MXPA99010515A - Gen que codifica para resistencia sistemica adquirida en arabidopsis - Google Patents
Gen que codifica para resistencia sistemica adquirida en arabidopsisInfo
- Publication number
- MXPA99010515A MXPA99010515A MXPA/A/1999/010515A MX9910515A MXPA99010515A MX PA99010515 A MXPA99010515 A MX PA99010515A MX 9910515 A MX9910515 A MX 9910515A MX PA99010515 A MXPA99010515 A MX PA99010515A
- Authority
- MX
- Mexico
- Prior art keywords
- sar
- plant
- nucleic acid
- plants
- signal transduction
- Prior art date
Links
- 230000021918 systemic acquired resistance Effects 0.000 title abstract description 16
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 title description 28
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N Salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 142
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 claims abstract description 70
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims abstract description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 37
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims description 41
- 108010053156 lipid transfer protein Proteins 0.000 claims description 35
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 28
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 15
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 14
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 claims description 10
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 10
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 10
- 230000001131 transforming Effects 0.000 claims description 6
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 230000003278 mimic Effects 0.000 claims description 4
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 4
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 4
- 241001473877 Biserrula isolate Species 0.000 claims 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000002759 chromosomal Effects 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 claims 1
- 230000003505 mutagenic Effects 0.000 claims 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 claims 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 120
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N Kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 22
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 19
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 16
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 11
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 11
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 11
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 240000008962 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 8
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 7
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 7
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 6
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 6
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N acetic acid ethyl ester Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 5
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 5
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 5
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 5
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 5
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structures Anatomy 0.000 description 5
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 5
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 5
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 2-mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine zwitterion Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 description 4
- 235000017585 alfalfa Nutrition 0.000 description 4
- 235000017587 alfalfa Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 3
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 3
- 101700035006 PR-1 Proteins 0.000 description 3
- GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N Ser-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 3
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 3
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000001338 necrotic Effects 0.000 description 3
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 3
- 230000030118 somatic embryogenesis Effects 0.000 description 3
- XWMVMWTVLSLJGY-IUXQBBRLSA-N (2S,5R,6R)-6-[(2-carboxy-2-thiophen-3-ylacetyl)amino]-3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;(2R,3Z,5R)-3-(2-hydroxyethylidene)-7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C=1C=CSC=1 XWMVMWTVLSLJGY-IUXQBBRLSA-N 0.000 description 2
- SQSYNRCXIZHKAI-UHFFFAOYSA-N 2,6-dichloroisonicotinic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(Cl)=NC(Cl)=C1 SQSYNRCXIZHKAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 101710027759 At1g75040 Proteins 0.000 description 2
- 101710033091 BG2 Proteins 0.000 description 2
- 241000222235 Colletotrichum orbiculare Species 0.000 description 2
- 241000222237 Colletotrichum trifolii Species 0.000 description 2
- NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS NXTYATMDWQYLGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYVKPHCYMTWUCW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS WYVKPHCYMTWUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 240000007842 Glycine max Species 0.000 description 2
- 101710009978 LE16 Proteins 0.000 description 2
- 101710009969 LTP110-A Proteins 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N Lys-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- PBOUVYGPDSARIS-IUCAKERBSA-N Met-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C PBOUVYGPDSARIS-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 101700082220 PF12 Proteins 0.000 description 2
- 240000005158 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- HXNYBZQLBWIADP-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Cysteine Chemical compound OC(=O)C(CS)NC(=O)C1CCCN1 HXNYBZQLBWIADP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101700033344 SCP2 Proteins 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 2
- 229940027257 Timentin Drugs 0.000 description 2
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108010037389 glutamyl-cysteinyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074027 glycyl-seryl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CKAJHWFHHFSCDT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N Benzothiazole Chemical class C1=CC=C2SC=NC2=C1 IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011331 Brassica Nutrition 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 1
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 1
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 1
- 101710009962 CW18 Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000002860 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002243 Daucus carota subsp sativus Nutrition 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N Ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100004985 GUSB Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Histidine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 description 1
- 101710009972 LTP6 Proteins 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase family Proteins 0.000 description 1
- 240000001140 Mimosa pudica Species 0.000 description 1
- 235000016462 Mimosa pudica Nutrition 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 101710026180 NIM1K Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229920000272 Oligonucleotide Polymers 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 101710008348 PARA1 Proteins 0.000 description 1
- 101700007412 PRP Proteins 0.000 description 1
- 101700063986 PRR3 Proteins 0.000 description 1
- 240000000064 Penicillium roqueforti Species 0.000 description 1
- 235000002233 Penicillium roqueforti Nutrition 0.000 description 1
- 241000582441 Peronospora tabacina Species 0.000 description 1
- 102000006486 Phosphoinositide phospholipase C family Human genes 0.000 description 1
- 108010044302 Phosphoinositide phospholipase C family Proteins 0.000 description 1
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 108020005089 Plant RNA Proteins 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108020003519 Protein Disulfide-Isomerases Proteins 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N RIFAMPICIN Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 229940081190 Rifampin Drugs 0.000 description 1
- 102100015789 SCP2 Human genes 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO SBMNPABNWKXNBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000208292 Solanaceae Species 0.000 description 1
- 240000001016 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229940014598 TAC Drugs 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- 101710009979 TSW12 Proteins 0.000 description 1
- 229960002180 Tetracycline Drugs 0.000 description 1
- OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N Tetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O OFVLGDICTFRJMM-WESIUVDSSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 229920000401 Three prime untranslated region Polymers 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 240000008529 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 230000036462 Unbound Effects 0.000 description 1
- 108020003635 Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 229920000146 Untranslated region Polymers 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 1
- 101710040760 avrRpt2 Proteins 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001488 breeding Effects 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000000408 embryogenic Effects 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012167 epicuticular wax Substances 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogens Species 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 101710011541 hrg-7 Proteins 0.000 description 1
- 230000020868 induced systemic resistance Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory Effects 0.000 description 1
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 238000011068 load Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional Effects 0.000 description 1
- 230000001173 tumoral Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 235000021307 wheat Nutrition 0.000 description 1
- 235000005765 wild carrot Nutrition 0.000 description 1
Abstract
La invención se refiere a genes que están relacionados con la transmisión de resistencia sistémica adquirida (SAR) en plantas a través de la vía de transducción de señal;un gen que ha sido caracterizado por su capacidad de codificar para una proteína que actúa hacia el extremo 5'a partir deácido salicílico en la vía de transducción de señal.
Description
GEN QUE CODIFICA PARA RESISTENCIA SISTEMICA ADQUIRIDA EN ARABIDOPSIS
CAMPO TÉCNICO
Esta invención se refiere a un gen específico para la vía de transduccíón de señal para resistencia sistémica adquirida en plantas.
REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUD RELACIONADA
Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud provisional de patente de E.U.A. copendiente presentada anteriormente No. 60/046,475 presentada el 14 de Mayo de 1997.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
La vía de transducción de señal en plantas que conduce a la resistencia sistémica adquirida (SAR) implica varias etapas. La primera etapa es la etapa de inducción o de inmunización, en donde la infección inicial de una hoja por un patógeno al cual la planta es resistente da como resultado una respuesta hipersensible (HR) llevando a la formación de lesiones necróticas. Existen, sin embargo, algunos ejemplos en donde la SAR ocurre sin necrosis. Cameron, y otros, "Biologically induced systemic acquired resistance ¡n Arabidopsis thaliana " "Plant J 5:715-725 (1994); Keller, y otros, "Physiological and molecular characteristics of elicitin-induced systemic acquired resistance ¡n tobáceo", Plant Physiol 1 10:365-376 (1996). La expresión en la hoja inoculada de un grupo de genes de proteína relacionados con la patogénesis (PR), comúnmente denominados genes SAR, ocurre durante esta etapa de inducción en tabaco y pepino (Kuc\ J., Bioscience 32:854-856 (1982); Ward, y otros, "Coordínate gene activity in response to agents that induce systemic acquired resistance, "Plant Cell 3:49-59 (1991 )) y en Arabidopsis (Uknes, y otros, "Acquired resistance in Arabidopsis", Plant Cell 4:645-656 (1992)); Uknes y otros, "Biological induction of systemic acquired resistance in Arabidopsis", Mol Plant-Microbe Interact 6:692-698 (1993). Durante esta etapa también ocurre la acumulación de ácido salicílíco (incremento de 10 a 50 veces). Yalpani, y otros, "Salicylic acid is a systemic signal and an inducer of pathogenesis-related proteins in virus-infected tobáceo," Plant Cell 3:809-818 (1991 ); Malamy, y otros, "Sallcylic acid: A likely endogenous signal in the resistance response of tobáceo to viral infection, "Science 250:1002-1004 (1990); Metraux, y otros, "Increase in salicylic acid at the onset of systemic acquired resistance in cucumber", Science 250:1004-1006 (1990); Uknes, y otros, Plant Cell 4:645-656 (1992); Vemooij, y otros, "Salicylic acid is not the translocated signal responsible for inducing systemic acquired resistance but ¡s required in signal transduction," Plant Cell 6:959-965 (1994).
Se ha informado que una señal transmisible en el floema puede moverse de la hoja necrótica al resto de la planta para establecer la SAR. Jennes, A y Kuc', J., "Graft transmission of systemic resistance of cucumber to anthracnose induced by Colletotrichum lagenarium and tobáceo necrosis virus," Phytopathology 69:753-756 (1979); Guedes, y otros, "Induced systemic resistance to anthracnose in cucumber as ¡nfluenced by the location of the inducer inoculation with Colletotrichum lagenarium and the onset of flowering and fruiting," Physiol Plant Pathol 17:229-233 (1980); Tuzun, S. y Kuc', J., "Movement of a factor in tobáceo infected with Peronospora tabacina Adam which systemically protects against blue mold," Physiol Plant Pathol 26:321-330 (1985). Un estudio en el que se utiliza mareaje con O18 de hojas de tabaco inoculadas con virus de mosaico de tabaco (TMV), reveló que un gran porcentaje del ácido salicílico en las hojas sistémicas es sintetizado en la hoja inicialmente infectada, lo cual concuerda con el hecho de que el ácido salicílico mismo es la señal transmisible de SAR. Shulaev, y otros, "Is salicylic acid a translocated signal of systemic acquired resistance in tobáceo," Plant Cell 7:1691-1701 (1995). Sin embargo, otros estudios que utilizaron pepino (Rasmussen, y otros, "Systemic ¡nduction of salicylic acid accumulation in cucumber after inoculation with Pseudomonas syringae pv. syringae " Plant Physiol 97:1342-1347 (1991 )), o experimentos de injerto con tabaco transgénico que contienen el gen de ácido salicílico hidroxilasa NahG bacteriano (y por lo tanto mostrando niveles drásticamente reducidos de ácido salicílico), han llevado a creer que el ácido salicílico no es la señal transmisible. Por ejemplo, los rizomas de NahG, cuando se inoculan con TMV, son capaces de producir una señal transmisible en el floema que puede ser percibida en el vastago de tipo silvestre, que después se hace resistente a otros patógenos subsecuentes. Gaffney, y otros, "Requirement of salicylic acid for the induction of systemic acquired resistance," Science 261 :754-756 (1993). Estos resultados sugieren que el ácido salicílico no se requiere en la etapa de inducción/inmunización para SAR. La segunda etapa en la vía de transducción de señal que conduce a la SAR es la etapa de establecimiento, que implícala percepción de la señal transmisible en las hojas sistémicas. Se caracteriza por la expresión del mismo grupo de genes de SAR como se inducen alrededor de la primera lesión necrótica, así como la acumulación de ácido salicílico, a diferencia de los niveles bajos que son inducidos en la primera hoja durante la etapa de inducción. La etapa final en la vía de transduccíón de señal es la etapa de expresión que ocurre cuando la planta se enfrenta a un segundo patógeno, normalmente virulento, y responde a este patógeno como si fuera uno avirulento. Kuc', J., Bioscience 32:854-856 (1982). Estudios recientes en los que se utilizan plantas con muy bajos niveles de ácido salicílico debido a la expresión del producto del gen de ácido salicílico hidroxilasa NahG (Gaffney, y otros, Science 261 :754-756 (1993); Vemooij, y otros, Plant Cell 6: 959-965 (1994); Delaney, y otros, Science 266:1247-1250 (1994)) han demostrado que el ácido salicílico se requiere no sólo en las etapas de establecimiento y expresión para SAR, sino también durante las Interacciones incompatibles HR, e incluso durante las interacciones compatibles para limitar la diseminación de la enfermedad. Los mutantes defectuosos en SAR de Arabidopsis nim 1 (Delaney, y otros, Science 266:1247-1250 (1994)) y nprl (Cao, y otros, "Characterization of an Arabidopsis mutant that is nonresponsive to inducers of systemic acquired resistance," Plant Cell 6:1583-1592 (1994)) también mostraron susceptibilidad incrementada a la enfermedad a patógenos virulentos, confirmando el papel del ácido salicílíco en la resistencia general a enfermedades. Las plantas mutantes cprl (expresor constitutivo de genes PR) con niveles elevados de gen de expresión para SAR y ácido salicílico mostraron ser resistentes a patógenos normalmente virulentos (Bowling, y otros, "A mutation in Arabidopsis that leads to constitutive expression of systemic acquired resistance," Plant Cell 6:1845-1857 (1994)), proveyendo evidencia genética adicional en apoyo a la importancia de la acumulación de ácido salicílico para resistencia a enfermedades. Como se mencionó anteriormente, un número de mutantes de Arabidopsis afectados en su capacidad para establecer SAR, fue aislado. Sin embargo, estos mutantes también tienen una respuesta general de defensa reducida, y por lo tanto, la lesión en estas plantas no es específica para SAR. De acuerdo con la presente invención, las proteínas de transferencia de lípidos (LTP) también han sido identificadas como importantes en el establecimiento de SAR en plantas. Anteriormente, las LTP habían sido clonadas a partir de un número de especies de plantas, y se ha propuesto que funcionan en una variedad de procedimientos incluyendo desarrollo embriogénico y deposición de cera epicuticular (Pyee y Kolattukudy, "The gene for the major cuticular wax-associated protein y three homologous genes from broccoli (Brassica olerácea) and their expression patterns," Plant Journal 7:49-59 (1995); Toonen y otros, "AtLTPI luciferase expression during carrot somatic embryogenesis," Plant Journal 12:1213-1221 (1997)). En relación con la presente ¡nvención, las LTP han sido implicadas en las respuestas de defensa en plantas. Por lo tanto, las LTP de dos especies monocotiledóneas mostraron poseer actividad antimicrobiana (Molina y otros, "Lipid transfer proteins (nsLTPs) from barley and maize leaves are potent inhibltors of bacterial and fungal plant pathogens," FEBS Letters 316:119-122 (1993)), y tabaco transgénico y Arabidopsis genéticamente manipuladas para expresar una LTP de cebada exhibieron tolerancia incrementada en contra de patógenos (Molina y García-Olmedo, "Enhanced tolerance to bacterial pathogens caused by the transgenic expression of barley lipid transfer protein LTP2, "Plant Journal 12:669-675 (1997)). No se han demostrado que estas proteínas de transferencia de lípídos funcionan en la transducción de señal para SAR. Selecciones previas para mutantes de SAR han evitado los pasos de producción de señal inicial involucrados en SAR induciendo SAR a través de la planta rociando con ácido 2,6-dicloroisonicotínico (INA), el cual actúa en el mismo punto como, o incluso hacia el extremo 3' del ácido salicílico en la vía de transducción de señal para SAR. A pesar de los informes con relación al posible papel del ácido salicílico en la SAR, y la correlación reportada de gen de expresión de SAR con SAR, virtualmente no existe información disponible sobre los mecanismos moleculares que dan como resultado la inducción, transmisión y expresión de SAR. Por lo tanto, existía la necesidad de aislar y caracterizar genes que son parte de la vía de transduccíón de señal para SAR, que codifican para proteínas que actúan hacia el extremo 5' del sitio de acción del ácido salicílico. Ahora se ha demostrado que los genes que codifican para proteínas que actúan hacia el extremo 5' del ácido salicílico en la vía de transducción de señal afecta la SAR en plantas, y un método para aislar dichos genes se describe en la presente. En particular, el gen dir-1 , que codifica para una proteína de transferencia de lípidos novedosa implicada en la vía de transduccíón de señal, ha sido aislado y caracterizado. El gen es útil como un reactivo para determinar los mecanismos involucrados en el establecimiento de SAR en plantas, y para manipular genéticamente la resistencia a enfermedades en plantas. Un método para la selección genética de mutantes de SAR también se ha desarrollado, el cual permite detectar mutantes defectuosos en SAR a través de la vía de transducción de señal para SAR, y muy específicamente, para aquellos mutantes de SAR que codifican para proteínas que actúan hacia el extremo 5' desde donde actúa el ácido salicílico en la vía de transducción de señal para SAR. Las proteínas traducidas de los genes son útiles para la producción de anticuerpos para las proteínas. Los anticuerpos son útiles como reactivos en la selección de plantas para ejemplos de los genes de transducción de señal para SAR.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína capaz de incrementar la resistencia sistémíca adquirida en una planta. La proteína actúa hacia el extremo 5' desde donde el ácido salicílico funciona a lo largo de la vía de transduccíón de señal. La invención también se refiere a un vector de ácido nucleico que comprende el gen dir-1. La invención además comprende células vegetales transformadas con un vector que contiene el gen dir-1. Además, esta ¡nvención comprende un método para conferir resistencia sistémica adquirida a una planta. Asimismo, la invención comprende un método para aislar mutantes para SAR que codifican para proteínas que actúan hacia el extremo 5' de ácido salicílico en la vía de transducción de señal. Estas y otras características, aspectos y ventajas de la presente invención se entenderán mejor con referencia a la siguiente descripción y a las reivindicaciones anexas.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La figura 1 muestra la secuencia de nucleótidos del gen dir-1. La figura 2 muestra la secuencia de aminoácidos de la proteína de transferencia de lípidos del gen dlr-1.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La presente ¡nvención comprende el aislamiento de genes involucrados en la transducción de señal para SAR que codifica para proteínas que actúan hacia el extremo 5' desde donde el ácido salicílico funciona a lo largo de la vía de transducción de señal para SAR. Para aislar un gen implicado en la transducción de señal para SAR que codifica para una proteína que actúa hacia el extremo 5' desde donde el ácido salicílico actúa a lo largo de la vía, se utiliza el siguiente método: utilizando las técnicas como se describe en el ejemplo 1 , las plantas transformadas de T-ADN y de tipo silvestre son cultivadas y observadas para síntomas de enfermedades. Los mutantes para SAR son aislados, y se realizan las pruebas de competencia para SAR como se describen en el ejemplo 1. Los mutantes para SAR son probados para determinar la posición del gen mutante en relación con el punto de acción del ácido salicílico en la vía como se describe en el ejemplo 1. El
ADN es aislado de aquellas plantas que son homocigóticas para un gen mutante para SAR, en donde se encontró que el gen codifica para una proteína que actúa hacia el extremo 5' desde el sitio de acción del ácido salicílico a lo largo de la vía, se sondeó para aislar una molécula de ADNc, y se secuenció utilizando técnicas como se describe en el ejemplo 2. Los genes aislados, tales como el gen dir-1 , pueden utilizarse como vectores para transformar plantas para incrementar la resistencia a enfermedades mediante restauración o incremento de SAR. Las plantas a las cuales puede aplicarse la invención incluyen leguminosas forrajeras comercialmente importantes tales como, pero no limitadas a alfalfa, leguminosas de semilla grande (leguminosas de grano) tales como pero no limitadas a semillas de soya, fríjol, chícharo, pero no limitadas a especies de solanáceas tales como tabaco, papa y tomate, y monocotiledóneas tales como pero no limitadas a maíz, trigo, y arroz. La transformación puede lograrse por cualquier medio conocido incluyendo Agrobacterium (Shargool, Peter D. y Ngo, That T., Biotechnological Applications of Plant Cultures, 1994, pp. 61-76), procedimiento biolístico (Shargool y Ngo en la p. 38) o electroporación. Las plantas transformadas pueden ser regeneradas mediante protocolos estándares bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como organogénesis de discos foliares o embriogénesis somática. Las plantas transformadas pueden propagarse sexualmente, o por cultivo de células o tejido. La invención incluyen la expresión de las proteínas traducidas a partir de los genes aislados tales como el gen dir-1. Estas proteínas, tales como la proteína de transferencia de lípídos del gen dir-1 (dir-1 LTP), son útiles en el desarrollo de anticuerpos para la proteína. Los anticuerpos son reactivos importantes para utilizarse en el procedimiento de selección de plantas para la expresión de genes aislados tales como el gen dir-1. Para aislar una proteína de un gen de vía de transducción de señal para SAR, el producto de gen del gen aislado se expresa como se describe en el ejemplo 5. Los anticuerpos para la proteína son producidos como se describe en el ejemplo 6. Los anticuerpos para la proteína son utilizados como reactivos para seleccionar las plantas para expresión del gen aislado como se describe en el ejemplo 6. Esta ¡nvención incluye un método para seleccionar mutantes defectuosos en SAR a través de la vía de transducción de señal para SAR, y, más específicamente, para seleccionar aquellos mutantes de genes que codifican para proteínas que actúan hacia el extremo 5' desde donde el ácido salicílico actúa a lo largo de la vía. Después de transformar las plantas y observar dichas plantas para detectar síntomas de enfermedad como se describe en el ejemplo 1 , se aislan los mutantes para SAR. Los mutantes para SAR son probados para determinar la posición del gen mutante en relación con el punto de acción de ácido salicílico en la vía como se describe en el ejemplo 1.
EJEMPLO 1 Aislamiento y caracterización del mutante de dir-1
Condiciones de crecimiento para plantas v bacterias El ecotipo Wassilewskija (Ws) de Arabidopsis thaliana y los grupos de semillas transformadas con ADN-T de Feldman se esterilizaron (Arabidopsis Biologlcal Resource Center de Ohlo State Unlversity), y se colocaron en placas sobre medios orgánicos mínimos de Murashige, diez días después se transfirieron a la tierra como se describe anteriormente. Cameron y otros, Plant J 5:715-725 (1994). Las plantas se colocaron en cámaras de crecimiento a 22 - 24°C a una intensidad de luz de 150 µE m"2 seg"1 con un fotoperiodo de nueve horas, y se dejaron crecer durante 4 a 5 semanas. Las cepas DC3000[pLAFR3] (virulenta) y DC3000[pLAFR3+avrRpt2](avirulenta) de Pseudomonas syringae pv tomato (Pst) (Whalen, y otros, "Identification of Pseudomonas syringae pathogens of Arabidopsis and a bacterial locus determining avirulence on both Arabidopsis and soybean," Plant Cell 3:49-59 (1991 )) y Ps pv maculicola M4[pLAFR3+avrRpm] (avirulenta) (Debener, y otros, "Identification and molecular mapping of a single Arabidopsis thaliana locus determining resistance to a phytopathogenic Pseudomonas syringae isolate," Plant J 1 :289-302 (1991 )) se cultivaron como se describió anteriormente. Cameron y otros, Plant J 5:715-725 (1994).
Aislamiento de mutantes para SAR A las plantas mutagenizadas (generación M1 ) con ADN-T de cuatro a cinco semanas de edad se les dio inoculación inmunizante de Pst (107 cfu/ml) avirulenta sobre una hoja por planta, dos días después, se inoculó sobre otras tres hojas con Pst virulenta (5 x 105 cfu/ml). Las plantas se observaron cuatro o cinco días después y los síntomas se compararon con los tratamientos virulentos y avirulentos de control (inducidos por SAR) sobre ecotipo Ws. Aquellas plantas que mostraron síntomas de enfermedad se seleccionaron como mutantes potenciales para SAR y se les permitió que produjeran semillas. La progenie entre 30 y 40 de los mutantes para SAR putativos fueron reselecclonados en la generación M2 como se describe más adelante.
Caracterización genética de dir-1 Un número de plantas de M2 dir-1 fueron retrocruzadas con Ws de tipo silvestre y la progenie resultante F1 , F2, y F3 se sometió a una prueba de competencia para SAR (descrita posteriormente) para poder determinar si la mutación de dir-1 era recesiva o dominante al tipo silvestre, y también si el fenotipo de dir-1 se segregaba conjuntamente con el ADN-T (marcador de resistencia a kanamicina).
Prueba de competencia para SAR Tanto las plantas dir-1 de tipo silvestre como Ws se sometieron a un número de tratamientos de infección. El tratamiento de control (M,M) consistió de una primera inoculación con 10 mM de MgCI2 sobre una hoja por planta, seguida dos días después por otra inoculación con 10 mM MgCI2 sobre otras cuatro hojas por planta. Un tratamiento avirulento (M, A) consistió de una primera inoculación con 10 mM MgCI2 sobre una hoja por planta, seguida dos días después por una inoculación avirulenta (106 cfu/ml) sobre otras cuatro hojas/planta. Un tratamiento virulento (M,V) consistió de una primera inoculación con 10 mM MgCI2 sobre una hoja/planta, seguida dos días después por una inoculación virulenta (106 cfu/ml) sobre otras cuatro hojas por planta. Un tratamiento para SAR (A,V) consistió de una primera inoculación con bacterias avirulentas (106 cfu/ml) sobre una hoja/planta, seguida dos días después por una inoculación virulenta (106 cfu/ml) sobre otras cuatro hojas/planta. Los síntomas de la enfermedad o su ausencia se observaron para cada tratamiento, y los resultados se confirmaron agrupando discos foliares de cada tratamiento para determinar el crecimiento bacteriano in planta.
Cuantificación de crecimiento bacteriano in planta Ocho discos foliares (4.0 mm en diámetro) fueron cultivados de plantas individuales y macerados en 10 mM MgCI2. Las diluciones apropiadas se hicieron en 10 mM MgCI2 y se colocaron en placa sobre agar de King B (King y otros, "Two simple media for demonstration of phycocyanin and fluorescein," J Lab Clin Med 44:301-307 (1954)) que contenía 100 mg/l de rifampicina (Sigma Chemical Co.,St. Louls, MO.) y 20 mg/l de tetraciclina (Sigma) para prevenir el crecimiento de bacterias que no fueran utilizadas como inoculo.
Análisis de niveles de ácido salicílico El ácido salicílico se determinó pulverizando 0.5 g de tejido de hoja de Arabidopsis (20-30 hojas) en N2, líquido, luego se extrajo en 50% de etanol más 0.04% 2-mercaptoetanol, seguido por dos volúmenes de 100% de etanol más 0.04% 2-mercaptoetanol. Los extractos de etanol combinados se secaron bajo N2, hasta que quedaran aproximadamente 4 ml de agua, después se extrajeron dos veces con un volumen de acetato de etilo. La fase de acetato de etilo se secó bajo N2, y el material secado se resuspendió en
200 µl de 100% metanol. El ácido salicílico se cuantificó mediante fase inversa
CLAR. Las muestras (20 µl) se inyectaron en una columna de sílice 4.6 x 250 mm 5 µm C-18 (J.T. Baker, Inc., Phillipsburg, NJ), equilibrando a temperatura ambiente con 95% de 20 mM de acetato de sodio, pH de 5.0, 5% de metanol, y corrió ¡socráticamente a una velocidad de flujo de 1.5 ml/min. El ácido salicílico (tiempo de retención de aproximadamente 7 minutos) se detectó utilizando un detector de fluorescencia de barrido (Model FP-920; JASCO,
Easton, MD) con una excitación a 315 nm y una emisión a 405 nm, como describe Yalpani y otros (1991 ). La identidad de valores máximos de ácido salicílíco de muestras representativas se confirmó en comparación con el espectro de emisión con la del estándar auténtico de ácido salicílico. Los valores máximos de ácido salicílico también se confirmaron digiriendo un número de muestras de ácido salicílico previamente determinadas con ácido salicílico hidroxílasa (Sigma) y demostrando que los valores máximos de ácido salicílico desaparecieron después del tratamiento. El ácido salicílico total (ácido salicílico libre + conjugado de glucosa) se midió mediante digestión de 50 µl de los extractos de metanol con ß-glucosidasa. La pérdida de ácido salicílíco durante el procedimiento de extracción varió de 36 a 50% y se corrigió durante el cálculo de los niveles de ácido salicílico (ng/g fwt).
Análisis y extracción de ARN El ARN se aisló de muestras de hojas congeladas (3-4 hojas/muestra) utilizando el procedimiento de pequeña escala de Verwoerd, y otros, "A small scale procedure for the rapid isolation of plant RNAs," Nucleic Acids Rs 17:23 8 2 (1989). Las muestras de ARN total (5 µg) se separaron por electroforesis a través de geles de formaldehído-agarosa y se sometieron a blotting en membranas de nylon Hybond-N (Amersham Corp., Arlington Heights, IL) como se describe en Sambrook, y otros, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, pp. 7.43-7.46 (1989). Se incluyó bromuro de etidio (40 µg/ml) en el regulador de la muestra para poder confirmar carga de muestra igual bajo luz UV después de la electroforesís. Los clones de ADNc de Arabidopsis para PR-1 , PR-2 y PR-5 (Uknes, y otros, Plant Cell 4:645-656 (1992)) fueron marcados 32P mediante iniciación aleatoria utilizando un Equipo Iniciador Aleatorio (Amersham). Las hibridizaciones y lavados se realizaron de acuerdo con Church, G.M. y Gilbert, W., "Genomic sequencing," Proc Nati Acad Sci E.U.A. 81 :1991-1995 (1984). Se utilizó una sonda de ADNr para volver a confirmar que cada banda fuera cargada con niveles similares de ARN total.
Aislamiento y caracterización genética del mutante de dir-1 de Arabidopsis De 1 1 ,000 líneas seleccionadas de plantas transformadas con ADN-T (Ml), se recuperaron 200 mutantes de SAR putativos. Después de volver a probar en la generación M2, el gen dir-1 mostró ser un verdadero mutante defectuoso en SAR. En dos pruebas separadas de SAR en plantas de M2 dir-1 , el fenotipo defectuoso en SAR se segregó con una relación de 3:1 (valores chi cuadrada p>0.9 y p>0.8) para plantas defectuosas en SAR a competentes en SAR (tipo silvestre). Estos resultados indican que la mutación de dir-1 es dominante a la función del gen SAR de tipo silvestre. Tres diferentes plantas M2 dir-1 fueron retrocruzadas con el antecedente Ws de tipo silvestre para poder confirmar la naturaleza dominante de la mutación de dir-1. La progenie (aproximadamente diez plantas) de cada cruza se probó otra vez para competencia de SAR (ver cuadro 1 para datos sobre crecimiento bacteriano in planta). Toda la progenie de cada cruza fue defectuosa en SAR, confirmando la naturaleza dominante de la mutación de dir-1.
CUADRO 1 Crecimiento bacteriano in planta (cfu/disco foliar) para progenie1 dir-1 x Ws F3
Tratamiento Genotipo SAR Control Avirulento Virulento (M, M) (M, A) (M, V) (A, V)3 (A,V)4 Ws 10* 8x10° 5x10' 2.2x10° 2x10b dir-1 F2-a 2x102 6.4x105 4.6x107 8.0x107 3.7x107 dir-1 F2-b 5x102 8.7x105 2.8x107 3.2x107
1Ocho discos foliares (2 replicas) se recolectaron de cada tratamiento, se presenta el promedio de 2 replicas. (M, M) - Primera Inoculación - MgCI2; 2° inoculación- MgCI2. (M, A) - Primera Inoculación - MgCI2; segunda inoculación avirulenta de Pst; hojas inoculadas o no inoculadas recolectadas después del 2o reto. (M, V) - Primera Inoculación - MgCI2; segunda inoculación virulenta de Pst; hojas no inoculadas recolectadas después del 2° reto. (A, V) - Primera Inoculación - Pst avirulento; 2° inoculación, Pst virulento; hojas inoculadas recolectadas después del 2o reto. 3(A, V), A=PstavrRpt2. 4(A, V), A=PsmavrRpml. Se permitió que las líneas retrocruzadas de dir-1 produjeran semillas y se colocaron sobre placas (250-500 semillas) sobre medios que contenían kanamicina para determinar si el fenotipo defectuoso en SAR se segregaba con el gen de resistencia de kanamicina presente sobre el ADN-T para determinar si la mutación de dir-1 era el resultado de la inserción de ADN-T al gen dir-1. Siete líneas retrocruzadas F2 se analizaron. Relaciones de segregación (resistente a kanamicina a sensible a kanamicina) variaron de 7 a 3.3, indicando que al mismo tiempo hubo más de una inserción de ADN-T por planta. Si hubiera dos copias funcionales del ADN-T presente en esas líneas, la relación de resistente a kanamicina a plantas sensibles sería de 15:1. Estas líneas F2 (resistente y sensible a kanamicina) se transfirieron a la tierra, se dejaron crecer durante cuatro semanas, luego se probaron para competencia de SAR mediante medición de síntomas de enfermedades y niveles de crecimiento bacterianos. Muy pocas de las plantas sensibles a kanamicina crecieron cuando se transfirieron a la tierra, pero en su gran mayoría, estas plantas fueron competentes en SAR. Las plantas de las líneas F2 que crecieron sobre kanamicina variaron de 100% defectuoso en SAR como se esperó, a 80% defectuoso en SAR, indicando que hubo un gen de resistencia funcional a kanamicina en alguna de la progenie que no estaba enlazada a la mutación de dir-1. El ADN se aisló del SAR defectuoso, de las plantas F2 resistentes a kanamicina y de SAR competente, y de las plantas F2 sensibles a la kanamicina. El ADN de cada muestra se digirió con EcoR1 y se sometió a electroforesis, blotting, y sondeo con el plásmido pBR322, que se encuentra cornprendido dentro de la construcción de ADN-T. Errampalli, y otros, "Embryoníc lethals and T-DNA insertional mutagenesis in Arabidopsis," Plant Cell 3:149-157 (1991 ). Un número de plantas resistentes a la kanamicina defectuosas en SAR de F2, contuvo bandas correspondientes al ADN-T que no se encontraron en las plantas sensibles a la kanamicina competentes en SAR. Un número de estas plantas resistentes a la kanamicina dir-1 F2 fue retrocruzado otra vez con Ws de tipo silvestre para poder eliminar cualquier secuencia de ADN-T no enlazada. Un número de las familias F2 del retrocruzamiento de dir-1 x Ws segregó 3:1 para resistencia a la kanamicina. Una prueba de competencia para SAR se realizó en individuos de dos familias que crecieron sobre medios que contienen kanamicina; si el ADN-T se segrega conjuntamente con el fenotipo de dir-1 , todos los individuos son defectuosos en SAR. Cada individuo en ambas familias (aproximadamente 120) fue defectuoso en SAR como se midió mediante la cuantificación bacteriana y de fenotipo. Estos resultados confirman que fenotipo mutante de dir-1 fue segregado con resistencia a la kanamlcina y la inserción de ADN-T. La semilla F3 de un número de individuos F2 se recolectó y se utilizó para aislar plantas homocigóticas a dir-1. Todas las plantas sensibles a la kanamicina F3 fueron homocigóticas de tipo silvestre para dir-1 , y expresaron SAR. El análisis genético por lo tanto indica que la mutación de dir-1 es provocada por la inserción de una molécula de ADN-T, facilitando la estrategia de clonar el gen interrumpido por técnicas de reacción de cadena de polimerasa (PCR).
Rescate del fenotipo de dir-1 con INA El rociar Arabidopsis con ácido 2,6-dicloroisonicotínico (INA), puede inducir SAR a patógenos de hongos y bacterias virulentos. Uknes, y otros, Mol Plant-Microbe Interact 6:692-698 (1993). El INA se piensa que actúa en el mismo punto o hacia el extremo 3' de ácido salicílico en la vía de transducción de señal de SAR. (Vemooij y otros, 1995). Por lo tanto, las plantas dir-1 M2 fueron rociadas con INA y luego desafiadas cuatro días después con 106 cfu/ml de bacterias virulentas; se observaron las plantas tres días después y se registraron los síntomas. El tratamiento de control virulento (M, V) produjo síntomas de enfermedades sobre ambas plantas Ws y dir-1 , mientras que el tratamiento de SAR (A, V) produjo enfermedades en las plantas dir-1 y resistencia o SAR en las plantas Ws. Las plantas Ws de tipo silvestre y dir-1 que fueron rociadas con INA fueron desafiadas con bacterias virulentas que no presentaban síntomas, indicando que el INA indujo SAR en plantas dir-1. Esto demuestra que la mutación de dir-1 se encuentra hacia el extremo de 5' de INA en la vía transducción de señal para SAR. Las substancias tales como, pero no limitadas a, aspirina (ácido acetil salicílíco), Isalicilato de metilo y benzotiazoles que, como el INA, imitan los efectos del ácido salicílico, también pueden utilizarse.
Gen de expresión para SAR y niveles de ácido salicííico en el mutante dir-1 de Arabidopsis En estudios preliminares de la progenie dir-1 x Ws F2 (resistente a kanamicina, defectuosos en SAR) seguidos de la inoculación con Pst avirulento (tratamiento con SAR), expresión de los genes PR-1 , PR-2 y PR-5 de SAR se redujo en la etapa de expresión de SAR en comparación con las plantas de tipo silvestre. Sin embargo, el ácido salicílico acumulado a niveles similares o más altos que los observados en plantas de tipo silvestre (cuadro 2), consistente con descubrimientos anteriores que mostraron que la acumulación de ácido salicílico está implicada no sólo en la SAR, sino también en la respuesta hipersensitiva (HR) y respuestas generales de defensa en Arabidopsis. Delaney, et al., Science 266:1247-1250 (1994), Cameron et al., no publicada). Además, SAR no fue inducida en el mutante de dir-1 cuando se utilizó una bacteria avirulenta diferente (Psm M4 avrRpm) como el inoculo primario inmunizante, indicando además que la lesión en las plantas mutantes de dir-1 es específica para la vía de transducción de señal de SAR.
CUADRO 2 Acido salicílico libre (ng/gfw) en Ws y dir-1 (progenie F2)
dir-1 F2-b - 1257 167 1017 1(M, M-inoc) - inoculación primaria - MgCI2; segundo reto de inoculación -MgCI2; los niveles de ácido salicílico se determinaron para hojas recolectadas de la segunda inoculación. 2,3 (M, A) - primera inoculación - MgCI2; segunda inoculación - Pst avirulento; hojas inoculadas o no inoculadas recolectadas después del segundo reto. 4(A, V) - inoculación primaria - Pst avirulento; segunda inoculación - Pst virulento; hojas inoculadas recolectadas después del segundo reto.
EJEMPLO 2 Aislamiento y caracterización del gen dir-1
El ADN genómico se aisló de hojas de una línea homocigótica de dír-1 mediante procedimientos estándares (Sambrook, et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989). Aplicación de (TAIL) PCR térmica simétrica entrelazada (Lui et al., "Efficiente isolation and mapping of Arabadopsis thaliana T-DNA insert junctions by thermal assymetdric interlaced PCR", Plant Journal 8: 457-463 (1995)) utilizando iniciadores específicos para el borde derecho (RB) del ADN-T resultante en secuencias clonadas que contienen el RB pero, en lugar de flanquear la planta con ADN, se encontraron secuencias de ADN-T inversas, indicando que una redesposición ocurrió dentro del ADN-T conduciendo a una inserción con dos bordes izquierdos (LB). TAIL-PCR fue preformado utilizando iniciadores diseñados para unirse a LBD ADN-T. Se amplificaron dos secuencias específicas, constituidas por secuencias de LB y secuencias de flanqueo genómico de plantas. Una combinación de PCR y análisis Southern biot con ADN genómico de tipo silvestre y Arabidopsis de dir-1 indicó que las dos secuencias amplificadas mediante TAIL-PCR eran contiguas en el genoma de Arabidopsis de tipo silvestre, y fueron interrumpidas por la simple inserción de ADN-T. Esta inserción se realizó en la región no traducida del extremo 3' de un gen, el marco de lectura abierto que tenía identidad de secuencia importante a la de una proteína de transferencia de lípidos no especifica (LTP) de Phaseolus vulgaris. La determinación de secuencias de ADN de flanqueo más allá de la inserción de ADN-T (lejos y fuera del extremo 3' de la LTP) no reveló marco de lectura abierto sobre 1.1 KB de secuencia. Además, los niveles de transcripto de LTP se redujeron fuertemente en preparaciones de ARN total de la línea de dir-1 , sugiriendo que la inserción de ADN-T sí interfiere con la expresión del gen dir-1. Sondeos de la secuencia de LTP genómica se utilizaron para aislar una ADNc que codifica para la LTP completa utilizando métodos estándares (Sambrook, y otros, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)).
Análisis de secuencia de ADN Se determinó por secuencias el ADN por el método de determinación de secuencias didesoxi de Sanger. (Sanger, y otros, Proc Nati Acad Sci EUA 74:5463-5467 (1997)). Se utilizó un equipo de determinación de secuencias de ciclo terminado didesoxi Taq (Applied Biosystems Inc., Foster City, CA) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Los productos se separaron sobre un gel de poliacrilamida al 6% y los datos se procesaron por un secuenciador de ADN automatizado ABI 373. Todas las manipulaciones de datos puros generados del sistema automatizado se realizaron sobre los programas de análisis de ADN del gen PC (Intelligenetics, Mountain View, CA). La secuencia de nucleótidos se muestra en SEQ ID NO:1. La evidencia indica que la LTP de Arabidopsis codificada por dir- 1 es una proteína novedosa implicada en las transducción de señal para establecer inmunidad de plantas sistémicas a enfermedades. Primeramente, la naturaleza de la selección genética se dirigió a las mutaciones en respuestas sistémicas más que en locales, y esto surgió por el hecho de que la mutación de dir-1 no afecta la respuesta local a patógenos avirulentos o el nivel de susceptibilidad a patógenos virulentos en plantas no afectadas, como ocurriría si el producto del gen dir-1 fuera en sí mismo antimicrobíano. Como segundo aspecto, los inducidores de SAR tales como INA rescatan el fenotipo de dir-1 , indicando que dir-1 se encuentra hacia el extremo 5' de otras funciones de señal tales como nprl , mutaciones que eliminan la capacidad de respuesta al INA (Cao et al., "Characterization of an Arabidopsis mutant that is nonresponsive to inducers of systemic acquired resístance" Plant Cell 6: 1583-1592 (1994)). Como tercer aspecto, la inducción sistémica de proteínas (PR) relacionadas con patogénesis y micro-HRs, marcadores moleculares para el establecimiento de SAR en hojas sistémicas (Cao et al., "Characterization of an Arabidopsis mutant that is nonresponsive to inducers of sistémic acquired resistance," Plant Cell 1583-1592 (1994); Alvarez et al., "Reactive oxygen intermediates medíate a systemic signal network in the establishment of plant immunity," Cell 92: 773-784 (1998)) es suprimida en dir-1. La inserción de ADN-T en la región no traducida de 3' de dir-1 conduce a una reducción en los niveles de transcripto correspondientes y por lo tanto niveles reducidos de dir-1 LTP funcional. Esto, a su vez, bloquea la transducción de señal desde la primera hoja infectada hacia las hojas sistémicas de la planta. La identificación del gen dir-1 que tiene dir-1 LTP como un producto de traducción indica que los intermediarios lípidos actúan como señales slstémicas para SAR. La secuencia de aminoácidos para dir-1 LPT se determinó utilizando programas de gen PC y se muestra en SEQ ID NO:2.
EJEMPLO 3 Construcción de un vector gue contiene el gen dir-1
Los fragmentos que contienen la longitud total de ADNc de
Arabidopsis dir-1 , o un homólogo funcional de dir-1 de otras especies de plantas, se clonan en un vector plásmido binario, por ejemplo en lugar del gen GUS en el vector plásmido binario pB1121.1 (R. A. Jefferson, T. A. Kavanagh, M. W. Bevan, "GUS fusions: ß-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusión marker in higher plants," The EMBRO Journal 6: 3901-3907 (1987), bajo el control del promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor (o cualquier otro promotor constitutivamente expresado o inducible activo en células de plantas) y el terminador nopalina de sintetasa (o cualquier otra terminación transcripcional de señal activa en células de planta). La construcción de clonación y vector utiliza técnicas de ADN recombinante estándares en cepas HB101 o DH5a de E. coli, preformadas de acuerdo con (Sambrook, J. Fritsch, E.R. & Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratorí Manual (2a Ed), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York). Las orientaciones del inserto se confirmaron medíante mapeo de restricción, y los extremos 5' de cada construcción se confirmaron al determinar las secuencias de un iniciador oligonucleótido del promotor 35S u otros promotores conocidos en la técnica.
EJEMPLO 4 El uso de un vector de gen dir-1 en la transformación de plantas y creación de plantas transgénicas
Las plantas de tabaco y alfalfa se transformaron con cepa LBA4404 de A. tumefaciens alojando la construcción del gen dir-1 mediante métodos de discos foliares. Las plantas de tabaco transgénicas (Nicotiana tabacum cv. Xanthi NF) son generadas como se describió anteriormente
(Rogers, et al., "Gene transfer ¡n plants: Production of transformed plants using Ti plasmld vectors," Methods Enzimo! 1 18:627-640 (1986)), con regeneración bajo selección de kanamicina. Las plantas de alfalfa transgénicas se generaron de la transformación y regeneración del cultivo Regen SY de alfalfa competente (Bingham, E.T, "Registration of alfalfa hybrid Regen-SY germplam for tissue culture and transformation research," Crop Sci 31 :1098 (1991 )), siguiendo una versión modificada de procedimientos publicados (Bingham, y otros, "Breeding alfalfa which regenerates from callus tissue in culture," Crop Sci 15:719-721 (1975)). Poco tiempo después, los discos foliares de hojas trifoliadas jóvenes son inoculados con una suspensión de Agrobacterium alojando la construcción binaria e incubando sobre placas sólidas B5h (Brown, O.C.W. y Atanassov, A., "Role of genetic background in somatic embriogenesis in Medicago," Plant Cell Tiss Organ Cult 4:1 1 1-122 (1985)) durante cuatro días (16 horas de luz a 24°C). Las explantas son lavadas dos veces con agua para remover bacteria y se incuban durante cuatro días más sobre nuevas placas B5h. Las explantas son lavadas dos veces con agua y transferidas a placas de selección (placas B5h con 100 mg/L de timentina (Smith-KIine Beecham, Philadelfia, PA) y 25 mg/L de kanamicina (Sigma, St. Louis, MO)). Callos y embriones ocasionales aparecen después de dos semanas y son transferidos a nuevas placas de selección, asegurándose de que los callos son dispersados. Las placas son incubadas durante otra semana para permitir el desarrollo de embriones adicionales. Los callos y embriones son transferidos a placas B5 (no hormonas, pero con antibióticos como antes). Después de dos semanas, los callos y embriones son transferidos a placas frescas B5 (con antibióticos). Después de una o dos semanas, los embriones individuales son cultivados sobre placas MS (Murashige, T., y Skoog, F., "A revised médium for rapid growth and bioassays with tobáceo tissue culture", Physiol Plant 15:473-497 (1962)) con antibióticos (50 mg/L de timentina y 25 mg/L de kanamicina); las plántulas son formadas en una a tres semanas, algunas veces con raíces. Estas son transferidas a cajas de plástico (Magenta Corp, Chicago, IL) con medios de agar MS y antibióticos. Las plantas se mantienen sobre medios MS con antibióticos y se propagan por poda. Las plantas también son transferidas a la tierra en el invernadero.
EJEMPLO 5 Aislamiento de dir-1 LTP
El producto del gen dir-1 de Arabidopsis se expresa en células
SB221 de E. coli como describe (BS Shorrosh and RA Dixon, "Molecular cloning of a putative plant endomembrane protein resembling vertébrate protein disulfide isomerase and phosphatidylinositol-specific phospholipase C," Proc Nati Acad of Sci EUA 88:10941-10945). La proteína expresada se resuelve por electroforesis de gel de pollacrilamida (Laemmii, U.K, "Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4, Nature 227:680-685 (1970)). La banda de proteína codificada por dir-1 es localizada por tinción con azul brillante Coomassie, y regiones de 12 bandas de gel son separadas, cortadas en pequeños fragmentos, desteñidas hasta concluir con 50% (v/v) isopropanol/3% (p/v) SDS durante la noche, enjuagadas con agua, secadas al vacío, pulverizadas en nitrógeno líquido, y finalmente resuspendidas en solución salina reguladora de fosfato.
EJEMPLO 6 Producción y uso de anticuerpos para la proteína dir-1 LTP
El antisuero se obtiene mediante la Inmunización de un conejo hembra blanco de Nueva Zelanda. La inmunización primaria contiene aproximadamente 30 µg de dir-1 LTP en 2.7 ml de adyuvante completo de Freund, inyectado subcutáneamente en la espalda en nueve sitios separados (300 ml por sitio). Las inyecciones de refuerzo que contienen dir-1 LTP de seis bandas separadas de gel (aproximadamente 15 µg) en adyuvante incompleto de Freund se dan a las cuatro y seis semanas después de las primeras inyecciones. El suero se almacena a -20°C. Los anticuerpos son utilizados como un reactivo para detectar la dir-1 LTP en plantas transgénicas en un análisis Western biot. Las proteínas de hoja y tallo son extraídas en 0.2 M de regulador de borato, pH 8.8 y sometidas a electroforesis desnaturalizadora de gel de poliacrilamida mediante procedimientos estándares (Ausubel et al. 1994. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. Nueva York). Las proteínas son transferidas a membranas Immobilon-P (Millipore, Milford, MA) en 25 mM Tris-HCl, pH 8.3, 192 mM glicina, y 20% metanol (Towbin et al. 1979). "Electroforetic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications", Proc Nati Acad Sci EUA 9:4350-4354). Las membranas son bloqueadas y sondeadas con anticuerpos primarios (anta-dir-1 ) y secundarios, por ejemplo, IgG anticonejo de cabra enlazado a un sistema de detección tal como fosfatasa alcalina, en 3% de BSA en TTBS (0.1% de Tween-20 en salina reguladora de pH con tris) (Ausubel y otros, Current Protocols in Molecular Biology (1994)). A pesar de que la presente invención se ha descrito en detalle con referencia a ciertas modalidades preferidas de la misma, otras versiones son posibles. Por lo tanto, el espíritu y el alcance de las reivindicaciones anexas no deben limitarse a la descripción de las modalidades preferidas contenidas en la presente.
LISTADO DE SECUENCIAS
(1 ) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: (A) NOMBRE: The Samuel Roberts Noble Foundation, Inc. (B) CALLE: P.O. Box 2180 (C) CIUDAD: Ardmore (D) ESTADO: Oklahoma (E) PAÍS: E.U.A. (F) CÓDIGO POSTAL: 73402 (G) TELEFONO: 580-223-5810 (H) TELEFAX: 580-221-7380
(i) SOLICITANTE: (A) NOMBRE: Dixon, Richard A. (B) CALLE: 206 Woods Lañe (C) CIUDAD: Ardmore (D) ESTADO: Oklahoma (E) PAÍS: E.U.A. (F) CÓDIGO POSTAL: 73401 (G) TELEFONO: (H) TELEFAX:
SOLICITANTE: (A) NOMBRE: Cameron, Robin (B) CALLE: 207 Lee Avenue (C) CIUDAD: Toronto (D) ESTADO: Ontario (E) PAÍS: Canadá (F) CÓDIGO POSTAL: M4E 2P4 (G) TELEFONO: (H) TELEFAX:
SOLICITANTE: (A) NOMBRE: Lamb, Christopher J. (B) CALLE: 6444 Farley Drive (C) CIUDAD: San Diego (D) ESTADO: California (E) PAÍS: E.U.A. (F) CÓDIGO POSTAL: 92122 (G) TELEFONO: (H) TELEFAX:
(¡i) TITULO DE LA INVENCIÓN: Gen que codifica para Resistencia Adquirida Sistémica en Arabidopsis (¡ii) NUMERO DE SECUENCIAS: 2
(iv) DIRECCIÓN PARA ENVIAR CORRESPONDENCIA: (A) DESTINATARIO: Sidley & Austin (B) CALLE: 717 N. Harwood, Suite 3400 (C) CIUDAD: Dallas (D) ESTADO: Texas (E) PAÍS: E.U.A. (F) CÓDIGO POSTAL: 75201-6507
(v) FORMA LEÍBLE POR COMPUTADORA: (A): TIPO DE MEDIO: Disco flexible (B) COMPUTADORA: IBM PC COMPATIBLE (C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Reléase #1.0, Versión #1.30
(vi) DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL: (A) NUMERO DE SOLICITUD: US (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (C) CLASIFICACIÓN:
(viii) INFORMACIÓN SOBRE EL APODERADO/AGENTE: (A) NOMBRE: Hansen, Eugenia S.
(B) NUMERO DE REGISTRO: 31 ,966 (C) NUMERO DE REFERENCIA/CASO: 11 137/03402
(ix) INFORMACIÓN SOBRE TELECOMUNICACIONES: (A) TELEFONO: 214-981-3315 (B) TELEFAX: 214-981-3400
(2) INFORMACIÓN PARA IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 1 : (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 439 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADENA: individual (D) TOPOLOGÍA: lineal
(ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
(ix) CARACTERÍSTICA: (A)NOMBRE/CLAVE: CDS (B)LOCALIZACION: 36..341
(xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID. DE SECUENCIA NO: 1 :
CAAACATATA GAAAAAGAGA GAGGAGGATA ATAAT ATG GCG AGC AAG AAA GCA 53 Met Ala Ser Lys Lys Ala 1 5 GCT ATG GCT ATG ATG GCG ATG ATC GTG ATA ATG GCT ATG TTG GTC GAT 101 Ala Met Ala Met Met Ala Met lie Val lie Met Ala Met Leu Val Asp 10 15 20 ACA TCA GTA GCG ATA GAT CTC TGC GGC ATG AGC CAG GAT GAG TTG AAT 149 Thr Ser Val Ala lie Asp Leu Cys Gly Met Ser Gln Aso Glu Leu Asn 25 30 35 GAG TGC AAA CCA GCG GTT AGC AAG GAG AAT CCG ACG AGC CCA TCA CAG 197 Glu Cys Lys Pro Ala Val Ser Lys Glu Asn Pro Thr Ser Pro Ser Gln 40 45 50 CCT TGC TGC ACC GCT CTG CAÁ CAC GCT GAT TTT GCA TGT CTT TGT GGT 245
Pro Cys Cys Thr Ala Leu Gln His Ala Asp Phe Ala Cys Leu Cys Gly 55 60 65 70 TAC AAG AAC TCT CCA TGG CTC GGT TCT TTC GGT GTT GAT CCT GAA CTC 293
Tyr Lys Asn Ser Pro Trp Leu Gly Ser Phe Gly Val Asp Pro Glu Leu 75 80 85 GCT TCT GCT CTC CCC AAA CAG TGT GGT CTA GCC AAC GCC CCA ACT TGT 341 Ala Ser Ala Leu Pro Lys Gln Cys Gly Leu Ala Asn Ala Pro Thr Cys 90 95 100
TAAAAGACTC TCTGTATACG TGTGTTTATG TTTTTTATTA CTCCTATTCT AAATATCGGA 401 TGTTATTAAT AAATCGTATT TTCTGCCAAA AAAAAAAA 439
(2) INFORMACIÓN PARA IDENTIFICACIÓN DE SECUENCIA NO. 2: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 102 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TOPOLOGÍA: lineal
(¡i) TIPO DE MOLÉCULA: proteína
(xi) DESCRIPCIÓN DE SECUENCIA: ID. DE SECUENCIA NO: 2:
Met Ala Ser Lys Lys Ala Ala Met Ala Met Met Ala Met lie Val lie 1 5 10 15 Met Ala Met Leu Val Asp Thr Ser Val Ala lie Asp Leu Cys Gly Met 20 25 30 Ser Gln Asp Glu Leu Asn Glu Cys Lys Pro Ala Val Ser Lys Glu Asn 35 40 45 Pro Thr Ser Pro Ser Gln Pro Cys Cys Thr Ala Leu Gln His Ala Asp 50 55 60 Phe Ala Cys Leu Cys Gly Tyr Lys Asn Ser Pro Trp Leu Gly Ser Phe 65 70 75 80
Gly Val Asp Pro Glu Leu Ala Ser Ala Leu Pro Lys Gln Cys Gly Leu 85 90 95 Ala Asn Ala Pro Thr Cys 100
Claims (20)
1.- Una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de transferencia de lípídos, en donde la proteína de transferencia de lípídos codificada presenta propiedad de transducción de señal para SAR, dicha molécula de ácido nucleico obtenible mediante un procedimiento que comprende los pasos de: a. cultivar plantas de tipo silvestre y plantas transformadas con ADN-T y observar para detectar síntomas de enfermedades; b. aislar mutantes de SAR que muestran síntomas de enfermedades; c. realizar pruebas de competencia en SAR para validar la mutación de SAR en dichos mutantes de SAR, en donde SAR está comprendido en una planta mutante de SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja de dicha planta con un inoculo avirulento y después tratada sobre otras hojas de dicha planta con un inoculo virulento en comparación con una planta de tipo silvestre que presenta SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja con un inoculo virulento y después recibió tratamiento sobre las otras hojas con un inoculo virulento; d. probar dichos mutantes de SAR para determinar la posición del gen mutante en relación con el punto de acción del ácido salicílico en la vía de transducción de señal, en donde dichos mutantes de SAR que primero son rociados con sustancias que imitan al ácido salícílico y actúa en casi el mismo punto que el ácido salicílico en la vía de transducción de señal para SAR, desafiados con una inoculación virulenta, y luego permanecen sin síntomas muestran un gen mutante de SAR hacia el extremo 5' del punto de acción del ácido salicílico en la vía de transducción de señal; e. aislar el ADN de dichas plantas que son homocigóticas para un gel mutante de SAR, y en donde el gen muestra que codifica una proteína que actúa hacia el extremo 5' desde el sitio de acción del ácido salicílico a lo largo de la vía de transduccíón de señal; f. sondear dicho ADN para aislar ADNc.
2.- El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dicho ácido nucleico puede funcionar como un vector para plantas, dicho ácido nucleico codificando para una proteína de transferencia de lípídos que muestra una propiedad de transducción de señal para SAR.
3.- La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada además porque dicha proteína de transferencia de lípidos codificada se muestra en SEQ ID NO: 2.
4.- La molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque dicha molécula de ácido nucleico es ADNc purificado.
5.- El ácido nucleico de conformidad con las reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado además porque dicho ácido nucleico comprende nucleótidos 1 a 439 como se ilustra en SEQ ID NO: 1.
6.- El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque dicho ácido nucleico es ADNc purificado.
7.- Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 3.
8.- Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 5.
9.- Una planta transformada que comprende el vector de conformidad con la reivindicación 7.
10.- Una planta transformada que comprende el vector de conformidad con la reivindicación 8.
11.- Una célula vegetal y plantas transformadas con una molécula de ácido nucleico recombinante que codifica para una proteína de transferencia de lípidos, en donde dicha proteína de transferencia de lípidos codificada exhibe propiedad de transducción de señal para SAR, en donde dicha molécula de ácido nucleico recombinante es obtenible mediante un procedimiento que comprende los pasos de: a. cultivar plantas de tipo silvestre y plantas transformadas con ADN-T y observar para detectar síntomas de enfermedades; b. aislar mutantes de SAR que muestran síntomas de enfermedades; c. realizar pruebas de competencia en SAR para validar la mutación de SAR en dichos mutantes de SAR, en donde SAR está comprendido en una planta mutante de SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja de dicha planta con un Inoculo avirulento y después tratada sobre otras hojas de dicha planta con un inoculo virulento en comparación con una planta de tipo silvestre que presenta SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja con un inoculo virulento y después recibió tratamiento sobre las otras hojas con un inoculo virulento; d. probar dichos mutantes de SAR para determinar la posición del gen mutante en relación con el punto de acción del ácido salicílico en la vía de transduccíón de señal, en donde dichos mutantes de SAR que primero son rociados con sustancias que imitan al ácido salicílico y actúa en casi el mismo punto que el ácido salicílico en la vía de transduccíón de señal para SAR, desafiados con una inoculación virulenta, y luego permanecen sin síntomas muestran un gen mutante de SAR hacia el extremo 5' del punto de acción del ácido salicílico en la vía de transduccíón de señal; e. aislar el ADN de dichas plantas que son homocigóticas para un gel mutante de SAR, y en donde el gen muestra que codifica una proteína que actúa hacia el extremo 5' desde el sitio de acción del ácido salicílíco a lo largo de la vía de transducción de señal; f. sondear dicho ADN para aislar ADNc.
12.- La célula vegetal y plantas de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizada además porque dicha molécula de ácido nucleico se integra en el ADN cromosómico de la planta.
13.- La molécula de ácido nucleico recombinante de conformidad con la reivindicación 11 ó 12, caracterizada además porque dicha molécula de ácido nucleico recombinante comprende nucleótidos 1 a 439 como se ilustra en SEQ ID NO: 1.
14.- Una proteína de transferencia de lípídos codificada por nucleótidos 36-341 de SEQ ID NO: 1.
15.- Una proteína de transferencia de lípídos que tiene una secuencia de aminoácidos como se ilustra en SEQ ID NO: 2, en donde dicha proteína muestra propiedad de transducción de señal para SAR.
16.- Un anticuerpo que específicamente une la proteína de conformidad con la reivindicación 14 ó 15.
17.- Un método para conferir resistencia sistémica adquirida a una planta que comprende la transformación de dicha planta con un vector que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica para una proteína de transferencia de lípidos que presenta propiedad de transducción de señal para SAR, dicha molécula de ácido nucleico obtenible mediante un procedimiento que comprende los pasos de: a. cultivar plantas de tipo silvestre y plantas transformadas con ADN-T y observar para detectar síntomas de enfermedades; b. aislar mutantes de SAR que muestran síntomas de enfermedades; c. realizar pruebas de competencia en SAR para validar la mutación de SAR en dichos mutantes de SAR, en donde SAR está comprendido en una planta mutante de SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja de dicha planta con un inoculo avirulento y después tratada sobre otras hojas de dicha planta con un inoculo virulento en comparación con una planta de tipo silvestre que presenta SAR después de haber sido primero tratada sobre una hoja con un inoculo virulento y después recibió tratamiento sobre las otras hojas con un Inoculo virulento; d. probar dichos mutantes de SAR para determinar la posición del gen mutante en relación con el punto de acción del ácido salicílíco en la vía de transducción de señal, en donde dichos mutantes de SAR que primero son rociados con sustancias que imitan al ácido salicílico y actúa en casi el mismo punto que el ácido salicílico en la vía de transducción de señal para SAR, desafiados con una inoculación virulenta, y luego permanecen sin síntomas muestran un gen mutante de SAR hacia el extremo 5' del punto de acción del ácido salicílico en la vía de transducción de señal; e. aislar el ADN de dichas plantas que son homocigóticas para un gel mutante de SAR, y en donde el gen muestra que codifica una proteína que actúa hacia el extremo 5' desde el sitio de acción del ácido salicílico a lo largo de la vía de transducción de señal; f. sondear dicho ADN para aislar ADNc.
18.- El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque dicha región de ácido nucleico comprende nucleótidos 1 a 439 de SEQ ID NO: 1.
19.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque dicha proteína tiene una secuencia de aminoácidos como se ilustra en SEQ ID NO: 2.
20.- Un método para aislar mutantes de SAR que posee una región de ácido nucleico que codifica para una proteína de transferencia de lípídos que presenta propiedad de transducción de señal para SAR, caracterizado además porque dicha proteína actúa hacia el extremo 5' desde el punto de acción del ácido salicílico a lo largo de la vía de transducción de señal: a. transformar plantas con un mutágeno para inserción; b. observar para detectar síntomas de enfermedades; c. aislar mutantes de SAR que muestran síntomas de enfermedades; d. rociar dichos mutantes de SAR con una sustancia similar al ácido salicílico; e. observar los fenotipos de dichos mutantes de SAR; y f. seleccionar dichos mutantes de SAR en donde el fenotipo de tipo silvestre es restaurado como el resultado de dicho rociado, en donde dichos mutantes de SAR en donde dicho fenotipo de tipo silvestre es restaurado tiene una región de ácido nucleico que codifica para una proteína de transferencia de lípidos que presenta propiedad de transducción de señal para SAR, en donde dicha proteína actúa hacia el extremo 5' desde el punto de acción del ácido sallcílico a lo largo de la vía de transducción de señal.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US046475 | 1997-05-14 | ||
| US60/046475 | 1997-05-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MXPA99010515A true MXPA99010515A (es) | 2000-08-01 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU708035B2 (en) | Transgenic plants expressing dna constructs containing a plurality of genes to impart virus resistance | |
| CA2112999C (en) | Pathogen-resistant transgenic plants | |
| US8334427B2 (en) | Induction of Xa27 by the avrXa27 gene in rice confers broad-spectrum resistance to Xanthomonas oryzae pv. oryzae and enhanced resistance to Xanthomonas oryzae pv. oryzicola | |
| CA2275491A1 (en) | Pathogen-induced plant promoters | |
| JPH09182589A (ja) | ハイブリッド種子生産の分子的方法 | |
| EP0680514A1 (en) | Nematode-resistant transgenic plants | |
| US7138273B2 (en) | Method of identifying non-host plant disease resistance genes | |
| CA2289905A1 (en) | Hypersensitive response elicitor fragments and uses thereof | |
| AU2008249729A1 (en) | Method for increasing the resistance of a plant to endoparasitic nematodes | |
| MXPA02000781A (es) | Genes dnd/canales ionicos de compuerta de nucleotidos ciclicos de arabidopsis thaliana; reguladores de la resistencia a enfermedades en las plantas y muerte celular. | |
| AU707935B2 (en) | Transgenic plants exhibiting heterologous virus resistance | |
| JP2002525033A (ja) | 植物に疾患抵抗性を付与するＰｉ−ｔａ遺伝子 | |
| US20020059660A1 (en) | Transgenic plants expressing DNA constructs containing a plurality of genes to impart virus resistance | |
| JPH05184373A (ja) | 抗菌ペプチドおよびそれに基づく植物耐病性 | |
| AU7487598A (en) | Gene encoding for systemic acquired resistance in arabidopsis | |
| MXPA99010515A (es) | Gen que codifica para resistencia sistemica adquirida en arabidopsis | |
| WO1998044803A1 (en) | Dna molecule encoding tomato ringspot virus proteins and uses thereof | |
| CA2253245A1 (en) | Fungus resistant transgenic plants |