NL8003423A - Werkwijze voor de bereiding van nieuwe enkefaline- derivaten, enkefalinederivaten en geneesmiddel met een dergelijk enkefalinederivaat erin. - Google Patents

Description

N/29.711-Kp/vdM .

- 1 -

Werkwijze voor de bereiding van nieuwe enkefalinederivaten, enkefalinederivaten en geneesmiddel met een dergelijk enkefa-linederivaat erin.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de bereiding van nieuwe enkefalinederivaten, op dergelijke enkefalinederivaten, alsmede op geneesmiddelen met een dergelijk enkefalinederivaat erin.

5 De uitvinding omvat nieuwe enkefalinederivaten, hun zouten, alsmede een werkwijze voor de bereiding ervan. De nieuwe verbindingen hebben de volgende formule: H2N-C(NH)-Tyr-A-Gly-Phe-B, waarin 10 Tyr, Gly en Phe L-tyrosine, glycine, resp. L- fenylalanine voorstellen, A een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen is of thioalkyl-D-a-aminozuur met 1-4 koolstofato-men, terwijl 15 B een aminogroep of L-prolinamidegroep voor stelt.

De betekenissen van Tyr, Gly en Phe zijn in de vakliteratuur /bijv. J. Biol. Cnem. 247, 977 (1972^gebruikelijk voor het aangeven van aminozuren.

20 Het is bekend, dat de morfine-achtige, d.w.z. de opiaatactiviteit van de in de natuur voorkomende methionine-en leucine-enkefalinen /Hughes en medew.: Nature 258, 577 (1975)_/ (peptide met de structuur Tyr-G^y-G^y-pêe-Met, resp. -Leu) door geschikte substitutie van de aminozuurresten 2-Gly 25 en 5-Met, resp. 5-Leu, versterkt kan worden. Door inbouwen van de D-methioninegroepen op de 2-plaats en de L-prolinamidogroep op de 5-plaats wordt een der werkzaamste erikefaline-analogen, het pentapeptidamide met de structuur Tyr-D-Met-Gly-Phe-Pro-NH2 verkregen (zie het Belgische octrooischrift 858.453).

30 Een doel van de uitvinding is de bereiding van nieuwe enkefalinederivaten, waarvan de opiaatactiviteit groter is dan die van de bekende verbindingen.

Gevonden werd thans, dat de opiaatactiviteit van de door aminozuuruitwisseling gewonnen sterk werkzame enkefa- 800 3 4 23 - 2 - line-analogen nog verder kan worden opgevoerd wanneer men aan de eindstandige aminogroep een amidinogroep aanbouwt, d.w.z. een peptidanaloog bereidt, welke een eindstandige guanidino-groep bevat. De grotere opiaatactiviteit van de op deze wijze 5 bereide verbindingen met de eerder vermelde formule, kan met alle daarvoor gebruikelijke proeven worden aangetoond, bijv. aan het ileum van het Guinese biggetje (guinea pig ileum, GPI) /Kosterlitz en Watt: Br. J. Pharmacol. _33_/ 266 (1968); Kosterlitz en medew. : Br. J. Pharmacol. ^9./ 398 (1970)__7 en 10 aan het zaadstrengpreparaat van de muis /Hughes en medew.:

Br. J. Pharmacol. _53, 371 (1975) J. In de tabel zijn de opiaat-activiteiten van vier een eindstandige guanidinogroep bevattende en hun I^N-eindstandige analogen vermeld. De opgegeven waarden hebben betrekking op de op normorfine betrokken rela-15 tieve activiteiten (activiteit van normorfine = 1). Ter wille van een betere overzichtelijkheid is telkens onder de verbinding volgens de uitvinding het ongesubstitueerde peptide aangegeven.

TABEL

20 verbinding activiteit

GPia GPIb GPiab · MVDC

H-N-C(NH)-Tyr-D-Met-Gly-Phe-Pro- NH2 823 173 25 H-Tyr-D-Met-Gly-Phe-Pro-NH2 8 8 25 H2N-C(NH)-Tyr-D-Met-Gly-Phe-NH2 211 79 21 H-Tyr-D-Met-Gly-Phe-NH2 17 4 H2N-C(NH)-Tyr-D-Nle-Gly-Phe-NH2 126 79 18 H-Tyr-D-Nle-Gly-Phe-NH2 22 8 H-N-C(NH)-Tyr-D-Nle-Gly-Phe-Pro-30 NH2 79 21 17 H-Tyr-D-Nle-Gly-Phe-Pro-NH2 12 10 GPIa: volgens Kosterlitz en Watt /Br. J. Pharmacol. J3y 266 (1968)_7 GPIÜ: volgens Kosterlitz en medew. /Br. J. Pharmacol. 39_, 398 35 (1970)_7 MVDC: volgens Hughes en medew. /Br. J. Pharmacol. 5_3, 371 (1975)_7.

800 3 423 * i - 3 -

Het door de invoering van de N-eindigende guanidi-nogroep verkregen resultaat is verrassend, aangezien juist dit deel van de enkefalinemoleculen het gevoeligst is en elke ingreep aan de eindstandige aminogroep (bijv. de verwijdering 5 ervan, acylering of dialkylering) in het algemeen tot verzwakking, dan wel tot verlies van de opioïde activiteit leidt /bijv. Morgan en medew.: Communications, J. Pharm. Pharmac.

28, 660 (1976)_7·

De verbindingen met de eerder vermelde formule, 10 waarin B een aminogroep voorstelt, hebben volgens systematische gegevens in de proef volgens D1Amour-Smith /J. Pharm.

Ther. 72,, 74 (194l)_7 een sterkere pijnstillende werking dan morfine.

Uit eigen onderzoek is gebleken, dat de verbin-15 dingen met de boven genoemde formule het katecholaminegehalte van de kernen van amygdala centralis op selectieve wijze veranderen. Aangezien de kerngroep over een hoog enkefalinegehal-te en een grote opiaatreceptordikte beschikt en geen deel uitmaakt van de specifiek het pijngevoel beïnvloedende systemen, 20 ligt het in de verwachting dat de verbindingen met de boven genoemde formule de volgende functies specifiek beïnvloeden: voedselopname, emotionaliteit, sociale verhouding, leer- en gedachtenprocessen.

Het doel van de uitvinding is derhalve een 25 werkwijze voor de bereiding van nieuwe enkefalinederivaten met de boven genoemde formule, waarin de betekenis van Tyr, Gly,

Phe, A en B dezelfde is als eerder vermeld, uit de een eindstandige aminogroep bevattende peptiden van de overeenkomstige aminozuurreeks. Het is voor de onderhavige werkwijze kenmer-30 kend, dat de eindstandige aminogroep op een op zichzelf bekende wijze wordt omgezet in een guanidinogroep en dat men uit het verkregen produkt eventueel een zout vormt.

Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding wordt het uitgangspeptide bij 20-80°C omgezet met 35 1,1-2,0 equivalenten l-amidino-3,5-dimethylpyrazoolacetaat in aanwezigheid van 1,1-2,0 equivalenten trialkylamine, waarbij het reactiemedium een waterige of watervrije lagere alcohol is, terwijl de concentratie in het reactiemedium 1-1,1 mMol/ml 800 34 23 Γ j - 4 - bedraagt. Dan wordt de oplossing ingedampt, het N-eindigende een guanidinogroep bevattende peptide afgezonderd en desgewenst tot een zout omgezet.

De uitvinding wordt aan de hand van de volgende 5 voorbeelden nader toegelicht.

De in de voorbeelden aangegeven R^-waarden werden bepaald onder gebruikmaking van kiezelgel G (Reanal, Budapest) laagchromatografie, onder gebruikmaking van de volgende op-losmiddelmengsels: 10 1. ethylacetaat-pyridine-azijnzuur-water 480 : 20 : 6 : 11 2. ethylacetaat-pyridine-azijnzuur-water 240 : 20 : 6 : 11 3. ethylacetaat-pyridine-azijnzuur-water 15 60 : 20 : 6 : 11 4. chloroform-methanol 9 : 1 5. methyleenchloride-25 % waterige ammonia- methanol 12 : 3 : 8.

VOORBEELD I

20 Amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylala- nyl-L-prolinamide (verbinding met de eerder genoemde formule, waarbij A = D-methioninerest en B = L-prolinamiderest).

Stap 1: l-amidino-3,5-dimethyl-pyrazoolacetaat.

Er werd 20,1 g (100 mmol.) l-amidino-3,5-dimethyl-25 pyrazoolnitraat ^Thiele en Dralle: Ann. 302, 294 (1898)J

onder roeren opgelost in een mengsel van 110 ml natronloog en 200 ml methyleenchloride. De organische fase werd afgescheiden, boven natriumsulfaat gedroogd, waarna 6 ml azijnzuur werd toegevoegd en dan onder verminderde druk werd ingedampt. Het 30 kristallijne residu werd gesuspendeerd in diethylether, vervolgens afgefiltreerd, daarna met diethylether gewassen en tenslotte gedroogd. Hierbij werd 18,25 g (92 %) van het pro-dukt verkregen. Smeltpunt: 114-116°C.

Analyse voor = 198,2) 35 berekend: C = 48,47 % H = 7,12 % N = 28,27 % gevonden: C=48,6 % H = 7,1 % N=28,5 %.

Stap 2: amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide-acetaat-hydraat.

800 34 23 - 5 - Λ

Er werd 1,45 g (2 mmol.) L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide-acetaattrihydraat (Belgische octrooischrift 858.453) en 0,5 g (2,52 mmol) 1-amidino-3,5-dimethylpyrazoolacetaat (voorbeeld I, stap 1) op-5 gelost in 2 ml ethanol. De oplossing werd vermengd met 0,4 ml (2,86 mmol.) triethylamine, waarna men het geheel 4 uur lang liet staan bij 60-70°C. Dan werd het reactiemengsel verdund met 30 ml ethylacetaat, waarbij het gevormde neerslag werd afgefiltreerd, met ethylacetaat gewassen en in vacuum gedroogd. 10 Hierbij werd 0,58 g (80 %) van het produkt verkregen.

R^: 0,63-0,68; (_ a_7^ = +4° (c = 1; n azijnzuur) C33H4809N8s " 732,844.

VOORBEELD II

Amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenyl-15 alaninamide (verbinding met de eerder vermelde formule, waarbij A = D-methioninerest en B = aminogroep).

Stap 1: tert-butyloxycarbonyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylalaninamide.

Er werd 5,35 g (15 mmol.) benzyloxycarbonyl-20 glycyl-L-fenylalaninamide ^Frutonen Bermann: J. Biol. Chem. 145, 253 (1942)_7 opgelost in 100 ml methanol en vervolgens in aanwezigheid van palladiumactieve kool gehydreert. Na beëindiging van de reactie werd de katalysator afgefiltreerd, met methanol gewassen, waarna de wasmethanol met het filtraat 25 werd verenigd, waarna het geheel onder verminderde druk werd ingedampt. Na het indampen bleef het glycyl-L-fenylalanin- 3 amide (R^: 0,19-0,29) achter, welke stof samen met 6,43 g (15 mmol.) tert-butyloxycarbonyl-D-methionine-2,4,5-trichloor- fenylester /Broadbent en medew.; J. Chem. Soc., 1967, 2632/ 30 werd opgelost in 30 ml pyridine. De oplossing werd gedurende de nacht bewaard en daarna onder verminderde 'druk ingedampt.

Het residu werd vermengd met 15 % mercaptoetnanol-bevattende diethylether, waarna het mengsel werd afgefiltreerd, met di- ethylether gewassen en gedroogd. Hierbij werd 5,1 g (75 %) van 2 35 het produkt verkregen. R^: 0,70-0,77.

C21H32°5N4S “ 452,564.

Stap 2: D-methionyl-glycyl-L-fenylalaninamide-hydrochloride.

800 34 23 - 6 -

Er werd 4,52 g (10 mmol.) van het beschermde tri-peptidamide (stap 1} gesuspendeerd in 20 ml ethylacetaat, waarna de suspensie onder roeren en koeling met ijs aan 40 ml 11-15 % zoutzuur-bevattend ethylacetaat werd toegevoegd. Het 5 reactiemengsel werd gedurende een uur geroerd, vervolgens met 60 ml ethylacetaat verdund, waarna het verkregen neerslag werd afgefiltreerd, met ethylacetaat werd gewassen en onder vacuum boven kaliumhydroxide gedroogd. Hierbij werd 3,7 g 3 (95 %) van het produkt verkregen. R^: 0,50-0,55.

10 C16H25°3N4SC1 " 388'915*

Stap 3: tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- methionyl-glycyl-L-fenylalaninamide.

Er werd 1,4 g (5 mmol.) tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosine ^Anderson en McGregor: J. Am. Chem. Soc. 79^ 6180 15 (1957)_7 opgelost in 10 ml dimethylformamide. De oplossing werd tot -15°C afgekoeld. Bij deze temperatuur werd onder roeren 0,6 ml (5 mmol.) N-methylmorfoline en 0,7 ml (5 mmol.) chloorkoolzuurisobutylester toegevoegd. Na 10 min. roeren werd aan het reactiemengsel de tot -15°C afgekoelde suspensie van 20 1,95 g (5 mmol.) tripeptidamide-hydrochloride (stap 2) en 0,7 ml (5 mmol.) trietnylamine in 10 ml dimethylformamide toegevoegd. Het reactiemengsel werd bij -15°C gedurende 2 uur en bij 0°C gedurende een uur geroerd en daarna onder verminderde druk ingedampt. Het na het indampen achtergebleven residu werd 25 met water vermengd, gefiltreerd, met water gewassen, gedroogd en dan uit 30 ml kokend ethylacetaat omgekristalliseerd. Hierbij werd 2,15 g (70 %) van het produkt verkregen.

R^: 0,64-0,68.

C30H41°7N5S " 6l5'734· 30 Stap 4: L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylala- ninamide-acetaat-hydraat.

Er werd 1,85 g (3 mmol.) van het beschermde tetra-peptidamide (voorbeeld II, stap 3) gesuspendeerd in· 5 ml ethylacetaat, waarna aan de verkregen suspensie onder roeren 35 en koelen met ijs 15 ml 11-15 % zoutzuur-bevattend ethylacetaat werd toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende een uur geroerd en dan met 20 ml ethylacetaat verdund. Het gevormde neerslag werd afgefiltreerd, met ethylacetaat gewassen 800 3 4 23 - 7 - en vervolgens gedroogd. Het verkregen produkt werd opgelost in 10 ml water, waarna de oplossing werd opgebracht op 15 ml acetaat-anionenuitwisselende hars (AG 1-X2, Bio-Rad, Richmond, California). De hars werd met 80 ml water gewassen. Dan werden 5 de waterige oplossingen gevriesdroogd. Hierbij werd 1,07 g 3 (60 %) van het produkt verkregen. R^: 0,55-0,60; R^: 0,89-0,97; = +80° (c = 1? n azijnzuur).

C27H39°8N5S + 593'688·

Stap 5: amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-10 fenylalaninamide-acetaat-hydraat.

Er werd 0,6 g (1 mmol.) tetrapeptide-amidehydraat (voorbeeld II, stap 4) en 0,24 g (1,2 mmol.) pyrazoolderivaat (voorbeeld I, stap 1) opgelost in 2 ml ethanol. Aan de oplossing werd 0,2 ml (1,2 mmol.) triethylamine toegevoegd, waarna 15 het geheel gedurende 5 uur werd bewaard bij 60°C. Dan werd de oplossing onder verminderde druk ingedampt, waarna de oplossing aansluitend met ca. 20 ml ethylacetaat werd verdund. Het neergeslagen produkt werd afgefiltreerd, met ethylacetaat gewassen, gedroogd en vervolgens in 10 ml water opgelost. De 20 waterige oplossing werd gevriesdroogd. Hierbij werd 0,51 g 3 (80 %) van het produkt verkregen. R^: 0,54-0,59; R^: 0,65-0,70; / q_7^ =40,5° (c = 1; n azijnzuur) C28H41°8N7S ” 635,730.

VOORBEELD III

25 Amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenyl- alaninamide (verbinding met de eerder vermelde formule, waarbij A = D-norleucylrest en B = aminogroep.

Stap 1: benzyloxycarbonyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylalaninamide.

30 Er werd 3,98 g (15 mmol.) benzyloxycarbonyl-D- norleucine /Izumiya en medew.: J. Chem. Soc. Japan 79.' 420 (1958)_7 opgelost in 15 ml dimethylformamide. De oplossing werd tot -15°C afgekoeld. Onder roeren werd bij deze temperatuur 1,7 ml (15 mmol.) N-methylmorfoline en 2,0 ml (15 mmol.) 35 chloorcarbonzuurisobutylester toegevoegd. Na 10 min. roeren werd aan het reactiemengsel een op de volgende wijze bereide oplossing toegevoegd: er werd 5,35 g (15 mmol.) benzyloxycarbonyl- 800 3 4 23 - 8 - glycyl-L-fenylalaninamide /Fruton en Bergmann: J. Biol. Chem. 145, 253 (1942)_/ in 100 ml methanol in aanwezigheid van palladiumactieve koolstof gehydreerd, waarna de katalysator werd afgefiltreerd, het methanol onder verminderde druk werd 5 ingedampt en het residu in 15 ml dimethylformamide werd opgelost.

Het met deze oplossing vermengde reactiemengsel werd gekoeld tot -15°C en bij deze temperatuur gedurende 2 uur bewaard. Dan werd het reactiemengsel bij 0°C gedurende een uur 10 bewaard en aansluitend daarop onder verminderde druk ingedampt. Het residu werd met water vermengd, gefiltreerd en gedroogd.

Het produkt werd uit een mengsel van ethylacetaat en petroleum-ether omgekristalliseerd. Opbrengst: 5,0 g (70 %). ϊφ 0,75-0,80.

15 C25H3205N4 - 468,538.

Stap 2: D-norleucyl-glycyl-L-fenylalaninamide-hydrochloride.

Er werd 4,7 g (10 mmol.) van het beschermde tri-peptidamide (stap 1) opgelost in een mengsel van 50 ml ethanol 20 en 50 ml dimethylformamide. De oplossing werd vermengd met 10 ml n zoutzuur en vervolgens in aanwezigheid van palladiumactieve kool gehydreerd. Na beëindiging van de reactie werd de katalysator afgefiltreerd en met dimethylformamide gewassen.

Het filtraat werd met de wasvloeistof verenigd en ingedampt.

25 Het na het indampen achtergebleven residu werd vermengd met ethylacetaat, afgefiltreerd en vervolgens met ethylacetaat gewassen. Hierbij werd 3,05 g (82 %) van het produkt verkregen, φ: 0,45-0,55.

C17H2703N4C1 - 370,875.

30 Stap 3: tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D- norleucyl-glycyl-L-fenylalaninamide.

Er werd 1,4 g (5 mmol.) tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosine en 1,85 g (5 mmol.) tripeptidamide-hydrochloride (stap 2) op de in stap 3 van voorbeeld II beschreven wijze ge-35 condenseerd. Hierbij werd 1,94 g (65 %) van het produkt verkregen. ίφ 0,70-0,75.

C31H4307N5 - 597,694.

Stap 4: L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenyl- 800 3 4 23 - 9 - alaninamide-acetaathydraat.

1,8 g (3 mmol.) van het beschermde tetrapeptide (stap 3) werd op de in stap 4 van voorbeeld II beschreven wijze omgezet. Hierbij werd 1,12 g (65 %) van het produkt verkre-5 gen. ίφ 0,60-0,65; ίφ 0,9-0,95; = 80,5° (c = 1; n azijnzuur).

C28H41°8N5 " 575'648·

Stap 5: amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylalaninamide-acetaathydraat.

10 0,58 g (1 mmol.) van de volgens stap 4 verkregen tetrapeptidamide-acetaathydraten werd op de instap 5 van voorbeeld II beschreven wijze omgezet. Hierbij werd 1,39 g (75 %) produkt verkregen, φ: 0,62-0,70; ( q.7^ = +40,5° (c = 1; n azijnzuur).

15 C29H43OgN7 - 617,690.

VOORBEELD IV

Amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylala-nyl-L-prolinamide (verbinding met de eerder vermelde formule, waarbij A = D-norleucyl- en B = L-prolinamidegroep).

20 Stap 1: benzyloxycarbonyl-D-norleucyl-glycyl-L- fenylalanyl-L-proline.

Er werd 7,95 g (30 mmol.) benzyloxycarbonyl-D-norleucine /ïzomiya en medew.: J. Chem. Soc. Japan 79, 420 (1958)_7 en 5,95 g (30 mmol.) 2,4,5-trichloorfenol opgelost 25 in 60 ml ethylacetaat, waarna de oplossing in ijswater werd afgekoeld. Aan de gekoelde oplossing werd 5,8 g (28 mmol.) dicyclohexylcarbondiimide toegevoegd. Na laten staan gedurende twee uur werd het neergeslagen dicyclohexylcarbamide afgefiltreerd, waarna de oplossing onder verminderde druk werd inge-30 dampt. Het residu werd uit n-hexaan omgekristalliseerd, afgefiltreerd, met n-hexaan gewassen' en aan de lucht gedroogd.

De op deze wijze verkregen actieve ester (9,35 g = 75 %; 4 R^: 0,82-0,92) werd in 40 ml pyridine opgelost. Aan de oplossing werd 6,4 g (20 mmol.) glycyl-L-fenylalanyl-L-proline 35 (Belgische octrooischrift 858.453) en 2,8 ml (20 mmol.) tri-ethylamine toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Dan werd het mengsel ingedampt, waarna het residu werd opgelost in een mengsel van 800 34 23 - 10 - 50 ml diethylether en 50 ml 5 % natriumhydrogeencarbonaatop-lossing. De waterfase werd twee keer gewassen met 30 ml diethylether en-dan met n-zwavelzuur tot een pH van 3 aangezuurd. Het hierbij neergeslagen produkt werd drie keer uitgeschud met 5 50 ml ethylacetaat. De verenigde organische fasen werden twee keer gewassen met 20 ml water, vervolgens boven natriumsulfaat gedroogd en dan onder verminderde druk ingedampt. Het residu werd met cyclohexaan vermengd, gefiltreerd, met cyclohexaan gewassen en dan gedroogd. Hierbij werd 9,97 g (88 %) produkt 10 verkregen. R^: 0,28-0,38.

C30H38°7N4 " 566' 636·

Stap 2: benzyloxycarbonyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide.

Er werd 8,5 g (15 mmol.) van het volgens stap 1 15 bereide beschermde tetrapeptide opgelost in 30 ml tetrahydro-furan. De oplossing werd tot -15°C afgekoeld. Bij deze temperatuur werden onder roeren 1,7 g (15 mmol.) N-methylmorfoline en 2,0 ml (15 mmol.) chloorkoolzuurisobutylester toegevoegd, waarna na 10 min. roeren nog eens 8 ml tot beneden 5°C afge-20 koelde 20-50 % waterige ammoniakoplossing werd toegevoegd. Het reactiemengsel werd bij een temperatuur beneden 0°C nog een uur lang geroerd, waarna het tetrahydrofuran onder verminderde druk uit het reactiemengsel werd afgedestilleerd. Aan het residu werd 20 ml water en 50 ml ethylacetaat toegevoegd, 25 waarna de fasen van elkaar werden gescheiden. De waterfase werd gewassen met 20 ml ethylacetaat. De organische fasen werden verenigd en drie maal met 20 ml water gewassen. Na drogen boven natriumsulfaat werd de oplossing onder verminderde druk ingedampt. Het residu werd met diethylether geroerd, 30 gefiltreerd, met diethylether gewassen en vervolgens gedroogd.

2

Hierbij werd 9,3 g (91 %) produkt verkregen. R^: 0,4-0,5 C30H39°6N5 “ 565'652·

Stap 3: D-norleucyl-glycyl-L-fenylalanyl-L- prolinamide .

35 Van het volgens stap 2 verkregen beschermde tetra- peptidamide werd 5,66 g (10 mmol.) opgelost in 10 ml methanol en in aanwezigheid van palladiumactieve kool gehydreerd. Na beëindiging van de reactie werd de katalysator afgefiltreerd, 800 34 25 - 11 - Λ ·< met methanol gewassen, waarna de wasvloeistof met het fil-traat werd verenigd. De methanolische oplossing werd onder verminderde druk ingedampt. Het residu werd vermengd met di-ethylether, afgefiltreerd, met diethylether gewassen en ten-5 slotte gedroogd. Hierbij werd 3,7 g (85 %) produkt verkregen, ίφ 0,38-0,48.

C22H33°4N5 " 431,524.

Stap 4: tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosyl-D-nor-leucyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide.

10 1,4 g (5 mmol.) tert-butyloxycarbonyl-L-tyrosine en 2,16 g (5 mmol.) van het volgens stap 3 verkregen tetra-peptidamide werden op de in stap 3 van voorbeeld II beschreven wijze gecondenseerd met dit verschil, dat aan de met dimethyl-formamide bereide oplossing van de aminecomponent geen tri- 15 ethylamine werd toegevoegd. Hierbij werd 3,0 g (86 %) produkt verkregen. R*: 0,4-0,5.

C36H50°8N6 - 694,808.

Stap 5: L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenyl-alanyl-L-prolinamide-acetaathydraat.

20 2,1 g (3 mmol.) van het volgens stap 4 verkregen beschermede pentapeptidamide werd op de in stap 4 van voorbeeld II beschreven wijze omgezet. Hierbij werd 1,45 g (72 %) produkt verkregen. : 0,47-0,52; R^: 0,92-0,98; l\7^°= +26° (c = 1; n azijnzuur).

25 C^oH.o0oNc - 672,762.

33 48 9 6

Stap 6: amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide-acetaathydraat.

0,7 g (1 mmol.) van het volgens stap 5 verkregen pentapeptidamide-acetaathydraat werd op de in stap 5 van voor- 30 beeld II beschreven wijze omgezet. Hierbij werd 0,57 g (80 %) produkt verkregen. R^: 0,33-0,43; R^: 0,65-0,75; / o./q° = +1° (c = 1; n azijnzuur).

C34H50°9N8 - 714,804.

8003423 35

Claims (8)

1. Werkwijze voor de bereiding van nieuwe enkefa-linederivaten met de formule H2N-C(NH)-Tyr-A-Gly-PHe-B, 5 waarin Tyr, Gly en Phe L-tyrosine, glycine, resp. L-fenylalanine zijn, A een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen of thioalkyl-D-a-aminozuur met 1-4 koolstofato-10 men voorstelt en B een aminogroep of L-prolinamide is, alsmede de zouten van deze verbindingen uit het een eindstandi-ge aminogroep bevattend peptide van de overeenkomstige amino-zuurreeks, met het kenmerk, dat de einstandi-15 ge aminogroep van het peptide op een op zichzelf bekende wijze tot een guanidinogroep wordt omgezet en het verkregen produkt desgewenst in een zout wordt omgezet.

2. Werkwijze voor de bereiding van in het bijzonder op het centrale zenuwstelsel inwerkende farmaceutische 20 preparaten, met het kenmerk, dat één of meer verbindingen met de in conclusie 1 weergegeven formule met de daarin vermelde betekenissen voor Tyr, Gly, Phe, A en B, of een zout ervan, wordt vermengd met de in de farmacie gebruikelijke drager- en/of hulpstoffen en vervolgens op op zichzelf 25 bekende wijze tot een farmaceutisch preparaat wordt verwerkt, bijv. injectie-oplossingen, tabletten, dragees of kapsules.

3. Enkefalinederivaten met de formule H2N-C(NH)-Tyr-A-Gly-Phe-B, waarin

30 Tyr, Gly en Phe L-tyrosine, glycine, resp. L-fenylalanine zijn, A een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen of thioalkyl-D-a-aminozuur met 1-4 koolstofato-men voorstelt, terwijl 35. een aminogroep of L-prolinamide is, alsmede zouten van deze verbindingen.

4. Amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L-fenylalanyl-L-prolinamide en zouten ervan.

5. Amidino-L-tyrosyl-D-methionyl-glycyl-L- 800 34 23 Λ - 13 - •-Λ fenylalaninamide en zouten daarvan.

6. Amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-fenylalaninamide en zouten daarvan.

7. Amidino-L-tyrosyl-D-norleucyl-glycyl-L-5 fenylalanyl-L-prolinamide en zouten daarvan.

8. Farmaceutisch preparaat, met het het kenmerk, dat dit als werkzaam bestanddeel een enkefalinederivaat met de in conclusie 1 weergegeven formule met de daarin vermelde betekenissen voor Tyr, Gly, Phe, A en 10. bevat, of de zouten ervan. 15 800 34 23