NL8801966A

NL8801966A - Werkwijze voor de bereiding van vinblastine en vincristine.

Info

Publication number: NL8801966A
Application number: NL8801966A
Authority: NL
Original assignee: Univ British Columbia
Priority date: 1987-08-06
Filing date: 1988-08-05
Publication date: 1989-03-01
Also published as: HU208829B; AU617342B2; AU2051288A; GB2215331B; HUT50351A; IT8821678A0; JPH01151590A; SE8802813D0; BE1003228A4; JPH0613532B2; ZA885765B; CH676711A5; GB8818765D0; CA1341262C; DE3826412A1; GB2215331A; SE8802813L; SE467875B; IT1227155B

Description

* -1- 27662/Vk/pr

Korte aanduiding: Werkwijze voor de bereiding van vinblastine en vincristine.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de bereiding van vinblastine en vincristine. Een dergelijke werkwijze is beschreven in de 5 Nederlandse octrooiaanvrage 8800134, eveneens ten name van aanvraagster. De werkwijze zoals beschreven in de Nederlandse octrooiaanvrage 8800134 is thans verbeterd door het uitvoeren van een verbeterde werkwijze waardoor hogere opbrengsten kunnen worden verkregen van de beoogde verbinding.

Met name heeft de uitvinding betrekking op een verbeterde werk-10 wijze voor de bereiding van dimere alkaloideveFbindingen met name van de Catharanthus (Vinca) alkaloidegroepen en in het bijzonder op een verbeterde werkwijze voor de bereiding van anti-virale, anti-leukemische (anti-neo-plastische)verbindingen te weten vincristine en vinblastine. Een aanzienlijke verbetering in de opbrengst van het enamine wordt verkregen door de 15 1,4-reductie van het iminium-tussenprodukt door het gebruik van bepaalde 1,4-djhydropyridineverbindingen. Verder verdient het de voorkeur de oxida-tieve transformatie van het enamine tot de iminium-tussenprodukten en de daarop volgende reductie van de iminium-tussenprodukten tot vinblastine en leurosidine uit te voeren onder bepaalde parameters. Zodoende is het moge-20 lijk uitgaande van bepaalde uitgangsstoffen in één keer de eindprodukten te bereiden te weten vinblastine, leurosidine en 3',4'-dehydrovinblastine.

Vincristine en vinblastine kunnen worden weergegeven door algemene formule 1, vermeld op het formuleblad waarbij geldt dat wanneer R is COOCHj en is OCH^ dan verkrijgt men vinblastine (NSC 49482) en wanneer 25 R overeenkomt met COOCH^ en R^ is OCH^ en N^ is N-CH0 (N-formyl) wordt vincristine verkregen (NSC 67574).

Deze reeks van dimere alkaloïden die belangrijke anti-tumormid-delen omvatten, worden gevormd uit een indool zoals catharanthine (formule 2, R = COOCHj) en een dihydroindooleenheid zoals vindoline (formule 3) waarin 30 de eenheden met elkaar zijn verbonden via een koolstof-koolstofbinding die een alalifatisch centrum C^g omvat in de indooleenheid en een aromatische C^-koolstof in het vindoline gedeelte.

De werkwijze volgens de uitvinding wordt hierdoor gekenmerkt, dat verbindingen worden bereid weergegeven door formule 21, 22 en 23 vermeld op 35 het formuleblad, waarbij in formule 21 alkyl = CH^ of (CHj^XH^ waarbij n= 1-5, R1 = CH3 of CH0, Rj = H of C0-alk, Rj = H, R4 = C00-alk of C0NR13Ru «8801960 -2- 27662/Vk/pr waarbij en R-j^ kunnen worden gekozen uit de groep bestaande uit waterstof, aLkyl, gesubstitueerde alkyl, aryl of gesubsitueerde arylfuncties, Z = -CH=CH- of -CH2-CH2-, R = formule 22 of 23, R? = H of COO-alk, Rg = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R^ = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R^g = 5 H, OH, 0-alk, OCO-alk, R^ = H of COO-alk, R^ = H of alkyl, waarbij de werkwijze voor de bereiding van een dimeer afgeleid van een indooleenheid van de natuurlijke iboga-alkaloid familie die een aza bicyclo-octaan gedeelte en een dihydroindooleenheid bevat van natuurlijk Aspidosperma en Vinca alkaloïde families, waarbij de stereochemie van 10 de koolstof-koolstofbinding tussen deze twee eenheden identiek is met die van vinblastine, door: a) de vorming van een N-oxide tussenprodukt in de koude bij een temperatuur van -70 °C tot +40 °C uit de indooleenheid door oxideren van de stikstofbrug en zonder afscheiden van het tussenprodukt, 15 b) behandelen van het N-oxide indooltussenprodukt in aanwezig heid van een stof gekozen uit de groep bestaande uit azijnzuuranhydride, gehalogeneerd azijnzuuranhydride en acetylchloride ter bewerkstelliging van een Polonovski-type fragmentatiereactie, c) zonder afscheiding van het produkt uit stap b) het koppelen 20 van het reactieprodukt met een dihydroindooleenheid in aanwezigheid van azijnzuuranhydride, gehalogeneerd azijnzuuranhydride en acetylchloride bij een lage temperatuur van ongeveer -70 °C tot +40 °C onder inerte omstandigheden,

d) het produkt uit c) wordt afgescheiden door verdampen van het 25 oplosmiddel, bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van -20 °C

tot 0 °C, e) het produkt uit stap d) wordt gereduceerd door 1,4-dihydropyri-dineverbindingen weergegeven door formule 9, waarbij R^ en R^ in formule 9 carbonzureesters (COO-alk) zijn en R^, R2, R^ en R^ zijn gekozen uit een 30 groep bestaande uit H, alkyl, aryl (Hantzch ester serie) of N-gesubsitueerde I, 4-dihydronicotin amiden waarbij R^ een gesubsitueerde alkyl of een gesubsitueerde arylfunctie is en R^ is CONR^Rg, waarbij R^ en Rg zijn gekozen uit een groep bestaande uit waterstof,alkyl of arylfunctie, f) het produkt uit stap e), hetgeen een enamine is met formule 8, 35 wordt afgescheiden door verdampen van het oplosmiddel, bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van -20 °C tot 0 °C, .8801966 % -3- 27662/Vk/pr g) het produkt uit stap e), hetgeen een oplossing is van het enamine met formule 8 wordt 5 tot 50-voudig verdund door hetzelfde toegepaste oplosmiddel, bij voorkeur in het gebied van 8 tot 12-voudig bij een temperatuur van 0 °€ tot -70 °C, bij voorkeur lager dan -40 °C, 5 h) het enamine verkregen in stap f) of de enamineoplossing ver kregen in stap g), wordt gebruikt ter bereiding van iminiumtussenprodukten met formule 16 of 16a door een aantal oxidatieve bewerkingen met inbegrip van: 1) geregeld beluchten/oxidatie waarbij een oplossing van het 10 enamine wordt geroerd aan de open lucht of met een stroom lucht/zuurstof die door de oplossing wordt geborreld, 2) zoals vermeld in 1) maar onder toevoeging van een metaalion, 3) zoals vermeld in 1) maar onder toevoeging van een flavine-coenzym zoals weergegeven door formule 12 om in situ het corresponderend 15 1,5-didyroflavinecoenzym te ontwikkelen zoals weergegeven door formule 13, 4) zoals genoemd onder 1) maar onder toevoeging van waterstofperoxide en/of hydroperoxide zoals weergegeven door formule R-00H waarbij R is alkyl of aryl, i) het produkt, te weten(een)iminiumtussenprodukt(en) verkregen 20 in stap h) wordt afgescheiden door het verdampen van het oplosmiddel, bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van -20 °C tot 0 °C, en j) het produkt verkregen in stap i) of de oplossing met het iminiumtussenprodukt verkregen in stap h) wordt omgezet tot de gewenste verbindingen met formule 21, waarbij vinblastine en vincristine voorbeelden 25 zijn en leurosidine (formule 35) door reductie met alkalimetaatboriumhydride (NaBH^, KBH^, LiBH^) in geschikte oplosmiddelen (organische oplosmiddelen en/of water) zoals toegepast bij de oxidatieve bewerkingen van stap h).

Een belangrijke verbetering is de reductie waarbij de omzetting wordt uitgevoerd van het iminiumtussenorodukt met formule 6 tot het enamine 30 met formule 8, zoals beschreven in stap e), door het gebruik van verschillende nieuwe 1,4-dihydronocotinamiden (formule9) waarbij R2 = = R5 = R^ = H, = CONl·^ en R^ kan verschillende functionele groepen bevatten zoals aryl, carboxyalkylzure esters, suikers, carbonzuren en carboxylaat in zoutvorm, zoals weergeven door formules 27 tot 32 vermeld in tabel A en 35 1,4-dihydropyridine-verbindingen zoals formules 33 en 34. Van speciaal belang is de aanwezigheid van electronrijke functionele groepen (zoals carbon- .8801966 « -4- 27662/Vk/pr zure esters en carboxylaatzouten in van formule 9, in staat tot coördinatie met het positief geladen iminiumtussenprodukt (formule 6)). Een dergelijke coördinatie verhoogt zowel de regioselectiviteit (1,4-reductie boven 1,2-reductie) en de reductiesnelheid van het iminiumtussenprodukt (formule 6), 5 hetgeen leidt tot een verbeterde opbrengst van het enamine (formule 8). Een verdere verbetering in de vorming van de laatste verbinding wordt bereikt door het uitvoeren van de reductie van het iminiumtussenprodukt (formule 6) en het handhaven van het reactiemengsel voordat enige verdere bewerking plaatsheeft op een lage temperatuur (0 tot -70 °C), bij voorkeur lager dan 10 -40 °C.

Specifieke voorbeelden betrekking hebbende op de bovenvermelde verbeteringen voor de synthese van het enamine (formule 8) door de 1,4-reductie van het iminiumtussenprodukt (formule 6) zijn aangegeven in de voorbeelden I-IX(stappen C tot K). De resultaten van deze voorbeelden zijn 15 samengevat in de tabellen B en C. Tabel B geeft de reductiebewerkingen aan (stappen i en j zoals aangegeven in de voorbeelden VII en VIII) onder toepassing van reductiemiddelen met respectievelijk formule 31 en 32, die de beste opbrengsten geven aan enamine (formule 8). Tabel C geeft de invloed aan van de temperatuur op de reductie van het iminiumtussenprodukt (formu-20 le 6) met het reductiemiddel met formule 32. Het verlagen van de reductie-temperatuur tot -40 °C (stap K (2), voorbeeld IX) resulteerde in een verhoging van zowel de verhouding 1,4-reductieopbrengst, enamine (met formule 8) ten opzichte van het 1,2-reductieprodukt, 3,4-dehydrovinblastine (met formule 7), (4,2:1) evenals van de totale opbrengst van de reactie (85%).

25 Het tweede gebied van de verbetering heeft betrekking op de oxidatieve transformatie van het enamine (formule 8)tot het iminiumtussenprodukt (formule 16) beschreven in octrooiaanvrage 8800134. Verschillende parameters voor deze oxidatieve omzetting zijn onderzocht om de opbrengst aan vinblastine (formule 1) te optimaliseren.

30 Tabel D geeft de invloed aan van de concentratie aan ijzer(III)- chloride. Twee equivalente ijzerdlDchloride geven de hoogste opbrengst aan vinblastine met formule 1.

35 .8801966

Tabel A

-5- 27662/Vk/pr NADH modellen voor 1,2-ten opzichte van 1,4-reductie van het iminiumtusserr produkt met formule 6

Verbinding met formule 6 ¥ Verbinding met + Verbinding met _ „ ... formule 7 (1,2) formule 8 (1,4) R = CO-CH, (3',4,-dehydro- (enamine) vinblastine)

Formule met reductiemiddel Stap formule 36 waarbij

R' = formule 37 A

R’ = formule 27 C

R' = formule 28 F

R' = formule 29 G

R' = formule 30 H

R' = formule 31 I

R' = formule 32 J,K

formule 38 B

formule 33 0 formule 34__E__

Tabel B

---- —------

Invloed van reductiemiddel op 1,4-ten opzichte van 1,2-reductie van iminium met formule 6 reductie __1,4;1,2-reductieprodukten *^ opbrengst (%)_ *5--- a*5 1:1 75 B 1:1 60 C 0,9:1,0 60 D 1:1 40 E 1,1:1 60 F 2:1 65 S 1,5:1 70 H 1,1:1 65 I 2,3:1 70 J 2,2:1 70

Opmerkingen *1) Typische werkwijze :100 mg iminium met formule 6 in 6 mi methanol waaraan reductiemiddelen C-J (1-6 equivalenten) opgelost in 6 ml methanol waren toegevoegd. Verdere bijzonderheden in "Experimenteel gedeelte".

*2) Bepaling door omgekeerde fase HPLC.

*3) Gekombineerde 1,2-reductie (3,4-dehydrovinblastine met formule 7) + 1,4-reductie (enamine met formule 8) produkten

*4) Al deze reacties werden uitgevoerd bij 20 °C

*5> Stappen A en B zijn vermeld in de Nederlandse octrooiaanvrage 8800134 £ φ Q ^ 0n0ig» hier ter vergelijking gegeven.

Tabel C

“6“ 27662/Vk/pr

Invloed van de temperatuur op de 1,4-tegen 1,2-reductie van iminium met formule 6 ____ " *1) o *3)

Reductiestap Temperatuur ( C) 1/4:1/2-reductie- Opbrengsten (%) . . . *2) __produkten___ D 20 2/2:1 70 K (1 ) -20 3/2:1 80 K (2) -40 4/2:1 85

Opmerkingen

*1) Werkwijze zoaIs aangegeven in Tabel B *2) Bepaling door HPLC

*3) Gekombineerde 1,2-reductie (3/4-dehydrovinbalstine met formule 7) + 1,4-reductie (enamine met formule 8) -produkten.

Tabel D

Invloed van ijzer(ni)chloride op de bereiding van vinblastine (formule 1) *3) uit enamine met formule 8__

Hoeveelheid FeCl^ Oxidatieomstandigheden Opbrengst (%) *£) (equivalenten) (temperatuur tijd) van vinblastine jL't \ _ 0 lucht / 0°C 5 min. 0 1 lucht*^ 0 °C 5 min. 13/3 2 lucht*^ 0 °C 5 min. 19/0 3 lucht*^ 0 °C 5 min. 10/4

Opmerkingen *1) Bij een snelheid van 60 ml/min.

*2) Door omgekeerde fase HPLC -bepaling na reductief opwerken met NaBH^ *3) Enamine met formule 8/Ontstaan bij -40 °C (stap K (2)).

.8801966

Tabel E

-7- 27662/Vk/pr

De invloed van de tijd van de oxidatie op de bereiding van vinblastine (met formule 1) uit enamine (met formule 8)*^

Tijd *1) (min.) Opbrengst (%) aan vinblastine _ ^ 5 15,4 10 15/5 15 15/7 45 6,5

Opmerkingen *1) Reactieomstandigheden: 2 equivalenten ijzer(m)chloride werd toegevoegd, klucht door de oplossing geborreld in een hoeveelheid van 60 ml/min bij 0 °C.

*2) Door omgekeerde fase HPLC bepaling na reductief opwerken met NaBH^ *3) Enamine (met formule 8) ontwikkeld bij -40 °C (stap K(2))

Tabel F

Invloed van de oxidatietemperatuur bij de bereiding van vinblastine (met *3) formule 1) uit enamine (met formule 8) o )

Temperatuur C Opbrengst (%) ^,) aan vinblastine -40 3,7 -23 6,2 0 19,6 20 20,6 45 16,0

Opmerkingen *1) Reactieomstandigheden: 2 equivalenten ijzer(llI)chloride werden toegevoegd, lucht door de oplossing geborreld in een hoeveelheid van 60 ml/min. gedurende 15 minuten.

*2) Door omgekeerde fase HPLC bepaling na reductief opwerken met NaBH^ *3) Enamine ontwikkeld bij -40 °C (stap K(2)) .8801966

Tabel G

-8- 27662/Vk/pr

Invloed van de verdunning op de bereiding van vinblastine (met formule 1) *3) ! uit enamine (met formule 8) , *1 4) verdunningsfactor ' opbrengst (%) aan vinblastine 1 19,6 5 25,2 10 30,1 20 29,6 50 24,7

Opmerkingen *1) Reactieomstandigheden: er werden 2 equivalenten ijzerdlDchloride toe* voegd, lucht door de oplossing geborreld bij een hoeveelheid van 60 ml/min. gedurende 15 minuten bij 0 C.

*2) Door omgekeerde fase HPLC bepaling na reductief opwerken met NaBH^ *3) Enamine ontwikkeld bij *40 °C (stap K (2)) *4) Verdunningsfactor 1 is 100 mg iminium (met formule 6) in 6 ml methanol waaraan reductiemiddel met formule 32 (6 equivalenten) in 6 ml methanol werd toegevoegd, (totaal volume = 12 ml); verdunningsfactor 5 = een totaal volume van 60 ml.

Tabel E geeft resultaten die betrekking hebben op de opbrengst van vinblastine ten opzichte van de oxidatietijd. De maximale opbrengst aan vinblastine (met formule 1) wordt bereikt na 5 tot 20 minuten beluchten in aanwezigheid van 2 equivalenten ijzerdlDchloride.

5 Tabel F geeft de resultaten weer van de verschillende oxidatie* temperaturen in aanwezigheid van 2 equivalenten ijzerdlDchloride op de op* o b brengst aan vinblastine (met formule 1). Het temeperatuurstraject van 0 C tot 20 °C geeft de hoogste opbrengst aan vinblastine (met formule 1) na reductief opwerken met NaBH^ zoals aangegeven door omgekeerde fase HPLC.

10 De invloed van de verdunning van het enamine (met formule 8)- oplossing op de bereiding van vinblastine (met formule 1) wordt aangegeven in tabel G. Een verdunningsfactor van 10 tot 20 op het enamine met formule 8 in oplossing voor beluchten in aanwezigheid van ijzerdlDchloride (2 equivalenten) bij 0 °C geeft de beste opbrengst aan vinblastine (met formule 1) zo-15 als aangetoond door omgekeerde fase HPLC na reductief opwerken met NaBH^.

o 8801 96 6 -9- 27662/Vk/nv

Samengevat hebben de specifieke verbeteringen voor de onderhavige werkwijze,™ zoverre ze betrekking hebben op de oxidatieve omzetting van het enamine (met formuLe 8) betrekking op de verdunning (5 tot 50 voudig) van de oplossing met het enamine (met formule 8) dat wordt 5 verkregen in de bovenvermelde reductie van het iminiumtussenprodukt (met formule 6), met hetzetfde oplosmiddel als toegepast bij de reductie. Voor praktische doeleinden is de bij voorkeur toegepaste .verdunm'ngsfaktor gewoonlijk ongeveer 8 tot 12 voudig. De bovenvermelde werkwijze wordt uitgevoerd bij een lage temperatuur (0 °C tot -70 °C), bij voorkeur lager dan 10 -4G 0C en onder inerte omstandigheden zoals afdekking met argon of een inert gas van de groep nul van het Periodiek Systeem (stikstof, helium en neon). Na deze verdunning kan de oxidatieve omzetting van het enamine (formule 8) worden uitgevoerd zoals 'bovenbeschreven (beluchten bij '60 ml/min. gedurende 15 minuten bij 0 °C in de aanwezigheid-van ijzer(lH)chlorid'e 15 in de hoeveelheid van 2 equivalenten ), zoals vermeld in de Nederlandse octrooiaanvrage 8800134, ter bereiding van de corresponderende iminium-tussenprodukten zoals weergegeven door evenwicht 16 b op het formuleblad-Het derde gebied van de verbeteringen heeft betrekking op de reductie van iminiumtussenprodukten (formule 16b) door alkalimetaatborium-20 hydride (NaBH^, KBH^, LiBH^) tot vinblastine (met formule 1) en/of teuro-sidine (formule 35). De iminiumtussenprodukten (met formule 16 en 16a), bereid uit de oxidatieve omzetting van enamine (met formule 8) worden gereduceerd door de toevoeging van alkalimetaalboriumhydride bij een lage temperatuur (4 °C tot -20 °C), bij voorkeur bij 0 °C. De reductie wordt 25 uitgevoerd bij een PH lager dan 8,5 en bij voorkeur bij 7,5 tot 8. Het totale reactiemengsel wordt daarna onder verlaagde druk ingedampt bij een „ lage temperatuur (0 °C tot 10 °C) voordat de extractie plaatsheeft en de afscheiding van de alkaloideprodukten zoals beschreven in de Nederlandse octrooiaanvrage 8800134.

30 Voor praktische doeleinden kunnen de bovenvermelde verbeterin gen zoals aangegeven, direkt in het totale procédé worden uitgevoerd dat in een keer wordt bewerkstelligd door uit te gaan van de indooleenheid (formules 2, 22 of 23) en de dihydroindooleenheid (formule 21, R = H) tot de eindprodukten met formule 21. Het afscheiden van de verschillende 35 tussenprodukten(formules 24,6,8,16) blijft achterwege zoals is aangegeven in reactieschema 1, voor het in één keer bereiden van vinblastine (42%) naast leurosidine (17%) en anhydrovinblastine (18%) uit catharanthine en vindoline.

.8801966 -10- 27662/Vk/nv

Samengevat is de onderhavige werkwijze ook toepasbaar op de bereiding van dimere produkten uit catharanthine en dihydrocatharanthine met vindoline als uitgangsstoffen en f.enyl, alkyl en amide“derivaten die worden weergegeven door de formules 21, 22 en 23. In formule 21 heeft 5 "alk" betrekking op een lagere alkylgroep met 1 ~ 6 koolstofatomen en bij voorkeur 1-3 koolstofatomen, "aryl "is mono-aryl zoals benzyl, styryl en xylyl, R<| wordt gekozen uit een groep bestaande uit waterstof, alk, CHO en CORj, waarbij R$ alkyl of aryl is; R2 en Rj worden gekozen uit een groep bestaande uit waterstof en -C0-alk; R^ wordt gekozen uit 10 een groep bestaande uit COO-alk, C0NH-NH2, C0NH2, CONHR^ en CONlR^)^ waarbij Ró alkyl is; Z wordt gekozen uit een groep bestaande uit -CH^CH-,- en -CH-CH- en R wordt gekozen uit de indoolfamilie weergegeven door formule 22 waarbij R-, wordt gekozen uit de groep bestaande uit waterstof of COO-alk; R0 wordt gekozen uit de groep bestaande uit water-

O

15 stof, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl; R^ wordt gekozen uit de groep bestaande uit waterstof, OH, 0-alk, OCO-alk of alk; R1Q wordt gekozen uit de groep bestaande uit waterstof, OH, 0-alk, OCO-alk of formule 23 waarbij R^ wordt gekozen uit de groep bestaande uit waterstof of COO-alk; R^ wordt gekozen uit alkyl.

20 De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van de volgende specifieke beschrijving.

Deze uitvinding heeft met name betrekking op een werkwijze voor de bereiding van verbindingen weergegeven door formules 21, 22, en 23, waarbij in formule 21 "alkyl" = CH^ of (CH^)p^H^ waarbij n = 1-5, 25 R1 = CH3 of CHO, R2 = H of CO-alk, R3 = H, R4 = COO-alk of CONR^R^ waar R13 en R^ gekozen kan worden uit de groep bestaande uit waterstof, alkyl, samengesteld alkyl, aryl of gesubstitueerde arylfuncties,2 = -CH*CH-of -CH2-CH2-, R = formule 22 of 23, R? = H of COO-alk, Rg = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R^ = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R^q = H, OH, 0-alk/ 30 OCO-alk, R^ = H of COO-alk, R^ = H of alkyl, welk werkwijze is aangegeven in conclusie 1.

Van speciaal belang is de aanwezigheid van elektronrijke functionele groepen (zoals carbonzure .esters en carboxylaatzouten) in R,j met formule 9, in staat tot de coördinatie met het positief geladen 35 iminiumtussenprodukt (met formule 6).

.8801966 -11- 27662/Vk/nv

Enkele voorbeelden van deze 1,4- dihydropyridineverbindingen zijn vermeLd in tabet A (zoals de formules 31 en 32). Een dergelijke coördinatie verhoogt zowel de regioselectiviteit (1,4-reductie ten opzichte van 1,2-reduc-tie) en de reductiesnelheid van het iminiumtussenprodukt (formule 6), het-5 geen leidt tot een verbeterde opbrengst van het enamine (formule 8).

De reductie wordt uitgevoerd onder een inerte atmosfeer bij “60 °C tot +60 °C maar bij voorkeur bij een temperatuur van -20 °C tot -40 °C. De toegepaste oplosmiddelen zijn alcoholen, acetonitril, of hogere analoge stoffen behorend tot deze serie, dimethylsulfoxide, dimethyl-10 formamide, verschillende ethers zoals dioxaan en tetrahydrofuran en gechloreerde koolwaterstoffen.

De oxidatieve werkwijzen in stap (h) 1-4 worden uitgevoerd in organische oplosmiddelen zoals alcoholen, acetonitril of hogere analogen van deze serie, dimethylsulfoxide dimethylformamide, verschillende ethers 15 zoals dioxaan, tetrahydrofuran, aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen en tolueen. Een waterige buffer (zoals fosfaat, Tris-HCl, MES-buffers) bij een pH van 5-9 bij voorkeur in het gebied van 6-8 kunnen als co-optosmid-delen worden toegepast. De reactietemperatuur kan variëren van -60 °C tot +60 °C.

20 van special belang is de aanwezigheid van elektronrijke functionele groepen (zoals carbonzure esters en carboxylaatzouten) bij van formule 9/in staat is tot coördinatie met het positief geladen iminiumtussenprodukt (met formule 6). Enkele voorbeelden van deze 1,4- dihydropyride-verbindingen zijn vermeld in tabel A (bijvoorbeeld de formules 31 en 32).

25 Een dergelijke coördinatie verhoogt zowel de regioselectiviteit (1,4-re-ductie ten opzichte van 1,2-reductie) en de reductiesnelheid van het iminiumtussenprodukt (formule 6), hetgeen leidt tot een verbeterde opbrengst van het enamine (formule 8).

De reductie wordt uitgevoerd onder een inerte atmosfeer van 30 “60 °C tot +60°C, maar bij voorkeur in het gebied van -20 °C tot -40 °C.

De toegepaste oplosmiddelen zijn alcoholen, acetonitril of hogere analoge stoffen uit deze serie, dimethylsulfoxide dimethylformamide, verschillende ethers zoals dioxaan en tetrahydrofuran en gechloreerde koolwaterstoffen.

Het produkt uit stap (e) zoals boven aangegeven, hetgeen een enamine is met 35 formule 8, wordt afgescheiden door verdampen van het oplosmiddel, bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van “20 °C tot 0 °C.

* 8801 96$ * ' -12- 27662/Vk/nv

Volgens de werkwijze van de uitvinding bereidt men ook een enamine en oxideert het enamine tot het iminium tussenprodukt (formule 16 en 16 a) door een aantal oxidatieve bewerkingen waarbij: 5 (a) geregelde beluchting/oxidatie waarbij een oplossing van het enamine aan de open lucht wordt geroerd met een stroom lucht/zuurstof die door de oplossing wordt geborreld, (b) zoals in stap (h) (1) maar onder toevoeging van ijzer(III)chlo- ride, 10 (c) zoals in stap (h) (1) maar onder toevoeging van flavyne-coen- zym, weergegeven door formule 12, om in situ het corresponderende 1,5-di-hydroflavine coënzym te verkrijgen weergegeven door formule 13.

De oxidatieve bewerkingen worden uitgevoerd in organische oplosmiddelen zoals alcoholen, acetonitril of hogere homologen hieruit, 15 dimethylsulfoxide dimethylformamide, ethers zoals dioxaan, tetrahydro-furan, aromatische koolwaterstoffen zoals benzeen, tolueen.

De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van de volgende voorbeelden.

De voorbeelden I - VIII worden uitgevoerd bij 20 °C.

20 Voorbeeld I

De reductie van het iminiumtussenprodukt (formule 6) met 1-diphenylmethyl (-1,4-dihydronicotinamide met formule 9 waarbij = di-fenylmethyl ; R2 = = R5 = R6 = H; R3 = C0NH2) (formule 27) - de synthese van enamine (formule 8 - stapC ).

25 Aan een geroerde oplossing van 100 mg iminiumtusssenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste ethanol werd 76 mg (2,5 equivalenten) 1-difenylmethyl -1,4-dihydronicotinamide met formule 27,in 6 ml methanol toegevoegd onder een positieve argon atmosfeer waarbij het reductiemid-del in delen werd toegevoegd bij een snelheid van 1 equivalent per 60 min.

30 Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC-analyse (Waters Radial-Pak C^g of CN-patroon, methanol-H^-Et^N als oplosmiddelsysteem) onder andere produkten aan door de vorming van enamine met formule 8 en 3', 4' -dehydrovinblastine met formule 8 in een verhouding van 0,9:1 overeenkomend met een opbrengst van 60%.

35 .8801966 -13- 27662/Vk/nv

Voorbeeld II

De reductie van een iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1-benzyl-3-cyano-1,4-dihydropyridine (formule 9, = benzyl, Rg = R4 =

Rj s R^ = H; Rj - CN) met formule 33;de synthese van enamine met formule 8 (stap D).

5 Aan een geroerde oplossing van 100 mg Iminiumtussenprodukt met formule 6,in 6 ml ontgaste methanol werd 206 mg (10 equivalenten) 1-benzyl-3-cyano-1,4-dihydropyridine met formule 33 in 10 ml methanol toegevoegd onder positieve argon atmosfeer, waarbij het reductiemiddel in gedeelten werd toegevoegd bij een snelheid van 1 equivalent per 60 min.

10 Hierna werd omgekeerde fase HPLC-analyse uitgevoerd waaruit onder andere de produktvorming bleek van enamine met formule 8 en 3', 4*,-dehydrovin-blastine met formule 7 in een verhouding 1:1 (opbrengst 40%).

Voorbeeld ΠΙ

De reductie van het iminiumtussenprodukt met formule 6 met 15 1-benzyl-1,4-dihydronicotinyl-(2l-carbamoyl-pyrrolidinyl)-amide met formule 9 waarbij R^ = benzyl ; R^ = R^ = = R^ = H; R7 = (2 -carbamoyl-pyrro- lidinylcarbonyl met formule 34 - de bereiding van enamine met formule 8 (stap E).

20 Aan een geroerde oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste methanol werd 163 mg (5 equivalenten) 1“benzyl-1,4-dihydronicotinyl-(2,-carbamoyl-pyrrolidinyl)-arnide toegevoegd in 5 ml methanol onder een positieve argon druk, waarbij het reductie-25 middel in kleine hoeveelheden werd toegevoegd bij een snelheid van 1 equivalent per 30 min. Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC -analyse (zoals bovenbeschreven) onder andere produkten aan zoals de vorming van enamine met formule 8 en 3', 4,-dehydrovinblastine met formule 7 in een verhouding 30 van 1,1:1 (opbrengst 60%).

Voorbeeld IV

Reductie van iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1,4-di-hydro-1-(1-methoxycarbonyl-isobutyl)-nicotinamide met formule 9, waarbij = 1-methoxycarbonyl-isobutyl; R^ = R^ = R^ = R^ = H; R^ = CONH^, met 35 formule 28; de synthese van enamine met formule 8 (stap f).

Aan een geroerde oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met .8801966 “14- 27662/Vk/nv formule 6 in 6 ml ontgaste methanol werd 150 mg (6 equivalenten) 1,4-dihy-dro-1-(1-methoxy τ carbonylisobutyD-nicotinamide met formule 28 toegevoegd in 6 ml methanol onder een positieve argon druk waarbij het reductiemiddel wordt toegevoegd in hoeveelheden van 1 equivalent per 30 min. Hierna 5 wordt de omgekeerde fase HPLC-analyse uitgevoerd (zoals bovenbeschreven) hetgeen onder andere produkten aangeeft zoals de vorming van enamine met formule 8 en 3', 4'“dehydrovinblastine (met formule 7) in een verhouding van 2:1 (opbrengst 65%).

Voorbeeld V

10 De reductie van iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1- (2', 3', 4', 6'-tetraacetyl-(beta)-d-cjlucopyranosidyl -1,4~dihydronicoti n-amide met formule 9 waarbij - (2', 3', 4', ó'-tetraacetyl-(beta)-D-glucopyranosidyl; = R^ - R^ = H; R^ = CONH^ ), met formule 29 - synthese van enamine met formule 8 (stap G).

15 Aan een geroerde oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste.* methanol werd 238 mg (5 equivalenten) 1-(2',3' 4', 6'-tetra-acetyl-(beta)-D‘-glycopyranosidyl)-1,4-dihydronico-tinamide met formule 29 in 10 ml methanol toegevoegd onder een positieve argon-atmosfeer, waarbij het reductiemiddel 20 in gedeelten werd toegevoegd in een hoeveelheid van 1 equivalent per 60 min. Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC-analyse zoals boven aangegeven, onder andere produkten aan zoals de vorming van enamine met formule 8 en 3', 4'-dehydrovinblastine met formule 7 in een verhouding van 1,5:1 (opbrengst 70%).

25 Voorbeeld VI

De reductie van het iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1/4“dihydro“1“(2,-methoxycarbonyl isopropyU-nicotinamide met formule 9 waarbij R^ = 2' -methoxy carbonylisopropyl; R^ = R^ = R^ = R^ = H; R^ CONH-) met formule 30 - synthese van enamine met formule 8 (stap H).

30 ,

Aan een geroerde oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste methanol werd 82 mg (3,5 equivalenten) 1,4“dihydro“1“(2'methoxy“carbonylisopropyl)-nicotinamide met formule 30 toegevoegd in 7 ml methanol onder een positieve argon-atmosfeer, waarbij ^ het reductiemiddel werd toegevoegd in kleine hoeveelheden zoals 1 equivalent per 30 min. Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC-analyse (zoals boven .8801966 -15- 27662/Vk/nv aangegeven) onder andere produkten aan zoals de vorming van enamine met formule 8 en 3', 4'“dehydrovinbLastine met formule 7 in een verhouding van 1,1:1 (opbrengst 65%)

Voorbeeld VII

5 De reductie van iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1,4- dihydro-1-(1 ’^'-dimethoxy-carbonyl ethyl) waarbij = H;

Rj = CONHj) met formule 31 - synthese van enamine met formule 8 (stap I).

Aan een oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste methanol werd 148 mg (5 equivalenten) 1,4-dihydro-1-10 (1*,2'-dimethoxy“carbonyl ethyl -nicotinamide met formule 31 in 10 ml methanol toegevoegd onder een positieve argon-atmosfeer, waarbij het re-ductiemiddel in gedeelten werd toegevoegd bij een snelheid van 1 equivalent per 30 min. Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC-analyse zoals boven aangegeven aan dat produkten werden verkregen zoals de vorming van enamine 15 met formule 8 en 3', 4'-dehydrovinblastine met formule 7 in een verhouding van 1,1:1 (opbrengst 70%).

Voorbeeld VIII

Reductie van iminiumtussenprodukt met formule 6 met een 1,4-di-hydro-1-(natriumisobutyl-1-carboxylaat)-nicotinamide met formule 4 waarbij 20 R^ = natrium-isobutyl-1-carboxylaat; R£ = = R^ = H; R^ = CONH2 met formule 32-synthese van enamine met formule 8 (stap J>.

Aan een oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste methanol werd 130 mg (5 equivalenten) 1,4-dihydro~1-(natrium-isobutyl-1-carboxylaat)-nicotinamide met formule 32 toegevoegd in 6 ml me-25 thanoL onder een positieve argonatmosfeer, waarbij het reducitemiddel in gedeelten werd toegevoegd met een snelheid van 1 equivalent per 30 minuten. Hierna gaf de omgekeerde fase HPLC-analyse zoals boven beschreven naast andere produkten de vorming aan van enamine met formule 8 en 3,,4,-dehydro-vinblastine met formule 7 in een verhouding van 2,2:1 (opbrengst 70%).

30 35 .8801966 -16- 27662/Vk/pr

Voorbeeld IX

De reductie van iminiumtussenprodukt met formule 6 met 1,4-dihydro-1-(riatriumisobutyl-1-carboxyLaat)-nicotinamide me.··; formule 9 waarbij = natriuiïiisobutyl-1-carboxylaat; R2= R^ = R^ = R^ = H; R^ = C0NH2, met formule 5 32 bij lage temperatuur-synthese van enamine met formule 8 (stap K).

1) Aan een oplossing van 100 mg iminiumtussenprodukt met formule 6 in 6 ml ontgaste methanol bij -20 °Cwerd155 mg (6 equivalenten) 1,4-di-hydro-1-(natriumisobutyl-1-carboxylaat)-nicotinamide met formule 32 toegevoegd in 6 ml methanol onder een positieve argonatmosfeer, waarbij het re-10 ductiemiddel in één keer werd toegevoegd. Na 45 minuten bij deze temperatuur werd omgekeerde fase HPLC-analyse uitgevoerd, zoals boven beschreven, waarbij naast andere produkten de vorming werd aangetoond van enamine met formule 8 en 3',4'-dehydrovinblastine met formule 7 in een verhouding van 3,2:1 (opbrengst 80%).

15 2) Het uitvoeren van de bovenvermelde reactie bij -40 °C gaf na 60 minuten enamine met formule 8 en 3',4l-dehydrovinblastine met formule 7 in een verhouding van 4,2:1 (opbrengst 85%).

Voorbeeld X

De bereiding van vinblastine met formule 1 door oxidatie van ena-20 mine met formule 8 tot iminiumtussenprodukt met formule 16 met lucht in aanwezigheid van i jzerdIDchloride bij een hoge verdunning (methode 5).

De oplossing die enamine met formule 8 bevatte (stap K(2)), verkregen uit 200 mg van het iminiumtussenprodukt met formule 6 werd vijfvoudig verdund met methanol voordat de oxidatie plaatshad (totaal volume 120 ml).

25 Daarna werd 75 mg (2 equivalenten) ijzerdIDchloride toegevoegd en lucht werd door de oplossing geborreld bij 0 °C gedurende 20 minuten. Daarna werd 200 mg natriumboriumhydride toegevoegd en de oplossing onder verlaagde druk ingedampt voordat 100 ml water werd toegevoegd en extractie met 3 x 200 ml ethylacetaat werd uitgevoerd. De gekombineerde organische extracten werden 30 gedroogd over Na2S0^ en het oplosmiddel werd onder verlaagde druk ingedampt. Het ruwe produkt werd kolomchromatografisch gezuiverd (silicagel, TLC-zuiver-heid, 15 g). Het eluëren met ether: chloroform (10:7) gaf 18 mg 3',4'-dehydro-vinblastine met formule 7, hetgeen overeenkomt met een opbrengst van 11%. Verder elueren met ether:chloroform: methanol (10:7:0,5) gaf 62 mg vinblas-35 tine met formule 1 (opbrengst 37%).

.8801966

Claims

1. Werkwijze voor de bereiding van verbindingen weergegeven door de formule 21,22 en 23 waarbij in formule 21 alkyl = CH^ of waarbij n = 1-5, R1 = CH3 of CHO, R2 = H of CO-alk, R3 = H, R4 = COO-alk of C0NR13ru 5 waarbij R^ en R^ kunnen worden gekozen uit de groep bestaande uit waterstof, alkyl, gesubstitueerde alkyl, aryl of gesubsitueerde aryIfuncties, Z = -CH=CH- of -CHp-CHp-, R = formule 22 of 23, R? = H of COO-alk, Rg = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R? = H, OH, 0-alk, OCO-alk of alkyl, R1Q = H, OH, 0-alk, OCO-alk, R^ = H of COO-alk, R12 = H of alkyl, 10 waarbij de werkwijze voor de bereiding van een dimeer afgeleid van een indooleenheid van de natuurlijke iboga-alkaloid familie die een aza bicyclo-octaangedeelte en een dihydroindooleenheid bevat van natuurlijk Aspidosperma en Vinca alkaloïde families, waarbij de stereochemie' van de koolstof-koolstofbinding tussen deze twee eenheden identiek is met die 15 van vinblastine, met het kenmerk, dat de werkwijze wordt uitgevoerd door a) de vorming van een N-oxide tussenprodukt in de koude bij een temperatuur van -70 °C tot +40 °C uit de indooleenheid door oxideren van de stikstofbrug en zonder afscheiden van het tussenprodukt, b) behandelen van het N-oxide indooltussenprodukt in aanwezig-20 heid van een stof gekozen uit de groep bestaande uit azijnzuuranhydride, gehalogeneerd azijnzuuranhydride en acetylchloride ter bewerkstelliging van een Polonovski-type fragmentatiereactie, c) zonder afscheiding van het produkt uit stap b) het koppelen van het reactieprodukt met een dihydroindooleenheid in aanwezigheid van 25 azijnzuuranhydride, gehalogeneerd azijnzuuranhydride en acetylchloride bij een lage temperatuur van ongeveer -70 °C tot +40 °C onder inerte omstandigheden, d) het produkt uit c) wordt afgescheiden door verdampen van het oplosmiddel, bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van -20 °C 30 tot 0 °C, e) het produkt uit stap d) wordt gereduceerd door 1,4-dihydropyri-dineverbindingen weergegeven door formule 9, waarbij R^ en R,- in formule 9 carbonzure esters (COO-alk) zijn en R^, R^, R^ en R^ zijn gekozen uit een groep bestaande uit H, alkyl, aryl (Hantzch ester serie) of N-gesubsitueerde 35 1,4-dihydronicotin amiden waarbij R^ een gesubsitueerde alkyl of een gesubsitueerde arylfunctie is en R^ is CONR^Rg, waarbij Rj en Rg zijn gekozen uit een groep bestaande uit waterstof,alkyl of arylfunctie, .8801966 -19- 27662/Vk/pr f) het produkt uit stap e), hetgeen een enamine is met formule 8, wordt afgescheiden door verdampen van het oplosmiddel/ bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van ”20 °C tot 0 °C, g) het produkt uit stap e), hetgeen een oplossing is van het 5 enamine met formule 8 wordt 5 tot 50-voudig verdund door hetzelfde toegepaste oplosmiddel/ bij voorkeur in het gebied van 8 tot 12-voudig bij een temperatuur van 0 °C tot “70 °C/ bij voorkeur lager dan -40 °C, h) het enamine verkregen in stap f) of de enamineoplossing verkregen in stap g), wordt gebruikt ter bereiding van iminiumtussenprodukten IQ met formule 16 of 16a door een aantal oxidatieve bewerkingen met inbegrip van: 1. geregeld beluchten/oxidatie waarbij een oplossing van het enamine wordt geroerd aan de open lucht of met een stroom lucht/zuurstof die door de oplossing wordt geborreld/ 15 2) zoals vermeld in 1) maar onder toevoeging van een metaaUon/ 3. zoals vermeld in 1) maar onder toevoeging van een flavine-coenzym zoals weergegeven door formule 12 om in situ het corresponderend 1/5-didyroflavinecoenzym te ontwikkelen zoals weergegeven door formule 13, 4. zoals genoemd onder 1) maar onder toevoeging van waterstof-20 peroxide en/of hydroperoxide zoals weergegeven door formule R-00H waarbij R is alkyl of aryl, i) het produkt, te weten(een)iminiumtussenprodukt(en) verkregen in stap h) wordt afgescheiden door het verdampen van het oplosmiddel/ bij voorkeur bij een lage temperatuur in het gebied van -20 C tot 0 °C, en 25 j) het produkt verkregen in stap i) of de oplossing met het iminiumtussenprodukt verkregen in stap h) wordt omgezet tot de gewenste verbindingen met formule 21, waarbij vinblastine en vincristine voorbeelden zijn en leurosidine (formule 35) door reductie met alkalimetaalboriumhydride (NaBH^, KBH^, LiBH^) in geschikte oplosmiddelen (organische oplosmiddelen 30 en/of water) zoals toegepast bij de oxidatieve bewerkingen van stap h).

2 Werkwijze volgens conclusie 1/ met het kenmerk, dat het afschei den van de tussenprodukten zoals in de stappen 1(d), 1(f) en 1(i) achterwege blijft en de gehele werkwijze vanaf de indooleenheid (met formules 2,22 of 23) en de dihydroindooleenheid (met formule 21 R = H) tot het eindprodukt 35 met formule 21 wordt uitgevoerd in een bewerking in één vat. .8801966 -20- 27662/Vk/pr

3. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat een N-oxide- indooltussenprodukt wordt gekoppeld met een dihydroindooleenheid en wordt gereduceerd door 1,4-dihydropyridineverbindingen weergegeven door formule 9, vermeld op het formuleblad, waarbij R^ en in formule 9 carbonzure 5 esters zijn (C00-alkyl) en R^, R^, R^ en R6 zijn gekozen uit de groep bestaande uit H, alkyl, aryl (Hantzch ester serie) of N-gesubsitueerde 1,4-dihydronicotinamiden waarbij R<| een gesubsitueerde alkyl of gesubsitueerde arylfunctie is en R^ is CONR^Rg, waarbij R^ en Rg worden gekozen uit de groep bestaande uit waterstof, alkylof arylfuncties.

4. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat deze de stap omvat ter bereiding van een enamine en oxideren van het enamine tot het imini umtussenprodukt (formule 16 en 16a) door een aantal oxidatieve bewerkingen met inbegrip van : a) geregelde beluchting/oxidatie waarin een oplossing van het 15 enamine wordt geroerd aan de open lucht met een stroom lucht/zuurstof die door de oplossing wordt geborreld, b) als in stap (h) (1) maar onder toevoeging van ijzerCIIDchloride, c) als in stap (h) (1) maar onder toevoeging van een flavineco-enzym zoals weergegeven door formule 12 om in situ het corresponderende 1,5- 20 dihydroflavinecoenzym te ontwikkelen zoals weergegeven door formule 13.

5. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat stap (h) (1) wordt uitgevoerd, doch onder toevoeging van waterstofperoxide en/of hy-droperoxiden zoals weergegeven door formule R-00H, waarbij R wordt gekozen uit een groep bestaande uit alkyl en aryl.

5 Aan een oplossing van 500 mg (1,5 mmol) catharanthine met formule 2 in 4,5 ml droge dichloromethaan bij - 15 °C onder een positieve argonat-mosfeer werd in één keer 330 mg (1,9 mmol) m-chloorbenzoëzuur toegevoegd en het mengsel werd gedurende 5 minuten geroerd bij -10 tot -15 °C. Hierna werd het reactiemengsel afgekoeld tot -40 °C en een oplossing van 450 mg 10 (1 mmol) vindoline met formule 3 in 1 ml dichloormethaan werd toegevoegd, onmiddellijk gevolgd door toevoeging van 1 ml (7,1 mmol) trifluorazijnzuur-anhydride. Na 2 uren bij -60 °C werden de vluchtige produkten verwijderd onder verlaagde druk (hoogvacuümpomp) en 12 ml droge, ontgaste methanol werd toegevoegd na spoelen van het systeem met argon. De verkregen oranje-oplos-15 sing werd gekleurd tot -40 °C en een oplossing van 1,5 g (6 mmol) 1,4-dihydro-1-(natriumisobutyl-1-carboxylaat)-nicotinamide met formule 32 werd in 12 ml droge, ontgaste methanol toegevoegd onder een positieve argonatmosfeer. Nadat de reductie was beëindigd,( waargenomen door omgekeerde fase HPLC) werd 300 ml koude methanol toegevoegd, de oplossing gehouden op een temperatuur 20 tussen -5 en 0 °C. Daarna werd 330 mg (2 mmol) ijzerdlDchloride toegevoegd en droge Lucht door de oplossing geborreld bij een snelheid van 60 ml/min gedurende een periode van 20 minuten. Hieraan werd 1 g natriumboriumhydride toegevoegd en de oplossing ingedampt onder verLaagde druk (bewerkt met een waterstraalpomp) voor de toevoeging van 100 ml water en de extractie werd 25 uitgevoerd met 3 x 150 ml ethylacetaat. Het gekombineerde organische extract werd gedroogd over Na2SO^ en het oplosmiddel werd ingedampt onder verlaagde druk ter verkrijging van het ruwe produkt dat chromatografisch werd gezuiverd zoals eerder aangegeven ter verkrijging van 95 mg 3',4,-dehydrovin-blastine met formule 8, overeenkomend met een opbrengst van 12%, 315 mg 30 vinblastine met formule 1 (overeenkomend met 30% opbrenst) en 130 mg leurosidine met formule 35, overeenkomend met een opbrengst van 16%.

35 Conclusies. < 8801 966 -18- 27662/Vk/pr

6. Werkwijze volgens conclusie 4, met het kenmerk, dat het tussen- produkt van iminium (formules 16 en 16a), afgescheiden door verdampen van het oplosmiddel bij een lage temperatuur in het gebied van -20 °C tot 0 °C,wordt gereduceerd tot een Vinca alkaloïde gekozen uit de groep bestaande uit vinblastine en leurosidine door reductie met alkalimetaalboriumhydride. .8801966