NO143973B - Fremgangsmaate for kjemisk attenuering av trypanosoma cruzi - Google Patents
Fremgangsmaate for kjemisk attenuering av trypanosoma cruzi Download PDFInfo
- Publication number
- NO143973B NO143973B NO752208A NO752208A NO143973B NO 143973 B NO143973 B NO 143973B NO 752208 A NO752208 A NO 752208A NO 752208 A NO752208 A NO 752208A NO 143973 B NO143973 B NO 143973B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- trypanosomes
- concentration
- medium
- incubated
- chemical
- Prior art date
Links
- 241000223109 Trypanosoma cruzi Species 0.000 title claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 150000005053 phenanthridines Chemical class 0.000 claims description 12
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims description 8
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 13
- 206010001935 American trypanosomiasis Diseases 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 5
- 208000024699 Chagas disease Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 1-[(2r,4s,5s)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H]([14CH2]O)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-OYDXRQHMSA-N 0.000 description 2
- MQOKYEROIFEEBH-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-3,8-diamine;bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](C)=C1C1=CC=CC=C1 MQOKYEROIFEEBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- URSFPCGNENDEFB-UHFFFAOYSA-N 3-[2-(3-amino-5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-8-yl)iminohydrazinyl]benzenecarboximidamide;chloride;hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].C12=CC(N=NNC=3C=C(C=CC=3)C(N)=N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 URSFPCGNENDEFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XYJODUBPWNZLML-UHFFFAOYSA-N 5-ethyl-6-phenyl-6h-phenanthridine-3,8-diamine Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2N(CC)C1C1=CC=CC=C1 XYJODUBPWNZLML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGSMZVWKRNFDPJ-UHFFFAOYSA-M 5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium;bromide Chemical compound [Br-].C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 KGSMZVWKRNFDPJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QBMCSIIASWDDPU-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-6-phenyl-6h-phenanthridine-3,8-diamine Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2N(C)C1C1=CC=CC=C1 QBMCSIIASWDDPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KNIUHBNRWZGIQQ-UHFFFAOYSA-N 7-diethoxyphosphinothioyloxy-4-methylchromen-2-one Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(OP(=S)(OCC)OCC)=CC=C21 KNIUHBNRWZGIQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010004194 Bed bug infestation Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001414835 Cimicidae Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNZJTSGALAVCLH-UHFFFAOYSA-N Isometamidium chloride Chemical compound [Cl-].C12=CC(\N=N\NC=3C=C(C=CC=3)C(N)=N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 QNZJTSGALAVCLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 1
- ARFHIAQFJWUCFH-IZZDOVSWSA-N Nifurtimox Chemical compound CC1CS(=O)(=O)CCN1\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 ARFHIAQFJWUCFH-IZZDOVSWSA-N 0.000 description 1
- 208000009182 Parasitemia Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 241001414833 Triatoma Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000223107 Trypanosoma congolense Species 0.000 description 1
- 241000223099 Trypanosoma vivax Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229950004591 isometamidium chloride Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960002644 nifurtimox Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/002—Protozoa antigens
- A61K39/005—Trypanosoma antigens
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Feeding And Watering For Cattle Raising And Animal Husbandry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for
kjemisk attenuering av Trypanosoma cruzi ved å behandle levende trypanosomer med fenantridin-derivater med det formål ved full oppnåelse av deres immunologiske potens å utkoble deres patogenitet. Denne som kjemisk attenuering betegnede forholdsregel muliggjør å utvikle en vaksine, som også er anvendbar på mennesker.
Chagas-sykdommen gjelder som et av de store sunnhetsproblemer i Syd- og Mellom-Amerika. Den frembringes
ved en infeksjon av Trypanosoma. Antallet av de ekte infiserte på subkontinentet er omstridt, imidlertid vurderer Verdens Helseorganisasjon (WHO) 1960 tallet av infiserte til omtrent
7 millioner, de som er utsatt for en infeksjonsfare til ca.
35 millioner.
De for oppdemning av infeksjonen anvendte metoder er mangfoldige. I første rekke står vel arbeidet i overbærer-utrydning (rovveggedyr av slekten Triatoma) i befolknings-boliger, opplysning av befolkningen og sanering av boligmulig-hetene. Denne metode gjennomføres - understøttet av WHO - i mange land allerede med stort resultat. Et annet resultat ved bekjempelse av Chagas-sykdommen var innføring av kjemoterapeu-tikumet "Lampit" (varemerke for Farbenfabriken Bayer, Lever-kusen) , av et i mennesker høyvirksomt etiologisk stoff. Problematikken med kjemoterapien ligger imidlertid i opptreden av irreversible patologiske endringer, f.eks. på hjerte og andre hulorganer, mens infeksjonen ikke mer kan fjernes ved administrering av legemidler i en relativt sen fase av sykdommen. En imidlertid i bekjempelse av infeksjonene(Viral og bakteriell genese) generelt anvendt profylaktisk forholdsregel ,-applikasjonen av en vaksine, gjelder idag ennu som for-bundet med for stor risiko.
I en rekke arbeidsgrupper (f.eks. Kagan, Marsden, Nussenzweig, Menezes, Hungerer) kunne det riktignok vises at naturlig attenuerte kulturformer av T. cruzi etter injeksjon
,på mus beskytter disse mot en dødelig infeksjon med patogen trypanosom. Problematikken imidlertid er den i forskjellig grad påvisbare restpatogenitet av kulturformene.
En undertrykkelse av patogeniteten av T. cruzi beskrives av J. Emmett i j. Parasitol, 36(1950), 45-47. Han bestrålte ennu høyinfektøse kulturformer med røntgenstråler og fant at en bestråling på 100.000 røntgen riktignok lar trypanosomene leve, men ødelegger deres infektiositet. Slike bestrålte kulturformer immuniserer imidlertid ikke mere mus mot en patogen infeksjon (Chiari et al.. Rev.Inst.Med.trop., Sao Paulo, 10 (1968),131-137) .
De i beskrivelsen i DAS 1.234.930 refererte eksperimenter til kjemisk modifisering (f.eks. med formalin, hydroksylamin) av trypanosomer fører heller ikke til en vaksine.
En annen måte ble omtalt av Fernandes et al. i Expl. Parasit„18 (1966), 203-210. De inkuberte kultur- og blod-former med actinomycin D. Derved tapte trypanosomet deres
evne til å formere seg, deres immunogene potens bibeholdt seg imidlertid. En anvendelse av dette podningsstoff på mennesker umuliggjøres imidlertid fra begynnelsen på grunn av den høye toksisitet av actinomycin D.
Til grunn for oppfinnelsen ligger den oppgave å tilveiebringe et immunologisk virksomt stoff overfor Chagas-sykdommen, som ved blokkering av restpatogeniteten av kulturformer er uskadelig for menneskene, men bibeholder dens fulle immunologiske protektive virkning. Det for attenuering anvendte stoff selv bør i de i vaksinen foreliggende konsentra-sjoner være helt utoksiske for mennesker. Dette stoff ble • overraskende funnet i representanter for klassen av fenantri-diner.
Fenantridin ble syntetisert allerede i 1938 og undersøkt med hensyn på deres terapeutiske virkning overfor (Trypanosoma congolense og Trypanosoma vivax. 1946 viste Browning et al. i Nature (London- 157 (1946), 262-264 også en kjemoterapeutisk virkning overfor T. cruzi på mus. Deretter fremkom en rekke av arbeider f.eks. fra .Riou og medarbeidere.i Acad.Sc.Paris (D), 268 (1969), 1327-1330 over virkningsmekanismen iav 3,8-di-amino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid på T. cruzi.
Det ble nå funnet at en inkubasjon-av trypanosomer med fenantridin-derivater endrer vitaliteten og infektio-siteten således at mus etter injeksjon med slike behandlede trypanosomer ikke undergår patogen infeksjon, men utfolder en full immunbeskyttelse.
Oppfinnelsens gjenstand er en fremgangsmåte for kjemisk attenuering av Trypanosoma cruzi, idet fremgangsmåten er karakterisert ved at i et en-faset,vandig,flytende kulturmedium suspenderte trypanosomer som foreligger i en konsentrasjon på 10 -3 -10 Q/ml inkuberes 1-120 timer ved 18-37 C med et fenantridinderivat som foreligger i en konsentrasjon på 0,5-1000 y/ ml til tap av deres patogenitet og de på denne måte attenuerte trypanosomer utvinnes deretter.
Som fenantridin-derivater egner det seg alle fysiologisk tålbare representanter for denne stoffklasse. Spesielt egnet er slike derivater som i 3- og 8-stilling er substituert med aminogrupper, i 6-stilling med en fenylrest og i 5-stilling med en lavere alkylgruppe. Som eksempler på slike forbindelser skal nevnes 3,8-diamino-5-metyl-6-fenyl-fenantridin, isometamidin og 3,8-diamino-5-etyl-6-fenyl-fenantridin. Da fenantridinderivatene generelt er dårlig oppløse-lig i vann lønner det seg å anvende dem ifølge oppfinnelsen i form av deres vannoppløselige salter. Som syrer for salt-dannelsen egner det seg alle organiske og fremfor alt uorganiske syrer, som har fysiologisk tålbare anioner og som med fenantridin-derivatene danner vannoppløselige salter. Spesielt egnet innen oppfinnelsens ramme er salter av fenantridin-derivater med halogenhydrogensyrer som klorhydrogensyre eller bromhydrogensyre. Eksempler på egnede salter er 3,8-diamino-5- metyl-6-fenyl-fenantridinium-bromid ("Dimidiumbromid") , iso-metamidiumklorid ("Samorin") og spesielt 3,8-diamino-5-etyl-6- fenyl-fenantridiniumbromid ("Ethidiumbromid"). Fenantridinderivatene resp. deres salter anvendes i en konsentrasjon som på den ene side er stor nok til ved trypanosomer å bevirke den ønskede kjemiske attenuering, som på den annen side ikke er så stor at trypanosomene beska-diges uheldig. Det har vist seg egnet en konsentrasjon på 0,5-'1000 y/ ml, fortrinnsvis 5-100 y/ ml.
Trypanosomene underkastes fortrinnsvis i en
3 8
konsentrasjon på 10 til 10 trypanosomer pr. ml av behandlingen ifølge oppfinnelsen. Spesielt fordelaktig trypanosom-
konsentrasjon.er 1-5 x 10 7 trypanosomer/ml. Trypanosomene suspenderes i denne konsentrasjon i et flytende kulturmedium som er egnet til fullstendig å underholde disse organismers stoffskifte. Som kulturmedium egner det seg alle for holding av trypanosomer egnede medier. Avgjørende er at kulturmediet er mest mulig fattig resp. sogar fritt for anti-gen-determinanter. Denne forutsetning oppfylles spesielt av proteinfrie medier. Som eksempler for egnede kulturmedier skal det nevnes lever-infusjon-tryptose-medium (LIT,ifølge E.P. Camargo, Rev.Inst.Med.trop., Sao Paulo, 6 (1964)/ 93-100), videre proteinfrie, kjemisk definerte medier, slik de eksempelvis omtales av Morgan, Morton og Parker i Proe.Soc.Exp.Biol. Med., 73 (1950), 1-8, Salk, Younger og Ward i Am. J.Hyg., 60 (1954), 214-230 eller Parker, Castor og McCulloch i Special Publi-cations, N.Y. Acad.Sci., 5 (1957), 303-313.
Behandlingen av de i kulturmediet suspenderte trypanosomer med et fenantridinderivat resp.- dets salt strekker seg over en tid fra ca. 1-120, fortrinnsvis 20-48 timer. Temperaturen utgjør ca. 18-37°C, fortrinnsvis 25-33°C. 1 Tilsvarende generelt kjente kjemiske lover er behandlings-tidene å utvide desto lenger jo lavere temperaturen er. Følgelig er det innen rammen av det ovennevnte de kortere behandlingstider og tilordner de høyere temperaturer og de lengere behandlingstider de lavere temperaturer.
Etter behandlingen adskilles trypanosomene fra kulturmediet. Dette kan foregå ved dekantering, filtrering eller hensiktsmessig ved sentrifugering. Hvis det tilstrebes fremstilling av et podningsstoff kan de således utvunne trypanosomer suspenderes i en egnet fysiologisk tålbar oppløsning 'igjen i den for et podningsstoff egnet konsentrasjon.
I de følgende omtalte forsøk skal det vises at de ifølge oppfinnelsen behandlede trypanosomer taper deres formeringsevne og deres patogenitet og følgelig er egnet for fremstilling av en vaksine mot Chagas-sykdommen.
Ved alle nedenfor anførte eksperimenter må medier og apparater håndteres under strengt sterile betingelser.
Påvisningen av den irreversible formeringsstans ved behandling ifølge oppfinnelsen foregår eksempelvis etter følgende metode!
Epimastigote kulturformer av T. cruzi, stamme Brasil, dyrkes på difasisk blodagar (modifisert ifølge Senekjie, Am.J.Trop.Med., 23(1943), 523-431) (4-5dager ved 28°C). Den flytende fase med trypanosomene filtreres gjennom steril gas. Suspensjonen sentrifugeres 20 minutter ved 5000 x g og sedimentet vaskes to ganger med fysiologisk koksaltoppløsning. Trypanosomene opptas i et fortynnet medium ifølge Parker et al., Special Publications, N.Y. Acad,Sei 5 (1957), 303-313 , til en tetthet på 2 x 10<7>/ml. 3 prøver å 2,5 ml blandes med Økende mengde 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid (hver
; gang 5 y/ml, 10 y/ ml, 100 y/ ml). Tre prøver behandles med "tiocid" 1:10.000, som utrydder trypanosomene i denne konsentrasjon men opprettholderden ytre form, og tre prøver bibeholdes ubehandlet. Alle blandinger inkuberes 24 timer ved 28°C, sentrifugeres deretter 20 minutter ved 5000 x g og sedimentet i opptas i 2,5 ml av 1:10 fortynnet medium ifølge Parker et al., Special Publications, N.Y. Acad.Sei5 (1957), 303-313. Alle prøver blandes med radioaktivt 14c-tymidin (0,2 yC) og inkuberes 24 timer ved 28°C. Deretter adskilles trypanosomene over et Sartoriusfilter og vaskes tre ganger med fysiologisk koksalt-
; oppløsning. Prøvenes radioaktivitet vurderes kvantitativt.
Hemmingen av innbygning av 14c-thymidin i trypanosomene er et mål for hindring av formeringsevnen.
Som ovennevnte tabell viser, har de ifølge oppfinnelsen behandlede trypanosomer helt eller delvis tapt sin formeringsevne.
Påvisningen av tapet av patogenitet etter inkubasjon med 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid kan eksempelvis gjennomføres på følgende måte:
A. I hjertecellekulturer
30 hjerter av ikke-infiserte,voksne inavls-
mus (Stamme NMRI), vekt av en mus omtrent 20 g, uttas under strengt sterile betingelser, opptas i 5 ml fosfatpufret kok-saltoppløsning pH 7,4 (PBS 7,4) og knuses mekanisk, idet blodige og hvite bindevevsstykker kasseres. Hjertehomoge-
natet overføres i en trypsineringskolbe og oppfylles med 20-30 ml PBS 7,4. Suspensjonen oppvirvles hurtig og kraftig på magnet-rører, etter kort avsetning avdekanteres det ovenstående sammen med deri befinnende erytrozyter. Residuet omrøres under tilsetning av 20 ml av en trypsinoppløsning (97 ml PBS 7,4, 3 ml 5%-ig natriumbikarbonat, 0,25% trypsin) ved 35°C i 10 min. Etter kort avsetning avdekanteres det ovenstående. Residuet trypsineres ytterligere 6-7 ganger. Det avdekanterte ovenstående sentrifugeres (400 x g, 10 min.), sedimentene opptas i 75 ml av følgende oppløsning, som videre betegnes som Dul-beccos bruksmedium:
20 % føtalt kalveserum
10% "Dulbeccos", Fabriken Biocult Lab., Glasgow
7% natriumbikarbonat
2% glutamin
0,5 % penicillin/streptomycin
oppfylt til 100% med Aqua bidest.
3 ml av suspensjonen av hjertecelle-vevet overføres i smårør, såkalte Leightonrør, som er forsynt med små dekkglass 13 x 54 mm. De med silikonkorker lukkede rør inkuberes ved 37°C. Etter 24 timer har det dannet seg et cellelag (Monolayer).
Inavlsmus av stammen NMRI, som omtrent 12 dager
på forhånd- er blitt infisert subkutant med T.cruzi, stamme Brasil, blodtappes sterilt og blodet samles i citratpuffer. Det fortynnes med Dulbeccos bruksmedium, således at det oppstår en sluttkonsentrasjon på 1,5 x IO<6> trypanosomer/ml. Trypanosomsus-pensjonen halveres og den ene halvdel innstilles med 3,8-diamino-
5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid på lOy/ml. De to blandinger inkuberes 24 timer ved 28°C. Deretter frasentrifugeres trypanosomene og opptas i frisk Dulbeccos bruksmedium (1/5 x 10^/ml).
Etter fjerning.av mediet fra cellekulturene har man hver gang 3 ml av trypanosom-suspensjonen (4,5 x 10^ totalt) i Leighton-rørene og inkuberer ved 33°C i 72 timer. Deretter veksles mediet og inkuberes ytterligere 48 timer.
De i Leighton-tubene befinnende med celle lag bevokste dekkglass farves.
i Resultat: Cellene som ble inkubert med ubehandlede trypanosomer er - som det mikroskopiske bildet viser - infisert mellom 40 og 70%. Cellene som imidlertid ble inkubert med trypanosomer, som var forbe-handlet med 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantri-diniumbromid er ikke infiserte.
B. På mus.
NMRI-mus som omtrent 10 dager på forhånd var infisert med 5 x 10 4 trypanosomer av stammen Brasil pr. mus, ble under sterkt sterile betingelser blodtappet i nærvær av heparin 3 (gjennomsnittskonsentrasjon 50-200 x 10^/ml). Suspensjonen innstilles med mediet ifølge Parker et al. (Special Publications, N.Y. Acad.sei., 5 (1957),303-313) til 2 x 10<6>/ml og halveres. Den ene halvdel blandes med 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantridinium-bromid (sluttkonsentrasjon 10 y/ ml). Begge suspensjoner inkube-5 res ved 37°C i 24 timer. De således inkuberte suspensjoner appliseres subkutant (0,5 ml/dyr= 1 x 10 trypanosomer/dyr) på mus (12-14 g). Sykdomsforløpet følges ved hjelp av vekt, para-sitemi og dyrenes død.
Resultat:
x) 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid.
<15>De ifølge oppfinnelsen behandlede trypanosomer har som nedenfor bevises - immuniserende egenskaper.
Påvisningen av dannelsen av en beskyttende immunitet kan eksempelvis gjennomføres som følger: 2 grupper av mus inokuleres med trypanosomer (epimastigot form). Gruppe A, 10 mus får hver 0,5 ml subkutant kulturformer (5 x 10 7/dyr), gruppe B, 10 mus, kulturformer, som er blitt behandlet ifølge oppfinnelsen ifølge eksemplet (5 x 10 7/dyr), gruppe C, 10 mus, 0,5 ml kokesalt. Etter 21 dager infiseres alle dyr med patogene trypanosomer stamme Brasil (1 x 10^/dyr subkutant).
Resultat: Dyrene fra gruppe A og B overlever til 100% minst 100 dager etter infeksjonen, kontrolldyrene av gruppe C dør alle i løpet av 10. til 15. dag etter infeksjon.
Dermed er det vist at en parenteral administrering av ifølge oppfinnelsen attenuerte trypanosomer formår å beskytte mot en dødelig infeksjon av trypanosomer.
Fremstilling av en vaksine, som som virksomt prinsipp inneholder suspensjonen av trypanosomene ifølge oppfinnelsen i et fysiologisk tålbart vandig medium lar seg utføre på den for fagfolk kjente måte, fortrinnsvis under stabilisering av trypanosomene med beskyttelseskolloider, eksempelvis med proteiner som albumin eller polysakkarider som dekstran.
Oppfinnelsen skal forklares ved hjelp av følgende eksempel.
Eksempel.
Behandling av kulturformer av T. cruzi med 3,8-diamino-5-etyJ.-6-fenylantridiniumbromid.
Alle apparater og medier må håndteres under strengt sterile betingelser.
Utgangsmaterialet er suspensjonen av T. cruzi i den flytende fase av en blodagar-kultur. De 5 dager gamle kulturer dekanteres gjennom steril gas i en målesylinder og i et Thoma-kammer bestemmes konsentrasjonen avtrypanosomer i ut-gangssuspensjonen. I eksemplet er det 25 x 10^ trypanosomer/ml i 75 ml, hvilket tilsvarer en totalmengde på 1.8 x 10 q. Suspensjonen overføres i et 250 ml sentrifugebeger med skrulokk (Sorvall USA, Rotor GSA, polykarbonatflasker, plastikktetnings-lokk med 0-ringer) og sentrifugeres 20 minutter ved ^°C i en Sorvall RC-2-B ved ^500 omdreininger pr. minutt (= 3300 x g). Det overstående avdekanteres. Sedimentet resuspenderes i 100 ml fysiologisk NaCl og sentrifugeres igjen under samme betingelser. Det overstående avdekanteres og sedimentet suspenderes i et medium av følgende sammensetning i sentrifugebegeret.
Videre uorganiske salter og andre bestanddeler:
pH 7,2
i det følgende kalt "medium".
Ved tilsetning av 85 ml medium og 5 ml av en gjennom et milliporefilter (0,2 u porestørrelse) steril fil-trert oppløsning av 0,9 ml 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenan-tridiniumbromid i medium (sluttkonsentrasjon 10 y/ml i 90 ml) oppstår en suspensjon av 2 x 10 trypanosomer/ml. Denne suspensjon inkuberes 24 timer ved 28°C i et dyrkningsskap. Etter 24 timer sentrifugeres igjen ved 4500 omdreininger/min. i Sorvall-sentrifuge ved 4°C. Det ovenstående kasseres og sedimentet opptas i 18 ml medium.
Den dannede sluttkonsentrasjon på 1 x 10 g trypanosomer/ml er eksempelvis egnet til immunisering av mus.
Claims (3)
1. Fremgangsmåte for kjemisk attenuering av Trypanosoma cruzi, karakterisert ved at i et en-faset, vandig, flytende kulturmedium suspenderte trypanosomer som foreligger i en konsentrasjon på 103 -10 8/ml inkuberes 1-120 timer ved 18-37°C med et fenantridinderivat som foreligger i en konsentrasjon på 0,5-1000 y/ ml til tap av deres patogenitet og de på denne måte attenuerte trypanosomer utvinnes deretter.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som fenantridin-derivat anvendes 3,8-diamino-5-etyl-6-fenylfenantridiniumbromid.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1-2, karakterisert ved at kulturmediet er proteinfritt.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2430380A DE2430380C3 (de) | 1974-06-25 | 1974-06-25 | Herstellung eines Stoffes mit immunologischer Wirkung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO752208L NO752208L (no) | 1975-12-30 |
| NO143973B true NO143973B (no) | 1981-02-09 |
| NO143973C NO143973C (no) | 1981-05-20 |
Family
ID=5918871
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO752208A NO143973C (no) | 1974-06-25 | 1975-06-20 | Fremgangsmaate for kjemisk attenuering av trypanosoma cruzi |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4024242A (no) |
| JP (1) | JPS5843370B2 (no) |
| AR (1) | AR205205A1 (no) |
| AT (1) | AT339475B (no) |
| BE (1) | BE830640A (no) |
| CA (1) | CA1052695A (no) |
| CH (1) | CH625706A5 (no) |
| CU (1) | CU34292A (no) |
| DE (1) | DE2430380C3 (no) |
| DK (1) | DK139161C (no) |
| FR (1) | FR2276061A1 (no) |
| GB (1) | GB1517011A (no) |
| IE (1) | IE41298B1 (no) |
| IL (1) | IL47509A (no) |
| LU (1) | LU72801A1 (no) |
| NL (1) | NL7507389A (no) |
| NO (1) | NO143973C (no) |
| SE (1) | SE422153B (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2556386C2 (de) * | 1975-12-15 | 1985-02-28 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung von Druckformen und/oder metallisierten Bildern |
| FR2489934B1 (fr) * | 1980-09-05 | 1985-06-07 | Feudor Sa | Briquet a gaz jetable |
| WO1983003199A1 (en) * | 1982-03-18 | 1983-09-29 | Boon, Thierry | Method for obtaining reduced infectivity variants from protozoan parasites, thus obtained variants and utilization thereof |
| JPS59171666U (ja) * | 1983-05-02 | 1984-11-16 | 信越化学工業株式会社 | 携帯用塵取具 |
| JPS602459U (ja) * | 1983-06-14 | 1985-01-10 | 仲 芙佐子 | クリ−ナ− |
| JPS6159066U (no) * | 1984-09-20 | 1986-04-21 | ||
| FR2846009B1 (fr) * | 2002-10-18 | 2007-10-12 | Centre Nat Rech Scient | Criblage de molecules a activite anti-prion:kits, methodes et molecules criblees |
| FR2846008B1 (fr) * | 2002-10-18 | 2006-06-02 | Centre Nat Rech Scient | Criblage de molecules a activite anti-prion:kits, methodes et molecules criblees |
-
1974
- 1974-06-25 DE DE2430380A patent/DE2430380C3/de not_active Expired
-
1975
- 1975-01-01 AR AR259303A patent/AR205205A1/es active
- 1975-06-18 IL IL47509A patent/IL47509A/xx unknown
- 1975-06-20 CU CU34292A patent/CU34292A/es unknown
- 1975-06-20 NO NO752208A patent/NO143973C/no unknown
- 1975-06-20 NL NL7507389A patent/NL7507389A/xx not_active Application Discontinuation
- 1975-06-23 US US05/589,082 patent/US4024242A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-06-23 CA CA229,888A patent/CA1052695A/en not_active Expired
- 1975-06-23 CH CH814475A patent/CH625706A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-06-23 SE SE7507203A patent/SE422153B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-06-24 JP JP50079218A patent/JPS5843370B2/ja not_active Expired
- 1975-06-24 DK DK287275A patent/DK139161C/da not_active IP Right Cessation
- 1975-06-24 LU LU72801A patent/LU72801A1/xx unknown
- 1975-06-24 IE IE1402/75A patent/IE41298B1/xx unknown
- 1975-06-24 AT AT483575A patent/AT339475B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-06-25 FR FR7519858A patent/FR2276061A1/fr active Granted
- 1975-06-25 BE BE157682A patent/BE830640A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-06-25 GB GB26941/75A patent/GB1517011A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATA483575A (de) | 1977-02-15 |
| NO143973C (no) | 1981-05-20 |
| FR2276061A1 (fr) | 1976-01-23 |
| AR205205A1 (es) | 1976-04-12 |
| DK287275A (da) | 1975-12-26 |
| DE2430380B2 (de) | 1979-08-30 |
| JPS5843370B2 (ja) | 1983-09-27 |
| CH625706A5 (no) | 1981-10-15 |
| AT339475B (de) | 1977-10-25 |
| CU34292A (no) | 1977-03-08 |
| DE2430380C3 (de) | 1980-04-30 |
| DK139161B (da) | 1979-01-02 |
| DK139161C (da) | 1979-06-25 |
| DE2430380A1 (de) | 1976-01-15 |
| US4024242A (en) | 1977-05-17 |
| SE422153B (sv) | 1982-02-22 |
| FR2276061B1 (no) | 1978-11-10 |
| NO752208L (no) | 1975-12-30 |
| IL47509A (en) | 1979-01-31 |
| GB1517011A (en) | 1978-07-05 |
| CA1052695A (en) | 1979-04-17 |
| NL7507389A (nl) | 1975-12-30 |
| SE7507203L (sv) | 1975-12-29 |
| BE830640A (fr) | 1975-12-29 |
| AU8238975A (en) | 1977-01-06 |
| JPS5126219A (no) | 1976-03-04 |
| IL47509A0 (en) | 1975-08-31 |
| IE41298L (en) | 1975-12-25 |
| IE41298B1 (en) | 1979-12-05 |
| LU72801A1 (no) | 1977-03-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jones et al. | The interaction between Toxoplasma gondii and mammalian cells: I. Mechanism of entry and intracellular fate of the parasite | |
| US4197290A (en) | Vaccine | |
| CN102166350B (zh) | 鲆鲽鱼类五联灭活疫苗及其制备方法 | |
| NO143973B (no) | Fremgangsmaate for kjemisk attenuering av trypanosoma cruzi | |
| Desowitz et al. | Effect of selenium and dimethyl dioctadecyl ammonium bromide on the vaccine-induced immunity of Swiss-Webster mice against malaria (Plasmodium berghei) | |
| Horowitz et al. | Inhibition of the Salmonella typhi oral vaccine strain, Ty21a, by mefloquine and chloroquine | |
| US7302913B2 (en) | Vaccine against salmonid rickettsial septicaemia based on arthrobacter cells | |
| RU2106878C1 (ru) | Способ лечения вич-инфекции | |
| JPH11511735A (ja) | 非細胞性（Ａｃｅｌｌｕｌａｒ）百日咳ワクチン及びその調製方法 | |
| Kierszenbaum | Chagas’ disease | |
| WO1983003354A1 (en) | Neisseria gonorrhoeae vaccine | |
| Gadebusch | Specific Degradation of Cryptococcus neoformans 3723 Capsular Polysaccharide by a Microbial Enzyme: III. Antibody Stimulation by Partially Decapsulated Cells | |
| CN100571774C (zh) | 伤寒、副伤寒外膜蛋白疫苗 | |
| NZ206083A (en) | Cattle vaccine against moraxella bovis | |
| Domer | In vivo and in virto cellular responses to cytoplasmic and cell wall antigens of Histoplasma capsulatum in artificially immunized or infected guinea pigs | |
| Murphy et al. | Host defenses in murine malaria: induction of a protracted state of immunity with a formalin-killed Plasmodium berghei blood parasite vaccine | |
| NO310598B1 (no) | Middel og blanding for anvendelse som medikament, fremgangsmåte for fremstilling av middel, samt antistoffer | |
| Kahan et al. | Specific immunoprotection with 3 M KCI solubilized tumor antigen | |
| Coggin Jr et al. | Differential extraction of tumor-specific transplantation antigen and embryonic antigen from Simian virus 40-and adenovirus 7-induced sarcoma cells of hamsters with 1-butanol and 3 M potassium chloride | |
| ES2308987T5 (es) | Vacuna para peces | |
| KR0143925B1 (ko) | 일본뇌염백신의 제조방법 | |
| Khusmith et al. | ANTIGENIC DISPARITY OF PLASMODIUM JZIJAX CAUSING INITIAL SYMPTOMS AND CAUSING RELAPSE | |
| RU2065308C1 (ru) | Способ специфической профилактики мелиоидоза | |
| Osuna et al. | A protein secreted by Trypanosoma cruzi capable of inducing the entry of inert particles into HeLa cells | |
| KR0153085B1 (ko) | 일본뇌염-유행성출혈열 혼합백신 |