MXPA99006784A - Composicion liofilizada de factor morfogenetico oseo de humano mp52 - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a factor morfogenéticoóseo de humano MP52 con manitol en una relación en peso de 1:5-50, seguido por liofilización, se obtiene composición liofilizada estable de factor morfogenéticoóseo de humano MP52 lo que evita la coloración y atrofia del producto liofilizado de factor morfogenéticoóseo de humano MP52 durante el almacenamiento y también evita la cohesión en el momento de la reconstitución.

Description

' -% COMPOSICIÓN LIOFILIZADA DE FACTOR MORFOGENETICO OSEO DE HUMANO MPS2 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a la composición liofilizada de factor morfogenético óseo de humano MP52 y un proceso de preparación de la misma. Mas específicamente, esta invención pertenece a una composición liofilizada que contiene factor morfogenético óseo de humano MP52 y manitol y un 10 proceso de preparación de la misma.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El ADNc de factor morfogenético óseo de humano MP52 se aisló por primera vez en 1994 com un factor relacionado con osteogénesis clasificado como una 15 superfamilia TGF-ß (Biochem. Biophy. Res. Comm., Vol. 204, No. 2 , 1994). Después, una tecnología de ingeniería genética avanzada ha hecho posible preparar el factor morfogenético óseo de humano MP52 sin deteriorar su actividad morfogenética ósea ? 20 (W096/33215 ) . El factor morfogenético óseo de humano MP52 se almacena bajo una condición liofilizada. Se Ref.: 30747 asocia, sin embargo, con un inconveniente que una reducción de volumen (contracción) se presenta durante el almacenamiento y cohesión de polvos presentes en el momento de reconstitución.

Con un punto de vista de resolver los problemas descritos anteriormente, aminoácidos, sacáridos y alcoholes polihídricos se usan para BMP-2 que es una proteína clasificada como la misma superfamilia TGF-ii y tiene propiedades mas cercanas al factor morfogenético óseo de humano MP52 (JP-A No. HEI 6-508777). Los presentes inventores, por lo tanto, intentaron la aplicación de tales aditivos al factor morfogenético óseo de humano MP52 pero no pudieron resolver los problemas anteriores. Específicamente descrito, la cohesión en el momento de la reconstitución se observó aún si un aminoácido neutro o básico tal como alanina, valina o lisina se adicionó al factor morfogenético óseo de humano MP52 en una cantidad de 0.5 a 2.5% antes de la liofilización. Cuando un sacárido tal como sacarosa o dextran se adicionó en una cantidad de 0.5 a 1%, seguido por liofilización, el desarrollo de color a verde amarillento pálido y se observó la contracción del producto liofilizado. Cuando un alcohol polihídrico tal como sorbitol se adicionó en una cantidad de 0.5 a 1%, seguido por liofilización, el factor morfogenético óseo de humano MP52 se disolvió en el período de liofilización, lo que hizo posible preparar un producto _>. liofilizado .

* DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN ? Los presentes inventores han procedido con una investigación extensiva con un punto de vista para resolver los problemas descritos anteriormente, como resultado, se ha encontrado que cuando se adiciona 'i manitol al factor morfogenético óseo de humano MP52, seguido por liofilización, ni coloración o contracción se observa durante el almacenamiento del producto liofilizado y la cohesión no se presenta en el momento de la reconstitución, conduciendo a la terminación de la presente invención.

La presente invención proporciona, por lo tanto, una composición liofilizada del factor morfogenético óseo de humano MP52 que contiene factor morfogenético óseo de humano MP52 y manitol. Como factor morfogenético óseo de humano MP52 en la presente invención, se usa preferentemente el factor morfogenético óseo de humano MP52 (que en la sucesivo podría llamarse MrhMP52") que se ha preparado por medio de tecnología de ingeniería genética expuesta en W096/33215. Como manitol, se usa preferentemente el prescrito como D-manitol en la Farmacopea Japonesa. El factor morfogenético óseo de humano MP52 y manitol se mezclan preferentemente en una relación de 1 : 5-50.

La composición de acuerdo a la presente invención puede prepararse liofilizando una solución de mezcla acuosa de factor morfogenético óseo de humano MP52 y manitol por medio de un método convencional. Descrito específicamente, la composición de la presente invención es disponible adicionando una cantidad predeterminada de manitol a una solución acuosa de factor morfogenético óseo de humano MP52 purificado, mezclándolos, filtrando la solución de la mezcla acuosa resultante, llenando con el filtrado un vial estéril y llevando a cabo la liofilización.

La composición de la presente invención se administra a un paciente en una cantidad efectiva para tratamiento terapéutico después de que se disuelve en agua destilada para inyección o ácido débil (aproximadamente pH 3), por ejemplo, una solución de ácido clorhídrico o amortiguador de ácido cítrico, según el uso.

La cantidad preferida de manitol incorporado en la composición de la presente invención se determinó mediante una prueba de estabilidad. La prueba de estabilidad se condujo de acuerdo con el método descrito en la instrucción para el procedimiento de operación estándar preparado en base a la Farmacopea Japonesa XIII, donde se observaron o se midieron propiedades tal como apariencia y claridad de la solución, electroforesis y contenido de agua en el momento de inicio de la prueba y 3 meses después y formación ósea ectópica.

Como resultado, ningún cambio en las propiedades tal como apariencia y claridad de la solución se observó en el momento de inicio de la prueba y 3 meses mas tarde. De los resultados de la medición en la electroforesis y contenido de agua, la preparación que contenía manitol en la relación en peso descrita antes fue estable en el momento de inicio de la prueba y 3 meses mas tarde.

Se dice que el contenido de agua preferido de un producto liofilizado es en general de 2% o menor. Se juzgó de los hallazgos anteriores que una composición de factor morfogenético óseo de humano MP52 que contienen manitol en una cantidad de 5 a 50 mg, deseablemente 10 mg, por 1 mg de factor morfogenético óseo de humano MP52 se prefiere como un producto farmacéutico .

Además, la formación ósea ectópica de cada una de las composiciones liofilizadas del factor morfogenético óseo de humano MP52que contenían 10, 25 y 50 mg de manitol, se midieron respectivamente después de almacenarse durante 6 meses. Como resultado, la formación ósea ectópica se observó a partir de cualquier composición sin hacer caso de la temperatura de almacenamiento o cantidad de manitol. En base a los resultados de la prueba descrita antes, se ha confirmado que la adición de manitol al factor morfogenético óseo de humano MP52 antes de la liofilización no tiene efectos adversos en el factor morfogenético óseo de humano MP52 y la composición resultante permanece estable durante un gran período de tiempo .

MEJOR FORMA PARA REALIZAR LA INVENCIÓN La presente invención se describirá en adelante mas específicamente por medio de los siguientes ejemplos.

Eiemplo 1 Preparación de una composición rhMP52 A 1 mg/ml de una solución acuosa de rhMP52 purificado, que se ha obtenido mediante la preparación del proceso expuesto en W096/33215, se adicionó D-manitol de la Farmacopea Japonesa en una cantidad de 10, 25 y 50 mg, respectivamente, y se mezclaron. Después de que la mezcla resultante se filtró a través de un filtro de membrana de 0.22 µm, porciones de 1 ml del filtrado así obtenido se llenaron en viales estériles. Se liofilizaron, por lo que una composición de la presente invención se preparó en la forma de producto farmacéutico.

Eiemplo 2 Prueba de estabilidad de la composición rhMP52 La composición liofilizada rhMP52 obtenida en el Ejemplo 1 se llenó en una botella de vial (hermética al aire, transparente) y se almacenó a 2-8°C, 25°C y 40°C, respetivamente. La estabilidad se evaluó en base a los siguientes criterios después de tres meses de almacenamiento. Los criterios para evaluación son como sigue : Propiedades : (Apariencia) : La composición que permaneció en la forma de una torta blanca y no se coloreó se catalogó como "sin cambio".

(Cla idad de la solución) : Una solución que tenía la composición disuelta en 1 ml de agua destilada para inyección se catalogó como "sin cambio" cuando fue sin color, transparente y libre de cohesión.

(Electroforesis ) : Una pureza de una banda principal se calculó de un porcentaje de área, después de introducir una imagen por medio de un explorador de película que adopta la transmisión usando una película ro a y después de encontrar un % de densidad óptica de integración (IOD) de cada banda.

(Contenido de agua) : El contenido de agua de la composición se midió por medio de un medidor de micro humedad.

Como resultado, con respecto a las propiedades, la composición de la presente invención permaneció sin cambiar en apariencia y claridad de la solución, mientras que la cohesión se observó en un producto liofilizado de rhMP52 solo. Como resultado de electroforesis, cada composición mostró buena estabilidad ( % ) .

Los resultados de la medición de contenido de agua (%) se muestran en la Tabla 1 que muestra que no hay un .£<" 10 gran cambio en el contenido de agua (%) entre las composiciones. La Tabla i muestra la comparación con el producto compuesto solamente de rhMP52, el contenido de agua de cada una de las composiciones de acuerdo a la presente invención es menor en el momento de la ?_- 15 preparación o después del almacenamiento y por lo tanto r? . la contracción no se presenta fácilmente. . 4T Tabla 1 co posi- Inicial 3 meses mas tarde ción 2-1 25°C 40°C rhMP52 9.7% 9.2% 7.6% 7.8% solo + Manitol 1.6% 1.6! 1.4% 1.2% 10 mg ~ + Manitol 0.9% 0.7% 0.6% 0.5% 25 mg + Manitol 0.6% 0.5% 0.4% 0.4% 50 mg Eiemplo 3 Formación ósea ectópica de rhMP52 Un vial (1 mg/vial) que contenía la composición ** obtenida en el Ejemplo 1 se almacenó a 4°C y 25°C durante 6 meses, respectivamente, después, 1 ml de agua destilada para inyección se adicionó al vial, por lo que se preparó una solución para administración. La solución así preparada se administró intramuscularmente a un ratón ICR (comprado en Nippon Crea Co., Ltd.) En una cantidad de 20 µg/20 µl . Dos semanas después, la presencia o ausencia de formación ósea ectópica se observó mediante un fotografiado de rayos X suave (n=2) . Los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2 composición 4°C 25°C rhMP52 solo se observó ebf* se observó ebf + Manitol, 10 mg se observó ebf se observó ebf + Manitol, 25 mg se observó ebf se observó ebf + Manitol, 50 mg se observó ebf se observó ebf ebf: formación ósea ectópica APLICABILIDAD INDUSTRIAL El producto liofilizado del factor morfogenético óseo de humano MP52 involucra problemas que se colorea o se contrae durante el almacenamiento y cohesiona en el momento de la reconstitución. La composición liofilizada de acuerdo a la presente invención, sin embargo, es libre de tales problemas. El factor morfogenético óseo de humano MP52 en la composición liofilizada de la presente invención permanece estable y no se observa cambio sustancial en pureza, contenido de agua y formación ósea ectópica aún después de almacenamiento durante un gran tiempo. Así, la presente invención es aplicable en el campo de producto farmacéutico .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes.

Claims (1)

REIVINDICACIONES 1. Una composición liofilizada de factor morfogenético óseo de humano MP52, caracterizada porque contiene una mezcla de factor morfogenético óseo de humano MP52 con manitol en una relación de mezclado en el rango de 1 : 5-50 (relación en peso) . 2. La composición liofilizada de acuerdo a la reivindicación 1, caracterizada porque el factor morfogenético óseo de humano MP52 se produce por medio de una tecnología de ingeniería genética. 3. Un proceso para la preparación de una composición liofilizada de factor morfogenético óseo de humano MP52, caracterizado porque comprende adicionar manitol a una solución purificada de factor morfogenético óseo de humano MP52 en una cantidad para dar una proporción de mezclado del factor morfogénetico óseo de humano MP52 al manitol en el rango de 1: 5-50 (porporción en peso) y luego liofilizar la solución mezclada restante.

1. El proceso para la preparación de la composición liofilizada de acuerdo a la reivindicación 4, caracterizado porque el factor morfogenético óseo de humano MP52 se produce por medio de una tecnología de ingeniería genética .