NO180755B - DNA-probe og fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus arter - Google Patents

DNA-probe og fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus arter

Info

Publication number
NO180755B
NO180755B NO901437A NO901437A NO180755B NO 180755 B NO180755 B NO 180755B NO 901437 A NO901437 A NO 901437A NO 901437 A NO901437 A NO 901437A NO 180755 B NO180755 B NO 180755B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
dna
strain
helveticus
species
fragment
Prior art date
Application number
NO901437A
Other languages
English (en)
Other versions
NO901437L (no
NO180755C (no
NO901437D0 (no
Inventor
Herbert Hottinger
Beat Mollet
Nathalie Pilloud
Original Assignee
Nestle Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nestle Sa filed Critical Nestle Sa
Publication of NO901437D0 publication Critical patent/NO901437D0/no
Publication of NO901437L publication Critical patent/NO901437L/no
Publication of NO180755B publication Critical patent/NO180755B/no
Publication of NO180755C publication Critical patent/NO180755C/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en DNA-probe for identifisering av bakterielle stammer fra Lactobacillus helveticus-arten, og en fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer fra denne arten med denne DNA-proben.
Lactobacillus helveticus er en meget viktig bakterie for fermentering av mat. Den blir hovedsakelig brukt for fermentering av melkeprodukter og er funnet i oppstartings-kulturer for noen oster og i noen land, også for yoghurt-produksjon. Fermentering og modning av disse matproduktene er vanligvis et resultat av vekstassosiasjon og interaksjon mellom forskjellige bakterier, i de fleste tilfeller forskjellige Lactobacilli, Lactococci og andre bakterielle arter. Idet de fleste bakterielle artene har meget like næringsmessige krav og vokser under lignende miljøbetingel-ser, er en klar identifikasjon innenfor Lactobacillus-arten noen ganger meget vanskelig. Det kan spesielt være vanskelig å differensiere mellom de to yoghurt-bakteriene L. bul-garicus, som hører til L. delbrueckii-arten og L. helveticus (tidligere også kalt L. jugurti; 0. Kandler og N. Weiss, Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, vol. 2, 1208-1260, 1986. Klassifisering av alle disse artene er så langt meget arbeidskrevende og omfatter upålitelige kriterier som sukker-fermenteringsmønstre og syreproduksjon. På grunn av disse forsøkene forblir en identifikasjon av disse forskjellige artene upålitelige og ofte vilkårlige.
DNA-hybridisasjonsteknikker, ved anvendelse av spesifikke DNA-prober, er et meget verdifullt redskap for identifikasjon av bakterielle og virale stammer, og er allerede blitt anvendt ved klinisk diagnostikk. Slike DNA-prober er blitt anvendt for identifikasjon av Yersinia enterocolitica (J.Jagow et al., Appl. Environ. Microbiol. 51, 441-443, 1986), Plasmodium falciparum (R.H. Barker et. al., Science 231, 1434-1436, 1986), Salmonella typhi (F.A. Ruben et al., J. Clin. Microbiol. 22, 600-605, 1985), Bacillus subtilis (J. Krauss et al., FEMS Microbiol. Lett. 33, 89-93, 1986), Haemophilus influenzae (F. Malouin et al., J. Clin. Microbiol. 26, 2132-2138, 1988) og andre bakterielle arter, DNA-virus (J. Brandsma et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA, 77, 6851-6855; P. Stolhandske et al., J. Clin. Microbiol. 15, 744-747, 1982; P. Stolhandske et al., J. Med. Virol. 12, 213-218, 1985), samt RNA-virus (J. Flores etal., Lanceti, 555-559, 1983;M. Lin et al., J. Virol. 55, 509-512, 1985).
I Lactobacillus-arten omfatter DNA-prober for L.curvatus (H.A.R. Petrick et al., Appl. Environ. Micrbiol. 54, 405-408, 1988) som er spesifikt assosiert med ødeleggelse av vakuumpakket kjøtt og for L.delbrueckii-arter L.bulgaricus, L.lactis og L.delbrueckii (M. Delly et al., submitted) blitt isolert. Det ville være av stor betydning for meieriindu-strien å ikke bare kunne identifisere L-delbrueckii hurtig, som ved anvendelse av fremgangsmåten beskrevet i vår europeiske patentsøknad nr. 89106016.2, men også ha en hurtig og pålitelig fremgangsmåte for å detektere og klassifisere stammer hørende til L.helveticus-arten.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig en DNA probe for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus-arter, kjennetegnet ved at den blir oppnådd ved en fremgangsmåte som omfatter preparering av en Hindlll klonbank fra stammen L. helveticus ATCC 15009 ved spaltning av DNA til denne stammen med Hindlll, ligering inn i plasmid pACYC184, og transformasjon av ligeringsblandingen inn i E. coli stamme HB101, og isolering derfra en klon hvorfra et Hindlll DNA fragment spesifikt kan hybridisere til DNA fra stammene til L. helveticus artene, i det dette DNA-fragmentet er fragmentet sLHl eller fragmentet sLH2, som definert i figurene 1 og 2.
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte for å identifisere en bakteriell stamme av L. helveticus artene, kjennetegnet ved å preparere DNA fra en stamme som skal bli identifisert og undersøke om dette DNA hybridiseres til en probe.
En første hensikt med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en spesifikk DNA-probe som kan bli anvendt i hybridi-seringsprosedyrer for spesifikt å identifisere stammer hørende til Lactobacillus helveticus-arten, enten i bakterielle kulturer, eller som bestanddeler i mat eller i løpet av fremstilling av mat, f.eks. i løpet av industriell fermentas;] on.
DNA-proben omfatter et DNA-fragment som kan hybridisere til DNA fra stammer av L. helveticus-arten. Dette DNA-fragmentet blir fortrinnsvis merket på en hvilken som helst egnet måte så som 32P,<35>S eller biotin.
Fremgangsmåten for identifisering av en bakteriell stamme av L- helveticus-arten ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter preparering av DNA fra en stamme som skal identifiseres og undersøking om dette DNA hybridiseres til foreliggende probe eller til en probe produsert ved foreliggende fremgangsmåte. I en foretrukket utførelsesform av denne fremgangsmåten blir DNA preparert ved dyrking av celler fra stammen som skal identifiseres på et kulturmedium supplementert med en fermenterbar karbonkilde, inkubering av disse i nærvær av proteinaser, behandling av disse med en N-acetyl-muramidase, inkubere disse videre i nærvær av et emulgeringsmiddel, et chelateringsmiddel og en proteinase, fenolekstrahering av DNA derifra, etanolpresipitering av ekstrahert DNA, behandling av dette DNA med en RNase og kloroformekstrahering av RNase-behandlet DNA.
Figur 1 er et restriksjonskart av et klonet Hindlll DNA-fragment, sLHl, med opprinnelse fra L. helveticus ATCC 15009 og med en lengde på omtrent 1845 basepar.
Enzymer som ikke kutter innenfor dette fragmentet er:
Apal.Aval.BamHI, BglI, Bglll, BstBI.Cfol, Cfol, EcoRI.
Haell, Hindlll. Kpnl, Mlul, NarI, Ncol, Ndel, Nhel, Noti, NruI, Nsil, PstI, Pvul, SacI. SacII, Sali, Smal. SnaBI, SphI, Sspl og Stul.
Figur 2 er et restriksjonskart av et annet klonet Hindlll DNA-fragment, sLH2, med opprinnelse fra L.helveticus ATCC 15009 og en lengde på omtrent 1875 basepar.
Enmzymer som ikke kutter dette fragmentet er:
AccI, Åflll, Aval, Ball, Bglll. Pral.EcoRV.Kpnl.
NarI, Ncol. Nhel, Noti. Nrul, Nsil, PstI, Pvul. SacI,
SacII. Sali, Seal, Smal, SphI, Sspl og Stul.
I disse to figurer angir tallene I parentes den relative posisjonen til hensiktsmessige restriksjonsseter i basepar.
For å tilveiebringe DNA-prober som spesifikt identifiserer stammer hørende til L.helveticus-arter, var det mulig å klone Hindlll DNA-fragmenter med opprinnelse fra L.helveticus-stammer tilfeldig og å screene disse for arts-spesifikk hybridisasjon.
Foretrukket vektor for transformering av en klonbank av Hindlll DNA-fragmenter av L.helveticus var plasmid pACYC184, som kan bli transformert inn i en E. coli-stamme, f.eks. i den foretrukne E. coli-stamme HB101.
Spesielt spesifikke prober ble dannet av Hindlll DNA-fragmenter med opprinnelse fra stammen L.helveticus ATCC 15009, f.eks. fra to DNA-fra<g>menter sLHl og sLH2.
Bortsett fra ovennevnte foretrukne måte for preparering av DNA fra en stamme som skal identifiseres var det også mulig å preparere dette DNA ved enkel lysering av celler fra denne stammen, enten fra kulturer eller på faste bærere så som f.eks. filterpapir eller nitrocellulosepapir, og å utføre identifikasjonsforsøk på dette DNA med probene ifølge foreliggende oppfinnelse.
I screeningseksperimenter ved anvendelse av dotblot-hybridisasjon, ble over 50 forskjellige Lactobacillus-stammer med forskjellig opprinnelse undersøkt. Det kunne blitt vist at prober ifølge foreliggende oppfinnelse bare hybridiserte spesifikt til L.helveticus-artene og at de hadde meget høy sensitivitet.
Bakterie og plasmid
Melkesyrebakterier anvendt i eksemplet nedenfor er vist i tabell I. E. coli-stammen er HB101 (leuB6 proA2 recA13 thil ara!4 lacYl galK2 xy_15 mtll rpsL20 supE44 hsdS20). Plasmidet anvendt som vektor er pACYC184 (A.C.Y. Chang og S.N.Cohen, J. Bacteriol. 134: 1141-1156, 1978).
Medium
For vekst av de forskjellige Lactobacilli, Lactococci og Propionibakteriene ble MRS-kraft (Difro Laboratories) anvendt, supplementert med 1% laktose. E. coli-stammen ble dyrket i LB-medium.
Preparering av DNA
i ) DNA fra Lactobacillus.Lactococcus og Propioni-bakterier
Celler ble fortynnet fra overnatt-kulturer inn i 10 ml MRS, supplementert med 1% laktose og dyrket til midtlogfase ved 43°C. Cellene ble deretter høstet ved sentrifugering, vasket én gang i kald IM NaCl og Inkubert i lt. ved 37°C i nærvær av proteinase K (250 pg/ml) og Pronase E (500 pg/ml). Cellene ble vasket i TE (10 mM Tris hydroklorid pH 7,4; 1 mM EDTA) og behandlet med mutanolysin (200 pg/ml) i nærvær av TE i 1 t. ved 37°C SDS. EDTA og proteinase K ble tilsatt til en final konsentrasjon på 0, 1%, 75 mM og 200 pg/ml, respektivt, og inkubert i 4 t. ved 65°C. DNA ble deretter fenolekstrahert, etanol presipitert og kveilet på en steril tannpirker. DNA'et ble resuspendert i TE i nærvær av RNase A (200 jjg/ml), kloroformekstrahert, represipitert i etanol og påny kveilet på en tannpirker. DNA ble deretter resuspendert i 100 pl TE og lagret ved 4°C.
ii) Plasmid DNA fra E. coli.
Plasmid DNA fra E. coli ble isolert og etter behov renset på CsCl-gradienter ifølge Maniatis et al.
(Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1982). Kjemikalier ble forhandlet fra E. Merck Chemicals Inc. og enzymer fra Sigma Chemical Co..
Preparering av en Hindlll klonbank fra en L. helveticus-stamme
DNA fra L. helveticus ATCC 15009 ble fullstendig spaltet med Hindlll og ligert inn i vektor pACYC184 som var lineærisert ved dets unike Hindlll-sete og behandlet med fosfatase. Ligeringsblandingen ble transformert inn i HB101, plassert på LB-skåler supplementert med 30 jjg/ml kloramfenikol og dyrket ved 37°C overnatt. Enkelte kolonier ble dyrket i LB supple mentert med kloramfenikol, plasmidene deres ekstrahert, spaltet med Hindlll og analysert ved agarosegelelektroforese. 90$ av de analyserte klonene inneholdt L.helveticus Hindlll DNA-fragmenter.
Merking av DNA- fragmenter
For radioaktiv merking av DNA ble en i-fyll-erstatnings-DNA-syntese eller nick-translasjonsreaksjon (Maniatis et al.) anvendt. Klenow-fragmentet av DNA polymerase I og E. coli DNA-polymerase I ble kjøpt fra Boehringer-Mannheim, [a_<32>p]dATPfra Amersham Co.
Dotblot- hvbridiseringsprosedyrer
Aliquoter av 200 ng kromosomalt DNA i TE ble denaturert ved oppvarming i 5 min. ved 95"C. SSC ble satt til aliquotene for å tilveiebringe en final konsentrasjon på 16X SSC og deretter ble blandingen applisert på lOXSSC-fuktet GeneScreen-papir og skylt én gang med 20XSSC. En Bio-Rad dotblot-apparatur ble anvendt. Filteret var deretter klart for DNA-hybridisasjon ved anvendelse av standard prosedyrer med hybridisasjon med 6XSSC ved 65 0 C og påfølgende vask med O.IXSSC ved 65"C (E. Southern, J. Mol. Biol. 98, 503-517, 1975). Som DNA-prober ble enten totale plasmider eller HindiII-fragment-DNA som var<32>P-merket anvendt. For detektering av hybridisasjonssignalene ble filtrene utsatt for røntgenfilm.
Restriksj onskartlegging
Restriksjonsenzymer ble kjøpt fra Boehringer-Mannheim Co. og New England Biolabs Co. og ble anvendt som foreslått av forhandleren.
EKSEMPEL
Isolering av L. helveticus DNA- prober
Hindlll spaltet kromosomalt DNA fra L.helveticus ATCC 15009, ble anvendt for å preparere en klonbank som beskrevet ovenfor. Flere kloner ble isolert og anvendt som DNA-prober i dotblot hybridisasjonseksperimenter ved anvendelse av filter inneholdende DNA-prøver av et valgt antall forskjellige melkesyrebakterier. Resultatene av hybridisasjonen viste at omtrent 70$ av undersøkte L.helveticus-kloner bare hybridiserte til de forskjellige L.helveticus-prøvene på dotblot-fUtrene. De andre 30$ av klonene som ble undersøkt, hybridiserte også til forskjellige andre ikke-beslektede arter og slekter av melkesyrebakterien. I følgende eksempler ble to DNA-prober valgt som var meget spesifikke for L.helveticus-arten. De blir betegnet "sLHl" og "sLH2" i foreliggende beskrivelse og krav.
Restriks. 1 onskartlegging av sLHl og sLH2
Et restriksjonskart av DNA-f ragmentene sLHl og sLH2 ble bestemt ved anvendelse av flere restriksjonsenzymer. Resultatene er vist i fig. 1 og 2 (se kort beskrivelse av tegningen ovenfor).
Spesifisitet og sensitivitet til DNA- probene sLHl og sLH2
De to DNA-probene sLHl og sLH2 ble undersøkt mot mange forskjellige representanter av Lactobacillus-slekten og andre melkesyrebakterier med dotblot hybridisasjoner. I disse hybridisasjonseksperimentene ble bare Hindlll DNA-fragmentene med opprinnelse fra L.helveticus isolert fra plasmidene anvendt som DNA-prober. Resultatene av dotblotene viste at begge DNA-probene bare hybridiserer til DNA avledet fra bakterielle arter av L.helveticus. Alle andre stammer undersøkt fra forskjellige Lactobacillus-arter, Lactococcus og Propionibacterier viste ingen hybridisasjon. De eneste unntakene som ble observert var to stammer av L.acidophilus, N21 og N22, som ga et svakt hybridiseringssignal med sLHl og sLH2. Disse svake signalene kan derimot klart bli differen-siert fra de mye sterkere hybridisasjonssignalene til stammer hørende til L.helveticus-arten. Fullstendige resultater er oppsummert i tabell I.
For å undersøke sensitiviteten til dotblottene ble det laget filtere med fortynninger i serie av DNA fra forskjellige Lactobacillus-stammer og anvendelse av disse for hybridisasjon med probene sLHl og sLH2. Resultatene kan summeres som følger: i) Positive hybridisasjonssignaler kunne bli detektert med letthet i alle forskjellige L.helveticus-stammene ved DNA-mengder som var så lave som 2 ng pr. flekk. ii) Alle andre undersøkte bakterielle stammer er oppført i tabell I, og viser ingen hybridisasjonssignaler ved DNA-mengder på 200 ng pr. flekk. iii) Ved en DNA-mengde mellom 200 ng og 1,6 jjg pr. flekk begynte mange stammer av L.acidofilus-arter å gi opphav til hybridisasjonssignaler. iv Følgende stammer er blitt undersøkt ved DNA-mengder på 1,6 >ig pr. flekk og viste ingen hybridisasjonssignaler: L. lactis N4 , L. fermentum N7, L. plantarum N24, L. buchneri N25, L. brevis N26, L. casei N27, L. bulgarticus N123, L. maltaromicus N207, L. reuteri N211 og E. coli HB101.
a) Kode fra Nestlé Research Centre
b) Anvendt probe for dotblot-hybridisasjon:
(+) angir hybridisasjon; (-) ingen hybridisasjon

Claims (5)

1. DNA-probe for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus-arter, karakterisert ved at den blir oppnådd ved en fremgangsmåte som omfatter preparering av en Hindlll klonbank fra stammen L. helveticus ATCC 15009 ved spaltning av DNA til denne stammen med Hindlll, ligering inn i plasmid pACYC184, og transformasjon av ligeringsblandingen inn i E. coli stamme HB101, og isolering derfra en klon hvorfra et Hindlll DNA fragment spesifikt kan hybridisere til DNA fra stammene til L. helveticus artene, i det dette DNA-fragmentet er fragmentet sLHl eller fragmentet sLH2, som definert i figurene 1 og 2.
2. Fremgangsmåte for å identifisere en bakteriell stamme av L. helveticus artene, karakterisert ved å preparere DNA fra en stamme som skal bli identifisert og undersøke om dette DNA hybridiseres til en probe ifølge krav 1.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved å preparere nevnte DNA ved lysering av cellene til nevnte stamme som skal bli identifisert.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved å preparere nevnte DNA ved lysering av cellene til nevnte stamme som skal bli identifisert på en fast bærer.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved å preparere nevnte DNA ved dyrking av cellene til nevnte stammer som skal bli identifisert på et kulturmedium supplementert med en fermenterbar karbonkilde, inkubering av disse i nærvær av proteinaser, behandling av disse med en N-acetyl-muramidase, videre inkubering av disse i nærvær av et emulgeringsmiddel, et gelateringsmiddel og en proteinase, fenolekstrahering av DNA derfra, behandling av dette DNA med en RNase og kloroformekstrahering av RNase behandlet DNA.
NO901437A 1990-02-10 1990-03-29 DNA-probe og fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus arter NO180755C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP90102650A EP0441991B1 (en) 1990-02-10 1990-02-10 A DNA probe for Lactobacillus helveticus

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO901437D0 NO901437D0 (no) 1990-03-29
NO901437L NO901437L (no) 1991-08-12
NO180755B true NO180755B (no) 1997-03-03
NO180755C NO180755C (no) 1997-06-11

Family

ID=8203632

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO901437A NO180755C (no) 1990-02-10 1990-03-29 DNA-probe og fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus arter

Country Status (16)

Country Link
US (1) US5412086A (no)
EP (1) EP0441991B1 (no)
JP (1) JPH03236799A (no)
AT (1) ATE108209T1 (no)
AU (1) AU625826B2 (no)
CA (1) CA2012835C (no)
DE (1) DE69010478T2 (no)
DK (1) DK0441991T3 (no)
ES (1) ES2056261T3 (no)
FI (1) FI93744C (no)
IE (1) IE64712B1 (no)
IL (1) IL93735A (no)
NO (1) NO180755C (no)
NZ (1) NZ233005A (no)
SG (1) SG13695G (no)
ZA (1) ZA902061B (no)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0652291B1 (en) * 1992-07-07 2003-05-28 Fuso Pharmaceutical Industries Ltd. Probe for diagnosing infectious disease
ATE253640T1 (de) * 1998-06-17 2003-11-15 Nestle Sa Mobile genetische elemente als werkzeuge zur genetischen modifikation von l. delbrueckii oder l. helveticus

Also Published As

Publication number Publication date
FI93744B (fi) 1995-02-15
FI901726A (fi) 1991-08-11
JPH03236799A (ja) 1991-10-22
CA2012835A1 (en) 1991-08-10
ES2056261T3 (es) 1994-10-01
IE64712B1 (en) 1995-08-23
AU625826B2 (en) 1992-07-16
FI901726A0 (fi) 1990-04-05
FI93744C (fi) 1995-05-26
IL93735A (en) 1995-05-26
NO901437L (no) 1991-08-12
DE69010478T2 (de) 1994-10-27
AU5130690A (en) 1991-08-15
SG13695G (en) 1995-06-16
US5412086A (en) 1995-05-02
DE69010478D1 (de) 1994-08-11
NO180755C (no) 1997-06-11
DK0441991T3 (da) 1994-09-26
ATE108209T1 (de) 1994-07-15
NO901437D0 (no) 1990-03-29
EP0441991A1 (en) 1991-08-21
CA2012835C (en) 1996-06-11
NZ233005A (en) 1992-02-25
EP0441991B1 (en) 1994-07-06
IL93735A0 (en) 1990-12-23
IE900890A1 (en) 1991-08-14
ZA902061B (en) 1990-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Delley et al. DNA probe for Lactobacillus delbrueckii
Blaiotta et al. 16S–23S rDNA intergenic spacer region polymorphism of Lactococcus garvieae, Lactococcus raffinolactis and Lactococcus lactis as revealed by PCR and nucleotide sequence analysis
Beimfohr et al. Rapid genotypic differentiation of Lactococcus lactis subspecies and biovar
Corroler et al. Correlation between polymerase chain reaction analysis of the histidine biosynthesis operon, randomly amplified polymorphic DNA analysis and phenotypic characterization of dairy Lactococcus isolates
JPH08103275A (ja) 乳酸桿菌由来の新規なプラスミドpBUL1 及びその誘導体
Casey et al. Characterization and classification of virulent lactococcal bacteriophages isolated from a Cheddar cheese plant
Pilloud et al. DNA probes for the detection of Lactobacillus helveticus
NO180755B (no) DNA-probe og fremgangsmåte for identifisering av bakterielle stammer av Lactobacillus helveticus arter
US4883756A (en) pTN1060, a conjugal plasmid and derivatives thereof that confer phage resistance to group N streptococci
Hayes et al. pAMβ1-Associated Mobilization of Proteinase Plasmids from Lactococcus lactis subsp. lactis UC317 and L. lactis subsp. cremoris UC205
AU696233B2 (en) Method of eliminating genetic routes for bacteriophage evolution and products produced thereby
EP0806483B1 (en) Detection of bacterium belonging to the genus pectinatus
CA2012838C (en) Dna probe for lactobacillus delbrueckii
AU664537B2 (en) Phage defense rotation strategy
EP0246909B1 (en) Plasmids conferring phage insensitivity on bacteria
Husson-Kao et al. The autolysis of Streptococcus thermophilus DN-001065 is triggered by several food-grade environmental signals
Coffey et al. Traditional and molecular approaches to improving bacteriophage resistance of Cheddar and Mozzarella cheese starters
Aprea et al. Multiplex PCR to detect bacteriophages from natural whey cultures of buffalo milk and characterisation of two phages active against Lactococcus lactis, фApr-1 and фApr-2
Aprea et al. Multiplex PCR to detect bacteriophages from natural whey cultures of
Nomura et al. Rapid PCR-Based Method Which Can
Chen et al. Genetic Characterization and Physiological Role of Endopeptidase O
Woskow Effect of proteolytic enzymes on transfection and transformation of Streptococcus lactis protoplasts and transformation of Streptococcus cremoris

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees