MXPA06004698A - Metodos y composiciones para utilizarse en el tratamiento de la diabetes. - Google Patents

Abstract

Esta invencion se refiere a metodos y composiciones para tratar la diabetes, que involucran el uso de aminoacidos hidroxilados tales como 4-hidroxiisoleucina y uno o mas agentes anti-diabeticos adicionales.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA. UTILIZARSE EN EL TRATAMIENTO DE LA DIABETES Campo de la Invención Esta invención se refiere a métodos y composiciones para su uso en el tratamiento de diabetes. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La diabetes mellitus es un trastorno del metabolismo de los carbohidratos, y se desarrolla cuando el cuerpo no puede controlar de manera efectiva los niveles de glucosa en sangre. La enfermedad se caracteriza por una inadecuada secreción o utilización de la insulina, altos niveles de glucosa en sangre y orina, y sed, hambre, pérdida de peso y producción de orina excesivas. Esto puede conducir a una variedad de serias complicaciones, incluyendo enfermedad cardiovascular, enfermedad renal, ceguera, daño nervioso e isquemia del limbo. La diabetes se divide en dos tipos, 1 y 2, contando el último con aproximadamente 90% de los casos. En la diabetes tipo 1, el cuerpo destruye las células ß productoras de insulina del páncreas, dando como resultado la incapacidad del cuerpo para producir insulina. La diabetes tipo 1 se presenta típicamente en niños o adultos jóvenes, y generalmente se maneja mediante la administración de insulina, dieta estricta, y ejercicio. También se observa la - - diabetes tipo 1 en adultos mayores posterior a la falla terapéutica de la diabetes tipo 2. La diabetes tipo 2 se caracteriza por un deterioro en la secreción de insulina debido a la función alterada de la célula ß, asi como a una disminución de la capacidad de los tejidos, normalmente sensibles a la insulina, (e.g., el hígado y los músculos) para responder a la insulina. La diabetes tipo 2 generalmente se desarrolla en aquellos de más de 45, pero también se ha detectado recientemente en personas más jóvenes. La enfermedad se asocia con factores de riesgo tales como la edad, la historia familiar, obesidad, falta de un ejercicio regular, alta presión sanguínea e hiperlipidemia . El tratamiento implica una dieta estricta y regímenes de ejercicio, medicaciones orales (e.g., medicaciones que aumentan la secreción de insulina y/o la sensibilidad a la insulina) , y, en algunos casos, la administración de insulina. La diabetes tipo 2 aumenta rápidamente en importancia como un problema mayor de salud pública en el mundo occidental. Aunque hace cien años fue una enfermedad relativamente rara, actualmente existen aproximadamente 200 millones de diabéticos tipo 2 en el mundo, y se estima que este número aumente a más de aproximadamente 300 millones para el año 2025. Este dramático aumento en la incidencia de diabetes tipo 2 es paralelo al incremento en la prevalencia de obesidad en las culturas occidentales. Además, a medida que más culturas adoptan hábitos alimenticios occidentales, es probable que la diabetes tipo 2 alcance proporciones epidémicas en todo el mundo. Dada la seriedad de las complicaciones asociadas con esta enfermedad, asi como su rápidamente incrementada incidencia, es un problema principal el desarrollo de procedimientos efectivos para tratamiento en el campo de la medicina. SUMARIO DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos para tratar la diabetes (diabetes tipo 1 o diabetes tipo 2) en pacientes, que implica la administración a los pacientes de un aminoácido hidroxilado (por ejemplo, 4-hidroxiisoleucina, e.g., el isómero 2S,3R, S de 4-hidroxiisoleucina) y uno o más agentes antidiabéticos adicionales, para obtener un efecto mejorado (e.g., sinergistico o aditivo). Ejemplos de agentes antidiabéticos adicionales que pueden utilizarse en la invención incluyen biguanidas (e.g., metformina) , drogas de sulfonilurea, glinidas, glitazonas (e.g., tiazolidinadionas, tales como maleato de rosiglizatona) , agonistas del receptor del péptido 1 similar a glucagón (e.g., Exenatide®) e insulina. Otros ejemplos de agentes antidiabéticos (y otros) que pueden utilizarse en combinación con aminoácidos hidroxilados de acuerdo con la invención se listan abajo. En un ejemplo, 4-hidroxiisoleucina se combina con insulina y/o - - metformina, mientras que en otro ejemplo, 4-hidroxiisoleucina se combina con metformina y/o una tiazolidinadiona. El aminoácido hidroxilado y otros agentes antidiabéticos pueden administrarse en o aproximadamente al mismo tiempo ambos o en diferentes momentos. También se incluyen en la invención equipos y composiciones farmacéuticas (e.g., tabletas o cápsulas) que incluyen combinaciones de los agentes antes anotados y en cualquier otra parte en la presente. La invención proporciona varias ventajas. Por ejemplo, debido a que se utilizan las combinaciones de drogas descritas en la presente para obtener efectos mejorados (e.g., sinergisticos o aditivos), es posible considerar una menor administración de cada droga, lo que conduce a una disminución en la exposición total de los pacientes a las drogas, asi como a cualquier efecto secundario adverso de cualquiera de las drogas. Adicionalmente, puede lograrse un mayor control de la enfermedad, debido a que las drogas pueden combatir la enfermedad a través de diferentes mecanismos . Otras características y ventajas de la invención serán aparentes a partir de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica que muestra la estimulación aditiva de la absorción de glucosa en adipocitos - - diferenciados 3T3-L1 mediante la combinación de insulina e ID 1101. La Figura 2 es una serie de gráficas que muestran los cambios en los niveles de glucosa en plasma a partir de la linea basal, durante una prueba de tolerancia a la glucosa oral . La Figura 3 es una gráfica que muestra el efecto de ID 1101 en combinación con Glibenclamida sobre la secreción de insulina en células beta INS-1. La Figura 4 es una gráfica que muestra el efecto de ID 1101 en combinación con Exendin-4 sobre la secreción de insulina en células beta INS-1. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos y equipos o composiciones farmacéuticas para su uso en el tratamiento de diabetes y enfermedades o condiciones relacionadas, tales como síndrome metabólico. La invención se basa en la administración de aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina a pacientes, con uno o más agentes antidiabéticos, a fin de obtener un efecto mejorado (e.g., sinergístico o aditivo) . Como se trata adicionalmente abajo, ejemplos de agentes que pueden administrarse con los aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina, de acuerdo con la invención, incluyen insulina, biguanidas, sulfonilureas, glinidas, glitazonas, péptido-1 similar a - - glucagón (GLP-1) y sus agonistas, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos, antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa, y otros agentes mencionados en la presente. Los métodos y composiciones de la invención se describen en mayor detalle, como sigue. Aminoácidos Hidroxilados El centro de la invención es la administración de uno o más aminoácidos hidroxilados (e.g., aminoácidos mono-hidroxilados, aminoácidos poli-hidroxilados, o formas lactónicas de tales aminoácidos hidroxilados) , en combinación con uno o más agentes antidiabéticos, a pacientes. Un ejemplo especifico de un aminoácido hidroxilado que puede utilizarse en la invención es 4-hidroxiisoleucina (e.g., el isómero 2S,3R,4S), que ha mostrado estimular la secreción de insulina de una manera dependiente de glucosa, y disminuir la resistencia a la insulina (ver, e.g., Patente de E.U. No. 5,470,879; WO 01/15689; Broca et al., Am. J. Physiol. 277 : E617-E623 , 1999; cuyas enseñanzas se incorporan en la presente por la referencia) . 4-hidroxiisoleucina para uso en la invención, puede obtenerse, por ejemplo, mediante métodos químicos sintéticos. Sin embargo, este compuesto se encuentra naturalmente presente en altas cantidades en las semillas de la legumbre fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.), de la cual puede purificarse utilizando métodos tales como los descritos en la - - Patente de E.U. No. 5,470,879, O 97/32577, WO 01/72688, y Wang et al., Eur. J. Org. Chem. 834-839, 2002, cuyas enseñanzas se incorporan en la presente por la referencia. 4-hidroxiisoleucina se administra preferentemente de manera oral, pero también puede administrarse mediante otras vias incluyendo, e.g., vias subcutánea, intramuscular, e intravenosa. La droga puede administrarse, por ejemplo, en una dosis de 0.5 a 200 mg/kg/dia. Como pueden determinarlo los expertos en esta técnica, la cantidad de aminoácido hidroxilado administrada puede disminuir cuando la administración se lleva a cabo en combinación con el uso de otro agente antidiabético, como se describe en la presente, para obtener un efecto mejorado (e.g., sinergistico o aditivo) . Ejemplos de agentes que pueden administrarse en combinación con un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina, de acuerdo con la invención, se describen adicionalmente abajo. Insulina Como se trató anteriormente, la diabetes tipo 2 se caracteriza por anormalidades en la secreción de insulina y por la resistencia a la insulina de tejidos objetivo importantes, tales como músculos, hígado y tejidos adiposos. Esta enfermedad se ha tratado generalmente por medio del uso de agentes orales antidiabéticos, tales como los agentes - - insulinotropicos y sensibilidazores de insulina. La diabetes tipo 1 se caracteriza por la destrucción masiva de las células ß pancreáticas, dando como resultado una drástica hipoinsulinemia . Por consiguiente, la administración de insulina exógena es central para el tratamiento de esta enfermedad. La resistencia a la insulina se presenta también en la diabetes tipo 1, pero, en contraste con la diabetes tipo 2, la resistencia a la insulina en la diabetes tipo 1 no es un fenómeno principal, sino que es un evento secundario que puede revertirse frecuentemente por una terapia de insulina adecuada. Sin embargo, algunas veces es difícil lograr el control glicémico por medio de la administración de insulina y la insulina necesita aumentarse en gran medida. Además, la hiperglucemia contribuye al deterioro de la acción de la insulina en tales sujetos. El enlace de insulina a su receptor inicia una cascada de transducción de señal que involucra los substratos del receptor de insulina IRS1, IRS2, etc. Una función principal de los substratos receptores de insulina es activar la fosfatidilinositol 3-quinasa, que juega un papel central en la ruta de señalamiento de la insulina. Los defectos en el receptor de insulina o en los elementos primarios de señalamiento de insulina puede jugar un papel importante en el desarrollo de la resistencia a la insulina. En efecto, en el caso de pacientes con diabetes tipo 1 con resistencia a la insulina, se ha encontrado que los defectos celulares en tejidos objetivo incluyen alteraciones en el enlace de insulina y en la transducción intracelular de la señal de insulina que implican la activación de PI3-quinasa. Como se trató anteriormente, 4-hidroxiisoleucina es una droga que exhibe actividades tanto insulinotrópicas como de sensibilización a la insulina. La actividad de sensibilización a la insulina de la droga se relaciona con la activación de PI3-quinasa en el músculo e hígado. Por consiguiente, el uso de un aminoácido hidroxilado (e.g., 4-hidroxiisoleucina) en combinación con terapia de insulina puede conducir a un incremento en la activación de PI3-quinasa y por tanto a la disminución de la resistencia a la insulina . El uso de aminoácido hidroxilados en combinación con la terapia de insulina puede en consecuencia, permitir el uso de dosis menores de insulina. La invención incluye por tanto, el uso de aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina en el tratamiento de diabetes tipo 1. Además, la invención incluye también procedimientos que implican combinar terapias de insulina y de aminoácido hidroxilado con uno o más procedimientos terapéuticos adicionales, tales como los descritos en cualquier otra parte en la presente (e.g., terapia que implica el uso de una o más biguanidas, sulfonilureas , glinidas, agentes de - - sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas), agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes) . Biguanidas Metformina (Glucophage®, Bristol-Myers Squibb Company, E.U.; Stagid®, Lipha Santé, Europa) es un compuesto de biguanida ampliamente utilizado en el tratamiento de diabetes tipo 2. Es la droga de primera linea utilizada en el tratamiento de pacientes obesos (BMI>27) , a menos que se contraindique, e.g., por deterioro en la función renal. Los tratamientos con metformina dan como resultado la disminución en los niveles de glucosa mediante diversos mecanismos diferentes, incluyendo reducción de la absorción intestinal de glucosa, reducción del apetito, aumento en la utilización hepática periférica (efecto de sensibilización a la nsulina) , y reducción de la salida hepática. Esta droga se administra de manera estándar en dosis que varían de 500-2550 mg/día, e.g., 850, 1000, 1500, 2000, o 2500 mg, tomados típicamente en una, dos o tres dosis de, e.g., 500, 850 y 1000 mg cada una. Estas cantidades pueden disminuir al utilizarse en las combinaciones de la presente invención, como se trata adicionalmente en cualquier parte en la presente. La invención incluye terapia de combinación que - - implica el uso de biguanidas, tales como metformina, con un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina . También se incluyen en la invención procedimientos que implican el uso de biguanidas y aminoácidos hidroxilados (tales como 4-hidroxiisoleucina) en combinación con otras terapias antidiabéticas incluyendo, por ejemplo, aquellas descritas en cualquier parte en la presente (e.g., terapias que implican el uso de insulina, sulfonilureas , glinidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes) . Sulfonilureas y Glinidas La falla en el control de los picos de glucosa relacionada con alimentos es un factor clave en la pérdida del control glicémico en la diabetes tipo 2. Esta falla en el control glicémico prandial da como resultado un deterioro en la función secretoria de las células ß pancreáticas y forma defectos extrapancreáticos en la sensibilidad a la insulina (i.e., resistencia a la insulina). Las drogas de sulfonilurea, que generalmente son el tratamiento de primera linea para pacientes tipo 2 no obesos (BMK27) , incrementan la cantidad de insulina producida por el páncreas, y por tanto ayudan a compensar la resistencia del cuerpo a la insulina. Ejemplos específicos de drogas de sulfonilurea - - incluyen gliclazida (Diamicron®) , glibenclamida, gliprizida (Glucotrol® y Glucotrol XL®, Pfizer) , glimepirida (Amaril®, Aventis) , clorpropamida (e.g., Diabinese®, Pfizer), tolbutamida, y gliburida (e.g., Micronase®, Glynase® y Diabeta®) . Como se trató anteriormente, 4-hidroxiisoleucina tiene efectos de estimulación de insulina y de sensibilización a la insulina. Por consiguiente, la combinación de un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina, con una droga de sulfonilurea puede utilizarse para el control de alimentos en diabetes tipo 2. El tratamiento con una combinación de un aminoácido hidroxilado (tal como 4-hidroxiisoleucina) y una droga de sulfonilurea, puede complementarse con un tratamiento empleando uno o más agentes terapéuticos adicionales, tales como los agentes antidiabéticos descritos en la presente. Por ejemplo, pueden utilizarse uno o más de los siguientes tipos de agente en tales combinaciones: insulina, biguanidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquxnasa y otros agentes) . Similares a las sulfonilureas, las meglitinidas (e.g., glinidas) son drogas que también estimulan a las células ß pancreáticas a liberar insulina. Un ejemplo especifico, repaglinida (Prandin® o NovoNorm®, Novo Nordisk) - - actúa cerrando los canales de potasio ATP de las células ß pancreáticas, lo cual da como resultado la despolarización de la membrana celular, conduciendo a un influjo de calcio, que a su vez activa la secreción de insulina. Es de acción rápida y corta, lo que la hace un tratamiento útil previo a los alimentos. Ejemplos de drogas de meglitinida adicionales a repaglinida que pueden utilizarse en la invención, incluyen, ormitiglinida, nateglinida, senaglinida y BTS-67582, que pueden tomarse cada una antes de los alimentos (ver también WO 97/26265, WO 99/03861, y O 00/37474). Nateglinida (Starlix®) puede ser particularmente útil en la reducción de las excursiones post-prandiales de glucosa en sangre, dado que mejora la secreción de insulina en primera fase. El tratamiento con una combinación de un aminoácido hidroxilado (tal como 4-hidroxiisoleucina) y una glinida, puede complementarse con un tratamiento empleando cualquier combinación de los siguientes agentes: insulina, biguanidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes. Agentes de Sensibilización a la Insulina Como se trató anteriormente, el aumento en los niveles de glucosa y lipidos en la sangre son características - - fundamentales de la diabetes. La glucotoxicidad y lipotoxicidad resultantes pueden conducir a la alteración de la función de la célula ß. Las glitazonas, tales como tiazolidinadionas, son agentes de sensibilización a la insulina y también son efectivos para reducir las concentraciones de ácido graso libre y triglicéridos en la sangre. Como se anotó anteriormente, 4-hidroxiisoleucina tiene actividad insulinotrópica dependiente de glucosa, asi como efectos extrapancreáticos de sensibilización a la insulina. Por consiguiente, el uso de una combinación de una tiazolidinadiona y un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina, tiene efectos benéficos tanto en la glucotoxicidad como en la lipotoxicidad. Un ejemplo de una tiazolidinadiona que puede utilizarse en la invención es maleato de rosiglitazona (Avandia®, Glaxo Smith Kline) . Otro ejemplo es pioglitazona (Actos®, Eli Lilly, Takeda) . Ejemplos adicionales de drogas de tiazolidinadiona que pueden utilizarse en la invención incluyen troglitazona, ciglitazona, isaglitazona, darglitazona, englitazona, CS-011/CI-1037 , T 174, y los compuestos descritos en la WO 97/41097 (DRF-2344) , WO 97/41119, WO 97/41120, WO 98/45292 y WO 00/41121, cuyo contenido se incorpora en la presente por la referencia. El tratamiento que implica el uso combinado de un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina) y - - tiazolidinadionas, tales como rosiglitazona, puede incluir también otros agentes tales como insulina, biguanidas, sulfonilureas , glinidas, otros agentes de sensibilización a la insulina, agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes . Ejemplos adicionales de agentes de sensibilización a la insulina que pueden utilizarse en combinación con un aminoácido hidroxilado de acuerdo con la invención, incluyen GI 262570, YM-440, MCC-555, JTT-501, AR-H039242, KRP-297, GW-409544, CRE-16336, AR-H049020, LY510929, MBX-102, CLX-0940, GW-501516, y los compuestos descritos en la WO 99/19313 (NN622/DRF-2725) , WO 00/23415, WO 00/23416, WO 00/23417, WO 00/23425, WO 00/23445, WO 00/23451, WO 00/50414, WO 00/63153, WO 00/63189, WO 00/63190, WO 00/63191, WO 00/63192, WO 00/63193, WO 99/63196, y WO 00/63209, cuyo contenido se incorpora en la presente por la referencia. Agonistas del Receptor del péptido 1 Similar a Glucagón El péptido 1 similar a glucagón (GLP-1) es un potente estimulante de la secreción de insulina dependiente de glucosa a través de un mecanismo cíclico mediado por AMP en las células ß pancreáticas. Exendin-4 (1-39) (Ex4), que se aisla de veneno de monstruo de Gila, es un agonista receptor de GLP-1 altamente específico que exhibe una - - duración prolongada de acción insulinotrópica . Exenatide® (AC2993) ; Amylin Pharmaceuticals ; Gallwitz et al., Int. J. Clin. Prac, 58 ( sl42 ): 15-19, 2004) es una versión sintética de Ex4, y ha mostrado aumentar el control mediante múltiples acciones, incluyendo estimulación dependiente de glucosa de la secreción de insulina, supresión de secreción de glucagón, vaciado gástrico retardado, disminución en la ingestión de alimentos, y peso reducido. Ex4 también ha reportado aumentar la sensibilidad a la insulina a través de un mecanismo dependiente de PI3 quinasa. También puede utilizarse una formulación de liberación sostenida (i.e., Exenatide LAR®; Amylin Pharmaceuticals) . Otros ejemplos de agonistas de GLP-1 que pueden utilizarse en la invención se describen en la WO 98/08871 y WO 00/42026, cuyo contenido se incorpora en la presente por la referencia. El tratamiento que implica el uso combinado de aminoácidos hidroxilados , tales como 4-hidroxiisoleucina y un agonista receptor del péptido 1 similar a glucagón, tal como Exenatide®, puede incluir también el uso de otros agentes antidiabéticos tales como insulina, biguanidas, sulfonilureas, glinidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas), agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa) , antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes. Agentes que Retardan la Absorción de Carbohidratos Los agentes que retardan la absorción de carbohidratos pueden utilizarse para controlar los niveles post-prandiales de glucosa. ün ejemplo de este tipo de agente son los inhibidores de a-glucosidasa, que actúan bloqueando el rompimiento de oligosacáridos y disacáridos de los carbohidratos de la dieta, retardando así la absorción de glucosa. Ejemplos de inhibidores de a-glucosidasa incluyen acarbosa, miglitol, voglibosa y emiglitato. Otros agentes que retardan la absorción de carbohidratos son aquellos que inhiben el vaciado gástrico. En particular, existe un número de hormonas que se sabe que inhiben el vaciado gástrico, incluyendo péptido 1 similar a glucagón, colescitoquinina, y también amilina, que se sintetiza y se secreta de células ß pancreáticas. Se ha desarrollado un análogo sintético de amilina (pramlintida) para el tratamiento de diabetes. El uso de una combinación de un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina, que tiene propiedades insulinotrópicas y de sensibilización a la insulina, y de agentes que retardan la absorción de carbohidratos, puede llevarse a cabo para lograr efectos mejorados (e.g., sinergísticos o aditivos) en el control post-prandial de glucosa. El tratamiento que implica el uso combinado de aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina y agentes que retardan la absorción de los carbohidratos, como - - se describe en la presente, puede incluir también el uso de otros agentes antidiabéticos tales como insulina, biguanidas, sulfonilureas, glinidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas de receptor GLP-1, antagonistas de glucagón, activadores de glucoquinasa y otros agentes . Antagonistas de Glucagón Glucagón es una hormona que actúa en conjunción con la insulina para regular los niveles de glucosa en la sangre. Actúa principalmente estimulando las células, tales como las células hepáticas, para liberar glucosa cuando caen los niveles de glucosa en sangre. En consecuencia, para disminuir los niveles de glucosa en la sangre en pacientes diabéticos, es útil la administración de antagonistas de glucagón que, de acuerdo con la invención, pueden administrarse con un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina. Ejemplos de antagonistas de glucagón que pueden utilizarse en la invención incluyen derivados de quinoxalina (e.g., 2-estiril-3- [3- (dimetilamino) propilmetilamino] -6, 7-dicloroquinoxalina; Collins et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 2 ( 9) : 915-918 , 1992); skyrin y análogos de skyrin (ver, e.g., O 94/14426), derivados de 1-fenil pirazolo (Patente de E.ü. No. 4,359,474); disilaciclohexanos sustituidos (Patente de E.U. No. 4,374,130), piridinas y - - bifenilos sustituidos (WO 98/04528) ; piridil pirrólos sustituidos (Patente de E.U. No. 5,776,954); 2 , 4-diaril-5-piridilimidazolos (WO 98/21957, WO 98/22108, WO 98/22109, y la Patente de E.U. No. 5,880,139); aril pirrólos 2,5-sustituidos (WO 97/16442 y la Patente de E.U. No. 5,837,719); pirimidinona sustituida, piridona y compuestos de pirimidina (WO 98/24780, WO 98/24782, WO 99/24404, y WO 99/32448); 2- (bencimidazol-2-iltio) -1- (3, 4-dihidroxifenil) -1-etanonas (Madsen et al., J. Med. Chem. 41:5151-5157, 1998); hidrazidas de alquilideno (WO 99/01423 y WO 00/39088); y otros compuestos tales como los descritos en e.g., WO 00/69810, WO 02/00612, WO 02/40444, WO 02/40445 y WO 02/40446. Adicionalmente, pueden identificarse antagonistas de glucagón adicionales utilizando, e.g., los métodos descritos en la Publicación de la Solicitud de Patente de E.U. US 2003/0138416 Al, cuyas enseñanzas se incorporan en la presente por la referencia. El tratamiento que implica el uso combinado de aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina, y un antagonista de glucagón, tal como los referidos anteriormente, puede incluir también el uso de otros agentes antidiabéticos, tales como insulina, biguanidas, sulfonilureas, glinidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas del receptor GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., - - acarbosa) , activadores de glucoquinasa, y otros agentes. Activadores de Glucoquinasa Glucoquinasa es una enzima que juega un papel central en la glicólisis, absorción de glucosa y síntesis de glicógeno. Se han propuesto activadores de glucoquinasa para su uso en el tratamiento de diabetes. Ejemplos de tales compuestos pueden encontrarse, por ejemplo en la WO 00/58293, WO 01/44216, WO 01/83465, WO 01/83478, WO 01/85706 o WO 01/85707, cuyo contenido se incorpora en la presente por la referencia. Adicionalmente, pueden identificarse activadores de glucoquinasa adicionales utilizando, e.g., los métodos descritos en la Publicación de la Solicitud de Patente de E.U. US 2003/0138416 Al. Los activadores de glucoquinasa pueden administrarse con aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina, de acuerdo con la invención, utilizando métodos estándar. Además, el tratamiento que implica el uso combinado de aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina y activadores de glucoquinasa, tales como los descritos en los documentos antes referidos, también puede incluir el uso de otros agentes antidiabéticos, tales como insulina, biguanidas, sulfonilureas, glinidas, agentes de sensibilización a la insulina (e.g., glitazonas) , agonistas del receptor de GLP-1, agentes que retardan la absorción de los carbohidratos (e.g., acarbosa), antagonistas - - de glucagón y otros agentes. Otros Agentes Ejemplos de otros agentes antidiabéticos que pueden utilizarse en combinación con un aminoácido hidroxilado, tal como 4-hidroxiisoleucina (asi como otros agentes descritos en la presente) , de acuerdo con la invención, incluyen imidazolinas (e.g., efaroxan, isazoxan, fentolamina, y 1-fenil-2- (imidazolin-2-il) bencimidazolo) ; inhibidores de glicogen fosforilasa (ver, e.g., WO 97/09040; oxadiazolidinadionas , inhibidores de dipeptidil peptidasa-IV (DPP-IV), inhibidores de proteina tirosina fosfatasa (PTPasa) , inhibidores de enzimas hepáticas implicadas en la estimulación de gluconeogénesis y/o glicogenólisis, moduladores de absorción de glucosa, inhibidores de glicogen sintasa quinasa-3 (GSK-3) , compuestos que modifican el metabolismo de lipidos (e.g., agentes antihiperlipidémicos y agentes antilipidémicos ) , agonistas de receptor del proliferador de peroxisoma (PPAR) , y agonistas del receptor de retinoide X (RXR) (e.g., ALRT-268, LG-1268 y LG-1069) . La hiperlipidemia es un factor de riesgo principal para la enfermedad cardiovascular, que es particularmente prevalente entre pacientes diabéticos. Por consiguiente, los aminoácidos hidroxilados tales como 4-hidroxiisoleucina, también pueden administrarse, de acuerdo con la invención, en conjunción con agentes antihiperlipidémicos o agentes - - antilipidémicos (e.g., colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatin, pravastatin, simvastatin, probucol, y dextrotiroxina) , opcionalmente, en combinación con otros agentes descritos en la presente. Además, los aminoácidos hidroxilados, tales como 4-hidroxiisoleucina también pueden administrarse de acuerdo con la invención, en conjunción con uno o más agentes antihipertensión (opcionalmente en combinación con otros agentes descritos en la presente) , dado que se ha encontrado que la hipertensión se asocia con la alteración de los niveles de insulina en sangre. Ejemplos de agentes antihipertensión que pueden utilizarse en la invención incluyen ß-bloqueadores (e.g., alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propanolol, y metoprolol) , inhibidores de enzima de conversión de angiotensina (ACE) (e.g., benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, quinapril, y ramipril) , bloqueadores de canal de calcio (e.g., nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem, y verapamil) , y a-bloqueadores (e.g., doxazosin, urapidil, prazosin, y terazosin) . Administración Los agentes farmacéuticos descritos en la presente pueden administrarse por separado (e.g., como dos pildoras administradas aproximadamente o al mismo tiempo) , lo cual puede ser conveniente en el caso de drogas que ya se encuentran comercialmente disponibles en formas individuales. Alternativamente, para combinaciones de drogas que pueden tomarse al mismo tiempo, por la misma vía (e.g., oralmente), las drogas pueden formularse convenientemente para encontrarse en el mismo vehículo de suministro (e.g., una tableta, cápsula u otra pildora) . Los métodos para formular drogas que pueden utilizarse en la invención son muy conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20a ed., A. R. Gennaro, ed. ) , Lippincot Williams & Wilkins, 2000. Estos métodos incluyen el uso de e.g., cápsulas, tabletas, aerosoles, soluciones, suspensiones, y preparaciones para administración tópica. Las formulaciones para uso oral incluyen tabletas que contienen el (los) ingrediente (s) activo (s) en una mezcla con excipientes aceptables farmacéuticamente no tóxicos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes o rellenadores inertes (e.g., sucrosa y sorbitol) , agentes lubricantes, deslizadores, y antiadhesivos (e.g., estearato de magnesio, estearato de zinc, ácido esteárico, sílices, aceites vegetales hidrogenados y talco) . Las formulaciones para uso oral también pueden proporcionarse como tabletas masticables, o como cápsulas de gelatina suaves en las cuales el (los) ingrediente ( s ) activo (s) se mezcla (n) con agua o un medio oleaginoso. Las formulaciones para administración - - parenteral pueden contener, por ejemplo, excipientes, agua estéril, o salina; polialquileno glicoles tales como polietitileno glicol; aceites de origen vegetal; o naftálenos hidrogenados. Puede utilizarse un polímero láctido biodegradable biocompatible, copolímero láctido/glicólido, o copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno para controlar la liberación de los compuestos. Las formulaciones nanoparticuladas (e.g., nanopartículas biodegradables, nanopartículas de lipido sólido, y liposomas) pueden utilizarse para controlar la biodistribución de los compuestos . Las concentraciones de los agentes en las formulaciones variarán, dependiendo de un número de factores incluyendo las dosis de los agentes que van a administrarse, la vía de administración, la naturaleza del agente, la frecuencia y el modo de administración, la terapia deseada, la forma en la que se administran los agentes, la potencia de los agentes, el sexo, edad, peso y condición general del sujeto que va tratarse, la naturaleza y severidad de la condición tratada, cualquier enfermedad concomitante que va a tratarse, y otros factores que serán aparentes para los expertos en la técnica. Generalmente, en el tratamiento de adultos humanos, pueden utilizarse dosis de aproximadamente 0.001 mg a aproximadamente 1000 mg (e.g., aproximadamente 0.05-500, 0.1- - - 250, 0.5-100, 1-50 o 2-25 mg) de cada compuesto activo por kg de peso corporal. Una dosis oral típica puede encontrarse, por ejemplo, en el rango de desde aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 100 mg (e.g., aproximadamente, 0.01-50 o 0.05-10 mg) por kg de peso corporal al día, administrada en una o más dosis tales como de 1 a 3 dosis. Las dosis pueden incrementarse o disminuirse según sea necesario, como puede determinarse fácilmente por los expertos en la técnica. Por ejemplo, la . cantidad de un agente particular puede disminuirse al utilizarse en combinación con otro agente, si se determina apropiado. Además, puede hacerse referencia a las cantidades y procedimientos estándar que se utilizan para administrar los agentes mencionados en la presente. Ejemplos de dosis para las drogas mencionadas en la presente se proporcionan en la Tabla 1 abajo. Las drogas pueden utilizarse en estas dosis cuando se combinan con un aminoácido hidroxilado (e.g., 4-hidroxiisoleucina) , que se administra generalmente en una cantidad en el rango de, por ejemplo, 250 mg -1 g/día (e.g., 350-900, 450-800, o 550-700 mg/día) . Alternativamente, debido a los efectos mejorados (e.g., sinergísticos o mejorados) obtenidos al utilizar las combinaciones de drogas de la invención, las cantidades en la Tabla 1 y/o la cantidad de aminoácido hidroxilado administradas pueden disminuir (e.g., aproximadamente 10.70%, 20.60%, 30.50%, o 35-45%), como se determine apropiado por - - expertos en esta técnic Tabla 1 Sustancia de Droga Dosis y/o administración Insulina 400 IU por vial-40 10 al día (valor medio) Glicazida (Diamicron®) 80 mg/tableta-1 a 4 tabletas al dia Glibenclamida (Daonil®) 0 Gliburida 5 mg/tableta-1 a 3 tabletas al día (Glibenclamide) ; (Micronase, Glynase, Diabeta) 1.25 a 6 mg/tableta-1 a 2 tabletas al día (Glyburide) Glipizida (Glucotrol®, Gilbenese®) 5 mg/tableta-1 a 4 tabletas al día Glimepride (Amaryl®, Amarel®) 1 a 4 mg/tableta-6 mg al día máximo Clorpropamida (Diabinese®) 250 mg/tableta-125 a 100 mg al día Tolbutamida 500 mg/tableta-1 a 4 tabletas al día Repaglinida (Prandin®) 0.5 a 16 mg al día Nateglinida, Senaglinida (Starlix®) 60 a 120 mg/tableta-3 tabletas al día Tolazamida 100 a 500 mg/tableta Rosiglitazona 2 a 8 mg/tableta-8 mg al día máximo Pioglitazona 15 a 45 mg/tableta-15 a 45 mg al día Troglitazona 200 a 400 mg/tableta-200 a 600 mg al día Ciglitazona 0.1 mg/tableta Exenatida (Amylin) 0.09 a 0.270 mg al día Acarbosa 50 a 100 mg/tableta-150 a 600 mg al día iglitol 50 a 100 mg/tableta-150 a 300 mg al día Voglibosa 0.1 a 0.9 mg al día Fentolamina 50 mg 4 a 6 veces al día Colestiramina (Colestipol) 4 g/unidad-12 a 16 g al día CXofibrato 500 mg/cápsula-1 a 4 cápsulas/día Gemfibroizil (lipur) 450 mg/tableta-2 tabletas al día Lovastatina 10 y 20 mg/tableta Pravastatina 20 mg/tableta-10 a 40 mg al día Simvastatina (Zocor®, Lodales) 5 y 20 mg/tableta-5 a 40 mg al día Probucol 250 mg/tableta-1 g al día Dext otiroxina 2 a 6 mg al día Alprenolol 50 mg/tableta-4 a 8 tabletas al día Atenolol 50 a 100 mg/tableta-100 a 200 mg al día Timolol 10 mg/tableta-10 a 20 mg al día Pindolol 5 y 15 mg/tableta-5 a 60 mg al día Propanolol 40 mg/tableta-80 a 160 mg al día Metoprolol 100 y 200 mg/tableta-50 a 200 mg al día Captopril 25 y 50 mg/tableta-12.5 a 150 mg al día Enalapril 5 y 20 mg/tableta-5 a 40 mg al día Nifedipina 10 mg/cápsula-30 a 60 mg al día Diltiazem 60 mg/tableta-3 a 6 tabletas al día Verapamil 120 y 240 mg/cápsula-240 a 360 mg al día Doxazosin 2 a 8 mg al día Prazozina 2.5 y 5 mg/tableta-2.5 a 20 mg al día La invención proporciona también composiciones farmacéuticas que incluyen las combinaciones de drogas anotadas anteriormente. Las drogas pueden formularse juntas de una forma apropiada, por ejemplo, en una tableta o una cápsula. También se incluyen en la invención equipos que incluyen las combinaciones de droga en formulaciones separadas, pero con instrucciones para utilizarlas juntas. Los métodos, composiciones y equipos de la invención pueden utilizarse en la prevención y tratamiento de diabetes (tipos 1 y 2) , asi como en el tratamiento de pacientes que tienen condiciones relacionadas, tales como pre-diabetes , síndrome metabólico, resistencia a la insulina e intolerancia a la glucosa . Ejemplos I. La combinación del isómero 4-hidroxileucina 2S, 3R, 4S con insulina -tiene un efecto aditivo en la absorción de glucosa en células de adipocito 3T3 diferenciadas . Objetivo : Determinar el efecto del isómero 4-hidroxileucina 2S, 3R, 4S (ID 1101) o insulina, solos o en combinación, bajo diversas condiciones de incubación, en la absorción de 3H-deoxi-glucosa mediante células de adipocito 3T3-L1 diferenciadas . Materiales y Métodos : - - Brevemente, las células de adipocito 3T3-L1 (ATCC; Cl-173) se cultivaron en placas de cultivo de tejido de 12 pozos durante 3 dias a fin de lograr confluencia (Lakshmanan et al., "Analysis of insulin-stimulated glucose uptake in differentiated 3.73-Ll adipocytes", Diabetes mellitus : Methods and Protocols, (Saire Ozcna Ed.) Humana Press Inc., Tonowa, New Jersey, 2003, páginas 97-103) . El medio de cultivo se removió y se volvió a colocar con medio de diferenciación (Green et al., Cell 3:127-133, 1974; Madsen et al., Biochem. J. 375:539-549, 2003), y después las células se incubaron durante 9 dias adicionales. El estado de diferenciación se confirmó mediante examen visual. El saciado celular se condujo durante 5 horas reemplazando el medio de diferenciación con un medio que carece de suero fetal de ternera. Durante el periodo de saciado las células se expusieron a ID 1101 (0.5 o 1.0 mM) , durante 0.5, 1, 2, 4 o 5 horas. Las células se expusieron a insulina (0.0167 U/ml; Sigma; Cat. No. 15534) por la última 0.5 hora del periodo de saciado, ya sea sola o en combinación con ID 1101. Las células se lavaron y después se agregó medio fresco conteniendo 16 µ? de 3H-Deoxi-D-glucosa (0.5 µ??/p??) y 10 µ? 2-deoxi-D-Glucosa y las células se incubaron durante 10 minutos. La absorción de glucosa se detuvo lavando las células con PBS enfriado en hielo. Las células se Usaron y se determinó la actividad especifica en el lisado en relación - - a la absorción de respaldo de 3H-deoxi-glucosa . Los resultados se estandarizaron en base al contenido de proteina por pozo. Resultados: La estimulación óptima de absorción de glucosa se presentó cuando las células se expusieron durante los últimos 30 minutos del periodo de saciado de 5 horas a insulina o ID 1101 (0.5 y 1.0 mM) o al tratamiento de combinación (Figura 1) . Al utilizarse como único tratamiento, la insulina o ID 1101 (0.5 o 1.0 mM) estimuló la absorción de glucosa por aproximadamente 5 pmol/mg/minuto por arriba del nivel de respaldo observado para las células de control (2 pmol/mg/minuto) . Sin embargo, la combinación de insulina con ID 1101, ya sea a 0.5 p 1.0 mM) , ocasionó un incremento significativo en la absorción de glucosa (p<0.05) por aproximadamente 6 pmol/mg/minuto sobre la absorción emitida por cualquiera de los compuestos solo. La absorción de glucosa se duplicó tratando con la combinación, indicando que bajo las condiciones probadas, los compuestos son aditivos en actividad. Conclusión La absorción de glucosa en adipocitos puede estimularse igualmente mediante insulina (0.167 ü/ml) o ID 1101 (0.5 o 1.0 mM) , pero cuando se utilizan en combinación a estas concentraciones, se observa un efecto aditivo en la - - absorción de glucosa. II . Efecto de 4-hidroxiisoleucina y Rosiglitazona (Avandia®) solas y en combinación en la tolerancia a la glucosa en un ratón C57B6 obeso inducidos por dieta. Antecedentes : Aunque el mecanismo de acción permanece bajo investigación, la 4-hidroxiisoleucina (ID 1101) ha mostrado inducir la secreción de insulina dependiente de glucosa in vitro e in vivo (Sauvaire et al., Diabetes 47:206-210, 1998) y reducir la resistencia periférica a la insulina (Broca et al., Am. J. Physiol. 277 : E617-623 , 1999). Rosiglitazona es una tiazolidinadiona que actúa estimulando los receptores de activación de peroxisoma proliferativo-insulina (PPAR) , que a su vez ocasionan efectos de sensibilización a la insulina en músculo esquelético y tejido adiposo (Tiikkainen et al., Diabetes 53:2169-2176, 2004). También se inhibe la gluconeogénesis hepática. Dados los efectos fisiológicos de estos compuestos, fue de interés determinar si, al utilizarse en combinación, podría observarse una actividad aditiva o sinergística en un modelo animal de diabetes tipo 2. Objetivo: El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de rosiglitazona e ID 1101, solas o en combinación, en la tolerancia a la glucosa en ratones hechos hiperglicémicos por medio del consumo de una dieta alta en grasas.

- - Materiales y Métodos : Se recibieron ratones C57BL6 a las 7-8 semanas de edad y se alimentaron con una dieta alta en grasas (45% de calorías de grasa) durante 8 semanas. Se verificó la glucosa en sangre y los animales con lecturas entre 200 y 220 mg/dL se aleatorizaron en grupos de control y tratamiento. Se recibió un grupo de ratones C57BL6 que recibieron una dieta normal como control. Los grupos de tratamiento incluyeron aquellos que recibieron un tratamiento dos veces al día mediante administración oral con rosiglitazona (1.5 o 5 mg/kg) , ID 1101 (50 o 100 mg/kg) , o una combinación de rosiglitazona e ID 1101 (1.5 y 50 mg/kg, respectivamente). Se administró una prueba de glucosa oral de línea de base (OGTT) previo al inicio del tratamiento. La prueba se repitió en los días 7, 14, y 21, para determinar si los tratamientos influenciaron la tolerancia a la glucosa. Resultados : Como se esperaba, la OGTT de línea de base mostró que los animales que recibieron la dieta alta en grasas exhibieron menos tolerancia a la prueba con glucosa que los animales de control (p<0.05) con dieta normal (NDC) (Figura 2) . En el día 7, los animales experimentaron una OGTT y los resultados se compararon entre los grupos. Los animales tratados con la combinación de ID 1101 (50 mg/kg) y rosiglitazona (1.5 mg/kg) fueron significativamente más - - tolerantes a la prueba con glucosa en relación con los animales de control con dieta alta en grasas (DIO) (p<0.05). De manera similar, · los animales tratados con rosiglitazona a 5 mg/kg también fueron más tolerantes a la glucosa que los animales de control con dieta alta en grasas (p<0.05). Aunque hubo una tendencia indicando que la combinación de drogas puede ser más eficaz, el resultado no fue estadísticamente satisfactorio. Los resultados de OGTT del día 14 mostraron una tendencia similar pero no significativa. Sin embargo, para el día 21, solo los ratones que recibieron rosiglitazona (1.5 o 5 mg/kg) mostraron un significativo aumento en la tolerancia a la glucosa en relación con los animales de control con dieta alta en grasas (p<0.05). Conclusión: Solo se probó 1 combinación de concentraciones de droga en este estudio, sin embargo, el resultado sugiere que puede observarse la sinergia entre los compuestos con diferentes combinaciones de concentraciones de droga. Dados los problemas de toxicidad asociados con tiazolidinadionas, puede existir beneficio al combinar miembros de esta clase con ID 1101; potencialmente la dosis podría reducirse, mejorando así la seguridad. IXI . Efecto aditivo de ID 1101 en la combinación con glibenclamida en la estimulación dependiente de glucosa de la - - .secreción de insulina en células INS-1. Objetivo: Este estudio se condujo para determinar si ID 1101 en combinación con glibenclamida estimula la secreción de insulina a un grado mayor que cualquiera de los compuestos utilizado solo. Materiales y Métodos: El isómero óptico 2S, 3R, 4S de 4-hidroxiisoleucina (ID 1101) se probó de manera oculta, solo o en combinación con glibenclamida, para determinar el efecto insulinotrópico en células INS-1. Brevemente, las células se colocaron en placas a una densidad de 2 x 105 en placas de 12 pozos y se incubaron durante 2 dias en RPMI con suero fetal de ternera al 10% y 11 mM de glucosa. El medio se retiró al tercer dia posterior a la colocación en placas y se volvió a colocar con RPMI conteniendo 3 mM de glucosa con suero fetal de ternera al 10%. Las células se incubaron durante 24 horas adicionales. Al cuarto dia posterior a la colocación en placas, el medio se retiró y se reemplazó con amortiguador de bicarbonato Krebs-Ringers conteniendo 2 mM de glucosa. Las células se incubaron durante 30 minutos. El amortiguador se retiró y se reemplazó con amortiguador de bicarbonato Krebs-Ringers con 4.5 mM de glucosa, conteniendo ID 1101 a 0.1 mM, glibenclamida sola a 10"10 mM o 10-11 mM, o una combinación de los 2 compuestos. Las células se incubaron durante 1 hora.

- - Se determinó la secreción basal de insulina incubando las células en presencia de amortiguador con 2 mM de glucosa. La presencia de glucosa a 4.5 mM estimuló la secreción de insulina y sirvió como control positivo. Resultados : ID 1101 ha mostrado previamente tener actividad insulinotrópica (Broca et al., Eur. J. Pharmacol. 390:339-345, 2000; Sauvaire et al., Diabetes 47:206-210, 1998) y de nuevo estimuló la secreción de insulina por arriba de los niveles de respaldo (Figura 3) . Glibenclamida es un secretagogue y de manera similar mostró un efecto estimulante a 10-10 mM pero no a 10-11 mM (Figura 3) . Sin embargo, la combinación de ID 1101 a 0.1 mM y glibenclamida a 10-11 mM dio como resultado un efecto estimulante mayor que el emitido por cualquiera de los compuestos solo. El mismo efecto estimulante se observó también para la combinación con glibenclamida a 10~10 mM. Conclusión: La combinación de glibenclamida e ID 1101 demuestra un efecto aditivo sobre la secreción de insulina in vitro, utilizando un análisis de exploración de secreción de insulina en base a una linea celular. IV. Efecto aditivo de ID 1101 en la combinación con exendin-4 en la estimulación dependiente de glucosa de la secreción de insulina en células INS-1.

- - Objetivo : Este estudio se condujo para determinar si ID 1101 en combinación con exendin-4 estimula la secreción de insulina a un grado mayor que cualquiera de los compuestos utilizado solo. Materiales y Métodos : El isómero óptico 2S, 3R, 4S de 4-hidroxiisoleucina (ID 1101) se probó solo y en combinación con exendin-4, para determinar el efecto insulinotrópico en células INS-1. Brevemente, las células se colocaron en placas a una densidad de 2 x 105 en placas de 12 pozos y se incubaron durante 2 días en RPMI con suero fetal de ternera al 10% y 11 mM de glucosa. El medio se retiró al tercer dia posterior a la colocación en placas y se volvió a colocar con RPMI conteniendo 3 mM de glucosa con suero fetal de ternera al 10%. Las células se incubaron durante 24 horas adicionales. Al cuarto dia posterior a la colocación en placas, el medio se retiró y se reemplazó con amortiguador de bicarbonato Krebs-Ringers conteniendo 2 mM de glucosa. Las células se incubaron durante 30 minutos. El amortiguador se retiró y se reemplazó con amortiguador de bicarbonato Krebs-Ringers con 4.5 mM de glucosa, conteniendo ID 1101 a 0.01 mM o 0.05 mM de exendin-4 solo a 10~9 mM o 10-10 mM, o una combinación de los 2 compuestos. Las células se incubaron durante 1 hora. Se determinó la secreción basal de insulina incubando las - - células en presencia de amortiguador con 2 mM de glucosa. El efecto de la glucosa a 4.5 mM sirvió como control. Resultados : ID 1101 ha mostrado previamente tener actividad insulinotrópica (Broca et al., Eur. J. Pharmacol . 390:339-345, 2000; Sauvaire et al., Diabetes 47:206-210, 1998) y de nuevo estimuló la secreción de insulina por arriba de los niveles de respaldo (Figura 4) . Exendin-4 no mostró un efecto estimulante a 10~9 y a 10"10 mM (Figura 4) . Sin embargo, la combinación de ID 1101 a 0.01 y 0.05 mM y exendin-4 a cualquiera de las concentraciones dio como resultado un efecto estimulante mayor que el emitido por cualquiera de los compuestos solo (p<0.01). Conclusión: La combinación de exendin-4 e ID 1101 demuestra un efecto aditivo sobre la secreción de insulina in vitro, utilizando un análisis de exploración de secreción de insulina en base a una linea celular. Todas las publicaciones citadas anteriormente se incorporan en la presente por la referencia en su totalidad. Otras modalidades se encuentran en las siguientes reivindicaciones .

Claims (28)

REIVINDICACIONES

1. Un método para tratar diabetes en un paciente, comprendiendo el método la administración al paciente de un aminoácido hidroxilado y uno o más agentes antidiabéticos adicionales .

2. El método de la reivindicación 1, en donde el aminoácido hidroxilado es 4-hidroxiisoleucina.

3. El método de la reivindicación 2, en donde la 4-hidroxiisoleucina es el isómero 2S, 3R, 4S de 4-hidroxiisoleucina.

4. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es insulina.

5. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es una biguanida.

6. El método de la reivindicación 5, en donde la biguanida es metformina.

7. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es una droga de sulfonilurea.

8. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es una glinida.

9. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es una tiazolidinadiona .

10. El método de la reivindicación 9, en donde la tiazolidinadiona es maleato de rosiglitazona o pioglitazona.

11. El método de la reivindicación 1, en donde el agente antidiabético adicional es un agonista del receptor del péptido 1 similar a glucagón.

12. El método de la reivindicación 11, en donde el agonista del receptor de péptido 1 similar a glucagón es Exenatide®.

13. El método de la reivindicación 1, en donde el aminoácido hidroxilado se administra a un paciente en o aproximadamente al mismo tiempo que el agente antidiabético adicional.

14. El método de la reivindicación 1, en donde la diabetes es diabetes tipo 2.

15. Un equipo farmacéutico que comprende un aminoácido hidroxilado y uno o más agentes antidiabéticos adicionales.

16. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el aminoácido hidroxilado es 4-hidroxiisoleucina.

17. El equipo farmacéutico de la reivindicación 16, en donde la 4-hidroxiisoleucina es el isómero 2S, 3R, 4S de 4-hidroxiisoleucina.

18. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es insulina.

19. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es una biguanida .

20. El equipo farmacéutico de la reivindicación 19, en donde la biguanida es metformina.

21. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es una droga de sulfonilurea .

22. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es una glinida .

23. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es una tiazolidinadiona .

24. El equipo farmacéutico de la reivindicación 23, en donde la tiazolidinadiona es maleato de rosiglitazona o pioglitazona .

25. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el agente antidiabético adicional es un agonista del receptor del péptido 1 similar a glucagón.

26. El equipo farmacéutico de la reivindicación 25, en donde el agonista del receptor del péptido 1 similar a glucagón es Exenatide®.

27. El equipo farmacéutico de la reivindicación 15, en donde el aminoácido hidroxilado y el agente antidiabético adicional se formulan en una sola composición.

28. El equipo farmacéutico de la reivindicación 27, en donde la composición única es una tableta o una cápsula .