NO313010B1 - Eskuletinderivater, fremgangsmåte for fremstilling derav, preparat, kulturskål og sett, samt fremgangsmåte for påvisningog/eller identifikasjon av en mikroorganisme i en pröve - Google Patents
Eskuletinderivater, fremgangsmåte for fremstilling derav, preparat, kulturskål og sett, samt fremgangsmåte for påvisningog/eller identifikasjon av en mikroorganisme i en pröve Download PDFInfo
- Publication number
- NO313010B1 NO313010B1 NO19985070A NO985070A NO313010B1 NO 313010 B1 NO313010 B1 NO 313010B1 NO 19985070 A NO19985070 A NO 19985070A NO 985070 A NO985070 A NO 985070A NO 313010 B1 NO313010 B1 NO 313010B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- general formula
- compound
- cyclohexenoesculetin
- alkyl
- glucoside
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 30
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 57
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 22
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 18
- -1 glucoamidine Natural products 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims description 5
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 4
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 4
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 229930182480 glucuronide Natural products 0.000 claims description 3
- 150000008134 glucuronides Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 2
- 125000005157 alkyl carboxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 claims description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N beta-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- ILEDWLMCKZNDJK-UHFFFAOYSA-N esculetin Chemical class C1=CC(=O)OC2=C1C=C(O)C(O)=C2 ILEDWLMCKZNDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 36
- QNHQEUFMIKRNTB-UHFFFAOYSA-N aesculetin Natural products C1CC(=O)OC2=C1C=C(O)C(O)=C2 QNHQEUFMIKRNTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 29
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 28
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 28
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 27
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- GUAFOGOEJLSQBT-UHFFFAOYSA-N aesculetin dimethyl ether Natural products C1=CC(=O)OC2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 GUAFOGOEJLSQBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 7
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 7
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 7
- AESFGSJWSUZRGW-UHFFFAOYSA-N (3,4-diacetyloxyphenyl) acetate Chemical class CC(=O)OC1=CC=C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)=C1 AESFGSJWSUZRGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 4-methylumbelliferone Chemical compound C1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C HSHNITRMYYLLCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 5
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 4
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 4
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 4
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 4
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 4
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 4
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 4
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- VZBNZFYHLQRFPS-UHFFFAOYSA-N 2-(6,7-dihydroxy-2-oxochromen-4-yl)acetic acid Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC2=C1OC(=O)C=C2CC(=O)O VZBNZFYHLQRFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- GGNQRNBDZQJCCN-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2,4-triol Chemical class OC1=CC=C(O)C(O)=C1 GGNQRNBDZQJCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N cis-cyclohexene Natural products C1CCC=CC1 HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- ZSANYRMTSBBUCA-UHFFFAOYSA-N diethyl 3-oxopentanedioate Chemical compound CCOC(=O)CC(=O)CC(=O)OCC ZSANYRMTSBBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 3
- KUWPCJHYPSUOFW-SCWFEDMQSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-(hydroxymethyl)-6-(2-nitrophenoxy)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)OC1OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O KUWPCJHYPSUOFW-SCWFEDMQSA-N 0.000 description 2
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- STCWBNGIVIFZHI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dihydroxy-2-oxochromene-3-carboxylic acid Chemical compound OC1=C(O)C=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 STCWBNGIVIFZHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 2
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000194049 Streptococcus equinus Species 0.000 description 2
- FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5r,6s)-4,5,6-trinitrooxy-2-(nitrooxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-3,5-dinitrooxy-6-(nitrooxymethyl)oxan-4-yl] nitrate Chemical compound O([C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O1)O[N+]([O-])=O)CO[N+](=O)[O-])[C@@H]1[C@@H](CO[N+]([O-])=O)O[C@@H](O[N+]([O-])=O)[C@H](O[N+]([O-])=O)[C@H]1O[N+]([O-])=O FJWGYAHXMCUOOM-QHOUIDNNSA-N 0.000 description 2
- OHULVMOXKLLMJR-MSOLQXFVSA-N [(2s,6r)-4-benzoyloxy-2-methoxy-5-oxo-2h-pyran-6-yl]methyl benzoate Chemical compound C([C@H]1O[C@@H](C=C(OC(=O)C=2C=CC=CC=2)C1=O)OC)OC(=O)C1=CC=CC=C1 OHULVMOXKLLMJR-MSOLQXFVSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N butyryl chloride Chemical compound CCCC(Cl)=O DVECBJCOGJRVPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 150000003997 cyclic ketones Chemical class 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 2
- BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N cyclopentanone Chemical compound O=C1CCCC1 BGTOWKSIORTVQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N cyclopentene Chemical compound C1CC=CC1 LPIQUOYDBNQMRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAASRHQPRFFWCS-UHFFFAOYSA-P diazanium;oxygen(2-);uranium Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[U].[U] ZAASRHQPRFFWCS-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- NAGJUTYGIQTFNJ-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-acetylpentanedioate Chemical compound COC(=O)CCC(C(C)=O)C(=O)OC NAGJUTYGIQTFNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- FGSGHBPKHFDJOP-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-oxocyclohexane-1-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1CCCCC1=O FGSGHBPKHFDJOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 150000008195 galaktosides Chemical class 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N indoxyl Chemical group C1=CC=C2C(O)=CNC2=C1 PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- REEZZSHJLXOIHL-UHFFFAOYSA-N octanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCC(Cl)=O REEZZSHJLXOIHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N phosphoryl trichloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)=O XHXFXVLFKHQFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 2
- 150000008495 β-glucosides Chemical class 0.000 description 2
- BWMXDESAZVPVGR-GSZWNOCJSA-N (2r,3s,4s,5r)-2-(hydroxymethyl)-6-quinolin-8-yloxyoxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OC1=CC=CC2=CC=CN=C12 BWMXDESAZVPVGR-GSZWNOCJSA-N 0.000 description 1
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PDNUSULWPCDPLF-UHFFFAOYSA-N 3-(6,7-dihydroxy-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)propanoic acid Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC2=C1OC(=O)C(CCC(O)=O)=C2C PDNUSULWPCDPLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OREOENKOEYFURM-UHFFFAOYSA-N 3-acetyl-6,7-dihydroxy-4-methylchromen-2-one Chemical compound OC1=C(O)C=C2OC(=O)C(C(=O)C)=C(C)C2=C1 OREOENKOEYFURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGSBZRWRGBQMJK-UHFFFAOYSA-N 3-benzyl-6,7-dihydroxy-4-methylchromen-2-one Chemical compound O=C1OC=2C=C(O)C(O)=CC=2C(C)=C1CC1=CC=CC=C1 KGSBZRWRGBQMJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQJCWFJUQNNEPH-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydroxy-2-oxochromene-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(C(=O)O)=C(O)C2=C1O MQJCWFJUQNNEPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-HRNXZZBMSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl alpha-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-HRNXZZBMSA-N 0.000 description 1
- HOSGXJWQVBHGLT-UHFFFAOYSA-N 6-hydroxy-3,4-dihydro-1h-quinolin-2-one Chemical group N1C(=O)CCC2=CC(O)=CC=C21 HOSGXJWQVBHGLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241001156002 Anthonomus pomorum Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-TVKJYDDYSA-N Cichoriin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1C=CC(=O)O2 WNBCMONIPIJTSB-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N D-Cycloserine Chemical compound N[C@@H]1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N D-Cycloserine Natural products NC1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000520130 Enterococcus durans Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000194030 Enterococcus gallinarum Species 0.000 description 1
- 241000520134 Enterococcus mundtii Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000588731 Hafnia Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 241001084338 Listeria sp. Species 0.000 description 1
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000588768 Providencia Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 241000775777 Streptococcus agalactiae ATCC 13813 Species 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical class CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- CYAYKKUWALRRPA-HTOAHKCRSA-N [(2r,3s,4s,5r,6r)-3,4,5-triacetyloxy-6-bromooxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound CC(=O)OC[C@H]1O[C@H](Br)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O CYAYKKUWALRRPA-HTOAHKCRSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L ammonium ferric citrate Chemical compound [NH4+].[Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O FRHBOQMZUOWXQL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-KKQCNMDGSA-N beta-D-xylose Chemical compound O[C@@H]1CO[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-KKQCNMDGSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000004648 butanoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-YOPQJBRCSA-N chembl1332716 Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O\C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)/C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C(O)=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CCN(C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-YOPQJBRCSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 229930184985 cichorin Natural products 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 125000000332 coumarinyl group Chemical group O1C(=O)C(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001925 cycloalkenes Chemical group 0.000 description 1
- 125000001162 cycloheptenyl group Chemical group C1(=CCCCCC1)* 0.000 description 1
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical class NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000522 cyclooctenyl group Chemical group C1(=CCCCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 1
- 238000006264 debenzylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000002027 dichloromethane extract Substances 0.000 description 1
- NNOGMCQLKMLNPL-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-acetylpentanedioate Chemical compound CCOC(=O)CCC(C(C)=O)C(=O)OCC NNOGMCQLKMLNPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- YMCDYRGMTRCAPZ-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-acetyl-3-oxobutanoate Chemical compound CCOC(=O)C(C(C)=O)C(C)=O YMCDYRGMTRCAPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTOQBHVLCJERBS-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-acetylhexanoate Chemical compound CCCCC(C(C)=O)C(=O)OCC ZTOQBHVLCJERBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHZPNBKZPAWCJD-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-oxocyclopentane-1-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C1CCCC1=O JHZPNBKZPAWCJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOSFCELWXONZOQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-(6,7-dihydroxy-4-methyl-2-oxochromen-3-yl)propanoate Chemical compound OC1=C(O)C=C2OC(=O)C(CCC(=O)OCC)=C(C)C2=C1 OOSFCELWXONZOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229960004642 ferric ammonium citrate Drugs 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 238000005858 glycosidation reaction Methods 0.000 description 1
- CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N hafnium(IV) oxide Inorganic materials O=[Hf]=O CJNBYAVZURUTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- XVARCVCWNFACQC-RKQHYHRCSA-N indican Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=CC=C12 XVARCVCWNFACQC-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- XVARCVCWNFACQC-UHFFFAOYSA-N indoxyl-beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CNC2=CC=CC=C12 XVARCVCWNFACQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- XJTQJERLRPWUGL-UHFFFAOYSA-N iodomethylbenzene Chemical compound ICC1=CC=CC=C1 XJTQJERLRPWUGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004313 iron ammonium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000000011 iron ammonium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N nalidixic acid Chemical compound C1=C(C)N=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=C1 MHWLWQUZZRMNGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000210 nalidixic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 125000001400 nonyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N pentamethylene Natural products C1CCCC1 RGSFGYAAUTVSQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N phenylacetonitrile Chemical compound N#CCC1=CC=CC=C1 SUSQOBVLVYHIEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLOWWWKZYUNIDI-UHFFFAOYSA-N phosphinic chloride Chemical compound ClP=O RLOWWWKZYUNIDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000135 prohibitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- VFWRGKJLLYDFBY-UHFFFAOYSA-N silver;hydrate Chemical compound O.[Ag].[Ag] VFWRGKJLLYDFBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- KKCBUQHMOMHUOY-UHFFFAOYSA-N sodium oxide Chemical compound [O-2].[Na+].[Na+] KKCBUQHMOMHUOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001948 sodium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical group N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005757 von Pechmann cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
- 150000008494 α-glucosides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/06—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2
- C07D311/08—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring
- C07D311/14—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 2 not hydrogenated in the hetero ring substituted in position 6 and unsubstituted in position 7
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
- C07F9/6552—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a six-membered ring
- C07F9/65522—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a six-membered ring condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/06—Benzopyran radicals
- C07H17/065—Benzo[b]pyrans
- C07H17/075—Benzo[b]pyran-2-ones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/20—Coumarin derivatives
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Manufacture And Refinement Of Metals (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører nye eskuletinderivater, fremgangsmåte for fremstilling derav og deres anvendelse som substrater for den spesifikke påvisning av mikroorganismer, i form av preparat, kulturskål og sett, samt fremgangsmåte for påvisning og/eller identifikasjon av en mikroorganisme i en prøve.
Eskuletin er aglykonet av eskulin og av cichoriin, og kan fås ved hydrolyse av disse molekylene. Eskuletin har den følgende kjemiske formel:
Det fullstendige kjemiske navn for eskuletin er 6,7-dihydroksy-2H-l-benzo-pyran-2-on (også kjent som 6,7-dihydroksykumarin eller cichorigenin).
Tilstedeværelsen av P-D-glukosidase har lenge vært ansett som en viktig
diagnostisk markør ved mikrobeidentifikasjon. Det mest vanlig brukte substrat for påvisning av dette enzymet er det naturlig forekommende glykosid eskulin (6,7-dihydroksykumarin-6-glukosid eller 6-((3-D-glukopyranosyloksy)-7-hydroksy-2H-1 - benzopyran-2-on).
Hydrolyse av eskulin gir P-D-glukose og eskuletin (6,7-dihydroksykumarin), idet den sistnevnte forbindelse påvises ved dannelsen av et brunt/sort kompleks i nærvær av
jernsalter. Denne testen ble først anvendt ved identifikasjon av enterokokker og har siden funnet bred anvendelse ved identifikasjonen av andre slekter (Swan, A., J. Clinical Pathology 7, s. 160-163 (1954), Trepeta et al, Antonie van Leewenhoek 53, s. 273-277 (1987)). Hovedulempen ved dette substratet er at når det resulterende kompleks som dannes inkorporeres i agar, spres det utover i mediet (James et al, Zbl. Bakt. Hyg. A267, s. 188-193 (1987)). Dette skaper vanskeligheter med å skjelne mellom P-glukosidaseproduser-ende kolonier når det er til stede i en blandet kultur.
Syntetiske substrater er også tilgjengelige for påvisning av P-D-glukosidase, hvorved man får enten kromogene eller fluorescerende forbindelser etter hydrolyse
(Manafi et al, Microbiol. Reviews 55, s. 335-348 (1991)). F eks har den fluorogene forbindelse 4-metylumbelliferyl-(3-D-glukosid vært mye anvendt selv om den har flere ulemper når den inkorporeres i et agarmedium. Disse omfatter det faktum at gjenkjen-nelsen av kolonier bare kan utføres under tilstedeværelsen av langbølget ultrafiolett lys, og også glukosen som frigjøres fra substratet ved hydrolyse, kan benyttes av organismene til å produsere syre. Dette forårsaker en reduksjon i fluorescensen som fremstilles av 4-metylumbelliferon på grunn av dominansen til den udissosierte form av molekylet ved lav pH. I tillegg er det frigjorte umbelliferon tilbøyelig til å diffundere gjennom agarenog skape vanskeligheter med å skjelne mellom individuelle kolonier som produserer mål-enzymet. Andre substrater som vanligvis anvendes, omfatter P-D-glukosidderivatene av nitrofenol (Trepeta et al, Antonie van Leewenhoek 53, s. 273-277 (1987)). Omfattende diffusjon er imidlertid igjen en alvorlig begrensende faktor når det inkorporeres slike substrater i faste medier (Manafi et al, Microbiol. Reviews 55, s. 335-348 (1991)).
P-galaktosidase er også en viktig diagnostisk markør ved mikrobeidentifikasjon. Den er kanskje den mest omfattende studerte av alle mikrobielle enzymer og dens tilste-deværelse har lenge vært ansett som en verdifull taksonomisk markør. Dette gjelder spesielt i bakteriefamilien Enterobacteriaceae hvor analyse av P-galaktosidase er blitt brukt i mange år for differensieringen mellom ikke-laktosefermenterende arter fra sakte eller sene laktosefermentorer (James, A.L., I Chemical Methods in Prokaryotic Systematics, s. 471-492, red. Goodfellow and 0'Donnel, Wiley & Sons (1994)). Et stort antall substrater er tilgjengelige for p-galaktosidase, idet det vanligste er orto-nitrofenyl-P-D-galaktosid (ONPG), som frigjør gul o-nitrofenol etter hydrolyse (Lowe, G.H., J. Medical Laboratory Technology 19, s. 21 (1962)). Det er også blitt anvendt fluorogene substrater som utnytter slike markører som resorufm, fluorescein og 4-metylumbelliferon (Manafi et al, Microbiol. Reviews 55, s. 335-348 (1991), Plovins et al, Applied and Environmental Microbiol. 60, s. 4638-4641 (1994)).
En viktig anvendelse av P-galaktosidaseanalysen er påvisningen av "coliformer" i vann og matprøver. Dette har ført til utviklingen av membranfiltreringsteknikker som - omfatter et egnet substrat for den direkte påvisning av P-galaktosidase (Brenner et al, Applied and Environmental Microbiol. 59, s. 3534-3544 (1993), Ceneci et al, Microbios 76, s. 47-54 (19 )). Det mest anvendte substrat for dette formålet er 4-metylumbelliferon-P-D-galaktosid. For eksempel ble substratet brukt i en hurtiganalyse som muliggjorde påvisning av så lite som 1 faececoliform pr 100 ml i løpet av 6 timer (Berg et al, Applied and Environmental Microbiol. 54, s. 2118-2122 (1988)). Begrensningene ved dette substratet er at det frigjorte 4-metylumbelliferon lett diffunderer over filteret og det frem-brakte fluorescens kan bare visualiseres under ultrafiolett lys.
På grunn av begrensningene til disse substratene for identifikasjon av P-glukosidase og P-galaktosidase, har det blitt anvendt kromogene forbindelser som gir uopp-løselige produkter etter hydrolyse. Slike substrater gir den fordel at det frigjorte kromogen forblir lokalisert rundt bakteriekolonien uten å diffundere gjennom mediet (Kodaka et al, J. Clinical Microbiol. 33, s. 199-201 (1995)). Eksemplene på disse for påvisningen av P-glukosidase omfatter indoksyl-P-D-glukosid og 5-brom-4-klor-3-indolyl-å-D-glukosid og eksempler for påvisningen av å-galaktosidase omfatter galakto-sider av indoksyl og dets halogenerte derivater, slik som 5-brom-4-klor-3-indolyl- P-D-galaktosid (X-gal) (Kodaka et al, J. Clinical Microbiol. 33, s. 199-201 (1995)). Aglykonet frigjort ved hydrolyse fra disse substratene oksideres hurtig av luft, slik at det dannes et fiolett/blått indigoidfargestoff på kolonimassen (James, A.L., I Chemical Methods in Prokaryotic Systematics, s. 471-492, red. Goodfellow and 0'Donnel, Wiley & Sons
(1994)). Selv om disse substratene er svært effektive, er de forholdsvis vanskelige å fremstille, og selv om de er kommersielt tilgjengelige, har deres svært høye kostnad vist seg å være uoverkommelig for storskaladiagnostisk anvendelse. Bruken av 8-hydroksy-kinolin-P-D-glukosidet er også blitt beskrevet som et alternativ til eskulin for påvisningen av p-glukosidase (James et al, Zbl. Bakt. Hyg. A267, s. 188-193 (1987)). Selv om over-bevisende resultater ble oppnådd, har man støtt på toksisitetsproblemer, særlig med grampositive organismer (Albert et al, British Journal of Experimental Pathology 34, s. 199-130(1953)).
Den foreliggende oppfinnelse vedrører visse nye 6- eller 7-substituerte derivater av eskuletin (6,7-dihydroksykumarin) som er mikrobielt hydrolyserbare til fluorescerende, jernchelaterende eskuletinrester som har en liten tilbøyelighet til å diffundere gjennom agar eller andre vandige miljøer, uten å lide av alle de ulempene som det er hen-vist til ovenfor.
Ifølge et første aspekt av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt en forbindelse med den generelle formel I:
hvor
R<1>og R<2>er et hydrogenatom;
hver av R3 og R<4>uavhengig av hverandre er en (Ci-Cg)alkyl- eller fenyl(Ci-Cg)-alkylgruppe, eller karboksy-(Ci-C4)alkyl-aminokarbonyl-(CrC4)akyl; eller
R<3>og R<4>danner sammen med karbonatomene som de er bundet til, en (C5-C8)sykloalkenring; og
én av Y og Z er en sukkerrest, en glukuronid-, glukoamidin-, glukuronsyre- eller glykuronsyrerest, en fosfatgruppe eller R<5>C02- hvor R<5>er (CrCi0)alkyl, og den andre av Y og Z er et hydrogenatom; eller et egnet salt eller et hydrat derav.
Heretter omfatter i denne beskrivelsen uttrykket "forbindelse" "salt" eller "hydrat" med mindre sammenhengen krever noe annet.
Slik det her er brukt viser uttrykket "(Ci-C8)alkyl" til rettkjedete eller forgrenede hydrokarbongrupper som har fra ett til åtte karbonatomer. Illustrerende for slike alkylgrupper er metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek-butyl, tert-butyl, pentyl, neopentyl, heksyl, heptyl og oktyl. Fra ett til fire karbonatomer kan være foretrukket.
Slik det her er brukt viser uttrykket "(Ci-Cio)alkyl" til rettkjedete eller forgrenede hydrokarbongrupper med fra ett til ti karbonatomer. Illustrerende for slike alkylgrupper er metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek-butyl, tert-butyl, pentyl, neopentyl, heksyl, heptyl, oktyl, nonyl og decyl. Fra ett til seks karbonatomer kan være foretrukket.
Slik det her er brukt henviser uttrykket "(C5-C8)-sykloalkenring" til en alisyklisk ring som har fra 5 til 8 atomer, og som i tillegg har én eller flere dobbeltbindinger. Illustrerende for slike sykloalkenylgrupper er syklopentenyl, sykloheksenyl, sykloheptenyl og syklooktenyl.
I forbindelser ifølge denne oppfinnelsen gir tilstedeværelsen av et asymmetrisk karbonatom opphav til enantiomerer. Tilstedeværelsen av flere asymmetriske karbonatomer gir opphav til diastereoisomerer som hver består av to enantiomerer, med en passende R- eller S-stereokjemi i hvert kiralt sentrum. Oppfinnelsen skal forstås å omfatte slike diastereoisomerer, optisk aktive enantiomerer og blandinger derav.
Uttrykket "egnet salt" henviser til et salt fremstilt ved å bringe en forbindelse med formel I i kontakt med en syre eller base som har et motion som ikke virker inn på den påtenkte bruk av forbindelsen. Eksempler omfatter natriumsaltet eller magnesium-saltet av et fosfatderivat eller saltet dannet fra et primært, sekundært eller tertiært amin hvor forbindelsen med den generelle formel I er en karboksylsyre. Et eksempel på et primært aminsalt kan være sykloheksylammoniumsaltet, et egnet sekundært aminsalt kan være piperidinsaltet og et tertiært aminsalt kan være trietylaminsaltet.
Foretrukne forbindelser med den generelle formel I omfatter de hvori, uavhengig eller i enhver forenlig kombinasjon: R<1>er hydrogen;
R2 er hydrogen;
R<3>er (Ci-C4)alkyl, særlig butyl, eller benzyl;
R<4>er (d-C4)alkyl;
den enzymatisk avspaltbare gruppe representert ved Y eller Z, er en a- eller fortrinnsvis (5-bundet sukkerrest, slik som p-D-glukose, p-D-galaktose, P-D-xylose, p-D-glukuronsyre eller N-acetyl-P-D-glukosamin, eller en fosfat- eller karboksylatgruppe
(R<5>COO-), hvor R<5>er en (Ci-Cio)alkylgruppe. Sukkerrester, særlig de som er avledet fra glukose og galaktose, er de mest foretrukne forbindelser.
Forbindelser hvor R<3>og R<4>sammen med karbonatomene som de er bundet til, danner en syklopenten- eller sykloheksenring, er spesielt foretrukket.
Aglykonresten med den generelle formel I er et substituert eskuletin. Når Y er en glukoserest og Z er hydrogen (dvs. når eskuletinringsystemet er substituert i 7-stillingen), er forbindelsene med den generelle formel I cichoriiner. Når Y er et hydrogenatom og Z er en glukoserest (dvs. når eskuletinringsystemet er substituert i 6-stillingen), er forbincF eisene med den generelle formel I eskuliner. Cichoriiner og analoger av cichoriiner når de andre sukkerrestene enn glukose er substituert i 7-hydroksylgruppestillingen, er foretrukket. Dette skyldes at de fluorescerende egenskapene til eskuletinringsystemet slukkes ved tilstedeværelsen av sukkersubstituentene i 7-stillingen; hydrolyse av det fluorogene, i motsetning til det fluorescerende, cichoriin (eller annen sukkeranalog) for å frigjøre eskuletin kan derfor observeres ved en økning i fluorescens. Ettersom eskuliner (og andre sukkeranaloger) allerede ikke har noen 7-hydroksysubstituent, fluorescerer de selv i den konjugerte tilstand, så ingen forskjell fra det frie aglykon kan observeres ved hjelp av fluorescens alene.
Når forbindelsen med den generelle formel I er en organisk ester, kan hver av Y og Z uavhengig av hverandre være en (CpC^alkylkarbonylgruppe. Foretrukne estere omfatter oktanoat- og butyratesterne. Esterderivatene kan anvendes når det mikrobielle enzym er en esterase.
Foretrukne forbindelser med den generelle formel I er: 3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-galaktosid, 3,4-sykloheksenoeskuletin-p-D-glukosid, 3,4-sykloheksenoeskuletm-p-D-glukuronid, 3-benzyl-4-metyleskuletin-(3-D-glukosid, 3,4-sykloheksenoeskuletin-N-acetyl-(5-glukosaminid, 3,4-sykloheksenoeskuletin- (5-D-xylosid, 3-n-butyl-4-metyleskuletin-P-D-galaktosid, 3-n-butyl-4-metyleskuletin-P-D-glukosid, 3,4-sykloheksenoeskuletin-6(7)-fosforsyre,
Ifølge et andre aspekt av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt en fremgangsmåte for fremstillingen av forbindelsene definert i generell formel I, som omfatter å derivatisere en eventuelt beskyttet forbindelse med generell formel II i 6- eller 7-stilling, og deretter eventuelt omdanne forbindelsen med generell formel I som derved dannes, til en annen forbindelse med generell formel I.
Derivatisering av forbindelsen med generell formel II til en forbindelse med generell formel I omfatter glykosylering, fosforylering og forestring.
Glykosidderivatet av forbindelsene med generell formel II kan dannes ved å behandle forbindelsen med et glykosid under egnede betingelser. Glykosylering av et eskuletinderivat inntrer i 7-stillingen på kumarinringen med mindre denne stillingen er blokkert, i hvilket tilfelle glykosylering kan finne sted i 6-stillingen. Et eksempel på en egnet blokkeringsgruppe er et benzylsyrehalogenid, slik som benzylklorid, benzylbromid eller benzyljodid, eller annen gruppe slik som benzylcyanid (Greene Protective Groups in Organic Synthesis, publ. Wiley-Interscience, s. 97-99 (1981)). Glykosylering etterfølges så av debenzylering ved hjelp av egnet behandling.
Det er foretrukket at hydroksylgruppene i glykosidet beskyttes ved tilsetning av en fjernbar beskyttelsesgruppe, slik som en acetylrest. Et eksempel på en egnet, beskyttet glykosidforbindelse er tetraacetylformen av P-glukosidet eller P-galaktosidet. Tetraace-tylderivatet kan avledes fra den tilsvarende p-acetobromheksose. Avbeskyttelse av hydroksylgruppene kan gjennomføres på hvilket som helst bestemt tidspunkt, men i praksis vil dette være sluttrinnet i dannelsen av den ønskede forbindelse. Avbeskyttelse<*>" kan omfatte behandling med en oppløsning av natriummetoksid i metanol når beskyttel-sesgruppen er en acetylrest. Betingelser for glykosylering kan velges av fagfolk innen teknikken uten unødig eksperimentering. Egnede betingelser kan imidlertid omfatte behandling av det beskyttede glykosid av eskulinet i en oppløsning av kaliumhydroksid i vandig aceton etterfulgt av avbeskyttelse. ;Organiske estere kan dannes fra den passende 6,7-dihydroksykumarinkarbok-sylsyre med generell formel II. Dihydroksykumarinkarboksylsyren kan eventuelt først acetyleres for å beskytte 6- og 7- hydroksylgruppene, og kan så omdannes til syrekloridet ved tilsetning av tionylklorid. Mono-, di- eller triaminoacylet kan dannes ved konjugasjon av syrekloridet med den passende aminoacylforbindelse. Aminoacylkon-jugatet kan forestres ved behandling med et (CrCi0)alkylkarbonylhalogenid i nærvær av pyridin. Eksempler på egnede alkylkarbonylhalogenider omfatter oktanoylklorid eller butyrylklorid. ;Dannelse av fosfatesterderivater kan oppnås ved behandling av eskuletinderivatet med fosforklorid (POCI3) i nærvær av pyridin (eller annet passende monofosforylerings-middel). ;Som nevnt ovenfor kan en forbindelse med generell formel I eventuelt modifiseres til en annen forbindelse med generell formel I. For eksempel kan, når enten Y eller Z er en enzymatisk avspaltbar gruppe, slik som en glykosidrest, glykosidet modifiseres in situ; for eksempel kan en glukoserest modifiseres til en glukuronsyrerest med oksygen i nærvær av platinakatalysator og karbon. Likeledes kan andre glykosider oksideres til deres 6-karboksylderivater (glukuronsyrer). I tillegg kan 7-substituerte substrater, f eks å-glukosider med generell formel I hvor Y er glukose, gi andre substrater ved passende om-setninger av den ledige fenolgruppe (6-hydroksyl), f eks karboksylestere, etterfulgt av avbeskyttelse av 7-substituenten med søtmandel-å-glukosidase. Dette gir derivater av ;eskulinsyreserien. ;Forbindelsene med generell formel II kan fremstilles ved å behandle en passende lineær eller syklisk P-ketoester (substituert eller usubstituert) med generell formel III med en forbindelse med generell formel IV i en Pechmann-kondensasjon. ;P-ketoesterne med generell formel III er som følger: ; ;
hvor ;hver av R og R uavhengig av hverandre er en acetyl-(CH3CO-) eller acylgruppe med formel X(CH2)nCO-, hvor n er et tall fra 0 til 6 og X er: (i) hydrogen, (CrC8)alkyl, eller fenyl (C,-C8)alkyl, ;(ii) -C02CH3eller -C02C2H5, eller ;(iii) C2H5OOCCH2CO-, hvor n er 1; eller ;R er hydrogen, en (Ci-C8)alkyl- eller en fenyl (CrC8)alkylgruppe; eller ;R og R danner tilsammen et syklisk keton -(CH2)nCO-, hvor n er et tall mellom 4 og ;7; og ;R<8>er (Ci-Cg)alkyl, fenyl eller metylfenyl. ;Av P-ketoesterne med generell formel III hvor R og R danner et syklisk keton, er syklopentanon og sykloheksanon foretrukket. Det er også foretrukket at R<8>er butyl eller metylfenyl. ;Forbindelsene med generell formel IV er: ; ;
hvor ;hver R<9>uavhengig av hverandre er hydrogen eller (CrC8)alkyl-CO; R<1>og R<2>er som beskrevet tidligere. ;De foretrukne forbindelser med generell formel IV er 1,2,4-trihydroksybenzenderivater eller, 1,2,4-triacetoksybenzenderivater ;
hvor R<1>og R<2>er som beskrevet tidligere. ;I praksis er imidlertid 1,2,4-trihydroksybenzen forholdsvis ustabilt og det foretrukne utgangsmateriale er derfor 1,2,4-triacetohydroksybenzen. 1,2,4-triacetoksy-hydrobenzen kan syntetiseres ved hjelp av Thiele-Winter-acetylering av den tilsvarende benzokinonforbindelse. ;Foretrukne (i-ketoestere er: ;etyl-2-n-butylacetoacetat, ;etyl-2-benzylacetoacetat, ;etyl-2-sykloheksanonkarboksylat, og ;etyl-2-syklopentanonkarboksylat. ;Produktet fra dette trinnet er en forbindelse med generell formel II som definert ovenfor. Andre forbindelser som er nevnt, er trivielt syntetiserbare ved hjelp av fremgangsmåter som er kjent innen teknikken. ;Dannelsen av 6,7-dihydroksykumarinkarboksylsyrer innenfor generell formel II kan utføres ved å behandle en egnet (3-ketoester med generell formel III, hvor X er ;(a) -CO2CH3, eller C02C2H5hvor n er et tall mellom 0 og 6, eller ;(b) C2H5OOCCH2CO-, hvor n er 1, ;med en forbindelse med generell formel IV som definert ovenfor. ;Foretrukne utgangsforbindelser omfatter dietylacetondikarboksylat, dimetyl-2-acetylglutarat eller dietylacetylglutarat. Når dietylacetondikarboksylat behandles med 1,2,4-triacetoksybenzen, er produktet etter hydrolyse 6,7-dihydroksykumarin-4-eddiksyre. ;
Utgangsmaterialer som ikke allerede er beskrevet, er lett syntetiserbare ved hjelp av fremgangsmåter som er kjent innen teknikken. ;Ifølge et tredje aspekt av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt et preparat som omfatter en forbindelse med generell formel I og eventuelt et fortynningsmiddel, en eksipiens eller et substrat som alle er mikrobiologisk aksepterbare. Substratet kan være et fast eller halvfast vekstunderstøttelsesmedium eller et flytende vekstunderstøttelses-medium. ;Agar er det tradisjonelle understøttelsesmedium som brukes innen mikrobiologi ;til veksten av mikroorganismer. Det fremstilles ved å autoklavere den dehydratiserte agar i vann med andre komponenter om nødvendig. Autoklaveringsprosessen ved temperatur-er over 100 °C forårsaker at agaren rehydratiseres slik at det dannes en gelatinøs, flytende agaroppløsning. Den dannede flytende agar får avkjøles litt og helles så, mens den fortsatt er flytende, over i egnede beholdere, slik som kulturplater eller Petri-skåler. Agaren vil gelere slik at det dannes et understøttelsesmedium etter ytterligere avkjøling. Valget av agar vil avhenge av stammen av mikroorganismer som skal dyrkes, men kan velges fra én av de følgende preparater: bakteriologisk agar, Columbia-agar, edelagar, utvelgelses-agar, hjerne-hjerte-infusjonsagar, LB-agar eller Lennox næringsagar, luria-agar, gjær-ekstrakt eller tryptonfordøyelsesprodukt, Andre valg av medium er beskrevet i Sambrook et al, Molecular Cloning, 2. utgave, A1-A3, Cold Spring Harbor Laboratory (1989), og i Difco Manual, 10. utgave, Difco Laboratories, Detroit, MI, USA. ;Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan blandes med den dehydratiserte agar som separate komponenter eller fremstilles som kombinerte partikler etter hva som passer. ;Vanligvis kan det utvalgte dyrkningsmedium også omfatte ett eller flere essensielle næringsstoffer, mineral, vitamin og/eller antibiotikum for å velge ut, fremme eller hjelpe til i veksten av en bestemt mikroorganisme, eller for å hjelpe til ved identifikasjonen eller nummereringen av en bestemt mikroorganisme. Antibiotika som vanligvis anvendes i mikrobiologiske dyrkningsmedier, omfatter: ampicillin, kloramfenikol, D-sykloserin, gentamicin, kanamycin, nalidinsyre, rifampicin, spektinomycin, streptomycin og tetrasyklin. Essensielle næringsstoffer omfatter aminosyrer som mikroorganismen som skal dyrkes, er vekstmangelfull på, eller en slik fermenterbar karbonkilde som et karbo-hydrat. Det kan også være nødvendig å tilsette visse mineraler, slik som f eks magnes-ium, kalsium, natrium, kalium eller jern, i form av et passende salt, eller ammonium-eller fosfatsalter. ;Dyrkingen av mikroorganismer på et fast understøttelsesmedium, slik som agar, kan utføres i en egnet beholder og denne vil i praksis være Petri-skålen eller kulturplaten. Vanligvis omfatter beholderen en base med et overhengende lokk for å la oksygen tilføres til aerobe bakterier når platen inkuberes. Når det dyrkes anaerobe bakterier, kan lokket være forseglet til basen eller platen kan inkuberes i en anaerob inkubator. ;Ifølge et fjerde aspekt av foreliggende oppfinnelse er det tilveiebrakt en fremgangsmåte for påvisning og/eller identifikasjon av mikroorganismer i en prøve, som omfatter trinnet med (a) å dyrke en mikroorganisme isolert fra prøven på et vekstunder-støttelsesmedium som inneholder en forbindelse med generell formel I, og (b) påvise frigjørelsen av en identifiserbar, kromogen eller fluorogen markør etter hydrolyse av forbindelsen med generell formel I. Mikroorganismene kan også være til stede i et flytende vekstunderstøttelsesmedium eller flytende prøve som skal analyseres. ;Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes til å påvise både gram-negative og gram-positive bakterier. Fremgangsmåten har anvendelse, men er ikke begrenset til påvisningen av de følgende slekter: Enterococcus, Listeria, Streptococcus, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Hafnia, Klebsiella, Proteus, Providencia, Salmo-nella, Serratia, Shigella og Yersinia. ;Den fluorescerende eller, sammen med jern, fargede markør som påvises ved fremgangsmåten, er resultatet av hydrolysen av forbindelsen med generell formel I som frigjør eskuletinresten. Hydrolyse av forbindelsen kan være karakteristisk for tilstedeværelsen av en mikroorganisme som skal påvises. ;Spesifikk påvisning av mikroorganismer er påkrevet på sykehus for å hjelpe til ved klinisk diagnose og effektiv fastleggelse av et passende forløp for medisinsk behandling. Vanlige biologiske prøver som en lege vil ønske å analysere med hensyn på mikro-organismeinnholdet, er spytt, urin, blod, avføring, innholdene i magesekken eller en biopsiprøve. Matvare- og drikkevareindustriene krever også spesifikk påvisning av mikroorganismer for å overvåke og opprettholde produktkvalitet og -sikkerhet. Likeledes trenger også vannindustrien å være i stand til å overvåke tilstedeværelsen og kvantiteten av mikroorganismer som er til stede i vanntilførselen. Egnede prøver for analyse ved fremgangsmåten ifølge dette aspektet av oppfinnelsen vil derfor være et spiselig stoff, vann eller annen drikkevare. ;Fremgangsmåten gjør i sin foretrukne form bruk av de forskjellige nye eskuletinderivatene som indikatorer for bestemte enzymatiske aktiviteter ved inkor-porering av agarmedium. På grunn av den hovedsakelig ikke-spredende karakter til jernchelatet som fremstilles, kan kolonier visualiseres og, forutsatt at mediet er passende selektivt, identifiseres. Fremgangsmåten tilpasses godt til bruken av cellulosenitrat-membranfilteret og derved til kolonitelling. ;Ifølge foreliggende oppfinnelse kan forbindelsene være til stede i vekstunder-støttelsesmediet ved en effektiv konsentrasjon som kan være fra 0,1 mg/ml til 2 mg/ml, passende fra 0,2 mg/ml til 1 mg/ml, og fortrinnsvis fra 0,4 mg/ml til 0,8 mg/ml. Det er foretrukket at en konsentrasjon på 0,5 mg/ml anvendes når vekstunderstøttelsesmediet er Columbia-agar. ;Følgelig omfatter foreliggende oppfinnelse også et sett som omfatter et vekstmedium inneholdende en forbindelse med generell formel I. Settet kan i tillegg omfatte en slik beholder som en Petri- eller kulturskål. ;Foretrukne trekk for det andre og etterfølgende aspekt av oppfinnelsen er som for det første aspekt mutatis mutandis. ;Oppfinnelsen vil nå bli beskrevet ved eksemplifisering under henvisning til de ledsagende eksempler som er tilveiebrakt for illustrasjonsformål. ;Eksempler 1- 4: ;Syntese av substituerte eskuletiner (6,7-dihydroksykumariner) ;Materialer ;Columbia-agar ble erholdt fra Lab M, Bury, Storbritannia. Kjemikalier involvert i syntesen av eskuletinderivatene ble alle erholdt fra Aldrich Chemical Company Ltd, Gillingham, Storbritannia. ;Eksempel 1: ;Syntese av 6,7-dihydroksy-3,4-sykloheksenokumarin ; ;
1,2,4-triacetoksybenzen (6,3 g, 25 mmol) og etyl- sykloheksanon-2-karboksylat (4,25 g, 25 mmol) ble varmet opp sammen i en liten kolbe inntil det ble erholdt en homogen, viskøs væske. Den lavest mulige temperatur ble anvendt. Den varme væsken ble avkjølt noe og en magnetrører innført. Avkjøling under 30 °C forårsaket størkning og derfor ble det ved denne temperaturen hurtig tilsatt 75 vekt% svovelsyre (35 ml) avkjølt til 10 °C til den omrørte væske. Dette senket temperaturen samtidig som homogeniteten ble opprettholdt. Reaksjonen fikk fortsette ved omgivelsestemperatur i 6 timer, idet det etter ca 3 timer ble dannet en hvit suspensjon. ;Suspensjonen ble i en tynn strøm helt over i hurtig omrørt is/vann (300 ml) og ga en suspensjon av kremgult fast stoff. Etter omrøring i 10 minutter ble det faste stoff fjernet ved vakuumfiltrering, vasket med rikelig vann og sugd tørt, og så lufttørket ved 40-50 °C. Råmaterialet ble krystallisert fra varm etanol. Etter avkjøling skiltes det ut lysegule nåler. Disse ble fjernet ved vakuumfiltrering og lufttørket (5,2 g (89 %)). ;Eksempel 2: ;Syntese av 6,7-dihydroksy-3-benzyl-4-metylkumarin ;
1,2,4-triacetoksybenzen (6,3 g, 25 mmol) og etyl-2-benzylacetoacetat (5,5 g, 25 mmol) ble varmet opp sammen som beskrevet i eksempel 1. 75 % svovelsyre (35 ml) ble tilsatt til den omrørte oppløsning og omrøring ble fortsatt i 16 timer. Den mørkt fargede suspensjon ble helt over i is/vann (350 ml) med god omrøring og den grå suspensjonen filtrert og resten vasket med rikelig vann. Det gjenværende faste stoff ble lufttørket og rekrystallisert fra varm etanol med etterfølgende tilsetning av litt vann for å hjelpe til ved krystallisasjon. Eskuletinderivatet dannet små hvite nåler (5,5 g, 75,3 %). ;Eksempel 3: ;Syntese av 6,7-dihydroksy-3-acetyl-4-metylkumarin ; ;
1,2,4-triacetoksybenzen (6,3 g, 25 mmol) og etyldiacetoacetat (4,3 g, 25 mmol) ble varmet opp sammen som beskrevet tidligere og behandlet med 75 % svovelsyre (35 ml). Etter 16 timer ble råproduktet isolert ved å helle det over i is/vann. Det lufttørkede materialet ble krystallisert fra varm etanol med tilsetning av varmt vann inntil krystallisa-sjonspunktet. Etter avkjøling ble det dannet lysegule nåler (3,5 g, 60 %). ;Eksempel 4: ;Syntese av 6,7-dihydroksy-4-metylkumarin-3-propionsyre ; ;
1,2,4-triacetoksybenzen (6,3 g, 25 mmol) og dimetyl-2-acetylglutarat (5,75 g, 25 mmol) ble varmet opp sammen og behandlet med 75 % svovelsyre (35 ml) som beskrevet tidligere. Etter omrøring i 20 timer ble råmaterialet isolert ved å helle det over i is/vann og produktet ble samlet opp etter vasking med vann. Produktet (etyl-6,7-dihydroksy-4-metylkumarin-3-propionat) ble krystallisert fra varm etanol (4,1 g, 56 %). ;Esteren ble hydrolyser! ved omrøring med en vandig oppløsning av kaliumhydroksid (3 % vekt/volum) som omfatter vann (90 ml) og etanol (10 ml). Etter flere timer avslørte en testprøve ikke noen gjenværende ester (TLC under anvendelse av etylacetat: toluen (3:1), u.v.-inspeksjon). Den alkaliske oppløsning ble omrørt og surgjort til pH 2-3 under anvendelse av saltsyre (2M). Den utfelte syre ble fjernet ved vakuumfiltrering, vasket med vann og rekrystallisert fra en blanding av varm metanol og vann (1:1) (2,95 g,44,6%). ;Beslektet preparat: ;6,7-dihydroksykumarin-4-eddiksyre ; ;
Dette ble fremstilt som i eksempel 4 ved utbytting av den anvendte ester med dietylacetondikarboksylat (5,05 g, 25 mmol). Temperaturen i den 20 timer lange reaksjonen ble holdt ved 10-15 °C for å forhindre mulig hydrolyse og dekarboksylering. Den isolerte syre utgjorde 2,4 g (47 %). ;Triacetoksybenzenet som ble anvendt ved de ovenfor nevnte, syntetiske fremgangsmåter, var enten innkjøpt (Lancaster Synthesis Ltd, Morecambe, Lancs) eller laget ved hjelp av Thiele-Winter-acetylering av p-benzokinon under anvendelse av et eddiksyreanhydrid. ;Eksempler 5- 10: ;Syntese av glykosider og beslektede forbindelser ;Eksempel 5: ;Syntese av 3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-glukopyranosid ; ;
3,4-sykloheksenoeskuletin (6,7-dihydroksy-3,4-sykloheksenokumarin (3,5 g, 15 mmol) ble oppløst i en vandig oppløsning av kaliumhydroksid, 16 ml 10 % vekt/volum KOH (29 mmol). Med omrøring oppløstes eskuletinet hurtig. Til dette ble det tilsatt a-acetobromglukose (6,25 g, 15 mmol) oppløst i aceton (18 ml). Oppløsningen var homogen og ble lysere i farge etter omrøring. Etter 18 timer ved 10-15 °C ble det dannet en gul utfelling. Denne ble fjernet ved filtrering hvorved man fikk en gul kake (3,0 g tørrvekt). ;Filtratet ble helt sakte over i omrørt isvann (200 ml). Utfellingen som ble dannet, ble filtrert på en Buschner-trakt, vasket med vann og tørket, hvorved man fikk en gummi-masse. Denne ble oppløst i diklormetan (50 ml) med oppvarming. Den svake utfelling som ble dannet etter avkjøling, ble fjernet. TLC viste at denne var 3,4-sykloheksenoeskuletin. Filtratet inneholdt tetraacetylglykosidet med et spor av eskuletinet. ;Den gule kake ble oppmalt og ekstrahert med varmt diklormetan og suspensjonen filtrert, idet resten (1,4 g) av eskuletinet ble beholdt for fremtidig glykosidering. Filtratet fra dette ble slått sammen med den tidligere diklormetanekstrakt, tørket med magnesiumsulfat (vannfritt) og rotasjonsinndampet, hvorved man fikk et lyst, fast stoff. Dette ble oppløst i varm metanol og rekrystallisert fra denne, hvorved man fikk små fargeløse krystaller av den rene tetraacetylforbindelsen (2,5 g, 29 %). ;Deacetylering ble utført ved å anvende natriummetoksid i metanol). Nyoppkuttet natrium (1,0 g) ble oppløst i metanol (100 ml). ;Tetraacetylforbindelsen (2,5 g) ble oppløst i metanol (50 ml) og behandlet med natriummetoksidoppløsning (20 ml). Forløpet av deacetylering ble fulgt ved hjelp av TLC inntil bare grunnlinjematerialet (oppløsningsmidlet - etylacetat/toluen, 3:1) var tilbake. Den metanoliske oppløsning ble brakt til pH 6,5 ved tilsetning av aliquoter av Amberlite IRI20 (H<+>), analytisk finhetsgrad, vasket etterbehandling med syre. Super-natantvæsken ble dekantert fra harpiksen og den sistnevnte vasket med metanol (3x10 ml). Metanol ble fjernet ved rotasjonsfordampning ved 30-40 °C og det gjenværende faste stoff krystallisert fra metanol/vann (1,5 g, 86 %). ;Eksempel 6: ;Syntese av 3-benzyl-4-metyleskuletin-(3-D-glukopyranosid ; ;
3-benzyl-4-metyleskuletin (eksempel 2) (4,25 g, 15,6 mmol) ble oppløst i en vandig oppløsning av kaliumhydroksid (16,5 ml 10 % vekt/volum KOH (29 mmol)) med omrøring. Det skiltes snart ut et gult, fast stoff, kaliumsaltet. En oppløsning av a-aceto-bromglukose (6,6 g, 16 mmol), oppløst i aceton (20 ml), ble tilsatt til den omrørte opp-løsning. Ytterligere tilsetning av aceton (3-4 ml) sikret homogenitet. Den lysebrune oppløsning ble omrørt over natten (16 timer). Den resulterende pasta ble frafiltrert med sug og resten sugetørket og så lufttørket ved romtemperatur. Tetraacetylglukosidet ble ekstrahert over i varm kloroform (3 x 30 ml) og den resulterende suspensjon filtrert fraen sparsom utfelling. Kloroformoppløsningen ble vasket med kald, fortynnet (3 %) natrium-karbonatoppløsning (3 x 30 ml) etterfulgt av vann. Den organiske fase ble tørket under anvendelse av vannfritt magnesiumsulfat og rotasjonsinndampet, hvorved man fikk et hvitt, fast stoff. Dette ble oppløst i varm etanol (100 ml) og avkjølt til 0 °C over natten. Krystallene ble fjernet ved sugefiltrering og pressing. Etter tørking i en vakuumovn veide produktet 3,0 g (32 %). Deacetylering av tetraacetylglukosidet (3,0 g) under anvendelse av metanolnatirummetoksid ble oppnådd som beskrevet i eksempel 5, og ga p-glukosidet (1,8 g,81,4%). ;Eksempel 7: ;Syntese av 3,4-sykloheksenoeskuletin-p-D-galaktopyranosid ; ;
3,4-sykloheksenoeskuletin (6,95 g, 30 mmol) ble oppløst i en vandig oppløsning - av kaliumhydroksid (35 ml, 10 % vekt/volum KOH (62,5 mmol)). a-acetobromgalaktose (13,6 g, 33 mmol) ble oppløst i aceton (36 ml) og denne oppløsningen ble tilsatt til den omrørte vandige eskuletinoppløsning. Tilsetning av litt mer aceton var nødvendig for å få en homogen oppløsning. Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten (10-15 °C). Utfelling stanset ?? (commenced betyr startet) etter 4 timer. Suspensjonen ble filtrert etter 16 timer. Resten < 1 g ble påvist å være hovedsakelig det uendrede eskuletin og ble kassert. Filtratet var tofaset, bestående av en nedre viskøs fase og et øvre vannlag. Den nedre fase ble etter separasjon helt over i en brønn med is/vann (250 ml) under omrøring, hvorved man fikk et rikelig hvitt bunnfall. Dette ble fjernet ved sugefiltrering, vasket med kaldt vann og tørket. Det tørkede faste stoff ble oppløst i diklormetan. TLC viste en stor, hurtig bevegende flekk av tetraacetylgalaktosidet og svært lite av eskuletinet. ;Det vandige øvre lag fra reaksjonsblandingen ble konsentrert ved rotasjons-inndamping ved 30-40 °C og helt over i isvann. Produktet var mye mindre enn fra det nedre lag, men inneholdt fortsatt en vesentlig mengde av det ønskede produkt. Det utfelte stoff ble fjernet ved sugefiltrering, tørket og oppløst i diklormetan. ;De kombinerte diklormetanoppløsninger ble vasket med fortynnet vandig na-triumkarbonat (2 x 50 ml) og så med vann. Etter tørking med vannfritt magnesiumsulfat ble oppløsningsmidlet fjernet ved rotasjonsfordampning ved 30 °C, hvorved man fikk en viskøs olje som ikke størknet. ;Det oljeaktige tetraacetylgalaktosid ble avbeskyttet ved oppløsning i metanol og tilsetning av metanolisk natriummetoksid (30 ml 1 % oppløsning) som beskrevet i eksempel 5. Etter avdamping av metanol dannet galaktosidet en olje som hurtig størknet til en masse av hvite krystaller (5,2 g, 44,8 %). ;Eksempel 8: ;Syntese av 3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-glukuronid ;
Til en omrørt oppløsning av 3,4-sykloheksenoeskuletin (2,32 g, 10 mmol) og metyl-2,3,4-tri-0-acetylglukopyranosylbromiduronat (3,97 g, 10 mmol) i nydestillert kinolin (20 ml) ble det tilsatt nyfremstilt sølv (I)-oksid (1,86 g, 15 mmol). Blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 24 timer i fravær av lys. Den resulterende oppslem-ming ble filtrert med sug, idet resten ble vasket med kald aceton inntil den var lysegrå av farge. Filteret ble sakte tilsatt til omrørt kald saltsyre (200 ml, 2M), hvorved man fikk en tett, grå utfelling som ble samlet opp ved sugefiltrering og vasket med mer 2M saltsyre (2 x 30 ml), resten ble sugd tørr og tørket i en vakuumtørkeovn ved omgivelsestemperatur. Rekrystallisasjon fra metanol ga et gråhvitt fast stoff (0,82 g, 15 %). ;Det acetylerte metyluronat ble avbeskyttet ved oppløsning i metanol og tilsetning av en femtedels molforhold av metanolisk natriumhydroksid (95 % metanol/5 % vann). Etter omrøring i 5 timer ble metanol fjernet ved rotasjonsfordampning. Vann (10 ml) ble tilsatt og oppløsningen nøytralisert med 2M saltsyre. Vann ble fjernet ved rotasjonsfordampning ved 60 °C og resten oppslemmet og omrørt i aceton i 1 time. Det opp-slemmede glukuronid ble fjernet ved sugefiltrering og aceton fjernet ved rotasjonsfordampning, hvorved man fikk et amorft, lysebrunt pulver (0,41 g, 65 %). ;3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-xylopyranosid og 3,4-sykloheksenoeskuletin-N-acetyl-P-D-glukosaminid ;Ved hjelp av lignende fremgangsmåter som de som er beskrevet, ble de følgende glykosider syntetisert, selv om de ikke ble isolert i ren tilstand. ;3,4-sykloheksenoeskuletin-p-D-xylopyranosid ; 3,4-sykloheksenoeskuletin-N-acetyl- p-D-glukosaminid ;
Eksempel 9: ;Syntese av 3,4-sykloheksenoeskuletin-6(7)-fosforsyre ;
Til en omrørt oppløsning av 3,4-sykloheksenoeskuletin (2,32 g, 10 mmol) i pyridin (5 ml) og toluen (10 ml) ble tilsatt fosforylklorid (1,84 g, 12 mmol) ved 0 °C. Den omrørte oppløsning fikk varmes opp til romtemperatur og ble deretter varmet opp på et oljebad ved 60 °C i 2 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble helt over i vann med god omrøring og gjort alkalisk (pH 12) ved tilsetning av 2M hydroksidoppløsning. ;Etter lagring over natten ved 5 °C ble toluenet fjernet ved hjelp av diklor-metanekstraksjon og vannlaget ble regulert til pH 8 med saltsyre og rotasjonsinndampet ved 50-60 °C, hvorved man fikk en lysegul rest. Denne ble oppløst i varmt vann og etter avkjøling til 0 °C skiltes natriumsaltet av fosfatet ut som et gråhvitt pulver. TLC (oppløs-ningsmiddel - etylacetat/toluen, 3:1) viste hovedsakelig grunnmaterialet (u.v.-absor-berende), men fortsatt med noe forurensende eskuletin til stede. Dette kunne stort sett fjernes ved gjentatt ekstraksjon med eter. ;Eksempel 10: ;Syntese av N(-7(6)-oktanoyloksy-6(7)-hydroksykumarin-4-acetyl)-glysylglysin ;
6,7-dihydroksykumarin-4-eddiksyre (2,04 g, 10 mmol) ble acetylert ved opp-løsning i overskudd av eddiksyreanhydrid (10 ml) og tilsetning av 2-3 dråper svovelsyre (d = 1,84). Etter forsiktig oppvarming inntrådte en svak eksoterm og etter ytterligere 30 min ved 40 °C ble reaksjonsblandingen avkjølt og helt på is/vann (100 ml). Det hvite faste stoff som sakte ble dannet, ble fjernet ved sugefiltrering og vasket med kaldt vann og tørket i en vakuumovn ved omgivelsestemperatur. ;Produktet (diacetatet) ble ikke rekrystallisert, men ble omdannet til syrekloridet ved tilsetning av tionylklorid (10 ml) og etterfølgende ny blanding i 1 time. Overskuddet av tionylklorid ble fjernet under redusert trykk og sporene ble eliminert ved gjentatt inn- - damping med tørr eter. ;Det oljeaktige syreklorid ble oppløst direkte i tetrahydrofuran (20 ml) og innført i en sakte strøm i en godt omrørt oppløsning av glysylglysin (1,32 g, 10 mmol) oppløst i en blanding av vann (20 ml) og pyridin (2 ml) for å virke som base. Etter 3 timer ble opp-løsningen rotasjonsinndampet for å fjerne tetrahydrofuran og avbeskyttet ved tilsetning av konsentrert ammoniakk (5 ml). Etter 1 time var deacetylering fullstendig og oppløs-ningsmidler ble fjernet ved rotasjonsfordamping under redusert trykk ved 50-60 °C. Produktet var forurenset med overskudd av glysylglysin og salter, og ble derfor rekrystallisert fra metanol/vann, hvorved man fikk produktet N(6,7-dihydroksykumarin-4-acetyl)glysylglysin. ;Forestring ;Glysylglysinkonjugatet (1,68, 5 mmol) ble oppløst i pyridin (10 ml) og til den omrørte oppløsning ble det tilsatt oktanoylklorid (0,9 g, 5,5 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og så helt over i en blanding av is/vann (90 ml) og konsentrert saltsyre (10 ml) med effektiv omrøring. Det gummiaktige faste stoff som skiltes ut, ble oppløst i etylacetat og vasket med konsentrert natrium-kloridoppløsning. Den organiske fase ble fraskilt, tørket (vannfritt natriumsulfat) og rotasjonsinndampet, hvorved man fikk et voksaktig fast stoff av oktanoatesteren av det"* hydrofile eskuletin.
N(7(6)-butyryloksy-6(7)-hydroksykumarin-4-acetyl)glysylglysin
Ved hjelp av en lignende fremgangsmåte, men ved å bytte ut med butyrylklorid (0,58 g, 5,5 mmol) i forestringsfremgangsmåten, ble det erholdt den tilsvarende butyratester (N(7(6)-butyryloksy-6(7)-hydroksykumarin-4-acetyl)-glysylglysin).
Eksempel 11:
Testfremgangsmåter under anvendelse av forbindelser som er tidligere syntetisert i eksemplene 1-10
Bakteriologiske undersøkelser ble utført på agarplater med glykosider eller andre derivater av de modifiserte eskuletiner inkorporert. Den følgende beskrivelse, hvor det anvendes 3,4-sykloheksenoeskuletin-å-D-glukosid til differensiering av gram-positive streptokokker og beslektede organismer, og til visualisering av eskulin-positive kolonier, tjener til å illustrere den generiske anvendelse av disse nye forbindelsene. - -
Eskulinagar ble fremstilt på følgende måte: Columbia-agar (45 g), jern(III)am-moniumsitrat (0,5 g) og eskulin (1,09 g) ble oppløst ved koking i destillert vann (1 liter). pH i dette mediet ble så regulert til 7,5 og mediet sterilisert ved autoklavering i 10 min ved 116 °C. Mediet fikk avkjøles til 55 °C før det ble helt over i 20 ml volumer. Agar inneholdende 3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-glukosid ble fremstilt på en identisk måte, bortsett fra at eskulin ble byttet ut med dette nye glykosidet (CHE-å-D-gluk) (0,5 g).
150 stammer av enterokokker samlet opp fra et bredt spekter av sykehus- og miljøprøver ble identifisert under anvendelse av fremgangsmåten til Facklam og Collins (J. Clinical Microbiol. 27, s. 731-734 (1989)). Hver av disse stammene ble inokulert i fysiologisk saltoppløsning for å fremstille et inokulum av omtrent IO<8>organismer pr ml. Dette ble oppnådd ved å utføre en sammenligning med en McFarlane Standard 0,5. Ved å
anvende en flerpunktsinokulator (Denley) ble så 1 il av hver suspensjon inokulert på begge testmediene, idet man sikret at ikke mer enn 12 stammer ble inokulert pr plate. I tillegg til disse enterokokkene ble et utvalg av 40 streptokokker og stammer av Listeria
sp. samlet inn og identifisert med API 32 STREP med supplerende tester der hvor det ble angitt. Disse ble også inokulert på identisk måte. 250 stammer av Enterobacteriaceae ble også samlet inn fra et bredt spekter av kilder, og deres identitet bekreftet ved hjelp av API 20 E-systemet (Biomerieux). Disse ble inokulert på både eskulin- og CHE-P-D-glukosid-medium som beskrevet ovenfor.
Til sist ble 7 stammer av enterokokker og to stammer av streptokokker erholdt fra National Collection of Type Cultures (NCTC), London. Disse var: Enterococcus faecium NCTC 7171, Enterococcus faecalis NCTC 755, Enterococcus gallinarum NCTC 11428, Enterococcus mundtii NCTC 12343, Enterococcus casselijlavus NCTC 12341, Enterococcus durans NCTC 8307, Enterococcus raffinosis NCTC 12192, Streptococcus agalactiae NCTC 8181 og Streptococcus bovis NCTC 8177. Suspensjoner av disse 10 stammene ble fremstilt som ovenfor ved 10<8>organismer pr ml og fortynnet i sterilt, destillert vann ved hjelp av standardmetoder for å fremstille suspensjoner med omtrent 1 organisme pr ml. 3 x 100 ml volumer av hver suspensjon ble så filtrert på 3 cellulose-nitratmembranfiltere (Sartorius) under anvendelse av en standard filtreringsmetode. Ett av disse filtrene ble plassert på en CHE-P-D-glukosidplate, den andre på en eskulinplate og den tredje på en Columbia-agarplate uten substrat. Alle platene ble inkubert ved 37 °C i luft i nøyaktig 18 timer, bortsett fra platene inokulert med streptokokker som ble inkubert i luft supplert med 5 % karbondioksid. Etter inkubasjon ble platene undersøkt med henblikk på tilstedeværelsen av sorte eller brune kolonier, og kolonitellinger ble utført på membranfiltrene.
Resultater:
Alle stammer som ble brukt i denne undersøkelsen, vokste godt på både CHE-{3- - D-glukosid- og eskulinholdige medier. De to substratene var merkbart forskjellige når det gjelder diffusjon i agaren. Hydrolyse av eskulin resulterte i et sort kompleks som dif-funderte i stor grad, mens hydrolyse av CHE-P-D-glukosid ga et sort kompleks svært begrenset til bakterieveksten. Det kan ses i tabell 1 at hydrolysen av CHE-P-D-glukosid korrelerte svært nært til hydrolyseeskulin. Dette gjaldt spesielt for de gram-positive bak-teriene hvor hver stamme som ble testet, viste fullstendig korrelasjon mellom de to substratene. Av 150 stammer av enterokokker og 12 stammer av Listeria sp. hydrolyserte hver stamme både eskulin og CHE-P-D-glukosid, hvorved det ble fremstilt sorte kolonier. Utmerket korrelasjon ble også oppnådd med disse to substratene for de gram-negative bakterier som ble testet. Ett unntak fra dette var i tilfellet med E. coli hvor stammer (10 %) viste seg å hydrolysere CHE-p-D-glukosid, men var ute av stand til å hydrolysere eskulin.
I membranfiltreringsforsøket ga alle NCTC-stammene av enterokokker og stammen av S. bovis sorte kolonier på CHE-P-D-glukosid-medium. På filtrene plassert på eskulinmedium ga alle stammene et lysebrunt, diffunderbart kompleks som spredte seg utover overflaten til filteret og også inn i agaren under membranen. Det var ingen statistisk forskjell mellom koloniantallene på CHE-P-D-glukosid, eskulin eller hjerne-hjerte-infusjon for noen av organismene som ble testet (data ikke vist). S. agalactiae NCTC tjente som en negativ kontroll og oppviste ikke hydrolyse av noen av stoffene.
Hovedfordelen ved CHE-P-D-glukosid er at når det frigjorte sykloheksenoeskuletin kombineres med jern, er det resulterende sorte kompleks svært uoppløselig og diffunderer ikke gjennom agarmediet. Dette resulterer i dannelsen av atskilte sorte kolonier som det lett kan skjelnes mellom i en blandet kultur. Når eskulin hydrolyseres, kombineres det frigjorte eskuletin derimot med jern slik at det dannes et brunt/sort kompleks som diffunderer hurtig gjennom agar. Denne diffusjonen kan føre til vanskeligheter med å skille ut eskulinpositive kolonier i en blandet kultur. Forskjellen mellom de to substratene trer sterkt frem i fig. 1 som viser en stamme av Listeria monocytogenes (NCTC 11994) på CHE-p-D-glukosidmedium og en tradisjonell eskulinbasert selektiv agar. Fraværet av enhver diffusjon av det sorte kompleks når det anvendes CHE-p-D-glukosid, vil også kunne gi en betydelig fordel når bakterier identifiseres under anvendelse av en flerpunkts inokulasjonsteknikk dersom det anvendes store antall stammer på hver plate.
En annen svært nyttig fordel ved CHE-P-D-glukosid som har fremkommet fra denne undersøkelsen, er dets mulige anvendelse i membranfiltreringsundersøkelser med hensyn på faecestreptokokker/enterokokker. Eskulin har lenge vært ansett som et potens-ielt anvendbart substrat for et slikt formål, problemene som er forbundet med diffusjonen av eskuletinkomplekset, har imidlertid ikke blitt overvunnet til tross for store anstreng-elser. (Daoust et al, Applied Microbiology 29, s. 584-589 (1975)). Dette problemet med - diffusjon er særlig akutt når store antall enterokokker er til stede og hele membranen far-ges med det gyllenbrunfargede eskuletinkompleks (Brodsky et al, Applied and Environmental Microbiology 31, s. 695-699 (1976)). Når CHE-p-D-glukosid anvendes som substrat, vokser enterokokker som atskilte sorte kolonier på membranen, og som lett kan skilles ut i blandet populasjon. Dette skyldes at dette sorte kompleks som dannes i kolonien, ikke er i stand, til å diffundere gjennom membranen og inn i agaren, og følgelig er en eventuelt fremstilt farge svært begrenset til den aktuelle koloni. I tilfellet med eskulin diffunderer det mindre komplekset som dannes lett gjennom membranen og inn i agaren, og den brune fargen som fremstilles, er lite synlig på grunn av omfattende diffusjon. Denne forskjellen mellom de to substratene fremkommer godt i fig. 2.
Det er blitt rapportert at hydrolyse av eskulin hurtig kan påvises ved å overvåke bortfallet av det naturlige substratfluorescens under hydrolyse i nærvær av jernsalter (Edberg et al, J. Clinical Microbiology 4, s. 180-184 (1976)). CHE-p-D-glukosid, i motsetning til eskulin, fluorescerer ikke på grunn av utbyttingen av 7-hydroksylgruppen i sykloheksenoeskuletinmolekylet. Når dette substratet hydrolyseres, er imidlertid det frigjorte sykloheksenoeskuletin fluorescerende. En alternativ strategi for en fluorescens-analyse for anvendelse av CHE-p-D-glukosid ville derfor være å se etter generering av fluorescens i fravær av jernsalter. Som konklusjon er CHE-P-D-glukosid et svært nyttig' substrat som gir et sort ikke-diffunderbart produkt etter hydrolyse ved hjelp av P-D-glukosidase i nærvær av jern. Substratet synes å være ikke-inhiberende og dets syntese er forholdsvis lettvint.
Eksempel 12:
CHE-glukosid i blodagar
Sykloheksenoeskuletin-glukosid (CHE-glukosid) ble inkorporert i blodagarbaser for påvisning og identifikasjon av organismer som gir høy hemolyse og produserer glukosidase. Når organismer inkuberes anaerobt, kan CHE-glukosid-blodagarbaser brukes til å påvise tilstedeværelsen av glukosidaseinduserende anaerobe bakterier, slike som Bact. fragilis. 41 g Columbia-agarbase (Lab 1) ble utveid og plassert i en kolbe sammen med 0,5 g CHE-glukosid, 0,95 g jem(III)-glukonat og 0,05 g sinkacetat. En liter vann ble tilsatt, og det ble blandet autoklavert ved 121 °C i 15 min. Kolben ble avkjølt til 47 °C og 100 ml hesteblod ble tilsatt, det ble blandet og helt opp i Petri-skåler.
Bakterier testet:
Strept. pyrogenes - 3 stammer
Strept. milleri - 1 stamme
Enterococci spp. - 5 stammer
Group C Streptococci - 2 stammer
Strep. sanguis - 1 stamme
Ps. aeruginosa - 1 stamme
E. coli - 1 stamme
Clost. perfringens - 1 stamme
Bact. fragilis - 1 stamme
Resultater:
De følgende stammer ga sorte kolonier: Alle stammer av Enterococci, Strep. sanguis, Strept. milleri Group F, Bact.
fragilis.
Alle stammer av Strept. pyrogenes, Streptococci som tilhører gruppene B, C og
F, og noen enterokokker ga noe hemolyse.
Den kan oppsummeres med at CHE-glukosid inkorporert i blodagarbaser gir klar påvisning av glykosidaseenzymer uten noen interferens med hemolysemønstre. Ved å anvende disse to indikatorene og passende, selektive midler, kan disse viktige patogenene isoleres og foreløpig identifiseres på primærkulturplater.
Claims (15)
1. Forbindelse,
karakterisert vedat den har den generelle formel I:
hvor
R<1>og R<2>er et hydrogenatom;
hver av R<3>og R<4>uavhengig av hverandre er en (Ci-Cg)alkyl- eller fenyl(Ci-Cg)-alkylgruppe, eller karboksy-(Ci-C4)alkyl-aminokarbonyl-(Ci-C4)akyl; eller
R<3>og R<4>danner sammen med karbonatomene som de er bundet til, en (C5-Cg)sykloalkenring; og
én av Y og Z er en sukkerrest, en glukuronid-, glukoamidin-, glukuronsyre- eller glykuronsyrerest, en fosfatgruppe eller R<5>C02- hvor R<5>er (Ci-Cio)alkyl, og den andre av Y og Z er et hydrogenatom; eller
et egnet salt eller et hydrat derav.
2. Forbindelse ifølge krav 1,
karakterisert vedat, uavhengig av hverandre eller i hvilken som helst forenlig kombinasjon: R<1>er hydrogen; R er hydrogen; R3 er (CrC4)alkyl eller benzyl; R<4>er (Ci-C4)alkyl; den enzymatisk avspaltbare gruppe representert ved Y eller Z, er en a- eller (3-bundet sukkerrest, slik som (3-D-glukose, P-D-galaktose, (5-D-xylose, P-D-glukuronsyre eller N-acetyl-P-D-glukosamin, eller en fosfat- eller en karboksylatgruppe (R<5>COO-), hvor R5 er en (Ci-Cio)alkylgruppe.
3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2,
karakterisert vedat den er
3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-galaktosid,
3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-glukosid, 3,4-sykloheksenoeskuletin-(3-D-glukuronid, 3-benzyl-4-metyleskuletin-P-D-glukosid,
3,4-sykloheksenoeskuletin-N-acetyl-P-glukosaminid, 3,4-sykloheksenoeskuletin-P-D-xylosid, 3-n-butyl-4-metyleskuletin-P-D-galaktosid, 3-n-butyl-4-metyleskuletin-P-D-glukosid,
3,4-sykloheksenoeskuletin-6(7)-fosforsyre,
4. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelsene med den generelle formel I som definert i krav 1,
karakterisert vedat en eventuelt beskyttet forbindelse med den generelle formel II
derivatiseres i 6- eller 7-stilling, og eventuelt omdannes deretter og den derved dannede forbindelse med den generelle formel I omdannes til en annen forbindelse med den generelle formel I.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert vedat derivatisering av forbindelsen med den generelle formel II til en forbindelse med den generelle formel I er glykosylering, fosforylering og/eller forestring.
6. Preparat,
karakterisert vedat det omfatter en forbindelse med den generelle formel I og eventuelt et fortynningsmiddel, en eksipiens eller et substrat som er mikrobiologisk akseptabelt.
7. Preparat ifølge krav 6,
karakterisert vedat substratet er et vekstunderstøttelsesmedium.
8. Preparat ifølge krav 7,
karakterisert vedat vekstunderstøttelsesmediet er fast, halvfast eller flytende.
9. Preparat ifølge krav 7 eller 8,
karakterisert vedat vekstunderstøttelsesmediet er agar.
10. Preparat ifølge hvilket som helst av kravene 7-9,
karakterisert vedat vekstunderstøttelsesmediet i tillegg omfatter ett eller flere av essensielt næringsstoff, mineral, vitamin og/eller antibiotikum.
11. Kulturskål,
karakterisert vedat den inneholder et preparat ifølge hvilket som helst av kravene 6-10.
12. Fremgangsmåte for påvisning og/eller identifikasjon av en mikroorganisme i en prøve,
karakterisert vedde følgende trinn: (a) dyrking av mikroorganismen isolert fra prøven på et vekstunderstøttelsesmedium som inneholder en forbindelse med den generelle formel I, og (b) påvisning av frigjørelsen av en identifiserbar, farget eller fluorescerende markør etter hydrolysen av forbindelsen med den generelle formel I.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 12,
karakterisert vedat prøven er en biologisk prøve, et spiselig stoff, vann eller annen væske som kan drikkes.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13,
karakterisert vedat den biologiske prøve er spytt, urin, blod, avføring, innholdet i magesekken eller en biopsiprøve.
15. Sett,
karakterisert vedat det omfatter et vekstmedium som inneholder en forbindelse med den generelle formel I og eventuelt en kulturskål.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB9609024.6A GB9609024D0 (en) | 1996-05-01 | 1996-05-01 | Compounds |
PCT/GB1997/001202 WO1997041138A2 (en) | 1996-05-01 | 1997-05-01 | Esculetin derivatives |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO985070D0 NO985070D0 (no) | 1998-10-30 |
NO985070L NO985070L (no) | 1998-10-30 |
NO313010B1 true NO313010B1 (no) | 2002-07-29 |
Family
ID=10792941
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO19985070A NO313010B1 (no) | 1996-05-01 | 1998-10-30 | Eskuletinderivater, fremgangsmåte for fremstilling derav, preparat, kulturskål og sett, samt fremgangsmåte for påvisningog/eller identifikasjon av en mikroorganisme i en pröve |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6008008A (no) |
EP (1) | EP0900230B1 (no) |
JP (1) | JP4155599B2 (no) |
KR (1) | KR100517757B1 (no) |
AT (1) | ATE210674T1 (no) |
AU (1) | AU713108B2 (no) |
CA (1) | CA2253506C (no) |
DE (1) | DE69709092T2 (no) |
DK (1) | DK0900230T3 (no) |
ES (1) | ES2169859T3 (no) |
GB (1) | GB9609024D0 (no) |
NO (1) | NO313010B1 (no) |
NZ (1) | NZ332606A (no) |
PT (1) | PT900230E (no) |
WO (1) | WO1997041138A2 (no) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9609024D0 (en) * | 1996-05-01 | 1996-07-03 | Idg Uk Ltd | Compounds |
EP0961834B1 (en) | 1997-06-04 | 2003-05-07 | The Newcastle upon Tyne Hospitals National Health Service Trust | Identification of salmonella |
US7344854B2 (en) * | 1999-07-20 | 2008-03-18 | Micrology Laboratories, Llc | Test media for quantitative or qualitative identification and differentiation of general coliforms, E. coli, Aeromonas spp and Salmonella spp in a test sample |
US7273719B2 (en) * | 1999-07-20 | 2007-09-25 | Micrology Laboratories, Llc | Test media for quantitative or qualitative identification and differentiation of general coliforms, E coli, Aeromonas spp and Salmonella spp materials in a test sample |
US6350588B1 (en) * | 1999-07-20 | 2002-02-26 | Micrology Laboratories, Llc | Test media and quantitative or qualitative method for identification and differentiation of biological materials in a test sample |
FR2800377B1 (fr) | 1999-10-28 | 2003-05-09 | Bio Merieux | Substrat enzymatique, procede de synthese et utilisations |
FR2810676B1 (fr) * | 2000-06-27 | 2003-03-07 | Alain Rambach | Milieu de culture pour la detection et/ou la discrimination des bacteries du genre vibrio et procede de mise en oeuvre |
US20070155701A1 (en) * | 2002-08-23 | 2007-07-05 | Alexandros Makriyannis | Keto cannabinoids with therapeutic indications |
US7538233B2 (en) * | 2003-09-05 | 2009-05-26 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Coumarins as iNOS inhibitors |
US7094528B2 (en) * | 2004-06-30 | 2006-08-22 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Magnetic enzyme detection techniques |
US7906276B2 (en) | 2004-06-30 | 2011-03-15 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US7504235B2 (en) | 2005-08-31 | 2009-03-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection technique |
US8758989B2 (en) * | 2006-04-06 | 2014-06-24 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US7897360B2 (en) | 2006-12-15 | 2011-03-01 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection techniques |
EP2146728A4 (en) * | 2007-05-21 | 2010-12-29 | Univ Wake Forest Health Sciences | PRELIMINARY CELLS FROM THE HARN AND METHOD FOR THEIR USE |
FR2926563B1 (fr) * | 2008-01-21 | 2013-04-26 | Biomerieux Sa | Procede de detection et/ou d'identification de clostridium difficile |
WO2010065239A1 (en) | 2008-12-05 | 2010-06-10 | Wake Forest University Health Sciences | Stem cells from urine and methods for using the same |
FR2964978B1 (fr) * | 2010-09-21 | 2013-11-15 | J Soufflet Ets | Nouveaux substrats fluorescents, procede d'obtention de ces produits et leur application |
EP2714923A4 (en) * | 2011-05-31 | 2015-07-08 | Univ Texas | METHOD AND COMPOSITIONS FOR DETECTING FUNCTIONAL CLOSTRIDIUM DIFFICILE TOXINS |
GB201319768D0 (en) | 2013-11-08 | 2013-12-25 | Glycosynth Ltd | Naphthalene derived chromogenic enzyme substrates |
FR3019833A1 (fr) * | 2014-04-11 | 2015-10-16 | Balel S A | Procede de detection et d'identification de clostridium difficile |
WO2020064054A1 (de) | 2018-09-24 | 2020-04-02 | 4Gene Gmbh | Verfahren, vorrichtung und indikator zur lokalisation von überhitzungsschäden |
US11986886B2 (en) | 2019-06-06 | 2024-05-21 | Albert Einstein College Of Medicine | Rapid synthesis of metal nanoparticles |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59192099A (ja) * | 1983-04-12 | 1984-10-31 | Ajinomoto Co Inc | 微生物菌数の測定法 |
US5055594A (en) * | 1990-07-19 | 1991-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Fluorogenic trypotophanase substrates |
JPH06312925A (ja) * | 1993-03-02 | 1994-11-08 | Kureha Chem Ind Co Ltd | 軟骨保護剤及び新規エスクレチン誘導体 |
US5574062A (en) * | 1993-04-13 | 1996-11-12 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Coumarin derivative and use thereof |
JP2902318B2 (ja) * | 1994-12-28 | 1999-06-07 | 呉羽化学工業株式会社 | エスクレチン誘導体、その製造方法及びマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤 |
GB9609024D0 (en) * | 1996-05-01 | 1996-07-03 | Idg Uk Ltd | Compounds |
-
1996
- 1996-05-01 GB GBGB9609024.6A patent/GB9609024D0/en active Pending
-
1997
- 1997-05-01 AT AT97918287T patent/ATE210674T1/de active
- 1997-05-01 DK DK97918287T patent/DK0900230T3/da active
- 1997-05-01 JP JP53867697A patent/JP4155599B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-05-01 PT PT97918287T patent/PT900230E/pt unknown
- 1997-05-01 CA CA002253506A patent/CA2253506C/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-01 EP EP97918287A patent/EP0900230B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-01 DE DE69709092T patent/DE69709092T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-01 KR KR1019980708651A patent/KR100517757B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-05-01 WO PCT/GB1997/001202 patent/WO1997041138A2/en active IP Right Grant
- 1997-05-01 AU AU26469/97A patent/AU713108B2/en not_active Expired
- 1997-05-01 NZ NZ332606A patent/NZ332606A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-05-01 ES ES97918287T patent/ES2169859T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-10-30 NO NO19985070A patent/NO313010B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-11-02 US US09/184,231 patent/US6008008A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-12-28 US US09/472,980 patent/US6287798B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2253506A1 (en) | 1997-11-06 |
US6287798B1 (en) | 2001-09-11 |
KR100517757B1 (ko) | 2006-06-21 |
EP0900230A2 (en) | 1999-03-10 |
JP2000510457A (ja) | 2000-08-15 |
US6008008A (en) | 1999-12-28 |
DE69709092D1 (de) | 2002-01-24 |
JP4155599B2 (ja) | 2008-09-24 |
AU2646997A (en) | 1997-11-19 |
WO1997041138A3 (en) | 1997-12-11 |
KR20000065074A (ko) | 2000-11-06 |
DE69709092T2 (de) | 2002-08-22 |
WO1997041138A2 (en) | 1997-11-06 |
CA2253506C (en) | 2007-09-25 |
AU713108B2 (en) | 1999-11-25 |
NZ332606A (en) | 1999-10-28 |
ATE210674T1 (de) | 2001-12-15 |
GB9609024D0 (en) | 1996-07-03 |
NO985070D0 (no) | 1998-10-30 |
NO985070L (no) | 1998-10-30 |
ES2169859T3 (es) | 2002-07-16 |
DK0900230T3 (da) | 2002-04-08 |
EP0900230B1 (en) | 2001-12-12 |
PT900230E (pt) | 2002-05-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6287798B1 (en) | Esculetin derivatives | |
US5210022A (en) | Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria | |
US5726031A (en) | Test media and quantitative method for identification and differentiation of biological materials in a test sample | |
EP0961834A1 (en) | Identification of salmonella | |
US8404460B2 (en) | Method for detecting and/or identifying Clostridium difficile | |
US20060172364A1 (en) | Novel chromogenic substrates based on Alizarin, their applications and formulations containing such substrates | |
DE60224072T2 (de) | Enzymaktivitätsindikatoren | |
US6130057A (en) | Method for differentiating microorganisms in a sample | |
JP5751658B2 (ja) | 腸管出血性大腸菌o157、o26、o111選択分離培地 | |
James et al. | Note: Cyclohexenoesculetin‐β‐D‐glucoside: a new substrate for the detection of bacterial β‐D‐glucosidase | |
US20020086278A1 (en) | Chromogenic media containing blood or hemin | |
JP2001008679A (ja) | 大腸菌o26分離用培地 | |
CN106432369B (zh) | 一种基于吲哚酚衍生物、2-(苯并噻唑-2′-基)苯酚衍生物的糖苷的合成方法 | |
DE60037133T2 (de) | Enzymatisches substrat, verfahren zur herstellung und verwendung desselben | |
AU2011298206B2 (en) | Use of a beta-glucosidase activator for detecting and/or identifying C. difficile | |
WO2015067926A1 (en) | Chromogenic substrates for beta-d-glucuronidase activity and use thereof for microbial detection |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |