TRATAMIENTO DE LINFOMA DE CÉLULA T USANDO 10-PROPARGIL-10-DEAZAAMINOPTERINA
Esta solicitud reclama la prioridad de la solicitud provisional norteamericana no. 60/521,593, presentada el 30 de mayo de 2004, que se incorpora como referencia. Antecedentes de la Invención Esta solicitud se refiere al uso de una combinación de 10-propargil-10-deazaaminopterina y en el tratamiento de linfoma de célula T. La 10-propargil-10-deazaaminopterina ("PDX" o "10-propargil-10dAM") es un miembro de una clase grande de compuestos que han sido probados y en algunos casos se ha encontrado que son útiles en el tratamiento de los tumores. Este compuesto que tiene la estructura mostrada en la figura 1, es descrito por DeGraw et al. "Synthesis and Antitumor Activity of 10-propargyl-10-deazaaminopterin0 J. Medical Chem. 36: 2228-2231 (1993) y muestran que actúa como inhibidor del crecimiento en el linaje celular de murina L1210 y en menor grado de la enzima reductasa de dihidrofolato ("DHFR"). Además, algunos resultados fueron presentados sobre las propiedades antitumorales de los compuestos usando el modelo tumoral mamario de murina E0771. Estos datos fueron equivocados debido al pequeño número de ratones usados en las pruebas (3 por dosis), la ausencia de cualquier información sobre la desviación estándar que cuantifica la confiabilidad de los datos y el hecho de que la dosis más alta usada de hecho fue tóxica para los ratones. Sin embargo, asumiendo que estos datos tuvieran un valor predictivo de la eficacia de un fármaco para tratar tumores humanos, cuando mucho predecirá un fármaco que con niveles de tolerancia equivalentes tienen propiedades comparables o tal vez ligeramente mejores que el metotrexato. La publicación PCT no. WO98/02163 describe la sorprendente observación de que las composiciones PDX más altamente purificados cuando se probaron en un modelo de xenoinjerto con respecto a su eficacia contra los tumores humanos se ha mostrado que son muy superiores al metotrexato ("MTX") y aún superiores al edatrexato ("ETX") un candidato clínico más reciente. Además 10-propargil-10-dAM mostraron una sorprendente capacidad de curar tumores de tal forma que no hay evidencia de crecimiento tumoral varias semanas después del cese de la terapia. Así la composición altamente purificada que contiene 10-propargil-10-dAM puede usarse de acuerdo con la invención para tratar tumores, incluyendo tanto tumores sólidos y leucemias. La composición se ilustra para usarse en un tratamiento de tumores mamarios humanos y cáncer pulmonar en humanos. Los estudios subsecuentes sobre el PDX han mostrado que es útil por si solo y en combinación con otros agentes terapéuticos. Por ejemplo Sirotnak et al., Clinical Cáncer Research Vol. 6, 3705-3712 (2000) reporta la co-administración de PDX y probenecid, un inhibidor de una ATPasa de membrana plasmática similar a cMOAT/MRP, aumenta ampliamente la eficacia del PDX contra los tumores sólidos humanos in vivo. PDX y combinaciones de PDX con agentes quimioterapéuticos a base de platino han mostrado que son efectivos contra el mesotelioma (Khokar, et al., Clin. Cáncer Res. 7:3199-3205 (2001). El término "linfomas" se refiere a estados patológicos incluyendo linfoma no de Hodgkins (NHL); linfoma difuso de células B (DLBCL); linfomas foliculares (FL); mal de Hodgkin; linfoma de Burkitt, linfoma cutánea de célula T; linfoma del sistema nervioso central primario y metástasis linfomatosas. En la mayoría de los casos, el linfoma se caracteriza por la presencia de células cancerosas B. Sin embargo en los linfomas de células T, el estado patológico se caracteriza por linfocitos T cancerosos. Breve Descripción de la Invención De acuerdo con la presente invención, el linfoma de célula T no de Hodgkin se trata usando PDX. Así, de acuerdo con un aspecto de la invención, se provee un método para el tratamiento de linfoma de célula T no de Hodgkin que consiste en administrar a un paciente que sufre de linfoma una cantidad terapéuticamente efectiva de PDX. Los resultados clínicos preliminares en humanos han mostrado que este tratamiento es particularmente efectivo, aún con respecto a los linfomas que fueron refractarios a otras modalidades terapéuticas. Breve Descripción de las Figuras La figura 1 muestra la estructura de PDX y metotrexato; La figura 2 muestra una HPLC de una preparación de 10- propargil-10-dAM impura preparada de acuerdo con la técnica anterior; La figura 3 muestra una HPLC de una preparación de PDX altamente purificada de acuerdo con la invención; La figura 4 muestra un esquema sintético útil para preparar el compuesto de acuerdo con la invención. Descripción Detallada de la Invención Esta solicitud se refiere al uso de 10-propargil-10-deazaaminopterina en el tratamiento de linfoma de célula T. Los linfomas de célula T son linfomas en los cuales las células
T del paciente se ha determinado que son cancerosas. Los linfomas de células T incluyen una variedad de condiciones incluyendo sin limitaciones: (a) linfomas linfoblásticos en los cuales empiezan a ser malignos los progenitores linfoides primitivos del timo; (b) los neoplasmas de célula T maduras o periféricas, incluyendo leucemia prolinfocíticas de célula T, leucemia linfocíticas granular de célula T, leucemia de célula NK agresiva, linfoma de célula T cutánea (micosis fungoides/síndrome de Sezary), linfoma de células grandes anaplástica, linfoma de tipo célula T, linfoma de célula T tipo enteropatía, leucemia linfoma de célula T de adultos incluyendo aquellos asociados con HTLV-1, y linfoma de célula T angioinmunoblástico, y linfoma de célula T paniculítica subcutánea; y (c) linfomas de célula T periféricas que inicialmente incluyen una para corteza de nodo linfático y nunca crecen con un patrón verdaderamente folicular. En una modalidad de la invención la composición contiene PDX "altamente purificado". Como se usa en la descripción y en las reivindicaciones, composiciones que son "altamente preferida" contienen PDX substancialmente libres de otros derivados de ácido fólico, particularmente 10-deazaaminopterina, que pueden interferir con la actividad antitumoral del PDX. Una composición dentro del alcance de la invención puede incluir portadores o excipientes para formular el PDX en una forma unitaria de dosificación adecuada para el uso terapéutico así como agentes terapéuticos adicionales que no sean folatos. PDX puede sinterizarse usando el método descrito en el documento de DeGraw, anterior o en el ejemplo 7 de la patente norteamericana no. 5,354,751, que se incorpora aquí como referencia. La evaluación por HPLC del producto preparado por este método muestra la presencia de una cantidad sustancial (~ 46%) de una impureza A (figura 2) que tienen un tiempo de retención consistente con la 10-deazaaminopterina. Así si este método sintético se emplea purificación posterior si es necesario más allá de lo descrito en el documento de DeGraw. Esa purificación puede realizarse por medio de HPLC adicional o cristalización para retirar la 10-deazaaminopterina y otros derivados de ácido fólico que pueden estar presente. La figura 3 muestra un HPLC de una preparación altamente purificada consistente esencialmente de 10-propargil-10-dAM de acuerdo con la invención preparada usando el método descrito en el ejemplo 1. En este caso, la cantidad de PDX (determinado por el área del pico de HPLC) se aproxima al 98%, y el pico correspondiente a 10-deazaaminopterina no se detecta por medio del software de procesamiento aunque existe un rizo de línea base menor en esta área. PDX ha sido usado en un estudio de fase l/ll en el cual participaron pacientes con linfoma agresivo, incluyendo tres pacientes con linfoma de célula T resistente a los fármacos. Se obtuvieron los siguientes resúmenes del caso. Cada uno de esos pacientes también se trató con ácido fólico (1 mg/m2 diariamente empezando una semana antes del tratamiento con PDX) y suplemento con B12 (1mg/m2 al mes). Paciente 1 Diagnostico: Linfoma de célula T periférica, etapa IV Datos demográficos: Hombre de 48 años de edad Tratamiento previo: CHOP x 4 ciclos (julio-noviembre 2002) - refractario, ICE x 2 ciclos (diciembre 2002) - refractario, Campath (marzo-junio 2003) - respuesta mixta Etapa antes del pre-tratamiento: Enfermedad extensa - enfermedad cutánea Tratamiento en estudio: PDX 135 mg/m2 x 1 dosis Toxicidad: Estomatitis grado 3; neutropenia grado 3, sepsia Respuesta: Remisión esencialmente completa por medio de exploración PET Comentario: Este paciente finalmente murió después de desarrollar bacteremia y sepsia de las lesiones abiertas en la piel con bacterias Gram positivas. Paciente 2 Diagnostico: Linfoma linfoblástica, célula T precursora, etapa IV Datos demográficos: Mujer de 65 años de edad Tratamiento previo: Quimioterapia de combinación con complejo L20 desde mayo del 2002, administrada durante dos años. Recibió MTX desde mayo del 2002 a febrero del 2004. Recaída en diciembre de 2004. Etapa antes del pre-tratamiento: Recaída extensamente extendida
Tratamiento en estudio: PDX 30 mg/m2 x 3 dosis cada 4 semanas. Hasta la fecha se han completado 3 ciclos Toxicidad: Ninguna Respuesta: Remisión completa por medio de exploraciones PET y CT Comentario: Paciente con enfermedad esencialmente resistente al metotrexato con una enfermedad basada extensamente en el seno el la cual empezó a resolverse después de una dosis de PDX. Paciente 3 Diagnostico: Linfoma de célula T asociada a HTLV Datos demográficos: Hombre de 38 años de edad Tratamiento previo: quimioterapia de combinación por infusión de EPOCH, octubre 2003 a febrero de 2004
Etapa antes del pre-tratamiento: Enfermedad en la axila derecha Tratamiento en estudio: PDX 135 mg/m2 a la semana x 3 dosis 4 semanas x 2 ciclos Toxicidad: Ninguna Respuesta: Remisión completa Comentario: Desaparición completa de la enfermedad clínicamente evidente al final del primer ciclo, muy bien tolerado, sin toxicidad. Paciente 4 Diagnostico: Linfoma de célula T paniculítica Datos demográficos: Hombre de 25 años de edad Tratamiento previo: Ontak (refractario), 9/02-11/02, Targretina y IFN a 1/03-10/03 (remisión parcial duradera); CHOP 4/04-6/04; ICE 6/04, CyPen 7/04-8/04, Targretin/MTX 9/04 a 2/05 Tratamiento en estudio: PDX 30 mg/m2 a la semana x 4 Respuesta: Remisión completa clínica por medio de PET
Toxicidad: Ninguna
Comentario: curación de las lesiones subcutáneas, demasiado numerosas para ser contadas, lesión granulante ulcerativa grande A la fecha solo 4 pacientes con linfoma de célula T han sido tratados con PDX, y todos cumplieron con los criterios de remisión total, aun en base a técnicas de formación de imagen PET sensibles. De manera interesante el paciente tratado con 135 mg/m2 recibió solo una dosis única del fármaco con una dramática respuesta a la terapia, mientras que los otros solo recibieron dosis modestas pequeñas con un esquema semanal. Para usarse en la presente invención, PDX es formulado ventajosamente como parte de una preparación farmacéutica. La formación de dosificación específica dependerá del método de administración pero puede incluir tabletas, cápsulas, líquidos orales, y soluciones para la administración intravenosa, intramuscular o intraperitoneal. Un esquema de dosificación adecuado incluye la administración de 150 mg/m2 cada dos semanas. Obviamente niveles más bajos pueden ser indicados dependiendo de la tolerancia de un paciente individual, o si se adopta una administración más frecuente. Por ejemplo son apropiados niveles del orden de 40 a 120 mg/m2 de área superficie/día. Las dosis de 30 mg/m2 semanalmente durante 6 semanas seguido por una semana de descanso, o aumentar gradualmente las dosis de PDX en un esquema semanal durante 6 semanas también es adecuado. Niveles mayores podrían ser utilizados si se usan administraciones menos frecuentes. Así, en un sentido general, las dosis de 30 a 275 mg/m2 en dosificaciones bisemanales usando protocolos similares a aquellos descritos en la patente norteamericana no. 6,323,205 que se incorpora por referencia, pertenece a la experiencia en la técnica. PDX puede usarse en combinación con otros compuestos citotóxicos y antitumorales, incluyendo alcaloides vinca tales como vinblastina, navelbina y vindesina; probencida, análogos nucléotidos tales como gemcitabina, 5-fluorouracilo, y citarabina; agentes alquilantes tales como ciclofosfamida o ifosfamida; cisplatino o carboplatino; leucovorina; taxanos tales como paclitaxel o docetaxel; anticuerpos monoclonales anti-CD20, con o sin radioisótopos, y antibióticos tales como doxorubicina y mitomictomicina. También pueden usarse combinaciones de PDX con varios de otros agentes antitumorales o con inhibidores del factor de crecimiento y agentes anti-angiogénicos. PDX y otros agentes pueden administrarse concurrentemente o utilizarse en combinación como parte de un régimen de tratamiento común en el cual PDX y otros agentes se administran en diferentes momentos. Por ejemplo el otro agente puede administrarse antes, inmediatamente después o después de un periodo de tiempo (por ejemplo 24 horas) en relación a la administración PDX. Así para los propósitos de esta solicitud, el término administrar se refiere generalmente a la administración concurrente o secuencial de los fármacos y en cualquier ordenen un régimen de tratamiento paralelo con o sin una separación en tiempo entre los fármacos a menos que se indique otra cosa. PDX se utiliza de forma adecuada en combinación con acido fólico y un suplemento de vitamina B12 para reducir los efectos laterales del tratamiento. Por ejemplo los pacientes pueden tratarse con ácido fólico (1 mg/m2 al día empezando 1 semana antes del tratamiento con PDX) y B12 (1mg/m2 al mes). EJEMPLO 1 La figura 4 muestra un esquema sintético útil en la preparación de 10-propargil-10-dAM de acuerdo con la invención. Una mezcla de 60% de NaH en dispersión aceitosa (1.06g, 26.5 mmol) en 18 mL de THF seco en el tamiz se enfrió a 0° C. La mezcla fría se trato con una solución de éster de dimetilo de ácido homotereftálico (5.0 g, 24 mmol. compuesto 1 en la figura 4) en THF seco (7 mL), y la mezcla se agitó durante 1 hora a 0o C. Se agrego bromuro de propargílo (26.4 mmol), y la mezcla se agito a 0° C durante 1 hora adicional, y luego a la temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla resultante se trató con 2.4 mL de ácido acético al 50% y luego se vertió en 240 mL de agua. La mezcla se extrajo con éster (2x150mL). Los extractos de éter se combinaron, se secaron sobre Na2SO4, y se concentraron a un aceite anaranjado-amarillo. La cromatografía sobre gel de sílice (600 mL de 230-400 mallas) con elución por medio de cicIohexano-EtOAc (8:1) dio el producto éster de dimetilo de ácido a-propargilhomotereftálico (compuesto 2) como un sólido blanco (4.66) que por medio de TLC (cicIohexano-EtOAc, 3:1) parece ser homogéneo. Los datos de espectros de masa en este producto, mostraron que es una mezcla del producto deseado 2, y el compuesto de dipropargilo. No se detecto material de partida 1. HPLC muestra que la proporción de los productos mono- a dipropargilo es de aproximadamente 3:1. Ya que el compuesto de dipropargilo, contrariamente al compuesto 1, no puede producir un compuesto indeseado en la siguiente etapa de reacción, este material fue adecuado para su conversión al compuesto 3. La ausencia del compuesto de partida 1 en el producto usado para proceder a la síntesis es muy importante para evitar la formación secuencial de 10 dAM durante la transformación que conduce al producto final, porque el retiro completo del 10-dAM de 10-propargil-10-dAM es muy difícil. Una mezcla se formó al combinar 0.36 g de NaH al 60% (9 mmol) en dispersión de aceite con 10 mL de DMF seca y se enfrió a 0-5° C. La mezcla fría se trata al goteo con una solución con una solución del producto de la primera reacción (compuesto 2) (2.94 h, 12 mmol) en 10 mL de DMF seco y se agito a 10° C durante 30 minutos. Después de enfriar a -25° C, una solución de bromhidrato 1 ,4-diamino-6-(bromometil)-pteridina-0.02 2-propanol (1.00 g, 2.9 mmol) en 10 mL de DMF seco se agregó por goteo mientras que la temperatura se mantuvo cerca de -25° C. La temperatura de la mezcla agitada se dejo elevar a -10° C durante un periodo de 2 horas. Después de 2 horas adicionales a -10° C, la temperatura se dejo elevar a 20° C; la agitación a la temperatura ambiente se continuo durante 2 horas adicionales. La reacción entonces se ajusto a un pH de 7 por medio de la adición de CO2 sólido. Después de la concentración al vacío para retirar el solvente, el residuo se agito con éter de dietilo y el material insoluble en éter se recolecto, lavó con agua y se secó para dar 1.49 g de un producto crudo. Este producto crudo se disolvió en CHCI3-MeOH (10:1) para la aplicación a una columna de gel de sílice. La elución con el mismo sistema solvente dio el éster de metilo de ácido 10-propargil-10-carbometoxi-4-deoxi-4-amino-10-deazapteróico (compuesto 3) que fue homogéneo según TLC con un rendimiento del 40% (485 mg). Una suspensión agitada del compuesto 3 (400 mg, 0.95 mmol) en 2-metoxietanol (5 mL) se trato con agua (5 mL) y luego solución al 10% de hidróxido de sodio (3.9 mL). La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas, tiempo durante el cual tuvo lugar la solución. La solución se ajustó a un pH de 8 con ácido acético y se concentró al alto vacío. El residuo resultante se disolvió en 15 mL de agua y se acidifico a un pH de 5.5-5.8 dando como resultado la formación de un precipitado. El precipitado se recolectó, se lavó con agua y se secó al vacío para recuperar 340 mg del compuesto 4 (91% de rendimiento). EL análisis de HPLC indico una pureza de producto del 90%. El compuesto 4 (330° mg) es descarboxilo por calentamiento en 15 ml de DMSO a 115-120° C durante 10 minutos. Una prueba por medio de HPLC después de 10 minutos confirmó que la conversión fue casi completa. DMSO se retiro por medio de destilación al vacío (baño a 40° C). El residuo se agito con NaOH 0.5 N para dar una solución clara. La acidificación a un pH de 5.0 con 1N HCl dio ácido 10-propargil-4-deoxi-4-amino-10-deazapteróico (compuesto 5) como sólido amarillo con un rendimiento del 70%. La HPLC indicó una pureza del producto en esta etapa del 90%. El compuesto 5 (225 mg, 0.65 mmol) se acopló con clorhidrato de L-glutamato de dimetilo (137 mg, 0.65 mmol) usando reactivo BOP exafluorofosfato de (benzotriazol- 1 -i loxytris(dimetilamino)fosfonio) (287 mg, 065 mmol, Aldrich Chemical Co.) en DMF (10 mL) que contiene trietilamina (148 mg, 1.46 mmol). La mezcla se agito durante 3 horas a 20-25° C y luego se evaporó hasta la sequedad. El residuo se agitó con agua, y el producto crudo insoluble en agua se colectó y se seco al vacío. El producto crudo (350 mg) se purifico por medio de cromatografía de gel de sílice con elución por medio de CHCI3-MeOH (10:1) que contiene trietilamina (0.25% en volumen) para recuperar 165 mg del éster de dimetilo de 10-propargil-10-deazaaminopterina (compuesto 6, rendimiento del 50%) que fue homogéneo a TLC (CHCI3-MeOH 5:1). El compuesto 6 (165 mg, 0.326 mmol) se suspendió en 10 mL de MeOH agitado al cual se había agregado 0.72 mL (0.72 meq) de NaOH 1N. La agitación a la temperatura ambiente se continuó hasta que la solución se presentó después de algunas horas. La solución se mantuvo a 20-25° C durante 8 horas, luego se diluyó con 10 mL de agua. La evaporación bajo presión reducida retiró el metanol, y la solución acuosa concentrada se dejó a 20-25° C durante otras 24 horas. HPLC entonces mostró que la hidrólisis del éster había sido completa. La solución acuosa clara se acidificó con ácido acético a un pH de 4.0 para precipitar 10-propargil-10-deazaaminopterina como un sólido amarillo pálido. El producto recolectado, lavado con agua y secado al vacío peso 122 mg (79% de rendimiento). El ensayo por medio de análisis elemental, RMN de protones y espectrometría de masa fue completamente coherente con la estructura asignada. El análisis por HPLC indicó una pureza del 98% y estableció que el producto estaba libre de 10-desazaaminopterina.