NO145405B - Fremgangsmaate til rensning av det svangerskapsspesifikke beta-1-glykoprotein - Google Patents

Description

I tysk søknad nr. 21 57 610 er det omtalt et i

plazenta forekommende glykoprotein, som tilkommer betegnelsen "svangerskapsspesifikt 3-^-glykoprotein" (SP-^) . Videre er det i nevnte patentsøknad omtalt en fremgangsmåte til isolering av dette glykoprotein. En ytterligere slik' fremgangsmåte er omtalt i norsk søknad nr. 761 306.

Oppfinnelsens gjenstand er en adsorpsjonsfremgangs-måte som muliggjør videre å rense og praktisk talt renfrein-stille det svangerskapsspesifikke B^-glykoprotein, som ved de nevnte fremgangsmåter fremkommer i en renhet fra 6 0-95%.

Fremgangsmåten er karakterisert ved at man bringer

en vandig fosfatholdig oppløsning, som inneholder det svangerskapsspesif ikke g^-glykoprotein i berøring med hydroksy-

lapatit, adskiller hydroksylapatitet fra oppløsningen og fra dette utvinner SP-^.

I norsk utlegningsskrift nr. 123 235 er det omtalt

en fremgangsmåte til anrikning av aspergillopeptidase ved kromatografering hvorved det anvendes hydroksylapatit. I "Chemical Abstracts" (1968), bind 69, 94332j, er det anført at hydroksylapatit riktignok ble anvendt til fraksjonering av menneskelig svangerskapsserum, imidlertid ikke med opti-

malt resultat.

På tross av denne kjente teknikkens stand var det overraskende at hydroksylapatit kunne anvendes til rensning av SP^ med det oppnådde gode resultat.

Det svangerskapsspesifikke g^-glykoprotein SP^ adsorberes sammen med urenhetene på hydroksylapatiten, men den elueres fra hydroksylapatiten med 0,005 M fosfatpuffer,

mens urenhetene ikke elueres av fosfatpuffere og forblir adsorbert på hydroksylapatiten.

Oppfinnelsen vedrører altså en fremgangsmåte til rensning av det svangerskapsspesif ikke g^-glykoprotein, SP^,

for fremstilling av et produkt som inneholder over 99% SP-^ ,

idet fremgangsmåten er karakterisert ved at en fosfatholdig vandig oppløsning som inneholder det svangerskapsspesifikke 6-^-glykoprotein og hvis renhet er 60-95% med en pH på 5-8,5,

og et fosfatinnhold på 0,001-0,01 M pr. liter, bringes i be-

røring med hydroksylapatiten, fraskiller oppløsningen fra hydroksylapatiten som elueres med en ca. 0,005 M fosfatpuffer og utvinner SP^ fra elueringsoppløsningen.

Adsorpsjonen av forurensningene kan såvel gjennom-føres i en porsjonsfremgangsmåte som også en søylekromato-grafi.

Ved overholdelse av de ovennevnte betingelser fåes etter denne fremgangsmåte det svangerskapsspesif ikke 6-^-glykoprotein i en renhet på over 99%.

Preparatets renhet bestemmes fordelaktig med immu- ■

nologiske fremgangsmåter under anvendelse av antisera, som såvel inneholder antilegemer mot det svangerskapsspesifikke 3-^-glykoprotein, som også mot noen eller flere i plazenta-ekstrakt, i blod eller urin fra svangre forekommende anti-

j gener.

Til høyrensning av svangerskapsspesifikt 3^-glykoprotein oppløser 50 mg av det 60-95% rene preparat i 10 ml

j 0,005 molar natriumfosfatpuffer (pH 6,0) og haes på en med hydroksylapatit fylt søyle (2x8 cm), som på forhånd var blitt ekvilibrert med en 0,005 molar fosfatpuffer pH 6,8.

Ved evalueringen av søylen med 0,005 molar fosfatpuffer

vandrer det svangerskapsspesif ikke 8^-glykoprotein gjennom - søylen, forurensningene derimot adsorberes på hydroksylapatit.

Det proteinholdige gjennomløp inneholder svangerskapsspesifikt 3-^-glykoprotein i ren form; det dialyseres for fjerning av saltene mot 10 ganger volum vann og lyofiliseres deretter.

Utbytte ca. 40 mg svangerskapsspesifikt B^-glykoprotein.

j Renheten utgjør over 99%, dvs. etter immunologiske fremgangsmåter er det ikke påvisbart noen av de tilblandinger som var tilstede før rensningsoperasjonen.

Claims (1)

1. Fremgangsmåte til rensning av det svangerskapsspesifikke g-^-glykoprotein, SP1, for fremstilling av et produkt som inneholder over 99% SP.^karakterisert ved at en fosfatholdig vandig oppløsning som inneholder det svangerskapsspesif ikke B-^-glykoprotein og hvis renhet er 60-95% med en pH på 5-8,5 og et fosfatinnhold på 0,001-0,01 mol/l, bringes i berøring med hydroksylapatit, fraskiller oppløsningen fra hydroksylapatiten som elueres med en ca. 0,005 molar fosfatpuffer og utvinner SP.^ fra eluerings-

   oppløsningen.