MXPA99000654A - Inhibidores de desaminasa de adenosina - Google Patents

Abstract

Esta invención da a conocer (2S,3R)-3-(6-aminopurin-9-il) aralcan-2-oles, una clase novedosa de derivados de adenina (también denominados 9-aralquiladeninas, ARADS), que se ha demostrado que inhiben la enzima desaminasa de adenosina en niveles terapéuticamenteútiles. Los valores inhibidores relevantes constantes (Ki) están en la escala de 10-7 a 10-10 M. Estos compuestos con potencias en esta escala pueden inhibir reversiblemente la ADA de una manera efectiva, sin desactivar permanentemente la enzima. Se ha demostrado que los inhibidores de ADA que tienen perfiles biológicos similares, son de un valor terapéutico cuando se utilizan para proteger al músculo cardiaco contra el daño isquémico.

Description

INHIBIDORES DE DESAMINASA DE ADENOSINA Antecedentes de la Invención Esta invención está en el campo de la quimica y la farmacología, y se refiere a fármacos que pueden inhibir la desaminasa de adenosina. Estos fármacos se pueden utilizar para reducir la degradación metabólica de los agentes quimioterapéuticos para cáncer y virales. La enzima de desaminasa de adenosina (ADA, también conocida como aminohidrolasa de adenosina) está designada como E.C.3.5.4.4. en el sistema de clasificación internacional. Es una enzima catabólica que convierte la adenosina y la 2'-desoxiadenosina en la inosina y la 2 ' -desoxi-inosina correspondientes, mediante el reemplazo del grupo amino en la sexta posición de la adenina con un grupo hidroxilo. La ADA también puede degradar un número de otros nucleósidos que se utilizan en la quimioterapia de cáncer y/ó viral. Por consiguiente, se pueden utilizar inhibidores de ADA como auxiliares (es decir, como agentes secundarios para incrementar la efectividad de un fármaco primario) , con el fin de prolongar las vidas medias metabólicas de los fármacos en la quimioterapia de cáncer y viral. Los inhibidores de ADA también se pueden utilizar para crear artificialmente deficiencias de ADA que sean de interés para la investigación como herramientas bioquímicas.

Existen un número de inhibidores de ADA conocidos, tanto de origen natural como sintético. La desoxicoformicina (dCF, Pentostatina) es el inhibidor que se presenta naturalmente más potente. Es un 2 ' -desoxinucleósido con un valor KL de 2.5 x 10-12 M. Esta potente actividad se describe como de enlace apretado, debido a que la regeneración de la enzima es extremadamente lenta, y la inhibición algunas veces es descrita como irrevesible. La pentostatina está en uso clínico para el tratamiento de leucemia de las células vellosas. También existen un número de inhibidores de ADA sintéticos. Entre los más importantes está la eritrohidroxi-noniladenina (EHNA) , que fue descubierta por Schaeffer, H.J. y Sch ender, C.F., Enzyme Inhibitors XXVI :Bridging Hydrophobic and Hydrophilic Regions on Adenosine Deaminise with Some 9- (2-Hidroxi-3-alquil) adenines; ". Med . Chem . , 17:68, 1974. Una diferencia entre la EHNA y la dCF es la potencia de inhibición de la enzima. La EHNA tiene un valor K^ de 10-9 M, que la hace mil veces menos activa que la dCF. Otra diferencia importante entre los dos fármacos, es su duración de inhibición de ADA. A diferencia de la dCF, la inhibición con EHNA es reversible, con una vida media de media hora. Esta diferencia se basa en el hecho de que la EHNA aparentemente es metabolizada por las enzimas del hígado en metabolitos oxidados (hidroxilados) que son excretados en la orina, McConnell, W.R. ; el Dareer, S.M.; Hill, D.L., Metabolism and Disposition of erytrhro-9- (2-Hydroxi-3-nonyl) [14C]adenine in the Rhesus Monkey, Drug Metab . Disp . , 1980, 8, 5-7; y Lambe, CU.; Nelson, D.J., Pharmacokinetics on Inhibition of Adenosine Deaminase by erythro-9-(2-Hydroxy-3-nonyl)adenine in CBA Mice, Biochem . <. Pharmacol . , 1983, 31, 5356-539. Debido a que la dCF es un fármaco muy tóxico, recientemente se ha enfocado la atención en la EHNA, ya que se espera que la terapia con EHNA produzca los efectos farmacológicos con una toxicidad reducida. El interés renovado en la EHNA ha estimulado los estudios para entender la relación entre su estructura y su actividad. Esto ha conducido a la síntesis de un gran número de análogos modificados tanto en el heterociclo (adenina) , como en la cadena alifática unida a él. Los análogos de anillo modificado han demostrado la necesidad de N-l, pero no de N-3 en el anillo de seis miembros. Por otra parte, los estudios de la cadena de alquilo que tiene dos carbonos quirales en C-2 y C-3, han demostrado la importancia de la quiralidad para la actividad biológica. El trabajo original por Schaeffer y colaboradores produjo una mezcla racémica de EHNA, y la mayor parte del trabajo anterior se hizo sobre este material ópticamente inactivo. Sin embargo, dos laboratorios han demostrado posteriormente que la mayor parte de la actividad reside en el isómero de (+) -2 , S , 3R-eritro, Baker, D.C.; Hawkins, L.D., Synthesis of Inhibitors of Adenosine Deaminase. A Total Synthesis of (+) -erythro-3- (Adenyl-9-yl) -2-nonanol and its Isomers from Chrial Precursors, J. Org. Chem . , 1982, 47, 2179-2184; y Bastían, G. ; Bessodes, M. ; Panzica, R.P.; Abushanab, E. ; Chen, S.F.; Stoeckler, J.D.; Parks, Jr., R.E., Adenosine Deaminase Inhibitors. Conversión of a Single Chrial Synthon into erythro-and threo-9- (2-Hydroxy-3-nonyl) adenines, J. Med . Chem . , 1981, 24, 1383-1385. Estos descubrimientos han presentado la sintesis de análogos de EHNA que mantenían la misma quiralidad en estos dos centros, Harriman, G. ; Poirot, A. ; Abushanab, E. ; Midgett, R.M. ; Stoeckler, J. Adenosine Deaminase Inhibitors, Synthesis and Biological Evaluation of Cl1 and Nor-Cl' Derivatives of (+) -erythro-9- (2 (S) -Hydroxy-3 (R) -nonyl)adenine, J . Med . Chem . , 1992, 35, 4180. Más recientemente, se ha demostrado que los derivados hidroxilados de (+)-EHNA en las posiciones 8 y 9 de la cadena de alquilo, tienen, en adición a la actividad inhibidora de ADA, Varghese, C. ; Sarma, M.S.P.; Palle, V.P.; Aushanab, E. ; Li, S.Y.; Stoeckler, J. , Adenosine Deaminase Inhibitors. Synthesis and Biological Evaluation of Putative Metabolites of (+) -erythro-9- (2S-Hydroxy-3R-nonyl) adenine, J". Med . Chem . , 1994, 37, 3844, un efecto protector sobre el músculo cardiaco contra el daño isquémico (Abushanab, Patente de los Estados Unidos Número 5,491,146, cuya patente se incorpora a la presente como referencia en su totalidad en esta descripción) .

Este efecto protector se ha reportado anteriormente para la dC en un modelo cardiovascular y de neuroprotección.

Compendio de la Invención La presente invención incorpora una clase novedosa hasta ahora desconocida de aralquiladeninas (A-RADS) que inhibe la ADA de una manera reversible. Algunos de estos derivado demuestran, por primera vez, una mayor actividad inhibidora d ADA que cualquier inhibidor sintético previamente reportado. U uso benéfico de las ARADS, es hacer más lenta la degradación d ciertos tipos de fármacos terapéuticos útiles por la ADA. Los análogos de ARAD descritos en la presente s pueden administrar como auxiliares para prolongar las vida medias, e incrementar la efectividad de los fármaco quimioterapéuticos (normalmente utilizados como agentes contr el cáncer ó antivirales) , que son degradados por la ADA. Com será reconocido por los expertos en la materia, el rang deseado de valores K-j_ es relativamente amplio, ya que lo compuestos candidatos se pueden administrar a un paciente e cualquier nivel deseado mediante diferentes vías. Estos análogos tienen un valor terapéutico adiciona cuando se utiliza para proteger el músculo cardiaco contra e daño isquémico. Además, se cree que estos análogos tiene utilidad en la conservación de los órganos utilizados para lo trasplantes.

Dentro de la familia de ARAD útiles para los propósitos descritos en la presente se incluyen cualesquiera isómeros (incluyendo isómeros "treo") , análogos, ó sales de los compuestos descritos en la presente, en el entendido de que estos isómeros, análogos y sales, sean funcionalmente efectivos como inhibidores de ADA, y sean farmacológicamente aceptables. El término "farmacológicamente aceptable" abarca aquellas características que hacen que un fármaco sea adecuado y práctico para administrarse a seres humanos; estos compuestos deben ser suficientemente estables químicamente para tener una vida de anaquel adecuada bajo condiciones de almacenamiento razonables, y deben ser fisiológicamente aceptables cuando se introduzcan en el cuerpo mediante una vía de administración adecuada. Las sales aceptables pueden incluir sales de metal alcalino, así como sales de adición de ácidos libres ó de bases libres. Los ejemplos de los ácidos que se utilizan ampliamente para formar sales de adición de ácido farmacológicamente aceptables, incluyen ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, y ácidos orgánicos, tales como ácido maleico, ácido succínico y ácido cítrico. Las sales de metal alcalino ó las sales de metal alcalinotérreo podrían incluir, por ejemplo, sales de sodio, potasio, calcio ó magnesio. Todas estas sales se pueden preparar mediante medios convencionales. La naturaleza de la sal no es crítica, en el entendido de que no sea tóxica, y que no interfiera sustancialmente con la actividad deseada. El término "análogo" se utiliza en la presente en el sentido farmacéutico convencional. En la terminología química, un análogo se refiere a una molécula que se parece estructural-mente a una molécula referente, pero que se ha modificado de una manera dirigida y controlada, para reemplazar a cierto sustituyente de la molécula referente con un sustituyente alternativo diferente de hidrógeno. Estos análogos están cubiertos por las reivindicaciones de la presente, solamente si satisfacen los requerimientos de eficacia dados a conocer en la presente, de una manera que no destruya la función deseada de la inhibición de ADA por el compuesto en un valor Ki en la escala de aproximadamente 10-7 a aproximadamente 10~10. La administración de los compuestos de esta invención a seres humanos ó animales, puede ser cualquier técnica capaz de introducir los compuestos en la corriente sanguínea, incluyendo administración oral ó por medio de inyecciones intravenosas ó intramusculares. El compuesto activo normalmente se administra en una formulación farmacéutica, tal como en un vehículo líquido para inyección, ó en forma de cápsula, tableta ó líquido para ingestión oral. Estas formulaciones pueden comprender una mezcla de uno ó más compuestos activos mezclados con uno ó más vehículos ó diluyentes farmacéuticamente aceptables. Si se desea, también puede haber otros agentes terapéuticos (tales como análogos de nucleósidos contra el cáncer ó antivirales) presentes en una formulación inyectable ó en una cápsula, tableta, ó líquido ingerible. La invención también incorpora síntesis que se pueden utilizar para preparar estos compuestos y sus análogos que contienen (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) alcan-2-ol modificado por adenina y sustituido por arilo. La invención comprende diferentes eritro-(2S, 3R) -3-(6-amino-purin-9-il) aralcan-2-oles (ARADS), que también se pueden denominar 9-aralquiladeninas. La invención enseña reactivos sintéticos y métodos generales que se pueden utilizar para crear estas y otras ARADS, que contienen sustituyentes aromáticos, incluyendo alquilo, haluro, hidroxi, ásido, éster, éter, amina, azida u otras fracciones en el alquilo, así como la porción de arilo de la cadena. Los análogos también se pueden modificar en la estructura de adenina si se desea. Las ARADS descritas en la presente han demostrado que inhiben la desaminasa de adenosina (ADA) en niveles terapéuticamente útiles. Los valores Ki relevantes están en la escala de 10~8 a 10~9 M, que está dentro de una escala deseada de 10~7 a 10~10 M. Las ARADS que tienen potencias dentro de esta escala, pueden inhibir efectivamente la actividad de ADA sobre una base reversible sin envenenar permanentemente (fijarse irreversiblemente a) la enzima.

Breve Descripción de los Dibujos La figura es un esquema de síntesis general para ARADS.

Descripción de las Modalidades Preferidas Esta invención da a conocer una nueva serie de (2S,3R)-3-( 6-aminopurin-9-il) arilalcan-2-oles (también, denominados 9-aralquiladeninas, ARADS) , en donde el grupo alquilo está compuesto de 4 a 8 átomos de carbono, que tienen un grupo hidroxi en el carbono #2, con una quiralidad (S) , y un anillo de adenina unido a través del nitrógeno en la posición #9 con el carbono #3 con una quiralidad (R) . El carbono terminal de esta cadena de alquilo está unido a un anillo aromático (fenilo, naftilo, tienilo, furanilo, etc.), cuyo anillo puede estar sustituido con alquilo, haluro, hidroxi, ácido carboxílico, éster, éter, azida, amina, etc. , para hacer análogos útiles. Esta invención también da a conocer métodos para sintetizar estos compuestos (ARADS) . El método comprende ampliamente los siguientes pasos, como se muestran en la Figura 1: a. Hacer reaccionar un reactivo de epóxido que tenga la orientación quiral deseada, con una fracción de arilo ó aralquilo en la forma de un reactivo de Grignard, ó una sal de metal alcalino, para formar una cadena de aralquilo que tenga un grupo hidroxilo en el carbono #3. b. Hacer reaccionar el grupo hidroxi en el carbono #3 con 6-cloropurina bajo condiciones de Mitsunobu, que consisten en trifenilfosfina, azodicarboxilato de dietilo ó de diisopropilo, en un solvente adecuado, tal como benceno, tolueno, tetrahidrofurano para formar un nuevo compuesto comprendido de un anillo de 6-cloropurina unido a través de su nitrógeno en el #9 con la cadena de aralquilo en la posición 3. De una manera alternativa, este compuesto se puede obtener mediante la construcción del anillo de purina en una forma por pasos. Esto comprende conectar el alcohol con un éter de sulfonato, y hacer reaccionar este éster con azida de sodio para formar una cadena de arilalquilo sustituida en la posición tres como un grupo azido. c. La reducción de este grupo azido mediante la metodología establecida, da el compuesto de amino correspondiente. Cuando se han terminado estos tres pasos básicos, se realiza cualquier procesamiento adicional que sea necesario para terminar la síntesis del análogo hidroxilado deseado, y luego se purifica el análogo. Los pasos de procesamiento y purificación particulares utilizados para crear un análogo específico, dependerán de la estructura molecular exacta del análogo deseado. Estos pasos están dentro de la experiencia ordinaria en la técnica, y más adelante se describen diferentes ejemplos de reactivos y reacciones adecuadas que se pueden utilizar para estos propósitos.

SERIE DE DERIVADOS AROMÁTICOS DE ARAD La clase de análogos incorporados en la invención están representados en general como: Haciendo referencia a la figura, se han sintetizado y probado los siguientes compuestos de las letras: R puede asumir cualquiera de las posiciones 1, 3, 4 , 5 ó 6.

Tabla Compuesto n R K±(M) 4a 0 4-CH3 3.02 X 10"7 (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -4- (4-metilfenil) butan- 2-ol. 4b 0 4-CH2CH3 1.33 X 10~7 (2S,3R)-3-(6-aminopurin-9-il) -4- (3-etilfenil) butan— ol. 4c 0 4-CH2CH2CH3 3.02 X 10~7 (2S, 3R) -3-(6-aminopurin-9-il) -4- (2-propilf enil) - butan-2-ol. 1 H (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -5-fenilpentan-2-ol. 4d 1 3-CH3 1.02 x 10"9 (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -5- ( 3 -metilf enil ) - pentan-2-ol. 1 2-CH2CH3 4e 2 H 8.90 X 10~10 (2S, 3R) -3-(6-aminopurin-9-il) -6-fenilhexan-2-ol 4f 2 2-CH3 5.1 x ÍO"10 (2S,3R) -3-(6-aminopurin-9-il) -6- (2-metilf enil) hexan- 2-?l. 4g H 7.60 X 10 -10 (2S, 3R) -3-(6-aminopurin-9-il) -7- (2-fenilheptan-2-ol 4h 4 H 9.5 x ÍO"10 (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -8-feniloctan-2-ol En la Figura 1 se muestra un esquema sintético genérico, Procedimientos Experimentales Preparación de la serie de compuestos 2 PROCEDIMIENTO GENERAL 1: (ABERTURA DEL EPOXIDO CON HALUROS AROM TICOS POR MEDIO DE SALES DE LITIO) . A una solución agitada de haluro aromático (2 equivalentes) en tetrahidrofurano seco (THF) enfriada a -78 °C (baño de acetona/hielo seco) , se le agregó lentamente litio butílico normal (2 equivalentes). Esta mezcla se agitó a -78°C durante 1/2 hora, en cuyo tiempo se agregó una solución del epóxido (1 equivalente) en tetrahidrofurano seco, seguida por la adición lenta de eterato de trifluoruro de boro (3 equivalentes). La mezcla resultante se agitó a -78 °C durante 3 horas, luego se dejó calentar a la temperatura ambiente, y se agitó durante la noche. Luego la reacción se apagó con 2x2 mililitros de cloruro de amonio acuoso saturado, se concentró bajo presión reducida, y se diluyó con 200 mililitros de éter dietílico. La capa de éter se lavó en secuencia con 2x20 mililitros de una solución de salmuera, y 1x20 mililitros de agua destilada. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se evaporó bajo presión reducida, para dar el producto crudo. El producto crudo se colocó sobre una columna de sílice, y se eluyó con hexano: acetato de etilo (20 —>10:1) para dar el producto puro deseado de la resonancia magnética nuclear (RMN) .

PROCEDIMIENTO GENERAL 2: (ABERTURA DEL EPOXIDO CON HALUROS ALIFATICOS UTILIZANDO LA REACCIÓN DE GRIGNARD) . A una mezcla mecánicamente agitada de metal de magnesio (2 equivalentes) , y un cristal de yodo en una cantidad mínima de éter dietílico anhidro, se le agregó por goteo una solución del haluro alifático (2 equivalentes) en éter dietílico anhidro. Cuando la reacción se hizo vigorosa, se enfrió son un baño de hielo mientras que se agregaba lentamente el haluro restante. Cuando reaccionó todo el magnesio, la solución se enfrió a -78 °C (baño de acetona/hielo seso) , y se agitó mecánicamente durante 15 minutos. Se agregó una solución de cloruro de litio (0.2 equivalentes) y cloruro de cobre II (0.1 equivalentes) en unos cuantos mililitros de tetrahidrofurano seco, seguido por la adición inmediata del epóxido (1 equivalente) en éter anhidro. La mezsla de reassión se agitó a -78°C durante 5 horas, y luego se dejó salentarse lentamente hasta la temperatura ambiente, y se agitó durante la noche. Entonces la reacción se apagó con 2x2 mililitros de cloruro de amonio acuoso saturado, se concentró bajo presión reducida, y se diluyó con 200 mililitros de éter dietílico. La capa de éter se lavó en secuencia con 2x20 mililitros de una solución de salmuera, y 1x20 mililitros de agua destilada. La fase orgánisa se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se evaporó bajo presión reducida para dar el produsto crudo. El producto crudo se solosó sobre una solumna de sílise, y se eluyó con hexano: asetato de etilo (20—>10:1) para dar el producto puro deseado de la resonancia magnética nuclear. (2S,3S) -2-benciloxi) -4- (4-me ilfenil) utan-3-ol (2a) Se preparó en un rendimiento del 82 por ciento (procedimiento general 2). [a]D+34.4° (c=1.155, CHC13) 1H RMN (CDC13) d 1,2/dm J=6 Hz, 3H) ; 2.25 (s, 3H) ; 2.56-2.85 (m, 3H) ; 3.13-3.78 (m, 2H) ; 4.16-4.73 (qAB, J=12 Hz , 2H) ; 7.03 (s, 4H) ; 7.28 (s, 5H) . Análisis elemental calculado para C18H2202: C, 79.96; H, 8.202. Encontrado: C, 79.87; H, 8.12. (23,38) -2-benciloxi) -4-(3-etenilfenil)butan-3-ol (2b) Se hizo a partir de 3-bromoestireno, empleando el procedimiento general 1 en un rendimiento del 81 por ciento (un líquido gomoso transparente) . Datos de H RMN: d 1.3 (d, J=6 Hz , 3H) , 2.6-3.0 ( , 2H, 1H D20 intercambiable), 3.3-3.9 (m, 2H) , 4.55 (AB suarteto central, ?AB=24 Hz , JAB=12 Hz, 2H) , 5.25 (d, J=10 Hz , 1H) , 5.75 (d, J=18 Hz, 1H) , 6.77 (dd, J=18 Hz , 10 Hz , 1H) , 7.0-7.6 (m, 9H) . Análisis elemental salsulado para C?gH2202 es C, 80.82; H, 7.85. Encontrado: C, 80.60; H, 7.61. (2S, 3S) -2- (benciloxi) -4- (2-prop-2-enil£enil)butan-3-ol (2c) Se hizo a partir de 3- (2-bromofenil) propil-2-eno, empleando el prosedimiento general 1, en un rendimiento del 67 por ciento (un líquido gomoso transparente) . Datos de RMN: d 1.2 (d, J=6 Hz, 3H) , 1.5-1.9 (m, 3H, 1H D20 intersambiable) , 2.7-2.9 (m, 2H) , 3.25-3.8 (m, 2H) , 4.55 (AB suarteto central, ?AB=21 Hz , JAB=12 Hz , 2H) , 5.5-7.3 ( , 11H) . Análisis elemental calsulado para C2oH 4?2 es C, 81.04; H, 8.16. Ensontrado: C, 81.10; H, 8.34. (2S, 3S) -2- (benciloxi) -5- (3-ptetilfenil)pentan-3-ol (2d) Se obtuvo puro (procedimiento general 1) en un rendimiento del 60 por ciento: [a]D +16.9° (c=1.285, CHC13) ; 1H RMN (CDC13) d 1.2 (d, J=6Hz , 3H) ; 1.55-1.76 (m, 2H) ; 2.31 (s, 3H) ; 2.43-3.03 (m, 3H) ; 3.3-3.55 (m, 2H) ; 4.27-4.77 (JAB=12 Hz , 2H) ; 6.86-7.45 (m, 9H) . Análisis elemental calculado para C19H2402 es C, 80.24; H, 8.505. Encontrado: C, 80.37; H, 8.36. (2S, 3S) -2- (benciloxi) -6-fenilhexan-3-ol (2e) Se hizo a partir de 2-fenil-l-bromoetano, empleando el procedimiento general 2, en un rendimiento del 82 por ciento (un líquido gomoso transparente) . Datos de RMN : d 1.15 (d, J=6 Hz , 3H) , 1.3-1.9 (m, 4H) , 2.45-2.7 (m, 2H, 1H D20 intercambiable), 3.25-3.5 (m, 2H) , 4.45 (AB, cuarteto central, ?AB=24 Hz , JAB=12 Hz , 2H) , 7.0-7.4 (m 10H) . (2S, 3S) -2- (benciloxi) -6- (2-metilfenil) hexan-3-ol (2f) Se hizo a partir de 2- (2-metilfenil-1-cloroetano, empleando el procedimiento general 2, en un rendimiento del 58 por siento (un líquido gomoso transparente) . Análisis elemental salsulado para C 0H26O2 es C, 80.50; H, 8.78. Encontrado: C, 80.70; H, 8.82. (2S, 3S) -2- (benciloxi) -7-fenilheptan-3-ol (2g) Se hizo a partir de 3-fenil-1-bromopropano, empleando el procedimiento general 2, en un rendimiento del 84 por ciento (un líquido gomoso transparente) . Datos de RMN: d 1.1 (d, J=6 Hz , 3H) , 1.2-1.65 (m, 6H) , 2.35-2.6 (m, 2H) , 1H D20 intercambiable), 3.05-3.4 (m, 4H) , 4.55 (AB cuarteto central, ?AB=24 Hz , JAB=12 Hz , 2H) , 6.95-7.3 (m, 10H) . (2S, 3S) -2- (bensiloxi) -8-feniloctan-3-ol (2h) Se hizo a partir de 4-fenil-l-clorobutano, empleando el procedimiento general 2, en un rendimiento del 80 por ciento (una goma transparente) . Análisis elemental salsulado para C21H2802 es C, 80.73; H, 9.03. Ensontrado: C, 80.61; H, 9.15, Preparación de la serie de compuestos 3; PROCEDIMIENTO GENERAL: (INVERSIÓN DE MITSUNOBU SOBRE EL ALCOHOL UTILIZANDO LA 6-CLOROPURINA, SEGUIDA POR AMONOLISIS DEL PRODUCTO CRUDO) . A una mezsla del alsohol (1 equivalente) , trifenilfosfina (2 equivalentes) , y 6-sloropurina (2 equivalentes) , en tetrahidrofurano seso, se le agregó lentamente DIAD (2 equivalentes) . La mezsla resultante se agitó a reflujo, bajo nitrógeno, durante la noshe. La mezsla se enfrió entonses y se sonsentró bajo presión redusida. El residuo se aplisó a una solumna de sílice corta, y se eluyó con éter dietílico, hasta que la sromatografía de sapa delgada no mostró más produsto (aproximadamente 500 mililitros) . El éter eluido se sombinó y se sonsentró hasta aproximadamente la mitad del volumen bajo presión reducida, luego se lavó con 2x20 mililitros de salmuera, y 1x20 mililitros de agua destilada. La sapa orgánisa se secó entonces sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se consentró bajo presión redusida para dar el produsto srudo. Este material crudo se puso entonces sobre una solumna de sí.lise larga, y se eluyó lentamente son hexano: asetato de etilo (de 10:1 a 1:1). Ya que la dihidro-DIAD y el produsto fueron incapaces de separarse sompletamente, la mezsla se sometió a amonólisis antes de una purifisasión completa. Se agregó amoniaco líquido a la mezcla cruda, y se colosó en una bomba a 60 °C durante la noshe. Después de esto, la reasción se diluyó con cloruro de metileno (50 mililitros) , y se lavó con 3x5 mililitros de agua destilada. La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo se colosó sobre una columna de sílice, y se eluyó con hexano: acetato de etilo (5:1 a 2:3) para dar el produsto deseado. (2S,3R)-3-(6-aminopurin-9-il)-2-(benciloxi)-4-(4-metilfenil) utano (3a). Se preparó en un rendimiento del 14.5 por ciento.

(P.F. 144-146°C) . [a]D +106.4° (c=1.91, CH2C12) ; K RMN (CDC13) d 1.2 (d, J=6 Hz, 3H) ; 2.16 (s, 3H) ; 3.2-3.43 ( , 2H) ; 3.88-4.76 (m, 4H) ; 5.81 (bs, 2H) ; 6.83 (s, 4H) ; 7.26 (s, 5H) ; 7.68 (s, 1H) ; 8.23 (s, 1H) . Análisis elemental salsulado para C23H25N50: C, 71.29; H, 6.503; N, 18.07. Encontrado: C, 71.14; H, 6.70; N, 17.89. (2S,3R)-3-(6-aminopurin-9-il)-2-(benciloxi)-4-(3-etenilfenil) utano (3b) . Se hizo utilizando el procedimiento general 3 en un rendimiento global del 11.4 por siento (un sólido blanso, p.f. 116-118°C) . Datos de 1H RMN: d 1.35 (d, J=6 Hz , 3H) , 3.3-3.7 (m, 2H) 4.0-4.2 (m, 1H) , 4.55 (AB cuarteto central, ?AB=24 Hz , JAB=12 Hz, 2H) , 4.6-4.9 (m, 1H) , 5.1 (d, J=10 Hz , 1H) , 5.5 (d, J=18 Hz, 1H) 6.5 (dd, J=18 Hz , 10 Hz , 1H) , 6.7-7.2 (m, 4H; 2H D20 intercambiable), 7.3-7.5 (m, 5H) , 7.8 (s, 1H) , 8.3 (s, 1H) . Análisis elemental salsulado para C24H25N50 es C , 72.16; H, 6.31; N, 17.53. Ensontrado : C, 71.98; H, 6.67; N, 17.74. (2S,3R)-3-( 6-aminopurin-9-il) -2- (benciloxi) -4- (2 -prop-2-enilfenil) butano (3c) . Se hizo empleando el prosedimiento general 3 en un rendimiento global del 9 por ciento. Datos de ??. RMN: d 1.2 (d, J=6 Hz , 3H) , 1.5-1.8 (m, 3H) 2.3-2.6 (m, 3H) , 2.8-3.5 (m, 1H) , 4.55 (AB cuarteto central, ?AB=18 Hz , JAB=12 Hz, 2H) , 5.35-6.4 (m, 2H, 2H, D20 intersambiable) , 6.8-7.4 (m, 9H) , 8.0 (s, 1H) , 8.3 (s, 1H) . (2Sr 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) - 2 - (benciloxi) -5- ( 3 -metilfenil) pentano (3d) . Se preparó en un rendimiento del 30 por ciento (P.F. 155-157°C) . [a]D +52.5° (s=0.415, CHC13) ; 1H RMN (CDC13) di.2 (d, J=6 Hz, 3H) ; 2.25 (s, 3H) ; 2.3-2.48 (m, 4H) ; 3.7-4.03 (m, 1H) ; 4.18-4.68 (m, 3H) , 5.93 (bs, 2H) ; 6.66-7.4 (m, 9H) ; 7.91 (s, 1H) ; 8.33 (s, 1H) . Análisis elemental salculado para C24H27N50: C, 71.79; H, 6.778; N, 17.44. Ensontrado: C, 71.95; H, 6.65; N, 17.26. (2S,3R)-3-( 6-aminopurin-9-il) -2- (benciloxi) -6-fenil exano (3e) . Se hizo empleando el prosedimiento general 3, en un rendimiento global del 13 por ciento (un sólido blanco, p.f. 139-140°C) . Datos de RMN: d 1.2 (d, J=6 Hz, 3H) , 1.3-1.7 (m, 2H) , 1.95-2.3 (m, 2H) , 2.6 (t, J=8 Hz , 2H) , 3.7-3.95 (m, 1H) , 4.4 (AB cuarteto central, ?AB=24 Hz , JAB=12 Hz, 2H) , 4.45-4.7 (m, 1H) , 6.35 (s amplio, 2 H D20 intercambiable), 6.95-7.35 ( , 10H) , 7.9 (?, 1H) , 8.3 (s, 1H) . Análisis elemental calculado para C2 H27N50 es C, 71.80; H, 6.78; N, 17.44. Encontrado: C, 71.70; H, 6.89; N, 17.32 por ciento. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -2- (benciloxi) -6- ( 2 - etilfenil) hexano (3f) . Se hizo empleando el procedimiento general 3, en un rendimiento global del 18 por ciento. (Dos pasos) (un sólido blanco, p.f. 141-142°C. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -2- (benciloxi) -7-fenil eptano (3g) .

Se hizo empleando el procedimiento general 3, en rendimiento global del 8.3 por ciento .(Un sólido blanco, p. 102-103°C) . Datos de RMN: d 0.9-1.3 (m, 2H) , 1.1 (d, J=6 H 3H) , 1.35-1.7 ( , 2H) , 1.9-2.25 (m, 2H) , 2.36-2.6 (m, 2H) ; 3. 3.95 (m, 1H) , 4.55 (AB cuarteto central, ?AB=24 Hz, JAB=12 H 2H) , 4.4-4.7 (m, 1H) ; 6.55 (s amplio, 2H D20 intercambiable) 6.9-7.35 (m, 10H) , 7.9 (s, 1H) , 8.3 (s, 1H) . (2S,3R) -3- (6~aminopurin-9-il) -2- (benciloxi) -8-fenilostano (2h) Se hizo empleando el procedimiento general 3, en rendimiento global del 28 por ciento. (Un polvo blanco) .

Preparación de la serie de compuestos 4 PROCEDIMIENTO GENERAL 4: (REMOCIÓN DEL GRUPO PROTECTOR D BENCILO UTILIZANDO HIDROXIDO DE PALADIO SOBRE CARBÓN) . Una mezcla del derivado de adenina (1 equivalente) hidróxido de paladio sobre carbón (de un peso igual al materia de partida) en etanol (20 mililitros) , y cislohexeno (1 mililitros) , se agitó a reflujo durante la noche, y luego s dejó enfriar a la temperatura ambiente. Luego la mezsla s filtró, y la solusión se concentró bajo presión reducida. E residuo se colocó sobre una columna de sílice, y se eluyó co hexano: acetato de etilo (1:1), 50 mililitros, acetato de etilo 50 mililitros, y asetato de etilo:metanol (10:1), para dar el produsto deseado. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -4- (4-metilfenil) utan-2-ol (4a) Se preparó en un rendimiento del 65 por siento. P.F. 156-158°C. [a]D +247.7° (s=0.17, CHC13) ; RMN (CDC13) d 1.33 (d, J=6 Hz, 3H) ; 2.16 (s, 3H) ; 3.16 (d, J=7.5 Hz , 2H) ; 4.05-4.5 (m, 3H) ; 5.8 (bs, 2H) ; 6.4-6.9 (dd, JAB=9 Hz , 4H) ; 6.98 (s, 1H) ; 8.16 (s, 1H) . Análisis elemental calsulado para C16H?gN50.1.5H20: C, 59.24; H, 6.84; N, 21.59. Ensontrado: C, 59.73; H, 6.77; N, 21.25. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -4- (3-e ilfenil)butan-2-ol (4b) Se hizo a partir de MACI-118, empleando el prosedimiento general 4, en un rendimiento del 90 por siento (un sólido blanso, p.f. 157-158°C). Datos de 1H RMN: d 1.05 (t, J=8 Hz , 3H) , 1.35 (d, J=6 Hz, 3H) , 2.45 (q, J=8 Hz , 2H) , 3.2 (d, J=6 Hz , 2H) , 4.2-4.6 (m, 2H) , 4.95 (s amplio, 1H D20 intersambiable) 6.5-7.2 (m, 4H, 2 D20 intercambiable), 7.5 (s, 1H) , 8.2 (s, 1H) . Análisis elemental calculado para C17H 1N50 es C, 65.57; H, 6.80; N, 22.49. Encontrado: C, 65.78; H, 7.00; N, (2S,3R) -3-(6-aminopurin-9-il) -4- (2-propilfenil) utan-2-ol (4c) Se hizo empleando el procedimiento general 4, en un rendimiento del 91 por ciento (un sólido blanco, p.f. 181-182°C) . Datos de XH RMN: 5 0.8 (t, J=9 Hz , 3H) , 1.15-1.6 (m, 5H) , 2.3 (t, J=9 Hz, 2H) , 3.1-3.4 (m, 2H) , 3.75 (s amplio, 2H D20 intercambiable), 7.25 (s, 1H) , 8.1 (s, 1H) . Análisis elemental calculado para C18H23N50 es C, 66.44; H, 7.12; N, 21.52. Encontrado: C, 66.03; H, 7.40; N, 20.36. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -5- (3-metilfenil) entan-2-ol (4d) Se preparó en un rendimiento del 62 por ciento. P.F. 146-148°C. [a]D +55.9° (s=0.315, CHC13) ; ?. RMN (CDC13) di.21 (d, J=6 Hz, 3H) ; 2.28 (s, 3H) ; 2.33-2.68 (m, 4H) ; 4.03-4.46 (m, 2H) ; 4.95 (bs, 1H) ; 6.5 (bs, 2H) ; 6.75-7.09 (m, 4H) ; 7.76 (s, 1H) ; 8.26 (s, 1H) . Análisis elemental salsulado para C17H21N50: C, 65.57; H, 6.797; N, 22.49. Encontrado: C, 65.38; H, 6.92; N, 22.62. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -6-fenilhexan-2-ol (4e) Se hizo empleando el procedimiento general 4, en un rendimiento del 98 por ciento (un sólido blanco, p.f. 153-154°C) . Datos de XH RMN: 5 1.15 (d, J=6 Hz , 3H) , 1.2-1.6 (m, 2H) , 1.7-2.2 (m, 2H) , 2.4-2.7 (m, 2H) , 3.95-4.5 (m, 2H, 1H D20 intersambiable) , 6.6-7.25 ( 5H, 2H D20 intersambiable) , 7.8 (s, 1H) ; 8.2 (s, 1H) . Análisis elemental salsulado para C17H21N50 es C, 65.57; H, 6.8; N, 22.49. Ensontrado: C, 65.65; H, 6.89; N, 22.60 por siento. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -6- (2-metilfenil) hexan-2-ol (4f) Se hizo empleando el prosedimiento general 4, en un rendimiento del 71 por siento (un sólido blanso, p.f. 153-155°C. (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -7-fenilheptan-2-ol (4g) Se hizo empleando el prosedimiento general 4, en un rendimiento del 92 por siento (un sólido gomoso) . Datos de XH RMN: d 0.9-1.7 (m, 7H) , 1.7-2.1 (m, 2H) , 2.1-2.5 (m, 2H) , 3.9-4.4 (m, 2H) , 4.8 (amplio s, 1H D20 intersambiable), 6.6-7.2 (m, 5H, 2H D20 intersambiable), 7.75 (s, 1H) , 8.1 (s, 1H) . (2S, 3R) -3- (6-aminopurin-9-il) -8-feniloctan-2-ol (4h) Se hizo empleando el procedimiento general 4, en un rendimiento del 89 por siento (un sólido gomoso) .

Evaluación Biológica Los sompuestos se probaron somo inhibidores de la desaminasa de adenosina de musosa intestinal de beserro (ADA) . Se midió direstamente la desaminasión de adenosina en inosina a 25°C, a partir de la disminución en la absorbencia a 265 nanómetros (Kalckar, H.M., Differential Spectrophotometry of Purine Compounds by Means of Spesifis Enzymes, III Studies of the Enzymes of Purine Metabolism, J. Biol . Chem . , 1947 , 167, 461-475 y Agar al, R.P.; Parks, R.E., Jr. , Adenosine Deaminase from Human Erythrocytes , Methods Enzymol , 1978, 51, 502-507), la ADA (Tipo VI) , y la adenosina, se adquirieron en Sigma Chemisal Co. , St. Louis, MO. La enzima se diluyó en un regulador estabilizante de fosfato de potasio 50 mM, pH de 7.2. Se preinsubaron sonsentraciones variables de análogos durante 3 minutos con 20 microlitros de una solusión de ADA en un volumen total de 2 mililitros de regulador de fosfato. Esto permitió la reacción de asociación entre la enzima y un inhibidor de enlace semi-apretado para alcanzar un estado uniforme, Agarwal, R.P.; Spector, T. ; Parks, E.R. , Jr. , Tight-Binding Inhibitors-IV, Inhibition of Adenosine Deaminase b Various Inhibitors, Bioshem. Pharmacol., 1977, 26, 359-367. Las reacciones se iniciaron mediante la adisión de 0.1 mililitros de sustrato (sonsentrasiones finales: 0.015 unidades/mililitro de ADA, adenosina 50 µM, fosfato 50 mM) . Los valores K s determinaron a partir de análisis de regresión no lineal de las curvas de velocidad contra inhibición de concentrasión (1) utilizando el programa de somputadora (Delta Point-Delta Graph Pro 3) para la ecuación U¿ - U~0 1/ (1 + S/Km) + 1], en donde irQ es la velocidad de la reacsión en ausencia del inhibidor. La Km para adenosina, determinada en consentrasiones de 10-72 µM bajo sondisiones idéntisas, fue de 25 µM. La dessripción anterior se ha limitado a una modalidad espesífisa de la invención. Sin embargo, se podrá ver que se pueden hacer variaciones y modificaciones a la invención, con la obtención de algunas ó todas las ventajas de la invensión. Por sonsiguiente, es el objeto de las reivindisasiones adjuntas subrir todas las variasiones y modificaciones que entren en el verdadero espíritu y alcance de la invención.

Claims (4)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que comprende la estructura de: en donde n = 0-4, y R se selecsiona a partir del grupo que consiste en 4-CH3; 3-CH2-CH3; 2-CH2CH2CH3; H; 3-CH3; 2-CH2CH3; H 2-CH3.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde n = 0 R = 4-CH

3. 3. La composición de la reivindicasión 1, en donde n = 0 R = 3-CH2CH3.

4. La somposisión de la reivindicación 1, en donde de la reivindicasión 1, en donde n = 1 R = H. 6. La somposición de la reivindicación 1, en donde n = 1 R = 3-CH3. 7. La somposisión de la reivindicación 1, en donde n = 1 R = 2-CH2CH3. 8. La composición de la reivindicasión 1, en donde n = 2 R = H. 9. La somposisión de la reivindisasión 1, en donde n = 2 R = 2-CH3. 10. La composición de la reivindicación 1, en donde n = 3 R = H. 11. La composición de la reivindicasión 1, en donde n = 4 R = H. 12. Una somposición que somprende un compuesto de la reivindicación 1, ó: una sal farmacológicamente aceptable del mismo; un isómero farmacológisamente aseptable del mismo que inhibe la astividad de desaminasa de adenosina son un valor Ki entre aproximadamente 10~7 y aproximadamente 10"10; ó un análogo farmasológisamente aceptable del mismo, que inhibe la actividad de desaminasa de adenosina con un valor Ki de entre aproximadamente 10~7 y aproximadamente 10" una combinasión de los mismos,