NO152532B - Stabiliseringsmiddel for inaktivert eller svekket virus - Google Patents

Description

Denne oppfinnelse angår et stabiliseringsmiddel for inaktivert eller svekket virus, bestående i det vesentlige av et delvis hydrolysert gelatin, et nærmere bestemt kultur-medium, sorbitol og en fosfatbuffer. vira som det er aktuelt å stabilisere med stabiliseringsmidlet, er meslinger, kusma, røde hunder, vannkopper, polio, hepatitis og lignende eller kombinasjoner av to eller flere slike.

Stabiliseringsmidler av denne art er kjent fra tyske

(DE) utlegningsskrifter nr. 2 405.675, 1 617 356 og 1 258 547. Eksempelvis er det fra DE utlegningsskrift nr. 2 405 675

kjent et stabiliseringsmiddel som inneholder en delvis hydrolysert gelatin med" en molekylvekt på ca. 3000, sorbitol og fosfat. Ingen av disse kjente stabiliseringsmidler har imidler-tid bruksegenskaper som overgår egenskapene av det kjente stabiliseringsmiddel SPGA (succrose, fosfatbuffer, glutamat og albumin), som ansees å være det beste av alle kjente virus-stabiliseringsmidler.

Det har nu i henhold til oppfinnelsen vist seg at et stabiliseringsmiddel som analogt med de kjente stabiliseringsmidler av den innledningsvis angitte art består i det vesentlige av 2 - 5 vektdeler av et delvis hydrolysert gelatin med en molekylvekt på ca. 3000, 0,5 - 1,7 vektdeler"Medium 199", 2-55 vektdeler sorbitol og en fosfatbuffer, har vesentlig bedre bruksegenskaper enn ovennevnte SPGA når stabiliserings-midlets fosfatbuffer er en sur fosfatbuffer og inneholdes i en mengde som gir stabiliseringsmidlet en pH-verdi på 6,0 - 6,5.

Stabiliseringsmidlet fortynnes med fra tre til åtte ganger,(fortrinnsvis ca. 5,5 ganger) dens vekt av destillert vann før bruk.

Den hydrolyserte gelatin med en molekylvekt på ca.

3000 anvendes i stabiliseringsmidlet for å få en oppløselig, ikke-gelerende, proteinholdig basis med lite eller ingen pyrogenitet eller antigenitet. Den hydrolyserte gelatin har omtrent samme aminosyresammensetning som gelatin. I motset-ning til gelatin, som danner geler, men er uoppløselig i kaldt vann, gelerer hydrolysert gelatin ikke, men er oppløselig i kaldt vann og andre vanlige væsker som melk og appelsinsaft. Vandige oppløsninger som inneholder inntil 10% hydrolysert

gelatin, øker ikke særlig i viskositet. Ved konsentrasjon over 10% øker viskositeten langsomt. Ved ca. 50% konsentrasjon er oppløsningene temmelig viskøse. Den typiske aminosyresammensetning av hydrolysert gelatin er som følger:

Den delvis hydrolyserte gelatin kan fåes ved enzyma-tisk hydrolyse av gelatin ved hjelp av et proteolytisk enzym, som f.eks. papain, chymopapain og bromelin, skjønt også andre kjente hydrolysemetoder kan benyttes, f.eks. syrehydro-lyse. En egnet hydrolysert gelatin markedsføres under vare-merket "Sol-U-Pro".

Vedrørende"Medium 199", som er et næringsmedium som tillater vekst av celler in vitro, vises det til Morgan et al., Proe. Soc. Exp. Biol. & Med., 73:1-8, 1950.

Ved anvendelse av stabiliseringsmidlet i en flytende vaksine er sorbitolen i alminnelighet tilstede i en mengde henimot den øvre ende av det angitte mengdeområde. Et foretrukket stabiliseringsmiddel består i dette tilfelle i det vesentlige av ca. 3,6 av den delvis hydrolyserte gelatin,

ca. 53 vektdeler av sorbitolen, ca. 1,1 vektdeler "Medium

199" og den mengde av fosfatbufferen som kreves for å innstille pH-verdien på 6,0 - 6,5. Ved anvendelse av stabiliseringsmidlet i en lyofilisert vaksine er derimot sorbitolen i alminnelighet tilstede i en mengde henimot den nedre ende av mengdeområdet. Et foretrukket stabiliseringsmiddel består i dette tilfelle i det vesentlige av ca. 3,6 vektdeler av den delvis hydrolyserte gelatin, ca. 3,6 vektdeler av sorbitolen, ca. 1,1 vektdeler "Medium 199" og den mengde av fosfatbuffer ren som kreves for å innstille pH-verdien på 6,0 - 6,5.

Som fosfatbuffer inneholder stabiliseringsmidlet ifølge oppfinnelsen fortrinnsvis natriumfosfat.

Nedenfor er det angitt to spesifikke sammensetninger av stabiliseringsmidlet ifølge oppfinnelsen. Sammensetning B foretrekkes for en lyofilisert vaksine.

Stabiliseringsmidlet inneholder eventuelt, og fortrinnsvis, en liten mengde natriumbicarbonat og fenolrødt. I stabili-seringsmidlene med den ovenfor angitte sammensetning kan natriumbicarbonatet være tilstede i en mengde av ca. 1,2 g og fenolrødt i en mengde av ca. 0,01 g. En volumdel basisvaksine fortynnes vanligvis med fra 2 til 12 volumdeler stabiliseringsmiddel .

De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen og viser de gode resultater som oppnåes i sammenligning med det beste av de tidligere kjente stabiliseringsmidler, nemlig SPGA.

Eksempel 1

80 ml meslingviruskonsentrat som var blitt lagret ved

-70°C, ble tint i et vannbad ved 25°C og deretter holdt ved

4 - 8 C. Det flytende viruskonsentrat ble så delt i to por-

sjoner hver på 40 ml.

a) En 4 0 ml prøve av denne virusvæske ble fortynnet

i 210 ml av det ovenfor beskrevne sterile stabiliseringsmiddel

av sammensetning B. Fortynningen ble utført under aseptiske

betingelser og laminær strømning. For å forhindre mikrobevekst ble det tilsatt 10,5 mg neomycin til preparatet. Den fortynnede vaksine ble overført til 2 ml glassampuller (0,7 ml vaksine pr. ampulle) som straks ble flammeforseglet og lagret ved 4 - 8°c.

b) Den annen 4 0 ml prøve ble behandlet som den første, bortsett fra at det i stedet for stabiliseringsmidlet med

sammensetning B ble anvendt et standard kommersielt vaksine-fortynningsmiddel (SPGA). Lagringsstabiliteten av vaksinene er angitt i følgende tabell:

Titrene er uttrykt som log TCID5Q/0,1 ml.

TCIDjjq (Tissue Culture Infection Dose) står for 50%

vevkultur-smittedose.

Mens titeren etter 4 måneder var vesentlig redusert i til-fellet hvor SPGA var anvendt, holdt den seg temmelig konstant i det tilfelle hvor stabiliseringsmidlet ifølge oppfinnelsen var benyttet.

Eksempel 2

32 ml meslingviruskonsentrat som var blitt lagret ved -70°C, ble tint i et vannbad ved 25°C og så holdt ved 4 - 8°C. Det flytende viruskonsentrat ble så delt i to deler, hver på 16 ml.

a) En 16 ml prøve av denne virusvæske ble fortynnet i

48 ml av det tidligere beskrevne sterile stabiliseringsmiddel

B. Fortynningen ble foretatt under aseptiske betingelser og laminær strømning. For å forhindre mikrobevekst ble 2,5 mg neomycin tilsatt til preparatet. Den fortynnede vaksine ble fylt i 2 ml glassampuller (0,7 ml vaksine pr. ampulle) som straks ble flammeforseglet og lagret ved 37°C. b) Den annen 16 ml prøve ble behandlet som den første, unntatt at der i stedet for stabiliseringsmidlet med sammensetning B ble anvendt stabiliseringsmidlet med sammensetning A. Lagringsstabiliteten av vaksinene er angitt i følgende tabell:

Eksempel 3

80 ml meslingviruskonsentrat som var blitt lagret ved

-70°C, ble tint i et vannbad ved 20°C og så holdt ved 4 - 8°C. Det flytende viruskonsentrat ble delt i to deler, hver på 4 0 ml. a) En 40 ml prøve av denne virusvæske ble fortynnet i 210 ml av det ovenfor beskrevne sterile stabiliseringsmiddel med sammensetning B. Fortynningen ble utført under aseptiske betingelser og laminær strømning. For å forhindre mikrobevekst ble 10,5 mg neomycin tilsatt til preparatet. Den: fortynnede vaksine ble fylt i 3 ml glassampuller (0,7 ml vaksine pr. ampulle) som ble lyofilisert, korket og lagret ved 37°C. b) Den annen 40 ml virusprøve ble behandlet som den første, bortsett fra at der i stedet for stabiliseringsmidlet

med sammensetning B ble anvendt et standard kommersielt for-tynningsmiddel ("Medium 1 99 " inneholdende SPGA).

Lagringsstabiliteten av disse vaksiner er angitt i den følgende tabell.

Titrene er uttrykt som log TCID50/0,1 ml.

Mens titeren etter 7 dager var vesentlig redusert ved bruk av SPGA, holdt titeren seg stabil ved bruk av stabiliseringsmidlet ifølge oppfinnelsen.

Eksempel 4

Lyofiliserte ampuller fremstilt som i eksempel 3 ble rekonstituert i destillert vann (0,7 ml pr. ampulle) og lagret ved 2 - 8°C.

Lagringsstabiliteten av disse vaksiner er angitt i den følgende tabell:

Tapet i titer var således meget mindre ved bruk av stabiliseringsmidlet ifølge oppfinnelsen enn ved bruk av SPGA.

Claims (4)

1. Stabiliseringsmiddel for inaktivert eller svekket virus, bestående i det vesentlige av 2 - 5 vektdeler av en delvis hydrolysert gelatin med en molekylvekt på ca. 3000,

0,5 - 1,7 vektdeler"Medium 199", 2-55 vektdeler sorbitol og en fosfatbuffer, karakterisert ved at fosfatbufferen er en sur fosfatbuffer og inneholdes i en mengde som gir stabiliseringsmidlet en pH-verdi på 6,0 - 6,5.

2. Stabiliseringsmiddel ifølge krav 1, karakterisert ved at det i det vesentlige består av ca. 3,6 vektdeler av den delvis hydrolyserte gelatin, ca. 3,6 vektdeler av sorbitolen, ca. 1,1 vektdeler"Medium 199" og den mengde av fosfatbufferen som kreves for å innstille pH-verdien på 6,0 - 6,5.

3. Stabiliseringsmiddel ifølge krav 1, karakterisert ved at det i det vesentlige består av ca. 3,6 vektdeler av den delvis hydrolyserte gelatin, ca. 53 vektdeler av sorbitolen, ca. 1,1 vektdeler"Medium 199" og den mengde av fosfatbufferen som kreves for å innstille pH-verdien på 6,0 - 6,5.

4. Stabiliseringsmiddel ifølge krav 1-3, karakterisert ved at det som fosfatbuffer inneholder natriumfosfat.