenisere bakteriecellene i en fysiologisk buffer c) sentrifugere ved 13,000 x g i 15 minutter og separere surnatanten; d) avsalting av surnatanten ved dialyse ved anvendelse av membraner med en utskilling på 12 kDa; e) fryse og lyofilisere løsningen oppnådd i (d); f) suspendere det lyofiliserte materialet i en avproteiniserende løsning, for eksempel trikloreddiksyre; g) sentrifugere løsningen oppnådd i (f) ved 30.000 x g og separere surnatanten ved tilsetning av etanol; h) sentrifugere surnatanten fra trinn (g) ved 20.000 x g for å oppnå polysakkaridet;
i) vaske det utfelte polysakkarid med absolutt etanol,
dehydrere in vacuo og suspendere det i sterilt H20.
Kvantifisering av det rensede polysakkarid kunne for eksempel utføres i henhold til fremgangsmåten beskrevet av Pelkonen et al., Journal of Bactereology 170, 2646, 1988.
Polysakkaridet oppnådd i henhold til oven beskrevne fremgangsmåte blir anvendt ved analyse for bestemmelse av antistoffer i serum eller andre biologiske fluider fra pasienter som har en proteseinnretning innsatt.
Foretrukket bestemmer analysen nærværet av antistoffer i klassen IgG og/eller IgM, ved å følge konvensjonelle immu-nokjemiske fremgangsmåter, som for eksempel enzymkoplet immunosorbent analyse (ELISA), gel immun-presipitasjon, immundiffusjon eller omvendt immunelektroforese, radioimmunanalyse, komplementfiksering, og passive hemoagglutina-sjon.
En fast-fase fremgangsmåte blir foretrukket i hvilken polysakkaridet blir immobilisert til en fast overflate, som for eksempel mikrotiterbrønner, og så tillatt å reagere med prøven ved betingelser passende for dannelsen av immunkomplekset. Med en gang immunkomplekset er dannet, kan det bli påvist ved reaksjon med passende molekyler, som for eksempel antistoffer eller deres immunkompetente fragmenter, evt. merket med radioaktive isotoper, kjemoluminescens eller fluorogene substanser, eller koplet til enzymer som katalyserer kolorimetriske reaksjoner og andre lignende substanser.
Effektiviteten til fremgangsmåtene fremlagt ved oppfinnelsen ble bekreftet ved de følgende forsøk.
I et første sett av eksperimenter ble sera fra 15 pasienter med vaskulær transplantasjonsinfeksjon analysert. Nærværet av en infeksjon på protese i disse pasientene ble bekreftet av mikrobiologiske analyser av både prøver tatt fra det periprotesiske vevet og fra selve transplantatene etter deres kirurgiske utskifting. Minst en staphylococcusstamme ble isolert fra hver prøve.
Av disse 15 pasientene viste 11 åpenbare kliniske tegn på infeksjon mens 4 bare hadde ikke-spesifikke kliniske tegn på infeksjon, men var positive ved scintigrafi etter injeksjon av 9<9m>Tc-merkede leukocytter.
Sera fra 10 voksne, friske personer av begge kjønn ble anvendt som negative kontroller.
Reaktivitet til seraene ble analysert i et ELISA-format mot: a- monospesifikke biofilmer dannet av ulike
staphylococcus stammer (både kliniske isolater og referansestammer) dannet på små polypropylensylindre (0,5 x 1 mm) ; b- polyspesifikke biofilmer dannet av ulike
staphylococcus stammer (både kliniske isolater og referansestammer) dannet på små polypropylensylindre (0,5 x 1 mm) ; c- overflateproteiner ekstrahert fra kulturer av ulike
staphylococcusstammer. d- polysakkaridene beskrevet i foreliggende oppfinnelse,
ekstrahert fra kulturer av Staphylococcus aureus DSM 11942 og av Staphylococcus epidermidis SA 1545 (se eksempel 1 for karakterisering av denne stammen).
Eksperimenter ga følgende resultater:
a- både IgG og IgM antistofftitere mot monospesifikke
eller polyspesifikke staphylococcus biofilmer eller staphylococcus overflate- og sekretoriske proteiner var ikke signifikant forskjellige i verken infiserte eller ikke-infiserte pasienter;
b- både IgG og IgM antistofftitere mot staphylococcus polysakkaridet ifølge oppfinnelsen var signifikant forskjellige i infiserte og ikke-infiserte pasienter;
de tillot dessuten å differensiere mellom åpenbart symptomatisk infiserte pasienter og pauci-symptomatiske, scintigrafi positive pasienter.
Tabell 1. Område, gjennomsnitt og standardavvik for både IgG- og IgM-titere oppnådd i ELISA-analyser utført på serumprøver fra 11 pasienter med en symptomatisk vaskulær transplantasjonsinfeksjon, 4 pasienter med en pauci-symptomatisk vaskulær transplantasjonsinfeksjon, men positive for scintigrafi etter injeksjon av <99m>TC-merkede leukocytter, og 10 friske kontrollindivider, ved anvendelse av polysakkaridet ekstrahert fra kulturer av S. aureus DSM 11942 for å sensibilisere mikrotiterbrønner. Tabell 2. Område, gjennomsnitt og standardavvik av både IgG- og IgM-titere oppnådd i ELISA-analyser utført på serumprøver av 11 pasienter med en symptomatisk vaskulær transplantasjonsinfeksjon, 4 pasienter med pauci-symptomatisk vaskulær transplantasjonsinfeksjon men positive for scintigrafi etter injeksjon av 99<m>TC-merkede leukocytter, og 10 friske kontrollindivider, som anvender polysakkaridet ekstrahert fra kulturer av S. epidermidis SA 1545 for å sensibilisere mikrotiterbrønner. I et andre sett av eksperimenter ble en større mengde sera analysert for å bestemme både IgG- og IgM-titerne i ELISA-tester utført kun ved anvendelse av polysakkaridet ifølge oppfinnelsen for å sensibilisere mikrotiterbrønner. Gjennom alle disse forsøkene ble polysakkaridet ekstrahert fra stammen SA1545 (beskrevet i eksempel 1) anvendt.
Totalt ble 97 sera testet i disse forsøkene. Av disse 97 sera, ble 19 oppnådd fra kontrollpasienter ikke infisert og ikke som hadde en vaskulær transplantasjon, 3 ble oppnådd fra kontrollpasienter ikke infisert men bærende en vaskulær transplantasjon, 5 ble oppnådd fra pasienter bærende en vaskulær transplantasjon infisert av Gram-negative bakterier, 13 ble oppnådd fra pasienter ikke infisert, men med en vaskulær transplantasjon og med en tidligere historie av vaskulær transplantasjonsinfeksjon forårsaket av Staphylococcus spp., og 57 ble oppnådd fra pasienter bærende en vaskulær transplantasjon infisert med Staphylococcus spp.
Både IgG- og IgM-titere ble bestemt i alle disse sera ved anvendelse av 1/160 og 1/320 fortynninger av seraene; to sett av duplikate bestemmelser ble utført for å vurdere intra-eksperiment og inter-eksperiments reproduserbarhet til analysen. ELISA-analyser ble utført som beskrevet i eksempel 4.
Resultater oppnådd i dette andre settet av forsøk er opp-summert i tabell 3.
Tabell 3. Resultater av enzymkoplet immunosorbent analyse (ELISA) utført ved anvendelse av polysakkarid preparatet av S.epidermidis SA 154 5 på 97 serumprøver.
IgM-titerne til hver serumprøve anvendt for den statistiske evalueringen var gjennomsnittsverdier av fire ulike bestemmelser oppnådd i to ulike forsøk. IgG-titerne til hver serumprøve anvendt for den statistiske evalueringen var gjennomsnittsverdien av to ulike bestemmelser oppnådd i ett forsøk.
Resultater av Student T-tester for sammenligning av IgM-titere målt ved serumfortynning = 1:160:
A(A1+A2) vs. D: p = 1,7 x 10"<15>
B vs. D: p = 2, 0 x IO"<4>
C vs. D: p = 7,2 x IO"<8>
A+B+C vs. D: p = 5,3 x 10~<23>
A+C vs. D: p = 0,142
A vs. C: p = 2, 07 x IO"<11>
Resultater av Student T-tester for sammenligning av IgG-titere målt ved serumfortynning = 1:320:
A(A1+A2) vs. D: p = 4,5 x IO"<21>
B vs. D: p = 7, 5 x IO"<8>
C vs. D: p = 8, 0 x IO"<7>
A+B+C vs. D: p = 3,1 x 10~<21>
A+C vs. D: p = 0,2 65
A vs. C: p = 0,024
Kommentarer:
• Antistofftiterne som er detekterbare som slimpolysakka-ridet (SP) av S. epidermidis SA1545 viste signifikante forskjeller i grupper eller ulike individer, i henhold til deres kliniske historie. • Signifikant høyere antistofftitere mot SA 1545-SP ble funnet i pasienter bærende vaskulære transplantasjoner infisert ved Staphylococcus ssp., sammenlignet med: i) kontrollindivider uten noen historie om slik infeksjon, enten bærende en vaskulær transplantasjon eller ikke; ii) pasienter bærende en vaskulær transplantasjon infisert med Gram-negative bakterier; iii) individer bærende en vaskulær transplantasjon ikke infisert, men med en tidligere historie om vaskulær transplantasjonsinfeksjon av Staphylococcus ssp. Disse data indikerer totalt at vaskulær transplantasjonsinfeksjon forårsaket
av Staphylococcus ssp. utløser en spesifikk humoral immunrespons mot SP, og at denne responsen kan påvises ved enzymetiske immunanalyser ved anvendelse av en fast-fase sensibilisert med SA1545 SP-preparatet, som beskrevet i foreliggende patentsøknad.
Analyse av den isotypiske responsen mot SA1545 SP i de ovennevnte individgruppene viste signifikante forskjeller av både IgM og IgG antistofftitere. IgM-titerne var nærmest beslektet med tilstanden til aktiv infeksjon forårsaket av Staphylococcus ssp.
Eksistensen av statistisk signifikant forskjell mellom titerne til infiserte og ikke-infiserte pasienter tillater å etablere en knekkpunktverdi over hvilken det er mulig å definere en høy sannsynlighet for eksistensen av en infek-sjonsprosess. Det er videre mulig å anvende denne fremgangsmåten for å overvåke pasienten etter innsetting av transplantatet ved anvendelse av antistofftiteren målt ved implantasjonstidspunktet som en spesifikk referanseverdi i oppfølgingen.
Det viser seg klart at den ovenfor beskrevne fremgangsmåte har mange fordeler, sammenlignet med konvensjonelle diagnostiske fremgangsmåter på dette området, siden den er lett å utføre, billig og tillater å oppnå pålitelige resultater (uten behov for invasive fremgangsmåter) også i de tidlige infeksjonsfaser, når alle de andre tilgjengelige fremgangsmåter ofte mislykkes i å gi klare diagnostiske informasjoner; denne fremgangsmåten tillater videre en periodisk overvåkning av pasienter for forekomsten av latente infeksjoner og kan gi pålitelig informasjon på terapeutiske utbytter.
De følgende eksempler er tenkt å bedre skulle klargjøre oppfinnelsen.
Eksempel 1
Karakterisering av en bakteriestamme passende for analysen
En Staphylococcus epidermidis stamme, indikert som SA1545 - som gir den numeriske koden 6704773 når testet for identi-fikasjon med API 20 STAPH identifikasjonssystemet, ble isolert fra en aorto-bifemoral transplantasjon eksplantert fra en voksen mann.
Isolatet viste en tydelig dimorfisme av kolonier når dyrket på Columbia Agar-plater supplementert med 5% defibrinisert saueblod. Det var negativt for mannitolfermentering når dyrket på mannitol saltagar, med kolonier visende en diame-ter på 1 mm eller mindre etter 18 timer inkubasjon ved 37°C.
Isolatet var sensitivt for følgende antibiotika, som vur-dert ved anvendelse av Kirby-Bauer-analyser: Gentamycin, Vancomycin, Ofloxacin, Erytromycin, Imipinem, Cefalotin, Amoxicillin+klavulansyre, Cefoperazon.
Det biokjemiske mønsteret til isolatet er som følger:
I mange andre tilfeller har stammer som viser lignende karakteristikker og passer til å anvendes i analysen av oppfinnelsen blitt isolert.
Eksempel 2
Fremstilling av dyrkningsmediet
Dyrkningsmediet inneholder følgende forbindelser per 1 liter:
Formuleringen av mediet tilsvarer den beskrevet i Hussain, Hastings, White, J. Med. Microbiol. 34:143-147, 1991, med følgende modifikasjoner, angående preparatet: etter at alle komponentene i mediet er veid, blir MgS04(7H20) oppløst i destillert vann, så blir alle gjenværende forbindelser tilsatt enkeltvis under kontinuerlig risting. L-cystein må før tilsetning til mediet løses opp i 2-3 dråper 5N NaOH.
Med en gang alle forbindelsene er løst opp (selv om en liten mengde bunnfall kan holde seg), blir volumet justert til 11 med destillert vann og sterilisert ved filtrering gjennom 0,2 <y>m porøse membraner.
Eksempel 3
Fremstilling av polysakkaridet
Stammer dyrkes i 1000 ml modifisert HHW-medium i 6 dager ved 37°C med risting.
Bakteriepelletene blir samlet med sentrifugering ved 13.000 x g i 15 minutter ved 4°C, suspendert i 20 ml steril iskald fysiologisk saltløsning (NaCl 0,9%), og frosset ved -20°C i 2 timer. Bakteriesuspensjonen blir så tint opp ved romtemperatur og homogenisert 10 ganger i 30 sekunder med 30 sekunders intervaller.
Homogenatet blir så sentrifugert ved 13.000 x g i 15 minutter ved 4°C, den resulterende supernatanten blir lagret ved 4°C; mens den resulterende pelleten blir suspendert igjen i 20 ml steril iskald saltløsning og homogenisert som beskrevet over. Supernatanten resulterende fra det andre homogeniseringstrinnet blir tilsatt til den tidligere oppnådde og avsaltet ved dialyse mot 1.000 volumer av destillert vann ved 4°C i 2 timer, ved anvendelse av dialysemembraner med en utskilling på 12 kDa. Prøven blir så frosset ved -80°C, lyofilisert, suspendert i 5% (W/V) trikloreddiksyre og inkubert 15 minutter ved 4°C.
Prøven blir så sentrifugert ved 30.000 x g ved 4°C; 4 volumer iskald absolutt etanol blir så tilsatt til supernatanten, dette blir videre inkubert ved 4°C i 48 timer. Bulkpolysakkaridet blir så samlet med sentrifugering ved 20.000 x g i 30 minutter ved 4°C, vasket med 0,5 volumer iskald absolutt etanol, dehydrert under vakuum og til slutt suspendert i 2 ml sterilt destillert vann. Polysakkaridet oppnådd som beskrevet over, blir anvendt for å sensibilisere mikrotiterbrønner etter passende fylling (typisk i 50 yl aliquoter).
Eksempel 4
Utførelse av ELISA analysen
Brønnene på en mikrotiterplate blir sensibilisert med 50 yl av polysakkaridet fremstilt i henhold til eksempel 3 og fortynnet 1/80 i sterilt destillert vann, tilstrekkelig forseglet og inkubert i 18-24 timer ved 4°C. Etter inkube-ring blir brønnene tømt og vasket 5 ganger med 100 yl 0,05% tween 20 i fosfatbufret saltløsning (PBS).
Brønnene blir så tømt, mettet med 200 yl 10% soyamelk i PBS, tilstrekkelig forseglet og inkubert ved 37°C i 1 time. Brønnene blir så tømt, vasket som beskrevet over, og 50 yl aliquoter av de fortynnede sera blir tilsatt. Sera, inklu-dert en positiv kontroll og en negativ kontroll, blir typisk fortynnet 1/160 og 1/320 i PBS. Etter tilsetning av seraene blir brønnene tilstrekkelig forseglet og inkubert ved 37°C i 1 time. Brønnene blir så tømt, vasket som beskrevet over, og 50 yl av enten "Peroksidase-Konjugert Kanin Anti-human IgG" (for eksempel DAKO cod. P0214) (fortynnet 1/15.000 i 10% soyamelk i PBS) eller "Peroksidase-Kon jugert Kanin Anti-human IgM" (for eksempel DAKO cod. P0215) (fortynnet 1/1.500 i 10% soyamelk i PBS) blir tilsatt. Brønnene blir tilstrekkelig forseglet, inkubert ved 37°C i 1 time, tømt og vasket som beskrevet over.
Etter siste vasking blir 50 ul av det kromogene substratet for peroksidase (for eksempel BM Blue POD Substrate Boehri-nger Mannheim, cod 1484281) tilsatt til hver brønn.
Brønnene blir så inkubert 10 minutter ved 37°C og reaksjo-nen blir så stoppet ved å tilsette 50 ul 0,5N H2S04. OD45onm for hver brønn blir så evaluert ved anvendelse av en mikro-titerplateavleser ved anvendelse av en ubehandlet brønn inneholdende 100 yl 0,5N H2S04 som blindprøven.
Som en generell regel skulle OD45onm for positiv kontroll ikke være over verdien 1,5.
Hvis dette skulle skje må analysen repeteres, reduserende inkubasjonstiden for peroksidasesubstratet.
Claims (4)
1. Fremgangsmåte for bestemmelsen av infeksjoner på proteser i hvilken minst en Staphylococcus stamme er involvert, som omfatter påvisning fra blodprøver eller andre biologiske fluidprøver av antistoffer som reagerer med et polysakkarid oppnådd ved de følgende trinn: a) dyrking av en slimproduserende virulent Staphylococcus epidermidis- eller S. aureus-stamme i medium som har HHW-sammensetning i en periode på 4-6 dager; b) homogenisering av bakteriecellene i en fysiologisk buffer; c) sentrifugering ved 13.000 x g i 15 minutter og separering av supernatantene; d) avsalting av supernatanten ved dialyse ved anvendelse av membraner med en avkutting på 12 kDa; e) frysing og lyofilisering av løsningen oppnådd i (d) ; f) suspendering av det lyofiliserte materialet i en avproteiniserende løsning; g) sentrifugering ved 30.000 x g av løsningen oppnådd i (f) og separering av supernatanten ved tilsetning av etanol; h) sentrifugering av supernatanten fra trinn (g) ved 20.000 x g for å oppnå polysakkaridet; i) vasking av det utfelte polysakkaridet med absolutt etanol, dehydrering in vacuo og suspendering av det i sterilt H20.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, i hvilken antistoffene er IgG og IgM.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1-2, hvilken er i form av ELISA, gel immun-presipitasjon, immundiffusjon, omvendt immunelektroforese, radioimmunanalyse, komplementfiksering.
4. Fremgangsmåte for å fremstille et polysakkarid fra kulturer av slimproduserende virulente Staphylococcus epidermidis- eller S. aureus-stammer som omfatter: a) dyrking av en slimproduserende virulent Staphylococcus epidermis- eller aureus- stamme i modifisert HHW-medium i en periode på 4-6 dager; b) homogenisering av bakteriecellene i en fysiologisk buffer; c) sentrifugering ved 13.000 x g i 15 minutter og separering av supernatantene; d) avsalting av supernatanten ved dialyse ved anvendelse av membraner med en avkutting på 12 kDa; e) frysing og lyofilisering av løsningen oppnådd i (d) ; f) suspendering av det lyofiliserte materialet i en avproteiniserende løsning; g) sentrifugering ved 30.000 x g av løsningen oppnådd i (f) og separering av supernatanten ved tilsetning av etanol; h) sentrifugering av supernatanten fra trinn (g) ved 20.000 x g for å oppnå polysakkaridet; i) vasking av det utfelte polysakkaridet med absolutt etanol, dehydrering in vacuo og suspendering av det i sterilt H20.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT98MI000197A IT1298539B1 (it) | 1998-02-03 | 1998-02-03 | Metodo per la determinazione di infezioni da protesi |
| PCT/EP1999/000618 WO1999040440A1 (en) | 1998-02-03 | 1999-02-01 | Method for the determination of prosthetic infections |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20003919D0 NO20003919D0 (no) | 2000-08-02 |
| NO20003919L NO20003919L (no) | 2000-09-29 |
| NO325631B1 true NO325631B1 (no) | 2008-06-30 |
Family
ID=11378802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20003919A NO325631B1 (no) | 1998-02-03 | 2000-08-02 | Fremgangsmate for bestemmelse av infeksjoner pa proteser |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7807395B2 (no) |
| EP (1) | EP1053474B1 (no) |
| JP (2) | JP2002502978A (no) |
| AU (1) | AU2520299A (no) |
| CA (1) | CA2319575C (no) |
| DE (1) | DE69919512T2 (no) |
| DK (1) | DK1053474T3 (no) |
| ES (1) | ES2228007T3 (no) |
| IL (1) | IL137439A0 (no) |
| IT (1) | IT1298539B1 (no) |
| NO (1) | NO325631B1 (no) |
| WO (1) | WO1999040440A1 (no) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7252828B2 (en) | 1998-07-15 | 2007-08-07 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Polysaccharide vaccine for staphylococcal infections |
| CN100351260C (zh) | 2002-11-12 | 2007-11-28 | 布赖汉姆妇女医院 | 葡萄球菌感染的多糖疫苗 |
| WO2004043407A2 (en) | 2002-11-12 | 2004-05-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods and products for treating staphylococcal infections |
| SI1745075T1 (sl) | 2004-04-21 | 2013-07-31 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Poli-N-acetilglukozamin (PNAG/dPNAG) vezavni peptidi in postopki za njihovo uporabo |
| CN102159540B (zh) | 2008-07-21 | 2015-08-12 | 布赖汉姆妇女医院 | 与合成的β-1,6葡糖胺寡糖相关的方法和组合物 |
| RU2518249C1 (ru) * | 2012-10-16 | 2014-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) | Способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроогранизмов к антибиотикам на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK105490C (da) * | 1961-05-15 | 1966-10-03 | Parke Davis & Co | Fremgangsmåde til fremstilling af et stafylokok-antigenprodukt i form af immunogene polysaccharidforbindelser. |
| US5055455A (en) * | 1988-09-28 | 1991-10-08 | Brigham And Women's Hospital | Capsular polysaccharide adhesin antigen, preparation, purification and use |
| JPH04503114A (ja) * | 1989-09-08 | 1992-06-04 | ウイスコンシン アラムナイ リサーチ フオンデーション | ブドウ球菌フィブロネクチン受容体抗体の検出試験 |
| DK0615458T3 (da) * | 1991-12-06 | 1997-09-15 | North Shore Univ Hospital | Fremgangsmåde til reduktion af infektioner relateret til medicinske anordninger |
| PT783520E (pt) * | 1994-09-21 | 2002-05-31 | Henry M Jackson Found Advanc M | Anticorpos opsonicos amplamente reactivos que reagem com antigenios de estafilococos comuns |
-
1998
- 1998-02-03 IT IT98MI000197A patent/IT1298539B1/it active IP Right Grant
-
1999
- 1999-02-01 DK DK99904832T patent/DK1053474T3/da active
- 1999-02-01 DE DE69919512T patent/DE69919512T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-01 IL IL13743999A patent/IL137439A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-02-01 JP JP2000530802A patent/JP2002502978A/ja active Pending
- 1999-02-01 CA CA2319575A patent/CA2319575C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-02-01 WO PCT/EP1999/000618 patent/WO1999040440A1/en active IP Right Grant
- 1999-02-01 AU AU25202/99A patent/AU2520299A/en not_active Abandoned
- 1999-02-01 ES ES99904832T patent/ES2228007T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-01 EP EP99904832A patent/EP1053474B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-08-02 NO NO20003919A patent/NO325631B1/no not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-05-01 US US10/135,827 patent/US7807395B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-01-29 JP JP2010018353A patent/JP4934729B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK1053474T3 (da) | 2004-12-20 |
| DE69919512T2 (de) | 2005-09-29 |
| ITMI980197A1 (it) | 1999-08-03 |
| US7807395B2 (en) | 2010-10-05 |
| WO1999040440A1 (en) | 1999-08-12 |
| DE69919512D1 (de) | 2004-09-23 |
| AU2520299A (en) | 1999-08-23 |
| JP2010145416A (ja) | 2010-07-01 |
| ES2228007T3 (es) | 2005-04-01 |
| EP1053474B1 (en) | 2004-08-18 |
| US20020197280A1 (en) | 2002-12-26 |
| IL137439A0 (en) | 2001-07-24 |
| IT1298539B1 (it) | 2000-01-12 |
| NO20003919D0 (no) | 2000-08-02 |
| CA2319575C (en) | 2011-09-13 |
| JP4934729B2 (ja) | 2012-05-16 |
| JP2002502978A (ja) | 2002-01-29 |
| EP1053474A1 (en) | 2000-11-22 |
| NO20003919L (no) | 2000-09-29 |
| CA2319575A1 (en) | 1999-08-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Epstein et al. | Effects of specific antibodies on the interaction between the fungus Candida albicans and human oral mucosa | |
| CN101395476A (zh) | 多重耐药葡萄球菌的免疫色谱检测方法和诊断试剂盒 | |
| NO832407L (no) | Preparat for anvendelse ved diagnose av chlamydiale infeksjoner. | |
| JP4934729B2 (ja) | プロテーゼ感染の決定のための方法 | |
| Colomer-Winter et al. | Biofilm assays on fibrinogen-coated silicone catheters and 96-well polystyrene plates | |
| Rafiq et al. | Serological detection of Gram-positive bacterial infection around prostheses | |
| Almeida et al. | Capsulelike surface material of Mycoplasma dispar induced by in vitro growth in culture with bovine cells is antigenically related to similar structures expressed in vivo | |
| Boraker et al. | BrucELISA: an enzyme-antibody immunoassay for detection of Brucella abortus antibodies in milk: correlation with the Brucella ring test and with shedding of viable organisms | |
| EP3608672B1 (en) | Crude native hapten-based indirect elisa assay kit and lyophilised controls for the confirmatory diagnosis of bovine brucellosis in blood serum and milk by animal and tank | |
| Nath et al. | A community study on the aetiology of childhood diarrhoea with special reference to Campylobacter jejuni in a semiurban slum of Varanasi, India | |
| US8426139B2 (en) | Polypeptides for identifying in vitro and preventing staphyloccocal infections on joint prostheses and other implanted foreign materials | |
| Strzelec-Nowak et al. | Investigation of the actual causes of hip joint implant loosening classified as aseptic–analysis of microbiological culture results and levels of inflammatory markers | |
| Burnie et al. | Immunoblot fingerprinting of coagulase negative staphylococci. | |
| US20170045532A1 (en) | Materials and methods for diagnosis of peri-implant bone and joint infections using prophenoloxidase pathway | |
| JPS60224068A (ja) | 日和見感染における病原菌の判定方法 | |
| US8642275B2 (en) | Immunological tests for the presence of bacteria which make use of antibodies obtained using a specific method | |
| Welch et al. | Simplified procedure for tissue culture in routine detection of cytotoxins. | |
| KR19990063833A (ko) | 헬리코박터 파이로리 단백질 | |
| Gudding | Measurement of Staphylococcus Aureus Nuclease and Antinucleases: Applicability for The Assessment of Mastitic Milk | |
| Taylor et al. | Infection of total hip prostheses by Peptococcus magnus: an immunofluorescence and ELISA study of two cases. | |
| Thomas et al. | Antibody response to Staphylococcus aureus surface proteins in rabbits with persistent osteomyelitis after treatment with demineralized bone implants | |
| Mohammed et al. | Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for endotoxin in milk | |
| Sidner | Molecular Mechanisms Underlying Mucosal Attachment and Colonization by Clostridioides difficile | |
| RU1816320C (ru) | Способ определени обсемененности желчи энтеробактери ми | |
| Braconier et al. | Indirect immunofluorescence as a diagnostic tool in a prosthetic heart valve endocarditis due to actinobacillus actinomycetemcomitans and staphylococcus epidermidis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |