NO126364B

NO126364B -

Info

Publication number: NO126364B
Application number: NO00165548A
Authority: NO
Inventors: Beat Iselin; Heini Kappeler; Bernhard Riniker; Werner Rittel
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1965-11-12
Filing date: 1966-11-11
Publication date: 1973-01-29
Also published as: DE1543502A1; BR6684474D0; DE1543502B2; GB1164618A; NL149156B; FI47759C; SE357556B; CS158191B2; FR6134M; BE689574A; NL6615964A; JPS4837031B1; OA104E; FI47759B

Description

Tillegg til patent nr. 124.831Addendum to patent no. 124,831

I patent nr. 124.831 er det beskrevet peptider somIn patent no. 124,831 peptides are described which

utmerker seg ved en forsterket ACTH-virkning og som adskiller seg fra de kjente peptider med ACTH-virkning ved at de ved aminoenden som første a-aminosyre har en D-aminosyre. are distinguished by an enhanced ACTH effect and which differ from the known peptides with ACTH effect in that they have a D-amino acid at the amino end as the first α-amino acid.

Som peptid med meget god ACTH-virkning er det iAs a peptide with a very good ACTH effect, it is i

hovedpatentet omtalt H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-the main patent mentioned H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-

] 1-24 Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH (D-Ser -g cortikotropin). ] 1-24 Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH (D-Ser -g corticotropin).

Det er nå blitt funnet at det.tilsvarende peptidIt has now been found that the corresponding peptide

som i stedet for argininrestene i 17,18-stilling inneholder lysin-which instead of the arginine residues in the 17,18 position contain lysine-

rester, har en omtrent like god adrenokorticotrop virkning. Det nyeresidues, have an approximately equally good adrenocorticotropic effect. The new

11718 12^ 11718 12^

peptid, D-Ser , Lys ' -$ -corticotropin, lar seg fremstillepeptide, D-Ser , Lys ' -$ -corticotropin, can be prepared

lettere enn D-Ser -3 -corticotropin, •fordi det ikke inneholder argininrestene i stillingene 17,18, som på grunn av guanidinogruppene i sidekjeden vanskeliggjør peptidets fremstilling. easier than D-Ser -3 -corticotropin, •because it does not contain the arginine residues in positions 17,18, which, due to the guanidino groups in the side chain, make the peptide's production difficult.

Oppfinnelsen vedrører altså en fremgangsmåte til fremstilling av nye peptider med øket og/eller forlenget ACTH-virkning, og med formel D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-metionyl-L-glutamyl (eller L-glutaminyl)-L-histidyl-L-fenylalanyl-L-arginyl-L-tryptofyl-glycyl-L-lysyl-L-propyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin eller deres C-terminale amider og deres syreaddisjonssalter og komplekser. The invention thus relates to a method for the production of new peptides with increased and/or prolonged ACTH action, and with the formula D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl (or L-glutaminyl)-L -histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyll-glycyl-L-lysyl-L-propyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl -L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-proline or their C-terminal amides and their acid addition salts and complexes.

Som syreaddisjonssalter skal det spesielt nevnes salter av terapeutisk anvendbare syrer, -som saltsyre, eddiksyre, fremfor alt imidlertid tungtoppløselige salter, som sulfater, fosfater eller sulfonater. As acid addition salts, special mention must be made of salts of therapeutically applicable acids, such as hydrochloric acid, acetic acid, above all, however, poorly soluble salts, such as sulfates, phosphates or sulfonates.

Med komplekser er det å forstå de komplekslignende i deres struktur ennu ikke avklarede forbindelser som oppstår ved tilsetning av visse uorganiske eller organiske stoffer til adrenocor-ticotrop virksomme peptider og fremfor alt de som gir dem en forlenget virkning. Slike uorganiske stoffer er forbindelser som av-leder seg fra metaller som kalsium, magnesium, aluminium, kobolt og spesielt fra sink, fremfor alt tungtoppløselige salter, som fosfater og pyrofosfater, såvel som hydroksyder av disse metaller. Organiske stoffer som bevirker en forlengelse av virkningen, er eksempelvis ikke antigene gelatiner, f.eks. oksypolygelatiner, polyvinylpyrrolidon og karboksymetylcellulose, videre sulfonsyre- eller fosforsyreestere av alginsyre, dextrin, polyfenoler og polyalkoholer, fremfor alt polyfloretinfosfat og fytinsyre, såvel som polymerisater og kopolymerisater av aminosyrer, f.eks. protamin og spesielt av aminosyrer som har en overveiende del av sure a-aminosyrer, som glutaminsyre eller asparaginsyre. Complexes are to be understood the complex-like in their structure not yet clarified compounds that arise from the addition of certain inorganic or organic substances to adrenocorticotropic active peptides and above all those that give them a prolonged effect. Such inorganic substances are compounds which derive from metals such as calcium, magnesium, aluminium, cobalt and especially from zinc, above all sparingly soluble salts, such as phosphates and pyrophosphates, as well as hydroxides of these metals. Organic substances which cause a prolongation of the effect are, for example, non-antigenic gelatins, e.g. oxypolygelatins, polyvinylpyrrolidone and carboxymethylcellulose, further sulphonic acid or phosphoric acid esters of alginic acid, dextrin, polyphenols and polyalcohols, above all polyphloretin phosphate and phytic acid, as well as polymers and copolymers of amino acids, e.g. protamine and especially of amino acids that have a predominant proportion of acidic α-amino acids, such as glutamic acid or aspartic acid.

De nye forbindelser har som allerede nevnt en ves-entlig sterkere ACTH-aktivitet enn de tilsvarende forbindelser med L-konfigurasjon ved første'aminosyre. De skal følgelig anvendes i human- og veterinærmedisin, f.eks. i stedet for det naturlige hormon. As already mentioned, the new compounds have a substantially stronger ACTH activity than the corresponding compounds with L-configuration at the first amino acid. They must therefore be used in human and veterinary medicine, e.g. instead of the natural hormone.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen erkarakterisertved at aminosyrene D-serin, L-tyrosin, L-serin, L-metionin, L-glutaminsyre (eller L-glutamin), L-histidin, L-fenylalanin, L-arginin, L-tryptofan, glycin, L-lysin, L-prolin, L-valin, glycin, L-lysin, L-lysin, L-lysin, L-lysin, L-prolin, L-valin, L-lysin, L-valin,L-tyrosin, L-prolin eller L-prolinamid og/eller peptidbruddstykker som inneholder disse aminosyrer i ønsket rekkefølge., eventuelt i form av reaktive derivater av aminosyrene og/eller peptidbrostykkene, kondenseres under anvendelse av innen peptidkjemien kjente metoder og under intermediær beskyttelse av reaktive grupper til det angitte peptid eller peptidamid, som deretter, hvis ønsket, overføres i terapeutisk anvendbare syreaddisjonssalter eller komplekser. The method according to the invention is characterized in that the amino acids D-serine, L-tyrosine, L-serine, L-methionine, L-glutamic acid (or L-glutamine), L-histidine, L-phenylalanine, L-arginine, L-tryptophan, glycine, L-lysine, L-proline, L-valine, glycine, L-lysine, L-lysine, L-lysine, L-lysine, L-proline, L-valine, L-lysine, L-valine, L-tyrosine, L-proline or L-prolinamide and/or peptide fragments containing these amino acids in the desired order, optionally in the form of reactive derivatives of the amino acids and/or peptide bridge fragments, are condensed using methods known in peptide chemistry and under intermediate protection of reactive groups to the indicated peptide or peptidamide, which are then, if desired, transferred into therapeutically useful acid addition salts or complexes.

Sammenknytningen av aminosyre- og/eller peptidenhet-ene foregår således at man omsetter en aminosyre eller et peptid med beskyttet a-aminogruppe og aktivert terminal karboksylgruppe med en aminosyre eller et peptid med frie a-aminogrupper og frie eller beskyttet, f.eks. forestret eller amidert terminal karboksylgruppe, eller at man omsetter en aminosyre eller et peptid med aktivert a-aminogruppe og beskyttet terminal karboksylgruppe med en aminosyre eller et peptid med fri terminal karboksylgruppe og beskyttet a-aminogruppe. Karboksylgruppen kan eksempelvis aktiveres ved overføring i et syrehalogenid, -azid, -anhydrid, -imidazolid, isoksazolid eller en aktivert ester, som cyanmetylester, karboksymetylester, p-nitro-fenylester, eller ved reaksjon ved hjelp av et karbodiimid (eventuelt under tilsetning av N-hydroksysuccinimid) eller N,N'-karbonyl-diimidazol, aminogruppen aktiviseres eksempelvis ved reaksjon med et fosfatamid. Som vanlige metoder kan det nevnes karbodiimidmetoden, azidmetoden, metoden av aktivert ester og anhydridmetoden. Det skal også fremheves den såkalte faststoffbæresyntesen, hvor peptidet opp-bygges fra karboksylenden, som er bundet esteraktig til en polymer, idet man påkondenserer aminosyrene i rekkefølge. The linking of the amino acid and/or peptide units takes place in such a way that one reacts an amino acid or a peptide with a protected α-amino group and activated terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with free α-amino groups and free or protected, e.g. esterified or amidated terminal carboxyl group, or that one reacts an amino acid or a peptide with an activated α-amino group and protected terminal carboxyl group with an amino acid or a peptide with a free terminal carboxyl group and protected α-amino group. The carboxyl group can, for example, be activated by transfer into an acid halide, -azide, -anhydride, -imidazolide, isoxazolide or an activated ester, such as cyanomethyl ester, carboxymethyl ester, p-nitro-phenyl ester, or by reaction using a carbodiimide (possibly with the addition of N -hydroxysuccinimide) or N,N'-carbonyl-diimidazole, the amino group is activated, for example, by reaction with a phosphatamide. Common methods include the carbodiimide method, the azide method, the activated ester method and the anhydride method. Emphasis should also be placed on the so-called solid carrier synthesis, where the peptide is built up from the carboxyl end, which is bound in an ester-like manner to a polymer, by condensing the amino acids in sequence.

I reaksjonen ikke deltagende, frie, funksjonelle grupper beskyttes spesielt ved hjelp av ved hydrolyse eller reduksjon lett avspaltbare rester, karboksylgruppen fortrinnsvis ved forestring, f.eks. med metanol, tert.-butanol, benzylalkohol, p-nitrogenzylalko-hol, eller amiddannelsen, aminogruppen eksempelvis ved innføring av tosyl-, trityl-, formyl-, trifluoracetyl-, o-nitrofenyl-sulfenyl-, ftalyl- eller karbobenzoksygruppen eller farvede beskyttelsesgrupper som p-fenyl-azo-benzyloksykarbonylgruppen eller p-(p'-metoksy-fenyl-azo)-benzyloksykarbonylgruppen, eller spesielt av tert.-butyloksykar-bonylresten. Til beskyttelsen av aminogruppen i argininets guanido-gruppering er nitrogruppen egnet; den nevnte aminogruppe av arginin må imidlertid ikke nødvendigvis beskyttes ved reaksjonen. Histidin-ets iminogruppe kan beskyttes ved hjelp av benzyl- eller tritylresten. Free functional groups not participating in the reaction are protected in particular by means of residues that can be easily split off by hydrolysis or reduction, the carboxyl group preferably by esterification, e.g. with methanol, tert.-butanol, benzyl alcohol, p-nitrogenyl alcohol, or the amide formation, the amino group, for example by introducing the tosyl, trityl, formyl, trifluoroacetyl, o-nitrophenyl-sulfenyl, phthalyl or carbobenzoxy group or colored protecting groups such as the p-phenyl-azo-benzyloxycarbonyl group or the p-(p'-methoxy-phenyl-azo)-benzyloxycarbonyl group, or especially of the tert-butyloxycarbonyl residue. For the protection of the amino group in the arginine's guanido grouping, the nitro group is suitable; however, the said amino group of arginine does not necessarily have to be protected in the reaction. The histidine's imino group can be protected by means of the benzyl or trityl residue.

Omdannelsen av en beskyttet amino- eller iminogruppe til en fri gruppe, såvel som overføringen av en funksjonell modifisert karboksylgruppe i en fri 'karboksylgruppe under fremgangsmåteforløpet foregår etter i og for seg kjente metoder ved behandling med hydro-lyserende resp. reduserende midler. The conversion of a protected amino or imino group into a free group, as well as the transfer of a functionally modified carboxyl group into a free carboxyl group during the course of the process takes place according to methods known per se by treatment with hydrolyzing resp. reducing agents.

En foretrukket fremgangsmåte består i at man kon-denserer de første 3 aminosyrer, f.eks. H-D-Ser-Tyr-OH-holdige tri-peptid (den forkortede skrivemåte refererer seg til L-aminc-syren, A preferred method consists in condensing the first 3 amino acids, e.g. H-D-Ser-Tyr-OH-containing tri-peptide (the abbreviated spelling refers to the L-aminc acid,

når D- ikke er spesielt betegnet), eller det dessuten den 4.aminosyreholdige tetrapeptid med heptapeptid, res. heksapeptid av følgende aminosyrer til aminosyre 10, fortrinnsvis etter azidmetoden, og deretter kondenseres dekapeptidet med tetradekapeptidet av aminosyre 11-24. Ved denne kondensasjon anvendes som koblingsmetode fortrinnsvis karbodiimidmetoden eller metoden av aktiverte estere, fremfor alt ved hjelp av p-nitrofenylesteren. I sistnevnte tilfelle behøver p-nitrofenylesteren av dekapeptidet ikke å isoleres som sådanne, men kan også dannes i selve kondensasjonstrinnet fra dekapeptid med fri karboksylgruppe p-nitrofenol og dicykloheksylkarbodiimid. Dekapeptidet foreligger altså som a-aminobeskyttet peptid med fri karboksylgruppe eller med en p-nitrofenylestergruppe. Tetradekapeptidet anvendes i form av en ester, fortrinnsvis av tert. butylester eller av w-amidet. De i peptidbruddstykkene som skal kondenseres, tilstede-værende sidekjeder-aminogrupper beskyttes fortrinnsvis ved tert.-butyloksykarbonylgruppen, sidekjedekarboksylgruppen ved tert.-butylestergruppen. Disse beskyttelsesgrupper kan avspaltes i siste trinn med trifluoreddiksyre. when D- is not specifically designated), or the 4th amino acid-containing tetrapeptide with heptapeptide, res. hexapeptide of the following amino acids to amino acid 10, preferably by the azide method, and then the decapeptide is condensed with the tetradecapeptide of amino acids 11-24. In this condensation, the coupling method is preferably the carbodiimide method or the method of activated esters, above all using the p-nitrophenyl ester. In the latter case, the p-nitrophenyl ester of the decapeptide does not need to be isolated as such, but can also be formed in the condensation step itself from the decapeptide with free carboxyl group p-nitrophenol and dicyclohexylcarbodiimide. The decapeptide is thus available as an α-amino-protected peptide with a free carboxyl group or with a p-nitrophenyl ester group. The tetradecapeptide is used in the form of an ester, preferably of tert. butyl ester or of the w-amide. The side chain amino groups present in the peptide fragments to be condensed are preferably protected by the tert-butyloxycarbonyl group, the side chain carboxyl group by the tert-butyl ester group. These protecting groups can be removed in the final step with trifluoroacetic acid.

Ifølge en ytterligere foretrukket fremgangsmåte kondenseres de første 4 aminosyreholdige tetrapeptider H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-OH med eicosapeptidet av aminosyrene 5~24. Ved denne kondensasjon anvendes som koblingsmetode fortrinnsvis azidmetoden. Tetrapeptid-hydrazidets resp. -azidets a-aminogruppe beskyttes fortrinnsvis ved den tert. butyloksykarbonylgruppe. Eicosapeptidet kan foreligge som fritt peptid eller som ester, spesielt tert. butylester, eller som Pro 2k-amid. Også i Eicosapeptidet beskyttes sidekjede-aminogruppene fortrinnsvis ved tert.butyloksykarbonylgruppen, sidekjedekarboksylgruppen ved tert. butylestergruppen. According to a further preferred method, the first 4 amino acid-containing tetrapeptides H-D-Ser-Tyr-Ser-Met-OH are condensed with the eicosapeptide of amino acids 5~24. In this condensation, the azide method is preferably used as the coupling method. The tetrapeptide hydrazide's resp. -azide's α-amino group is preferably protected by the tert. butyloxycarbonyl group. The eicosa peptide can exist as a free peptide or as an ester, especially tert. butyl ester, or as Pro 2k-amide. Also in the Eicosapeptide, the side chain amino groups are preferably protected by the tert.butyloxycarbonyl group, the side chain carboxyl group by tert. the butyl ester group.

Etterat man ved kondensasjon av peptidbruddstykker har fått tetracosapeptid, hvis a-aminogruppe og sidekjede-aminogrupper er beskyttet med tert. butyloksykarbonylgruppe og dets endekarboksyl-gruppe og sidekjedekarbpksylgruppe med tert. butylestergruppen, kan alle disse beskyttelsesgrupper avspaltes samtidig ved sur hydrolyse, eksempelvis med trifluoreddiksyre. Foreligger endekarboksylgruppen ikke som tertbutylestergruppe, men som amidgruppe, så fåes peptidamider. Peptidhydrazider får man eksempelvis når man behandler et peptid med endeplasserte laverealkylestergrupper med hydrazinhydrat. After, by condensation of peptide fragments, tetracosapeptide has been obtained, whose α-amino group and side-chain amino groups are protected with tert. butyloxycarbonyl group and its terminal carboxyl group and side chain carboxyl group with tert. the butyl ester group, all these protecting groups can be removed simultaneously by acid hydrolysis, for example with trifluoroacetic acid. If the terminal carboxyl group is not present as a tert-butyl ester group, but as an amide group, then peptidamides are obtained. Peptide hydrazides are obtained, for example, when a peptide with terminally placed lower alkyl ester groups is treated with hydrazine hydrate.

Alt etter arbeidsmåte får man de nye forbindelserDepending on the way you work, you get the new connections

i form av baser eller deres salter. Fra saltene kan basene utvinnes på i og for seg kjent måte. Fra sistnevnte igjen lar det seg ved omsetning med syrer, som er egnet til dannelse av terapeutisk anvendbare salter utvinne salter som f.eks. slike med uorganiske syrer, in the form of bases or their salts. The bases can be extracted from the salts in a manner known per se. From the latter again, by reaction with acids, which are suitable for the formation of therapeutically usable salts, salts such as e.g. those with inorganic acids,

som halogenhydrogensyrer, eksempelvis saltsyre eller bromhydrogensyre, perklorsyre, salpetersyre eller tiocyansyre, svovel- eller fosforsyre, eller organiske syrer, som maursyre, eddiksyre, propionsyre, glykol-syre, melkesyre, pyrodruesyre, oksalsyre, malonsyre, ravsyre, malein-syre, fumarsyre, eplesyre, vinsyre, sitronsyre, ascorbinsyre, hydroksy-maleinsyre, dihydroksymaleinsyre, benzosyre, fenyleddiksyre, 4-amino-benzosyre, 4-hydroksybenzosyre, antranilsyre, kanelsyre, mandelsyre,; salicylsyre, 4-amino-salicylsyre, 2-fenoksybenzosyre, 2-acetoksy-benzosyre, metansulfonsyre, etansulfonsyre, hydroksyetansulfonsyre, benzolsulfonsyre, p-toluolsulfonsyre, naftalinsulfonsyre eller sul-fanilsyre. such as hydrohalic acids, for example hydrochloric or hydrobromic acid, perchloric acid, nitric acid or thiocyanic acid, sulfuric or phosphoric acid, or organic acids, such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, maleic acid, fumaric acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, hydroxymaleic acid, dihydroxymaleic acid, benzoic acid, phenylacetic acid, 4-amino-benzoic acid, 4-hydroxybenzoic acid, anthranilic acid, cinnamic acid, mandelic acid,; salicylic acid, 4-amino-salicylic acid, 2-phenoxybenzoic acid, 2-acetoxy-benzoic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid or sulfanilic acid.

De peptider som kan fremstilles ved fremgangsmåten, kan finne anvendelse i form av farmasøytiske preparater. Disse inneholder peptidene i blanding med et for den enterale eller parenterale applikasjon egnede farmasøytiske, organiske eller uorganiske bære-materialer. For dette kommer det på tale slike stoffer som ikke reagerer med polypeptidene som f.eks. gelatiner, melkesukker, glukose, kokesalt, stivelse, magnesiumstearat, talk, planteoljer, benzylalko-holer, gummi, polyalkylenglykoler, vaselin, cholesterin eller andre kjente legemiddelbærere. De farmasøytiske preparater kan f.eks. foreligge som lyofilisat eller i flytende form som oppløsninger, suspen-sjoner eller emulsjoner. Enten er de sterilisert og/eller inneholder hjelpestoffer, som konserverings-, stabiliserings-, fukte- eller emulgeringsmiddel. De kan dessuten også inneholde andre terapeutisk verdifulle stoffer. The peptides that can be produced by the method can be used in the form of pharmaceutical preparations. These contain the peptides in mixture with a pharmaceutical, organic or inorganic carrier material suitable for enteral or parenteral application. This includes such substances that do not react with the polypeptides, such as e.g. gelatins, milk sugar, glucose, table salt, starch, magnesium stearate, talc, vegetable oils, benzyl alcohols, rubber, polyalkylene glycols, vaseline, cholesterol or other known drug carriers. The pharmaceutical preparations can e.g. available as a lyophilisate or in liquid form as solutions, suspensions or emulsions. They are either sterilized and/or contain auxiliary substances, such as preservatives, stabilisers, wetting agents or emulsifiers. They may also contain other therapeutically valuable substances.

Således kan man eksempelvis også kombinere dem med de i ACTH-terapien vanlige tilsetninger for å forlenge virkningen, Thus, for example, you can also combine them with the usual additives in ACTH therapy to prolong the effect,

som f.eks. oksypolygelatiner, polyfloretinfosfat, karboksymetylcellulose, eller åe ovennevnte tungt oppløselige metallforbindelser, spesielt fosfater, pyrofosfater eller hydroksyder av sink. like for example. oxypolygelatins, polyphloretin phosphate, carboxymethylcellulose, or the aforementioned sparingly soluble metal compounds, especially phosphates, pyrophosphates or hydroxides of zinc.

Videre kan man for å forlenge virkningen overføreFurthermore, in order to prolong the effect, it can be transferred

de nye peptider i deres komplekser med polymerisater eller kopolymerisater av aminosyrer, spesielt slike som har en overveiende del av sure a-aminosyrer, som glutaminsyre eller asparaginsyre av L-, D- eller D,L-konfigurasjonen. De nevnte polymerisater og kopolymerisater har i sidekjeden frie karboksylgrupper, mens den terminale karboksylgruppe kan foreligge i fri eller være modifisert funksjonell, f.eks. som estergruppe eller som en usubstituert eller ved hydrokarbonrester, fremfor alt lavere alkylgrupper, substituerte amidgruppe. Polymeri-satenes molekylvekt kan ligge mellom 1000 og 100.000, fortrinnsvis utgjør den 2000 - 15.000. Man anvender for preparatets fremstilling hensiktsmessig et vannoppløselig, fysiologisk tålbart salt, f.eks. natrium- eller ammoniumsalt, eller et salt med en organisk base, the new peptides in their complexes with polymers or copolymers of amino acids, especially those having a predominant part of acidic α-amino acids, such as glutamic acid or aspartic acid of the L-, D- or D,L configuration. The aforementioned polymers and copolymers have free carboxyl groups in the side chain, while the terminal carboxyl group can be free or be functionally modified, e.g. as an ester group or as an unsubstituted or, in the case of hydrocarbon residues, above all lower alkyl groups, substituted amide group. The molecular weight of the polymers can be between 1,000 and 100,000, preferably 2,000 - 15,000. A water-soluble, physiologically tolerable salt is suitably used for the preparation of the preparation, e.g. sodium or ammonium salt, or a salt with an organic base,

som trietylamin, procain, dibenzylamin, eller andre tertiære nitro-genbaser. such as triethylamine, procaine, dibenzylamine, or other tertiary nitrogen bases.

Polymerene er kjent eller kan fremstilles etter kjente metoder, eksempelvis'etter den av M. Idelson et al. J.Am. The polymers are known or can be prepared according to known methods, for example according to that of M. Idelson et al. J. Am.

Chem. Soc. 80, 4631 et seq. (1958) beskrevne fremgangsmåte. Således kan man f.eks. la glutaminsyre-a-karboksyanhydrid, -benzylester eller -tert.-butylester i dioksan reagere med ammoniakk eller et amin i et bestemt molforhold, f.eks. 100:1 (alt etter den ønskede poly-merisasjonsgrad), og etter avsluttet polymerisasjon avspalte beskyt-telsesgruppene, f.eks. benzyloksygruppene med bromhydrogeh i iseddik, den tertiære butyloksygruppe med trifluoreddiksyre. For fremstilling av polymere med enhetlig, definerte kjedelengder kan man oppbygge polymerene også ved syntese etter de i peptidkjemien kjente frem-gangsmåter (Carbodiimidmetoden, azidmetoden etc.). Chem. Soc. 80, 4631 et seq. (1958) described procedure. Thus, one can e.g. let glutamic acid α-carboxylic anhydride, -benzyl ester or -tert-butyl ester in dioxane react with ammonia or an amine in a specific molar ratio, e.g. 100:1 (according to the desired degree of polymerisation), and after the polymerisation is finished, split off the protective groups, e.g. the benzyloxy groups with bromohydrogeh in glacial acetic acid, the tertiary butyloxy group with trifluoroacetic acid. For the production of polymers with uniform, defined chain lengths, the polymers can also be built up by synthesis according to procedures known in peptide chemistry (the carbodiimide method, the azide method, etc.).

Konsentrasjonen av den polymere i de farmasøytiske preparater avhenger av det angjeldende salts oppløselighet og av vis-kositeten. Den polymere skal kunne foreligge i preparatene i oppløst form og være injiserbare. The concentration of the polymer in the pharmaceutical preparations depends on the solubility of the salt in question and on the viscosity. The polymer must be able to be present in the preparations in dissolved form and be injectable.

Konsentrasjonen av det adrenocorticotrope virksomme peptid velges således at preparatet eksempelvis har p. ml 10-50 I.E. The concentration of the adrenocorticotropic active peptide is chosen so that the preparation has, for example, per ml 10-50 I.E.

Oppfinnelsen skal i det følgende beskrives ved hjelp av noen eksempler. In the following, the invention will be described with the help of some examples.

Det tynnsjiktkromatografiske system betegnes på følgende måte: System 43A: tert.-amylalkohol-isopropanol-vann (100:40:10) System 45 : sek.butanol-3% vandig ammoniakk (100:44) System 100: Etylacetat-pyridin-iseddik-vann ( 62:21:6:11) System 101: n-butanol-pyridin-iseddik-vann ( 30:20:6:24) The thin-layer chromatographic system is designated as follows: System 43A: tert.-amyl alcohol-isopropanol-water (100:40:10) System 45: sec. butanol-3% aqueous ammonia (100:44) System 100: Ethyl acetate-pyridine-glacial vinegar -water ( 62:21:6:11) System 101: n-butanol-pyridine-glacial acetic acid-water ( 30:20:6:24)

Det anvendes følgende forkortelser:The following abbreviations are used:

Eksempel 1. Example 1.

370 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys-(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu oppløses i 7,4 ml 90#-ig triflucr-eddiksyre og hensettes i 45 minutter ved 25°C. Oppløsningen inndampes deretter til ca. 2 ml, fortynnes med 20 ml vann, inndampes igjen og lyofiliseres til slutt. Man får trifluoracetatet av det frie tetra-kosapeptid, som for omdannelse i acetat oppløses i litt vann og filtreres gjennom en søyle (0 = 12,5 mm, lengde = 15 cm) av svakt basisk ioneutveksler (f. eks. Merck Nr. II) i acetatform. Eluatet konsentreres til ca. 3 ml, lyofiliseres og ettertørkes i høyvakuum ved 40°C. Man får 316 mg kromatografisk og elektroforetisk enhetlig acetat av 370 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys-(BOC) -Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu is dissolved in 7.4 ml of 90% triflucracetic acid and allowed to stand for 45 minutes at 25°C. The solution is then evaporated to approx. 2 ml, diluted with 20 ml of water, evaporated again and finally lyophilized. The trifluoroacetate is obtained from the free tetracosapeptide, which for conversion into acetate is dissolved in a little water and filtered through a column (0 = 12.5 mm, length = 15 cm) of weakly basic ion exchanger (e.g. Merck No. II ) in acetate form. The eluate is concentrated to approx. 3 ml, lyophilized and post-dried in high vacuum at 40°C. 316 mg of chromatographically and electrophoretically uniform acetate are obtained

1 17 18 12^4 1 17 18 12^4

D-Ser -Lys ' -B -corticotropin som hvitt, amorft pulver.D-Ser -Lys ' -B -corticotropin as white, amorphous powder.

I tynnsjiktskromatogram på aluminiumoksyd i systemet 1-24 In thin-layer chromatogram on aluminum oxide in the system 1-24

101 har forbindelsene en Rf-verdi på 0,40. (3 -corticotropin under samme betingelse 0,51). Det vandrer ved elektroforese (16 volum/cm) ved pH 6,1 (pyridinacetatpuffer) i 2 timer 8,4 cm mot katoden. 101 the compounds have an Rf value of 0.40. (3 -corticotropin under the same condition 0.51). It migrates by electrophoresis (16 volume/cm) at pH 6.1 (pyridine acetate buffer) for 2 hours 8.4 cm towards the cathode.

Utgangsmaterialet kan fremstilles på følgende måte: 1) Z. Lys( B0C)- Lys( B0C), NHNH2 10 g Z.Lys(B0C)-Lys(B0C).OCH^(fremstillet av Z.Lys-(BOC)-OH + H.Lys(B0C)-0CH^ved hjelp av dicykloheksylkarbodiimid) opp-løses i 160 ml metanol og blandes med 7, 8 ml .hydrazinhydrat. Man hensetter den klare oppløsning i 24 timer ved 25°C og inndamper deretter til ca. 1/3 av det opprinnelige volum. Ved blanding med 200 ml vann faller det ut et oljeaktig bunnfall, som blir fast ved avkjøling og utdrivning og kan pulveriseres. Man suger fra på nutsch, vasker med vann og tørker råproduktet. Det renses ved engangs omkrystallisering fra metanol-iseddik-petroleter og har da et smeltepunkt på 118-119,5°C. The starting material can be prepared as follows: 1) Z.Lys(B0C)- Lys(B0C), NHNH2 10 g Z.Lys(B0C)-Lys(B0C).OCH^ (prepared from Z.Lys-(BOC)-OH + H.Lys(B0C)-OH (using dicyclohexylcarbodiimide) is dissolved in 160 ml of methanol and mixed with 7.8 ml of hydrazine hydrate. The clear solution is kept for 24 hours at 25°C and then evaporated to approx. 1/3 of the original volume. When mixed with 200 ml of water, an oily precipitate falls out, which solidifies on cooling and expulsion and can be pulverized. The nutsch is sucked off, washed with water and the raw product dried. It is purified by one-time recrystallization from methanol-glacial vinegar-petroleum ether and then has a melting point of 118-119.5°C.

På silikagel-tynnsjiktplater fåes følgende Rf-verdier: The following Rf values are obtained on silica gel thin-layer plates:

2) Z. Lys ( BOC)- Lys( BOC)- Pro- QH 2) Z. Light ( BOC)- Light( BOC)- Pro- QH

1,87 g Z.Lys(BOC)-Lys(BOC.NHNH„ oppløses i 15 ml nydestillert dimetylformamid og avkjøles til -25 C. Hertil drypper man langsomt 2,07 ml 4,35-n. saltsyre og deretter 0,66 ml 5-n. natri-umnitritoppløsning. Man omrører i 10 minutter ved -10°C og tilsetter deretter en oppløsning av 692 mg L-prolin i 4,2 ml dimetylformamid-vann (2:1). Endelig tildryppes dessuten ved -10°C 1,82 ml trietylamin og deretter hensettes reaksjonsoppløsningen natten over ved 0°C og i ytterligere 2 timer ved værelsestemperatur. Man inndamper deretter i høyvakuum til et volum på ca. 4 ml og blander det klebrige residuum med 25 ml vann. Ved avkjøling til 0°C og utdrivning kan det pulveriseres. Man suger fra på nutsch, vasker med litt vann og tørker i høyvakuum ved 40°C. For rensning av det ikke krystalliser-bare råprodukt gjennomføres en multiplikativ fordeling etter Craig i oppløsningsmiddelsysternets metanol-puffer-kloroform-tetraklorkarbon (35:13:15:15) /_ puffer = 28,5 ml iseddik + 19,25 g ammoniumacetat i 960 ml vann/ med fasevolum på hver gang 10 ml. Etter 220 trinn isolerer man fra fordelingselementene nr. 49-73 ( ,u . = 6l: K = 1.87 g of Z.Lys(BOC)-Lys(BOC.NHNH„ are dissolved in 15 ml of freshly distilled dimethylformamide and cooled to -25 C. To this, 2.07 ml of 4.35-n hydrochloric acid is slowly added drop by drop and then 0.66 ml of 5-n sodium nitrite solution. Stir for 10 minutes at -10°C and then add a solution of 692 mg of L-proline in 4.2 ml of dimethylformamide-water (2:1). Finally, add dropwise at -10 °C 1.82 ml of triethylamine and then the reaction solution is left overnight at 0 °C and for a further 2 hours at room temperature. It is then evaporated under high vacuum to a volume of approximately 4 ml and the sticky residue is mixed with 25 ml of water. On cooling to 0°C and expelling it can be pulverized. One sucks off the Nutsch, washes with a little water and dries in a high vacuum at 40°C. For purification of the non-crystallizable crude product, a multiplicative distribution according to Craig is carried out in the methanol buffer of the solvent system. chloroform-tetrachlorocarbon (35:13:15:15) /_ buffer = 28.5 ml glacial acetic acid + 19.25 g ammonium acetate in 960 ml water/ with a phase volume of 10 ml each time. After 220 steps, one isolates from the distribution elements no. 49-73 ( ,u . = 6l: K =

& / maks *;0,39) ved inndampning til tørrhet og bortsublimering av ammoniumacetat kromatografisk ren, imidlertid amorft tripeptidderivat av smeltepunkt ca. 70-80°C. I tynnsjiktkromatogram på silikagel fåes følgende Rf-verdier: ; ; 3) Z. Lys( BQC)- Lys( BQC)- Pro- Val- Lys( BQC)- Val- Tyr- Pro. QtBu;2,4 g Z.Lys(B0C)-Lys(B0C)-Pro.0H og 3,12 g H.Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu-oppløses i 30 ml absolutt kloroform. Man tilsetter ved 0°C 0,845 g dicykloheksylkarbodiimid, omrører 1 time ved 0°C og hensetter deretter i 30 timer ved 25°C. Det utskilte krystallinske dicykloheksylurinstoff frafiltreres og vaskes med litt eddikester. Til filtratet setter man 150 ml eddikester og ekstraherer den organiske fasé ved 0°C tre ganger, hver gang med 30 ml 3%-ig vin-syreoppløsning for å fjerne overskytende pentapeptid. Man vasker ytterligere flere ganger med vann til nøytral reaksjon og inndamper deretter til tørrhet. For å fjerne lipofile forurensninger oppløser ;man residuet i 10 ml metanol og 20 ml eddikester og utfeller oktapep-tidet ved tilsetning av 120 ml petroleter som seig masse som tørkes i vakuum ved 40°C. Det således dannede råprodukt (3*1 g) underkastes for endelig rensning en Craig-fordeling i systemet metanol-puffer-kloroform-tetraklorkarbon (30:10:3:30), f~puffer som angitt unåer 2) over 225 trinn med fasevolum på hver gang 10 ml. Det kromatografisk enhetlige oktapeptidderivat fåes ved inndampning av innholdet av elementene nr. 65-96 (/Umaks = ?8; K = 0,53) for tørkning og bortsublimering av ammoniumacetat i høyvakuum som hvitt amorft pulver med smeltepunkt ca. 130 - 140°C. Det har på silikagel følgende Rf-verdier: & / max *;0.39) by evaporation to dryness and sublimation away of ammonium acetate chromatographically pure, however amorphous tripeptide derivative of melting point approx. 70-80°C. In a thin-layer chromatogram on silica gel, the following Rf values are obtained: ; ; 3) Z. Lys( BQC)- Lys( BQC)- Pro- Val- Lys( BQC)- Val- Tyr- Pro. QtBu; 2.4 g of Z.Lys(B0C)-Lys(B0C)-Pro.OH and 3.12 g of H.Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu are dissolved in 30 ml of absolute chloroform. 0.845 g of dicyclohexylcarbodiimide is added at 0°C, stirred for 1 hour at 0°C and then allowed to stand for 30 hours at 25°C. The separated crystalline dicyclohexylurea is filtered off and washed with a little vinegar. 150 ml of acetic acid are added to the filtrate and the organic phase is extracted at 0°C three times, each time with 30 ml of 3% tartaric acid solution to remove excess pentapeptide. It is washed several more times with water until the reaction is neutral and then evaporated to dryness. To remove lipophilic impurities, the residue is dissolved in 10 ml of methanol and 20 ml of acetic acid and the octapeptide is precipitated by adding 120 ml of petroleum ether as a viscous mass which is dried in vacuum at 40°C. The crude product thus formed (3*1 g) is submitted for final purification to a Craig distribution in the system methanol-buffer-chloroform-tetrachlorocarbon (30:10:3:30), f~buffer as indicated under 2) over 225 steps of phase volume at each time 10 ml. The chromatographically uniform octapeptide derivative is obtained by evaporating the contents of elements no. 65-96 (/Umax = ?8; K = 0.53) for drying and sublimation away from ammonium acetate in high vacuum as a white amorphous powder with a melting point approx. 130 - 140°C. It has the following Rf values on silica gel:

4) H. Lys( BOC)- Lys( BOC)- Pro- Val- Lys( BOC- Val- Tyr- Pro- OtBu 4) H. Lys( BOC)- Lys( BOC)- Pro- Val- Lys( BOC- Val- Tyr- Pro- OtBu

1,46 g Z.Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu hydreres i 40 ml metanol etter tilsetning av 300 ml 10%- ig palladiumkull i en rystebeholder med karbondioksyd-absorbsjon. Vann-stoffopptak er avsluttet allerede etter 20 minutter. Etter 1 time frafiltreres katalysatoren, etterspyles med metanol og filtratet inndampes til tørrhet. Man får i kvantitativt utbytte det kromatografisk enhetlige dekarbobenzoksylerte oktapeptidderivat som hvitt amorft pulver med smeltepunkt ca. 110-120°C. Det har i tynnsjiktkromatogram på silikagel følgende Rf-verdier: 1.46 g of Z.Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu are hydrated in 40 ml of methanol after adding 300 ml of 10% palladium charcoal in a shaking container with carbon dioxide absorption. Water absorption is already finished after 20 minutes. After 1 hour, the catalyst is filtered off, rinsed with methanol and the filtrate is evaporated to dryness. The chromatographically uniform decarbobenzoxylated octapeptide derivative is obtained in quantitative yield as a white amorphous powder with a melting point of approx. 110-120°C. It has the following Rf values in a thin-layer chromatogram on silica gel:

5) Z.Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val- Lys( BOC)- Val- Tyr- Pro- OtBu. 5) Z.Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val- Lys( BOC)- Val- Tyr- Pro- OtBu.

1,98 g Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NHNH2oppløses i 22 ml absolutt dimetylformamid og blandes etter av-kjøling til -25°C dråpevis under omrøring med 3,4 ml 2,115-n. saltsyre og deretter med 0,378 ml 5-n. natriumnitritoppløsning. Den klare oppløsning videreomrøres i 15 minutter ved -10°C og blandes deretter med en til -5°C foravkjølet oppløsning av 1,313 g av ovennevnte oktapeptidderivat i 4 ml dimetylformamid. Man etterspyler ennu med 1 ml dimetylformamid og tildrypper deretter langsomt ved -5°C 1,05 ml trietylamin. Reaksjonsblandingen omrøres ytterligere i 30 minutter og hensettes deretter i 15 timer ved 0°C. Deretter konsentreres det til dannelse av en viskos olje og herav utfelles ved tilsetning av 20 ml vann en seig masse. Denne oppløses igjen under oppvarmning i 20 ml 1.98 g of Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NHNH2 are dissolved in 22 ml of absolute dimethylformamide and mixed after cooling to -25°C dropwise while stirring with 3, 4 ml 2.115-n. hydrochloric acid and then with 0.378 ml of 5-n. sodium nitrite solution. The clear solution is further stirred for 15 minutes at -10°C and then mixed with a -5°C pre-cooled solution of 1.313 g of the above-mentioned octapeptide derivative in 4 ml of dimethylformamide. It is further rinsed with 1 ml of dimethylformamide and then slowly added dropwise at -5°C 1.05 ml of triethylamine. The reaction mixture is stirred for a further 30 minutes and is then allowed to stand for 15 hours at 0°C. It is then concentrated to form a viscous oil and a viscous mass is precipitated from this by adding 20 ml of water. This is dissolved again while heating in 20 ml

metanol og peptidet utfelles igjen ved tilsetning av 30 ml vann.methanol and the peptide is precipitated again by adding 30 ml of water.

Ved avkjøling til 0°C og utdrivning får man en pulverformet oppslem-ning som filtreres, vaskes med vann og tørkes. Dette råprodukt underkastes for rensning en Craig-fordeling i systemet metanol-puffer-kloroform-tetraklorkarbon (60:20:3:60) f~puffer som angitt under punkt 21 med fasevolum på hver gang 20 ml. Etter 218 trinn isolerer man fra elementene nr. 105 - 134 (/umaks= 121> K = !»25) ved inndampning til tørrhet og avsublimering av ammoniumacetatet i høyvakuum kromatografisk enhetlig beskyttet tetradecapeptid som hvitt, amorft pulver med smeltepunkt ca. l80-190°C. Det har på silikagel følgende Rf-verdier: By cooling to 0°C and expelling, a powdery slurry is obtained which is filtered, washed with water and dried. For purification, this crude product is subjected to a Craig distribution in the system methanol-buffer-chloroform-tetrachlorocarbon (60:20:3:60) f~buffer as indicated under point 21 with a phase volume of 20 ml each time. After 218 steps, one isolates from the elements no. 105 - 134 (/umaks= 121> K = !»25) by evaporation to dryness and sublimation of the ammonium acetate in high vacuum chromatographically uniformly protected tetradecapeptide as a white, amorphous powder with a melting point approx. l80-190°C. It has the following Rf values on silica gel:

6) H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val- Lys( BOC)- Val- Tyr- Pro- OtBu. 1,66 g Z.Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu hydreres i '40 ml metanol med 300 ml palladiumkull (10% Pd) som vanlig. Ved inndampning av den filtrerte hydreringsoppløsning til tørrhet får man direkte det kromatografisk enhetlige produkt (14,9 g) som amorft pulver, som smelter uskarpt ved ca. 175 - 190°C. Det har på silikagel følgende Rf-verdier. 7) BOC.D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-'Arg-Try-Gly-Lys(^OC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr- Pro- OtBu. 6) H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val- Lys( BOC)- Val- Tyr- Pro- OtBu. 1.66 g Z.Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr- Pro-OtBu is hydrated in 40 ml of methanol with 300 ml of palladium charcoal (10% Pd) as usual. By evaporating the filtered hydration solution to dryness, the chromatographically uniform product (14.9 g) is directly obtained as an amorphous powder, which melts indistinctly at approx. 175 - 190°C. It has the following Rf values on silica gel. 7) BOC.D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-'Arg-Try-Gly-Lys(^OC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC )-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr- Pro- OtBu.

378 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH (og 451 mg H-Lys (BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys (BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tur-Pro.OtBu suspenderes i 4 ml absolutt pyridin og omrøres etter tilsetning av 0,15 ml vann og 0,32 ml l-n. saltsyre 10 minutter ved 50°C. Til den uklare suspensjon setter man deretter 145 mg dicykloheksylkarbodiimid og etter 3 timer igjen en like stor mengde. Man omrører ytterligere i 3 timer ved 50°C og hensetter det deretter natten over ved G°C. Det utskilte dicykloheksylurinstoff frafiltreres og ettervaskes 3 ganger med hver gang 0,8 ml 90%-ig pyridin. Filtratet blandes med 45 ml benzol, idet det utfelles et pulverformet råprodukt, som frafiltreres og tørkes ved 45°C. Ved gjenutfelling fra metanol-benzol-petroleter adskilles 378 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH (and 451 mg H-Lys (BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC )-Lys(BOC)-Lys (BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tur-Pro.OtBu is suspended in 4 ml of absolute pyridine and stirred after adding 0.15 ml of water and 0.32 ml of 1-n hydrochloric acid for 10 minutes at 50° C. 145 mg of dicyclohexylcarbodiimide is then added to the cloudy suspension and after 3 hours an equal amount again. Stirring is continued for 3 hours at 50° C and then left overnight at G° C. The separated dicyclohexylurea is filtered off and washed 3 times each time with 0.8 ml of 90% pyridine. The filtrate is mixed with 45 ml of benzene, a powdery crude product is precipitated, which is filtered off and dried at 45° C. At reprecipitation from methanol-benzene-petroleum ether is separated

størstedelen av de lipofile forurensninger, hvorpå den endelige rensning foregår ved hjelp av en Craig-fordeling i oppløsningsmiddelsys-temet metanol-puffer-kloroform-tetraklorkarbon (10:3517:5:4) (puffer som under 2) over 300 trinn, med fasevolum på hver gang 10 ml. Av fordelingselementene nr. 51-85 (/umai{S = 67; K = 0,29) isolerer man ved inndampning til tørrhet og bortsublimering av ammoniumacetat ved 40°C i høyvakuum, 445 mg kromatisk rent beskyttet tetrakosapeptidace-tat som amorft pulver med smeltepunkt ca. 205 - 210°C (spaltning). Det har på silikagel følgende Rf-verdier: the majority of the lipophilic impurities, after which the final purification takes place by means of a Craig distribution in the solvent system methanol-buffer-chloroform-tetrachlorocarbon (10:3517:5:4) (buffer as under 2) over 300 steps, with phase volume at each time 10 ml. From distribution elements no. 51-85 (/umai{S = 67; K = 0.29) 445 mg of chromatically pure protected tetracosa peptide acetate is isolated as an amorphous powder by evaporation to dryness and sublimation of ammonium acetate at 40°C in high vacuum melting point approx. 205 - 210°C (decomposition). It has the following Rf values on silica gel:

Forbindelsen har i prøven ifølge Schuler et al., hvor det måles den minimale intravenøse dose, som bevirker en markert økning av corticosteron-utskillelsen, en terskeldose på 0,003y/kg. Ved subkutan anvendelse i samme prøve er den 10 ganger mer aktiv In the test according to Schuler et al., where the minimal intravenous dose that causes a marked increase in corticosterone secretion is measured, the compound has a threshold dose of 0.003y/kg. When applied subcutaneously in the same sample, it is 10 times more active

enn (alt-L)-B 1-24-corticotropin.than (alt-L)-B 1-24-corticotropin.

Eksempel 2.Example 2.

Man fremstiller en tørrampulle av følgende komponenter: A dry ampoule is made from the following components:

Før bruk blir tørrampullens innhold blandet med Before use, the contents of the dry ampoule are mixed with

1 ml destillert vann, inneholdende i en oppløsningsampulle. Man får en suspensjon med en pH 7S6. 1 ml of distilled water, contained in a solution ampoule. A suspension with a pH of 7S6 is obtained.

Eksempel 3-Example 3-

Man fremstiller en oppløsningsampulle av følgende komponenter: A solution ampoule is made from the following components:

• Eksempel 4. • Example 4.

En steril filtrert vandig oppløsning av D-Ser<1->17 l8 1 ~ 2 4 A sterile filtered aqueous solution of D-Ser<1->17 l8 1 ~ 2 4

Lys -3 -corticotropin-heksaacetat blandes under aseptiske be-tingelser med natrium-polyfloretinfosfat og natriumklorid og fylles i Vialer og lyofiliseres, således at det fåes en tørrvial som inne-1 17 l8 1~2M holder følgende komponenter D-Ser -Lys ' -3 -corticotropin- Lys -3 -corticotropin hexaacetate is mixed under aseptic conditions with sodium polyphloretin phosphate and sodium chloride and filled into vials and lyophilized, so that a dry vial is obtained which contains the following components D-Ser -Lys -3 -corticotropin-

Før bruk blandes innholdet av tørrvialen med 2 ml destillert vann, inneholdt i en oppløsningsampulle. Before use, mix the contents of the dry vial with 2 ml of distilled water, contained in a solution ampoule.

Eksempel 5-Example 5-

2,0 g poly-L-glutaminsyre oppløses i ca. 5,7 ml 10%-ig natronlut, således at oppløsningen pH utgjør 7,4. I denne Dissolve 2.0 g of poly-L-glutamic acid in approx. 5.7 ml of 10% caustic soda, so that the pH of the solution is 7.4. In this

X 17 l8 X—24 X 17 l8 X—24

oppløsning oppløses 5,0 mg D-Ser -Lys ' -3 -corticotropin-heksaacetat og 0,2 mg mertiolat. Til denne oppløsning settes 1 ml av en saltsur oppløsning (pH 2,8) inneholdende 5>2 mg sinkklorid og 0,85 mg dinatriumfosfat (vannfritt). pH innstilles med natronlut på 7,8. Man fyller opp med vann til et volum på 10 ml. solution dissolve 5.0 mg D-Ser-Lys '-3-corticotropin hexaacetate and 0.2 mg merthiolate. To this solution is added 1 ml of a hydrochloric acid solution (pH 2.8) containing 5>2 mg zinc chloride and 0.85 mg disodium phosphate (anhydrous). The pH is adjusted with caustic soda to 7.8. Fill up with water to a volume of 10 ml.

Eksempel 6.Example 6.

Man fremstiller en suspensjon av følgende komponenter: A suspension is made from the following components:

Eksempel 7. Example 7.

Man fremstiller, en suspensjon av følgende komponenter: A suspension of the following components is produced:

Eksempel 8. Example 8.

Man fremstiller 0,5 ml av en saltsur oppløsning av X X7 x8 X~24 0.5 ml of a hydrochloric acid solution of X X7 x8 X~24 is prepared

0,5 mg D-Ser -Lys ' -3 -corticotropin-heksaacetat, 5525 mg ZnCl, 1,05 mg Na2HP0lj. 2 H20 og 2,0 mg NaCl med pH 3,0 og setter oppløsningen til 0,5 ml av en vandig oppløsning av 10 mg benzylalkohol, som inneholder så meget natronlut at det fåes en suspensjon av 0.5 mg D-Ser -Lys ' -3 -corticotropin hexaacetate, 5525 mg ZnCl, 1.05 mg Na 2 HPOlj. 2 H20 and 2.0 mg NaCl with pH 3.0 and add the solution to 0.5 ml of an aqueous solution of 10 mg benzyl alcohol, which contains so much caustic soda that a suspension of

PH 8,3.PH 8.3.

Eksempel 9.Example 9.

5 mg poly-L-glutaminsyre av midlere molekylvekt 39-600 oppløses i 5 ml 0,1-n. natronlut. Man filtrerer oppløsningen, 1 IT l8 1—2 4 tilsetter en oppløsning av 2,5 mg D-Ser -Lys ' -3 -corticotropin-heksaacetat, surgjør deretter med eddiksyre eller saltsyre til pH 4 og oppfyller med vann til 10 ml. Derved utfelles finfordelt et poly-L-glutaminsyre-D-Ser -Lys -3 -corticotropin-kompleks. Suspen-sjonen inneholder pr. ml 0,5 mg poly-L-glutaminsyre og 0,25 mg D-1 17 l8 1™24 5 mg of poly-L-glutamic acid of average molecular weight 39-600 is dissolved in 5 ml of 0.1-n. baking soda. The solution is filtered, 1 IT l8 1-2 4 a solution of 2.5 mg of D-Ser-Lys '-3-corticotropin hexaacetate is added, then acidified with acetic acid or hydrochloric acid to pH 4 and made up to 10 ml with water. Thereby, a finely divided poly-L-glutamic acid-D-Ser-Lys-3-corticotropin complex is precipitated. The suspension contains per ml 0.5 mg poly-L-glutamic acid and 0.25 mg D-1 17 l8 1™24

Ser -Lys ' -3 -corticotropin som kompleksforbindelse. Ser -Lys ' -3 -corticotropin as complex compound.

Claims

Method according to patent no. 124,831 for the production of new peptides with increased and/or prolonged ACTH action, and with the formula D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl (or L-glutaminyl)- L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyll-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L- prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-proline or their C-terminal amides and their acid addition salts and complexes, characterized in that the amino acids D-serine, L-tyrosine, L-serine, L -methionine, L-glutamic acid (or L-glutamine), L-histidine, L-phenylalanine, L-arginine, L-tryptophan, glycine, L-lysine, L-proline, L-valine, glycine, L-lysine, L -lysine, L-lysine, L-lysine, L-proline, L-valine, L-lysine, L-valine, L-tyrosine, L-proline or L-prolinamide and/or peptide fragments containing these amino acids in the desired order, possibly in the form of reactive derivatives of the amino acids and/or peptide fragments, condensed using methods known in peptide chemistry and r intermediate protection of reactive groups of the indicated peptide or peptidamide, which are then, if desired, transferred into therapeutically useful acid addition salts or complexes.