NO144673B - Funksjonaliserte adeninderivater for anvendelse ved affinitetskromatografering og som ko-enzymer - Google Patents
Funksjonaliserte adeninderivater for anvendelse ved affinitetskromatografering og som ko-enzymer Download PDFInfo
- Publication number
- NO144673B NO144673B NO762485A NO762485A NO144673B NO 144673 B NO144673 B NO 144673B NO 762485 A NO762485 A NO 762485A NO 762485 A NO762485 A NO 762485A NO 144673 B NO144673 B NO 144673B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- adenine
- derivatives
- functionalized
- water
- affinity chromatography
- Prior art date
Links
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical class NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 24
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 title claims description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 14
- -1 nicotinylamide adenine Chemical compound 0.000 claims description 11
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 229910052783 alkali metal Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UQADZBSCNRWCBX-JJNLEZRASA-N 3-[6-amino-9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]purin-8-yl]sulfanylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCSC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O UQADZBSCNRWCBX-JJNLEZRASA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBAJNQDWJUHYOF-UHFFFAOYSA-N 7h-purin-6-amine;pyridine-3-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 MBAJNQDWJUHYOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VJUPMOPLUQHMLE-UUOKFMHZSA-N 8-Bromoadenosine Chemical compound BrC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VJUPMOPLUQHMLE-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FCZOVUJWOBSMSS-UHFFFAOYSA-N 5-[(6-aminopurin-9-yl)methyl]-5-methyl-3-methylideneoxolan-2-one Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1CC1(C)CC(=C)C(=O)O1 FCZOVUJWOBSMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000990027 Bisaltes Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DBTDEFJAFBUGPP-UHFFFAOYSA-N Methanethial Chemical compound S=C DBTDEFJAFBUGPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical group NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002140 halogenating effect Effects 0.000 description 1
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- XVDBWWRIXBMVJV-UHFFFAOYSA-N n-[bis(dimethylamino)phosphanyl]-n-methylmethanamine Chemical compound CN(C)P(N(C)C)N(C)C XVDBWWRIXBMVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N propan-2-ol;hydrate Chemical compound O.CC(C)O XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
- C07D473/32—Nitrogen atom
- C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører funksjonaliserte adeninderivater, og det særegne ved de funksjonaliserte adeninderivater i henhold til oppfinnelsen er at de har den generelle formel
hvori
A er en ikke-adeninsubstituent på adeninkjernen, og R står for -OM hvori M er hydrogen eller et alkalimetall, idet adeninkjernen sammen med substituenten A er valgt fra gruppen bestående av nikotinoylamid-adenin-dinukleotid, nikotinoylamid-adenin-dinukleotidfosfat, samt adenosin.
Disse trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravet.
De funksjonaliserte adeninderivater kan fordelaktig fremstilles ved at man går ut fra forbindelser som inneholder en adenin-kjerne, med et halogenatom i 8-stillingen og foretar en om-leirende omsetning med natriumsaltet av 3-merkaptopropionsyre for å oppnå de tilsiktede adeninderivater som i den nevnte stilling har en omega-karboksylsyregruppe. Utgangs-materialene for den nevnte fremgangsmåte kan oppnås ved kon-vensjonelle metoder ved å halogenere de tilsvarende forbindelser som inneholder adeninkjernen, nemlig adenin-dinukleotid (NAD<+>), nikotinoylamid-adenin-dinukleotidfosfat (NADP<+>)
og adenosin.
Disse forbindelser er av meget stor viktighet innen biokjemien og deres funksjonalisering utvider deres anvendelsesområde.
De funksjonaliserte derivater kan ved hjelp av en kovalent binding bli knyttet til makromolekyler som er enten vannopp-løselige eller vannuoppløselige, og anvendes som ikke-diffunderbare koenzymer, eller ved affinitetskromatografering.
I tilfellet med tilknytting til vannoppløselige makromolekyler, kan de således anvendes som ikke-diffunderbare vann-oppløselige koenzymer i makromolekylær form. Dette tillater å utvide anvendelsesområdet for de kjente enzymsystemer hvori enzymet er mekanisk innleiret i uoppløselige porøse strukturer, som f.eks. fibre, polyakrylamidgel, mikrokapsler,etc. som er ugjennomtrenglelige for makromolekyler. I virkeligheten vil ved mekanisk innleiring sammen med enzymet eller et polyenzymsystem av det vannoppløselige koenzym i makromolekylær form, både enzymet og koenzymet forbli i nær kontakt og vandringen av det sistnevnte mot utsiden av den okkl-uderende struktur forhindres. Med det naturlige koenzym kan dette ikke gjøres på grunn av den lave molekylvekt av det sistnevnte. I tilfellet med tilknytning til vannuopp-løselige makromolekyler kan forbindelsene anvendes for affinitetskromatografering eller for enzymatiske reaksjoner i heterogen fase, idet det derved er mulig å gjenvinne koenzymet .
De ovennevnte derivater som er blitt funksjonalisert i adeninkjernen kan greit oppnås ved å omsette den tilsvarende ut-gangsforbindelse som er blitt halogensubstituert i Cg-stillingen av kjernen, med disaltet av omega-merkapto-propion-syre med den generelle formel
hvori M+ er ionet av et alkalimetall.
Reaksjonen gjennomføres i aprotiske polare løsningsmidler (som f.eks. heksametyl-fosfortriamid, dimetyl-sulfoksyd eller dimetylformamid) ved en temperatur på fra +20°C til +60°C, foretrukket ved romtemperatur, og under vannfri betingelser. Reaksjonen bevirker en substituering av halogen i 8-stillingen.av adeninkjernen på den måte som er vist i følgende formel:
hvori M<+> har den ovennevnte betydning, X er halogen og R er ikke-adeninresten av forbindelsen.'
Saltet av det derved oppnådde karboksylderivat kan deretter under den videre behandling omdannes til sin tilsvarende fri syre.
Fremgangsmåten er i og for seg generell, men i den etter-følgende del av beskrivelsen vil det vises til reaksjon mellom natrium-bisaltet av 3-merkaptopropionsyre og derivatene av NAD og NADP som er blitt bromert ved karbonatomet i 8-stillingen av adeninkjernen av adenosin, for å illustrere metodene anvendt for fremstillingen av de funksjonaliserte adeninderivater.
Forbindelsene kan for eksempel anvendes for fremstilling av adeninderivater i makromolekylær form, idet disse siste inneholder en eller flere enheter med den generelle formel kan oppnås fra nikotinoylamid-adenin-dinukleotid, nikotinoylamid-adenin-dinukleotidfosfat samt adenosin, og hvori nitrogen-atomet bundet til CO-gruppen er en del av en forbindelse med høy molekylvekt og som er enten vannoppløselig eller vann-uoppløselig og inneholder en eller flere primære eller sek-undære amingrupper (f.eks. polylysin, omega-aminoalkylpoly-akrylamider, polysakkaridestere av omega-aminoalkylkarbamin-syrer, polyvinylamin, omega-aminoalkylestere, eller omega-aminoalkyl-amider av polyglutaminsyre, aminoalkylsilaniserte glass-mikrokuler, polyetylenamin og andre). De funksjonaliserte forbindelser kan reagere med minst en polymer med minst en primær eller sekundær amingruppe, til å gi de ovennevnte adeninderivater i makromolekylær form, i nærvær av et vannoppløselig karbodiimid (f.eks. N-etyl-N'- (3-dimetyl-aminopropyl)-karbodiimid-hydroklorid) eller et uoppløselig sådant (f.eks. N,N'-dicykloheksylkarbodiimid) som kondensasjons-middel.
Kondensasjonsreaksjonen mellom karboksylgruppen i det funksjonaliserte adeninderivat og amingruppen i makromolekylet til å gi amidbindingen, gjennomføres i vandige omgivelser eller i en blanding av vann og et vannoppløselig organisk løsningsmiddel, som f.eks. pyridin, tetrahydrofuran, dioksan og andre, ved en temperatur på mellom +5°C og +50°C, og foretrukket ved romtemperatur.
Adeninderivatene overført i makromolekylær form har en rekke anvendelser, og kan som nevnt finne anvendelse ved affinitetskromatografering eller som aktive, ikke-diffunderbare koenzymer.
I tilfellet med tilknytting til vannoppløselige makromolekyler kan de således anvendes som ikke-diffunderbare vannopp-løselige koenzymer i makromolekylær form. Disse tillater en utvidelse av anvendelsesområdet for de kjente enzymatiske systemer hvori enzymet er mekanisk innleiret i oppløselige strukturer, som f.eks. fibere, polyakrylamidgeler, mikro-kapsler og andre, som er ugjennomtrengelige for makromole-kylene. I virkeligheten vil ved mekanisk innleiring sammen med enzymet, eller det polyenzymatiske system, også det vann-oppløselige koenzym foreligge makromolekylær form slik at både enzymet og koenzymet forblir i nær kontakt og vandring av koenzymet mot utsiden av den okkulerende struktur forhindres, mens dette ikke kan gjøres med det naturlige koenzym, på grunn av dets lave molekylvekt.
I tilfellet med tilknytting til vannuoppløselige makromolekyler kan de anvendes for affinitetskromatografering eller for enzymatiske reaksjoner i en heterogen fase, idet det er mulig å gjenvinne koenzymet.
EKSEMEPL 1
Fremstilling av 8-( 2- karboksyetvltio) adenosin.
Til en løsning av 380 milligram (1.1 millimol) 8-bromoadenosin
i 5 ml vannfritt fosfortriamid tilsettes under omrøring ved romtemperatur og under en vannfri atmosfære (nitrogen), 63 3 milligram (4.2 millimol) av natrium-disaltet av 3-merkaptopropionsyre (oppnådd ved behandling ved romtemperatur av merkaptsyren med en støkiometrisk mengde av natriumhydrid i vannfritt tetrahydrofuran og etterfølgende avdrivning av løsningsmidlet under vakuum.
Etter 16 timers omrøring ved romtemperatur filtreres blandingen og filtratet tilsettes 15 ml vann og ekstraheres flere ganger med kloroform inntil heksametulfosfortriamidet er fjernet.
Den vandige oppløsning innstilt til pH 8.5 med fortynnet
HC1 kromatografers på "DOWEX" (HCOO~) med gradert eluering med maursyre i vann. Fraksjonene med X ma, Ks28 2 mm kombineres og frysetørkes og gir 327 milligram 8-(2-karboksyetyltio)-adenosin.
Produktet viser seg å være rent ved tynnsjikt-analyse (silikagel med fluoressens-indikator, elueringsmiddel isopropanol-vann - 32% ammoniakk i volumforhold 7:2:1. Flekkene gjøres synlige med en UV lampe ved 254 nm; Rf = 0,56) og også ved høyvolt-elektroforese (Whatman paper 3MM 11x57 cm, elektrolytt 0,02 M ammoniumacetat pH 5.0, spenning 5000 V i 40 minutter, idet man gjør flekkene synlige ved hjelp av en UV-lampe ved 254 nm, idet mobiliteten av produktet mot anoden er i samsvar med nærværet av karboksylgruppen mens adenosin vandrer mot katoden).
UV-spektrum i 0.1M NaOH fremviser topp-absorpsjon ved 28 2
nm mens absorbsjonen for 8-bromoadenosin er ved 263 nm.
1 H NMR i NaO 2H viser, i tillegg til signalene i forhold til adenosin med utelukkelse av signalet for protonet i 8-posisj-onen de signaler som vedrører protonene i sidekjeden, 2.88 (2H, t; CH2COO) og 3.86 (2H, t; CH2S).
Også massespektrum bekrefter strukturen som tillegges produktet (m/e 239, 221, 192, 167).
EKSEMPEL 2
Fremstilling av nikotinoylamid- 8( 2- karboksyetyl- tio) adenin-dinukleotid.
Til 118 milligram (160 mikromol) nikotinoylamid-8-bromoadenin-dinukleotid oppløst i 2 ml vannfritt dimetylsulfoksyd til-
settes under omrøring ved romtemperatur og under en vann-
fri atmosfære (notrogen), 98.4 milligram (656 mikromol) av natrium-disaltet av 3-merkaptopropionsyre (fremstilt som beskrevet i eksempel 1).
Etter 16 timers omrøring ved romtemperatur filtreres bland-
ingen og 10 volumdeler aceton tilsettes til filtratet.
Det oppnådde bunnfall, separert ved sentrifugering og vasket
med aceton, tørkes under vakuum og oppløses i 15 ml 0,1M
HC1. Oppløsningen, innstilt til pH 7.5 med fortynnet soda-løsning, kromatograferes på "DOWEX-1" (HCOO<->) ved gradert eluering med maursyre i vann.
De kromatografiske fraksjoner med X IU3 , K S 276.5 kombineres og frysetørkes og gir 90 mg nikotinoylamid 8-(2-karboksyetyltio) adenin-dinukleotid. Produktet viser seg å være rent ved tynnsjiktsanalyse på silikagel med fluorescens-indikator med elueringsmiddel: isosmørsyre-vann-32% ammoniakk i volum-forholdet 66:33:1.7. Flekkene gjøres synlige med UV-lampe ved 254 nm; Rf 0.31), og ved høyvolts-elektroforese (3MM
Whatman paper LL x 57 cm; elektrolytt: 0,02M ammoniumacetat,
pH 5.0 spenning 5000 V i 30 minutter, idet flekkene gjøres synlige ved hjelp av en UV-lampe ved 254 nm. Mobiliteten mot anoden er større enn for NAD<+> som stemmer med tilstede-værelsen av karboksylgruppen).
Ultrafiolett-spektrumet i en løsning av pyrofosfatbuffer,
pH 8.7 viser en topp ved 276.5 nm som ved enzymatisk red-
uksjon med alkoholdehydrogenase fra gjær, går over til 28 2
nm med tilsynekomst av en ny topp ved 340 nm som er karak-teristisk for den reduserte nikotinoylamid-kjerne. 1 H NMR i <2>H„0 viser, i tillegg til signalene som gjelder NAD + med unntagelse av signalet for det proton som er knyttet
til karbonet i 8-stillingen av adeninkjernen de signaler som vedrører protonene i sidekjede: 6 2.88 (2H, t; C^COO)
og 2.86 (2H, t; CF^S). Også massespektrumet er i samsvar
med den struktur som tillegges produktet (m/e 221, 192, 167).
EKSEMPEL 3
Fremstilling av nikotinoylamid- 8-( 2- karboksyetyltio- adenin-dinukleotid- fosfat.
Til 50 mg (57.6 mikromol) nikotinoylamid-8-bromoadenin-dinukleotid-fosfat oppløst i 1 ml vannfritt dimetylsulfoksyd tilsettes udner omrøring ved romtemperatur og under en vannfri atmosfære (nitrogen) 36 mg (240 mikromol) av natrium-disaltet av 3-merkaptopropionsyre (fremstilt som beskrevet i eksempel 1).
Etter 16 timers omrøring ved romtemperatur, ble blandingen filtrert og filtratet tilsatt 10 volumdeler aceton. Det derved oppnådde bunnfall, separert ved sentrifugering og vasket med aceton, tørkes under vakuum og oppløses i 10 ml 0,IM HC1.
Oppløsningen, innstilt til pH 7.5 med fortynnet sodaløsning, kromatografers på "DOWEX-1" (Cl<->) ved gradert eluering med CaCl^ i vann med pH 3 véd tilsetning av HC1. De kromatografiske fraksjoner som inneholdt det forventede produkt kombineres, konsentreres til et lite volum og avsaltes ved gelfiltrering på "Sephadex G-10" ved eluering av produktet med vann.
Karakteriseringen av nikotinoylamid-8-(2-karboksy-etyl-tio) adenin-dinukleotid-fosfatet gjennomføres på tilsvarende måte som beskrevet i eksempel 2 for.det tilsvarende derivat av NAD<+> (glukose-6-fosfat-dehydrogenase ble anvendt for den enzymatiske reduksjon).
Claims (1)
- Funksjonaliserte adeninderivater for anvendelse ved affinitetskromatografering og som ko-enzymer,karakterisert ved at de har den generelle formel hvori A er en ikke-adeninsubstituent på adeninkjernen, ogR står for -OM hvori M er hydrogen eller et alkalimetall, idet adeninkjernen sammen med substituenten A er valgt fra gruppen bestående av nikotinoylamid-adenin-dinukleotid, nikotinoylamid-adenin-dinukleotidfosfat samt adenosin.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT25419/75A IT1039860B (it) | 1975-07-15 | 1975-07-15 | Processo per la preparazione di derivati adeninici funziona lizzati e prodotti cosi ottenuti |
IT2295876A IT1059785B (it) | 1976-05-04 | 1976-05-04 | Procedimento per la preparazione di derivati adeninici macromoleolarizzati e prodotti cosi ottenuti |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO762485L NO762485L (no) | 1977-01-18 |
NO144673B true NO144673B (no) | 1981-07-06 |
NO144673C NO144673C (no) | 1981-10-14 |
Family
ID=26328299
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO762485A NO144673C (no) | 1975-07-15 | 1976-07-15 | Funksjonaliserte adeninderivater for anvendelse ved affinitetskromatografering og som ko-enzymer |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4091203A (no) |
JP (1) | JPS5210292A (no) |
AU (1) | AU511507B2 (no) |
CA (1) | CA1083567A (no) |
CH (1) | CH626891A5 (no) |
DD (1) | DD125941A5 (no) |
DE (1) | DE2631046A1 (no) |
DK (1) | DK317276A (no) |
FR (1) | FR2318173A1 (no) |
GB (1) | GB1552453A (no) |
IL (2) | IL50027A (no) |
LU (1) | LU75377A1 (no) |
NL (1) | NL7607877A (no) |
NO (1) | NO144673C (no) |
SE (1) | SE7608064L (no) |
YU (2) | YU172576A (no) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5481166U (no) * | 1977-11-21 | 1979-06-08 | ||
JPS6121040Y2 (no) * | 1977-11-25 | 1986-06-24 | ||
JPS5485572U (no) * | 1977-11-30 | 1979-06-16 | ||
JPS5485574U (no) * | 1977-11-30 | 1979-06-16 | ||
US4701521A (en) * | 1978-07-17 | 1987-10-20 | The Trustees Of Boston University | Method of effecting cellular uptake of molecules |
JPS5535495U (no) * | 1978-08-31 | 1980-03-07 | ||
US4948882A (en) * | 1983-02-22 | 1990-08-14 | Syngene, Inc. | Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis |
WO1984003285A1 (en) * | 1983-02-22 | 1984-08-30 | Molecular Biosystems Inc | Defined sequence single strand oligonucleotides incorporating reporter groups, process for the chemical synthesis thereof, and nucleosides useful in such synthesis |
IT1196261B (it) * | 1984-09-20 | 1988-11-16 | Pierrel Spa | Derivati nucleosidici e purinici 8-sostituiti |
US20030228621A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-11 | Yong Qin | Common ligand universal enzyme assay and compositions for use therein |
US9926340B2 (en) * | 2015-04-08 | 2018-03-27 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | NAD analogs and methods of using said NAD analogs in determining ribosylation of proteins with PARP mutants |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2946781A (en) * | 1957-02-06 | 1960-07-26 | Merck & Co Inc | Process for the preparation of adenosyl homocysteine |
GB1257546A (no) * | 1968-09-10 | 1971-12-22 | ||
US3989812A (en) * | 1974-08-09 | 1976-11-02 | Smithkline Instruments, Inc. | Folic acid derivatives and use in radio-assay |
-
1976
- 1976-07-09 DE DE19762631046 patent/DE2631046A1/de not_active Withdrawn
- 1976-07-12 GB GB28951/76A patent/GB1552453A/en not_active Expired
- 1976-07-12 FR FR7621344A patent/FR2318173A1/fr active Granted
- 1976-07-12 IL IL50027A patent/IL50027A/xx unknown
- 1976-07-13 DD DD193827A patent/DD125941A5/xx unknown
- 1976-07-13 YU YU01725/76A patent/YU172576A/xx unknown
- 1976-07-13 LU LU75377A patent/LU75377A1/xx unknown
- 1976-07-13 CA CA256,851A patent/CA1083567A/en not_active Expired
- 1976-07-13 CH CH898276A patent/CH626891A5/it not_active IP Right Cessation
- 1976-07-14 US US05/705,012 patent/US4091203A/en not_active Expired - Lifetime
- 1976-07-14 DK DK317276A patent/DK317276A/da not_active Application Discontinuation
- 1976-07-14 AU AU15853/76A patent/AU511507B2/en not_active Expired
- 1976-07-14 SE SE7608064A patent/SE7608064L/xx not_active Application Discontinuation
- 1976-07-15 JP JP51083562A patent/JPS5210292A/ja active Pending
- 1976-07-15 NO NO762485A patent/NO144673C/no unknown
- 1976-07-15 NL NL7607877A patent/NL7607877A/xx not_active Application Discontinuation
-
1978
- 1978-02-22 US US05/880,133 patent/US4336188A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-02-14 IL IL56666A patent/IL56666A0/xx unknown
-
1983
- 1983-05-23 YU YU01138/83A patent/YU113883A/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU1585376A (en) | 1978-01-19 |
CA1083567A (en) | 1980-08-12 |
JPS5210292A (en) | 1977-01-26 |
NO762485L (no) | 1977-01-18 |
IL50027A0 (en) | 1976-09-30 |
NO144673C (no) | 1981-10-14 |
US4336188A (en) | 1982-06-22 |
GB1552453A (en) | 1979-09-12 |
IL56666A0 (en) | 1979-05-31 |
NL7607877A (nl) | 1977-01-18 |
FR2318173A1 (fr) | 1977-02-11 |
US4091203A (en) | 1978-05-23 |
CH626891A5 (no) | 1981-12-15 |
FR2318173B1 (no) | 1981-11-27 |
AU511507B2 (en) | 1980-08-21 |
YU113883A (en) | 1986-12-31 |
DK317276A (da) | 1977-01-16 |
IL50027A (en) | 1980-09-16 |
SE7608064L (sv) | 1977-01-16 |
YU172576A (en) | 1983-10-31 |
LU75377A1 (no) | 1977-02-25 |
DE2631046A1 (de) | 1977-01-20 |
DD125941A5 (no) | 1977-06-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO144673B (no) | Funksjonaliserte adeninderivater for anvendelse ved affinitetskromatografering og som ko-enzymer | |
Trayer et al. | Preparation of adenosine nucleotide derivatives suitable for affinity chromatography | |
Craven et al. | Affinity Chromatography on Immobilised Adenosine 5′‐monophosphate: 1. A New Synthesis and Some Properties of an N6‐Immobilised 5′‐AMP | |
CURTIUS et al. | Tetrahydrobiopterin biosynthesis: studies with specifically labeled (2H) NAD (P) H and 2H2O and of the enzymes involved | |
CA1220148A (en) | 9-(aminoalkyl)-8-hydroxyadenines and method of their preparation | |
Mosbach | [16] AMP and NAD as “general ligands” | |
Hevesi et al. | Reaction of sulfite with isoalloxazines | |
CN114605343A (zh) | 一种荧光基团LAN-OH、荧光传感器LAN-βgal及其制备方法和应用 | |
CS199583B2 (en) | Process for preparing derivatives of adenine | |
NO145013B (no) | Makromolekylaere adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller ko-enzymatiske reaksjoner | |
DK154670B (da) | Homogen, specifik bindings-analyse med en prostetisk gruppe som maerke samt reagenssystem til brug ved analysen | |
US4199498A (en) | Macromolecularized adenine derivatives | |
CN111689882B (zh) | 一种双断裂交联剂及其制备方法与应用 | |
CS202046B2 (cs) | Způsob přípravy funkcionalizovaných derivátů adeninu | |
Seela et al. | Agarose linked adenosine and guanosine-5′-monophosphate; a new general method for the coupling of ribonucleotides to polymers through their cis-diols | |
Czarnik et al. | Hexadeoxycycloheptaamylose-pyridoxamine, an artifical transaminase with a “deeper” binding pocket | |
Woenckhaus et al. | Preparations of holodehydrogenases by covalent fixation of NAD+-analogs to alcohol and lactate dehydrogenase | |
IE920836A1 (en) | Method for the chemical modification of proteins | |
US5399681A (en) | Method for preparing N6 -substituted NAD, NADP or FAD | |
Bruce et al. | Flavobacterium heparinum 3‐O‐sulphatase for N‐substituted glucosamine 3‐O‐sulphate | |
CN117736171B (zh) | 一种af488tsa的制备方法 | |
CN101759633A (zh) | N-连接糖链分析用试剂 | |
Wright et al. | Novel fluorescent labelled affinity probes for diadenosine-5′, 5‴-P1, P4-tetraphosphate (Ap4A)-binding studies | |
Carrico et al. | [12] ATP-Labeled ligands and firefly luciferase for monitoring specific protein-binding reactions | |
Soininen | Pseudomonas cytochrome c peroxidase. VI. Large scale purification procedure. |