NL1005352C2

NL1005352C2 - Fysiologisch werkzaam middel voor vissen en voeradditief voor het kweken van vissen.

Info

Publication number: NL1005352C2
Application number: NL1005352A
Authority: NL
Inventors: Akihisa Matsuura
Original assignee: Araya Corp
Priority date: 1997-02-24
Filing date: 1997-02-24
Publication date: 1998-08-26

Description

Fysiologisch werkzaam middel voor vissen en voeradditief voor het kweken van vissen 5

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op fysiologisch werkzame middelen voor vissen en voeradditie-ven voor het kweken van vissen.

Groene zwavelbacteriën zijn gebruikt voor de 10 ontwikkeling van voeradditieven voor het kweken van vissen zoals paling, modderkruiper, "sweetfish", bot, rode zeebra-sem en garnaal en, in het bijzonder, voor de jongen daarvan. Deze voeradditieven bleken effectief te zijn bij het vergroten van de effectiviteit van het voer.

15 Wanneer de groene zwavelbacteriën zelf worden toegevoegd, kunnen deze voeradditieven echter afgebroken worden door de eiwitten in de groene zwavelbacteriën, wat na 2 of 3 maanden resulteert in achteruitgang van deze additieven. Met het oog op het voorgaande was het gewenst 20 andere fysiologisch werkzame middelen te vinden voor vissen en voeradditieven voor het kweken van vissen die gedurende lange tijd bewaard kunnen blijven door de oorzaak van de afbraak weg te nemen.

Om de hiervoor beschreven problemen te ondervan-25 gen, heeft de uitvinder van de onderhavige uitvinding intensief onderzoek gedaan naar de metaboliet van groene zwavelbacteriën en gevonden dat de metaboliet van groene zwavelbacteriën een effectief bestanddeel bevat voor het bevorderen van de groei van vissen dat effectiever is dan 30 groene zwavelbacteriën zelf die een effectief bestanddeel bevatten, en tevens een werkwijze gevonden voor het verkrijgen van fysiologisch werkzame middelen voor vissen en voeradditieven voor het kweken van vissen door dit effectieve bestanddeel te extraheren. Volgens de onderhavige 35 uitvinding wordt voorzien in een fysiologisch werkzaam middel voor vissen en een voeradditief voor het kweken van vissen dat gemakkelijk in grote hoeveelheden kan worden 1005352 2 geproduceerd en dat een uitstekende efficiëntie als voerad-ditief heeft en gedurende zeer lange tijd kan worden bewaard en dus zeer economisch is.

De onderhavige uitvinding voorziet dus in een 5 fysiologisch werkzaam middel voor vissen, dat de metaboliet van groene zwavelbacteriën als effectief bestanddeel omvat.

De onderhavige uitvinding voorziet ook in een voeradditief voor het kweken van vissen, omvattende het hiervoor genoemde fysiologisch werkzame middel.

10 Het is daarom een doel van de onderhavige uitvin ding te voorzien in een fysiologisch werkzaam middel voor vissen dat de metaboliet van groene zwavelbacteriën als effectief bestanddeel omvat.

Figuur 1 toont de relatie tussen de gewichtstoena-15 me en het aantal testdagen.

De metaboliet van groene zwavelbacteriën kan als volgt worden verkregen.

De bacteriën worden verwijderd door de kweekoplos-sing die de groene zwavelbacteriën bevat, te filtreren, 20 waarbij een filtraat wordt verkregen dat alleen de metaboliet van groene zwavelbacteriën en bestanddelen uit het kweekmedium bevat en voorts de bestanddelen van het kweek-medium in de vorm van zouten en dergelijke te verwijderen, waardoor de metaboliet kan worden verkregen.

25 Eén van de redenen voor het verwijderen van de bestanddelen van het kweekmedium is dat bij drogen, bijvoorbeeld vriesdrogen, er zouten van de bestanddelen van het kweekmedium ontstaan waardoor de opbrengst aan effectieve bestanddelen laag wordt. Een andere reden is dat de 30 bestanddelen van het kweekmedium geen bestanddelen omvatten die fysiologisch werkzaam zijn voor vissen.

Voorbeelden van de werkwijzen omvatten een werkwijze voor het verwijderen van alleen bestanddelen van het kweekmedium met een laag molecuulgewicht door middel van 35 een omgekeerde-osmosemembraan of ultrafiltratiemembraan. Deze werkwijzen zijn effectief omdat wordt aangenomen dat de bestanddelen van de metaboliet die effectief zijn voor 1005352 3 het bevorderen van de groei een gemiddeld molecuulgewicht van 200 of meer hebben. De onderhavige uitvinding is echter niet beperkt tot deze werkwijzen. De tijdsperiode die noodzakelijk is voor het kweken van de groene zwavelbacte-5 riën volgens de onderhavige uitvinding is kort. Kenmerkend vermenigvuldigen de groene zwavelbacteriën zich binnen 24 uur tot een hoge . concentratie groter dan 109/ml. Het kweekmedium voor de groene zwavelbacteriën is minder duur en de massaproduktie ervan is eenvoudig en goedkoop. De 10 groene zwavelbacteriën kunnen stabiel worden gekweekt zonder dat men bang hoeft te zijn voor de groei van ongewenste micro-organismen zelfs indien voor het kweken de sterilisatie- en ontsmettingsbewerkingen worden weggelaten. De groene zwavelbacteriën veroorzaken voorts geen verslech-15 tering van inname of giftigheid voor de vissen, maar blijken daarentegen een aanzienlijke verbetering van de inname en groei te geven.

Uit het voorgaande blijkt dat het kweekmedium voor de groene zwavelbacteriën het meest geschikt is als voerad-20 ditief voor vissen. Zelfs indien de metaboliet van de groene zwavelbacteriën wordt gescheiden en geëxtraheerd en wordt toegevoegd als voeradditief, is de metaboliet effectief en kan hij gedurende lange tijd bewaard worden.

In het algemeen zijn de groene zwavelbacteriën 25 groene fotosynthetische bacteriën die anaëroob fotosynthese ondergaan met behulp van waterstofsulfide, colloidaal zwavel, thiosulfaten en moleculaire waterstof als elektronendonor en die alleen door fotosynthese kunnen leven zonder dat daarbij groeifactor noodzakelijk is. De groene 30 zwavelbacteriën hebben een fotosynthesesysteem in een onafhankelijke blaasjesachtige structuur binnen iedere cel, welk systeem een kleine hoeveelheid bacteriochlorofyl alsmede chlorobiumchlorofyl bevat. Tussen deze twee pigmenten treedt energieoverdracht op. De groene zwavelbacteriën 35 die behoren tot Chlorobium ondergaan onder zodanige omstandigheden assimilatie zodat naast H2S een kleine hoeveelheid azijnzuur aanwezig is.

1005352 4

Uit de onderhavige uitvinding blijkt dat de metaboliet van de groene zwavelbacteriën effectiever is dan de groene zwavelbacteriën zelf, waarbij tegelijkertijd wordt aangetoond dat de groene zwavelbacteriën, wanneer ze 5 worden gebruikt als fysiologisch werkzaam middel, aanzienlijk bijdragen aan de verbetering van de innamecapaciteit van de vissen waardoor de voerefficiëntie wordt verbeterd.

Voorbeelden van groene zwavelbacteriën volgens de onderhavige uitvinding omvatten Chlorobium limicola (DSM 10 245), Chlorobium vibrioforme (DSM 260), Chlorobium phaeo- bacteroides (DSM 266), Chlorobium phaeovibrioides (DSM 269), Prosthecochloris aestualii (DSM 271), Chlorobium tepidum (ATCC 49652), Pelodictyon luteolum (DSM 273), Pelodictyon phaeum (DSM 728) en andere groene zwavelbacte-15 riën die kunstmatig kunnen worden gekweekt. Bijzonder de voorkeur hebben groene zwavelbacteriën die behoren tot het genus Chlorobium omdat zij geschikt zijn om in grote hoeveelheden gekweekt te worden.

De temperatuur en pH voor het kweekmedium variëren 20 afhankelijk van de soort groene zwavelbacteriën en hun favoriete groeiomstandigheden. De basisomstandigheden voor een kweekmedium voor de groene bacteriën dat de voorkeur heeft, bestaan uit een kweekmedium dat zodanig is bereid dat de pH ervan enigszins zuur is (kenmerkend een pH gebied 25 van ongeveer 7,5 tot ongeveer 6,3) en de belichting op het oppervlak van een kweekvat wordt op niet lager dan 2000 Lux ingesteld. Bij voorkeur wordt het kweken onder perfect anaerobe omstandigheden uitgevoerd bij een temperatuur tussen ongeveer 20°C en ongeveer 30°C waarbij het kweekme-30 dium natriumacetaat als organisch bestanddeel bevat in een concentratie van ongeveer 0,05%.

Voorbeelden van voer voor het kweken van vissen omvatten rauw voer, zoals krill en specifiek voer dat vismeel, zetmeel of iets dergelijks bevat als het belang-35 rijkste ingrediënt en een verdikkingsmiddel, vitaminen, mineralen en dergelijke als additieven bevat. Het voer wordt in het algemeen bij de vissen gevoegd in de vorm van 1005352 5 pasta of tabletten. Wanneer het kweekmedium dat de metabo-liet van de groene zwavelbacteriën bevat en dat is gefiltreerd voor het verwijderen van de bacteriën zelf, of kweekmedia die de bacteriën zelf bevatten of mengsels 5 daarvan, worden toegevoegd aan het voer als voeradditief voor vissen, wordt het kweekmedium dat de groene zwavelbacteriën bevat of de bacteriën zelf, verdund met water of niet verdund, en vervolgens toegevoegd aan en gemengd met de voerpasta. De voertabletten kunnen worden geïmpregneerd 10 met de kweekmediumoplossing.

Het toepassen van de groene zwavelbacteriën die worden gebruikt bij de onderhavige uitvinding is niet beperkt tot voeradditief voor het kweken van vissen. De groene zwavelbacteriën of de metaboliet daarvan, die 15 vitaminen, mineralen, aminozuren en dergelijke bevatten, kunnen ook gebruikt worden als voedingsstof. Kort gezegd kunnen de groene zwavelbacteriën of de metaboliet daarvan effectief worden toegepast als fysiologisch werkzaam middel voor vissen.

20 De hoeveelheid groene zwavelbacteriën die wordt toegevoegd aan het voer is bij voorkeur ongeveer 0,1 gew.%, indien deze wordt gebruikt in gedroogde vorm. Indien het kweekmedium dat de groene zwavelbacteriën bevat, wordt gebruikt is de hoeveelheid van de mediumoplossing die moet 25 worden toegevoegd aan het voer bij voorkeur ongeveer 1 tot ongeveer 50%, afhankelijke van de concentratie bacteriën in de mediumoplossing. Een lager gehalte bacteriën resulteert in weinig verbetering in de inname. Indien de hoeveelheid bacteriën groter is dan de bovengenoemde waarde kan geen 30 extra effect worden verwacht.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een fysiologisch werkzaam middel voor vissen, omvattende de groene zwavelbacteriën en de metaboliet daarvan als effectieve bestanddelen. Het voer dat het fysiologisch werkzame 35 middel als voeradditief voor het kweken van vissen bevat, verbetert de groeiversnelling aanzienlijk. De groene zwavelbacteriën vermenigvuldigen zich binnen 24 uur tot een 1005352 6 hoge concentratie groter dan 109/ml, wat zeer hoog is vergeleken met andere bacteriën.

De metaboliet van de groene zwavelbacteriën is minder duur en de massaproduktie ervan is eenvoudig en 5 economisch. De groene zwavelbacteriën kunnen stabiel worden gekweekt zonder dat er moet worden gevreesd voor de groei van ongewenste microörganismen, zelfs indien tijdens de stap voor het kweken niet wordt gesteriliseerd en ontsmet. Bovendien veroorzaken de groene zwavelbacteriën geen afname 10 van inname of giftigheid voor vissen, maar blijken zij een aanzienlijke verbetering te geven van de inname en de groeiverbetering. Wanneer de groene zwavelbacteriën echter blijven staan, kunnen zij afgebroken worden en binnen 2 of 3 maanden verslechteren, zelfs indien ze zijn bewaard bij 4 15 °C of lager. Daarom wordt alleen de metaboliet afgescheiden door filtreren met behulp van een membraanfilter van 0,2 μτη waardoor de oorzaak van de afbraak, te weten de bacteriën zelf, wordt weggenomen zodat ze gedurende lange tijd bewaard kunnen blijven.

2 0 Met het oog op conservering, hebben een fysiolo gisch werkzaam middel voor vissen en een voeradditief voor het kweken van vissen die de metaboliet van groene zwavelbacteriën als effectief bestanddeel omvatten, bij de onderhavige uitvinding de voorkeur.

2 5 Aan de andere kant kan, zonder conservering te beschouwen, zonder risico gezegd worden dat een fysiologisch werkzaam middel voor vissen en een voeradditief voor het kweken van vissen de bacteriën zelf of een kweekmedium dat de groene zwavelbacteriën bevat als effectief bestand-30 deel daarvan, kan omvatten, zonder de metaboliet te scheiden van de groene zwavelbacteriën.

Wanneer een fysiologisch werkzaam middel voor vissen en een voeradditief voor het kweken van vissen de metaboliet van groene zwavelbacteriën en de bacteriën zelf 35 bevatten als effectieve bestanddelen kunnen zij de opbrengsten meer verbeteren dan wanneer zij alleen de metaboliet van groene zwavelbacteriën bevatten en kunnen zij een 1005352 7 synergistische werking van de fysiologische activiteit vertonen.

Voorbeeld 1 en 2

Vijf reservoirs van 3 0 cm x 3 0 cm werden gevuld 5 met water. Vervolgens werden in elk reservoir 15 goudvissen geplaatst en gekweekt tot een totaalgewicht van 77,0 g.

Voor een vergelijkingstest werd voer voor goudvissen (ANGEL FLOAT (merknaam) verkrijgbaar bij NIPPON PET FOODS Co.) in het reservoir gebracht.

10 Voor voorbeeld 1 werden voer en kweekmediumoplos- sing die gefiltreerd Chlorobium limicola (niet de bacteriën zelf) bevatten elk in een hoeveelheid van ongeveer 5% van het gewicht van de goudvissen in één dag in het reservoir gebracht. De concentratie kweekmediumoplossing was ongeveer 15 4 gew.% ten opzichte van het totale gewicht van het goud- vissenvoer.

Er werden vijf testgroepen bereid: (a) een groep waaraan werd toegevoegd: voer en ongeveer 4%, ten opzichte van het totale gewicht van het 20 goudvissenvoer, kweekmediumoplossing die gefiltreerd Chlorobium libicola (niet de bacteriën zelf) bevatte (voor voorbeeld 1).

(b) een groep waaraan alleen goudvissenvoer werd toegevoegd (ter vergelijking).

25 (c) een groep waaraan werd toegevoegd: voer en ongeveer 4%, ten opzichte van het totale gewicht van het goudvissenvoer, kweekmediumoplossing die Chlorobium limicola bevatte (ook de bacteriën zelf) (voor voorbeeld 2).

(d) een groep waaraan werd toegevoegd: voer en de 30 bacteriën zelf die waren gefiltreerd en gereinigd door middel van een 0,2 μτη membraanfilter uit de zelfde hoeveelheid kweekmediumoplossing als voorbeeld 2. (voor vergelijkend voorbeeld 1).

(e) een groep waaraan werd toegevoegd: voer en 35 ongeveer 4% kweekmedium voor de groene zwavelbacteriën zoals hiervoor (voor vergelijkend voorbeeld 2).

De volgende tabel 1 toont het gewicht na de test.

1005352

Tabel 1 8

Totaalgewicht

Vb. 1 Con- Vb. 2 Verg. Verg.

trole Vb. 1 Vb. 2

Begingewicht 77, o 77,0 77,0 77,0 77, o 5 Gewicht na 5 dagen 89,2 82,1 91,5 84,3 81,6

Gewicht na 10 dagen 100,1 88,9 102,1 91,4 87,4

Gewicht na 15 dagen 110,9 98,7 113,3 100,7 96,9

De groei in vergelijkend voorbeeld 1 was iets 10 beter dan de groei in de controletest maar de groei in zowel voorbeeld 1 als voorbeeld 2 was aanzienlijk verbeterd .

Er werd gevonden dat het cultuurmedium geen effect had omdat de groei in vergelijkend voorbeeld 2 slecht was 15 vergeleken met de groei in de controletest.

De volgende tabel 2 toont het gewichtstoename tijdens de test.

Tabel 2

Vb. 1 Con- Vb. 2 Verg. Verg.

trole Vb. 1 Vb. 1 20 Begin gewichtstoename 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Gewichtstoename na 5 dagen 12,2 5,1 14,5 7,3 4,6

Gewichtstoename na 10 dagen 23,1 11,9 25,1 14,4 10,4

Gewichtstoename na 15 dagen 33,9 21,7 36,3 23,7 19,9 25 Tabel 2 vergelijkt de gewichtstoename [(het totale gewicht na n dagen) - (het totale begingewicht 77,0 g) ] . Deze tabel toont de gewichtstoename van voorbeeld 1 en voorbeeld 2.

Figuur 1 toont de relatie tussen de gewichtstoena-30 me en het aantal testdagen gebaseerd op tabel 2.

Voorbeeld 3 en 4

Vier reservoirs van 75 cm x 45 cm x 45 cm werden gevuld met water. Vervolgens werden in elk van de contain- 1005352 9 ers 60 jonge zeebrasems gebracht (gemiddeld gewicht 0,2 g) en één maand gekweekt.

Voor een controletest werd voer voor rode zeebra-sem in het reservoir gebracht.

5 Er werden vier testgroepen bereid: (a) een groep waaraan alleen voer voor rode zeebrasem werd toegevoegd (controle), (b) een groep waaraan voer werd toegevoegd waaraan 2%, ten opzichte van het totale gewicht van het voer voor 10 rode zeebrasem, kweekmediumoplossing met Chlorobium limico-la (waaronder de bacteriën zelf) bevatte (voorbeeld 3).

(c) een groep waaraan voer werd toegevoegd dat ongeveer 2%, ten opzichte van het totale gewicht van het voer voor rode zeebrasem, kweekmediumoplossing bevatte, die 15 Chlorobium limicola gefiltreerd met een membraanfilter van 0,2 μττι (zonder de bacteriën zelf) bevatte (voor voorbeeld 4) .

(d) een groep waaraan voer werd toegevoegd dat alleen de bacteriën bevatte die waren gefiltreerd en 20 gereinigd met een membraanf ilter van 0,2 μπι uit dezelfde hoeveelheid kweekmediumoplossing als voorbeeld 4 (voor vergelijkend voorbeeld 3).

Tabel 3 toont de voerefficiëntie en het overle- vingspercentage.

25 Tabel 3

Con- Vb. 3 Vb. 4 Verg.

trole Vb. 3

Begingewicht (g) 12,0 12,0 12,0 12,0

Gewicht na test (g) 264,0 300,0 289,0 266,0

Gewichtstoename (g) 252,0 288,0 277,0 254,0 30 Hoeveelheid voer (g) 239,0 239,0 239,0 239,0

Voerefficiëntie (%) 105,4 120,5 115,9 106,3 % Gewichtstoename 2200 2500 2408 2217

Aantal overlevende vissen na test 54 59 56 59 35 Overlevingspercentage (%) 90,0 98,3 93,3 98,3

Verklaring tabel 3: 1005352 10

Begingewicht: het totale gewicht (g) rode zeebrasem bij het begin van de test.

Gewicht na test: het totale gewicht (g) van de rode zeebrasem bij het einde van de test.

5 Gewichtstoename: [(gewicht na test) - (begingewicht)] (g).

Hoeveelheid voer: de totale hoeveelheid (g) voer toegevoegd tijdens de test.

Voerefficiëntie: [(gewichtstoename)/(hoeveelheid voer) x 100] (%) .

10 Gewichtstoename: [(gewicht na test)/(begingewicht) x 100] (%) -

Overlevingspercentage: [(aantal overlevende vissen na test)/60) x 100] (%).

Uit de resultaten blijkt dat de groei in voorbeeld 15 3 en voorbeeld 4 goed was. Het overlevingspercentage tijdens de test was 98,3% (voorbeeld 3), 93,3% (voorbeeld 4) en 98,3% (vergelijkend voorbeeld 3) vergeleken met 90,0% (controle) en de verbetering van het overlevingspercentage werd waargenomen.

20 In de voorbeelden werd Chlorobium limicola ge bruikt als groene zwavelbacterie. De Chlorobium limicola werd gekweekt bij een temperatuur van 30°C met een belichting van 5000 Lux gedurende één dag in een kweekmedium met een pH van 6,8 ± 0,2 dat bevatte: 0,5 g dikaliumfosfaat, 25 0,5 g ammoniumsulf aat, 0,2 g magnesiumsulf aat, 0,05 g calciumchloride, 0,1 g natriumchloride, 1,0 g natriumbicarbonaat, 1,0 g natriumsulfide, 1,0 g natriumthiosulfaat, een sporehoeveelheid EDTA, een sporehoeveelheid EDTA-ijzerzout, een sporehoeveelheid EDTA-kobaltzout, een sporehoeveelheid 30 boorzuur, een sporehoeveelheid kopersulfaat, een sporehoeveelheid zinksulfaat, een sporehoeveelheid natriummolyb-daat, een sporehoeveelheid nikkelchloride, een sporehoeveelheid mangaanchloride en 1000 ml water.

In de voorgaande voorbeelden worden goudvissen en 35 jonge rode zeebrasems gebruikt maar de uitvinding is niet daartoe beperkt. De metaboliet van groene zwavelbacteriën veroorzaakt geen afname van de inname of giftigheid voor de 1005352 11 vissen maar verbetert juist de inname waardoor de groei van de vissen wordt bevorderd. Daarnaast is de tijd die nodig is om de groene zwavelbacteriën onder vantevoren bepaalde omstandigheden te kweken kort. Zelfs gefiltreerde kweekme-5 diumoplossing heeft een voldoende efficiëntie voor het bevorderen van de groei van vissen. Bovendien is het kweekmedium voor de groene zwavelbacterie minder duur en is de massaproduktie van de bacteriën eenvoudig en economisch. Bovendien kunnen de groene zwavelbacteriën stabiel worden 10 gekweekt zonder dat men bang hoeft te zijn voor de groei van ongewenste microörganismen zelfs wanneer voor het kweken niet wordt gesteriliseerd of ontsmet. De onderhavige uitvinding heeft dus deze voordelen. De onderhavige uitvinding is van toepassing op in het algemeen alle soorten 15 vissen dat wil zeggen niet alleen zoetwatervissen maar ook zoutwatervissen.

De groene zwavelbacterie Chlorobium limicola (DSM 254) werd gebruikt in de voorbeelden en verbeterde de voerefficiëntie en de snelheid van gewichtstoename aanzien-20 lijk. Dienovereenkomstig kunnen Chlorobium vibrioforme (DSM 260), Chlorobium phaeobacteroides (DSM 266), Chlorobium phaeovibrioides (DSM 269), Prosthecochloris aestualii (DSM 271), Chlorobium tepidum (ATCC 49652), Pelodictyon luteolum (DSM 273) en Pelodictyon phaeum (DSM 728) de voeref fi-25 ciëntie en de snelheid van gewichtstoename verbeteren.

Zoals blijkt uit het voorgaande voorziet de onderhavige uitvinding in een fysiologisch werkzaam middel voor vissen omvattende de metaboliet van groene zwavelbacteriën als effectief bestanddeel. Het voer dat het fysiolo-30 gisch actieve middel als voeradditief voor het kweken van vissen bevat, verbetert de conservering en de groeibevorde-ring aanzienlijk vergeleken met voer dat alleen de bacteriën zelf bevat. Bovendien is de kweekperiode voor de groene zwavelbacteriën zeer kort, dat wil zeggen, de groene 35 zwavelbacteriën kunnen in korte tijd tot hoge concentratie worden gekweekt en het kweekmedium dat daarvoor nodig is is minder duur. Daarom is het fysiologisch actieve middel dat 1005352 12 de metaboliet van groene zwavelbacteriën bevat bijzonder geschikt voor massaproduktie. Bovendien veroorzaakt het fysiologisch actieve middel geen afname van inname of giftigheid voor de vissen maar verbetert het juist de 5 inname van de vissen en voorziet in een zeer grote efficiëntie als voeradditief.

1005352

Claims

1. Fysiologisch werkzaam middel voor vissen, met 5 het kenmerk, dat het de metaboliet van groene zwavelbacte- riën als effectief bestanddeel omvat.

2. Fysiologisch werkzaam middel voor vissen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het een kweek van groene zwavelbacteriën als effectief bestanddeel omvat.

3. Fysiologisch werkzaam middel volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat de groene zwavelbacteriën behoren tot Chlorobiaceae.

4. Fysiologisch werkzaam middel volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat de groene zwavelbacteriën worden 15 gekozen uit Chlorobium limicola, Chlorobium vibrioforme, Chlorobium phaeobacteroides, Chlorobium phaeovibrioides, Prosthecochloris aestualii, Chlorobium tepidum, Pelodictyon luteolum en Pelodictyon phaeum.

5. Voeradditief voor het kweken van vissen, met 20 het kenmerk, dat het een fysiologisch werkzaam middel volgens één der conclusies 1 tot 4 omvat. 1005352