NL8403494A - Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). - Google Patents
Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). Download PDFInfo
- Publication number
- NL8403494A NL8403494A NL8403494A NL8403494A NL8403494A NL 8403494 A NL8403494 A NL 8403494A NL 8403494 A NL8403494 A NL 8403494A NL 8403494 A NL8403494 A NL 8403494A NL 8403494 A NL8403494 A NL 8403494A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- compound
- technetium
- proteins
- marking
- metallic
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 20
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 title claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical group CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940056501 technetium 99m Drugs 0.000 claims description 11
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical group [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims description 10
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 7
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 7
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 6
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 5
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 5
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 4
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 4
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 4
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 150000004656 dimethylamines Chemical class 0.000 description 2
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 108010086578 technetium Tc 99m fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 210000001631 vena cava inferior Anatomy 0.000 description 2
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 150000001455 metallic ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003495 technetium Chemical class 0.000 description 1
- 150000003496 technetium compounds Chemical class 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F13/00—Compounds containing elements of Groups 7 or 17 of the Periodic Table
- C07F13/005—Compounds without a metal-carbon linkage
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
( < -1-
Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten) .
De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het met een metallisch element markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten.
Op tal van gebieden van bio-medisch onderzoek bestaat *% 5 behoefte aan stoffen, die gemarkeerd zijn met metalen. Deze stoffen kunnen bijvoorbeeld zijn: eiwitten met een bijzondere biologische activiteit, zoals (monoclonale) anti lichamen, of andere stoffen met een affiniteit voor speciale weefsels of organen. Of en in welke mate een dergelijke stof of monoclo-10 naai antilichaam zich ophoopt in die weefsels en organen, kan worden vastgesteld aan de hand van de speciale eigenschappen, die het markerende metaal heeft. Die eigenschappen kunnen bijvoorbeeld zijn: het uitzenden van radioactieve straling; het uitzenden van fluorescentie-licht na excitatie; of het 15 geven van bijzondere signalen bij NMR-metingen. Tot op heden ontbreken echter goede methoden om de genoemde stoffen metallisch te markeren.
Onder "goede" methoden wordt dan verstaan dat de resulterende gemarkeerde verbindingen, wanneer ze aan ZO patiënten worden toegediend 1) niet toxisch zijn; 2) voor intraveneuze toediening pyrogeen-vrij en steriel zijn; 3) in het algemeen een verantwoord humaan gebruik voor geneeskundige diagnostiek mogelijk maken.
25 Het metallische element moet goed "hechten" aan de betreffende verbindingen en het mag de biologische eigenschappen van die verbindingen niet beïnvloeden.
[Iet behulp van de werkwijze volgens de uitvinding warden gemarkeerde verbindingen verkregen die aan de gestelde 30 eisen voldoen. Deze werkwijze vertoont daartoe het kenmerk dat metallische- of metaal bevattende ionen in zuur milieu reageren met een dimethylamine op een temperatuur die afhankelijk is van het gekozen dimethylamine, waarna de aldus verkregen verbinding reageert met de te markeren verbinding in 35 een bufferoplossing, waarvan de pH afhangt van de betreffende verbinding,
De reactie van het metallische element met de te 8403494
w C
-2- markeren stof verloopt dus in twee stappen, die als volgt kunnen worden aangegeven.
4* χ uur 1) R - N - CH +metallisch ion + H ---reactieve verbinding
t 3 Y° C
5 CH3 2] reactieve verbinding+te markeren verbinding (bijvoorbeeld: eiwit) er> gemarkeerde verbinding 10 Om een goede - 90% of hoger - opbrengst te verkrijgen is een juiste keuze van de temperatuur Y essentieel. 0e waarde van Y is afhankelijk van het gebruikte dimethylamine.
Diverse dimethylamines kunnen in principe worden gekozen. Bijvoorbeeld: R = H. Dit dimethylamine is echter relatief 15 vluchtig. In een voorkeursuitvoering van de werkwijze volgens de uitvinding is het dimethylamine:dimethylformamide (DUF).
De voor de vereiste zuurgraad benodigde H+ ionen dient door toevoeging van een fysiologisch zuur te worden verkregen. Zoutzuur voldoet in deze. Goede resultaten worden in het 20 bijzonder verkregen bij gebruik van een tien-voudige moleculaire overmaat DUF t.o.v. HC1.
Bij gebruik van DUF dient de temperatuur Y tussen 135° C en 145° C te liggen. De pH van de bufferoplossing die wordt gebruikt in de tweede reactiestap is afhankelijk van de te 25 markeren verbinding.
In het bijzonder is de werkwijze volgens de uitvinding van belang voor het met een radionuclide markeren van biologisch actieve eiwitten.
In de nucleaire geneeskunde worden voor humane diagnos-30 tiek radioactieve stoffen (radiofarmaca) aan patiënten toegediend. Op basis van een (evt. in de tijd) te maken verdelings-patroon kan een diagnose worden gesteld of een bijdrage aan een diagnose worden gegeven. Het verdelingspatroon in het lichaam wordt d.m.v. fotografische procédé’s of d.m.v. beeldgeheugens 35 vastgelegd. Het resultaat hiervan is een zgn. scintigram. Algemene eisen die men aan radiofarmaca stelt zijn naast de al reeds in het algemeen met betrekking tot gemarkeerde verbindingen voor geneeskundige diagnostiek genoemde, dat het radionuclide een halfwaardetijd bezit, die onnodige stralings-40 belasting voorkomt.
8403494 -3-
Radiofarmaca zijn in het algemeen biologisch actieve stoffen, die een bepaalde affiniteit bezitten tot fysiologisch of pathofysiologisch weefsel, dan wel deelnemen aan (pathoj-fysiologische biochemische processen. In dit opzicht is altijd 5 veel belangstelling getoond voor het gebruik van radioactieve eiwitten als radiofarmaca. Deze interesse is de laatste jaren duidelijk naar voren gekomen toen opgewekte monoclonale antistoffen biologisch zeer actief bleken te zijn en toepasbaar bleken voor nucleair geneeskundige diagnostiek.
10 Scintigrafisch onderzoek m.b.v. eiwitten is in het verleden uitgevoerd met jodium-isotopen. In het "American Heart Journal”, no. 105 (1981] blz 614-618 en in "Radiotherapy and Oncology”, no. 1 (1984) blz 333-338, is het gebruik van 1-123, 1-125 en 1-131 beschreven. De halveringstijden van de 15 isotopen 1-125 en 1-131 (resp. 60 dagen en 8 dagen') maken deze nucliden minder geschikt vanwege relatief hoge stralen-belasting voor patiënt, milieu en nucleair geneeskundig personeel. Tevens is voor scintigrafisch onderzoek een gamma fotonen-energie van 100-200 keV van het radionuclide wenselijk 20 om een goede afbeelding (scintigram) te verkrijgen m.b.v. een zgn. gammacamera (een dergelijke gammafotonen-energie bezitten 1-125 en 1-131 niet). Het radionuclide 1-123 (Ti=14 uur, E(gamma)= 160 keV) bezit deze eigenschappen wel, doch dit isotoop is zeer duur, slecht verkrijgbaar en bevat radio-25 nuclidische onzuiverheden. Wel bleek de biologische activiteit van het volgens de ”Iodogen"-methode gemerkte eiwit behouden te blijven.
Ook het gebruik van het radionuclide technetium-99m in de nucleaire geneeskunde is bekend voor het markeren van 30 stoffens zie bijvoorbeeld het "Journal of Nuclear Medicine", no. 11 (1970) blz 147, of meer recent, het "Journal of Nuclear Medicine”, no. 23 (1982) blz 1011-1019. Het technetium-99m is relatief goedkoop, is eenvoudig te verkrijgen en bezit de relatief geringe fysische halveringstijd van 6 uur. De fotonen-35 energie van dit nuclide is 140 keV, terwijl geen bita-straling wordt uitgezonden.
Met behulp van de werkwijze volgens de uitvinding is het dus mogelijk eiwitten te markeren met een metallisch radio-clide met een relatief korte halfwaardetijd, waarbij de 40 biologische activiteit behouden blijft. Bij gebruik van DMF
8403494 -4- * * bleek bij een reactietemperatuur tussen 135° C en 145° C een radiochemische opbrengst van tenminste 95% te. worden verkregen.
Uitstekende resultaten bij het met behulp van de werk-5 wijze volgens de uitvinding markeren van eiwittenj waarbij volledig aan de gestelde eisen wordt voldaan, worden verkregen door te markeren met het op zich zelf voor dit doel al bekende technetium-99m met een reactietijd voor de eerste stap van tenminste 4 uur en met een reactietemperatuur van 140° C. Aan 10 de hand van een uitvoeringsvoorbeeld, waarbij een eiwit wordt gemarkeerd met behulp van technetium-99m, zal de werkwijze volgens de uitvinding nader worden toegelicht en zullen de resultaten en de analysemethoden worden besproken.
15 Uitvoeringsvoorbeeld
De reactie van Tc-99m aan het eiwit verloopt als volgt en onder de aangegeven reactieomstandigheden: Q Q m — A 1111 r 20 1. DMF (H - C - N - 0Ho)+ TcO. +HC1 ----> reactieve-Tc-99m
Ü CHS 141,0 C
verbinding 1 uur 2. react ie ve - Tc-9 9m verbinding + eiwit -----> Tc-99m- 25 Na^COg Buffer gemarkeerd eiwit
De reactiestap 1 verloopt met een betrekkelijk kleine marge rond 140° C in schoon glaswerk.
30 De volgende variabelen werden waar van toepassing onderzocht en geoptimaliseerd: 1. de zuurgraad tijdens het labellingsproces.
2. de hoeveelheden DMF en HC1.
35 3. de hoeveelheid eiwit.
4. de reactietemperaturen.
5. de reactietijden.
Het TcO^ ion is steeds in "carrierfree" hoeveelheden - d.w.z, 40 in onweegbare ondermaat - aanwezig en is geen belangrijke 8403494 -5- reactieparameter.
Een goed resultaat waarbij meer dan 95% van het aangeboden pertechnetaat wordt teruggevonden als gemerkt eiwit, wordt verkregen bij de hoeveelheden 40 μΐ DMF en 52 yl HC1 1N 5 per milliliter TcO^ . Gebruikelijk is de toepassing van 0.4 mg OMF per mg eiwit.
De markeringsefficiëntie van de uitgevoerde werkwijze werd vastgestald d.m.v.: - electroforese in 0.1 molair acetaat buffer, pH 5.0, 250 Volt 10 gedurende 40 minuten.
- gelfiltratie over een kolom van 10 cm van ”G50 sephadex" met 0.9% NaCl als eluens. De elutie van het gemarkeerde eiwit vindt plaats in het "void volume”.
- Precipitatie m.b.v. trichloorazijnzuur waarbij het eiwit en 15 het label worden neergeslagen. Het product van reactiestap 1 slaat onder deze omstandigheden niet neer.
- d.m.v. autoradiografie Ceen kwalitatieve methode om een eerste indruk te krijgen van de markering).
Qe kwaliteit van het gemarkeerde eiwit werd getest d.m.v.
20 Agar electroforese en d.m.v. immuun electroforese, in vitro stollingstesten en in vivo dianenstudies.
De radiochemische opbrengst werd gemeten aan reacties die werden uitgevoerd met de eiwitten fibrinogeen, humaan serum albumine en een monoclonaal antilichaam tegen humaan fibrine 25 en bedroeg bij temperaturen Cvoor reacties) tussen 135° C en 145° C, en bij een reactieduur van tenminste 4 uur steeds meer dan 95%. Bij temperaturen onder 135° C en boven 145° C nam de opbrengst af: bij 130° C 90%, bij 150° C 92%. Ook bij reactietijden minder dan 4 uur nam de opbrengst af: bij 3 uur 30 90%, bij 2 uur 30% Creactietemperatuur steeds 140° C).
M.b.v. Agar electroforese werd aangetoond dat het technetium-99m dat op de beschreven methode gemarkeerd werd aan humaan serum eiwitten, geen specifieke affiniteit heeft tot ëén bepaald eiwit.
35 M.b.v. immuunelectroforese werd aangetoond dat immunologische eigenschappen van het volgens aangegeven methode met technetium gemarkeerde eiwitten, te weten totaal serum en humaan serum albumine, intact blijven.
Experimenten om de biologische activiteit van eiwitten 40 die volgens de aangegeven methode werden gemarkeerd met 8403494 • » * -6- technetium-99m te testen ,* werden uitgevoerd met humaan fibrinogeen en een monoclonaal antilichaam tegen humaan fibrine. Voor dit doel werd technetium-99m fibrinogeen toegediend aan de bloedbaan van een rat, waarna de radioactieve 5 stof na 24 uur weer uit het bloed werd teruggewonnen. Op deze manier fungeert de ontvanger als biologisch filter teneinde artefacten, waaronder beschadigde moleculen, weg te vangen.
Het geïsoleerde technetium fibrinogeen werd toegediend aan een aantal ratten en de bloedklaring van dit Tc-99m 10 fibrinogeen werd vergeleken met de bloedklaring van 1-125 fibrinogeen. Deze laatste bloedklaring werd beschouwd als biologische standaard omdat deze stof volgens de literatuur - zie "Biochemical and Biophysical Research Communications”, no. 97 C19B0) blz 49-55 - wordt aanvaard als een preparaat 15 dat adequate biologische eigenschappen bezit. Uit de experimenten bleek dat technetium-99m fibrinogeen een gelijk bloedverdwijningspatroon bezit als 1-125 fibrinogeen in de rat. Dit betekent dat er geen uitwisseling van het "label” met andere b1oedeiwitten (wat een probleem is bij bestaande 20 technetium-99m markeringsmethoden - zie "Experientia", no. 40 (1964) blz 543-544 -) optreedt.
Verder werd een test uitgevoerd waarbij het technetium-fibrinogeen aan stollingsexperimenten in vitro werd onderworpen. Hierbij bleek 96% van de technetium-activiteit in het 25 stolsel aanwezig te zijn.
Tenslotte werden experimenten uitgevoerd met monoclonale antilichamen gericht tegen humaan fibrine en gemark.eerd met technetium volgens de aangegeven methode. Ook deze stof werd aan een test onderworpen. Hierbij werd gevonden dat de 30 technetium verbinding zich vier keer zo veel in een stolsel concentreerde als een niet met fibrine reactief immuno-globuline.
Tevens werd dit technetium-gemarkeerde monoclonale eiwit toegediend aan een konijn met een hoge concentratie van 35 stolsels in de longen. In de vena cava inferior van dit konijn werd tevens een klein stolsel aangebracht van humaan fibrine en verder werden watjes in de buikholte aangebracht met humaan fibrine.
Scintigrafisch onderzoek van dit konijn, enkele uren na de 40 injectie van het Tc-99m-monoclonaal antilichaam tegen humaan 8403494 » * ** Ϋ * -7- fibrine liet de gebieden waar fibrine aanwezig is, zien. Na verwijdering uit het proefdier van het stolsel en na telling t.o.v. achtergrond in de vena cava inferior bleek het stolsel een t.o.v. de achtergrond verhoogde hoeveelheid technetium 5 radioactiviteit te bezitten.
Bovenstaande experimenten tonen aan dat een monoclonaal antilichaam zijn immunoreactiviteit behoudt na markering met technetium-99m via de werkwijze volgens de uitvinding.
8403454
Claims (5)
1. Werkwijze voor het met een metallisch element markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten met het kenmerk dat metallische- of metaalbevattende ionen in zuur milieu reageren met een dimethylamine op een temperatuur die 5 afhankelijk is van het gekozen dimethylamine. Waarna de aldus verkregen verbinding reageert met de te markeren verbinding in een bufferoplossing, waarvan de pH afhangt van de beT-treffende verbinding.
2. Werkwijze volgens conclusie 1, waarbij het dimethyl-10 amine dimethyIformamide is dat op een temperatuur tussen 135° C en 145° C reageert met de metallische- of metaalbe-vattendeionen.
3. Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk dat een tien-voudige moleculaire overmaat dimethylformamide ten 15 opzichte van zoutzuur’ wordt gebruikt.
4. Werkwijze volgens conclusies 1, 2 of 3, waarbij het metallische element een radionuclide is en de te markeren verbinding een biologisch actief eiwit.
5. Werkwijze volgens conclusies 3 of 4. waarbij het 20 radionuclide technetium-99m is. dat de reactietijd met het dimethylformamide tenminste 4 uren is en dat de reactie-temperatuur 140° C bedraagt. 8403494
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8403494A NL8403494A (nl) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). |
| US06/890,780 US4845039A (en) | 1984-11-15 | 1985-11-14 | Method of labeling amine-containing compounds with a metal |
| PCT/NL1985/000045 WO1986003010A1 (en) | 1984-11-15 | 1985-11-14 | Method of labeling amine-containing compounds with a metal |
| EP85905896A EP0203135A1 (en) | 1984-11-15 | 1985-11-14 | Method of labeling amine-containing compounds with a metal |
| JP60505244A JPS62501874A (ja) | 1984-11-15 | 1985-11-14 | アミン含有化合物を金属で標識する方法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8403494 | 1984-11-15 | ||
| NL8403494A NL8403494A (nl) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8403494A true NL8403494A (nl) | 1986-06-02 |
Family
ID=19844775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8403494A NL8403494A (nl) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4845039A (nl) |
| EP (1) | EP0203135A1 (nl) |
| JP (1) | JPS62501874A (nl) |
| NL (1) | NL8403494A (nl) |
| WO (1) | WO1986003010A1 (nl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61501087A (ja) * | 1983-12-29 | 1986-05-29 | オ−ストラリア国 | テクネチウム−９９ｍ−標識放射医薬の製造 |
| EP2310035B1 (en) | 2008-06-16 | 2015-08-26 | University Of Rochester | Fibroblast growth factor (fgf) analogs and uses thereof |
| EP2686680B1 (en) | 2011-03-18 | 2018-06-13 | Biotium Inc. | Fluorescent dyes, fluorescent dye kits, and methods of preparing labeled molecules |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4238589A (en) * | 1973-03-05 | 1980-12-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Fluorogenic materials and labeling techniques |
| BE832363R (fr) * | 1975-08-12 | 1975-12-01 | Procede de marouage de proteintes a l'aide du technitium | |
| US4472509A (en) * | 1982-06-07 | 1984-09-18 | Gansow Otto A | Metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
-
1984
- 1984-11-15 NL NL8403494A patent/NL8403494A/nl not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-11-14 US US06/890,780 patent/US4845039A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-14 JP JP60505244A patent/JPS62501874A/ja active Pending
- 1985-11-14 WO PCT/NL1985/000045 patent/WO1986003010A1/en not_active Application Discontinuation
- 1985-11-14 EP EP85905896A patent/EP0203135A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0203135A1 (en) | 1986-12-03 |
| WO1986003010A1 (en) | 1986-05-22 |
| JPS62501874A (ja) | 1987-07-23 |
| US4845039A (en) | 1989-07-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Blower et al. | Pentavalent rhenium-188 dimercaptosuccinic acid for targeted radiotherapy: synthesis and preliminary animal and human studies | |
| Meares et al. | Covalent attachment of metal chelates to proteins: the stability in vivo and in vitro of the conjugate of albumin with a chelate of 111indium. | |
| DE69030025T2 (de) | Verfahren zur Markierung von Proteinen mit Technetium/Rhenium | |
| EP0271806A2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer mit Technetium-99m-markierten organspezifischen Substanz | |
| JPS58126817A (ja) | 放射性核種標識タンパク質、とくに抗体または抗体断片の製造法 | |
| Smith et al. | [166Dy] dysporium/[166Ho] holmium in vivo generator | |
| JPS60201260A (ja) | 心疾患診断薬 | |
| EP0169232B1 (en) | Composition for technetium-99m labelling of proteinaceous material | |
| Wall et al. | Micro‐imaging of amyloid in mice | |
| US4533541A (en) | Tin-117m-labeled stannic (Sn4+) chelates | |
| NL8403494A (nl) | Het markeren van verbindingen die een amine-functie omvatten (waaronder eiwitten). | |
| Vimalnath et al. | Ce‐141‐labeled DOTMP: A theranostic option in management of pain due to skeletal metastases | |
| Dunson et al. | Preparation and comparison of technetium-99m diphosphonate, polyphosphate and pyrophosphate nuclear bone imaging radiopharmaceuticals | |
| Wong | A simple and efficient method of labeling hematoporphyrin derivative with 111In | |
| US4350674A (en) | Substituted acetanilidoiminodiacetic acid compounds, diagnostic agents containing such compounds labeled with technetium-99m, and methods for making and using such compounds and agents | |
| JPH02117623A (ja) | 放射能検定方法 | |
| McAfee et al. | Interpretation of interspecies differences in the biodistribution of radioactive agents | |
| US20060002850A1 (en) | Radiolabeled lymphatic staining agents and methods for making | |
| RU2121367C1 (ru) | Радионуклид для исследования метаболизма миокарда | |
| Mercer et al. | [131I] IAZA as a Molecular Radiotherapeutic (MRT) Drug: Wash-Out with Cold IAZA Accelerates Clearance in a Murine Tumor Model | |
| Zoghbi et al. | Investigations into agents for improving cell labeling with positron-and gamma-emitting radionuclides | |
| Callahan | Radiol&eled Red Blood Cells: Methods and Mechanisms | |
| McGoron | Radioisotopes in Nuclear Medicine | |
| Srivastava et al. | Radiolabeled antiplatelet monoclonal antibodies for the scintigraphic localization of in-vivo thrombi and vascular lesions | |
| NUMEROF | RADIOISOTOPES AND LABELED COMPOUNDS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BV | The patent application has lapsed |