MXPA05013507A - Formulacion de liberacion lenta de estradiol-progesterona paraanticoncepcion y terapia de reemplazo hormonal - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona formulaciones de liberación lenta de estradiol-progesterona, que se pueden utilizar ya sea para anticoncepción o en terapias de reemplazo hormonal. Las formulaciones contienen partículas conformadas de estradiol que se encuentra en forma hemicristalina que presenta velocidades de disolución especialmente bajas. Las partículas conformadas contienen estradiol combinado con colesterol en una relación molar de 1:1 y se administran combinadas con progesterona. La formulación de lenta liberación de la presente invención tiene la doble ventaja de una formulación con dosis baja de estradiol y un régimen de administración de baja frecuencia. Las formulaciones se pueden administrar por vía parenteral una vez al mes o con menor frecuencia.

Description

PROCESO PARA LA ELABORACIÓN DE PARTÍCULAS CONFORMADAS ESTABLES QUE CONTIENEN ESTRADIOL Y COLESTEROL CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente solicitud reclama prioridad a partir de la solicitud provisional Núm. de serie 60/477,939, presentada el 13 de junio del 2003. La presente invención se enfoca a formulaciones farmacéuticas que pueden proporcionar efectos simultáneos de anticoncepción ,y de reemplazo hormonal. Las formulaciones de la presente invención comprenden una combinación de dos o más hormonas naturales o análogos hormonales en cantidades eficaces para anticoncepción y para reemplazo hormonal. Las formulaciones están diseñadas para liberación prolongada o retardada que facilite la administración en intervalos de aproximadamente cuatro semanas o más.

ANTECEDENTES DE IA INVENCIÓN El ciclo ovárico/menstrual es un evento complejo caracterizado por una fase folicular rica en estrógeno y luego de la ovulación una fase lútea rica en progesterona. Cada fase dura aproximadamente 14 dias dando lugar a un intervalo intermenstrual de 28 dias aproximadamente. El tejido endometrial responde a los cambios en los niveles hormonales . La aparición de la menstruación es el comienzo de un nuevo ciclo menstrual y se cuenta como el dia uno. Durante un lapso de aproximado de cinco a siete dias, las capas superficiales del endometrio que crecen y se desarrollan durante el periodo previo al ciclo ovárico/menstrual se desprenden ya que la muerte del cuerpo lúteo en el ciclo menstrual no fértil está asociada con la pérdida de secreción de progesterona. La maduración folicular ovárica se presente progresivamente y produce un aumento en los niveles circulantes de estrógeno, que a su vez dan lugar a una nueva proliferación endometrial. El folículo ovárico dominante genera la ovulación a la mitad del ciclo, por lo general, entre los dias 12 a 16 del ciclo menstrual y de ser una fuente predominantemente estrogénica se convierte a una fuente de progesterona principalmente (el cuerpo lúteo) . El nivel creciente de progesterona en la sangre convierte el endometrio proliferativo a una fase secretora en la que la proliferación de tejido se ha reducido súbitamente dando lugar a la formación de glándulas u órganos endometriales . Cuando el ovocito ovulado es fertilizado en forma viable y continúa su escisión embrionaria progresiva, el endometrio secretor y el conceptus pueden interactuar para provocar la implantación que comienza aproximadamente a los seis a ocho dias posteriores a la fertilización. Si con la implantación se establece un embarazo, el embrión se fijará y se introducirá en el endometrio secretor y empezará a producirse la HCG gonadotropina coriónica humana (gonadotropina coriónica humana, por sus siglas en inglés) . La HCG a su vez estimula la prolongación de la función del cuerpo lúteo, es decir, la función de la progesterona permanece elevada y los menstruos no se producen en el ciclo menstrual fértil. Es asi como se establece el embarazo. En el ciclo menstrual no fértil, el nivel decreciente de progesterona en la sangre hace que el tejido endometrial se desprenda. Esto da inicio al siguiente ciclo menstrual . Debido a que la proliferación endometrial sirve para preparar el útero en caso de un embarazo inminente, la manipulación de hormonas para el entorno uterino permite la anticoncepción. Por ejemplo, se sabe que mediante la inhibición de retroalimentación, los estrógenos disminuyen la secreción hormonal que estimula los folículos. En ciertas circunstancias, los estrógenos pueden inhibir la secreción de la hormona luteinizante también por retroalimentación negativa. En circunstancias normales, el valor máximo de estrógeno circulante encontrado antes de la ovulación induce el torrente de hormonas gonadotrópicas que se produce justo antes de la ovulación causada por las mismas. Las dosis altas de estrógenos pueden impedir la concepción debido probablemente a que interfieren con la implantación . Las progestinas también pueden inducir anticoncepción. La progesterona endógena es responsable de los cambios progestacionales en el endometrio y los cambios cíclicos de las células y tejidos en el cuello de la matriz y la vagina. La administración de progestina hace la mucosa cervical más gruesa, adhesiva y celular y se cree que esto impide el transporte de espermatozoides. La administración de progestina también inhibe la secreción de la hormona luteinizante y bloquea la ovulación en humanos. Actualmente existen en el mercado diversas formulaciones anticonceptivas que se pueden clasificar con facilidad en varios tipos generales. El primero de estos corresponde a las formulaciones monofásicas. Las formulaciones monofásicas contienen una cantidad constante de estrógeno y progestina. Los molestos efectos secundarios de las pildoras de formulaciones monofásicas dependen del balance entre los componentes de estrógeno y progestina de la pildora. Por ejemplo, una pildora que tenga una cantidad relativamente dominante de progestina, con el tiempo provocará agotamiento de los receptores tanto de estrógeno como de progestina. Como es de esperarse el resultado es un endometrio atrófico o subestimulado, que finalmente puede causar amenorrea por ausencia de la pildora o hemorragia o sangrado intermenstruales debidos a una baja epitelialización. Por otra parte, es posible que el uso prolongado de una preparación con una cantidad relativamente dominante de estrógeno dé lugar al crecimiento del endometrio y al desarrollo de un estroma frágil y sin soporte y en consecuencia a sangrado o hemorragia intermenstruales. Las nuevas formulaciones conocidas como trifásicas tienen niveles variables de estrógeno y progestina y en la mayoría de los casos contienen niveles relativamente constantes de estrógeno con un aumento gradual de progestina a lo largo del ciclo. Este patrón de administración de estrógeno y progestina da como resultado una formulación relativamente dominante en estrógeno dispuesta al principio del envase y una actividad progestogénica creciente hacia el final del envase. La estabilidad endometrial puede ser mejor con estas pildoras puesto que la actividad estrogénica de la formulación dispuesta al principio del envase induce los receptores de estrógeno y de progestina haciendo al endometrio sensible a los niveles incrementados de progestina hacia el final del envase. La actividad de la progestina produce un estroma endometrial más estable y denso aunque la relativamente larga duración de la exposición a la progestina hacia el final del envase, puede todavía dar lugar a una disminución de los receptores de estrógeno y progestina y de la actividad. Un problema importante con este tipo de formulación es la baja dosis de esferoides de la formulación dispuesta al principio del envase, lo cual hace a estas pildoras vulnerables a las interacciones con medicamentos, o el de las pildoras omitidas que da lugar a ovulación intermenstrual. El inicio del envase es un tiempo critico en términos de ovulación intermenstrual puesto que la usuaria acaba de completar un intervalo de siete dias sin pildora, durante el cual puede dar comienzo el desarrollo folicular. Incluso si no se presenta el embarazo, la ovulación intermenstrual puede ocasionar un deficiente control del ciclo. El 17-ß-estradiol (E2) es el estrógeno natural más potente que se encuentra en el organismo humano y es el principal producto de secreción del ovario. Se oxida fácilmente en el organismo formando estrona E que a su vez se puede hidratar y dar estriol. Esta transformación se lleva a cabo principalmente en el higado, en donde se produce interconversión libre entre Ei y estradiol. Estos tres estrógenos naturales se excretan en la orina como glucurónidos y sulfatos junto con otros varios productos minoritarios relacionados que se presentan en forma de complejos hidrosolubles . Es bien sabido que después de la administración oral de E2 micronizado, la circulación creciente de estrógeno comprende principalmente la menos activa especie El que alcanza una concentración máxima que es muchas veces mayor que la de E2. La conversión de E2 a El y después a otros metabolitos se lleva a cabo durante la absorción en el intestino y el paso a través del higado. Este metabolismo extenso limita mucho la eficacia oral de los estrógenos naturales y sus esteres. En efecto, debido a su limitada eficacia oral, el E2 y sus esteres por lo general se administran por inyección intramuscular. La progesterona (P4) es la progestina natural activa, está presente en el cuerpo lúteo, placenta y corteza adrenal . Igual que el E2, el P4 también es ineficaz mediante administración oral debido a su rápido metabolismo en el epitelio intestinal y en el higado y por lo tanto sólo se administra por via intramuscular. Por su limitada eficacia oral, los especialistas en la técnica consideran a estas hormonas sexuales femeninas naturales como indeseables en la formulación de anticonceptivos orales. En lugar de esto, los especialistas se han enfocado a la fabricación y administración de estrógenos y progestinas sintéticos con fines de anticoncepción. El uso de derivados sintéticos también ha sustituido a las sustancias naturales en el tratamiento de menopausia, riesgo de aborto, etc. Sin embargo, es más probable que estos derivados sintéticos ocasione efectos secundarios tóxicos que las hormonas endógenas que son relativamente seguras. Aun cuando las modificaciones químicas de las hormonas naturales exhiben mejor actividad oral, también pueden causar una diversidad de efectos secundarios indeseables. Por ejemplo, se sabe que los derivados sintéticos de las hormonas naturales tienen un efecto estimulante adverso sobre la síntesis de proteínas en el hígado (con posibilidad de inducir trombosis) y exhiben un efecto diabetogénico, en contraste con las hormonas sexuales naturales . Por ejemplo, el estrógeno sintético se reabsorbe rápidamente en el tracto gastrointestinal. Debido a que se metaboliza con facilidad, se reabsorbe con rapidez en la membrana mucosa del intestino delgado y/o experimenta rápidos cambios químicos. En consecuencia, se pueden presentar importantes diferencias individuales en la biodisponibilidad. Por otra parte, los estradioles sintéticos pueden producir la acumulación indeseable de ciertos xenobióticos y se sabe que tienen propiedades carcinogénicas . También se sabe que las progestinas sintéticas presentan efectos secundarios indeseables entre los que se incluyen, por ejemplo, masculinización y efectos adversos en los niveles de colesterol, triglicéridos y proteínas de alta densidad. Las progestinas sintéticas también pueden provocar retención de líquidos y depresión. Otro efecto secundario adicional que puede afectar a sujetos que están en tratamiento anticonceptivo hormonal con medicamentos sintéticos, es la reducción/cese de la producción hormonal natural. Muchos sujetos también experimentan un desequilibrio hormonal indeseable derivado del cese de la ovulación originado por el efecto anticonceptivo de las hormonas sintéticas administradas. Por lo tanto, existe la necesidad urgente de una formulación farmacéutica que incluya hormonas endógenas que se puedan administrar en cantidades eficaces para proporcionar no sólo un efecto anticonceptivo sino también un efecto de reemplazo hormonal.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención aporta un medio para administrar hormonas naturales con una vida prolongada en el organismo por medio de un sistema de formulación de liberación prolongada conocido en la técnica de la invención como "depot" . La administración de las hormonas naturales precipita el efecto de retroalimentación negativa mientras que permite el reemplazo de las hormonas endógenas inhibidas . La presente invención proporciona una formulación farmacéutica para propósitos simultáneos de contracepción y de reemplazo hormonal, que comprende una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de una combinación de hormonas naturales o análogas hormonales. De preferencia, la formulación comprende por lo menos un estrógeno y por lo menos una progestina. Incluso con mayor preferencia, la formulación comprende las hormonas de origen natural 17-ß-estradiol (E2) y progesterona (P4). Al administrar cantidades eficaces de E2 y P4, las formulaciones de la presente invención permiten la anticoncepción eficaz y confiable sin los indeseables efectos secundarios que comúnmente se asocian con los anticonceptivos formulados con hormonas sintéticas activas por vía oral. Por otra parte, debido a que las formulaciones farmacéuticas están diseñadas para producir un perfil de disolución prolongado, las hormonas tienen tiempos de residencia media elevados y así se evitan los inconvenientes de la tradicional vida media corta de las hormonas naturales. Entre otras cosas, las formulaciones de la presente invención se preparan según los métodos expuestos en la Patente de los Estados Unidos Núm. 5360616 y se cristalizan según los métodos expuestos en la Patente de los Estados Unidos Núm. 6528094 Bl, los cuales se incorporan en la presente como referencia. Las formulaciones de la presente invención proporcionan beneficios de reemplazo hormonal eficaz. Debido a que las formulaciones están elaboradas con hormonas de origen natural, la administración de las mismas sirve para restaurar o suplir las hormonas que se encuentran en forma natural en caso de no ser producidas por un mamífero femenino en edad reproductiva. Los anticonceptivos convencionales que contienen hormonas sintéticas oralmente activas no ofrecen estos beneficios de reemplazo hormonal. Los agentes de estrógeno y progestina de las formulaciones de la presente invención están presentes en la formulación en una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal. En una base unitaria, las formulaciones de la presente invención contendrán aproximadamente 5 a 15 mg de 17-ß-estradiol y/o aproximadamente 200 a 500 mg de progesterona. Las modalidades particularmente preferidas son formulaciones que contienen aproximadamente 9 mg de 17-ß-estradiol y aproximadamente 400 mg de progesterona por dosis unitaria. Así, el término "cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal" de 17-ß-estradiol y progesterona, cuando se refiere a un mamífero y en particular en una mujer, significa que es una formulación que comprende 17-ß-estradiol y progesterona en una relación en peso aproximada de 1:40. De preferencia, la relación en peso aproximada es de 9:400. El término "dosis unitaria" se refiere a una cantidad suficiente para efectuar en un sujeto tanto la anticoncepción como la terapia de reemplazo hormonal a lo largo de al menos un ciclo menstrual completo. En una modalidad, la formulación farmacéutica comprende una pluralidad de microesferas que contienen al menos uno entre 17-ß-estradiol y progesterona; para la administración, las microesferas se suspenden en un vehículo acuoso. (En el sentido que se utiliza en la presente, el término "microesferas" incluye micropartículas, microcápsulas, liposomas y lo similar) . De preferencia, el estradiol y la progesterona en la microesfera están en forma cristalina. De conformidad con otro aspecto de la invención, la formulación farmacéutica comprende una preparación acuosa que contiene microesferas de un estrógeno y/o una progestina. Las microesferas de preferencia tienen un diámetro aproximado de 25 µm a 105 µm, con mayor preferencia de aproximadamente 35 fm a 75 fm. De preferencia, las microesferas están fabricadas con otros agentes, portadores y excipientes de tal manera que la formulación es adecuada para la administración parenteral mediante jeringa hipodérmica. Según otro aspecto de la presente invención, se puede lograr un efecto simultáneo, de anticoncepción y de reemplazo hormonal administrando a un sujeto una formulación farmacéutica que comprende una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona. Para esta administración el sujeto es de preferencia un mamífero hembra en edad reproductiva, aquí denominada también "hembra fértil". Según otro aspecto de la presente invención, un método para lograr efectos simultáneos de anticoncepción y de reemplazo hormonal, consiste en administrar a un sujeto una formulación farmacéutica que contiene microesferas de al menos uno entre 17-ß-estradiol y progesterona. De preferencia, la formulación es una dispersión o suspensión de las microesferas en un vehículo líquido. El 17-ß-estradiol y la progesterona están presentes en la formulación en una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal. En el caso de mujeres, la cantidad eficaz de 17-ß-estradiol es de aproximadamente 9 mg y la cantidad eficaz de progesterona es de aproximadamente 400 mg. Según otro aspecto de la invención, un método para lograr efectos simultáneos de anticoncepción y de reemplazo hormonal incluye la administración parenteral de una formulación farmacéutica de estrógeno/progestina a un sujeto. De preferencia, la formulación se administra por inyección intramuscular. Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención son formulaciones de liberación prolongada o retardada que se pueden administrar eficazmente en intervalos de aproximadamente cuatro semanas sin que se pierdan durante el periodo de intervención los efectos anticonceptivos o de reemplazo hormonal. Las formulaciones de la presente invención se pueden elaborar en una diversidad de formas para su almacenamiento, transporte o administración. Las formulaciones pueden elaborarse como microesferas, polvos, mezclas, suspensiones o geles. Cuando los agentes de estrógeno/progestina de las presentes formulaciones se presentan como dispersiones de microesferas en un vehículo acuoso para administración parenteral, el tamaño de partícula aproximado es de 25 µm a 105 µm y con mayor preferencia aproximadamente de 35 µm a 75 µm. Otro aspecto de la presente invención proporciona un estuche que comprende una formulación farmacéutica que contiene una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona. De preferencia, el estuche comprende una formulación que contiene microesferas, en donde las microesferas contienen al menos uno entre 17-ß-estradiol y progesterona y en donde la formulación contiene aproximadamente 9 mg de 17-ß-estradiol y aproximadamente 400 mg de progesterona. La presente invención, a través del uso de cantidades eficaces para la anticoncepción y para el reemplazo hormonal, de 17-ß-estradiol y progesterona, logra una importante ventaja que consiste en poder reducir de manera considerable o incluso eliminar los indeseables efectos secundarios que comúnmente se asocian con las formulaciones anticonceptivas convencionales que contienen hormonas sintéticas. Por otra parte, mediante el uso de cantidades eficaces de estas hormonas endógenas, la presente invención logra otra importante ventaja que consiste en proporcionar a los sujetos hormonas naturales a niveles equivalentes a la producción mensual natural promedio evitando así los indeseables desequilibrios hormonales .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1: Gráfica del perfil plasmático medio de estradiol a escala aritmética. Figura 2 : Gráfica del perfil plasmático de progesterona a escala aritmética.

Figura 3A: Difractograma de rayos X de microesferas de estradiol-colesterol (40:60) antes de la cristalización. Figura 3B: Difractograma de rayos X de microesferas de estradiol-colesterol (40:60) después de la cristalización. Figura 4: Perfil de disolución de microesferas de estradiol-colesterol (60:40) después de la cristalización en estado sólido según el método de la Patente de los Estados Unidos Núm. 6,528,094 Bl . Figura 5 : Perfiles de disolución comparativa de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas por el proceso de cristalización A (Ejemplo 2) y el proceso de cristalización B (Ejemplo 3) . Figura 6: DSC (calorimetría diferencial de barrido, por sus siglas en inglés) de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas según el proceso B. Figura 7 : Perfiles de disolución comparativa de microesferas de estradiol (E) ; y estradiol-colesterol (1:1), (1:2) y (1:3) tal como se usaron en el estudio clínico anticonceptivo y según el proceso de cristalización B. Figura 8 : Perfil plasmático de estradiol en función del tiempo para microesferas de estradiol (E) y estradiol-colesterol (1:1), (1:2) y (1:3) preparadas según el proceso de cristalización B. Figura 9: Perfil plasmático de estradiol en función del tiempo para microesferas de estradiol (E) y estradiol-colesterol (1:1), (1:2) y (1:3); dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B. Figura 10: Perfil plasmático de progesterona en función del tiempo para microesferas de estradiol (E) y estradiol-colesterol (1:1), (1:2) y (1:3); dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B. Figura 11: Perfil plasmático de la FHS (hormona estimulante de los folículos, por sus siglas en inglés,) en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (1:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra FHS endógeno. Figura 12 : Perfil plasmático de FHS en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (2:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra FHS endógeno. Figura 13: Perfil plasmático de la hormona luteinizante en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (1:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra la LH (hormona luteinizante, por sus siglas en inglés) endógena. Figura 14: Perfil plasmático de la hormona luteinizante en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (2:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra LH endógena. Figura 15 : Perfil plasmático de estradiol en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (3:1) y progesterona, y estradiol y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra estradiol endógeno. Figura 16: Perfil plasmático de estradiol en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (1:1) y progesterona, y estradiol-colesterol (2:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra estradiol endógeno. Figura 17: Perfil plasmático de progesterona en función del tiempo para microesferas de estradiol y progesterona y estradiol-colesterol (3:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra progesterona endógena. Figura 18: Perfil plasmático de progesterona en función del tiempo para microesferas de estradiol-colesterol (1:1) y progesterona y estradiol-colesterol (2:1) y progesterona; dosis de estradiol de 9 mg y progesterona de 400 mg; y preparadas según el proceso de cristalización B contra progesterona endógena. Figura 19: Perfiles de disolución comparativa de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas por los procesos de cristalización A, B y C. Figura 20: DSC de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas según el proceso C. Figura 21: Difractograma de rayos X de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas según el proceso C. Figura 22: Difractograma de rayos X de microesferas de estradiol-colesterol (1:1) preparadas según el proceso C.

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS En la presente invención, las cantidades eficaces para la anticoncepción y para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona, se administran de manera controlada a un sujeto para reducir en forma considerable y/o eliminar los efectos secundarios indeseables que comúnmente se asocian con terapias anticonceptivas de hormonas sintéticas. Por otra parte, la presente invención proporciona estas hormonas naturales en niveles equivalentes a su producción mensual natural promedio. En el sentido que se utiliza en la presente, el término "17-ß-estradiol" abarca cualquier forma, farmacéuticamente aceptable y con actividad estrogénica, del 17-ß-estradiol, por ejemplo, estra-1, 3, 5 (10) -trieno-3,17-ß-diol, que tiene la fórmula: o uno de sus esteres. El 17-ß-estradiol se puede obtener de fuentes naturales o sintetizarse. Para los fines de la presente invención, los esteres de 17-ß-estradiol adecuados incluyen, por ejemplo, los monoésteres en posición 3 como el benzoato de estradiol y el 3-acetato de estradiol; los monoésteres en posición 17 como cipionato de estradiol, 17-propionato de estradiol, 17-acetato de estradiol, 17-heptanoato de estradiol (enantato de estradiol) , 17-undecanoato de estradiol (undecilato de estradiol) y 17-valerato de estradiol; y los diésteres en posición 3 y 17, como el dipropionato de estradiol y el diacetato de estradiol, y lo similar y combinaciones de éstos. En el sentido que se utiliza aquí, el término "progesterona" se refiere a la pregn-4-ene-3,-20-diona, es decir, el compuesto de fórmula: e incluye la progesterona derivada de fuentes naturales y también la sintética. En las modalidades preferidas de la presente invención, las formulaciones farmacéuticas comprenden suspensiones acuosas de microesferas que contienen un estrógeno (por ejemplo, 17-ß-estradiol (E2)) y progestina (por ejemplo, progesterona (P4)) en una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal. Las microesferas individuales pueden contener tanto estrógeno como progestina. Sin tener en cuenta si tanto E2 como P4 están presentes en la microesfera, cada una se presenta en la formulación en una cantidad eficaz para proporcionar un efecto anticonceptivo y un efecto de reemplazo hormonal. De tal modo que si E2 y P4 no se presentan juntas en una microesfera individual, cada una está presente en cantidades eficaces en la formulación. Por otra parte, las microesferas de estas modalidades pueden contener otros esferoides endógenos como el colesterol. Los esferoides endógenos adicionales de preferencia son inertes con relación a los agentes estrógeno/progestina y tienen una solubilidad muy reducida en fluidos biológicos como la sangre. Cuando se formulan así, las microesferas de colesterol/estrógeno/progestina se preparan de tal manera que los agentes estrógeno/progestina se distribuyen con uniformidad en el esferoide relativamente inerte, de manera que la disolución de estos agentes es retardada pero continua y muy estable. De preferencia, el esferoide inerte así como el estrógeno y la progestina están en su forma cristalina dentro la microesfera. Como se verá después, la estable velocidad de disolución de los agentes activos, facilita la liberación controlada de los mismos durante un periodo prolongado. De preferencia, el periodo prolongado es por lo menos de un ciclo menstrual completo y en el caso de las mujeres es por lo menos de cuatro semanas . En modalidades de la invención, las cantidades de E2 y P4 eficaces para la anticoncepción y eficaces para el reemplazo hormonal son las cantidades que son adecuadas para proporcionar efectos simultáneos de anticoncepción y reemplazo hormonal. En particular, con respecto al efecto anticonceptivo, la cantidad eficaz de E2 y P4 es una cantidad que es suficiente para actuar sobre el hipotálamo y la pituitaria del sujeto que se trata e inhibir la liberación de las hormonas gonadotrópicas necesarias para mantener la función ovárica normal . Por otra parte, la cantidad eficaz de E2 y P4 para reemplazo hormonal es una cantidad suficiente para reemplazar de manera considerable el suministro natural de estas hormonas cuya producción endógena se reduce y/o elimina al cesar la ovulación. En modalidades preferidas de la invención, las cantidades de E2 y P4 eficaces para la anticoncepción y eficaces para el reemplazo hormonal son aquellas adecuadas para lograr el efecto deseado en una paciente mujer, las cuales para una dosis unitaria son aproximadamente 5 mg a 15 mg de estradiol y aproximadamente 300 mg a 500 mg de progesterona. Las modalidades con mayor preferencia comprenden aproximadamente 9 mg de 17-ß-estradiol y aproximadamente 400 mg de progesterona. La formulación de la presente invención comprende microesferas que contienen hormonas que permiten la administración reproducible, previsible y controlada de las hormonas que contienen. Varias de las características fisicoquímicas de las microesferas son importantes para lograr la liberación controlada de las hormonas . En particular, la solubilidad, el tamaño, y la composición polimérica de las microesferas tienen un efecto considerable en la velocidad de liberación. Por ejemplo, mientras mayor es el diámetro de la microesfera más tiempo toma que el nivel hormonal llegue a niveles no detectables. En la presente invención, el diámetro aproximado de las microesferas es de preferencia de 25 µm a 125 µm; con mayor preferencia de aproximadamente 35 µm a 105 µm; y con la máxima preferencia de aproximadamente 35 µm a 75 µm. Como las hormonas naturales E2 y P4 se degradan metabólicamente cuando se administran por vía oral, la formulación de la presente invención de preferencia se administra por administración parenteral, especialmente inyección intramuscular. En los métodos de la presente invención, el objetivo es proporcionar un efecto anticonceptivo y de manera simultánea proporcionar un efecto de reemplazo hormonal suministrando niveles naturales de E2 y P4. También, las formulaciones farmacéuticas y métodos de la presente invención promueven la aparición mensual de ciclos menstruales saludables de aproximadamente 28 días + 3 días. En modalidades preferidas, las formulaciones de la presente invención se administran a la paciente por inyecciones mensuales utilizando los medios de inyección adecuados, por ejemplo, una jeringa con aguja hipodérmica de calibre 18 ó 20. Las formulaciones farmacéuticas preferidas de la presente invención contienen cantidades eficaces para la anticoncepción y eficaces para el reemplazo hormonal de un estrógeno y una progestina preparadas en una formulación de liberación retardada o prolongada. Estas formulaciones de liberación retardada pueden incluir el estrógeno y la progestina combinadas con un portador, excipiente o ligante con solubilidad reducida en los fluidos biológicos en el sitio de administración. Por ejemplo, estas formulaciones de liberación retardada pueden contener microesferas en donde el estrógeno y la progestina están combinadas con un esferoide natural como el colesterol. El colesterol tiene una solubilidad muy baja en fluidos como la sangre en comparación con los estrógenos y la progestinas y por ello disminuye la disolución de estos agentes activos y en consecuencia retarda la liberación de los mismos en el torrente sanguíneo. Información adicional que puede ser útil en la preparación de estas formulaciones de microesferas de liberación retardada se encuentra en las Patentes de los Estados Unidos Núms . 5,360,616; 5,512,303; 5,633,014; 5,643,604 y 6,287,693, las cuales se considera forman parte de la presente, como referencia. Al menos en una modalidad preferida, una formulación de liberación retardada de la presente invención se prepara mezclando el estrógeno y la progestina perfecta y uniformemente con el vehículo de colesterol. La mezcla estrógeno/progestina/colesterol se puede fundir, congelar y/o esxtruir o procesar de cualquier otro modo para producir una pluralidad de partículas de tamaño y forma deseadas y someterse a una cristalización en estado sólido como se expone la Patente de los Estados Unidos Núm. 6,287,693. La patente '693 expone un proceso de cristalización en estado sólido mediante el cual a partir de una composición de morfologías mixtas se obtienen partículas de tamaño y forma deseadas que posteriormente se cristalizan en el tipo polimorfo más estable de cada uno de los respectivos constituyentes que las partículas pierdan sus características de tamaño y forma al exponerse a un medio que contiene alta concentración atmosférica de uno o más disolventes. Las partículas cristalinas resultantes son estables durante en almacenamiento, es decir, se pueden empacar y almacenar como sólido seco o polvo o como una suspensión en un vehículo acuoso, durante largos periodos de tiempo (por ejemplo, por lo menos aproximadamente un mes) sin que se pierdan las características de tamaño y forma. Debido a que el proceso de cristalización en estado sólido permite obtener alta pureza y estabilidad, las partículas de la presente invención se pueden fabricar con o sin excipientes adicionales, amortiguadores, estabilizantes, conservadores y biocidas. La posibilidad de fabricar partículas con tamaño y forma deseados es una importante ventaja ya que proporciona un medio para asegurar tamaños y formas de partícula consistentes e incluso uniformes que a su vez permiten una fácil administración (por ejemplo, mediante jeringa hipodérmica) y una disolución y liberación controlada y previsible del agente o los agentes activos. En modalidades particularmente preferidas, las partículas son microesferas. Otra modalidad preferida de la invención comprende una formulación de liberación retardada que contiene una pluralidad de microesferas en suspensión en un vehículo acuoso, las microesferas contienen 17-ß-estradiol, progesterona y colesterol y la formulación contiene 17-ß-estradiol y progesterona en una relación de aproximadamente 1:40 en peso. Las formulaciones de la presente invención se pueden administrar por cualquier vía de administración convencional. La vía de administración preferida es la parenteral y la que tiene mayor preferencia es la inyección intramuscular (IM) . Cuando se administra por vía parenteral, se prefiere que la formulación se presente como un fluido ya sea en solución o como una mezcla en suspensión. De preferencia, la formulación contiene las microesferas descritas anteriormente presentadas en una suspensión o en un vehículo acuoso. Como una opción, la formulación se puede preparar como un polvo que se mezcle con un vehículo y se administre. En estas modalidades, la formulación farmacéutica se puede envasar y comercializar como parte de un estuche. Este estuche puede contener dosis múltiples o unitarias de: (1) un polvo que contiene los agentes activos combinados con excipientes, aditivos, amortiguadores, conservadores y lo similar; (2) cantidades en dosis múltiples o unitarias de un portador líquido que opcionalmente contenga amortiguadores, conservadores y/o biocidas; y (3) un dispositivo para inyección, por ejemplo, una jeringa hipodérmica, de preferencia una jeringa con aguja de calibre 18 ó 20. Otra opción más para la administración de las formulaciones de la presente invención es la vía transdérmica . El suministro transdérmico de medicamentos se puede llevar a cabo por diversos medios que incluyen la inyección de un polvo, como se hace por un método biolístico en el que las partículas se aceleran mediante un gas u otro medio y se hacen pasar a través de la piel. Un ejemplo de este enfoque se describe en las Patentes de los Estados Unidos Núm. 6,168,587, titulada "Needless syringe using supersonic gas flow for partióle delivery" (Jeringa sin aguja que utiliza flujo supersónico de gas para el suministro de partículas) y Núm. 6,475,181, titulada "Drug partióle delivery" (Suministro de partículas de medicamento) , las cuales se considera forman parte de la presente, como referencia. El suministro transdérmico también se puede llevar a cabo en forma pasiva mediante parches adhesivos aplicados sobre la piel durante periodos prolongados. Estos parches se describen, por ejemplo, en la Patente de los Estados Unidos Núm. 6,149,935 titulada " Solid matrix system for transdermal drug deliver" (Sistema de matriz sólida pata el suministro transdérmico de medicamentos) la cual se considera forma parte de la presente, como referencia. Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar eficazmente a cualquier organismo mamífero, por ejemplo, primates, caninos, felinos, ovinos, equinos, porcinos, bovinos o murinos. De preferencia, el sujeto es un organismo primate y con mayor preferencia es una mujer. Se entenderá que el estrógeno y la progestina específicos utilizados en las formulaciones pueden variar para los diferentes mamíferos y también las cantidades . La formulación que contiene las microesferas de la presente invención se puede preparar por cualquier método adecuado. En una modalidad preferida, las microesferas se preparan por calentamiento de E2 y/o P4 que luego se enfrían rápidamente y así las microesferas se cristalizan lo suficiente. Después de la cristalización, las cápsulas se pueden recolectar por filtración conforme al tamaño de partícula. Por lo general, las microesferas con mayor tamaño disminuyen la concentración máxima de las hormonas y el tiempo requerido para lograr esa concentración. Por otra parte, las microesferas de mayor tamaño aumentan la vida media de absorción de hormona. Según otro aspecto de la invención, se proporciona un estuche para usarse en anticoncepción y terapia de reemplazo hormonal. El estuche puede comprender una formulación farmacéutica según la invención, la cual contiene una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona. El estuche también puede comprender uno o más componentes adicionales, por ejemplo, una ampolleta estéril que contenga un vehículo acuoso para reconstituir la formulación y obtener una suspensión homogénea, en caso de que la formulación se presente como microesferas en forma de polvo estéril. El estuche también puede incluir medios para administrar la formulación, por ejemplo, jeringas con agujas de calibre 18 y/o 20 para inyección intramuscular.

Se prevé que las composiciones de la presente invención se puedan formular y administrar según el siguiente protocolo. Una formulación de microesferas que contiene 9 mg de E2/400 mg de P4 se prepara como un polvo estéril en donde el tamaño de las microesferas varía entre aproximadamente 35 fm y 75 fm, de preferencia entre aproximadamente 39 fm y 52 fm. En ciertas modalidades preferidas, el polvo se envasa seco en jeringas de dosis unitaria. Para inyección intramuscular se prefieren las jeringas con agujas de calibre aproximado de 18 ó 20. De preferencia, las jeringas se empacan en empaque estéril y hermético y se almacenan en condiciones ambientales entre aproximadamente 15EC y 30EC. La formulación en polvo preenvasada se puede suspender en un vehículo acuoso. En una modalidad preferida, el vehículo acuoso se toma de una ampolleta estéril que contiene 3.0 mi de un vehículo acuoso. Un vehículo acuoso preferido que se utiliza para suspender las microesferas está constituido por: Metil parabeno NF 4.11 mg Propil parabeno NF 0.45 mg Manitol NF 144 mg Carboximetilcelulosa sódica USP de baja viscosidad 2.25 mg Polisorbato 80 NF 0.60 mg Agua inyectable USP 3.00 mg La persona con experiencia ordinaria en la técnica comprenderá que la composición y las concentraciones relativas de un vehículo acuoso de este tipo no son críticas para la presente invención y se pueden variar sin que se alteren o disminuyan considerablemente las ventajas o utilidad de la presente invención. La reconstitución se puede hacer mediante agitación vigorosa hasta obtener una suspensión homogénea. De preferencia, la suspensión resultante se administra por inyección intramuscular profunda, por ejemplo, en la región glútea. La primera dosis se deberá administrar en los primeros cinco días contados a partir del comienzo de la última menstruación. Las dosis siguientes se administrarán en un esquema de cada 28 ± 3 días. Por facilidad y comodidad las dosis siguientes se pueden administrar alternando las regiones glúteas. Como alternativa, las formulaciones farmacéuticas de progesterona/estradiol de la presente invención se pueden preparar como una formulación de liberación lenta de estradiol . Una formulación farmacéutica constituida por progesterona y microesferas de estradiol y colesterol produjo un efecto anticonceptivo confiable. Véase más adelante, Ejemplo 1, artículo de prueba B. Una reconocida ventaja de las formulaciones anticonceptivas parenterales que contienen estradiol es su alta solubilidad en solución acuosa. Las microesferas que contienen estradiol se pueden formular mediante un tratamiento postfabricación o sometiéndolas a templado. Es decir, primero se producen las microesferas con el tamaño y forma deseadas, se someten a un tratamiento o a una etapa de templado en atmósfera controlada y luego se secan y/o se recuperan. Dependiendo del tratamiento, las microesferas EC (que contienen estradiol) tienen una velocidad de disolución de estradiol en solución acuosa en 24 horas de aproximadamente 20% o menos y de preferencia de aproximadamente 15% o menos. Las modalidades que tienen mayor preferencia son las que tienen una velocidad de disolución aproximada de 10% o menos; y las que tienen aún más preferencia son aquelllas que tienen una velocidad de disolución de estradiol aproximada de 6% o menos. La EDR (velocidad de disolución de estradiol, por sus siglas en inglés) es una medida de la cantidad de estradiol disuelto en una solución acuosa de 0.3% p/v de monooleato de polioxietilensorbitán (Tween 80®) en agua purificada USP durante 24 horas a 37 °C y a presión estándar . La producción de partículas con baja EDR facilita la preparación de una formulación farmacéutica para HRT (terapia de reemplazo hormonal, por sus siglas en inglés) que contenga muy baja concentración de estradiol. Estas composiciones con baja concentración de estradiol se adaptan muy bien en pacientes que necesitan HRT durante los primeros cinco años de la menopausia. Por otra parte, las formulaciones que tienen baja EDR facilitan un régimen de tratamiento que implique menos cursos de administración o con menor frecuencia. Se considera que las formulaciones de esta invención se pueden administrar con poca frecuencia, por ejemplo, mensual o cada dos meses. Los estudios por difracción de rayos X de las partículas que muestran estas bajas velocidades de disolución de estradiol, sugieren que las partículas son agregados moleculares con una composición hemicristalina que incluye tanto un componente amorfo como un componente cristalino. Las composiciones con baja EDR son aquellas en las que el estradiol está constituido aproximadamente por 45% a 65% de un componente amorfo y aproximadamente 35% a 55% de un componente cristalino. De preferencia, las partículas tienen aproximadamente 50-60% de componente amorfo y aproximadamente 40-50% de componente cristalino. Con mayor preferencia, las partículas tienen aproximadamente 55% de componente amorfo y aproximadamente 45% de componente cristalino. De preferencia, estas composiciones de baja EDR se formulan a partir de una mezcla con una relación molar 1:1 de estradiol : colesterol . Sin limitarse a ninguna teoría o principio científico, los solicitantes creen que la solubilidad reducida y el perfil de baja disolución se pueden atribuir a la orientación del componente amorfo y el componente cristalino, dentro del agregado molecular o la composición molecular. Es decir, se considera que la superficie exterior de la partícula está constituida principalmente por el componente amorfo, de tal manera que las moléculas de estradiol orientan su porción predominantemente hidrófoba hacia el disolvente y hacen a las partículas prácticamente insolubles en agua. Se pueden formular partículas de estradiol de liberación lenta, combinando estradiol y colesterol en una relación molar 1:1, la composición se fabrica formando partículas de tamaño y forma deseados que se someten a una atmósfera saturada de disolventes durante un periodo prolongado de tiempo y a una temperatura elevada, después las partículas se secan también a temperatura elevada. En una modalidad, las partículas fabricadas se exponen a una atmósfera de baja humedad relativa (HR) por aproximadamente 12 horas o más, antes de exponerlas a la atmósfera saturada de disolvente. De preferencia, las partículas se formulan como microesferas. Las microesferas que tienen una EDR aproximada de 15% o más se pueden formular de la siguiente manera: se forman partículas que básicamente tienen una relación molar 1:1 de estradiol y colesterol y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; las partículas se exponen a una atmósfera de aproximadamente 25% o menos de humedad relativa (HR) durante al menos 12 horas; las partículas se exponen a una atmósfera saturada con acetona y agua durante al menos 48 horas aproximadamente entre 50° y 65 °C; las partículas se secan entre aproximadamente 35° y 50°C durante aproximadamente 24 horas o más; las partículas se recuperan; la EDR de las partículas recuperadas es menor de 15% (en peso) aproximadamente en 24 horas. Con mayor preferencia, el método incluye formar partículas constituidas básicamente de estradiol y colesterol en las que cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; las partículas se exponen a una atmósfera de baja HR (humedad relativa) ) durante al menos 24 horas; las partículas se exponen a una atmósfera saturada con acetona y agua durante al menos 72 horas aproximadamente a 60°C; las partículas se secan a 45 °C aproximadamente durante aproximadamente 42 horas; las partículas se recuperan; la velocidad de disolución de estradiol de las partículas recuperadas en solución acuosa, es menor de aproximadamente 6% (en peso) en 24 horas. Las concentraciones relativas de acetona y agua que saturan la atmósfera son de aproximadamente 65 a 80% moles y de aproximadamente 20 a 35% moles, respectivamente.

De preferencia, las concentraciones relativas son de aproximadamente 70 a 75% moles de acetona y de •aproximadamente 25 a 30% de agua. Con la máxima preferencia, las concentraciones de los dos componentes son de aproximadamente 72% moles de acetona a aproximadamente 28% moles de agua. La baja humedad relativa del ambiente es de aproximadamente 25% HR o menos y de preferencia de aproximadamente 20% o menos. Como alternativa, las partículas que tienen una EDR aproximada de 20% o menos se pueden formular por la exposición sucesiva a una atmósfera que contenga acetona/agua y a una atmósfera que contenga etanol/agua. El método consiste en: (a) formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol en una relación molar aproximada de 1:1 y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; (b) exponer las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua; (c) repetir el paso (b) al menos una vez y de preferencia dos veces; (d) exponer las partículas a una atmósfera saturada con etanol y agua; (e) secar las partículas; y (f) recuperar las partículas; la velocidad de disolución del estradiol a partir de las partículas recuperadas, en la solución acuosa, es menor de aproximadamente 20% (en peso) en 24 horas . En modalidades preferidas, las partículas se exponen a los vapores de una mezcla de acetona/agua durante aproximadamente dos a cinco periodos consecutivos de al menos 12 horas y aproximadamente a 20-40°C. De preferencia, la fase de acetona/agua se lleva a cabo en tres periodos consecutivos aproximadamente en 24 horas y aproximadamente a 30°C. La concentración relativa de la mezcla acetona/agua es igual a la mencionada anteriormente; y la mezcla de etanol/agua tiene una concentración relativa aproximada de 95 a 99% moles de etanol y aproximadamente 5 a 1 moles de agua. Las partículas se pueden secar a aproximadamente 40 a 50°C, de preferencia aproximadamente 45 °C durante aproximadamente 24 horas o más y de preferencia 36 horas aproximadamente. Las etapas de secado descritas aquí se pueden realizar a vacío o en presencia de aire. Con mayor preferencia, el método alternativo consiste en: formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol en una relación molar aproximada de 1 : 1 y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; exponen las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua a 30 °C aproximadamente durante tres periodos consecutivos de aproximadamente 24 horas; exponer las partículas a una atmósfera saturada con etanol y agua durante dos horas aproximadamente y a 30°C aproximadamente; secar las partículas a 45°C aproximadamente durante aproximadamente 42 horas; y recuperar las partículas; la velocidad de disolución del estradiol a partir de las partículas recuperadas, en la solución acuosa, es menor de aproximadamente 20% (en peso) en 24 horas. Los métodos de la presente invención proporcionan medios para fabricar microesferas de estradiol y colesterol que tienen una EDR aproximada menor de 20% (en peso) . Las modalidades preferidas tienen una EDR aproximada de 15% o menos y con mayor preferencia 6% o menos. El estradiol de las microesferas de la presente invención es una forma hemicristalina o compuesta en donde aproximadamente 50 a 60% es amorfa y aproximadamente 40 a 50% es cristalina. Las modalidades preferidas son aquellas en las que el estradiol es aproximadamente 55% amorfo y aproximadamente 45% cristalino. Las partículas de estradiol/colesterol de baja EDR de los métodos mencionados anteriormente, se pueden combinar con progesterona para hacer formulaciones con bajas dosis de estradiol que se puedan administrar cada mes o con menos frecuencia. Por ejemplo, la invención proporciona una formulación farmacéutica que contiene aproximadamente 5 a 15 mg de 17-ß-estradiol mezclado con colesterol en una relación molar aproximada de 1:1 y aproximadamente 300 a 400 mg de progesterona; en donde la relación aproximada de 17-ß-estradiol a progesterona es de 1:40, el 17-ß-estradiol está constituido por una forma hemicristalina que es aproximadamente 50 a 60% amorfa y aproximadamente 40 a 50% cristalina y la EDR aproximada de la formulación es de 20% o menos. La formulación farmacéutica se puede preparar con partículas de estradiol/colesterol combinadas con partículas de una progestina, de preferencia progesterona. De preferencia, las partículas son microesferas. Las partículas también pueden incluir aditivos y excipientes, por ejemplo, lubricantes, amortiguadores, estabilizantes y lo similar. Por otra parte, para la administración parenteral las partículas se pueden suspender en un vehículo. Esas formulaciones tienen un efecto anticonceptivo y se pueden usar eficazmente en regímenes de reemplazo hormonal que incluyan la administración parenteral una vez al mes o cada dos meses. De preferencia, la formulación se administra por inyección intramuscular. Se considera que sin mayor descripción, un técnico con experiencia ordinaria puede fabricar y usar las formulaciones de la presente invención y llevar a la práctica los métodos reivindicados utilizando la descripción que antecede y los siguientes ejemplos ilustrativos. Por lo tanto, los siguientes ejemplos realizados ilustran las modalidades preferidas y los métodos para usar y llevar a la práctica la presente invención y de ninguna manera se interpretarán como limitativos del resto de la exposición. EJEMPLO 1 ESTUDIO FARMACOCINÉ ICO EN CONEJOS PARA EVALUAR LA BIODISPONIBILIDAD DE DIFERENTES COMBINACIONES DE MICROESFERAS DE PROGESTERONA Y MICROESFERAS DE ESTRADIOL Y MICROESFERAS CON DIFERENTES PROPORCIONES DE ESTRADIOL Y COLESTEROL Este estudio está enfocado a la evaluación del perfil farmacocinético de artículos de prueba que contienen progesterona (P, Progesterone) y 17-ß-estradiol (E, Estradiol) . Se realizó un estudio prospectivo y comparativo en conejos machos de Nueva Zelanda. Los artículos de prueba consistieron en suspensiones acuosas que tenían como vehículo acuoso el que se describió anteriormente formado por microesferas de progesterona y microesferas de estradiol (E) o estradiol colesterol (EC, Estradiol Cholesterol) , fabricadas por el proceso expuesto en la Patente de los Estados Unidos Núm. 5,360,616 y cristalizado conforme a la Patente de los Estados Unidos Núm. 6,528,094 Bl . Los artículos evaluados fueron los siguientes: Artículo de prueba Composición A Microesferas P (ME) + E ME B P ME + (1:1) Estradiol colesterol ME C P ME + (2:1) Estradiol colesterol ME D P ME + (3:1) Estradiol colesterol ME Las suspensiones acuosas se administraron en forma de inyecciones intramusculares. Cada conejo recibió 133 mg de progesterona y 3 mg de estradiol. Las muestras de sangre se recolectaron en el tiempo 0 (predosis) , a las 1, 2, 4 y 9 horas, del día 2 al 14 todos los días y del día 14 al 28 cada tercer día. En las muestras resultantes se evaluaron progesterona y estradiol por técnicas de RÍA (radioinmunoensayo, por sus siglas en inglés) . A partir de los perfiles plasmáticos, se calcularon los siguientes parámetros: AUC_INF (área bajo la curva al infinito, por sus siglas en inglés) , ABC0_t (área bajo la curva hasta el último tiempo de muestreo, por sus siglas en inglés) , Cma? (concentración plasmática máxima, , por sus siglas en inglés), tiempo para lograr la Cma? (Tmax) , vida media (t2) , constante de eliminación (Kc) y MRT (tiempo de residencia medio, por sus siglas en inglés) . Estos resultados se analizaron estadísticamente con la finalidad de evaluar cualquier posible diferencia entre los grupos. Por lo que se refiere a la comparación de los parámetros calculados para estradiol, aunque el análisis no mostró evidencia de posibles diferencias entre los grupos que fueran significativas desde el punto de vista estadístico (p<0.05), como se ve en el siguiente cuadro, existen diferencias en el MRT ya que el MRT para EC ME (1:1) (artículo de prueba B) fue casi dos veces mayor que para las microesferas E (artículo de prueba A) , como puede observarse en el siguiente cuadro: ARTICULO DE PRUEBA A B D MRT ( días ) 4 . 56 ± 1 . 05 8.33 ± 2.61 5.01 ± 0.55 6.40 ± 2.27 CV 23 . 3 31.3 11 35.5 n 4 4 4 En lo que respecta a la comparación de los parámetros calculados para progesterona, aun cuando se observó variabilidad no se encontró diferencia estadísticamente significativa (p<0.05) entre los grupos.

Análisis gráfico : En las Figuras 1 y 2 se presentan perfiles plasmáticos medios de estradiol y progesterona para los cuatro artículos de prueba evaluados. Según los resultados para estradiol y progesterona y aun cuando el análisis estadístico no mostró evidencia de diferencias entre grupos, el análisis gráfico de los perfiles plasmáticos (véase la Figura 1) mostró diferente comportamiento. Esto se puede atribuir al tamaño pequeño de la muestra.

EJEMPLO 2 (COMPARATIVO) Microesferas de una mezcla de 49% de 17-ß-estradiol y 51% de colesterol. Este ejemplo comparativo es análogo a la fabricación de partículas según el Ejemplo 7 de la Patente de los Estados Unidos Núm. 6,528,094 Bl, la cual se considera forma parte de la presente, como referencia (también denominado aquí "proceso de cristalización A"). Las microesferas de estradiol/colesterol se pueden combinar con microesferas de progesterona para producir la formulación farmacéutica del artículo de prueba B del Ejemplo 1 anterior. Las microesferas de esta mezcla se obtuvieron fundiendo los componentes juntos, como en el caso de las substancias puras, formando por aspersión pequeñas gotas y congelándolas en forma de microesferas . Inicialmente las microesferas mostraron un alto contenido amorfo. Al colocar las microesferas en un recipiente de 7 litros aproximadamente y exponerlas durante 24 horas a 30 °C los vapores de 8 mi de etanol retenido en un material celulósico poroso, las microesferas amorfas cristalizaron por completo en la presencia de los vapores. Las microesferas se secaron a 60°C y a vacío durante 24 horas, el etanol residual presente en las microesferas fue menor de 0.01%.

Para evaluar la estabilidad de las microesferas, las microesferas no cristalizadas (sólo fundidas y congeladas) y las microesferas según la presente invención se colocaron por separado en una solución acuosa a 40°C y se observaron por microscopía óptica después de 82 días. Según se observó por microscopía óptica, las microesferas cristalizadas según la presente invención permanecieron estables a través del tiempo cuando se colocaron en agua mientras que no sucedió lo mismo con las microesferas no cristalizadas. Las microesferas cristalizadas resultantes presentaron morfología estable durante 82 días cuando se colocaron en una solución al 0.01% de Polisorbato 80 en agua purificada USP a 40°C o durante 14 días cuando se inyectaron por vía intramuscular en conejos. La Figura 3 muestra el difractograma de rayos X de las microesferas EC (40:60) antes y después de la cristalización; y la Figura 4 muestra el correspondiente perfil de disolución (es decir, 74% de estradiol disuelto a las 24 horas en una solución acuosa de Tween 80®) .

EJEMPLO 3 Proceso de cristalización modificado para EC ME que presenta 20% de disolución en 24 horas ("proceso de cristalización B") Se prepararon microesferas de estradiol-colesterol (1:1) en la misma forma que en el Ejemplo 2. Las microesferas con alto contenido amorfo se expusieron a vapores de acetona y agua (95% moles de acetona: 5% moles de agua) durante tres periodos consecutivos de 24 horas a 30 °C. Entre los periodos, los recipientes herméticos se abrieron y sus contenidos se secaron con aire, el disolvente residual se eliminó y las microesferas de estradiol después se sometieron al siguiente periodo de exposición al vapor. Luego, las partículas se calentaron (se desecaron) a 45 °C durante 42 horas y a vacío (aproximadamente 12.2 pulgadas de Hg) . Las partículas resultantes produjeron una . EDR promedio aproximada de 20%. Véase la Figura 5.

EJEMPLO 4 Proceso de cristalización para disolución excesivamente baja de microesferas de estradiol-colesterol ("proceso de cristalización C") Se prepararon microesferas de estradiol-colesterol según el proceso del Ejemplo 2. Las partículas se almacenaron a baja humedad relativa durante 24 horas. Después, las partículas se expusieron a vapores de acetona y agua (72% moles de acetona/28% moles de agua) durante 72 horas a 60°C. Luego, las partículas se calentaron (se desecaron) a 45 °C durante 42 horas. Las partículas resultantes tuvieron un promedio aproximado de 5% de disolución de estradiol en 24 horas en una solución acuosa al 0.3% de monooleato de polioxietilensorbitán (Tween 80®) a temperatura y presión estándar . La Figura 19 ilustra el perfil de disolución de las partículas de este ejemplo comparado con los que resultaron de los métodos de los Ejemplos 2 y 3. La Figura 20 muestra el perfil de DSC de las partículas obtenidas en este ejemplo. Las Figuras 21 y 22 son difractogramas de rayos X de las partículas obtenidas en el Ejemplo 4. Aun cuando la presente invención se ha descrito con relación a modalidades específicas, esta solicitud pretende cubrir los diversos cambios y sustituciones que pudieran realizar las personas con experiencia ordinaria en la técnica sin desviarse del espíritu y alcance de las reivindicaciones adjuntas.

Claims (52)

1. REIVINDICACIONES : 1. Un método para hacer una formulación de estradiol de liberación lenta, el método consiste en: (a) formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; (b) exponer las partículas a una atmósfera con aproximadamente 25% de HR o menos durante al menos 12 horas aproximadamente; (c) exponer las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua durante al menos 48 horas y a una temperatura aproximada entre 50 y 65 °C: (d) secar las partículas a una temperatura aproximada entre 35 y 50°C durante aproximadamente 24 horas o más; y (e) recuperar las partículas; en donde la EDR de las partículas recuperadas es menor de aproximadamente 15%.
2. 2. El método según la reivindicación 1, en donde el estradiol es 17-ß-estradiol.
3. 3. El método según la reivindicación 1, en donde la EDR es menor de aproximadamente 10%.
4. 4. El método según la reivindicación 1, en donde la EDR es menor de aproximadamente 6%.
5. 5. El método según la reivindicación 1, en donde la atmósfera de acetona/agua es de aproximadamente 72% moles de acetona y aproximadamente 20% moles de agua.
6. 6. Un método para hacer una formulación de estradiol de liberación lenta, el método consiste en: (a) formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; (b) exponer las partículas a una atmósfera con aproximadamente 25% de HR o menos durante aproximadamente 24 horas; (c) exponer las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua durante aproximadamente 72 horas y a una temperatura aproximada de 60 °C; (d) secar las partículas a 45 °C aproximadamente durante aproximadamente 42 horas; y (e) recuperar las partículas; en donde la EDR de las partículas recuperadas es menor de aproximadamente 6% .
7. 7. El método según la reivindicación 6, en donde el estradiol es 17-ß-estradiol .
8. 8. El método según la reivindicación 6, en donde el estradiol en la partícula recuperada es 17-ß-estradiol hemicristalino que es aproximadamente 55% amorfo y aproximadamente 45% cristalino.
9. 9. Un método para hacer una formulación de estradiol de liberación lenta, el método consiste en: (a) formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; (b) exponer las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua; (c) repetir el paso (b) ; (d) exponer las partículas a una atmósfera saturada con etanol y agua; (e) secar las partículas; y (f) recuperar las partículas; en donde la EDR de las partículas recuperadas es menor de aproximadamente 20%.
10. 10. El método según la reivindicación 9, en donde la mezcla de acetona y agua es de aproximadamente 95% moles de acetona y aproximadamente 10% moles de agua.
11. 11. El método según la reivindicación 9, en donde la mezcla de etanol y agua es de aproximadamente 95% moles de etanol y aproximadamente 5% moles de agua.
12. 12. El método según la reivindicación 9, en donde el paso (b) se realiza aproximadamente en 24 horas y el paso (c) se realiza dos veces.
13. 13. Un método para hacer una formulación de estradiol de liberación lenta, el método consiste en: (a) formar partículas constituidas básicamente por estradiol y colesterol y en donde cada uno o los dos son amorfos o polimorfos; (b) exponer las partículas a una atmósfera saturada con acetona y agua a 30 °C aproximadamente durante tres periodos consecutivos de aproximadamente 24 horas; (c) exponer las partículas a una atmósfera saturada con etanol y agua durante aproximadamente dos horas y a una temperatura aproximada de 30 °C: (d) secar las partículas a 45 °C aproximadamente durante aproximadamente 42 horas; y (e) recuperar las partículas; en donde la EDR de las partículas recuperadas es aproximadamente de 18% o menos.
14. 14. El método según la reivindicación 13, en donde la mezcla de acetona y agua es de aproximadamente 95% moles de acetona y aproximadamente 5% moles de agua.
15. 15. El método según la reivindicación 13, en donde la mezcla de etanol y agua es de aproximadamente 95% moles de etanol y aproximadamente 5% moles de agua.
16. 16. Una formulación farmacéutica que comprende aproximadamente de 5 a 15 mg de 17-ß-estradiol mezclado con colesterol en una proporción molar aproximada de 1:1 y aproximadamente 200 a 500 mg de progesterona; en donde la relación aproximada en peso de 17-ß-estradiol con respecto a progesterona es 1:40; el 17-ß-estradiol está constituido por una forma hemicristalina que es aproximadamente 50 a 60% amorfa y aproximadamente 40 a 50% cristalina; y la EDR aproximada de la formulación es de 20% o menos.
17. 17. La formulación farmacéutica según la reivindicación 16, en donde el 17-ß-estradiol está constituido por una forma hemicristalina que es aproximadamente 55% amorfa y aproximadamente 45% cristalina.
18. 18. La formulación farmacéutica según la reivindicación 16, en donde la EDR es de aproximadamente 6% o menos .
19. 19. La formulación farmacéutica según la reivindicación 16, en donde la mezcla estradiol/colesterol y la progesterona se formulan como microesferas con un diámetro aproximado de 35 a 75 µm.
20. 20. Microesferas de estradiol y colesterol con una relación molar 1 : 1 que tienen una EDR aproximada de 6% o menos .
21. 21. Las microesferas según la reivindicación 20, que tienen un espectro cristalográfico de rayos X prácticamente igual al de la Figura 22.
22. 22. Las microesferas según la reivindicación 20, en donde el estradiol está constituido por una forma hemicristalina que es aproximadamente 50 a 60% amorfa y aproximadamente 40 a 50% cristalina.
23. 23. Las microesferas según la reivindicación 20, en donde el estradiol está constituido por una forma hemicristalina que es aproximadamente 55% amorfa y aproximadamente 45% cristalina.
24. 24. Las microesferas según la reivindicación 20, en donde el estradiol es 17-ß-estradiol .
25. 25. Un método para realizar de manera simultánea anticoncepción y terapia de reemplazo hormonal en un mamífero hembra, el método consiste en administrarle una formulación farmacéutica que contiene partículas de 17-ß-estradiol y colesterol en una relación molar aproximada de 1:1 y partículas de progesterona; en donde la relación aproximada en peso de 17-ß-estradiol y progesterona es 1:40 y en donde el 17-ß-estradiol es aproximadamente de 50 a 60% amorfo y aproximadamente de 40 a 50% cristalino.
26. 26. El método según la reivindicación 25, en donde la formulación farmacéutica tiene una EDR aproximada de 10% o menos.
27. 27. El método según la reivindicación 25, en donde la formulación farmacéutica tiene una EDR aproximada de 6% o menos .
28. 28. El método según la reivindicación 25, en donde la formulación farmacéutica contiene aproximadamente 5 a 15 mg de 17-ß-estradiol y aproximadamente 300 a 500 mg de progesterona.
29. 29. El método según la reivindicación 25, en donde el 17-ß-estradiol de la formulación farmacéutica es aproximadamente 55% amorfo y aproximadamente 45% cristalino .
30. 30. El método según la reivindicación 25, en donde la administración es por inyección intramuscular.
31. 31. El método según la reivindicación 25, en donde la formulación se administra aproximadamente una vez al mes o con menor frecuencia.
32. 32. El método según la reivindicación 25, en donde la formulación se administra aproximadamente una vez cada dos meses.
33. 33. El método según la reivindicación 25, en donde el mamífero es un humano.
34. 34. Una formulación farmacéutica que contiene una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona en una relación aproximada en peso de 1:40; y en donde el 17-ß-estradiol está mezclado en forma de partículas individuales con colesterol.
35. 35. La formulación según la reivindicación 34, en donde la relación en peso de 17-ß-estradiol y progesterona es 9:400.
36. 36. La formulación según la reivindicación 34, en donde el 17-ß-estradiol y el colesterol están combinados en una relación molar 1:1 en forma de microesferas y la progesterona está mezclada por separado en forma de microesferas individuales .
37. 37. La formulación según la reivindicación 36, en donde las microesferas tienen un diámetro aproximado de 25 µm a 105 µm.
38. 38. Un método para la anticoncepción y el reemplazo hormonal simultáneos, el método consiste en administrar a un mamífero que necesita de la terapia, una formulación farmacéutica que contiene aproximadamente 5 a 15 mg de 17-ß-estradiol y aproximadamente 300 a 500 mg de progesterona .
39. 39. El método según la reivindicación 38, en donde la administración de la formulación farmacéutica se repite aproximadamente al mes.
40. 40. El método según la reivindicación 38, en donde la formulación farmacéutica se administra por inyección intramuscular.
41. 41. El método según la reivindicación 38, en donde el mamífero es un humano.
42. 42. El método según la reivindicación 38, en donde la formulación comprende una suspensión acuosa de microesferas constituida básicamente por 17-ß-estradiol y colesterol y microesferas constituidas básicamente por progesterona.
43. 43. El método según la reivindicación 42, en donde el 17-ß-estradiol y el colesterol están en una relación molar aproximada de 1:1 y la relación aproximada en peso de 17-ß-estradiol y progesterona es 9:400.
44. 44. Un método para la anticoncepción y el reemplazo hormonal simultáneos, el método consiste en administrar a un mamífero una formulación farmacéutica que contiene partículas constituidas básicamente por 17-ß-estradiol y colesterol y partículas constituidas básicamente por progesterona; y en donde el 17-ß-estradiol y la progesterona están en una relación aproximada en peso de 1:40.
45. 45. El método según la reivindicación 44, en donde la administración de la formulación farmacéutica se repite después de un ciclo menstrual completo en el sujeto.
46. 46. El método según la reivindicación 44, en donde la formulación farmacéutica se administra por inyección intramuscular.
47. 47. El método según la reivindicación 44, en donde el mamífero es un humano y la administración de la formulación se repite aproximadamente al mes .
48. 48. El método según la reivindicación 44, en donde las partículas son microesferas que tienen un diámetro aproximado entre 35 µm y 75 µm.
49. 49. Un estuche que comprende una formulación farmacéutica, la formulación consiste en: un envase estéril que contiene una dosis unitaria de una cantidad eficaz para la anticoncepción y eficaz para el reemplazo hormonal de 17-ß-estradiol y progesterona combinados con colesterol en forma de una pluralidad de microesferas; y un envase estéril que contiene un vehículo acuoso para suspender las microesferas para administración parenteral.
50. 50. El estuche según la reivindicación 49, en donde la cantidad eficaz de 17-ß-estradiol es de aproximadamente 9 mg.
51. 51. El estuche según la reivindicación 49, en donde la cantidad eficaz de progesterona es de aproximadamente 400 mg.
52. 52. El estuche según la reivindicación 49, que también comprende medios para la administración parenteral de la formulación.