NL8601290A - Bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit afgeleid van wortelcelweefselkweken. - Google Patents
Bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit afgeleid van wortelcelweefselkweken. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8601290A NL8601290A NL8601290A NL8601290A NL8601290A NL 8601290 A NL8601290 A NL 8601290A NL 8601290 A NL8601290 A NL 8601290A NL 8601290 A NL8601290 A NL 8601290A NL 8601290 A NL8601290 A NL 8601290A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- cells
- dye
- daucus carota
- anthocyanin
- cell line
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B61/00—Dyes of natural origin prepared from natural sources, e.g. vegetable sources
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
* * -1-
Bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit afgeleid van wortelcelweefselkweken.
Deze uitvinding heeft betrekking op de bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof van hoge intensiteit bereid uit een in de natuur voorkomen anthocya-nine gesinthetiseerd door cellen in de kweek van een cel-5 lijn van Daucus carota (wortel). De rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit is nuttig als een kleurstof in voedselprodukten, cosmetische produkten en farmaceutische produkten en is stabiel over een ruim pH traject onder uiteenlopende omstandigheden.
10 Anthocyaninen zijn een belangrijke en wijd ver spreide groep van kleurstoffen die in de natuur worden gevonden. Anthocyaninen zijn in water oplosbare kleurpigmen-ten die in de eerste plaats worden gevonden in tot de hogere planten behorende bloemen, vruchten en groenten. De 15 anthocyaninen die worden gebruikt ter bereiding van de natuurlijke kleurstof volgens de uitvinding is afgeleid van de cellijn Daucus carota. De cellijn van Daucus carota brengt een overmaat voort van een enkelvoudig anthocyanine dat een secundair metaboliet is. Het anthocyanine afgeleid 20 van de cellijn van Daucus carota is een intens gekleurd, in water oplosbaar pigment waarvan de kleuring sterk varieert van donker rood tot purper en blauw afhankelijk van het pH niveau.
Het Amerikaanse octrooischrift 4.172.902 beschrijft, 25 dat het bekend is, dat de meeste in de natuur voorkomende anthocyaninen intens zijn gekleurd bij pH niveau's beneden 3, maar dat anthocyaninen praktisch kleurloos zijn in een omgeving met pH waarden boven 3. Dit octrooischrift beschrijft ook het anthocyanine, peonidine 3-(dicaffeylsoforo-30 side)-5-glucoside afgeleid van "hemelsblauw" Morning Glory, dat volgens het octrooischrift nuttig is ter bereiding van stabiele kleuren in voedsel en dranken bij pH waarden van ongeveer 2,0 tot ongeveer 8,0.
Bovendien is algemeen bekend dat Daucus carota 35 cellen kunnen worden gekweekt in celsuspensie kweken a P C 1 2 3 y « -2- 4 * in een begrensd vloeistofmedium en voorts in callus culturen die worden gekweekt op schalen die hetzelfde begrensde vloeistofmedium bevatten als gebruikt wordt in de suspensie-kweken met de toevoeging van 1,0% agar. In het algemeen 5 vereist isolering van natuurlijke kleuren uit plantenbloe-men, vruchten of groenten echter het gebruik van de gehele plant veeleer dan cellen die gekweekt zijn in een weefsel-culture. Als gevolg van het gebruikmaken van een hele plant is de groei van de plant langzamer, minder manipuleer-10 baar en blijft beperkt ten gevolge van de natuurlijke geografische beperkingen zoals klimaat, bodem, water, schadelijke organismen, seizoengroei, transport, etc.
Een langs natuurlijke weg bereide kleurstof is van aanzienlijk belang en van commercieel belang ten ge-15 volge van de huidige behoefte om de gewoonlijk gebruikte kunstmatige koolteer (van het azotype) kleurstoffen als additieven in voedingsprodukten te vervangen. Van de kunstmatige koolteerkleurstoffen neemt men op het ogenblik aan dat het carcinogene stoffen zijn. Anthocyaninen hebben ver-20 scheidene voordelen als een langs natuurlijke weg bereide kleurstof in die zin dat anthocyaninen generaties lang aanwezig zijn geweest in voedselketens van mens en dier zonder klaarblijkelijke ongunstige effecten op de gezondheid. Voorts doen anthocyaninen hel gekleurde rode kleurscharkeringen 25 ontstaan en zijn in water oplosbaar. In het algemeen zijn anthocyaninen echter niet stabiel over een ruim pH traject hetgeen noodzakelijk is om te bereiken dat een natuurlijke kleurstof nuttig is als een kleurstof in voedingsprodukten.
Een doel van de uitvinding is het bereiden van een 30 hoge intensiteit rode natuurlijke kleurstof bereid uit een anthocyanine afgeleid van de cellijn van Daucus carota (wortel).
Een verder doel van de uitvinding is het bereiden van een rode natuurlijke kleurstof die stabiel is over een 35 ruim pH traject van ongeveer 2,0 tot 7,0 onder uiteenlopende omstandigheden.
Nog een doel van de uitvinding is het gebruiken van een gemodificeerd celweefselkweekmediurn ter optimale bereiding van grote hoeveelheden anthocyanine uit de cel-40 lijn van Daucus carota.
8 6 Ö12 9 6
* V
-3-
Nog een ander doel van de uitvinding is het verschaffen van een langs natuurlijke weg bereide kleurstof die bruikbaar is als een kleurstof voor voedingsprodukten, cosmetische produkten en farmaceutische produkten.
5 Bovenstaande doelen worden bereikt door de onderha vige uitvinding die ook het extra voordeel heeft, ten gevolge van het kweken van de wortelcellen in een celweefsel-cultuur, dat het mogelijk wordt gemaakt dat de Daucus carota cellen sneller en gemakkelijker worden gemanipuleerd 10 zodat de opbrengst van de gewenste verbinding wordt vergroot en natuurlijke geografische beperkingen zoals klimaat, bodem, water, schadelijke organismen, seizoengroei, transport, etc worden vermeden- De eerste stap bij de bereiding van een hoge intensiteit rode natuurlijke kleurstof volgens 15 de uitvinding is het kweken van de cellijn van Daucus carota (wortel) hetgeen een in water oplosbaar anthocyanine doet ontstaan. Het kweken van Daucus carota vindt plaats in een celweefselkweek die kan zijn hetzij een verhardingkweek hetzij een celsuspensiekweek. Het voorkeur-medium dat gebruikt 20 wordt in de celweefselkweek is een gemodificeerd Gambourg B5 medium. Volgend op de beginkweking van de wortelcellen, worden de wortelcellen periodiek sub-gekweekt met een enting in vers medium. De cellen worden geoogst na het sub-kweken door het medium uit te filtreren en daarna ofwel de cellen 25 vers te extraheren ofwel de cellen te extraheren na bevriezing van de cellen. Zuivering van het celextract wordt daarna uitgevoerd teneinde het anthocyanine te isoleren. Het. anthocyanineconcentraat wordt bij voorkeur gevriesdroogd tot een poeder. Het Daucus carota celextract is intens gekleurd 30 rood tot purper en blauw bij zure pH niveau's tot ten hoogste 7,0. De kleurstof die bereid wordt onder toepassing van de uitvinding is stabiel bij pH niveau's die liggen in het traject van 2,0 tot 7,0 onder uiteenlopende omstandigheden.
Fig.1 geeft weer de relatieve intensiteit van kleur 35 van de Daucus carota anthocyaninetoebereiding vergeleken met de relatieve intensiteit van kleur van Overseal Foods, Ltd.'s Natural Red Standard Powder (OV-RSP) bij pH niveau's die liggen in het traject van 2,0 tot 7,0 op dag 0, waarbij gebruik wordt gemaakt van de optische dichtheid van de Daucus 40 carota anthocyanine bij pH 2,0 als 100%.
SSO1290 -4-
Pig.2 geeft weer het percentage van retentie van de optische dichtheid op dag 0, na één maand voor pH niveau's van 2,0 tot 5,0 van de Daucus carota anthocyaninetoeberei-ding vergeleken met de OV-RSP rode kleur onder uiteenlopende 5 behandelingen, daaronder begrepen bevriezen, koelen, kamertemperatuur in donker, kamertemperatuur in licht, 5 min. lang verhitten tot 90°C gevolgd door kamertemperatuur en licht, en het brengen in een autoclaaf bij 120°C en 1,4 atmosfeer gedurende 20 min. gevolg door kamertemperatuur en 10 licht.
Fig.3 geeft weer het percentage van retentie van optische dichtheid op dag 0, na drie maanden voor pH niveau's van 2,0 tot 5,0 van de Daucus carota anthocyaninetoeberei-ding onder uiteenlopende behandelingen, daaronder begrepen 15 bevriezen, koelen, kamertemperatuur in duisternis, kamertemperatuur in licht, verhitten tot 90°C gedurende 5 min. gevolgd door kamertemperatuur en licht, en het brengen in een autoclaaf bij 120°C en 1,4 atmosfeer gedurende 20 min. gevolgd door kamertemperatuur en licht.
20 Fig.4 geeft weer het percentage van retentie van optische dichtheid op dag 0, na 6 maanden voor pH niveau's 2,0 tot 5,0 van de Daucus carota anthocyaninetoebereiding onder uiteenlopende behandelingen, daaronder begrepen bevriezen, koelen, kamertemperatuur in duisternis, kamertem-25 peratuur in licht, verhitting tot 90°C gedurende 5 min. gevolgd door kamertemperatuur en licht, en het brengen in een autoclaaf bij 120°C en 1,4 atmosfeer gedurende 20 min. gevolgd door kamertemperatuur en licht.
Gedetailleerde beschrijving.
30 _Voorkeur-uitvoeringsvorm van de uitvinding.
Van Daucus carota is bekend, dat het wordt gekweekt in celsuspensiecultures in een begrensd vloeistofmedium en voorts in vereeltingscultures gekweekt op schalen bevattende hetzelfde begrensde vloeistofmedium met 1% agar.
35 Standaardcelweefsel kweekmedium kan worden gebruikt ter cultivering van de cellijn van Daucus carota, zoals het Gambourg B5 medium. Het Gambourg B5 medium bevat de volgende elementen per liter: •530 129 6 4 ^ -5- E lemen t_Hoeveelheid (NH4)2S04................ 134 mg
NaH2P04.H20.............. 150 mg KNO 2..................... 2,5 mg 5 MgS04.3H20............... 250 mg
CaCl2.2H20............... 150 mg
MnS04.H20................ 10 mg H3B03.................... 3 mg
SnS04.7H20............... 2 mg 10 Na2Mo04.2H20............. 2,5 x 10_1 mg
CaS04.5H20............... 2,5 x 10~2 mg
CoC12.6H20............... 2,5 x 10~2 mg KI....................... 7,5 x 10“1 mg mesoinositol............. 100 mg 15 nicotinezuur............. 1 mg thiamine....... 10 mg pyridoxine............... 1 mg sucrose............... 30 mg
NaPe EDTA................ 30 mg 20 2,4-dichlcorfenoxyazijn- zuur..................... 1 mg
Het voorkeur-medium te gebruiken in de onderhavige uitvinding is een gemodificeerd Gambourg B5 medium, dat de 25 optimale bereiding van grote hoeveelheden anthocyanine mogelijk maakt. De modificatie van Gambourg's B5 medium omvatte veranderingen in de hoeveelheid hormoon, fosfaat, het type suiker dat gebruikt wordt als een koolstofbron en de toevoeging van het anti-neerslagmiddel. Het gemodificeerd Gam-30 bourg B5 medium dat wordt gebruikt in de celweefselkweek in de onderhavige uitvinding bevat de volgende elementen per liter: §801230 -6- E lemen t _Hoeveelheid (NH4)2S04................ 134 mg
NaH2P04.H20.............. 75 mg KN03..................... 2,5 mg 5 MgS04.3H20............... 250 mg
CaCl2.2H20............... 150 mg
MnS04.H20................ 10 mg H^BO^.............. 3 mg
ZnS04.7H20............... 2 mg 10 Na2Mo04.2H20............. 2,5 x 10-1 mg
CaSC>4.5H20............... 2,5 x 10 2 mg
CoC12.6H20............... 2,5 x 10“2 mg KI....................... 7,5 x 10~1 mg mesoinositol............. 100 mg 15 nicotinezuur............. 1 mg thiamine................. 10 mg pyridoxine............... 1 mg
Galactose................ 20 mg
NaFe EDTA................ 30 mg 20 2,4-dichloorfenoxyazijn- zuur..................... 0,1 mg nitrilotriazijnzuur...... 15 mg
De eerste stap in de onderhavige voorkeur-uitvoe-25 ringsvorm van de bereiding van een hoge-intensiteit rode natuurlijke kleurstof is het plaatsen van wortelcellen in een celweefselkweek met een gemodificeerd Gambourg B5 medium als boven beschreven en daarna het laten groeien van de wortelcellen. In verband met de onderhavige uit-30 eenzetting zal de bereiding van de natuurlijke kleurstof worden beschreven in termen van de wortelcellen die worden gekweekt in een celsuspensiekweek. Opgemerkt wordt, dat een verhardingskweek ook kan worden gebruikt.
De wortelcellen in suspensie worden daarna sub-35 gekweekt op een tweewekelijkse basis met een 10% inoculum in een vers medium. De kolf die de celkweek bevat, wordt gehouden op 25 tot 29°C in een 16:8 uurs licht:duisterniscyclus aan een roterende schudinrichting met 100 omwentelingen per minuut, dat wil zeggen de celsuspensiekweek wordt 40 16 uur lang belicht gevolgd door 8 uur lang verblijf in de 8301230 -7- duisternis.
De kweekcellen worden 12 tot 14 dagen na het sub-kweken geoogst door het medium uit te filtreren en daarna ofwel (1) de cellen vers te extraheren met zure methanol 5 of zure ethanol (0,1% HC1); (2) de cellen te extraheren met zure methanol of zure ethanol (0,1% HC1) na bevriezen van de cellen, of (3) extraheren van de cellen met heet water na bevriezing van de cellen.
De eerste trap in de zuivering van de cellen en de 10 isolering van het anthocyanine in de wortelcellen is de concentrering van het extract tot droog in een roterende verdamper gevolgd door de resolubilisering van het extract in dubbel gedestilleerd water. Daarna wordt het ruwe geconcentreerde extract behandeld met een kleine hoeveelheid van 15 een jonenwisselaarhars, zoals Whatman's DE-52 jonenwisse-laarhars, ter verwijdering van sterk bindende verbindingen. Het materiaal wordt gecentrifugeerd met 210 x g teneinde de hars te verkorrelen. Het bovendrijvend materiaal wordt geneutraliseerd tot pH 7,30 en aangebracht op een kolom van 20 DE-52 jonenwisselaarhars die in evenwicht is gebracht met 15 mM natriumacetaat met een pH van 7,30. De kolom wordt geëlueerd, eerst met 15 mM natriumacetaat met een pH van 7,30 ter verwijdering van los gebonden verontreinigingsmate-rialen en daarna met 1% azijnzuur ter vrijmaking van het 25 sterker gebonden anthocyanine. Monsters uit de anthocyanine-bevattende fracties werden verdund met 1% azijnzuur en afgetast in een ÜV-VIS spectrofotometer, zoals de Bausch & Lomb spectronic 2000, ter bevestiging van de aanwezigheid van anthocyanine. De fracties worden daarna samengevoegd 30 en gelyofiliseerd ter levering van een niet-hygroscopisch poeder dat 2-3% van het droge gewicht van de cel voorstelt en leidt tot 20 tot 25 optische dichtheid/mg wanneer het wordt opgelost in 1% azijnzuur. Een rode natuurlijke kleurstof wordt verkregen wanneer het concentraat wordt gevries-35 droogd tot een poeder.
Teneinde de hoge intensiteit van de bereide rode natuurlijke kleurstof aan te tonen, werden de kleurintensiteit of optische dichtheid (OD) en de 71 (lambda) maximale golflengte bepaald voor de anthocyaninische rode kleurstof 40 voor de pH niveau's 2,0 tot 7,0 en vergeleken met de opti-860 1 20 0 -8- sche dichtheid en de a (lambda) maximale golflengte bij pH niveau's 2,0 tot 7,0 van een in de handel verkrijgbare an-thocyaninetoebereiding, dat wil zeggen Overseal Foods Ltd.'s Natural Red Standard Powder (OV-RSP), gefabriceerd door 5 Overseal Foods Ltd., gevestigd in Engeland. Oplossingen die gebruikmaken van de anthocyaninische rode kleurstof afgeleid van Daucus carota volgens de uitvinding en Overseal Foods Ltd.'s Natural Red Standard Powder werden bereid in een steriele 0,1M citraatbuffer. De twee bereide oplos-10 singen werden daarna verdeeld in monsters waarvan de pH < werd ingesteld door de toevoeging van waterstofchloride of natriumhydroxyde, zodat een monster werd verkregen voor elk pH niveau van 2,0 tot 7,0. Daarna werden de oplossingen verdund zodat de concentratie van elke oplossing 1,0 g/1 15 was. De λ. (lambda) maximale golflengte in nanometer (nm) en de optische dichtheid werden gemeten in een Bausch &
Lomb Spectronic 2000 spectrofotometer. De resultaten van de vergelijkingen zijn opgesomd in tabel 1 en zijn grafisch weergegeven in fig.1.
20 Tabel 1
Daucus carota_OV-RSP_ pH max OD relatieve max OD relatieve (nm) intensiteit (nm) intensiteit _(%) _(%) 25 2,0 525,1 1,135 100,0 522,9 0,693 61,1 3.0 525,7 1,146 101,0 523,9 0,493 43,4 4.0 528,1 0,956 84,0 530,3 0,289 25,5 5.0 537,7 0,659 58,0 535,5 0,213 18,8 30 6.0 545,9 0,620 55,0 560,3 0,261 23,0 7.0 584,1 0,785 69,0 571,1 0,274 24,1
De resultaten van het vergelijken; onderzoek tussen 35 de Daucus carota anthocyaninetoebereiding en OV-RSP toebereiding tonen aan dat de Daucus carota anthocyaninetoebereiding een kleurintensiteit, dat wil zeggen optische dichtheid, heeft van 1,6 tot 3,3 x zo sterk als die van OV-RSP bij alle onderzochte pH niveau's. Verder is, zoals is toegelicht in fig.1, 40 de relatieve intensiteit van kleur van de Daucus carota 3801290 -9- toebereiding consistent hoger dan de relatieve intensiteit van kleur van de OV-RSP toebereiding.
De stabiliteit van het anthocyanine van Daucus carota en OV-RSP werden ook onderzocht en vergeleken voor 5 de pH niveau's 2,0-5/0 onder uiteenlopende behandelingen daaronder begrepen bevriezen, koelen, bij kamertemperatuur belichten, bij kamertemperatuur in duisternis, verhitten van de toebereiding tot 90°C gedurende 5 min. gevolgd door kamertemperatuur en licht, en brengen in een autoclaaf bij 10 120aC en 1,4 atmosfeer gedurende 10 min. gevolgd door kamer temperatuur en licht. De pH niveau's van 6,0 - 7,0 werden uit deze onderzoeken verwijderd omdat geen produkt stabiel is bij deze pH niveau's tenzij zij in bevroren toestand worden gehouden.
15 De monsters van de anthocyanine kleurstof afgeleid van Daucus carota en OV-RSP werden na 1 maand uit de boven beschreven behandelingen verwijderd ter meting van de Λ(lambda) maximale golflengte en optische dichtheid.
De resultaten na 1 maand voor de monsters onder de uiteen-20 lopende bovenvermelde omstandigheden zijn grafisch weergegeven in fig.2 voor de anthocyaninische kleurstof die is afgeleid van Daucus carota en voor de OV-RSP kleurstof.
Het Daucus carota produkt behield meer van zijn oorspronkelijke kleurintensiteit dan bij OV-RSP het geval was bij 25 enig onderzocht pH niveau. De onderzoeksresultaten, zoals weergegeven in fig.2, tonen aan, dat het Daucus carota produkt 75-100% van zijn oorspronkelijke kleurintensiteit behoudt bij pH niveau's 2,0-3,0 onder alle behandelingen.
Het Daucus carota produkt bij pH niveau's 4,0-5,0 bevatte 30 15-80% van zijn oorspronkelijke kleurintensiteit afhankelijk van de behandeling. De OV-RSP bevatte, ter vergelijking, bij pH niveau's van 2,0-3,0 0-60% van zijn oorspronkelijke kleurintensiteit na 1 maand afhankelijk van de door het monster ondergane behandeling. Bij pH niveau's 4,0-5,0 verloor 35 OV-RSP al zijn kleur na 1 maand onder de omstandigheden van kamertemperatuur belicht of in duisternis, bij 90°C en na inbrengen in een autoclaaf.
Teneinde voorts de stabiliteit aan te tonen van de gekweekte anthocyaninische kleurstof afgeleid van 40 Daucus carota, werden gedurende een periode van 3 maanden «301230 -10- en een periode van 6 maanden onderzoeken uitgevoerd onder gebruikmaking van de anthocyaninische rode natuurlijke kleurstof onder uiteenlopende omstandigheden, daaronder begrepen bevriezen, koelen, bij kamertemperatuur belicht 5 en in duisternis, verhitten tot 90 °C gedurende 5 min.
gevolgd door kamertemperatuur en belichting, en brengen in een autoclaaf bij 120°C en 1,4 atmosfeer gedurende 20 min. gevolgd door kamertemperatuur en belichting.
De onderzoeksresultaten van het Daucus carota 10 produkt na de periode van 3 maanden is grafisch toegelicht in fig.3. Na 3 maanden bewaren in de vriesinrichting, koelinrichting of bij kamertemperatuur in duisternis, behield het Daucus carota produkt meer dan 80% van zijn oorspronkelijke kleurintensiteit bij een pH niveau van 2,0-3,0. 15 Bij pH niveau's van 4,0-5,0, waren het bevriezen en koelen • in staat om meer dan 75% van de kleur te beschermen. Bewaren bij kamertemperatuur in duisternis leidde tot enigszins verder verlies van kleur, vergeleken met de periode van 1 maand, bij pH niveau's van 4,0-5,0. Bewaren bij kamertem-20 peratuur onder belichting leidde tot een volledig verlies van kleur bij pH niveau's 4,0-5,0.
De resultaten van onderzoek na de periode van 6 maanden voor het Daucus carota produkt is grafisch toegelicht in fig.4. Na 6 maanden bewaren in de vriesinrichting, 25 koelinrichting of bij kamertemperatuur in duisternis, waren de resultaten bij benadering hetzelfde als na 3 maanden.
Het enige onderscheidbare verschil na de periode van 6 maanden, vergeleken met na de periode van 3 maanden, was bij pH niveau 3,0 onder omstandigheden van verhitting tot 30 90°C gevolgd door kamertemperatuur en licht en na inbrengen in een autoclaaf. Onder deze omstandigheden bij pH niveau 3,0 had het Daucus carota produkt na 6 maanden een volledig verlies van kleur, terwijl na 3 maanden het Daucus carota produkt meer dan 50% van zijn kleur behield.
35 De Daucus carota cellijn brengt bij benadering 300 mg anthocyanine per liter celsuspensiekweek in 10 tot 12 dagen voort, hetgeen 2-3% van het droge gewicht van de cel voorstelt. Het celextract is intens van kleur rood tot purper en blauw bij zure pH niveau's tot ten hoogste 7,0.
40 Zoals aan een deskundige duidelijk zal zijn, $ β o i 9 q fl ·%? v ^ - 3» ij v ί » -1 1- kunnen uiteenlopende modificaties worden aangebracht binnen het kader van de in het voorafgaande weergegeven beschrijving. Dergelijke modificaties die binnen het vermogen van een deskundige ligt, vormt een deel van de onderhavige uit-5 vinding en zijn omvat door de bijgaande conclusies.
-conclusies- S8C12è0
Claims (15)
1. Werkwijze voor het bereiden van een kleurstof toebereid uit een anthocyanine gesynthetiseerd door cellen in een kweek van een cellijn Daucus carota, met het kenmerk , dat men
2. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het ken-15 merk, dat het medium van de celweefselkweek de volgende elementen per liter omvat· Element_Hoeveelheid (NH4)2S04................ 134 mg NaH2P04.H20.............. 75 mg KN03..................... 2,5 mg MgS04.3H20............... 250 mg CaCl2.2H20. . ............. 150 mg MnS04.H20................ 10 mg .................... 3 mg ZnS04.7H20............... 2 mg Na2Mo04-2H20............. 2,5 x 10~1 mg CaS04.5H20............... 2,5 x 10-2 mg CoC12.6H20............... 2,5 x 10 2 mg KI....................... 7,5 x 10-1 mg mesoinositol............. 100 mg nicotinezuur.......... 1 mg thiamine................. 10 mg pyridoxine. . ............. 1 mg Galactose................ 20 mg NaFe EDTA................ 30 mg ^ ^ Λ λ 2,4-dichloorfenoxyazi jn- Hh I? 1 '.4 V ^ ~ " zuur..................... 0,1 mg nitrilotriazi jnzuur...... 15 mg -13-
3-Werkwijze volgens conclusie 2, m e t het kenmerk, dat de kweek een verhardingskweek is en het medium agar insluit.
4. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het k e n -5 merk, dat de Daucus carota in suspensie worden sub- gekweekt op een twee-wekelijkse basis met 10% inoculum in een vers vloeistofmedium, waarbij de celkweek op 25-29°C wordt gehouden in een 16:8 uur licht .-donker cyclus in een roterende schudinrichting bij 100 omwentelingen per minuut. 1Q
5. Werkwijze volgens conclusie 1,met het kenmerk, dat de gekweekte cellen worden geoogst 12-14 dagen na het subkweken door uitfiltrering van het medium en daarna ofwel (1) vers extraheren van de cellen met 15 zure methanol of zure ethanol (0,1% HC1); (2) extraheren van de cellen met zure methanol of zure ethanol (0,1% HC1) na bevriezing van de cellen, of (3) extraheren van de cellen met heet water na bevriezing van de cellen.
5. Daucus carota cellen kweekt in een celweefsel- kweek; - de gekweekte Daucus carota cellen sub-kweekt; - de gekweekte cellen oogst; - de geëxtraheerde cellen zuivert ter isolering 10 van het anthocyanine; en - het geïsoleerde anthocyanine lyofiliseert ter levering van een in water oplosbaar anthocyaninisch poeder.
6. Werkwijze volgens conclusie 1, m e t het ken-20 merk, dat de zuivering van geëxtraheerde cellen ter isolering van het anthocyanine omvat - concentreren van het extract tot droog in een roterende verdamper gevolg door de resolubilisering van het extract in dubbelgedestilleerd water; 25. behandelen van het geconcentreerd extract met een ionenwisselaarhars; - centrifugeren van het behandelde extract bij 210 x g; - neutraliseren van het bovendrijvend materiaal 30 van het gecentrifugeerd extract tot een pH van 7,30 en aanbrengen van het geneutraliseerd bovendrijvend materiaal op een kolom van ionenwisselaarhars die in evenwicht is gebracht met 15 mM natriumacetaat met een pH van 7,30; en - elueren van de kolom met eerst 15 mM natrium-35 acetaat met een pH van 7,30, gevolgd door elueren van de kolom met 1% azijnzuur.
7. Gekleurde samenstelling gekenmerkt door 8501290 -14- een voedingsprodukt en een kleurstof, waarbij de kleurstof anthocyanine is, afgeleid van de cellijn van Daucus carota. 5
8.Gekleurde samenstelling gekenmerkt door een cosmetisch produkt en een kleurstof, waarbij de kleurstof anthocyanine is, die is afgeleid van de cellijn van Daucus carota. 10
9.Gekleurde samenstelling gekenmerkt door een farmaceutisch produkt en een kleurstof, waarbij de kleurstof het anthocyanine is, dat is afgeleid van de cellijn van Daucus carota. 15
10.Samenstelling volgens conclusie 7, gekenmerkt doordat de kleurstof stabiel is bij een pH in het traject van 2,0 tot 7,0.
11.Samenstelling volgens conclusie 8, gekenmerkt 20 doordat de kleurstof stabiel is bij een pH in het traject van 2,0 tot 7,0.
12.Samenstelling volgens conclusie 9, gekenmerkt doordat de kleurstof stabiel is bij een pH in het traject 25 van 2,0 tot 7,0.
13. Werkwijze voor het bereiden van een stabiele kleur in een voedingsprodukt met het kenmerk, dat men aan het voedingsprodukt een doeltreffende hoeveelheid 30 van een anthocyaninische kleurstof, die is afgeleid van de cellijn van Daucus carota, toevoegt.
14. Werkwijze voor het bereiden van een stabiele kleur in een cosmetisch produkt, met het kenmerk, 35 dat men aan het cosmetisch produkt een doeltreffende hoeveelheid van een anthocyaninische kleurstof, die is afgeleid van de cellijn van Daucus carota, toevoegt.
15. Werkwijze voor het bereiden van een stabiele kleur 40 in een farmaceutisch produkt, met het kenmerk, S§012 9 0 -15- da t men aan het farmaceutisch produkt een doeltreffende hoeveelheid van een anthocyaninische kleurstof, die is afgeleid van de cellijn van Daucus carota, toevoegt. 3601230
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/737,432 US4939086A (en) | 1985-05-24 | 1985-05-24 | Production and use of a high-intensity red natural colorant derived from carrot cell tissue cultures |
| US73743285 | 1985-05-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8601290A true NL8601290A (nl) | 1986-12-16 |
Family
ID=24963903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8601290A NL8601290A (nl) | 1985-05-24 | 1986-05-21 | Bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit afgeleid van wortelcelweefselkweken. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4939086A (nl) |
| JP (1) | JPS61289894A (nl) |
| AU (1) | AU594341B2 (nl) |
| BE (1) | BE904804A (nl) |
| CH (1) | CH670251A5 (nl) |
| DE (1) | DE3616521A1 (nl) |
| ES (1) | ES8801346A1 (nl) |
| FR (1) | FR2582312B1 (nl) |
| GB (1) | GB2175913B (nl) |
| IL (1) | IL78880A (nl) |
| IT (1) | IT1189881B (nl) |
| NL (1) | NL8601290A (nl) |
| SE (1) | SE8602363L (nl) |
| ZA (1) | ZA863890B (nl) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60130183T2 (de) | 2000-04-26 | 2008-05-21 | Smirnov, Vitaly Alekseevich | Anthocyaninfarbmittel und verfahren zu dessen herstellung aus organischem material |
| US20040131749A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-07-08 | Archer-Daniels-Midland Company | Phytochemicals from edible bean process streams |
| US20050048665A1 (en) | 2003-08-25 | 2005-03-03 | Nutriag Ltd. | pH colour indicator for use with agricultural compounds |
| CN104877390B (zh) * | 2015-05-12 | 2017-03-01 | 湖北紫鑫生物科技有限公司 | 一种高纯度黑胡萝卜色素的制备方法 |
| CN110484587B (zh) * | 2019-08-30 | 2023-07-25 | 重庆科技学院 | 一种提高萝卜花青素抗氧化性能的方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2309612A1 (fr) * | 1975-04-30 | 1976-11-26 | Ltvs | Procede d'extraction d'anthocyanes contenues dans des substrats vegetaux |
| US4172902A (en) * | 1978-05-26 | 1979-10-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Stable foods and beverages containing the anthocyanin, peonidin 3-(dicaffeylsophoroside)-5-glucoside |
| US4285982A (en) * | 1979-08-30 | 1981-08-25 | The Coca-Cola Company | Process for enhancing the sunlight stability of anthocyanic pigments |
| US4481226A (en) * | 1982-03-31 | 1984-11-06 | General Foods Corporation | Stabilized anthocyanin food colorant |
-
1985
- 1985-05-24 US US06/737,432 patent/US4939086A/en not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-05-16 DE DE19863616521 patent/DE3616521A1/de not_active Withdrawn
- 1986-05-21 NL NL8601290A patent/NL8601290A/nl not_active Application Discontinuation
- 1986-05-22 BE BE0/216690A patent/BE904804A/fr not_active IP Right Cessation
- 1986-05-23 AU AU57858/86A patent/AU594341B2/en not_active Ceased
- 1986-05-23 ES ES555305A patent/ES8801346A1/es not_active Expired
- 1986-05-23 CH CH2100/86A patent/CH670251A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-05-23 FR FR868607380A patent/FR2582312B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1986-05-23 IL IL78880A patent/IL78880A/xx unknown
- 1986-05-23 IT IT83362/86A patent/IT1189881B/it active
- 1986-05-23 SE SE8602363A patent/SE8602363L/ unknown
- 1986-05-23 GB GB8612587A patent/GB2175913B/en not_active Expired
- 1986-05-24 JP JP61120039A patent/JPS61289894A/ja active Pending
- 1986-05-26 ZA ZA863890A patent/ZA863890B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2582312B1 (fr) | 1991-03-15 |
| SE8602363D0 (sv) | 1986-05-23 |
| AU5785886A (en) | 1987-11-26 |
| GB2175913A (en) | 1986-12-10 |
| DE3616521A1 (de) | 1987-01-15 |
| GB8612587D0 (en) | 1986-07-02 |
| US4939086A (en) | 1990-07-03 |
| CH670251A5 (nl) | 1989-05-31 |
| AU594341B2 (en) | 1990-03-08 |
| BE904804A (fr) | 1986-09-15 |
| IL78880A (en) | 1991-03-10 |
| ES8801346A1 (es) | 1988-01-01 |
| ES555305A0 (es) | 1988-01-01 |
| GB2175913B (en) | 1989-03-15 |
| SE8602363L (sv) | 1986-11-25 |
| JPS61289894A (ja) | 1986-12-19 |
| IL78880A0 (en) | 1986-09-30 |
| IT8683362A0 (it) | 1986-05-23 |
| IT1189881B (it) | 1988-02-10 |
| FR2582312A1 (fr) | 1986-11-28 |
| ZA863890B (en) | 1987-02-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rahman et al. | Thermostable phycocyanin from the red microalga Cyanidioschyzon merolae, a new natural blue food colorant | |
| Remias et al. | Effects of realistically simulated, elevated UV irradiation on photosynthesis and pigment composition of the alpine snow alga Chlamydomonas nivalis and the arctic soil alga Tetracystis sp.(Chlorophyceae) | |
| Figueroa et al. | Red and blue light regulation of growth and photosynthetic metabolism in Porphyra umbilicalis (Bangiales, Rhodophyta) | |
| Blumwald et al. | Osmoregulation and cell composition in salt-adaptation of Nostoc muscorum | |
| Admiraal | Influence of light and temperature on the growth rate of estuarine benthic diatoms in culture | |
| Fan et al. | Effect of temperature and irradiance on growth of Haematococcus pluvialis (chlorophyceae) 1 | |
| Nozzolillo et al. | Seasonal changes in the phenolic constituents of jack pine seedlings (Pinus banksiana) in relation to the purpling phenomenon | |
| Mishra et al. | Preparation of highly purified C-phycoerythrin from marine cyanobacterium Pseudanabaena sp. | |
| Allen et al. | Changes in the visual pigments of trout | |
| NL8601290A (nl) | Bereiding en toepassing van een rode natuurlijke kleurstof met hoge intensiteit afgeleid van wortelcelweefselkweken. | |
| Weykam et al. | Seasonal photosynthetic performance of the endemic Antarctic red alga Palmaria decipiens (Reinsch) Ricker | |
| Hazen | The life history of Sphaerella lacustris (Haematococcus pluvialis) | |
| Zieslin | The development and causes of petal blackening and malformation of Baccara rose flowers | |
| Ben-Tal et al. | Environmental factors involved in colouration of flowers of Kangaroo Paw | |
| US5039536A (en) | Production and use of a high-intensity red natural colorant derived from carrot cell tissue cultures | |
| Gupta et al. | Vegetative survival of some wall and soil blue-green algae under stress conditions | |
| Staggenborg et al. | Sorghum grain yield reductions caused by duration and timing of freezing temperatures | |
| Li et al. | Induction and characterization of green pigmentation mutant in Porphyra yezoensis Ueda | |
| Marchioni et al. | Different growing conditions can modulate metabolites content during post-harvest of Viola cornuta L. edible flowers | |
| Lee | Chromatophores and their role in color change in the marine isopod Idotea montereyensis (Maloney) | |
| SOROKIN et al. | Fluctuations in the acid phosphatase activity of spherosomes in guard cells of Campanula persicifolia | |
| Sabir et al. | Quality changes in grape berry as affected by the use of different colored shade nets proposed to alleviate the adverse effects of climate change | |
| Torzillo et al. | Photosynthesis and biochemical characterization of the green alga Chlamydopodium fusiforme (Chlorophyta) grown in a thin-layer cascade | |
| Payne | Hydroid pigments. I. General discussion and pigments of the Sertulariidae | |
| Dawson | Light‐harvesting and light‐protecting pigments in simple life forms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BV | The patent application has lapsed |