MXPA05005909A

MXPA05005909A - Metodos y materiales para el tratamiento de condiciones inflamatorias usando un polipeptido que contiene un segmento aminoacido propio cs y un segmento aminoacido no propio.

Info

Publication number: MXPA05005909A
Application number: MXPA05005909A
Authority: MX
Inventors: Holmdahl Rikard
Original assignee: Resistentia Pharmaceuticals Ab
Priority date: 2002-12-02
Filing date: 2003-12-01
Publication date: 2005-08-26
Also published as: WO2004050111A3; WO2004050111A2; KR20050090390A; CN1745098A; DE60326264D1; NO20052714L; JP2006507834A; US20040214768A1; US7361742B2; AU2003288472A1; ES2323692T3; US20080262197A1; NZ540735A; ATE423133T1; CA2508302A1; NO20052714D0; RU2005120785A; EP1569958A2; RU2344144C2; EP1569958B1

Abstract

La invencion proporciona metodos y materiales para el tratamiento de condiciones inflamatorias. Especificamente, la invencion proporciona polipeptidos, acidos nucleicos aislados, celulas anfitrionas, y metodos que pueden usarse para inducir una respuesta de anticuerpos en un mamifero contra un antigeno tal como C5 o C5a. por ejemplo, los metodos y materiales descritos en la presente solicitud, pueden usarse para reducir los efectos de C5a en un mamifero reduciendo la cantidad de C5a total y/o enlazado con el receptor en el mamifero.

Description

METODOS Y MATERIALES PARA EL TRATAMIENTO DE CONDICIONES INFLAMATORIAS USANDO UN POLIPEPTIDO QUE CONTIENE UN SEGMENTO AMINOÁCIDO PROPIO CS Y UN SEGMENTO AMINOÁCIDO NO PROPIO REFERENCIA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad a la solicitud de patente provisional estadounidense número 60/430,278, presentada el 2 de diciembre de 2002.

CAMPO TÉCNICO La invención se refiere a métodos y materiales involucrados en el tratamiento de condiciones inflamatorias.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La artritis reumatoide (RA, según siglas en inglés) es una condición inflamatoria auto inmune que afecta las articulaciones periféricas. Los modelos de artritis animal han ayudado a definir genes relacionados con condiciones de RA. Se ha identificado un gen clase II (Aq en ratón) en el complejo de histocompatibilidad principal (MHC, según siglas en inglés) importante para la iniciación y mantenimiento de condiciones de RA. Este gen corresponde funcionalmente al gen HLA-DR DR*0401 en humanos, sugiriendo que el reconocimiento auto inmune mediado por células T de los antígenos específicos de la articulación está involucrado en la enfermedad. También se ha encontrado que los genes en las regiones fuera del MHC son importantes para la iniciación y mantenimiento de condiciones RA. Una de estas regiones está localizada en el cromosoma 2 en el ratón, y contiene un gen codificado por el factor complemento C5. Uno de los componentes activos del C5 es C5a, el cual es liberado durante el enlace del complemento a los inmunocomplejos. La liberación de C5a pone en funcionamiento varias vías diferentes que conducen a la inflamación reumatoide. El C5 producido localmente en una articulación inflamatoria puede unirse a receptores o macrófagos y a granulocitos neutrofílicos, conduciendo a la infiltración de células inflamatorias en las articulaciones. El C5 también juega un papel central en procesos mediados por complemento, tales como sepsis, isquemia miocárdica / daño por reperfusión, síndrome de ansiedad respiratoria adulta, nefritis, y rechazo de injertos, así como también condiciones inflamatorias mediadas por complemento tales como artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, ateroesclerosis y vasculitis.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a métodos y materiales para el tratamiento de condiciones inflamatorias tales como sepsis, isquemia miocárdica / daño por reperfusión, síndrome de ansiedad respiratoria adulta, nefritis, y rechazo de injertos, así como también condiciones inflamatorias mediadas por complemento tales como artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, arterosclerosis, y vasculitis en un mamífero. Específicamente, la invención proporciona polipéptidos, ácidos nucleicos aislados, células anfitrionas y métodos para el tratamiento de condiciones inflamatorias. Los polipéptidos de la invención pueden ser inmunogénicos. En un aspecto, la invención proporciona polipéptidos inmunogénicos que contienen segmentos aminoácidos propios y no propios. Por ejemplo, la invención proporciona un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5a propio y uno o más epítopos. En otro aspecto, la invención proporciona ácidos nucleicos aislados que codifican polipéptidos inmunogénicos apropiados para tratar un mamífero con una condición inflamatoria. Además, la invención proporciona células anfitrionas que contienen ácidos nucleicos aislados que codifican polipéptidos proporcionados en la presente solicitud. Estas células pueden usarse, por ejemplo, para producir grandes cantidades de los polipéptidos codificados. En un aspecto, la invención presenta una composición que contiene un polipéptido, en donde el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, y en donde la longitud del segmento no propio es menor que 350 aminoácidos, (por ejemplo, menos de 300 aminoácidos, menos de 250 aminoácidos, o menos de 200 aminoácidos). La administración del poíipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, y el genoma del mamífero puede incluir un ácido nucleico que codifica al segmento aminoácido C5 propio. El segmento aminoácido no propio puede ser un segmento aminoácido bacterial (por ejemplo, un segmento aminoácido BP). El segmento aminoácido no propio puede ser un segmento aminoácido C5. El segmento aminoácido C5 no propio puede ser de origen no natural. El segmento aminoácido C5 no natural puede contener al menos dos epítopos de célula T. El segmento aminoácido no propio puede ser un segmento aminoácido de vertebrado (por ejemplo, de mamífero). El segmento aminoácido C5 de vertebrado no propio puede contener al menos dos epítopos de células T. El segmento aminoácido no propio puede ser un segmento aminoácido viral o un segmento aminoácido fúngico. La invención también presenta un método para tratar un mamífero (por ejemplo, un humano) que tiene una condición inflamatoria. El método puede incluir administrar un poíipéptido al mamífero de tal forma que el poíipéptido induzca una respuesta anti-C5 en el mamífero, el poíipéptido contiene un segmento aminoácido, en donde el genoma del mamífero contiene un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5 propio. La condición inflamatoria puede ser sepsis, isquemia miocárdica / daño por reperfusión, síndrome de ansiedad respiratoria adulta, nefritis, y rechazo de injerto, artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, arterosclerosis, y/o vasculitis. El polipéptido puede ser MBP-C5a. El segmento aminoácido C5 propio puede contener una porción de una secuencia C5a. El segmento aminoácido no propio puede ser viral, bacterial, fúngico, mamífero, y/o de origen no natural. El segmento aminoácido no propio puede contener al menos dos epítopos de células T. En otro aspecto, la invención presenta una composición que contiene un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta antl-C5 en el mamífero, y el genoma del mamífero puede contener un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5. El segmento aminoácido C5 no propio puede ser de origen no natural. El segmento aminoácido C5 no propio puede contener al menos dos epítopos de célula T. En otro aspecto, la invención presenta una composición que contiene un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido vertebrado no propio. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, y el genoma del mamífero puede contener un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5 propio. El segmento aminoácido vertebrado no propio puede ser un segmento aminoácido de mamífero. El segmento aminoácido vertebrado no propio puede contener al menos dos epítopos de célula T. En otro aspecto, la invención presenta un composición que contiene un polipéptido que incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde la longitud del segmento aminoácido no propio es menor que 350 (por ejemplo, menos de 300, menos de 250, o menos de 200) residuos de aminoácido. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, y el genoma del mamífero puede contener un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5 propio. El segmento aminoácido no propio puede ser viral, bacterial, fúngico, mamífero y/o de origen no natural. El segmento aminoácido mamífero no propio puede contener al menos dos epítopos de célula T. En otro aspecto, la invención presenta una composición que contiene un polipéptido y un adyuvante, en donde el polipéptido contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial. El segmento aminoácido bacterial puede ser MBP. En otro aspecto, la invención presenta una composición que contiene un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio.

En todavía otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, la longitud del segmento aminoácido no propio es menor de 360 (por ejemplo, menos de 300, menos de 250, o menos de 200) residuos de aminoácido. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial, en donde el polipéptido carece de un sitio de escisión de factor Xa entre el segmento aminoácido C5 y el segmento aminoácido bacterial. El segmento aminoácido bacterial no propio puede ser MBP. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico. En otro aspecto, la invención presente un ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral. Otro aspecto de la invención presenta una célula anfitriona que contiene (1) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio; (2) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio; (3) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, la longitud del segmento aminoácido no propio es menor de 350 (por ejemplo, menor de 300, menor de 250, o menor de 200) residuos de aminoácido; (4) un ácido nucleico aislado en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial no propio; (5) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico no propio; y/o (6) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral no propio. La célula anfitriona puede expresar el polipéptido. En otro aspecto, la invención presenta una composición para administración a un mamífero. La composición puede contener un polipéptido, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, en donde el genoma del mamífero contiene un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5 propio. El segmento aminoácido C5 no propio puede ser de origen no natural. Ei segmento aminoácido C5 no propio puede contener al menos dos epítopos de célula T.

En otro aspecto, la invención presenta una composición para su administración a un mamífero, la composición contiene un polipéptido, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluyes un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, en donde el genoma del mamífero contiene un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5. El segmento aminoácido de vertebrado no propio puede incluir al menos dos epítopos de célula T. En todavía otro aspecto, la invención presenta una composición para su administración a un mamífero. La composición puede contener un polipéptido, en donde con respecto al mamífero el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde la longitud del segmento aminoácido no propio es menor de 350 (por ejemplo, menos de 300, menos de 250, o menos de 200) residuos de aminoácido. La administración del polipéptido a un mamífero puede inducir una respuesta anti-C5 en el mamífero, en donde el genoma del mamífero contiene un ácido nucleico que codifica el segmento aminoácido C5 propio. El segmento aminoácido no propio puede ser viral, bacterial, fúngico, o mamífero. El segmento aminoácido no propio puede ser de origen no natural. El segmento aminoácido no propio puede incluir al menos dos epítopos de célula T. En otro aspecto, la invención presenta una composición para su administración a un mamífero, la composición contiene un polipéptido y un adyuvante, en donde con respecto ai mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial (por ejemplo, MBP). En otro aspecto, la invención presenta una composición para su administración a un mamífero, la composición contiene un polipéptido, en donde con respecto al mamífero el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido f úngico. La invención también presenta una composición para su administración a un mamífero, la composición contiene un polipéptido, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio. La invención también presenta un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y en donde con respecto al mamífero, el polipéptido contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, y en donde la longitud del segmento aminoácido no propio es menor de 350 (por ejemplo, menos de 300, menos de 250 o menos de 200) residuos de aminoácido. En todavía otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial, y en donde el polipéptido carece de un sitio de escisión de factor Xa entre el segmento aminoácido C5 y el segmento aminoácido bacterial. El segmento aminoácido bacterial puede ser MBP. En otro aspecto, la invención presenta un ácido nucleido aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico. La invención también presenta un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y en donde con respecto al mamífero, el polipéptido contiene un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral.

La invención también presenta una célula anfitriona que contiene (1) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 y un segmento aminoácido C5 no propio; (2) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio; (3) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, la longitud del segmento aminoácido no propio es menor de 350 (por ejemplo, menos de 300, menos de 250, o menos de 200) residuos de aminoácido; (4) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial no propio; (5) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, en donde con respecto al mamífero, el polipéptido incluye un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico no propio; y/o (6) un ácido nucleico aislado, en donde el ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero en donde con respecto al m am ífero el poiipéptido incl uye un segmento am inoácido C5 prop io y u n segmento aminoácid o viral no propio. La célula anfitriona puede expresar el poiipéptido. En todavía otro aspecto, la invención presenta una compos ición para su administración a un mam ífero. La com posición puede contener u n poii péptido , en donde con respecto al mam ífero, el poiipéptido contiene un seg mento aminoácid o C5 propio y un segmento am inoácido no propio, y en donde el segmento aminoácido C5 propio es al menos 90 por ciento idéntico a una secuencia C5 del m am ífero. A menos que se defina de otra forma, todos los térm inos técnicos y científicos usados en la presente solicitud tienen el mismo sig nificado com únmente comprendido por cualq uier conocedor ordinario de la materia a la cual pertenece la invención. A pesar de que se puede usar métodos y materiales similares o eq uivalentes a los descritos aquí en la práctica o prueba de la presente invención, los métodos y materiales apropiados se describen más adelante. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias mencionadas en esta solicitud están incorporadas como referencia en su totalidad . En caso de conflicto, la presente especificación , incluyendo definiciones, será el co ntrol. Además, los materia les , métodos y ejemplos son ilustrativos solamente, y no pretenden ser l imitantes. Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de los siguientes dibujos y descripción detal lada, y a partir de las reivindicaciones.

DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 es una ilustración de una secuencia de ADN pro-C5 de ratón (SEQ ID No:1). La figura 2 es una ilustración de la secuencia de aminoácidoss de ratón pro-C5 incluyendo el péptido de señal (SEQ ID No:2). La figura 3 es un diagrama que ilustra un vector de ácido nucleico diseñado para expresar un polipéptido de fusión que contiene proteína de enlace maltosa (MBP) y C5a de ratón. La figura 4 es la secuencia de ácido nucleico de un producto PCR con MBP-C5a (SEQ ID No:3). La figura 5 es la secuencia de aminoácidoss de un polipéptido de fusión BP-C5a (SEQ ID No:4). La figura 6 es un gráfico que representa la incidencia de la artritis inducida por colágeno en ratones de control (diamantes vacíos) y en ratones vacunados con un polipéptido de fusión con MBP-C5a (círculos rellenos). *,p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.005. La figura 7 es un gráfico que representa la puntuación de artritis medía para la artritis inducida por colágeno en ratones de control (círculos vacíos) y en ratones vacunados con un polipéptido de fusión con MBP-C5a (círculos rellenos). *,p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.005.

La figura 8 es un gráfico que representa la puntuación media de artritis máxima media para la artritis inducida por colágeno en ratones de control y en ratones vacunados con un polipéptido de fusión con MBP-C5a. **, p<0.01. La figura 9 es un gráfico que representa el área bajo la curva para los datos de puntuación de artritis obtenidos de ratones inyectados con colágeno y luego tratados con PBC (control) o con un polipéptido de fusión con MBP-C5a. ***, p<0.005. La figura 10 es un gráfico que representa la incidencia de artritis crónica inducida por colágeno en ratones de control (círculos rellenos) y en ratones vacunados con un polipéptido de fusión con MBP-C5a (diamantes vacíos). *,p<0.05; **, p<0.01. La figura 11 es un gráfico que representa la puntuación media para la artritis crónica inducida por colágeno en ratones de control (círculos rellenos) y en ratones vacunados con un polipéptido de fusión con MBP-C5a (círculos vacíos). *,p<0.05.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos y materiales para el tratamiento de condiciones inflamatorias. El término "condición inflamatoria" como se usa en la presente solicitud, se refiere a una enfermedad, estado de enfermedad, síndrome, u otra condición que ocasione inflamación. Por ejemplo, la artritis reumatoide y el asma son condiciones inflamatorias. Otros ejemplos de condiciones inflamatorias incluyen, sin limitación, sepsis, isquemia miocárdica / daño por reperfusíón, síndrome de ansiedad respiratoria adulta, nefritis, y rechazo de injertos, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, arterosclerosis, y vasculitis. La invención proporciona polipéptidos, ácidos nucleicos aislados, células anfitrionas, y métodos para inducir una respuesta de anticuerpos en un mamífero contra un antígeno tal como C5 o C5a. Por ejemplo, los métodos y materiales descritos en la presente solicitud se pueden usar para reducir los efectos del C5 en un mamífero reduciendo la cantidad de C5a total y/o enlazado con el receptor.

POLIPÉPTIDOS La invención proporciona polipéptidos que pueden usarse para tratar una condición inflamatoria. Estos polipéptidos pueden ser inmunogénicos. Un polipéptido' nmunogénico" es cualquier polipéptido que induce efectivamente una respuesta de anticuerpos en un mamífero. Por ejemplo, un polipéptido inmunogénico puede ser un polipéptido que induzca efectivamente la producción de un anticuerpo anti-C5 propio en un mamífero. Los polipéptidos de la invención pueden contener al menos un segmento aminoácido que sería considerado no propio para el mamífero particular que está recibiendo el polipéptido. Por ejemplo, un polipéptido que induzca la producción de un anticuerpo anti-C5 propio puede contener un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio (por ejemplo, un segmento aminoácido C5 no propio). El segmento aminoácido C5 puede conferir la especificidad de la respuesta de anticuerpo anti-C5 propio, y el segmento aminoácido no propio puede ampliar la inmunogenicidad del polipéptido. El segmento aminoácido no propio (por ejemplo, un segmento aminoácido C5 no propio) puede contener al menos dos epítopos de célula T. Alternativamente, el segmento aminoácido no propio puede estabilizar un polipéptido inmunogénico de tal forma que la respuesta anticuerpo específica anti-C5 propio sea inducida. El segmento aminoácido C5 propio de un polipéptido puede ser una porción de C5 que interactúe directamente con un receptor C5a. Ejemplos de estos segmentos aminoácidos C5 propios incluyen, sin limitación, C5a o fragmentos de C5a. Adicionalmente, el segmento aminoácido C5 de un polipéptido puede ser una porción de C5 que influya indirectamente sobre la interacción de C5a con un receptor C5a. Por ejemplo, un polipéptido que contiene la secuencia de reconocimiento de convertasa C5 del C5 puede inducir la producción de anticuerpos que se liguen a la secuencia de reconocimiento de convertasa C5 del C5, inhibiendo de esta forma la conversión de C5 a C5a por medio de la convertasa C5. El término "segmento aminoácido" como se usa en la presente solicitud, se refiere a un tramo contiguo de aminoácidos dentro de un polipéptido. Por ejemplo, los residuos de aminoácido 30 a 40 dentro de un polipéptido de 100 aminoácidos serían considerados un segmento aminoácido. Un segmento aminoácido puede ser de cualquier longitud mayor de ocho residuos de aminoácido (por ejemplo, más grande que aproximadamente nueve, diez, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 500, 1000, o más residuos de aminoácido). Así, un segmento aminoácido puede ser C5, la región entera C5a de C5, o una parte de C5a. En algunas modalidades, un segmento aminoácido puede tener una longitud menor de 1000 residuos de aminoácido (por ejemplo, menos de 500, menos de 400, menos de 300, menos de 200, o menos de 100 residuos de aminoácido). En otras modalidades, un segmento aminoácido puede tener una longitud desde aproximadamente 20 hasta aproximadamente 200 residuos de aminoácido (por ejemplo, aproximadamente 30 hasta aproximadamente 180 residuos de aminoácido, o aproximadamente 40 hasta aproximadamente 150 residuos de aminoácido). El término "propio" como se usa en la presente solicitud con respecto a un segmento aminoácido y un mamífero particular, generalmente se refiere a un segmento aminoácido que el mamífero particular posee endógenamente. Si un segmento aminoácido es derivado de un miembro de una especie e introducido en otro miembro de la misma especie que posee endógenamente el segmento aminoácido, entonces ese segmento aminoácido particular es considerado como un segmento aminoácido propio. Por ejemplo, un segmento aminoácido C5 derivado de un ratón es un segmento aminoácido C5 propio cuando se introduce en el mismo ratón, un ratón genéticamente idéntico, o un ratón genéticamente no idéntico que posea endógenamente el mismo segmento aminoácido. El término "no propio" como se usa en la presente solicitud con respecto a un segmento aminoácido y a un mamífero particular, generalmente se refiere a cualquier segmento aminoácido que el mamífero particular no posee endógenamente. Si un segmento aminoácido se deriva de un miembro de una primera especie y se introduce en un miembro de una segunda especie que no posea endógenamente el segmento aminoácido, entonces el segmento aminoácido particular puede ser considerado un segmento aminoácido no propio. Por ejemplo, un segmento aminoácido C5 derivado de un ratón puede ser considerado un segmento aminoácido C5 no propio cuando se introduce en un ser humano. En otro ejemplo, si un polipéptido contiene un segmento aminoácido C5a de un ratón y un segmento aminoácido C5b de un ser humano, y este polipéptido se introduce en un ratón, entonces el segmento aminoácido C5a puede ser considerado un segmento aminoácido C5a propio, y el segmento aminoácido C5b puede ser considerado un segmento aminoácido C5b no propio. Alternativamente, si el mismo polipéptido se introduce en un ser humano, el segmento aminoácido C5a puede ser considerado un segmento aminoácido C5a no propio y el segmento aminoácido C5b puede ser considerado como un segmento aminoácido C5b propio. Si un segmento aminoácido de un miembro de una especie es considerado polimórfico para otro miembro de la misma especie que la del segmento aminoácido, puede ser considerado un segmento aminoácido no propio para un miembro de la especie que no posee este polimorfismo. Por ejemplo, si un segmento aminoácido C5 de un ser humano que tiene un tipo de polimorfismo en el segmento aminoácido se introduce en un segundo ser humano que no tiene ese tipo de polimorfismo particular, el segmento aminoácido C5 puede ser considerado un segmento aminoácido no propio para el segundo ser humano. También se entenderá que epítopos de células T crípticos (es decir, péptidos propios que bajo condiciones normales no están expresados en moléculas de MHC hasta el nivel requerido para su reconocimiento por las células T) pueden considerarse como no propios. Los segmentos aminoácidos no propios y propios pueden ser de los mismos o de diferentes polipéptidos de origen natural. Por ejemplo, si un polipéptido contiene un segmento aminoácido propio de C5 , entonces el segmento aminoácido no propio puede ser del mismo tipo de polipéptido (por ejemplo, C5 de rata) o un tipo de polipéptido diferente (por ejemplo, albúmina de rata). En otro ejemplo, un polipéptido puede contener un segmento aminoácido C5a propio y uno o más epítopos de célula T no propios provistos por BP. Adicionalmente, un segmento aminoácido puede ser de cualquier tipo de polipéptido, incluyendo, sin limitación, un polipéptido bacterial (por ejemplo, MBP), un polipéptido fúngico, un polipéptido viral, o un polipéptido de mamífero. El segmento o segmentos propios de los polipéptidos provistos en la presente solicitud típicamente son idénticos al menos en 90 por ciento (por ejemplo, al menos 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 o 99 por ciento idénticos) para una secuencia desde un polipéptido encontrado en el mamífero al cual se le administrará el polipéptido. En algunas modalidades, el segmento propio en el mamífero puede ser 100 por ciento idéntico a una secuencia desde un polipéptido encontrado en el mamífero al cual se le administrará el polipéptido. La invención proporciona así polipéptidos que contienen un segmento aminoácido que tiene (1) una longitud, y (2) una identidad en porcentaje con respecto a una secuencia de aminoácidos de referencia (por ejemplo, una secuencia de aminoácidos de un mamífero particular) sobre esa longitud. La invención también proporciona moléculas de ácido nucleico aisladas que contiene una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido que contiene un segmento aminoácido que tiene (1) una longitud, y (2) una identidad en porcentaje con respecto a una secuencia de aminoácidos de referencia de mamífero sobre esa longitud. Típicamente, la secuencia de aminoácidoss o de ácido nucleico de mamífero se denomina una secuencia de referencia, y la secuencia de aminoácidoss o ácido nucleico que está siendo comparada con la secuencia de mamífero se denomina la secuencia objetivo. Por ejemplo, una secuencia de mamífero puede ser la secuencia de referencia que tiene la secuencia indicada en SEQ ID No.2. Una longitud y una identidad en porcentaje sobre esa longitud para cualquier secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico se determina como sigue. Primero, una secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico se compara con una secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico del mamífero al cual se le administrará, usando el programa BLAST 2 Sequences (BI2seq) de la versión única de BLASTZ que contiene la versión BLASTN 2.0.14 y la versión BLASTP 2.0.14. Esta versión única de BLASTZ puede obtenerse en el sitio Web de Fish & Richardson (World Wide Web en "fr" punto "com" diagonal "blast"), el sitio web de National Center for Biotechnology Information del gobierno de Estados Unidos (World Wide Web en "ncbi" punto "nlm" punto "nih" punto "gov"), o la Universidad del Estado de Nueva York en Oíd Westbury Library (QH497.rn.6714). Las instrucciones que explican cómo usar el programa BI2seq pueden encontrarse en el archivo léame que acompaña a BLASTZ. El programa BI2seq realiza una comparación entre dos secuencias usando el algoritmo BLASTN o BLASTO. El BLASTN se usa para comparar secuencias de ácido nucleico, mientras que el BLASTP se usa para comparar secuencias de aminoácido. Para comparar dos secuencias de ácido nucleico, las opciones se configuran como sigue: -i se configura como un archivo que contiene la primera secuencia de ácido nucleico que va a ser comparada (por ejemplo, C:\seq1.txt); -j se configura como un archivo que contiene la segunda secuencia de ácido nucleico (por ejemplo, C:\seq2.txt); -p se configura como blastn; -o se configura como cualquier nombre de archivo deseado (por ejemplo, C:\salida.txt); -q se configura como -1; -r se configura como 2; y todas las otras opciones se dejan en sus configuraciones por defecto. Por ejemplo, se puede usar el siguiente comando para generar un archivo de salida que contiene una comparación entre dos secuencias: C:\BI2seq-i c:\seq1.txt -j c:\seq2.txt -p blastn -o c:\salida.txt -q -1 -r 2. Para comparar dos secuencias de aminoácido, las opciones de BI2seq se configuran como sigue: -i se configura como un archivo que contiene la primera secuencia de aminoácidos que va a ser comparada (por ejemplo, C:\seq2.txt); -p se configura como Blastp; -o se configura como cualquier nombre de archivo deseada (por ejemplo, C:\salida.txt); y todas las otras opciones se dejan en sus configuraciones por defecto. Por ejemplo, se puede usar el siguiente comando para generar un archivo de salida que contiene una comparación entre dos secuencias de aminoácido: C:\ BI2seq -i c:\seq1.txt -j c:\seq2.txt -p blastp -o c:\salida.txt. Si la secuencia objetivo comparte homología con cualquier parte de la secuencia de mamífero, luego el archivo de salida designado presentará aquellas regiones de homología como secuencias alineadas. Si la secuencia objetivo no comparte homología con cualquier parte de la secuencia de mamífero, entonces el archivo de salida designado no presentará secuencias alineadas. Una vez alineada, una longitud se determina contando el número de nucleótidos consecutivos o residuos de aminoácido de la secuencia objetivo presentada en alineación con la secuencia a partir de la secuencia de mamífero. Una posición que coincide es cualquier posición en donde un nucleótido idéntico o residuo de aminoácido se presenta en la secuencia objetivo y en la secuencia de mamífero. Los saltos presentados en la secuencia objetivo no se cuentan, dado que los saltos no son nucleótidos o residuos de aminoácido. De forma similar, los saltos presentados en la secuencia de mamífero no se cuentan, dado que los nucleótidos de la secuencia objetivo o los residuos de aminoácido se cuentan, no los nucleótidos o residuos de aminoácido de la secuencia de mamífero. La identidad en porcentaje de una longitud dada, se determina contando la cantidad de posiciones que coinciden sobre esa longitud y se divide ese número por la longitud seguida multiplicando el valor resultante por 100. Por ejemplo, si (1) un a secuencia de aminoácidos objetiva se compara con una secuencia de referencia, (2) el programa BI2seq presenta 200 aminoácidos consecutivos de la secuencia objetiva alineada con una región de la secuencia de referencia, y (3) el número de coincidencias sobre los 200 aminoácidos alineados es de 180, luego esa secuencia de 300 aminoácidos contiene un segmento aminoácido que tiene una longitud de 200 y una identidad en porcentaje sobre esa longitud de 90 (es decir, 180÷200*100 = 90). Nótese que el valor de identidad de secuencia en porcentaje se redondea hasta la próxima décima. Por ejemplo, 75.11, 75.12, 75.13 y 75.14 se redondean hacia abajo a 75.1, mientras 75.15, 75.16, 75.17, 75.18, y 75.19 se redondean hacia arriba hasta 75.2. También nótese que el valor de longitud siempre será un entero.

EI segmento o segmentos no propios de los polipéptidos proporcionados en la presente solicitud, típicamente son menos de 95 por ciento idénticos (por ejemplo, menos de 94, 93, 92, 91, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55 o 50 por ciento idénticos) a una secuencia de un polipéptido encontrado en el mamífero al cual se le va a administrar el polipéptido. Se puede usar cualquier método para elaborar un polipéptido incluyendo, por ejemplo, la expresión por medio de sistemas procarióticos, expresión por medio de sistemas eucarióticos, y técnicas de síntesis química. Puede usarse cualquier método para purificar un polipéptido que incluye, sin limitación, fraccionamiento, centrifugación, y cromatografía. Por ejemplo, los polipéptidos que contienen proteína enlazante maltosa (MBP) pueden purificarse usando cromatografía de afinidad con amilosa. ÁCIDOS NUCLEICOS La invención proporciona ácidos nucleicos que codifican polipéptidos como los que se describen en la presente solicitud (por ejemplo, polipéptidos que contienen segmentos aminoácidos propios y no propios). Por ejemplo, un ácido nucleico de la invención puede codificar un polipéptido que tenga la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID No:2. Alternativamente, un ácido nucleico de la invención puede codificar un polipéptido que tenga una secuencia de aminoácidos que contiene una porción de la secuencia indicada en SEQ ID No:2. En otra modalidad, un ácido nucleico provisto en la presente solicitud puede codificar un poiipéptido que tenga la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID No:4. Un ácido nucleico aislado puede codificar un poiipéptido que contenga un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio (por ejemplo, un segmento aminoácido C5 no propio, o un segmento aminoácido no propio de vertebrado, bacterial, fúngico o viral). El segmento propio codificado por el ácido nucleico aislado puede contener un segmento aminoácido (por ejemplo, un segmento aminoácido C5), con al menos 90 por ciento de identidad (por ejemplo, al menos 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, o 9 por ciento de identidad o 100 por ciento de identidad) con una secuencia de aminoácidos de un poiipéptido encontrado en el mamífero al cual se le administrará el poiipéptido. El segmento no propio codificado por el ácido nucleico aislado puede contener un segmento aminoácido con menos de 95 por ciento de identidad (por ejemplo, menos de 94, 93, 92, 91, 90, 85, 80, 75, 70, 60, 55, o 50 por ciento de identidad) con una secuencia de aminoácidos de un poiipéptido que se encuentra en el mamífero al cual se le administrará el poiipéptido. El término "ácido nucleico" como se usa en la presente solicitud, comprende tanto ARN como ADN, incluyendo ADNc, ADN genómico, y ADN sintético (por ejemplo, sintetizado químicamente). El ácido nucleico puede ser bicatenario o monocatenario. Cuando es monocatenario, el ácido nucleico puede ser la cadena en sentido o la cadena antisentido. Adicionalmente, el ácido nucleico puede ser circular o lineal. El término "aislado" como se usa en la presente solicitud con referencia a un ácido nucleico se refiere a un ácido nucleico de origen natural que no es inmediatamente contiguo con una o ambas de las secuencias con las cuales es inmediatamente contiguo (una en el extremo 5' y una en el extremo 3') en el genoma de origen natural del organismo del cual se deriva. Por ejemplo, un ácido nucleico aislado puede ser, sin limitación, un ADN recombinante de cualquier longitud, siempre que una de las secuencias de ácido nucleico que normalmente se encuentran flanqueando inmediatamente el ADN recombinante en un genoma de origen natural esté eliminado o ausente. Así, un ácido nucleico aislado incluye, sin limitación , un ADN recombinante que es independiente de otras secuencias (por ejemplo, un ADNc o un fragmento de ADN genómico producido por PCR o tratamiento con endonucleasa de restricción), así como también el ADN recombinante que está incorporado en un vector, un plásmido que se replica autónomamente, un virus (por ejemplo, un retrovirus, adenovirus, o virus de herpes), o en el ADN genómico de un procariote o eucariote. Además, un ácido nucleico aislado puede incluir un ADN recombinante que es parte de un híbrido o secuencia de ácido nucleico de fusión. El término "aislado" como se usa en la presente solicitud con referencia a un ácido nucleico también incluye cualquier ácido nucleico que no sea de origen natural y por lo tanto las secuencias de ácido nucleico que no son de origen natural no se encuentran en la naturaleza y no tienen secuencias inmediatamente contiguas en un genoma de origen natural. Por ejemplo, un ácido nucleico que no sea de origen natural tal como un ácido nucleico diseñado, se considera como un ácido nucleico aislado. El ácido nucleico diseñado puede elaborarse usando clonación molecular común, o técnicas químicas para síntesis de ácido nucleico. El ácido nucleico aislado que no es de origen natural, puede ser independiente de otras secuencias, o incorporado en un vector, un plásmido que se replica autónomamente, un virus (por ejemplo, un retrovirus, adenovirus, o virus de herpes), o el ADN genómico de un procariote o eucariote. Además, un ácido nucleico que no es de origen natural puede incluir un ácido nucleico que es parte de un híbrido o secuencia de ácido nucleico de fusión. Un ácido nucleico que existe entre cientos a millones de otros ácidos nucleicos dentro de, por ejemplo, ADNc o genotecas, o rebanadas de gel que contienen un digesto de restricción de ADN geonómico, no se considera como un ácido nucleico aislado. El término "exógeno" como se usa en la presente solicitud con referencia a un ácido nucleico y a una célula particular se refiere a cualquier ácido nucleico que no se origine de esa célula en particular tal como se encuentra en la naturaleza. Así, cualquier ácido nucleico que no sea de origen natural se considera exógeno para una célula una vez que ha sido introducido en la célula. Es importante notar que un ácido nucleico de origen no natural puede contener secuencias de ácido nucleico o fragmentos de secuencias de ácido nucleico que se encuentran en la naturaleza, siempre que el ácido nucleico como un todo no exista en la naturaleza. Por ejemplo, un ácido nucleico que contiene una secuencia de ADN genómico dentro de un vector de expresión es un ácido nucleico de origen no natural, y por eso es exógeno a una célula una vez introducido en la célula, dado que ese ácido nucleico como un todo (ADN genómico mas ADN vector) no existe en la naturaleza. Así, cualquier vector plásmido o virus que se replique autónomamente (por ejemplo, retrovirus, adenovirus, o virus de herpes) que como un todo no exista en la naturaleza se considera que es un ácido nucleico de origen no natural. Se deduce que los fragmentos de ADN genómico producidor por PCR o por tratamiento de restricción de endonucleasa así como también el ADNc, se consideran ácidos nucleicos de origen no natural, dado que existen como moléculas separadas que no se encuentran en la naturaleza. También se deduce que cualquier ácido nucleico que contiene una secuencia de promotor y una secuencia que codifica un polipéptido (por ejemplo, ADNc o ADN genómico) en un arreglo no presente en la naturaleza es un ácido nucleico de origen no natural. Un ácido nucleico que es de origen natural puede ser exógeno para una célula en particular. Por ejemplo, un cromosoma entero aislado de una célula de la persona X es un ácido nucleico exógeno con respecto a una célula de la persona Y una vez que el cromosoma se introduce en la célula de Y. Los ácidos nucleicos aislados pueden obtenerse usando cualquier método incluyendo, sin limitación, clonación molecular común y técnicas de síntesis química de ácido nucleico. Por ejemplo, puede usarse PCR para obtener un ácido nucleico aislado que contenga una secuencia de ácido nucleico que tenga similaridad con la secuencia indicada en SEQ ID No:1. PCR se refiere a un procedimiento o técnica en el cual el ácido nucleico objetivo se amplifica de una forma similar a la descrita en la patente estadounidense número 4,683,195, y modificaciones subsiguientes del procedimiento allí descrito. Generalmente, la información de secuencia de los extremos de la región de interés o más allá se usa para diseñar sensibilizadores oligonucieótidos que son idénticos o similares en secuencia a cadenas opuestas a un patrón potencial que va a se amplificado. Usando PCR, se puede amplificar una secuencia de ácido nucleico de ARN o de ADN. Por ejemplo, una secuencia de ácido nucleico puede aislarse mediante amplificación PCR a partir de ARN celular total, ADN genómico total, o ADNc, así como también a partir de secuencias de bacteriófago, secuencias de plásmido, secuencias virales y similares. Cuando se usa ARN como una fuente de patrón, se puede usar transcriptasa reversa para sintetizar cadenas de ADN complementarias. Los ácidos nucleicos aislados también se pueden obtener mediante mutagénesis. Por ejemplo, un ácido nucleico aislado que contiene una secuencia que se expone en SEQ ID No:1 puede ser mutada usando técnicas comunes de clonación molecular (por ejemplo, mutagénesis dirigida al sitio). Las mutaciones posibles incluyen, sin limitación, deleciones, inserciones y sustituciones, así como también combinaciones de deleciones, inserciones y sustituciones. Además, se puede usar bases de datos de ácido nucleico y de aminoácidos (por ejemplo, GenBank®) para obtener un ácido nucleico aislado. Por ejemplo, cualquier secuencia de ácido nucleico que tenga alguna homología con una secuencia expuesta en SEQ ID No:1, o cualquier secuencia de aminoácidos que tenga alguna homología con una secuencia expuesta en SEQ ID No:2 se puede usar como una consulta para buscar en GenBank®. Además, se puede usar técnicas de hibridación de ácido nucleico para obtener un ácido nucleico aislado. Brevemente, cualquier ácido nucleico que tenga alguna homología con una secuencia expuesta en SEQ ID No:1 puede ser usada como una sonda para identificar un ácido nucleico similar por medio de hibridación bajo condiciones de moderada a alta escasez. Una vez identificado, el ácido nucleico puede ser purificado entonces, secuenciado y analizado para determinar si está dentro del alcance de la invención tal como se describe en la presente solicitud. La hibridación se puede hacer mediante análisis Southern o Northern para identificar una secuencia de ADN o de ARN, respectivamente, la cual se hibridiza a una sonda. Esta sonda puede ser identificada con biotina, digoxigenina, una enzima, o un radioisótopo tal como 32P. El ADN o ARN que va a ser analizado puede ser separado electroforéticamente sobre un gel de agarosa o poliacrilamida, transferido a nitrocelulosa, nylon u otra membrana apropiada, e hibridado con la sonda usando técnicas estándar bien conocidas en la materia, tales como las descritas en las secciones 7.39 - 7.52 de Ambrook y coautores,(1989) Molecular Cloning, segunda edición, Cold Spring Harbor Laboratory, Plainview, NY. Además, se puede usar cualquier método para activar la transcripción o traslación de un ácido nucleico particular aislado que codifica un polipéptido. Estos métodos incluyen, sin limitación, construcción de un ácido nucleico tal que un elemento regulador promueva la expresión de una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido. Típicamente, los elementos reguladores son secuencias de ADN que regulen la expresión de otras secuencias de ADN en el nivel de transcripción. Así, los elementos reguladores incluyen, sin limitación, promotores, potenciadores y similares.

CÉLULAS ANFITRION AS La invención proporciona células anfitrionas que contienen al menos un ácido nucleico aislado descrito en la presente solicitud. Estas células pueden ser células procarióticas o células eucarióticas. Es notable que no se requiere que las células que contienen un ácido nucleico aislado dentro del alcance de la invención expresen un polipéptido. Además, el ácido nucleico aislado se puede integrar en el genoma de la célula o mantenerse en un estado episómico. Así, las células anfitríonas pueden ser transfectadas de forma estable o provisional con una construcción que contenga un ácido nucleico aislado de la invención. Las células anfitríonas provistas en la presente solicitud pueden contener un ácido nucleico exógeno que codifica un polipéptido. Por ejemplo, las células pueden contener un ácido nucleico que codifica un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio. Además, las células anfitríonas pueden expresar el polipéptido codificado. Se puede usar cualquier método para introducir un ácido nucleico aislado en una célula in vivo o in vitro. Por ejemplo, la precipitación de fosfato de calcio, electroporación, golpe de calor, lipofección, microinyección, y transferencia de ácido nucleico mediada por virus son métodos comunes que se pueden usar para introducir un ácido nucleico aislado en una célula. Además, el ADN desnudo se puede suministrar directamente a las células in vivo según se describe en cualquier parte (ver, por ejemplo, las patentes estadounidenses números 5,580,859 y 5,589,466, y sus continuaciones). Además, los ácidos nucleicos aislados se pueden introducir en las células generando animales transgénicos. Los animales transgénicos pueden ser animales acuáticos (tales como peces, tiburones, delfines, y similares), animales de granja (tales como cerdos, cabras, ovejas, vacas, caballos, conejos y similares), roedores (tales como ratones, cerdos de Guinea, y ratas), primates no humanos (tales como babuinos, monos y chimpancés), y animaies domésticos (tales como perros y gatos). Se puede usar varias técnicas conocidas en la materia para introducir ácidos nucleicos aislados en animales para producir las líneas fundadoras de animales transgénicos. Estas técnicas incluyen, sin limitación, microinyección pronuclear (patente estadounidense número 4,873,191); transferencia genética mediada por retrovirus en líneas de germen (Van der Putten y coinvestigadores, Proc. Nati. Acad. Sci., EEUU, 82:6148 (1985)); transfección genética en células madre embriónicas (Gossler y coinvestigadores, Proc. Nati. Acad. Sci. EEUU 83:9065-9069 (1986)); blanco genético en células madre embriónicas (Thompson y coinvestigadores, Cell, 56:313 (1989)); transferencia nuclear de núcleo somático (Schnieke y coinvestigadores, Science 278:2130-2133 (1997)); y electroporación de embriones (Lo Mol. Cell. Biol., 3:1803-1814 (1983)). Una vez obtenidos, los animales transgénicos se pueden replicar usando crianza tradicional o clonación animal. Se puede usar cualquier método para identificar células que contienen un ácido nucleico aislado de la invención. Estos métodos incluyen, sin limitación, PCR y técnicas de hibridación de ácido nucleico tales como análisis Northern y Southern. En algunos casos, se puede usar técnicas de inmunohistoquímica y bioquímica para determinar si una célula contiene un ácido nucleico particular aislado detectando la expresión de un polipéptido codificado por ese ácido nucleico particular.

MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE CONDICIONES INFLAMATORIAS Los polipéptidos proporcionados aquí pueden usarse en la fabricación de un medicamento o composición para el tratamiento de condiciones inflamatorias. Así, la invención proporciona métodos para el tratamiento de condiciones inflamatorias. Así, la invención proporciona métodos para el tratamiento de condiciones inflamatorias. Estos métodos incluyen, sin limitación, administrar una composición a un mamífero. Una composición puede contener un poiipéptido que actúa como un antígeno cuya respuesta inmune se desea. Además, una composición puede contener más de un poiipéptido, o cualquier combinación de diferentes polipéptidos. Por ejemplo, una composición puede contener polipéptidos virales y polipéptidos de mamífero. Es notable que cada poiipéptido en una composición puede tener una secuencia de aminoácidos idéntica. Además, los polipéptidos en una composición pueden contener diferentes segmentos de aminoácido, cada uno de los cuales puede actuar como una unidad antigénica definida contra la cual se desea una respuesta inmune. Así, los polipéptidos en una composición pueden contener diferentes segmento aminoácido que correspondan a cualquier región de un poiipéptido incluyendo, sin limitación, regiones de enlace de receptor, regiones de enlace de ligando, sitios activos de enzima, sitios de escisión de enzima de substratos de poiipéptido, regiones de enlace con antígenos de anticuerpos, y epítopos reconocidos por anticuerpos. Por ejemplo, los polipéptidos en una composición pueden comprender tres diferentes segmentos de aminoácido, cada uno de los cuales corresponde a la secuencia de reconocimiento de convertasa de C5. Además, diferentes o idénticos segmentos de aminoácido pueden estar en pareja o dispersados a través del mismo polipéptido. Típicamente, la administración de un polipéptido da como resultado la formación de anticuerpos que tienen especificidad para un epítopo o combinación de epítopos formados por los segmentos de aminoácido dentro de uno o más de los polipéptidos en la composición. Una composición puede contener un ácido nucleico aislado diseñado para expresar un polipéptido particular cuando se introduce en una célula anfitriona. Por ejemplo, un ácido nucleico aislado puede ser diseñado para codificar un polipéptido que tiene un segmento aminoácido C5a propio y uno o más de un epítopo de célula T no propio. Una vez construido, el ácido nucleico aislado se puede introducir en una célula anfitriona de tal forma que el polipéptido codificado se exprese. Puede usarse cualquier célula anfitriona, incluyendo, sin limitación, células procarióticas (por ejemplo, bacterias) y células eucarióticas (por ejemplo, células humanas). Una vez producido, el polipéptido puede ser purificado y usado para vacunar un mamífero. Alternativamente, una composición que contiene un ácido nucleico aislado diseñado para expresar un polipéptido particular se puede administrar a un mamífero de tal forma que el polipéptido se exprese in vivo.

Se puede elaborar una composición combinando cualquiera de los polipéptido (por ejemplo, polipéptido inmunogénicos) provistos en la presente solicitud con un portador farmacéuticamente aceptable. Estos portadores pueden incluir, sin limitación, soluciones estériles acuosas o no acuosas, suspensiones, y emulsiones. Ejemplos de solventes no acuosos incluyen aceite mineral, propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales y ésteres orgánicos inyectables, por ejemplo. Los portadores acuosos incluyen, sin limitación, agua, alcohol, soluciones salina y reguladas. Conservadores, saborizantes, y otros aditivos, tales como por ejemplo, antimicrobianos, anti-oxidantes, agentes quelatantes, gases inertes, y similares también pueden estar presente. Se apreciará que cualquier material descrito aquí que sea para administrarse a un mamífero, puede contener uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Una composición también puede incluir un adyuvante. Un "adyuvante" es un compuesto inmunológico que puede potenciar una respuesta inmune contra un antígeno particular tal como un polipéptido. Los adyuvantes tales como, por ejemplo, alumbre y otros compuestos basados en aluminio (por ejemplo, Al203) pueden ser combinados con un polipéptido que contenga un segmento aminoácido propio (por ejemplo, un segmento aminoácido C5 propio) para formar una composición que inicie una respuesta anti-propia cuando se administre a un mamífero. Los compuestos basados en aluminio pueden obtenerse de varios proveedores comerciales. Por ejemplo, los adyuvantes REHYDRAGEL® se pueden obtener en Reheis Inc. (Berkeley Heights, NJ). Los adyuvantes REHYDRAGEL® están basados en oxihidróxido de aluminio cristalino, y son genes hidratados que contienen partículas cristalinas con una gran área de superficie (aproximadamente 525 m2/g). Su contenido de Al203 típicamente abarca desde aproximadamente 2 por ciento hasta aproximadamente 10 por ciento. El REHYDRAGEL LG, por ejemplo, tiene un contenido de Al203 de aproximadamente 6 por ciento, y fluye fácilmente bajo ligera agitación. El REHYDRAGEL LG también tiene una capacidad de enlace de proteína de 1.58 (es decir, 1.58 mg de enlace da albúmina de suero bovino por 1 mg de Al203), un contenido de sodio de 0.02 por ciento, un contenido de cloro de 0.28 por ciento, sulfato indetectable, un nivel de arsénico menor de 3 ppm, un contenido de metal pesado menor de 15 ppm, un pH de 6.5, y una viscosidad de 1090 cp. REHYDRAGEL LG puede combinarse con una solución de polipéptido (por ejemplo, un polipéptido en PBS) para producir AI(OH)3. Además, se puede usar ALH YDROGEL™, un adyuvante en gel hidroxi de aluminio, (Allydrogel 1.3%, Alhydrogel 2.0%, o Alhydrogel "85") obtenido en Brenntag Stinnes Logistics. Además, se puede combinar MN51 con los polipéptidos provistos en la presente solicitud para formar una composición que active una respuesta anti-propia cuando se administra a un mamífero. MN51 (El Adyuvante SEPPIC Incompleto (ISA) 51) MONTANIDE® así como también el N720 están disponibles en Seppic (París, Francia). El MN51 contiene oleato de manida (MONTANIDE®80, también conocido como octadecenoato de manitol anhidro) en solución de aceite mineral (Drakeol 6 VR). MONTANIDE®80 es un líquido claro con un valor ácido máximo de 1, un valor de saponificación de 164-172, un valor hidroxilo de 89-100, un valor de yodo de 67-75, un valor peróxido máximo de 2, un valor de metal pesado menor de 20 ppm, un contenido máximo de agua de 0.35%, un valor de color máximo de 9, y una viscosidad a 25°C de alrededor de 300 mPa. El MONTANIDE® asociado con aceite (por ejemplo, aceite mineral, aceite vegetal, escualano, escualeno o ésteres) se conoce como MONTA IDE® ISA. El Drakeol 6 VR es un aceite farmacéutico de grado mineral. El Drakeol 6 VR contiene hidrocarburos insaturados o aromáticos, y tiene una gravedad A:P:I: de 36.2 a 36.8, una gravedad específica a 25°C de 0.834-0.838, una viscosidad a 38°C de 59-61 SSU o 10.0-10.6 centistokes, una prueba de ácido mejor que mínima, es negativo para fluorescencia a 360 nm, es negativo para materia visible suspendida, tiene un valor de prueba de derrame ASTM de -18 a -9.4°C, punto de ignición de 146°C, y cumple con todos los requerimientos de RN para el aceite mineral ligero y la absorción ultravioleta. El MN51 contiene aproximadamente de 8 a 12 por ciento de octadecanoato de manitol anhidro, y aproximadamente 88 a 92 por ciento de aceite mineral. MN51 ES un líquido amarillo claro que tiene un valor ácido máximo de 0.5, un valor de saponificación de 16 - 20, un valor hidroxilo de 9 - 13, un valor de peróxido máximo de 2, un valor de yodo de 5 - 9, un contenido de agua máximo de 0.5 por ciento, un índice refractivo a 25°C entre 1.455 y 1.465, una densidad a 20°C de aproximadamente 0.85, y una viscosidad a 20°C de aproximadamente 50 mPa. La conductividad de una mezcla 50:50 de MN51 y salina es menor que 1 ?µß???"1. Otros adyuvantes incluyen complejos inmuno estimulantes (ISCOM, según siglas en inglés) que pueden contener este tipo de componentes como colesterol y saponinas. Las matrices ISCOM pueden ser preparadas y conjugadas para Cu2+ usando métodos tales como los aquí descritos. Los adyuvantes tales como FCA, fia, mn51, mn720, Y AI(OH)3 están disponibles comercialmente en compañías como Seppic, Difco Laboratories (Detroit, MI) y Superfos Biosector A/S (Vedbeak, Demark). En algunas modalidades, una composición también puede contener uno o más componentes inmunoestimuladores adicionales. Estos incluyen, sin limitación, muramildipéptido (por ejemplo, N-acetilmuramil-L-alanil-D-isoglutamina; MDP), monofosforil-lípido A (MPL), y formil-metionina que contienen tripéptidos tales como N-formil-Met-Leu-Phe. Estos compuestos están disponibles comercialmente en Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) y RIBI ImmunoChem Research, Inc. (Hamilton, MT), por ejemplo. Las composiciones provistas en la presente solicitud pueden contener cualquier proporción de adyuvante a polipéptido. La proporción adyuvante:antígeno puede ser 50:50 (vol:vol), por ejemplo. Alternativamente, la proporción adyuvante:antígeno puede ser, sin limitación, 90:10, 80:20, 70:30, 64:36, 60:40, 55:45, 40:60, 30:70, 20:80 o 90:10. Una cantidad efectiva de cualquier composición provista en la presente solicitud se puede administrar a un anfitrión. El término "efectiva" como se usa en la presente solicitud, se refiere a cualquier cantidad que induzca una respuesta inmune al tiempo que no induce toxicidad significativa en el anfitrión. Esta cantidad puede ser determinada evaluando una respuesta inmune del anfitrión después de la administración de una cantidad conocida de una composición particular. Además, el nivel de toxicidad, si lo hay, puede ser determinado evaluando unos síntomas clínicos del anfitrión antes y después de administrar una cantidad conocida de una composición particular. Es notable que la cantidad efectiva de una composición particular administrada a un anfitrión puede ser ajustada de acuerdo con un resultado deseado, así como también la respuesta del anfitrión y el nivel de toxicidad. La toxicidad significativa puede variar para cada anfitrión particular y depende de múltiples factores, incluyendo, sin limitación, el estado de enfermedad del anfitrión, edad y tolerancia al dolor. Además, cualquier composición descrita en la presente solicitud puede ser administrada a cualquier parte del cuerpo del anfitrión. Una composición puede ser suministrada, sin limitación, a las articulaciones, mucosa nasal, sangre, pulmones, intestinos, tejidos musculares, piel o cavidad peritoneal de un mamífero. Además, se puede administrar una composición por vía intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, intratecal, o por inyeccíón íntradérmica, por administración nasal, por inhalación, o por perfusión gradual en el tiempo. En un ejemplo adicional, una preparación de aerosol de una composición se puede dar a un anfitrión por inhalación. La duración del tratamiento con cualquier composición provista en la presente solicitud, puede ser cualquier longitud de tiempo, desde tan corta como un día, hasta tan larga como el alcance de la vida del anfitrión (por ejemplo, muchos años). Por ejemplo, un polipéptido se puede administrar una vez al mes durante tres meses o una vez al año durante un periodo de diez años. También es notable que la frecuencia de tratamiento puede ser variable. Por ejemplo, se puede administrar un polipéptido una vez (o dos veces, tres veces, etc.), diariamente, semanalmente, mensualmente o anualmente. Se puede usar cualquier método para determinar si una respuesta inmune particular es inducida. Por ejemplo, las respuestas anticuerpo contra antígenos particulares se pueden determinar usando una prueba inmunológica (por ejemplo, una ELISA). En este tipo de prueba, los receptáculos de una placa de micro titulación pueden ser cubiertas con C5 e incubadas con suero de un mamífero tratado con una composición diseñada para producir anticuerpos anti-C5 en ese mamífero, y la presencia o ausencia de anticuerpos anti-C5 puede determinarse usando una IgG anti-rata. Además, se puede usar métodos clínicos que puedan evaluar el grado de un estado de enfermedad particular para determinar si una respuesta inmune deseada es inducida. Por ejemplo, una reducción en inflamación puede indicar una respuesta inmune deseada en un paciente tratado con una composición diseñada para producir anticuerpos anti-C5. Para dar soporte a una indicación de una respuesta inmune deseada, los niveles de anticuerpo anti-C5 en una muestra de sangre de este paciente pueden medirse usando la técnica ELISA descrita anteriormente.

ARTÍCULOS DE MANUFACTURA Los polipéptido y composiciones provistos en la presente solicitud pueden usarse en la fabricación de un medicamento (por ejemplo, un medicamento para tratar una condición inflamatoria). Además, la invención proporciona artículos de manufactura que puede incluir polipéptido y composiciones provistas aquí. Los componentes y métodos para producir artículos de manufactura son bien conocidos. Un artículo de manufactura puede incluir, por ejemplo, uno o más polipéptidos que induzcan la producción de un anticuerpo anti-C5 propio (por ejemplo, uno o más polipéptidos que contengan un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio tal como un segmento aminoácido C5 no propio). Además, un artículo de manufactura puede incluir, por ejemplo, reguladores u otros reactivos para el tratamiento o vigilancia de una condición inflamatoria. En algunas modalidades, estos artículos de manufactura pueden incluir una etiqueta o instrucciones que indiquen que los polipéptidos contenidos en la presente solicitud son efectivos para el tratamiento de una condición inflamatoria. La invención será descrita adicionalmente en los siguientes ejemplos, los cuales no limitan el alcance de la invención descrita en las reivindicaciones.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 - PRODUCCIÓN Y PURIFICACIÓN DE UN POLIPÉPTIDO C5a DE RATÓN Una secuencia de ADN de ratón pro-C5 (SEQ ID NO:1) se muestra en la figura 1, y la secuencia de aminoácidos de ratón pro-C5 incluyendo el péptido señal (SEQ ID NO:2) se muestra en la figura 2. La región codificadora para C5a de ratón se aisló mediante amplificación PCR a partir de una genoteca de ADNc de hígado de ratón total. El fragmento PCR estaba ligado en el vector de expresión bacterial pMAL-p2x (Fig.3; New England Biolabs, Beverly, MA), adyacente a una secuencia que codifica una porción de proteína enlazante maltosa (MBP). La región codificadora para el polipéptido de fusión BP-C5a fue amplificada entonces a partir de su vector mediante PCR. Para facilitar la purificación eventual del polipéptido de fusión, el sensibilizador PCR 5' también codificó seis residuos de histidina. Además, el sensibilizador 51 contenía un sitio EcoRI, y el sensibilizador 3' contenía un sitio Salí para propósitos de clonación.

El producto PCR (secuencia mostrada en la figura 4) fue transferido a un vector de expresión de mamífero, el pCEP-Pu2 mantenido episomalmente, el cual contiene una secuencia de señal de una región variable en inmunoglobulina. El sitio Sal! del producto PCR fue ligado en el sitio Xhol del vector pCEP-Pu2, dando como resultado la destrucción de ambos sitios. La secuencia de nucleóticos del producto PCR que codifica el polipéptido de fusión se expone en SEQ ID NO:3; y la secuencia de aminoácidos del polipéptido de fusión se expone en SEQ ID NO:4.

EJEMPLO 2 - EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE MBR-C5a DE CÉLULAS DE MAMÍFERO La construcción pCEP-Pu2 que contenía el polipéptido de fusión 6His-MBP-C5a fue transfectado en células 293-EBNA para sobre-expresión y purificación del polipéptido de fusión secretado. Las células de mamífero EBNA-293 fueron transfectadas por lipofección y cultivadas en Medio Eagle modificado con Dulbecco (DMEM) suplementado con 5% de suero fetal de ternera, 0.5µg/ml de puromicina, 50 µg/ml de gentamicina, y 100 g/ml de geneticina. Las células en crecimiento fueron expandidas, y se recolectaron los medios acondicionados cada 4 - 5 días. Las células y los detritos fueron eliminadas por centrifugación. El polipéptido de fusión contenía seis residuos de histidina para permitir la purificación usando agarosa Ni-NTA. Una alícuota de 0.75 mi de suspensión de Ni-NTA (QIAGEN GmbH, Alemania) que contenía perlas de -0.35 mi en 20% de etanol se añadió por 500 mi de medio condicionado. Después de incubación durante la noche a 4°C en una mezcladora, la agarosa Ni-NTA fue granulada por centrifugación durante 10 minutos a aproximadamente 200 g y transferida a columnas. Las perlas fueron lavadas con PBS, pH 7.4, en la presencia de 1M de NaCI y 0.1% de Tween-20, y eluida con 100 mM de imidazol (Merck, Alemania), en 20 mM de Tris, pH8.0, con 0.1 ; de MaCI, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las fracciones que contienen polipéptido fueron agrupadas y dializadas contra PBS, pH 7.4, usando una membrana con un peso molecular límite de 12,000 - 14,000 Da (Spectra/Por Membranes, Spectrum Laboratories, Inc., Rancho Domínguez, CA). En caso necesario, las muestras fueron concentradas usando un dispositivo centrífugo Macrosep 10K (PALL Gelman Laboratory). La concentración final del polipéptido fue estimada con prueba Bradford (BIO-RAD Protein Assay, Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Las células produjeron el polipéptido de fusión 6His-MBP-C5a en un nivel de aproximadamente 2 mg/litro. Se usó un marcador de peso molecular de proteína Rainbow (Amersham International, Buckinghamshire, Inglaterra), para la estimación de tamaño. El polipéptido migró al tamaño esperado de 53 kD. La secuencia de aminoácidos del polipéptido de fusión se muestra en la figura 5.

EJEMPLO 3 EFECTO DE MBP-C5a EN ARTRITIS INDUCIDA POR COLÁGENO El polipéptido 6His- BP-C5a purificado en PBS se combinó con Adyuvante de Freund completo (CFA) o Adyuvante de Freund Incompleto (IFA) en una proporción 1:1 inmediatamente antes de su uso. La solución se llevó hacia arriba y hacia abajo repetidamente en una jeringa Hamilton (Hamilton Corp, Reno, NE) equipada con una aguja de 18G, y se mezcló hasta que se formó una emulsión blanca con características reológicas similar a un ungüento. Se colocó una aguja 23G en la jeringa para la administración de la mezcla. También se preparó una mezcla que contenía volúmenes iguales de PBS y CFA o IFA. Ratones machos de doce semanas de edad QB(Balb/c X B10.Q) F1 fueron divididos en dos grupos de 14 o 16 animales cada uno, y fueron inyectados subcutáneamente entre la escápula el día 21 con 100 µg de MBP-C5a emulsificado en CFA o con la mezcla de control. También se tomaron muestras de sangre el día 21, y los sueros se almacenaron a -20°C. Los animales recibieron inyecciones de refuerzo de 50 µgn de MBP-C5a en IFA o la mezcla de control en el día -3 y en el día 28. Las inyecciones se administraron típicamente en un volumen de 100 a 200 µL·. Para inducir la artritis, los ratones fueron inyectados por vía intradérmica en la raíz de la cola el día 0 con 100 µg de CU digerido con pepsina emulsificado 1:1 en CFA. Se esperaba que la artritis se desarrollara entre los días 28 y 56. Los animales recibieron una inyección de refuerzo de CU emuisificado en IFA el día 35, y se tomaron muestras de sangre el día 35. Los animales se examinaron al menos tres veces semanalmente desde el día 14 hasta el día 90, cuando el experimento finalizó. Los animales fueron calificados de forma ciega usando un sistema de puntuación basado en el número de articulaciones inflamadas en cada pata. La inflamación fue definida por la hinchazón y enrojecimiento. En este sistema de puntuación, a cada dedo o nudillo inflamado se le dio un punto, mientras que a una muñeca o tobillo inflamado se le dieron cinco puntos. Esto dio como resultado una puntuación de 0 a 15 para cada pata (5 dedos + 5 nudillos + 1 muñeca o tobillo) y de 0 a 60 para cada ratón. El experimento fue finalizado el día 90 o cuando se juzgó apropiado basado en el desarrollo de la artritis. Ningún ratón mostró signos de estado anormal de la piel, cambios estereotípicos o comportamentales, infección, u otros efectos colaterales severos o inesperados aparte de los síntomas que ocurren normalmente en conexión con la enfermedad artrítica esperada. Los animales fueron anestesiados con enfluran (Forene®)/oxígeno, y se obtuvo sangre por punción reorbital. Se recolectó suero y se almacenó a -20°C. Se evaluaron los niveles de anticuerpo anti-CII y anti-C5a de los sueros recolectados en los días -21, 35, y al final del estudio, usando un método ELISA. Se usó la prueba Mann-Witney para analizar los datos de puntuación, y las áreas bajo la curva y los valores de chi cuadrado se usaron para analizar la significación de la incidencia de la artritis.

En el día 28 después del primer tratamiento con colágeno, siete de los 14 ratones en el grupo de control (50%) mostraron inflamación, mientras que solamente dos de los 16 ratones (12.5%) tratados previamente con MBP-C5a mostraron inflamación (Fig. 6). Estos datos dieron como resultado un valor P de chi cuadrado de 0.025. La incidencia acumulativa de la inflamación (como la del día 67), fue de 14 fuera de 14 en el grupo de control, y 11 fuera de 16 en el grupo tratado previamente con MBP-C5a (P = 0.22). Así, la incidencia de la artritis inducida por colágeno fue significativamente diferente entre los dos grupos. Una puntuación media de artritis basada en la cantidad de inflamación, se gráfico para cada grupo entre los días 1 y 90 (figura 7). La puntuación máxima de un ratón para cada grupo fue de 60. Al final del estudio, la severidad máxima dio como resultado un valor medio de 38.6 en el grupo de control y de 19.0 en el grupo tratado previamente con MBP-C5a (P = 0.0085; figura 8). El área bajo la curva dio como resultado un valor medio de 485.9 en el grupo de control y de 168.9 en el grupo tratado previamente con MBP-C5a (P = 0.0012, figura 9). Estos resultados demostraron que el tratamiento con el polipéptido de fusión MBP-C5a dio como resultado la disminución en la incidencia y severidad de la artritis inducida por colágeno en estos animales.

EJEMPLO 4 - EFECTO DE BP-C5a EN LA ARTRITIS CRÓNICA INDUCIDA POR COLÁGENO EN RATONES QB-BC El polipéptido MBP-C5a purificado en PBS fue combinado con CFA o IFA como se describió anteriormente. También se preparó una mezcla de control que contenía volúmenes iguales de PBS y CFA o IFA. Ratones machos y hembras de ocho a diez semanas de edad QB-BC (B10.Q (Balb/c X B10.Q)) fueron inyectados por vía intradérmica en la raíz de la cola con 100 µ9 de Gil digerida con pepsina emulsificada 1:1 en IFA. Luego de 35 días, los ratones recibieron una segunda inyección con 50 µ9 de CU digerida con pepsina emulsificada 1:1 en IFA. Los ratones fueron calificados luego al menos 3 veces por semana con respecto al desarrollo de artritis crónica. Muchos, pero no todos los ratones, desarrollaron un curso de enfermedad recurrente caracterizada por periodos de recurrencia de artritis activa. Estas recaídas aparecían sin predicción, duraban pocas semanas en una vez, y parecían ocurrir sobre una base de toda la vida. La variabilidad del efecto de la artritis en la cohorte fue principalmente debido a la heterogeneidad genética (Los ratones eran animales N2, debido a un diseño experimental dirigido a imitar la situación genética en los seres humanos). Para coordinar la recurrencia de las recaídas, los ratones fueron reinmunizados con CU durante la fase de recaída crónica. Cuando los ratones tenían de 12 a 14 meses de edad, los animales que tenían enfermedad recurrente crónica, pero que actualmente no tenían recaída de la enfermedad activa fueron mezclados aleatoriamente y ordenados en cuatro grupos de igual tamaño. Para inducir una recaída de artritis controlada, los ratones fueron inyectados por vía subcutánea entre la escápula el día -21 (día 259 después de la primera inmunización con Cll) con 100 µg de MBP-C5a en PBS (N = 24) o con PBS solamente, cada uno emulsificado 1:1 en CFA (N =12). Los animales recibieron una inyección de refuerzo de 50 µg de MBP-C5a en PBS o de PBS solo (cada uno en CFA) el día -3. El día 0 (día 280 después de la primera inmunización con Cll), los animales en ambos grupos fueron inyectados por vía intradérmica en la raíz de la cola con 50 µg de Cll digerida con pepsina emulsificada 1:1 en IFA. Una segunda inyección de refuerzo de 50 µ9 de MBP-C5a en PBS, o PBS solamente, se administró el día 21 (día 301 después de la primera inmunización con Cll). Además, se obtuvieron muestras de sangre por punción reorbital en el día -21 y en el día 0. Los animales fueron calificados de forma ciega usando el sistema de puntuación descrito anteriormente, dando como resultado una puntuación de artritis de 0 a 60 por cada ratón. El experimento finalizó el día 358 después de la primera inmunización con Cll. Estos estudios revelaron que mientras que todos los ratones de control mostraron síntomas de artritis, especialmente alrededor del día 40, solamente 50% de los ratones inmunizados con MBP-C5a mostraron artritis crónica (p<0.05; figura 10). Además, se determinó la puntuación de artritis media para los dos grupos desde el inicio del estudio (es decir, desde la primera inyección de CU), hasta el final del estudio mas luego 358 días después el día 78 después de la reinducción o recaída (figura 11). La puntuación de artritis media no fue significativamente diferente entre los dos grupos hasta la inmunización con MBP-C5a, después de la cual la puntuación de artritis media para el grupo tratado fue significativamente más baja que para el grupo de control (P<0.05; figura 11). Estos resultados demostraron que el polipéptido de fusión MBP-C5a fue capaz de reducir la incidencia de la artritis crónica recurrente en los animales tratados.

OTRAS MODALIDADES Se entenderá que a pesar de que la invención ha sido descrita en conjunto con su descripción detallada, la descripción precedente tiene la intención de ilustrar y no de limitar el alcance de la invención, el cual está definido por el alcance de las reivindicaciones anexas. Otros aspectos, ventajas, y modificaciones están dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método para el tratamiento de un mamífero que tiene una condición inflamatoria, dicho método comprende administrar un poíipéptido a dicho mamífero de tal forma que dicho poíipéptido induzca una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, dicho poíipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica dicho segmento aminoácido C5 propio.

2. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho mamífero es un ser humano.

3. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicha condición inflamatoria es seleccionada del grupo que consiste en sepsis, isquemia miocárdica / daño por reperfusión, síndrome de ansiedad respiratoria adulta, nefritis, rechazo de injertos, artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, esclerosis múltiple, arterosclerosis, y vasculitis.

4. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho poíipéptido es MBP-C5a.

5. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido C5 propio comprende una porción de una secuencia C5a.

6. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio comprende una porción de una secuencia C5.

7. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio es viral.

8. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio es bacterial.

9. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio es fúngico.

10. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio es de mamífero.

11. Ei método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio es de origen no natural.

12. El método de la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

13. Una composición que comprende un polipéptido, caracterizada además porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio.

14. La composición de la reivindicación 13, caracterizada además porque la administración de dicho polipéptido a un mamífero induce una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, caracterizada porque el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica dicho segmento aminoácido C5 propio.

15. La composición de la reivindicación 13', caracterizada además porque dicho segmento aminoácido C5 no propio es de origen no natural.

16. La composición de la reivindicación 13, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido C5 no propio contiene al menos dos epítopos de célula T.

17. Una composición que comprende un polipéptido, caracterizada además porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio.

18. La composición de la reivindicación 17, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de vertebrado no propio es un segmento aminoácido de mamífero.

19. La composición de la reivindicación 17, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de vertebrado no propio es un segmento aminoácido de mamífero.

20. La composición de la reivindicación 17, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de vertebrado no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

21. Una composición que comprende un polipéptido, caracterizada además porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor que 350 residuos de aminoácido.

22. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque la administración de dicho polipéptido a un mamífero induce una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, en donde el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica el mencionado segmento aminoácido C5 propio.

23. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es viral.

24. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es bacterial.

25. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es fúngico.

26. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es de mamífero.

27. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es de origen no natural.

28. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

29. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 300 residuos de aminoácido.

30. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 250 residuos de aminoácido.

31. La composición de la reivindicación 21, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 200 residuos de aminoácido.

32. Una composición que comprende un polipéptido y un adyuvante, caracterizada además porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial.

33. La composición de la reivindicación 32, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido bacterial es MBP.

34. Una composición que comprende un polipéptido, caracterizada porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico.

35. Una composición que comprende un polipéptido, caracterizada porque dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral.

36. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio.

37. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio.

38. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 350 residuos de aminoácido.

39. El ácido nucleico de la reivindicación 38, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 300 residuos de aminoácido.

40. El ácido nucleico de la reivindicación 38, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 250 residuos de aminoácido.

41. El ácido nucleico de la reivindicación 38, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 200 residuos de aminoácido.

42. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial, caracterizado además porque dicho polipéptido carece de un sitio de escisión de factor Xa entre dicho segmento aminoácido C5 y dicho segmento aminoácido bacterial.

43. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 42, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido bacterial no propio es MBP.

44. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico.

45. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido que comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral.

46. Una célula anfitriona que contiene el ácido nucleico de la reivindicación 36, 37, 38, 42, 44 o 45.

47. La célula anfitriona de la reivindicación 46, caracterizado además porque dicha célula anfitriona expresa dicho polipéptido.

48. Una composición para administración a un mamífero, dicha composición comprende un polipéptido, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio.

49. La composición de la reivindicación 48, caracterizada además porque dicha administración de dicho polipéptido a un mamífero induce una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, en donde el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica dicho segmento aminoácido C5 propio.

50. La composición de la reivindicación 48, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido C5 no propio es de origen no natural.

51. La composición de la reivindicación 48, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido C5 no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

52. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición contiene un polipéptido, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio.

53. La composición de la reivindicación 52, caracterizada además porque la administración de dicho polipéptido a un mamífero induce una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, en donde el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica dicho segmento aminoácido C5 propio.

54. La composición de la reivindicación 52, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de vertebrado no propio es un segmento aminoácido de mamífero.

55. La composición de la reivindicación 52, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de vertebrado no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

56. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición contiene un polipéptido, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, en donde la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor de 350 residuos de aminoácido.

57. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho polipéptido para un mamífero induce una respuesta anti-C5 en dicho mamífero, en donde el genoma de dicho mamífero comprende un ácido nucleico que codifica dicho segmento aminoácido C5 propio.

58. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es viral.

59. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es bacterial.

60. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es fúngico.

61. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es de mamífero.

62. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido no propio es de origen no natural.

63. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido de mamífero no propio comprende al menos dos epítopos de célula T.

64. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 300 residuos de aminoácido.

65. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 250 residuos de aminoácido.

66. La composición de la reivindicación 56, caracterizada además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es de menos de 200 residuos de aminoácido.

67. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición contiene un polipéptido y un adyuvante, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial.

68. La composición de la reivindicación 67, caracterizada además porque dicho segmento aminoácido bacterial es BP.

69. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición contiene un polipéptido, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico.

70. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición contiene un polipéptido, caracterizada porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral.

71. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido C5 no propio.

72. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido de vertebrado no propio.

73. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, y caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor de 350 residuos de aminoácido.

74. El ácido nucleico de la reivindicación 73, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor de 300 residuos de aminoácido.

75. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 73, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor de 250 residuos de aminoácido.

76. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 73, caracterizado además porque la longitud de dicho segmento aminoácido no propio es menor de 200 residuos de aminoácido.

77. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido bacterial, y caracterizado además porque dicho polipéptido carece de un sitio de escisión con factor Xa entre dicho segmento aminoácido C5 y dicho segmento aminoácido bacterial.

78. El ácido nucleico aislado de la reivindicación 77, caracterizado además porque dicho segmento aminoácido bacterial no propio es BP.

79. Un ácido nucleico aislado, caracterizado porque dicho ácido nucleico codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido fúngico.

80. Un ácido nucleico aislado, caracterizado además porque dicho ácido nucleico aislado codifica un polipéptido para su administración a un mamífero, y caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, dicho polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido viral.

81. Una célula anfitriona que contiene el ácido nucleico de la reivindicación 71,72, 73, 77, 79 u 80.

82. La célula anfitriona de la reivindicación 81, caracterizada además porque dicha célula anfitriona expresa dicho polipéptido.

83. Una composición para su administración a un mamífero, dicha composición comprende un polipéptido, caracterizado además porque con respecto a dicho mamífero, el mencionado polipéptido comprende un segmento aminoácido C5 propio y un segmento aminoácido no propio, y caracterizada además porque dicho segmento aminoácido C5 propio es al menos 90 por ciento idéntico a una secuencia C5 de dicho mamífero.