MXPA99005008A - Composicion farmaceutica que comprende un compuesto que tiene actividad anti-xa y un compuesto antagonista de agregacion plaquetaria - Google Patents

Abstract

La invención estádirigida a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene actividad anti-Xa, un compuesto antagonista de agregación plaquetaria y un vehículo farmacéuticamente aceptable;la invención estádirigida también a un método para tratar o prevenir una condición trombógena asociada con un trastorno isquémico relacionado con trombosis en un paciente, que comprende administrar a dicho paciente cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria;además, esta invención estádirigida al uso de cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis;además, esta invención estádirigida a un equipo para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis, dicho equipo comprendiendo una pluralidad de contenedores separados, en donde por lo menos uno de dichos contenedores contiene un compuesto que tiene actividad anti-Xa, y por lo menos otro de dichos contenedores contiene un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, y dichos contenedores contienen opcionalmente un vehículo farmacéutico.

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA QUE COMPRENDE UN COMPUESTO QUE TIENE ACTIVIDAD ANTI-XA Y UN COMPUESTO ANTAGONISTA DE AGREGACIÓN PLAQUETARIA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención está dirigida a una composición farmacéutica que comprende un compuesto con actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, que exhibe actividad inesperadamente eficaz para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con un trastorno isquémico relacionado con trombosis en un paciente. La invención está dirigida también a un método para tratar o prevenir una condición trombógena asociada con un trastorno isquémico relacionado con trombosis en un paciente, que comprende administrar cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto con actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria. Se ha demostrado que los antagonistas del receptor de fibrinógeno plaquetario son agentes efectivos para inhibir la formación de trombos dependiente de plaquetas, en modelos de trombosis coronaria en animales. Del mismo modo, los resultados de estudios clínicos han demostrado que los antagonistas del receptor de fibrinógeno plaquetario reducen la incidencia mixta de eventos isquémicos importantes cuando se administran a pacientes de alto riesgo que sufren angiopiastía coronaria transluminal percutánea. Sin embargo, el panorama terapéutico es muy estrecho para esta clase de compuestos, debido en parte a que el alto grado de inhibición de la agregación plaquetaria ex vivo requerida para la eficacia antitrombótica, está con frecuencia asociado con un notable incremento en el tiempo de hemorragia por patrón, lo cual es un indicador de complicaciones hemorrágicas inconvenientes. Las heparinas de bajo peso molecular (LMWHs) y los compuestos heparinoides (HCs) han sido usados eficazmente en años pasados para la prevención y el tratamiento de trombosis venosa y la tromboembolia asociada. Sin embargo, los LMWHs y HCs están invadiendo gradualmente el repertorio de tratamiento para las indicaciones trombóticas arteriales. Los resultados preliminares que favorecen el uso de LMWHs o HCs sobre la heparina no fraccionada en indicaciones trombóticas arteriales, son sustentados por varias diferencias farmacodinámicas, farmacocinéticas y mecanísticas entre estas dos clases de compuestos. Por ejemplo, se puede lograr anticoagulación confiable y segura con LMWHs o HCs mediante dosificación subcutánea sin monitoreo. Comparativametne con la heparina, los LMWHs y HCs tienen biodisponibilidad mayor, una vida media relativamente larga, y parecen tener un perfil más seguro,. Además, las LMWHs son más resistentes que la heparina a la neutralización por el factor plaquetario 4, el cual es liberado de plaquetas activadas, posiblemente en el sitio de la trombosis arterial.

La hemostasis, la bioquímica de la coagulación sanguínea, es un fenómeno extremadamente complejo por medio del cual el tejido corporal y la sangre entera normal contrarrestan espontáneamente la hemorragia en vasos sanguíneos lesionados. La hemostasis efectiva requiere la actividad combinada de factores vasculares, plaquetarios y plasmáticos, así como también un mecanismo de control para prevenir la coagulación excesiva. Los defectos, deficiencias o excesos de cualquiera de estos componentes pueden conducir a consecuencias hemorrágicas o trombóticas. La adhesión, dispersión y agregación plaquetarias sobre las matrices extracelulares son eventos centrales en la formación del trombo. Estos efectos son mediados por una familia de glucoproteínas adhesivas, es decir, fibrinógeno, fibronectina y factor de von Willebrand. El fibrinógeno es un cofactor para la agregación plaquetaria, mientras que la fibronectina sustenta las reacciones de unión y de dispersión de plaquetas sobre las matrices subendoteliales. Los sitios de unión para el fibrinógeno, fibronectina y el factor de von Willebrand, se han localizado sobre el complejo de proteína de membrana plaquetaria conocido como glucoproteína llb/llla. Las glucoproteínas adhesivas, al igual que el fibrinógeno, no se unen con las plaquetas en reposo normales. Sin embargo, cuando una plaqueta es activada con un agonista tal como trombina o adenosín difosfato, la plaqueta cambia su forma, haciendo quizá que el sitio de unión de GPIIb/llla sea accesible al fibrinógeno. El bloqueo del receptor de fibrinógeno inhibe así la agregación plaquetaria y la formación subsecuente del trombo, y es útil para la prevención y el tratamiento de condiciones trombógenas patológicas tales como ataque apoplético, enfermedad oclusiva arterial periférica, coagulación intravascular diseminada y síndromes coronarios agudos tales como angina de pecho inestable e infarto del miocardio.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención está dirigida también a una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene actividad anti-Xa, un compuesto antagonista de agregación plaquetaria y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención está dirigida también a un método para tratar o prevenir una condición trombógena asociada con un trastorno isquémico relacionado con trombosis en un paciente, que comprende administrar a dicho paciente cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 da información respecto a mediciones mixtas de hemodinamia/muestreo de sangre durante la administración de diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, N-(n-butilsulfonil)-4- (piperidin-4-ilbutiloxi)-L-fenilalanina (BSPBPA), y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 2 representa una gráfica del número de reducciones de flujo cíclicas (CFRs) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 3 representa una gráfica del tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 4 representa una gráfica del tiempo de protrombina (PT) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 5 representa una gráfica de la actividad anti-Xa para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 6 representa una gráfica de la actividad anti-lla para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo.

La figura 7 representa una gráfica del tiempo de hemorragia por patrón para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 8 representa una gráfica del conteo de plaquetas para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 9 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por colágena para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 10 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por ADP para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 11 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por ácido araquidónico para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 12 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por trombina para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 13 da información respecto a mediciones mixtas de hemodinamia/muestreo de sangre durante la administración de diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, amida de N-[N-[N-(4-(piperidin-4-¡l)butanoii)-N-etilglicil]aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina (PBGACA), y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 14 representa una gráfica del número de reducciones de flujo cíclicas (CFRs) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación piaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 15 representa una gráfica del tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 16 representa una gráfica del tiempo de protrombina (PT) para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 17 representa una gráfica de la actividad anti-Xa para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 18 representa una gráfica de la actividad anti-lla para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 19 representa una gráfica del tiempo de hemorragia por patrón para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 20 representa una gráfica del conteo de plaquetas para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 21 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por colágena para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 22 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por ADP para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo.

La figura 23 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por ácido araquidónico para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con el tiempo. La figura 24 representa una gráfica de la agregación plaquetaria ex vivo inducida por trombina para diferentes concentraciones del compuesto con actividad anti-Xa, enoxaparina, el compuesto antagonista de agregación plaquetaria, PBGACA, y composiciones de los mismos con ei tiempo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como se definieron anteriormente y a lo largo de la descripción de la invención, se deberá entender que los siguientes términos, a menos que se indique otra cosa, tienen los siguientes significados: Definiciones "Paciente" incluye tanto humanos como otros mamíferos. Se entiende que "cantidad efectiva" describe una cantidad de la composición de conformidad con la presente invención, eficaz para producir el efecto terapéutico deseado. "Compuesto antagonista de agregación plaquetaria" (PAAC), significa un compuesto que se une al receptor plaquetario GPIIb/llla (antagonista del receptor GPIIb/llla) e inhibe competitivamente la unión de fibrinógeno, fibronectina y factor de von Willebrand, e inhibe también la agregación de plaquetas activadas. "Compuesto con actividad anti-Xa" significa un compuesto heparinoide o heparina de bajo peso molecular (LMWH), o derivados sintéticos de los mismos.

Modalidades preferidas De conformidad con una modalidad preferida de la invención, las siguientes referencias, incorporadas en la presente como referencia, describen PAACs útiles: Lynch y otros, J. Pharm. Expt. Thera. 272 (1 ) 20 (1995); Kereiakes y otros, JACC 27 (3), 536 (1996); Peerlinck y otros, Circulation 88 (4), 1512 (1993); Barrett y otros, Clin. Pharmacol. Ther. 56 (4) 377 (1994); Cook y otros, Thromb. Haemostas. 70 (5), 838 (1993); Plow y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82, 8057-61 (1985); Ruggeri y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 5708-12 (1986); Ginsberg y otros, J. Biol. Chem. 260, 3931-36 (1985); y Gartner y otros, J. Biol. Chem. 260, 1 1 ,891-94 (1987); Plow, E. F. y otros, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 79, 371 1-3715 (1982); Tjoeng y otros, Patentes de E.U.A. Nos. 5,037,808, 4,879,313 y 4,992,463; Adams y otros, Patente de E.U.A. No. 4,857,508; Haverstick, D. M. y otros, Blood 66 (4), 946-952 (1985); Topol y otros, The Lancet, 343, 881 (1994), solicitud francesa No. 86/17507; Zimmerman y otros, patente de E.U.A. No. 4,683,291 ; publicación de solicitud europea No. 0 319 506; patente de E.U.A. No. 5,023,233, patente de E.U.A. No. 4,952,562; publicación internacional No. WO 91/04746; solicitud de los Estados Unidos serie No. 5,086,069; publicación internacional No. WO 92/131 17; patente de E.U.A. No. 5,053,392, patente de E.U.A. No. ,064,814; patente de E.U.A. No. 5,051 ,405; solicitud de patente europea 0479,481 ; solicitud de patente europea 0478,362; patente de E.U.A. No. ,292,756; publicación internacional No. WO 95/10295; y publicación internacional No. WO 89/1 1538. Los PAACs más preferidos son aquellos descritos en la publicación internacional No. WO 89/11538, publicación internacional No. WO 95/10295 o patente de E.U.A. No. 5,292,756; más preferidos son Reopro® (abciximab), N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina, amida de N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]-aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina ((PBGACA) o N-(n-butilsulfonil)-4-(piperid¡n-4-ilbutiloxi)-L-fenilalanina (BSPBPA). De conformidad con una modalidad preferida de la invención, las siguientes referencias, incorporadas en la presente como referencia, describen LMWHs útiles de conformidad con la invención y métodos para preparar las LMWHs: patente europea No. 0014184; Medicinal Research Reviews 12 (4), 373 (1992); Drugs of the Future 12 (1 ), 45 (1987); publicación internacional No. WO 92/19249; patente de E.U.A. No. 4,692,435; Barrowcliffe, Thromb. Res. 12, 27-36 (1977); solicitud de patente europea No. 37319; solicitud de patente europea No. 76279; patente de E.U.A. No. 4,804,652; WO81/3276; solicitud de patente europea No. 244235; solicitud de patente europea No. 244236; patente de E.U.A. No. 4,486,420; patente de E.U.A. No. 4,692,435; patente de E.U.A. No. 4,826,827; patente de E.U.A. No. 3,766,167; solicitud de patente europea No. 40144; solicitud de patente europea No. 347588, solicitud de patente europea No. 380943; patente de E.U.A. No. 4533549; patente de E.U.A. No. 4,629,699; solicitud de patente europea No. 269981 . Por ejemplo, un compuesto con actividad anti-Xa se puede producir de la manera siguiente: enriquecimiento por fragmentación mediante etanol y/o tamizado molecular, por ejemplo, filtración en gel o filtración en membrana de la LMWH presente en heparina estándar y despolimerización química controlada (mediante ácido nitroso, eliminación ß u oxidación por peryodato) o despolimerización enzimática (mediante heparinasas). Las condiciones de despolimerización se pueden controlar adecuadamente para producir productos de pesos moleculares deseados. Se usa comúnmente despolimerización por ácido nitroso. También se utiliza la despolimerización del éster bencílico de heparina mediante eliminación ß, la cual produce el mismo tipo de fragmentos que la despolimerización enzimática usando heparinasas. Se preparan LMWHs con actividad anticoagulante baja y conservando su estructura química básica mediante despolimerización usando oxidación por peryodato o removiendo la fracción de LMWH de unión a antitrombina, o se prepara mediante otros métodos, usando antitrombina inmovilizada por adsorción. Más preferida es una LMWH que tenga un peso molecular promedio de alrededor de 3000 a aproximadamente 6500. Las LMWHs comercialmente disponibles útiles de conformidad con la invención, incluyen las siguientes: Clexane®/Klexane®/Lovenox® (enoxaparina (ENOX) que tiene una masa molecular promedio de 4500 + 1000 Daltons (Da), distribución de masa molecular que comprende componentes de <2000 Da (16.0 + 4.0%) y de 2000 a 8000 Da (78.0 + 10.0%), actividad anti-Xa (Ui/mg sobre base en seco) de 90 a 125, y una relación de anti-Xa/anti-lla de 3.3 a 5.3; Fraxiparina® (Nardroparina) que tiene una masa molecular promedio de 4300 + 700 Da, distribución de masa molecular que comprende componentes de <2000 Da (<15%), de 2000 a 4000 Da (45 + 10% y de 2000 a 8000 Da (85 + 10%), actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de 95 a 130, y una relación de anti-Xa/Anti-lla de 2.5 a 4.0; Fragmin® (Dalteparina) que tiene una masa molecular promedio de 6000 + 400 Da, distribución de masa molecular que comprende componentes de <3000 Da (5.0 a 13.0% y >8000 Da (15.0 a 25.0%), actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de 1 10 a 210, y una relación de anti-Xa/anti-lla de 1.9 a 3.2; Embolex®/Monoembolex® (Certroparina) que tiene una masa molecular promedio de 5200 ± 1000 Da, distribución de masa molecular que comprende componentes de <2000 Da (10 a 25%) y <8000 Da (75 a 90%), actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de 80 a 120, y una relación de anti-Xa/anti-lla de 1.5 a 2.5; Fluxum®/Minidalton®/Lowhepa® (Parnaparina) que tiene una masa molecular promedio de 5000 ± 1000 Da, distribución de masa molecular que comprende componentes de <3000 Da (20 a 30%) y de 3000 a 8000 Da (50 a 60%), actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de 75 a 110, y una relación de anti-Xa/anti-lla de 2.0 a 3.0; Logiparina® (Tinzaparina) que tiene una masa molecular promedio de 3400 a 5600 Da, distribución de masa molecular que comprende componentes de <2000 Da (2.0 a 16.0%), 2000 a 4000 Da (66.0 ± 6.0%) y >8000 Da (12.0 a 38.0%), actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de >70, y una relación de anti-Xa/anti-lla de 1 .5 a 2.5; Clivarine® (Reviparina) y Normiflo® (ardeparina/heparina RD/RDH). Una LMWH preferida de conformidad con la invención se prepara de conformidad con los procedimientos descritos en la patente de E.U.A. No. 4,486,420 o la patente de E.U.A. No. 4,692,435; más preferida es la enoxaparina. De conformidad con otra modalidad preferida de la invención, un compuesto con actividad anti-Xa es un compuesto heparinoide. Las siguientes referencias, incorporadas en la presente como referencia, describen un compuesto heparinoide útil de conformidad con la invención, y métodos para preparar dicho compuesto: patente de E.U.A. No. 4,438,108, patente europea No. EP 66908, Zammit y otros, Thromb. Haemostas, 71 (6), 759 (1994), y Gent y otros, Circulation 93, 80 (1996). Un compuesto heparinoide preferido comercialmente disponible de conformidad con la invención es Orgaran® (Danaparoid), que tiene una masa molecular promedio de aproximadamente 6500 Da, actividad anti-Xa (Ul/mg sobre base en seco) de aproximadamente 10, y una relación de anti-Xa/anti-lla de aproximadamente 28. Las condiciones trombógenas preferidas tratables o prevenibles de conformidad con la invención, incluyen ataque apoplético, ateroesclerosis, angiogénesis, trombosis, condiciones tromboembólicas tales como trombosis venosa profunda, tromboflebitis o embolia pulmonar, coagulación intravascular diseminada o síndromes tromboembólicos asociados con cáncer, sepsis o complicaciones obstétricas, enfermedad oclusiva arterial periférica, y síndromes coronarios agudos tales como angina de pecho inestable e infarto del miocardio, hemodiálisis, o requerimientos de circulación extracorpórea asociados con un procedimiento quirúrgico o daño tisular causado por fosfolipasas A2 (PLA2); rnás preferidos son la angina de pecho inestable e infarto del miocardio. Puede haber otra modalidad preferida de conformidad con la invención útil en el curso de un procedimiento médico, en donde existe potencial de ocurrencia de una condición trombógena patológica, tal como durante cirugía de derivación de arteria coronaria o angioplastía coronaria transluminal percutánea, con o sin colocación de un implante intracoronario; más preferida es la angioplastía coronaria transluminal percutánea con o sin colocación de un implante intracoronario. Otra modalidad preferida de conformidad con la invención es el uso de cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis. En el método de tratamiento o prevención de conformidad con la invención, el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria se pueden administrar en diferentes formas, tales como en terapias de combinación que emplean opcionalmente procedimientos médicos. Por ejemplo, el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria se pueden administrar a un paciente concomitantemente, o en diferentes momentos, siempre que sean administrados de modo que en algún período existan cantidades farmacéuticamente efectivas de ambos compuestos presentes en el paciente, de modo que se produzca un efecto terapéutico de conformidad con la invención. Así, es otro objetivo de la invención proveer un equipo para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis, dicho equipo comprendiendo una pluralidad de contenedores separados, en donde por lo menos uno de dichos contenedores contiene un compuesto que tiene actividad anti-Xa, y por lo menos otro de dichos contenedores contiene un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, y dichos contenedores contienen opcionalmente un vehículo farmacéutico, cuyo equipo puede ser utilizado eficazmente para llevar a cabo terapias de combinación de conformidad con la invención. Otra modalidad para un equipo sería en donde por lo menos uno de dichos contenedores debe contener el compuesto que tiene actividad anti-Xa sin la presencia del compuesto antagonista de agregación plaquetaria, y por lo menos otro de dichos contenedores debe contener el compuesto antagonista de agregación plaquetaria sin la presencia del compuesto que tiene actividad anti-Xa. En la práctica, el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria se pueden administrar parenteralmente, tópicamente, rectalmente, transdérmicamente, intra-pulmonarmente u oralmente, pero preferiblemente se administran parenteralmente y/u oralmente. Las composiciones adecuadas que contienen los compuestos usados de conformidad con la invención se pueden preparar mediante medios convencionales. Por ejemplo, los compuestos usados de conformidad con la invención se pueden disolver o suspender en un vehículo adecuado. Los compuestos usados de conformidad con la invención se deben presentar en formas que permitan su administración mediante la vía más adecuada, y la invención se refiere también a una composición farmacéutica que contiene los compuestos usados de conformidad con la invención, los cuales son adecuados para su uso en medicina humana o veterinaria. Estas composiciones se pueden preparar de conformidad con los métodos acostumbrados, usando uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, los cuales comprenden adyuvantes o excipientes. Los adyuvantes comprenden, entre otras cosas, diluyentes, medios acuosos estériles y varios solventes orgánicos no tóxicos. Las composiciones pueden ser presentadas en forma de tabletas, pildoras cápsulas, pastillas, trociscos, dulces macizos, granulos, polvos, soluciones o suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elíxires o jarabes, polvos, solución o suspensión para administración intrapulmonar, y pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que comprende endulzantes, saborizantes, colorantes o estabilizadores para obtener preparaciones farmacéuticamente aceptables.

La elección del vehículo y el contenido de los compuestos usados de conformidad con la invención en el vehículo se determinan generalmente de conformidad con las propiedades químicas y de solubilidad de los compuestos, el modo particular de administración y las provisiones que serán observadas en la práctica farmacéutica. Por ejemplo, en la preparación de tabletas, se pueden usar excipientes tales como agua estéril, solución de Ringer, lactosa, citrato de sodio, soluciones salinas isotónicas (fosfato monosódico o disódico, cloruro de sodio, potasio, calcio o magnesio, o mezclas de dichas sales, carbonato de calcio y agentes de desintegración tales como almidón, ácidos algínicos y ciertos silicatos complejos combinados con lubricantes tales como estearato de magnesio, lauril sulfato de sodio y talco. Para preparar una cápsula, es ventajoso usar lactosa y polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se usan suspensiones acuosas, pueden contener agentes emulsificadores o agentes que faciliten su suspensión. También se pueden usar diluyentes tales como sacarosa, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, glicerol y cloroformo, o mezclas de los mismos. Para administración parenteral, son útiles las emulsiones, suspensiones o soluciones de los compuestos usados de conformidad con la invención en aceite vegetal, por ejemplo aceite de sésamo, aceite de cacahuate o aceite de oliva, o soluciones acuosas-orgánicas tales como agua y propilenglicol, esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo, así como también soluciones acuosas estériles de las sales farmacéuticamente aceptables. Las soluciones de las sales de los compuestos usados de conformidad con la invención son especialmente útiles para su administración mediante inyección intramuscular, intravenosa, intraarterial o subcutánea, o mediante técnicas de infusión. Las soluciones acuosas, que comprenden también soluciones de las sales en agua pura destilada, se puede usar para administración intravenosa con la condición de que su pH esté ajustado adecuadamente, que sean juiciosamente reguladas en su pH y hechas isotónicas con una cantidad suficiente de glucosa o cloruro de sodio, y que sean esterilizadas mediante calentamiento, irradiación o microfiltración. El compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria de conformidad con la invención se pueden formular también de tal manera que resistan la depuración rápida de la pared vascular (arterial o venosa) mediante convexión y/o difusión, aumentando así el tiempo de residencia de la composición en el sitio de acción deseado. El depósito útil de conformidad con la invención puede estar en una matriz de copolímero, tal como acetato etilenvinílico, o un gel de alcohol polivinílico rodeado por una coraza de Silastic. En forma alternativa, el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria pueden ser suministrados localmente a partir de un polímero de silicón implantado en la adventicia. Un procedimiento alternativo para reducir al mínimo el fracaso del compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria durante el suministro transvascular percutáneo, comprende el uso de micropartículas no difundibles eluyentes de fármaco. Las micropartículas pueden estar formadas de varios polímeros sintéticos, tales como polilactida por ejemplo, o substancias naturales incluyendo proteínas o polisacáridos. Dichas micropartículas permiten la manipulación estratégica de variables que incluyen la dosificación total de un fármaco y la cinética de su liberación. Las micropartículas pueden ser inyectadas eficazmente en la pared arterial o venosa a través de un catéter de balón poroso o un balón sobre el implante, y son retenidas en la pared vascular y el tejido periadventicio durante por lo menos aproximadamente dos semanas. Formulaciones y metodologías para el suministro intravascular local específico en un sitio de los agentes terapéuticos, se describen en Reissen y otros (J. Am. Coll. Cardiol. 1994; 23: 1234-1244), cuyos contenidos completos se incorporan en la presente como referencia. El medio para el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria puede ser también un hidrogel el cual se prepara a partir de cualquier homopolímero o heteropolímero biocompatible o no citotóxico, tal como un polímero hidrófilo de ácido poliacrílico que puede actuar como una esponja absorbente de fármaco. Dichos polímeros han sido descritos, por ejemplo, en la solicitud WO93/08845, cuyos contenidos completos se incorporan en la presente como referencia. Algunos de ellos, tales como en particular los que se obtienen a partir de óxido de etileno y/o propileno, están disponibles comercialmente. Además, el compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria se pueden administrar directamente a la pared del vaso sanguíneo por medio de un balón de angioplastía el cual es recubierto con una película hidrófila (por ejemplo, un hidrogel), o por medio de cualquier otro catéter que contenga una cámara de infusión para los compuestos, los cuales pueden ser así aplicados en forma precisa al sitio que será tratado. El porcentaje del compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria de conformidad con la invención, se puede hacer variar. Los compuestos deben constituir una proporción tal que se deba obtener una dosificación adecuada. Obviamente, se pueden administrar varias formas de dosificación unitarias. La dosis utilizada será determinada por el médico, y depende del efecto terapéutico, la vía de administración y la duración del tratamiento deseados, así como de la condición del paciente. En cada caso particular, las dosis serán determinadas de conformidad con los factores distintivos del sujeto que será tratado, tales como la edad, peso, condición general de salud y otras características que pueden afectar la eficacia del producto medicinal. En el adulto, las dosificaciones del PAAC son generalmente de alrededor de 0.0001 a aproximadamente 50, preferiblemente de alrededor de 0.0001 a aproximadamente 5, mg/kg de peso corporal por día mediante inhalación, de alrededor de 0.001 a aproximadamente 100, preferiblemente de 0.01 a 70, más especialmente de 0.05 a 10, mg/kg de peso corporal por día mediante administración oral, y de alrededor de 0.0001 a aproximadamente 10, preferiblemente de 0.001 a 1 , mg/kg de peso corporal por día mediante administración intravenosa. En el adulto, las dosificaciones del compuesto con actividad anti-Xa de conformidad con la invención son particularmente útiles en dosis de alrededor de 10 a aproximadamente 25,000 unidades internacionales (Ul) de actividad anti-Xa. El compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria usados de conformidad con la invención, se pueden administrar tan frecuentemente como sea necesario hasta obtener el efecto terapéutico deseado. El régimen de dosificación que se usa para llevar a cabo el método de esta invención, es aquel que asegure la respuesta terapéutica máxima hasta que se obtenga la mejora, y después el nivel efectivo mínimo que dé alivio. Algunos pacientes pueden responder rápidamente a una dosis mayor o menor, y pueden encontrar que son adecuadas dosificaciones de mantenimiento mucho más débiles. Los regímenes de tratamiento tanto a corto como a largo plazo son contemplados por la invención. También son contemplados los tratamientos al régimen de alrededor de 1 a aproximadamente 4 dosis por día, de conformidad con los requerimientos fisiológicos de cada paciente en particular, teniendo en mente, en efecto, que al seleccionar las dosificaciones apropiadas en cualquier caso específico, se debe considerar el peso, la salud general y la edad del paciente, así como otros factores que puedan afectar la respuesta al fármaco. Así, para otros pacientes, será necesario prescribir más de una o dos dosis por día.

Los compuestos de la presente invención también se pueden formular para su uso en conjunto con otros agentes terapéuticos tales como agentes o en relación con la aplicación de técnicas terapéuticas para tratar condiciones farmacológicas que pueden ser aminoradas mediante la aplicación de un compuesto de fórmuia I, tal como se describe en lo siguiente: Los compuestos de la presente invención se pueden usar en el tratamiento de restenosis o angioplastía usando cualquier dispositivo tal como técnicas de balón, ablación o con láser. Los compuestos de la presente invención se pueden usar en el tratamiento de restenosis consecutiva a colocación de implante en la vasculatura como 1 ) tratamiento primario para bloqueo vascular, 2) en los casos en donde la angioplastía en donde se usa cualquier dispositivo, no permite dar con una arteria visible. Los compuestos de la presente invención se pueden usar oralmente, mediante administración parenteral, o el compuesto se puede aplicar tópicamente mediante la intervención de un dispositivo específico, o como un recubrimiento adecuadamente formulado sobre un dispositivo de implante. Los compuestos de la presente invención se pueden usar en el tratamiento de restenosis en combinación con cualquier agente anticoagulante, antiplaquetario, antitrombótico o profibrinolítico. Con frecuencia, los pacientes son tratados concurrentemente antes, durante y después de practicar procedimientos de intervención con agentes de estas clases para realizar con seguridad el procedimiento de intervención o para evitar efectos perjudiciales o formación de trombos. Algunos ejemplos de grupos de agentes que se sabe son agentes anticoagulantes, antiplaquetarios, antitrombóticos o profibrinolíticos, incluyen cualquier formulación de inhibidores de trombina o inhibidores del factor Vlla. Algunos ejemplos de grupos de agentes que se sabe son agentes anticoagulantes, antiplaquetarios, antitrombóticos o profibrinolíticos incluyen cualquier formulación de aspirina, inhibidores directos de trombina, inhibidores directos del factor Xa o inhibidores del factor Vlla. Los compuestos de ia presente invención se pueden usar en combinación con cualquier agente antihipertensivo o agente regulador del colesterol o lípidos, en el tratamiento de restenosis o ateroesclerosis concurrentemente con el tratamiento de ateroesclerosis o presión sanguínea alta. Algunos ejemplos de agentes que son útiles en el tratamiento de presión sanguínea alta incluyen compuestos de los siguientes grupos: bloqueadores beta, inhibidores de ACE, antagonistas de los canales de calcio y antagonistas del receptor alfa. Algunos ejemplos de agentes que son útiles en el tratamiento de los niveles elevados de colesterol o niveles disregulados de lípidos, incluyen compuestos que se sabe son inhibidores de la HMGCoA reductasa, y compuestos de la clase del fibrato. El compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria usados de conformidad con la invención, exhiben actividades farmacológicas notables de conformidad con pruebas descritas en la literatura, cuyos resultados de prueba se piensa que se correlacionan con la actividad farmacológica en humanos y otros mamíferos. Los siguientes resultados de pruebas farmacológicas son características típicas del compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria usados de conformidad con la invención. Las siguientes pruebas farmacológicas evalúan la actividad del compuesto con actividad anti-Xa y el compuesto antagonista de agregación plaquetaria usados de conformidad con la invención. Estas pruebas incluyen las mediciones hemodinámicas durante la administración de diferentes concentraciones de un compuesto con actividad anti-Xa, un compuesto antagonista de agregación plaquetaria y composiciones de los mismos con el tiempo (figuras 1 y 13). Más específicamente, se hicieron mediciones de reducción del flujo cíclico (figuras 2 y 14), tiempo de tromboplastina parcial activada (figuras 3 y 15), tiempo de protrombina (figuras 4 y 16), actividad anti-Xa (figuras 5 y 17), actividad anti-lla (figuras 6 y 18), tiempo de hemorragia por patrón (figuras 7 y 19), conteo de plaquetas (figuras 8 y 20), agregación plaquetaria ex vivo inducida por colágena (figuras 9 y 21 ), agregación plaquetaria ex vivo inducida por ADP (figuras 10 y 22), agregación plaquetaria ex vivo inducida por ácido araquidónico (figuras 1 1 y 23) y agregación plaquetaria ex vivo inducida por trombina (figuras 12 y 24). Las composiciones de la presente invención exhiben actividad notable en las pruebas anteriores, y se considera que son útiles en la prevención y el tratamiento de trombosis asociada con ciertos estados de enfermedad. La actividad antitrombótica en la prueba de agregación plaquetaria ex vivo en caninos, predice dicha actividad en humanos (véase, por ejemplo, Catalfamo, J. L. y Dodds, W. Jean, "Isolation of Platelets from Laboratory Animáis", Methods Enzymol, 169, Parte A, 27 (1989)).

Materiales y métodos Todos los procedimientos en este estudio se llevan a cabo de conformidad con las regulaciones de la Animal Welfare Act y la Guide for the Care and Use of Laboratory Animáis (DHEW, publicación No. NIH 85-23, 1985). El protocolo de prueba siguiente es un modelo experimental de angina de pecho inestable. Perros Mongrel de cualquier sexo (15-21 kg) son anestesiados con pentobarbital sódico (30 mg/kg, i.v., siendo dados complementos según sea necesario), intubados y ventilados usando un respirador Harvard (Harvard Apparatus, S. Natick, MA). Un catéter triluminal (SAFEDWELL plus, Becton Dickinson, Sandy, UT) se coloca en la vena femoral derecha para la administración de agentes de prueba y anestesia complementaria. La arteria femoral derecha es canulada para medir la presión sanguínea arterial y para obtener muestras de sangre. Se lleva a cabo una toracotomía izquierda en ei quinto espacio intercostal, y el corazón es suspendido en un soporte pericárdico. La arteria coronaria circunfleja izquierda (LCX) es aislada y disectada en 2 cm, ligando las ramas laterales según sea necesario. Se coloca una sonda de flujo electromagnético (Carolina Medical Electronics, 501 D) sobre el vaso para monitorear el flujo sanguíneo coronario, y una ligadura en asa se coloca sobre la porción distal del vaso para producir una oclusión mecánica temporal, la cual se usa para facilitar el ajuste del grado de estenosis y para facilitar la validación de las mediciones de flujo cero. Distai a la sonda de flujo, un oclusor Lexan® se coloca con el propósito de crear una estenosis crítica, lo cual es confirmado por la supresión de la respuesta hiperémica a una oclusión mecánica del vaso durante 10 segundos. Células del endotelio y células del músculo liso vascular son dañadas comprimiendo el vaso con una abrazadera vascular. Estas condiciones dan como resultado la adhesión y agregación plaquetarias en ei área dañada, produciendo así una disminución gradual en el flujo sanguíneo coronario. Cuando el flujo llega a cero, el oclusor se mueve hacia atrás y hacia adelante sobre el área dañada para desalojar mecánicamente el trombo rico en plaquetas, restaurando así el flujo sanguíneo. Este patrón repetitivo de flujo sanguíneo decreciente que se restaura mediante disgregación mecánica del trombo plaquetario, es referido como reducciones de flujo cíclico (CFRs). El efecto antitrombótico de los agentes de prueba se cuantifica comparando el número de CFRs que ocurrieron durante un período de control de 20 minutos con el número de CFRs por 20 minutos para tres períodos consecutivos de 20 minutos después de la administración de fármaco. Se considera que una reducción significativa en el número de CFRs representa un efecto antitrombótico.

Protocolo experimental a. Protocolo usando BSPBPA 30 perros son asignados a uno de seis grupos de tratamiento adjuntos. Los compuestos se administran únicamente como un bolo intravenoso (para N-(n-butilsufonil)-4-(piperidin-4-ilbutiloxi)-L-fenilalanina (BSPBPA) o vehículo de solución salina), o como un bolo intravenoso más una infusión intravenosa constante (para heparina, enoxaparina (ENOX), o vehículo de solución salina. Los grupos de tratamiento son: 1 ) BSPBPA (30 µg/kg), II) BSPBPA (300 µg/kg), lll) ENOX (0.5 mg/kg + 5 µg/kg/min) IV) ENOX (0.5 mg/kg + 5 µg/kg/min) más BSPBPA (30 µg/kg), V) heparina (60 U/kg + 0.7 U/kg/min, y VI) heparina (60 U/kg + 0.7 U/kg/min) más BSPBPA (30 µg/kg). Todos los compuestos se diluyen en solución salina, y las inyecciones en bolo se hacen usando un volumen de 5 mi, y se hacen infusiones constantes usando un volumen de 22 mi. a. Protocolo usando PBGACA 30 perros son asignados a uno de seis grupos de tratamiento adjuntos. Los compuestos para estos experimentos implican la administración de los siguientes agentes como un bolo y una infusión constante (para amida de N-[N-[N-(4-(piperid¡n-4-il)butanoil)-N-etilglicil]aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina (PBGACA) o vehículo de solución salina), o como un bolo intravenoso más una infusión intavenosa constante (para heparina, ENOX, o vehículo de solución salina). Los grupos de tratamiento fueron: I) PBGACA (10 µg/kg + 0.15 µg/kg/min), II) PBGACA (30 µg/kg + 0.15 µg/kg/min), lll) ENOX (0.5 mg/kg + 5 µg/kg/min), IV) ENOX (0.5 mg/kg + 5 µg/kg/min) más PBGACA (10 µg/kg + 0.15 µg/kg/min), V) heparina (60 U/kg + 0.7 U/kg/min) y VI) heparina (60 U/kg + PBGACA (10 µg/kg + 0.15 µg/kg/min). Todos los compuestos se diluyen en solución salina, y las inyecciones en bolo se hacen usando un volumen de 5 mi, y las infusiones constantes se hicieron usando un volumen de 22 mi. Después de que se establecen CFRs consistentes durante por lo menos 20 minutos, los compuestos se administran como se describió anteriormente, y se monitorea el flujo sanguíneo durante el periodo de infusión de 1 hora. Se toman muestras de sangre arterial antes de la administración de los agentes de prueba (muestra control) y a 5, 10, 30 y 60 minutos después de la administración de los compuestos. Se toman muestras de sangre a un volumen de 1/10 de citrato trisódico a 3.8%, y se usan para pruebas de agregación plaquetaria ex vivo, conteo de plaquetas, niveles de anti-Xa, niveles de anti-lla y pruebas de tiempo de coagulación (tiempo de tromboplastina parcial activada, APTT, y tiempo de protrombina, PT). Se toman muestras de sangre (4.5 mi) obtenidas para análisis de niveles de anti-Xa y de anti-lla en jeringas enfriadas conteniendo 0.5 mi de citrato trisódico, y se colocan inmediatamente en hielo. Se registra la presión sanguínea arterial media, la frecuencia cardíaca y el ECG, durante la duración del protocolo (polígrafo Grass, modelo 7D, Grass Instruments, MA).

Tiempos de coagulación v tiempo de hemorragia por patrón. Se miden el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) y el tiempo de protombina (PT) usando un analizador de coagulación de micromuestras (MCA210, Bio Data Corp, Horsham, PA) y reactivos Dade® (tromboplastina-C Plus y reactivo para PTT Actin® activado por FS, Baxter Diagnostics, Inc., Deerfield, IL). El APTT es el método que se utiliza más ampliamente para monitorear la terapia de anticoagulación con heparina intravenosa. Es también una prueba fundamental para detectar deficiencias o anormalidades de los factores de coagulación intrínsecos: VIII, IX, XI, XII, y factores comunes a las vías intrínseca y extrínseca: I (fibrinógeno), II, V, X. Cuando se usa en conjunto con plasma deficiente en substrato, el APTT provee la base para la cuantif?cación de los factores de coagulación específicos. La capacidad intrínseca de la sangre para formar un coágulo de fibrina requiere de los factores de coagulación XII, XI, IX, VIII, X, V y II (protrombina), fibrinógeno, lípidos plaquetarios, y calcio. Mediante la adición de una substancia para activar los factores XII y XI, los factores de contacto, el tiempo de tromboplastina parcial se convierte en el tiempo de tromboplastina parcial "activada" (APTT). Debido a que los puntos terminales de coagulación son más cortos y más agudos que con el PTT, se ha demostrado que el APTT es una medición simple y altamente confiable del mecanismo de coagulación intrínseco.

Procedimiento de prueba 1.- Preincubar cloruro de calcio a 0.025 M a 37°C. 2.- Pipetear 0.1 mi de reactivo para APTT reconstituido en un tubo de prueba. 3.- Añadir 0.1 mi de plasma de prueba o control. 4.- Incubar a 37°C exactamente durante 5 minutos. 5.- Añadir 0.1 mi de cloruro de calcio preincubado, iniciando simultáneamente el cronómetro. 6.- Registrar el tiempo de coagulación.

El tiempo de protrombina es el método que se usa para monitorear la terapia de anticoagulación oral. Es también una prueba fundamental que se usa para detectar una deficiencia o anormalidad del factor de coagulación intrínseco Vil, y los factores comunes a las vías hemostáticas intrínseca y extrínseca: fibrinógeno II, V y X. Cuando se usa en conjunto con plasma deficiente en substrato, el PT provee la base para la cuantificación de los factores de coagulación específicos. La capacidad de la sangre para formar un coágulo de fibrina mediante la vía hemostática extrínseca requiere de trombopiastina, calcio, factor Vil, factor V, factor X, factor II (protrombina) y factor I (fibrinógeno) en tejidos. Cuando se añaden tromboplastina y calcio de tejidos a una muestra de plasma tratado con citrato, las acciones de los factores intrínsecos son desviadas, y la reacción se vuelve específica para los factores de coagulación que intervienen en las vías extrínseca y común.

Procedimiento de prueba 1.- Preincubar reactivo para PT reconstituido a 37°C. 2.- Pipetear 0.1 mi de plasma de prueba o control en un tubo de prueba. 3.- Incubar a 37°C durante por lo menos 2 minutos, pero no más de 10 minutos. 4.- Inyectar 0.2 mi del reactivo preincubado iniciando simultáneamente el cronómetro. 5.- Registrar el tiempo de coagulación.

Se obtienen mediciones del tiempo de hemorragia por patrón en los mismos puntos de tiempo que las muestras de sangre, como se mencionó anteriormente. El tiempo de hemorragia por patrón se mide después de que se hace una incisión uniforme sobre la membrana mucosa del labio superior interno con un dispositivo de incisión automatizado SurgicuttR (ITC, Edison, NJ). La sangre se seca con papel secante SurgicuttR para tiempo de hemorragia cada 30 segundos, teniendo cuidado de no perturbar ei sitio de incisión. Se mide el tiempo de hemorragia por patrón desde el momento de la incisión hasta que la sangre deja de manchar el papel secante. Se considera como máximos los tiempos de hemorragia de 10 minutos.

Actividad anti-Xa y anti-lla Las muestras se centrifugan a 1500 x g durante 10 minutos a 4°C. El plasma es removido y almacenado a -70°C hasta que es puesto a prueba. Se analiza la actividad anti-Xa y anti-lla mediante métodos cromógenos usando equipos suministrados por American Diagnostics (heparina actichromeR y heparina actichomeR anti-lla, Greenwich, CT), con modificaciones menores. Las incubaciones y reacciones se llevan a cabo a 37°C. Se determina la actividad amidolítica (unidades miliópticas, o mOD) usando un espectrofotómetro de placa de microtítulo SPECTRAmax y progamas Softmax Pro (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA). Se usa el primer estándar internacional para LMWH (National Institute for Biological Standards and Control, Londop; actividad anti-Xa 168 Ul/mg y actividad anti-lla 66.5 Ul/mg) para construir curvas estándar para medir la actividad anti-Xa y anti-lla de la heparina y ENOX. Las curvas se construyen usando un modelo de ajuste de curva de cuatro parámetros (Softmax Pro, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Los valores para actividad anti-Xa y anti-lla y heparina y ENOX se reportan en unidades internacionales.

Agregación plaguetaria La inhibición de la prueba de agregación plaquetaria ex vivo se basa en la prueba de Zucker, "Platelet Aggregation Measured by the Photoelectric Method", Methods in Enzymology 169, 1 17-133 (1989).

Se prepara plasma rico en plaquetas (PRP) centrifugando las muestras de sangre a 150 x g durante 10 minutos. Después de remover el sobrenadante que contiene PRP, se prepara plasma pobre en plaquetas (PPP) centrifugando la muestra restante a 1000 x g durante 10 minutos. Se determina el conteo de plaquetas con un contador de partículas Coulter ZM o Coulter ZBI (Coulter Intruments, Hialeah, FL). Cuando es necesario, el conteo de plaquetas se ajusta a 3 x 108 piaquetas/ml usando PPP autólogo. El PRP (250 µl) se incuba a 37°C mientras se agita a 1200 rpm. Después de preincubación con epinefrina durante 1 minuto (1 µM, Chrono-par 393, Chrono-log Corp., Havertown, PA), se induce la agregación plaquetaria mediante el uso de adenosín difosfato (ADP, 10 µM, Chrono-par 384, Chrono-log Corp., Havertown, PA), colágena (tendón de equino, 10 µg/ml, Chrono-par 385, Chrono-log Corp., Havertown, PA), ácido araquidónico (1 mM, Biodata Corp, Horsham, PA) o trombina (4 unidades/ml, Enzyme Research Institute, South Bend, IN; más Gly-Pro-Arg-Pro, un inhibidor de polimerización de fibrina, 2 mM, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). La agregación plaquetaria se monitorea espectrofotométricamente con un agregador plaquetario PAP-4C (Bio Data Corp, Horsham, PA). Los resultados se expresan como porcentaje de inhibición de la velocidad de agregación comparativamente con la respuesta de agregación antes del uso de fármaco.

Estadística Los datos obtenidos mediante muestreo múltiple durante el experimento se analizan mediante análisis de variancia bidireccional de mediciones repetidas. Se realizan comparaciones múltiples post-hoc de medias para valores de control dentro de los grupos de tratamiento, y se hace la comparación de los datos de ENOX con otros grupos de tratamiento usando la prueba de diferencia menos significativa. Un valor de p menor de 0.05 es considerado como significativo.

Resultados El uso combinado de un compuesto con actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria usados de conformidad con la invención, permite el uso de dichos compuestos a dosificaciones que serían subeficaces si se usaran individualmente, mientras efectúan la inhibición de la formación repetitiva de trombos plaquetarios al mismo grado que las altas dosis del compuesto antagonista de agregación plaquetaria sin aumentar significativamente el tiempo de hemorragia por patrón (comparativamente con un incremento superior a 5 veces el tiempo de hemorragia por patrón causado por altas dosis del compuesto antagonista de agregación plaquetaria, BSPBPA; y un incremento de aproximadamente 3 veces el tiempo de hemorragia por patrón causado por altas dosis del compuesto antagonista de agaregación plaquetaria, PBGACA). La combinación de una dosis baja de un compuesto antagonista de agregación plaquetaria con heparina, a una dosis que aumenta el APTT de 2.0 a 2.5 veces más sobre la línea basal, no inhibió la formación repetitiva de trombos plaquetarios. La presente invención se puede describir en otras formas específicas sin apartarse del espíritu o los atributos esenciales de la misma.

Claims (20)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y cantidades farmacéuticamente efectivas de un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria.

2.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto que tiene actividad anti-Xa es una heparina de bajo peso molecular.

3.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la heparina de bajo peso molecular se selecciona del grupo que consiste de enoxaparina, nardroparina, dalteparina, certroparina, parnaparina, reviparina, ardeparina/heparina RD/RDH o tinzaparina.

4.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque la heparina de bajo peso molecular es enoxaparina.

5.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto que tiene actividad anti-Xa es un compuesto heparinoide.

6.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto heparinoide es danaparoide.

7.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el compuesto antagonista de agregación plaquetaria es abciximab, N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]aspartil]-L-ß-ciclohexil aianina, amida de N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina o N-(n-butilsulfonil)-4-(piperidin-4-ilbutiloxi)-L-fenilalanina.

8.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque el compuesto antagonista de agregación plaquetaria es abciximab.

9.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque el compuesto antagonista de agregación plaquetaria es N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]-aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina.

10.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque el compuesto antagonista de agregación plaquetaria es amida de N-[N-[N-(4-(piperidin-4-il)butanoil)-N-etilglicil]-aspartil]-L-ß-ciclohexil alanina.

11.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada además porque el compuesto antagonista de agregación plaquetaria es N-(n-butilsulfonil)-4-(piperidin-4-ilbutiloxi)-L-fenil-alanina.

12.- El uso de un compuesto que tiene actividad anti-Xa en combinación con un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, en la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis en un paciente.

13.- El uso de conformidad con la reivindicación 12, en donde la condición fisiológica se selecciona de ataque apoplético, ateroesclerosis, angiogénesis, trombosis, una condición tromboembólica, coagulación intravascular diseminada, enfermedad oclusiva arterial periférica, hemodiálisis, un requerimiento de circulación extracorpórea asociada con un procedimiento quirúrgico, daño tisular causado por fosfolipasas A2, un síndrome coronario agudo, un síndrome tromboembólico asociado con cáncer, sepsis o complicaciones obstétricas.

14.- El uso de conformidad con la reivindiación 12, en donde la condición fisiológica es síndrome coronario agudo.

15.- El uso de conformidad con la reivindicación 14, en donde el síndrome coronario agudo es angina de pecho inestable o infarto del miocardio.

16.- El uso de conformidad con la reivindicación 12, en donde el tratamiento o la prevención ocurren en el curso de cirugía de derivación de arteria coronaria o angioplastía coronaria transluminal percutánea.

17.- El uso de conformidad con la reivindicación 12, en donde el tratamiento o la prevención ocurren en el curso de angioplastía coronaria transluminal percutánea.

18.- Un equipo para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis, dicho equipo comprendiendo una pluralidad de contenedores separados, en donde uno de dichos contenedores contiene un compuesto que tiene actividad anti-Xa, y por lo menos otro de dichos contenedores contiene un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, y dichos contenedores contienen opcionalmente un vehículo farmacéutico.

19.- El equipo de conformidad con la reivindicación 18, en donde por lo menos uno de dichos contenedores debe contener el compuesto que tiene actividad anti-Xa sin la presencia del compuesto antagonista de agregación plaquetaria, y por lo menos otro de dichos contenedores debe contener el compuesto antagonista de agregación plaquetaria sin la presencia del compuesto que tiene actividad anti-Xa.

20.- Un producto que contiene un compuesto que tiene actividad anti-Xa y un compuesto antagonista de agregación plaquetaria, como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial para tratar o prevenir una condición fisiológica asociada con trastorno isquémico relacionado con trombosis.