NO308509B1 - FremgangsmÕte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein pÕ cellemembranen samt fremgangsmÕte for fremstilling av idiotypepulse - Google Patents
FremgangsmÕte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein pÕ cellemembranen samt fremgangsmÕte for fremstilling av idiotypepulse Download PDFInfo
- Publication number
- NO308509B1 NO308509B1 NO923542A NO923542A NO308509B1 NO 308509 B1 NO308509 B1 NO 308509B1 NO 923542 A NO923542 A NO 923542A NO 923542 A NO923542 A NO 923542A NO 308509 B1 NO308509 B1 NO 308509B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- idiotype
- making
- protein
- dendritic cells
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title claims abstract description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 8
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 title claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 48
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 29
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 16
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 9
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 abstract description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 22
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 9
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 1-[[2-[(1R)-1-aminoethyl]-4-chlorophenyl]methyl]-2-sulfanylidene-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound N[C@H](C)C1=C(CN2C(NC(C3=C2C=CN3)=O)=S)C=CC(=C1)Cl BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 7,12-dimethyltetraphene Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(C=CC=C1)C1=C2C ARSRBNBHOADGJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 108010058936 Cohn fraction V Proteins 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N DMBA Natural products COC1=CC(OC)=CC(C=O)=C1 VFZRZRDOXPRTSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000005717 Myeloma Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045503 Myeloma Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000007416 antiviral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4208—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig
- C07K16/4241—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig
- C07K16/4258—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig
- C07K16/4266—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an idiotypic determinant on Ig against anti-human or anti-animal Ig against anti-receptor Ig against anti-tumor receptor Ig
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
Description
Oppfinnelsens bakgrunn
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein på cellemembranen samt fremgangsmåte for fremstilling av idiotypepulsede dendrittceller.
Immunsystemet hos hvirveldyr virker slik at det gjenkjenner og fjerner materialer, slik som patogener, bak-terier og virus, som oppfattes som fremmed for verten. I tillegg tjener immunsystemet også som et overlevelsessystem for å fjerne maligne celler som, ettersom de uttrykker endrede proteiner på celleoverflaten, anses som fremmede. Immuno- logiske responser på fremmedstoffer, kalt antigener, omfatter en humoral respons og en cellulær respons. Den humorale respons omfatter fremstillingen av bestemte antistoffer eller immunoglobuliner som gjenkjenner og binder seg til antigenet. Den cellulære respons omfatter frigjørelsen av celler som hjelper til å fjerne antigenene.
En immunrespons kan ofte induseres eller forsterkes ved hjelp av aktiv immunisering med en vaksine (eller et immunogen) som omfatter et antigen, eller.et molekyl som ligner på et antigen. Ofte er det nødvendig å gi immun-forsterkere, kalt adjuvanser, i tillegg til immunogenet.
De fleste B-lymfoidtumorer er kjennetegnet ved uttrykking av immunoglobulin (lg) på cellemembranen. Idio-typen (id) til overflate-lg kan anses som et tumorspesifikt antigen eller en tumorspesifikk markør og er blitt brukt som et mål for immunoterapi. Monoklonale anti-id-antistoffer er blitt brukt til å undersøke immunobiologien til disse tumorene og er også blitt brukt i terapeutiske forsøk. Den passive administrering av anti-id-monoklonale antistoffer (Mabs), spesielt av museopprinnelse, er imidlertid blitt hindret av en rekke problemer som har redusert deres anvend-barhet ved klinisk bruk. Noen av disse problemene er (i) det frie antigen i sirkulasjon ii) immunresponsen mot muse-Ig som oppstår, og (iii) heterogeniteten til tumorcellene. Flere undersøkelser har rapportert at immunisering med idiotype protein eller underfragmenter kan beskytte dyret mot fremveksten av et plasmacytom eller overflate-lg-bærende lymfom. Den induserte immunrespons omfatter anti-idiotypiske antistoffer som T-celle-avhengig immunitet. For å fremkalle slike antistoffer og immunitet mot en utfordring med tumorceller er det blitt påvist gjentatte ganger at det er nød-vendig å koble idiotypeproteinet til en sterk, immunogen bærer og presentere dette konjugatet i nærvær av et sterkt adj uvans.
Idiotypeheterogenitet er blitt beskrevet under et klinisk forsøk med anti-idiotype-antistoffer. Etter en inn-ledende, partiell respons indusert ved hjelp av det monoklonale antistoff, fremkom idiotypevariant-tumorcellene i det opprinnelige tumorsete. Det er sannsynlig at slike idiotypevariant-tumorceller allerede var til stede før behandlingen med mono-klonalt antistoff, men fikk proliferere etter den selektive fjerning av de idiotypepositive tumorceller.
Aktiv immunisering av dyr med syngent, tumoravledet lg eller dets underfragmenter utløser produksjonen av anti-id-antistoffer og induserer beskyttelse mot en påfølgende eksponering mot tumorceller. I de fleste tilfeller utløser imidlertid en tumor en respons som er for svak eller som synes å være for sen til å ha en vedvarende terapeutisk verdi. Det var derfor behov for enten modifisert id-lg eller sterke, ikke-fysiologiske adjuvanser. Bruken av ikke-fysiologiske immunogener eller ikke-spesifikke aktivatorer er svært uønsket for anvendelse på menneskepasienter på grunn av bivirkninger, inkludert muligheten for å indusere en polyklonal p-cellerespons som vil kunne føre til utviklingen av autoimmunsykdom.
Det foreligger således et lenge følt behov for å øke immunogenisiteten til vaksiner. Fortrinnsvis bør alle adjuvanser som brukes i forbindelse med slik immunisering, gi en immunrespons med tilstrekkelig styrke til å være terapeutisk nyttig. Særlig foreligger det et behov for en fremgangsmåte for fremstillling av et medikament som bevirker aktiv immunisering av tumorverten med syngent lg for å utløse en effektiv, polyklonal respons. Foreliggende oppfinnelse tilfredsstiller dette behov og gir også beslektede fordeler.
Oppsummering av oppfinnelsen
Oppfinnelsen tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein på cellemembranen,og fremgangsmåten er kjennetegnet ved at idiotypepulsede dendrittceller dannes ved eksponering av dendrittcellene invitro mot idiotypeprotein fra nevnte patogene lymfocytter og for-mulering av dette i form av et injiserbart medikament.
Videre tilveiebringer oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av idiotypepulsede dendrittceller, og fremgangsmåten er kjennetegnet ved at den omfatter eks-ponering av dendrittcellene in vitro mot idotypeimmuno-globuliner.
Kort beskrivelse av tegningene
Figur 1. Tumorimmunitetsindusert immunisering med idiotype-KLH-konjugater. C3H/He-mus ble immunisert ved ukent-lige intervaller med KLH-konjugater av 3 8C13-IgM (-'-'- to injeksjoner: gruppe II, -0-0- tre injeksjoner: gruppe I, -0-0- én injeksjon: gruppe III) eller kontroll-IgM (-0-0- to injeksjoner: gruppe IV). Én uke etter den siste immunisering ble musene inokulert med IO<2>38C13-tumorceller. Antallene svarer til forsøksgruppene i tabell I. Figur 2. Effekt av immunisering med idiotype-IgM-pulsede dendrittceller (DC) på overlevelse av mus etter tumorinokulering. C3H/He-mus ble immunisert med 38IC13 IgM-DC (-0-0- : gruppe V), eller kontroll-IgM-DC (-'-'- : gruppe VI)-eller oppløselig idiotypeprotein (-♦-♦- : gruppe VII) på dag 28 før utfordring med tumorcelle (IO2) . Mus fikk én forsterkningsinjeksjon av oppløselig IgM på dag -7. Antallene svarer til forsøksgruppene i tabell I. Figur 3. Sammenligning av syngene, anti-idiotype-antistoffer indusert ved immunisering med 3 8C13-KLH i Freunds adjuvans og med 38C13-pulset DC. Sera fra mus som var immunisert tre (-0-0- : gruppe I) eller to (-'-'- : gruppe II) ganger med 38C13-KLH-konjugater emulgert i Freunds adjuvans eller med 38C13-pulset DC (-♦-♦- : gruppe V) , ble tilsatt til brønner forbelagt med 38C13-IgM. Seraene ble fortynnet over 8 brønner. Bundet antistoff ble påvist ved tilsetning av enzymmerket geit-anti-muse-IgG.
Nærmere beskrivelse av oppfinnelsen
Ved anvendelse av medikamentet fremstilt ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen oppnås en økning av effekten av immunisering. En slik anvendelse er av særlig nytte for immunisering i situasjoner hvor en effektiv immunrespons er vanskelig å utløse, som ved mange tumormarkører. Anvendelsen er imidlertid også anvendbar sammen med immunisering mot forskjellige patogener.
Nylig ble en dramatisk økning av en antivirusimmun-respons ved hjelp av musedendrittceller pulset in vitro med virus eller med polyklonale, anti-idiotype-antistoffer (Ab2) rapportert, Francotte og Urbain, PNAS, 82, s. 8149 (1985). Dendrittceller (DC) er blitt påvist å være sterke stimulatorer for immunresponser mot antigener festet til deres celleoverflate. De antigenpulsede DC primer de hvilende T-lymfocytter som så avgir den nødvendige hjelp til antigen-spesifikke B-lymfocytter.
I forbindelse med foreliggende oppfinnelse ble det uventet funnet at muse-DC pulset in vitro med idiotypeprotein fra patogene lymfocytter kan erstatte den immunogene bærer og det ikke-fysiologiske adjuvans som tidligere har vært ment å være påkrevet for utløsning av en effektiv immunrespons mot patogene lymfocytter. Slik det her er brukt, henviser uttrykket "patogene lymfocytter" enten til uregulerte, maligne lymfocytter eller til lymfocytter plassert i en autoimmunrespons. Uttrykket idiotypeprotein fra en patogen lymfocytt henviser til et immunoglobulin eller fragment av et immunoglobulin (FAB) som bærer en idiotypisk epitop.
Beskyttelse mot en etterfølgende tumorcelledose kan oppnås ved forimmunisering med syngen idiotype konjugert til en immunogen bærer og emulgert i Freunds adjuvans, eller med in vitro idiotypepulset DC. Kontrollgruppene behandlet med det samme antall DC pulset med et irrelevant IgM eller immunisert med den samme dose oppløselig, syngent 38C13-IgM, oppviste ikke en forlenget overlevelse. Disse data indikerer klart den fremmende effekt av dendrittceller og den idiotypespesifikke undertrykkelse av tumorvekst.
C3H/He-mus ble immunisert med idiotypisk immunoglobulin M (IgM) fra det syngene 38C13-lymfom. Konjugering til et immunogent bærerprotein ("keyhole limpet hemocyanin"; KLH) og en sterk, ikke-fysiologisk immunstimulator ("complete Freund's adjuvant", CFA) var påkrevet for å oppnå en idiotypespesifikk, humoral og cellulær immunitet og beskyttelse mot en dødelig tumorcelleutfordring. Når dendrittceller ble brukt for idiotypepresentasjon, var det imidlertid ikke påkrevet hverken med immunogen bærer eller adjuvans. Dendrittceller som var blitt pulset in vitro med umodifisert idiotypeprotein og på nytt injisert i dyrene, var i stand til å indusere betydelig resistens mot etterfølgende tumorinokulering. Alternativt vil FAB-fragmenter eller syn-tetiske peptider som bærer en idiotypeepitop, kunne anvendes for inokulering. Idiotypespesifikke T-lymfocytter som prolifererer som respons på naturlig forekommende 38C13-idiotype (id) samt cytotoksiske T-lymfocytter, ble observert i begge gruppene. Den cellulære immunrespons var sterkere i de den-drittcellebehandlede dyr enn i tilfellet med 38C13-KLH og behandling med komplett Freunds adjuvans. Begge immuniser-ingsmetodene resulterte i langvarig overlevelse uten tumor-celleforsvinning forårsaket av fremkomst av idiotypevarianter eller tumorcelle i hvilende tilstand.Bemerkelsesverdig nok var 80 % av musene fortsatt i live etter ett år.
Serumanalyse av immuniserte dyr viste at den beskyttende effekt ikke var korrelert på en enkel måte til anti-idiotype-serumtiteren. Høye nivåer av anti-idiotype-antistoffer indusert ved hjelp av hyperimmunisering med Freunds adjuvans, kunne ha modulert overflate-Ig på tumorcellene som så kunne slippe unna ødeleggelse ved hjelp av id-spesifikke T-celler.
T-celler som prolifererer i nærvær av idiotypepro-teiner, vil kunne påvises selv 3 måneder etter immuniser-ingen. Disse cellene hadde, selv om deres fenotype ikke er kjent, en cytotoksisk effekt på de syngene tumorceller.
De følgende eksempler er ment å illustrere oppfinnelsen.
Eksempel I
Fremstilling av dendrittceller
Dendrittceller (DC) ble isolert ved å bruke fremgangsmåten beskrevet av Steinman og Cohen, J. Exp. Med., 139, s. 380-397 (1974). I korte trekk ble en suspensjon av miltceller som var frie for aggregater eller sammenklumpinger, oppslemmet i en oppløsning av bovint serumalbumin (BSA)
p=1.082 g/cm<3>), fraksjon V (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) , ved en konsentrasjon på 1 x 10<8>celler pr. ml. En lavdensitets-BSA-oppløsning (p = 1.060 g/cm<3>) ble belagt på toppen. Rørene ble sentrifugert inntil likevekt ved 10.000 g i 30 minutter ved 4 °C. Celler som fløt ovenpå, ble innhøstet og vasket to ganger i RPMI 164 0-medium. Cellene ble oppslemmet i komplett medium (RPMI 164 0, 5 % FCS,5x IO"<5>M 2-mercaptoethanol, penicillin, streptomycin, minimum essen-sielle aminosyrer og natriumpyruvat) og overført til plast petriskåler ved en konsentrasjon på 1 x IO<5>celler/ml i 3 timer ved 3 7 °C, 5 % C02, Ikke-festende celler ble fjernet ved forsiktig pipettering, og de festede celler ble holdt i komplett medium i ytterligere 16 timer. Supernatanten som inneholdt ikke-festende, lavdensitetsceller, ble brukt som kilde for DC. De forurensende makrofager ble fjernet under anti-genpulsing ettersom makrofagene var tilbøyelige til å feste seg på nytt til plastoverflaten, mens DC forble ikke-festende. Renheten til det endelige cellepreparat ble undersøkt ved scanning-EM, transmisjons-EM, immunfluorescens og acridinoransjefarging. Geit-anti-muse-Ig merket med FITC - og anti-Thy-1.2 merket til biotin (Becton Dickinson), ble brukt for å karakterisere henholdsvis B- og T-celler.
Dendrittceller ble på nytt oppslemmet i komplett medium ved en konsentrasjon på 5 x 105 celler pr. ml i 24-brønners, flatbunnede plater (1 ml pr. brønn). 50 mikrogram renset 3 8C13-IgM (kappa) idiotypeprotein eller et irrelevant muse-IgM (kappa) (ABPC, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) ble tilsatt. Platene ble holdt ved 37 °C i 5 % C02i 4-5 timer.
Cellene ble vasket flere ganger i steril PBS og på nytt oppslemmet ved 2,5 x IO<5>celler pr. ml.
Eksempel II
Syncren immunisering med idiotypisk lg
C3H/He-mus ble erholdt fra Laboratory Animal Center ved Catholic University of Leuven. Balb/c- og Fl (C3H/He x Balb/c)-mus ble alet opp ved Laboratory Animal Facility ved Free University of Brussels (VUB). 3 8C13 er en carcinogen-indusert (DMBA) B-celletumor av C3H-opprinnelse. Disse tumorcellene og den in vitro tilpassede cellelinje brukt i denne undersøkelse, uttrykker IgM (kappa) på cellemembranen, men utskiller ikke store mengder lg. En idiotype-IgM (kappa)-ut-skillende cellelinje er blitt erholdt ved fusjon av tumorcellene med en ikke-sekretorisk myelomcellelinje (P3 x 63 Ag 8.653) .
Fire grupper med 10 mus i hver gruppe ble immunisert med 50 (ag idiotypisk 3 8C13-IgM eller ubeslektet ABPC-IgM kryssbundet til KLH, emulgert i Freunds komplette adjuvans (CFA), ukomplette adjuvans (ICFA) eller PBS, ved å følge en plan vist i tabell 1. Én uke etter den siste injeksjon ble 38C13-tumorceller (IO<2>celler/mus) injisert intraperitonealt. Denne dosen er dødelig for 100 % av ikke-behandlede dyr innen dag 30. Tilstedeværelsen av tumor og dødsdagen ble registrert.
Figur 1 viser den beskyttende effekt av immunisering på overlevelse i et typisk forsøk. Den mest effektive immuni-seringsplan besto av to administreringer av idiotypisk IgM, én gang i CFA og én gang i ICFA (gruppe II). Disse funnene var reproduserbare. Det var ingen langvarig overlevende når - enten et irrelevant IgM-KLH-konjugat (gruppe IV) eller ukon-jugert, idiotypisk IgM (gruppe VII) ble brukt.
Eksempel III
Immunisering med dendrittceller som er pulset med idiotypisk I<g>M
Disse gruppene med 10 C3H/He-mus hver ble injisert intraperitonealt med 5 x IO<4>IgM-pulsede dendrittceller fremstilt som i eksempel I, i henhold til immuniseringsplanen ifølge tabell II.
Forsøksgruppe bestående av 10 mus.
<+>Dag før i.p.-injeksjonen av tumorceller (10<2>) på dag0.
Ett hundre 38C13-celler ble injisert intraperitonealt én uke etter den siste injeksjon med antigen. Tilstedeværelsen av tumorceller og dødsdagen ble registrert.
Den beskyttende effekt av immunisering med dendrittceller pulset med idiotypisk IgM, er vist i figur 2. En enkelinjeksjon med idiotypepulsede DC-er etterfulgt av en forsterkningsinjeksjon med oppløselig idiotypeprotein, resulterte i den samme overlevelse eller tumorpassering som i forsøkene hvor det ble brukt 38C13-KLH-konjugater og CFA. Kontrollimmuniserte dyr (DC-pulset med irrelevant IgM eller idiotypeprotein alene) oppviste ikke noen beskyttelse.
Eksempel IV
Vurdering av humoral og cellulær immunitet
For å fastslå rollen til humoral immunitet ble nivåene av syngene anti-idiotypiske antistoffer målt ved hjelp av en IgG-spesifikk ELISA fremstilt på følgende måte.
Balb/c-mus ble immunisert med renset idiotypeprotein kryssbundet med "keyhole limpet hemocyanin" (KLH)
(Calbiochem-Behring, Hoechst) med glutaraldehyd ifølge metoden til Maloney et al., Hybridoma, 4, s. 191-209 (1985). Miltcellene ble hybridisert til P3 x 63 Ag 8.653-myelom-cellelinjen. De monoklonale antistoffene E4 og 8E3 var sterkt reaktive med 38C13-IgM (kappa), var ikke inhiberbare ved hjelp av normalt C3H-serum og bandt seg hverken til normale - miltceller eller til rensede IgM-myelomproteiner. Et mono-klonalt anti-idiotypeantistoff S5A8 av C3H-opprinnelse og et monoklonalt rotteanti-stoff R7D7 renset fra ascitesvæske ved dobbeltutfelling med ammoniumsulfat (40 %), ble benyttet. Biotinmerking av antistoffene ble utført i henhold til metoder som er godt kjent innen teknikken.
Før tumorcelleinjeksjon ble to mus utblødd ved punktasjon av den retroorbitale plexus. Sera fra individuelle mus i den samme forsøksgruppe ble slått sammen. Syngene, anti-idiotype-antistoffer ble påvist ved hjelp av en ELISA-prøve som beskrevet.
Resultatene i figur 3 indikerer høye nivåer av anti-id-antistoffer hos mus immunisert med 38C13-KLH og CFA. Mye lavere nivåer ble påvist i sera fra dyr immunisert med DC-er, noe som indikerer at det var ingen klar korrelasjon mellom antistoffnivåer og overlevelse. Tre injeksjoner med IgM-KLH i CFA resulterte i et høyere serumnivå av anti-id-antistoffer, men en lavere overlevelsesrate (figur 1).
Cellulær immunitet ble bestemt ved å påvise idiotypiske, spesifikke T-lymfocytter i milten til langvarig overlevende fra begge immuniseringsforsøk. T-celle-anrikede miltceller ble dyrket i nærvær av oppløselig idiotypeprotein eller idiotypisk IgM koblet, til Sefarose-kuler i 3 dager. Kontroilbrønner inneholdt splenocytter i IL2 inneholdende medium 10 % (volum/volum) av supernatant fra rottemilt-cellekultur inneholdende 4 jag/ml concanavalin A i 24 timer, eller et irrelevant IgM-protein. En suspensjon av miltceller fra overlevende dyr ble overført til plast petriskåler (80 mm), forbelagt med 0,2 % BSA, ved IO<7>celler/ml i 3 ml komplett medium ved 37 °C i 1 time (27). Ikke-festende celler ble overført til plater forbelagt med kanin-anti-mus (kappa) (10Hg/ml) og plassert ved 4 °C i 1 time. En andre panorering ble utført på plater forbelagt med geit-muse-Ig (Tago, Burlingame, CA). Gjenvinning etter denne dobbeltpanorerings-fremgangsmåten var generelt 25-30 % av cellene med kjerne. I senere forsøk ble T-celler anriket ved binding til nylonull ved hjelp av metoder som er godt kjent innen teknikken. B-celle-forurensning ble undersøkt ved immunfluorescens under * anvendelse av fluorescerende geit-anti-muse-Ig-antistoffer (Tago). B-celle-fraksjonen var vanligvis 5-7 %. Cellesus-pensjonen anriket med hensyn på T-celler, ble plassert i rundbunnede brønner (200^l/brønn,5x IO<5>celler/ml) . 20 |il stimuleringsmiddel (50 ug/ml) ble tilsatt til brønnene. Etter 3 dagers dyrking ble 1,5 jaCi [methyl<3>H]-thymidin tilsatt til hver brønn. Etter denne 18-timers puls ble cellene innhøstet på glassfiberfiltere, og inkorporert radioaktivitet ble målt ved scintillasjonstelling. Alle målinger ble utført fire ganger, og dataene ble uttrykt som den gjennomsnittlige cpm ± ;SEM. ;Resultatene av stimuleringen in vitro er vist i tabell II. T-celler fra mus behandlet med DC-38C13, ga bedre respons på idiotypeproteinet enn mus behandlet med idiotype-KLH-konjugater i CFA, eller kontrollmus. ;
Tabell 2. ;♦Anrikede milt-T-celler ble dyrket in vitro i løpet av 3 dager i nærvær av 38C13-IgM. 38C13-IgM koblet til Sefarose-kuler, IL2-holdig medium eller oppløselig, ubeslektet IgM. Stimulering ble målt ved hjelp av graden av<3>H-thymidin-inkorporering de siste 18 timene av dyrkingen, ;formale C3H/He-mus ble brukt til å rense uprimede T-celler.<+>Signifikant ved p<0,001 ifølge t-test med ubeslektet IgM.<s>Signifikant ved p<0,001 ifølge t-test sammenlignet med uprimede T-celler. ;<#>p>0,05 ifølge t-test sammenlignet med uprimede T-celler."Signifikant ved p<0,002 ifølge t-test sammenlignet med uprimede T-celler. ;De T-celle-anrikede miltceller ble også brukt ved en konvensjonell, cellemediert cytotoksisitetsprøve på følgende måte: ;Tumorceller ble merket med L- [4, 5"3H] -leucin (Amersham) og ble plassert i U-bunnede mikrobrønner ved 1 x IO<4>målceller (100 ul). Effektorceller (anrikede milt-T-celler fra overlevende dyr) ble tilsatt ved et forhold på 100:1, 50:1, 25:1, 6,25:1, 3:1, 1,5:1 in triplo, idet sluttvolumet var 200 (il. Cellene ble sedimentert ved forsiktig sentri-fugering, og platene ble inkubert ved 3 7 °C i en fuktig atmosfære inneholdende 5 % C02i 16 timer. 50 mikroliter supernatant ble brukt til å telle den frigjorte radioaktivitet. Spontan og maksimal frigjørelse ble bestemt ved tilsetning av 100^1 komplett medium eller 100^1 0,1 % NP40 i stedet for T-celler. Spesifikk cytotoksisitet ble beregnet i henhold til den følgende formel: ;Cytotoksisitet ved hjelp av immunlymfocytter ble målt på dagen for T-celleisolering og etter en 3-dagers stimulering in vitro med 38C13-koblede Sefarose-kuler. Ustimulerte T-celler var ikke i stand til å lysere 38C13-målcellene. Etter stimulering in vitro var imidlertid spesifikk lyse av 38C13-tumorceller med DC-38C13-primede T-celler 21 % mot 11 % med 38C13-KLH-stimulerte celler (ved et forhold mellom effektor og mål på 100:1 i en 16-timers inkubasjonsprøve). ;Eksempel V ;Gjenværende tumorceller ;Tilstedeværelsen av gjenværende tumorceller i milten til langvarig overlevende ble oppsporet ved immunohistologi og dyrking in vitro. Kryostatsnitt ble fiksert i aceton og farget med de monoklonale antistoffene etterfulgt av strep-tavidin-pepperrotperoxydase og diaminobenziditetra-hydro-klorid. Nedfryste snitt av milten fra langvarig overlevende dyr ble farget med biotinylerte, monoklonale anti-idiotype-antistoffer. Disse antistoffene var tidligere blitt testet på tumor-invaderte miltsnitt hvor de farget både overflate og cytoplasmisk, idiotypisk IgM. Ingen gjenværende tumorceller kunne påvises i seriesnitt av milten fra langvarig overlevende dyr. B-lymfocytter isolert fra milten, ble dyrket in vitro i anriket og kondisjonert medium. Selv om 38C13-tumorcellene som ble brukt i denne undersøkelsen, er tilpasset vekst in vitro, oppviste ingen av kulturene utvekst av tumorceller. Endelig ble B-celler overført til bestrålte, syngene, naturlige dyr. Ingen tumorvekst ble observert i løpet av den 6 måneder lange observasjonstid. Disse dataene indikerer at ingen resttumorceller ble tilbake i milter hos langvarig overlevende dyr. ;Eksempel VI ;Alternativ fremstilling av dendrittceller ;Milter ble dynket med en oppløsning av 100 enheter/ml kollagenase (CLS III, Worthington, katalog nr. 4182,1 g/ampulle) i 10 x Hanks balanserte saltoppløsning (HBSS), (fortynnet fra 10 x HBSS, Gibco katalog nr. 310-4065A/J.), (pH 7,2, regulert med sterilt Gibco 7,5 % bicarbonat). Cellene ble samlet opp i et rør inneholdende RPMI-medium med 10 % FCS. De gjenværende rester ble inkubert<*>i 15 minutter i en oppløsning av 400 enheter/ml kollagenase i inkubatoren. Oppløsningen ble pipettert ca. 50 ganger for å samle opp mesteparten av cellene. Alle cellene ble kjørt sammen og pelletert.
Bovint serumalbumin ble fremstilt på følgende måte: "BOVUMINAR COHN FRACTION V"-pulver (Armour Pharmaceutical Company, Kankakee, Illinois) ble holdt ved 4 °C i en eksik-kator. I et begerglass (lukket med aluminiumsfolie) ble 65 ml destillert vann, 186 ml PBS, 29 ml IM NaOH og 107 g BSA blandet og holdt ved 4 °C i 24 timer uten omrøring. Densitet ble sjekket i et refraktometer og holdt mellom 1,3855 og 1,3865. Dersom oppløsningen var for tung, ble den omrørt svært sakte, og kald PBS ble tilsatt. Den ble filtrert og holdt ved4°C. Pelleten ble på nytt oppslemmet i en opp-løsning av kaldt BSA og sentrifugert ved 10.000 g, ca. 2 ml serumfritt medium ble tilsatt på toppen av gradienten. Lavdensitetsceller ble samlet opp og utgjorde ca. 10 % av miltcellene.
Cellene ble dyrket i 10 % FCS-holdig medium i 2 timer i 100-mm kulturskåler. Ikke-adherente celler ble vasket ut ved kraftig pipettering (15 minutter pr. plate). Cellene ble på nytt inkubert i 1 time i serumfritt medium, og ikke-adherente celler ble fjernet ved forsiktig pipettering. De gjenværende, adherente celler ble dyrket over natten i 10 % FCS-holdig RPMI. Neste dag ble de ikke-adherente celler samlet opp ved forsiktig pipettering. 2 x IO<5>til5x10<5>dendrittceller ble erholdt pr. milt.
Claims (8)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein på cellemembranen,karakterisert vedat idiotypepulsede dendrittceller dannes ved eksponering av dendrittcellene in vitro mot idiotypeprotein fra nevnte patogene lymfocytter og-formulering av dette i form av et injiserbart medikament.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisert vedat de patogene lymfocytter er tumorceller.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,karakterisert vedat tumorcellene er lymfomceller.
4 . Fremgangsmåte ifølge krav 3,
karakterisert vedat lymfomcellene er B-lymfoidceller.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1-4,
karakterisert vedat idiotypeproteinet er immunog1obulin.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1-4,
karakterisert vedat idiotypeproteinet er et fragment av et immunoglobulin.
7 Fremgangsmåte ifølge krav 1-6,
karakterisert vedat pattedyret er et menneske.
8. Fremgangsmåte for fremstilling av idiotypepulsede dendrittceller,
karakterisert vedat den omfatter eks-ponering av dendrittcellene in vitro mot idotypeimmuno-globuliner.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/493,511 US20030072751A1 (en) | 1990-03-14 | 1990-03-14 | Idiotypic vaccination against b cell lymphoma |
| PCT/US1991/001683 WO1991013632A1 (en) | 1990-03-14 | 1991-03-13 | Idiotypic vaccination against b cell lymphoma |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO923542L NO923542L (no) | 1992-09-11 |
| NO923542D0 NO923542D0 (no) | 1992-09-11 |
| NO308509B1 true NO308509B1 (no) | 2000-09-25 |
Family
ID=23960532
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO923542A NO308509B1 (no) | 1990-03-14 | 1992-09-11 | FremgangsmÕte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein pÕ cellemembranen samt fremgangsmÕte for fremstilling av idiotypepulse |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20030072751A1 (no) |
| EP (1) | EP0521897B1 (no) |
| JP (1) | JP2735947B2 (no) |
| AT (1) | ATE124265T1 (no) |
| AU (1) | AU645552B2 (no) |
| CA (1) | CA2078235C (no) |
| DE (1) | DE69110877T2 (no) |
| DK (1) | DK0521897T3 (no) |
| ES (1) | ES2074268T3 (no) |
| FI (1) | FI105452B (no) |
| NO (1) | NO308509B1 (no) |
| WO (1) | WO1991013632A1 (no) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6004807A (en) * | 1992-03-30 | 1999-12-21 | Schering Corporation | In vitro generation of human dendritic cells |
| DK0633929T3 (da) * | 1992-04-01 | 2004-06-28 | Univ Rockefeller | Fremgangsmåde til in vitro proliferation af dendritcelleforstadier og deres anvendelse til at producere immunogener |
| AU687733B2 (en) * | 1992-04-01 | 1998-03-05 | Rockefeller University, The | Method for in vitro proliferation of dendritic cell precursors and their use to produce immunogens |
| EP1421947A1 (en) * | 1992-07-22 | 2004-05-26 | The Trustees Of Princeton University | p53 vaccine |
| ATE214423T1 (de) * | 1992-08-21 | 2002-03-15 | Us Gov Health & Human Serv | B-lymphomazellinie und antigen |
| US5651993A (en) | 1992-11-18 | 1997-07-29 | Yale University | Specific immune system modulation |
| CA2158281A1 (en) * | 1993-03-15 | 1994-09-29 | Jay A. Berzofsky | Peptide coated dendritic cells as immunogens |
| CA2192655A1 (en) * | 1994-06-14 | 1995-12-21 | Edgar G. Engleman | Methods for in vivo t cell activation by antigen-pulsed dendritic cells |
| US6300090B1 (en) | 1994-07-29 | 2001-10-09 | The Rockefeller University | Methods of use of viral vectors to deliver antigen to dendritic cells |
| US6340981B1 (en) | 1997-06-30 | 2002-01-22 | Sun Microsystems, Inc. | Method and apparatus for stroke substitution |
| US6010905A (en) * | 1995-01-27 | 2000-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Method for inducing monocytes to exhibit the phenotype of activated myeloid dendritic cells |
| US5788963A (en) * | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
| AU1152397A (en) * | 1995-12-20 | 1997-07-14 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods for in vivo t cell activation by antigen-pulsed dendritic cells |
| US6080409A (en) | 1995-12-28 | 2000-06-27 | Dendreon Corporation | Immunostimulatory method |
| US7659119B2 (en) | 1996-02-12 | 2010-02-09 | Argos Therapeutics, Inc. | Method and compositions for obtaining mature dendritic cells |
| US5776746A (en) * | 1996-05-01 | 1998-07-07 | Genitope Corporation | Gene amplification methods |
| DE69840739D1 (de) | 1997-10-27 | 2009-05-28 | Merix Bioscience Inc | Methode und Zusammensetzung zur Herstellung von reifen dendritischen Zellen |
| CA2321093A1 (en) | 1998-02-20 | 1999-08-26 | The Rockefeller University | Apoptotic cell-mediated antigen presentation to dendritic cells |
| WO2000062818A1 (en) | 1999-04-20 | 2000-10-26 | Richard Leslie Edelson | Differentiation of monocytes into functional dendritic cells |
| US8313945B2 (en) | 1999-04-20 | 2012-11-20 | Yale University | Methods for inducing the differentiation of blood monocytes into functional dendritic cells |
| US7030228B1 (en) | 1999-11-15 | 2006-04-18 | Miltenyi Biotec Gmbh | Antigen-binding fragments specific for dendritic cells, compositions and methods of use thereof antigens recognized thereby and cells obtained thereby |
| AT409086B (de) * | 1999-11-16 | 2002-05-27 | Igeneon Krebs Immuntherapie | Neue verwendung von antikörpern als impfstoffe |
| US8524495B2 (en) | 2007-05-16 | 2013-09-03 | Yale University | Methods for inducing the differentiation of blood monocytes into functional dendritic cells |
-
1990
- 1990-03-14 US US07/493,511 patent/US20030072751A1/en not_active Abandoned
-
1991
- 1991-03-13 JP JP3506222A patent/JP2735947B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 DE DE69110877T patent/DE69110877T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-03-13 CA CA002078235A patent/CA2078235C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-03-13 AT AT91905685T patent/ATE124265T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-03-13 EP EP91905685A patent/EP0521897B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 ES ES91905685T patent/ES2074268T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 AU AU74886/91A patent/AU645552B2/en not_active Ceased
- 1991-03-13 DK DK91905685.3T patent/DK0521897T3/da active
- 1991-03-13 WO PCT/US1991/001683 patent/WO1991013632A1/en active IP Right Grant
-
1992
- 1992-09-11 NO NO923542A patent/NO308509B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-09-11 FI FI924082A patent/FI105452B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2078235C (en) | 2004-01-20 |
| NO923542L (no) | 1992-09-11 |
| NO923542D0 (no) | 1992-09-11 |
| EP0521897A1 (en) | 1993-01-13 |
| JPH05507905A (ja) | 1993-11-11 |
| FI105452B (fi) | 2000-08-31 |
| CA2078235A1 (en) | 1991-09-15 |
| ES2074268T3 (es) | 1995-09-01 |
| AU7488691A (en) | 1991-10-10 |
| DE69110877D1 (de) | 1995-08-03 |
| DE69110877T2 (de) | 1995-11-16 |
| FI924082A (fi) | 1992-09-11 |
| FI924082A0 (fi) | 1992-09-11 |
| DK0521897T3 (da) | 1995-11-13 |
| AU645552B2 (en) | 1994-01-20 |
| US20030072751A1 (en) | 2003-04-17 |
| ATE124265T1 (de) | 1995-07-15 |
| JP2735947B2 (ja) | 1998-04-02 |
| WO1991013632A1 (en) | 1991-09-19 |
| EP0521897B1 (en) | 1995-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO308509B1 (no) | FremgangsmÕte for fremstilling av et injiserbart medikament for induksjon av en effektiv immunrespons hos et pattedyr mot patogene lymfocytter som uttrykker et idotypeprotein pÕ cellemembranen samt fremgangsmÕte for fremstilling av idiotypepulse | |
| Tada et al. | Two distinct types of helper T cells involved in the secondary antibody response: independent and synergistic effects of Ia-and Ia+ helper T cells. | |
| Leclerc et al. | A synthetic vaccine constructed by copolymerization of B and T cell determinants | |
| Taniguchi et al. | Cellular consequences in the suppression of antibody response by the antigen-specific T-cell factor. | |
| US20090117135A1 (en) | Vaccine comprising an antigen conjugated to low valency anti-cd40 or anti-cd28 antibodies | |
| NO319013B1 (no) | Vaksine omfattende type I overflateantigener fra Staphylococcus epidermidis, samt hyperimmune globuliner og antistoff rettet mot type I-overflateantigenet. | |
| CN101790382A (zh) | 独特型疫苗 | |
| Ramalho‐Pinto et al. | Murine Schistosomiasis mansoni: anti‐schistosomula antibodies and the IgG subclasses involved in the complement‐and eosinophilmediated killing of schistosomula in vitro | |
| Francotte et al. | Enhancement of antibody response by mouse dendritic cells pulsed with tobacco mosaic virus or with rabbit antiidiotypic antibodies raised against a private rabbit idiotype. | |
| Dorfman | The optimal technological approach to the development of human hybridomas | |
| WO1999008705A1 (en) | Capsular polysaccharides from enterococci | |
| Manches et al. | Anti-Gal-mediated targeting of human B lymphoma cells to antigen-presenting cells: a potential method for immunotherapy using autologous tumor cells. | |
| Prager et al. | Immunological stimulation with modified lymphoma cells in a minimally responsive tumor-host system | |
| Hendriksen et al. | Production of polyclonal and monoclonal antibodies | |
| CA2176738C (en) | Method and composition for transfer of active tumor-specific immunization from an immunized allogeneic bone marrow donor | |
| Brown et al. | Genetic control and fine specificity of the immune response to a synthetic peptide of influenza virus hemagglutinin | |
| US20040009195A1 (en) | Modified sialic acid vaccines | |
| Campbell | Production and purification of antibodies | |
| US20020122809A1 (en) | Capsular polysaccharides from enterococci | |
| Ding et al. | Activation of helper T cells by immune complexes | |
| Kodama et al. | Induction of IgM memory with RNA from the spleens of immunized mice. | |
| WO2003068915A2 (en) | Production of human antibodies in immunodeficient, non-human, mammalian hosts | |
| RU2063245C1 (ru) | Способ получения антител для производства диагностических препаратов вируса клещевого энцефалита | |
| Kakimoto et al. | Different types of antigen-presenting cells affect the induction of experimental autoimmune arthritis | |
| JPH07116057B2 (ja) | 免疫増強剤及び強化抗原 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |