NL1023767C1 - Process for separating optical isomers from a protected amino acid. - Google Patents
Process for separating optical isomers from a protected amino acid. Download PDFInfo
- Publication number
- NL1023767C1 NL1023767C1 NL1023767A NL1023767A NL1023767C1 NL 1023767 C1 NL1023767 C1 NL 1023767C1 NL 1023767 A NL1023767 A NL 1023767A NL 1023767 A NL1023767 A NL 1023767A NL 1023767 C1 NL1023767 C1 NL 1023767C1
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- amino acid
- group
- side chain
- protected amino
- chain carboxyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/38—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
- C12P41/007—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving acyl derivatives of racemic amines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Description
t ,t,
Werkwijze voor het scheiden van optische isomeren van een beschermd aminozuurProcess for separating optical isomers from a protected amino acid
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het enzymatisch scheiden van optische isomeren van een beschermd aminozuur gekozen uit de groep bestaande uit beschermde natuurlijke en niet-natuurlijke aminozuren, 5 waarbij een enzym in contact wordt gebracht met een te scheiden mengsel dat R en S isomeren van het beschermde aminozuur omvat.The present invention relates to a method for enzymatically separating optical isomers of a protected amino acid selected from the group consisting of protected natural and non-natural amino acids, wherein an enzyme is contacted with a mixture to be separated comprising R and S isomers of the protected amino acid.
De scheiding van optische isomeren is een belangrijk proces bij industriële bereiding van aminozuren. Lage kosten 10 en optische zuiverheid (enantiomere overmaat) zijn belangrijke parameters. Om deze reden worden enzymen gebruikt vanwege hun selectiviteit. Om de kosten laag te houden geniet het in het algemeen de voorkeur om geen zuiver enzym te gebruiken maar eerder enzympreparaten.The separation of optical isomers is an important process in the industrial preparation of amino acids. Low costs and optical purity (enantiomeric excess) are important parameters. For this reason, enzymes are used because of their selectivity. In order to keep costs low, it is generally preferable not to use pure enzyme but rather enzyme preparations.
15 Het doel van de onderhavige uitvinding is om een werkwijze volgens de aanhef te verschaffen, welke de scheiding tegen lage kosten en met een uitstekende optische zuiverheid (e.e.) mogelijk maakt.The object of the present invention is to provide a method according to the preamble, which enables the separation at low costs and with an excellent optical purity (e.e.).
Hiertoe wordt de onderhavige uitvinding gekenmerkt 20 doordat het beschermd aminozuur een (niet-zijketencarboxyl) beschermd aminozuur is met de algemene formule (I)To this end, the present invention is characterized in that the protected amino acid is a (non-side chain carboxyl) protected amino acid of the general formula (I)
HRlN-CR2- (CH) n“C (0) ZR3 IHR1 N-CR2 - (CH) n C (O) ZR3 I
25 waarbij - R1 een aminobeschermgroep of waterstof is; R2 een zij keten is; - n een getal is gekozen uit 0, 1 en 2; - ZR3 een carboxylbeschermgroep is waarbij Z is gekozen uit O 30 of NH; en R1 en R3 geïntegreerd kunnen zijn, een heterocyclische (niet-zijketencarboxyl) beschermde ring vormend, waarbij het skelet van de ring 5 tot 8 atomen omvat; het (niet-zijketencarboxyl) beschermde aminozuur een mole-cuulgewicht heeft van minder dan 1000 Dalton, 35 waarbij de genoemde werkwijze de stappen omvat van 1023767 Ί I < I - het in contact brengen van het (niet-zijketencarboxyl) be- I schermde aminozuur (I) in aanwezigheid van water met een I optioneel deels gezuiverd celvrij extract van een schimmel I die een enzym bevat met ten minste één van een esterase- en I 5 een amidase-activiteit onder oplevering van een mengsel van I van (niet-zijketencarboxyl) beschermgroep ontdaan product I en uitgangsmateriaal; en I .- het optioneel scheiden van het van (niet-zijketencarboxyl) I beschermgroep ontdane product en uitgangsmateriaal.Wherein - R 1 is an amino protecting group or hydrogen; R2 is a side chain; - n is a number selected from 0, 1 and 2; - ZR3 is a carboxyl protecting group wherein Z is selected from O 30 or NH; and R 1 and R 3 may be integrated, forming a heterocyclic (non-side chain carboxyl) protected ring, wherein the skeleton of the ring comprises 5 to 8 atoms; the (non-side chain carboxyl) protected amino acid has a molecular weight of less than 1000 Daltons, said method comprising the steps of 1023767 - contacting the (non-side chain carboxyl) protected amino acid (I) in the presence of water with an optionally partially purified cell-free extract of a fungus I containing an enzyme with at least one of an esterase and an amidase activity yielding a mixture of I of (non-side chain carboxyl) ) protecting group stripped product I and starting material; and I. - optionally separating the (non-side chain carboxyl) I protecting group-depleted product and starting material.
I 10 Het van (niet-zijketencarboxyl) beschermgroep ontda- I ne. product draagt nu een vrije carboxylgroep. De onderstaande I voorbeelden laten de uitstekende resultaten zien verkregen I met behulp van de werkwijze volgens de uitvinding. In de on- I derhavige aanvrage wordt onder "enzymatisch scheiden" het I 15 vergroten van het aantal en/of de mate van eigenschappen I waarin het enzymatisch omgezette product en uitgangsmateriaal verschillen. Dat wil zeggen, een fysische scheiding in termen I van ruimte is geen eis, aangezien dit later kan gescheiden, I bijvoorbeeld in het geval van synthese.Removing the (non-side chain carboxyl) protecting group. product now carries a free carboxyl group. The examples below show the excellent results obtained with the aid of the method according to the invention. In the present application, "enzymatic separation" is understood to mean increasing the number and / or degree of properties in which the enzymatically converted product and starting material differ. That is, a physical separation in terms I of space is not a requirement, since it can be separated later, for example in the case of synthesis.
I 20 Volgens een voorkeursuitvoering wordt een set sub- straten met de formule (I) die de voorkeur geniet gekenmerkt doordat R3, met Z is 0, een groep voorstelt gekozen uit de set bestaande uit een vertakte of onvertakte (C1-C4) alkylgroep, een fenylgroep, en een (C1-C4) alkylfenylgroep; welke elk al 25 dan niet kunnen zijn gesubstitueerd met een of meer halogeen- I atomen, carboxy, hydroxy en aminogroep.According to a preferred embodiment, a set of substrates of the formula (I) is preferably characterized in that R 3, with Z is 0, represents a group selected from the set consisting of a branched or unbranched (C 1 -C 4) alkyl group, a phenyl group, and a (C 1 -C 4) alkylphenyl group; each of which may or may not be substituted with one or more halogen atoms, carboxy, hydroxy and amino group.
I Volgens een uitvoeringsvorm die sterk de voorkeur I geniet, indien Z NH is, is R3 zoals hierboven gedefinieerd of I waterstof.In a highly preferred embodiment, if Z is NH, R 3 is as defined above or I is hydrogen.
I 30 Van de aard van de zij keten van R2 wordt gedacht dat I deze voor de enzymatische reactie niet van speciaal belang I is. Echter, kleine substraten met de formule (i) zullen de I voorkeur genieten aangezien zij een snelle turn-over mogelijk I maken en geschikt zijn als bouwstenen voor synthese. Bijge- I 35 volg is volgens een gunstige uitvoeringsvorm het molecuulge- I wicht van het (niet-zijketencarboxyl) beschermde aminozuur I (I) minder dan 500.The nature of the side chain of R2 is thought to be not of special interest for the enzymatic reaction. However, small substrates of the formula (i) will be preferred since they allow a fast turn-over and are suitable as building blocks for synthesis. Consequently, according to a favorable embodiment, the molecular weight of the (non-side chain carboxyl) protected amino acid I (I) is less than 500.
I Bij voorkeur is het enzym afgeleid van Aspergillus I , 3 sp., bij voorkeur gekozen uit Aspergillus melleus en Aspergillus oryzae.I Preferably the enzyme is derived from Aspergillus I, 3 credits, preferably selected from Aspergillus melleus and Aspergillus oryzae.
Volgens een gunstige uitvoeringsvorm is het (niet-zijketencarboxyl) beschermde aminozuur gekozen uit een hydan-5 toïnederivaat en diketopiperazinederivaat.According to a favorable embodiment, the (non-side chain carboxyl) protected amino acid is selected from a hydan-toin derivative and diketopiperazine derivative.
Van deze substraten met de algemene formule (I) is gevonden dat het uitstekende substraten waren.These substrates of the general formula (I) have been found to be excellent substrates.
Tenslotte is, volgens een voorkeursuitvoering, het enzym geïmmobiliseerd, en maakt bij voorkeur deel uit van een 10 CLEA.Finally, according to a preferred embodiment, the enzyme is immobilized, and preferably forms part of a CLEA.
Een CLEA is een vernet enzymaggregaat. Dit verschaft een qua kosten doelmatige oplossing, en maakt een gemakkelijke scheiding van de biokatalytische CLEA en de oplossing waarin de scheiding wordt uitgevoerd mogelijk.A CLEA is a cross-linked enzyme aggregate. This provides a cost effective solution, and allows for easy separation of the biocatalytic CLEA and the solution in which the separation is carried out.
15 De onderhavige uitvinding zal thans worden toege licht onder verwijzing naar de volgende voorbeelden. In de voorbeelden wordt gebruik gemaakt van een ruw enzympreparaat van Aspergillus, waarbij het genoemde enzympreparaat een artii-noacylase-activiteit bezit en verkrijgbaar is bij Fluka. Dit 20 preparaat bevat ook een hydrolase-activiteit, welke in de onderhavige uitvinding wordt benut, meer in het bijzonder een esterase- en/of een amidase-activiteit. Immobilisatie van enzym geschiedde door het maken van een CLEA, volgens standaardprocedures (Cao L. et al, Org. Lett. 2, blz. 1361-1364, 25 (2000)).The present invention will now be illustrated with reference to the following examples. In the examples, use is made of a crude enzyme preparation from Aspergillus, wherein said enzyme preparation has an artia noacylase activity and is available from Fluka. This preparation also contains a hydrolase activity which is utilized in the present invention, more particularly an esterase and / or an amidase activity. Enzyme immobilisation was by making a CLEA, according to standard procedures (Cao L. et al., Org. Lett. 2, pages 1361-1364, 25 (2000)).
Voorbeeld 1Example 1
Enantioselectieve hydrolyse van D,L-fenylglycine-amide (PGA).Enantioselective hydrolysis of D, L-phenylglycine amide (PGA).
30 Een 10 mM oplossing van D,L-phenylglycine-amide (D,L-PGA) werd bereid in 5 ml van 50 mM TRIS buffer pH 7.5. Een enzymreactie werd gestart door het toevoegen van 50 U Aminoacylase I van Aspergillus melleus (Fluka, 1.3U/mg) en uitgevoerd onder voortdurend roeren bij kamertemperatuur. Pe-35 riodiek werden monsters genomen, verdund in elutievloeistof teneinde de enzymreactie te stoppen en onderworpen aan chira-le HPLC-analyse (Crownpack CR+, pH 2, 25°C) . Na 4 uur reactie werd 50,6% omzetting bereikt, en verdere hydrolyse was ver- s vf·*2* 1023767 4 waarloosbaar (51% na 18 uur). De optische zuiverheid van overgebleven D-fenylglycine-amide was 99+%, de optische zuiverheid van omgezet L-fenylglycine was 99%.A 10 mM solution of D, L-phenylglycine amide (D, L-PGA) was prepared in 5 ml of 50 mM TRIS buffer pH 7.5. An enzyme reaction was started by adding 50 U Aminoacylase I of Aspergillus melleus (Fluka, 1.3 U / mg) and performed with constant stirring at room temperature. Periodically samples were taken, diluted in elution fluid to stop the enzyme reaction and subjected to chiral HPLC analysis (Crownpack CR +, pH 2, 25 ° C). After 4 hours of reaction, 50.6% conversion was achieved, and further hydrolysis was invalid (51% after 18 hours). The optical purity of residual D-phenylglycine amide was 99 +%, the optical purity of converted L-phenylglycine was 99%.
5 Voorbeeld 2Example 2
Enantioselectieve hydrolyse van D,L-aminozuuramiden.Enantioselective hydrolysis of D, L-amino acid amides.
In alle gevallen werd een 10 mM oplossing van geschikt D,L-a_aminozuuramide bereid in 5 ml 50 mM TRIS buffer 10 pH 7.5. Een enzymreactie werd gestart door het toevoegen van 50,U Aminoacylase I van Aspergillus melleus (Fluka, 1.3ü/mg) en onder voortdurend roeren bij kamertemperatuur uitgevoerd. Periodiek werden monsters genomen, verdund met elutievloei-stof teneinde de enzymreactie te stoppen en onderworpen aan 15 chirale HPLC-analyse (Crownpack CR+). De optische zuiverheid van overblijvend D-a-aminozuuramide werd bepaald na het bereiken van ongeveer 50% omzetting.In all cases, a 10 mM solution of suitable D, L-a-amino acid amide was prepared in 5 ml of 50 mM TRIS buffer pH 7.5. An enzyme reaction was started by adding 50 .mu. Aminoacylase I of Aspergillus melleus (Fluka, 1.3 µ / mg) and carried out with constant stirring at room temperature. Samples were taken periodically, diluted with elution fluid to stop the enzyme reaction and subjected to chiral HPLC analysis (Crownpack CR +). The optical purity of remaining D-α-amino acid amide was determined after reaching about 50% conversion.
voor- Omz. e.e. Eprev. e.e. E
Exp. Substraat keurs- (%) (S) eonfigu- __ratie____ 1 D, L-leucine-ami- L 50.2 97.8 320 de 3 D,L-p-hydroxy- L 50.1 >99 >300 fenylglycine- amide 4 D,L-homo- L 48.2 90.7 240 fenylalanine 20Exp. Substrate (%) (S) Confirmation____ 1 D, L-leucine amino L 50.2 97.8 320 de 3 D, Lp-hydroxy-L 50.1> 99> 300 phenylglycine amide 4 D, L-homo-L 48.2 90.7 240 phenylalanine 20
Voorbeeld 3Example 3
Enantioselectieve hydrolyse van D,L-2-aminoboterzuurethyl-ester 25 D,L-2-aminoboterzuurethylester (ABAE) werd bereid door het veresteren van D,L-2-aminoboterzuur (D,L-ABA, verkregen bij ACROS) in ethanol in aanwezigheid van zwavelzuur.Enantioselective hydrolysis of D, L-2-aminobutyric acid ethyl ester D, L-2-aminobutyric acid ethyl ester (ABAE) was prepared by esterifying D, L-2-aminobutyric acid (D, L-ABA, obtained from ACROS) in ethanol in presence of sulfuric acid.
t 5t 5
De overmaat ethanol werd onder verlaagde druk afgedampt.The excess ethanol was evaporated under reduced pressure.
Het verkregen zwavelzure zout van D,L-ABAE (24 mmol) werd opgelost in 100 ml water en de pH werd onder gebruikmaking van NaOH op 6,7 bijgesteld. De reactie werd gestart door 5 het toevoegen van 1 g Aminoacylase I van Aspergillus melleus (Fluka, 1.3U/mg) en werd bij kamertemperatuur onder voortdurend roeren en automatische pH-controle uitgevoerd. Periodiek werden monsters genomen en onderworpen aan chirale HPLC-analyse (Crownpack CR+). Na vier uur was de pH toegenomen tot 10 8,0 en het reactiemengsel werd 3 keer met ethylacetaat geëx traheerd. Na afdampen van de ethylacetaatlaag werd 1,38 g D-ABAE met een optische zuiverheid van 98% verkregen (10,5 mmol, 88% van de theoretische opbrengst). De waterlaag bevatte 0,1 M (0,9 g) van L-ABA met een optische zuiverheid van 15 94% (8,7 mmol, 73% van de theoretische opbrengst).The resulting sulfuric salt of D, L-ABAE (24 mmol) was dissolved in 100 ml of water and the pH was adjusted to 6.7 using NaOH. The reaction was started by adding 1 g Aminoacylase I of Aspergillus melleus (Fluka, 1.3U / mg) and was carried out at room temperature with continuous stirring and automatic pH control. Samples were taken periodically and subjected to chiral HPLC analysis (Crownpack CR +). After four hours, the pH had risen to 8.0 and the reaction mixture was extracted 3 times with ethyl acetate. After evaporating the ethyl acetate layer, 1.38 g of D-ABAE with an optical purity of 98% was obtained (10.5 mmol, 88% of the theoretical yield). The aqueous layer contained 0.1 M (0.9 g) of L-ABA with an optical purity of 94% (8.7 mmol, 73% of the theoretical yield).
Het geïsoleerde D-ABAE werd vervolgens gehydroly-seerd in aanwezigheid van zoutzuur (pH 0,5, 100°C). Water werd afgedampt en het ruwe product werd gewassen met een mengsel van TBME/ 2-propanol, onder oplevering van 1 gram D-20 ABA hydrochloride zout (7,1 mmol, 59% van de theoretische opbrengst. Het product had een chemische zuiverheid van 99+% en 98+% optische zuiverheid en een [aio20 = -15 (c=l, 2.5 M HC1) .The isolated D-ABAE was then hydrolyzed in the presence of hydrochloric acid (pH 0.5, 100 ° C). Water was evaporated and the crude product was washed with a mixture of TBME / 2-propanol, yielding 1 gram of D-20 ABA hydrochloride salt (7.1 mmol, 59% of theory). The product had a chemical purity of 99 +% and 98 +% optical purity and a [a 10 20 = -15 (c = 1, 2.5 M HCl).
Voorbeeld 4 25 Enantioselectieve hydrolyse van D,L-a~aminozuurestersExample 4 Enantioselective hydrolysis of D, L-α-amino acid esters
In alle gevallen werd 10 mM van de geschikte D,L-<x-aminozuurester opgelost in 5 ml van 50 mM TRIS buffer pH 6,5. Een enzymreactie werd gestart door het toevoegen van 50 U 30 Aminoacylase I van Aspergillus melleus (Fluka, 1.3U/mg) en onder voortdurend roeren bij kamertemperatuur uitgevoerd. Periodiek werden monsters genomen, verdund met elutiemiddel teneinde de enzymreactie te stoppen en onderworpen aan chirale HPLC-analyse (Crownpack CR+). De optische zuiverheid van 35 de overblijvende D, -(χ-aminozuurester werd bepaald nadat circa 50% omzetting was bereikt.In all cases, 10 mM of the appropriate D, L <x-amino acid ester was dissolved in 5 ml of 50 mM TRIS buffer pH 6.5. An enzyme reaction was started by adding 50 U of Aminoacylase I from Aspergillus melleus (Fluka, 1.3 U / mg) and performed with constant stirring at room temperature. Samples were taken periodically, diluted with eluent to stop the enzyme reaction and subjected to chiral HPLC analysis (Crownpack CR +). The optical purity of the remaining D, - (χ-amino acid ester) was determined after approximately 50% conversion was achieved.
1023767 11023767 1
* I* I
66
Exp. Substraat voorkeurs** Omz. e.e. EExp. Preferred substrate ** Rev. e.e. E
configura- (%) (S) ___ tie___ _ 1 D,L-2- L 53 98 65 aminoboterzuur- ethylester 2 D,L-2- L 53 92 33 aminoboterzuur- methylester D,L-p-hydroxy- 3 fenylglycine- L 56 87 15 _methylester_configura- (%) (S) ___ tie___ 1 D, L-2 L 53 98 65 amino butyric acid ethyl ester 2 D, L-2- L 53 92 33 amino butyric acid methyl ester D, Lp-hydroxy-3 phenylglycine-L 56 87 15 _methyl ester_
Voorbeeld 5 5 Enantioselectieve hydrolyse van D,L-2-aminoboterzuurethyl-ester met behulp van geïmmobiliseerde Aminoacylase I.Example 5 Enantioselective hydrolysis of D, L-2-aminobutyric acid ethyl ester with immobilized Aminoacylase I.
10 ml van een oplossing van D, L-2-aminoboterzuur-ethylester (D,L-ABAE) werd bereid in 50 mM TRIS buffer van pH 10 6,7. De enzymreactie werd gestart door het toevoegen van 100 mg geïmmobiliseerde Aminoacylase I van Aspergillus (Fluka, 388 ü/g) en onder voortdurend roeren en bij kamertemperatuur uitgevoerd. Periodiek werden monsters genomen en onderworpen aan chirale HPLC-analyse (Crownpack CR+). Na 6 uur reactie 15 werd 49% omzetting bereikt. De optische zuiverheid van overblijvend D-ABAE was 90%, de optische zuiverheid van 2-aminoboterzuur was 94% (L).10 ml of a solution of D, L-2-aminobutyric acid ethyl ester (D, L-ABAE) was prepared in 50 mM TRIS buffer of pH 10.6.7. The enzyme reaction was started by adding 100 mg immobilized Aminoacylase I from Aspergillus (Fluka, 388 µl / g) and carried out with continuous stirring and at room temperature. Samples were taken periodically and subjected to chiral HPLC analysis (Crownpack CR +). After 6 hours of reaction, 49% conversion was achieved. The optical purity of remaining D-ABAE was 90%, the optical purity of 2-amino butyric acid was 94% (L).
Voorbeeld 6 20 Enantioselectieve hydrolyse van D,L-beta-fenylalanineethyl-ester.Example 6 Enantioselective hydrolysis of D, L-beta-phenylalanine ethyl ester.
Een 10 mM oplossing van D,L-beta-fenylalanineethyl-ester werd bereid in 5 ml 50 mM TRIS buffer van pH 7,5. Een 25 enzymreactie werd gestart door het toevoegen van 50 U Aminoacylase I van Aspergillus melleus (Fluka, 1.3U/mg) en onder voortdurend roeren bij kamertemperatuur uitgevoerd. Periodiek werden monsters genomen, verdund met elutiemiddel teneinde de enzymreactie te stoppen en onderworpen aan chirale HPLC-30 analyse (Crownpack CR+, pH 2, 25 C). Na 8 uur reactie werdA 10 mM solution of D, L-beta-phenylalanine ethyl ester was prepared in 5 ml of a 50 mM TRIS buffer of pH 7.5. An enzyme reaction was started by adding 50 U Aminoacylase I of Aspergillus melleus (Fluka, 1.3 U / mg) and carried out with constant stirring at room temperature. Samples were taken periodically, diluted with eluent to stop the enzyme reaction and subjected to chiral HPLC-30 analysis (Crownpack CR +, pH 2, 25 C). After 8 hours of reaction
' I"I
7 46% omzetting bereikt. De optische zuiverheid van overgebleven D- beta-fenylalanineethylester was 81% (E = 100).7 46% conversion achieved. The optical purity of remaining D-beta phenylalanine ethyl ester was 81% (E = 100).
1023767 ’1023767 "
Claims (9)
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1023767A NL1023767C1 (en) | 2003-06-27 | 2003-06-27 | Process for separating optical isomers from a protected amino acid. |
| EP04748942A EP1656456A1 (en) | 2003-06-27 | 2004-06-25 | Method of separating optical isomers of a protected aminoacid |
| RU2006100556/13A RU2006100556A (en) | 2003-06-27 | 2004-06-25 | METHOD FOR SEPARATING OPTICAL ISOMERS OF PROTECTED AMINO ACIDS |
| PCT/RU2004/000244 WO2005001107A1 (en) | 2003-06-27 | 2004-06-25 | Method of separating optical isomers of a protected aminoacid |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL1023767 | 2003-06-27 | ||
| NL1023767A NL1023767C1 (en) | 2003-06-27 | 2003-06-27 | Process for separating optical isomers from a protected amino acid. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL1023767C1 true NL1023767C1 (en) | 2004-12-28 |
Family
ID=33550490
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL1023767A NL1023767C1 (en) | 2003-06-27 | 2003-06-27 | Process for separating optical isomers from a protected amino acid. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1656456A1 (en) |
| NL (1) | NL1023767C1 (en) |
| RU (1) | RU2006100556A (en) |
| WO (1) | WO2005001107A1 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8934512B2 (en) * | 2011-12-08 | 2015-01-13 | Binoptics Corporation | Edge-emitting etched-facet lasers |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3647065B2 (en) * | 1994-07-20 | 2005-05-11 | 株式会社武蔵野化学研究所 | Method for producing optically active alanine |
| JP3160879B2 (en) * | 1996-01-30 | 2001-04-25 | 田辺製薬株式会社 | Preparation of optically active amino acid derivatives |
-
2003
- 2003-06-27 NL NL1023767A patent/NL1023767C1/en not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-06-25 EP EP04748942A patent/EP1656456A1/en not_active Withdrawn
- 2004-06-25 RU RU2006100556/13A patent/RU2006100556A/en not_active Application Discontinuation
- 2004-06-25 WO PCT/RU2004/000244 patent/WO2005001107A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2005001107A1 (en) | 2005-01-06 |
| RU2006100556A (en) | 2007-08-27 |
| EP1656456A1 (en) | 2006-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1897956A1 (en) | Process for preparation of optically active amines by optical resolution of racemic amines employing a bacterial omega-transaminase | |
| EP2071032A2 (en) | The use of enzymatic resolution for the preparation of intermediates of pregabalin | |
| US5756800A (en) | Process for the enzymatic resolution of 2-amino-4-methyl-phosphinobutyric acid derivatives | |
| US6261830B1 (en) | Enzymatic process for stereoselective preparation of a tertiary acid | |
| NL1023767C1 (en) | Process for separating optical isomers from a protected amino acid. | |
| JP2000515371A (en) | Biological resolution of N-acylazetidine-2-carboxylic acid | |
| US5552318A (en) | Method for preparing optically active amino acids and their esters using wheat germ lipase | |
| EP0512848B1 (en) | Enzymatic resolution of alpha-tertiary carboxylic acid esters | |
| US20050153401A1 (en) | Process for preparing optically active beta-aminocarboxylic acids from racemic n-acylated beta-aminocarboxylic acids | |
| SK282782B6 (en) | Process for preparing enantiomerically enriched N-derivatised lactams | |
| WO1998020152A1 (en) | Process for producing optically active 3-quinuclidinol derivatives | |
| JPH09206089A (en) | Production of optically active amino acid derivative | |
| JP2007117034A (en) | Method for producing optically active nipecotic acid compound | |
| US7439036B2 (en) | Process for producing optically active octahydro-1H-indole-2-carboxylic acid | |
| JP4392812B2 (en) | Novel optically active 4-amino-2-methylbutyric acid derivative and method for producing the same | |
| FR2829152A1 (en) | Separation of amino acid enantiomers by glutaramide formation and enzymatic hydrolysis using glutaryl 7-ACA acylase | |
| US7662610B2 (en) | Synthesis of intermediates for the preparation of pramipexol | |
| MXPA04002694A (en) | Enzymatic process for the preparation of substituted 2-amino-3-(2-amino-phenylsulfanyl)-propionic acid. | |
| US20060172393A1 (en) | Process for producing optically active alpha -methylcysteine derivative | |
| EP1391449A1 (en) | Hydrolysis of amino acid diesters | |
| JPH06319591A (en) | Production of optically active norstatin derivative | |
| EP3045540A1 (en) | Enzymatic process for the regioselective manufacturing of N-Fmoc-doxorubicin-14-O-dicarboxylic acid mono esters | |
| JP2008271827A (en) | METHOD FOR PRODUCING OPTICALLY ACTIVE N-ARYL-beta-AMINO ACID COMPOUND | |
| KR20090112070A (en) | The method for preparing optically active n-substituted phenylglycine alkyl esters by enzymatic method | |
| JP2001314197A (en) | Method for producing optically active hydroxyalkyl- alpha-aminocarboxylic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| VD1 | Lapsed due to non-payment of the annual fee |
Effective date: 20080101 |